專利名稱：一種發(fā)酵生產(chǎn)輔酶q的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及微生物發(fā)酵領(lǐng)域，具體涉及一種發(fā)酵生產(chǎn)輔酶Q10的方法。
背景技術(shù)：
輔酶Q10的生產(chǎn)方法有動(dòng)植物組織提取法、化學(xué)合成法和微生物發(fā)酵法三種。其中動(dòng)植物提取法成本高，不適合現(xiàn)代工業(yè)生產(chǎn)；化學(xué)合成法反應(yīng)復(fù)雜，副產(chǎn)物多，成本也較高。微生物發(fā)酵法目前只有日本采用，但是，日本企業(yè)使用的菌種是紅假單胞菌(Rhodopseudomonassp.)，發(fā)酵生產(chǎn)時(shí)必須使用光照，培養(yǎng)時(shí)間較長，因此增加了生產(chǎn)成本。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有輔酶Q10生長方法存在的問題，提供一種不需要光照且能高密度發(fā)酵生產(chǎn)輔酶Q10的方法。
為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明技術(shù)人員經(jīng)過長期的研究，發(fā)現(xiàn)農(nóng)桿菌LQ10(Agrobacterium sp.)能用于發(fā)酵生長輔酶Q10，且其生長過程不需要光照，并能高密度發(fā)酵，具體發(fā)酵方法如下所示(1)種子培養(yǎng)農(nóng)桿菌LQ10在進(jìn)入發(fā)酵罐前先進(jìn)行兩級種子培養(yǎng)，種子培養(yǎng)基為葡萄糖5g，蛋白胨5g，牛肉膏5g，酵母粉1g，MgSO4·7H2O 0.49g，瓊脂20g，121℃滅菌15min；培養(yǎng)溫度均為30℃，培養(yǎng)時(shí)間均為12小時(shí)；
(2)發(fā)酵培養(yǎng)經(jīng)過兩級種子培養(yǎng)后的農(nóng)桿菌LQ 10培養(yǎng)液進(jìn)入發(fā)酵罐發(fā)酵，發(fā)酵培養(yǎng)基為葡萄糖28g，蔗糖糖蜜50g，酵母粉5g，玉米漿28g，(NH4)2SO47g，KH2PO40.4g，Na2HPO4·12H2O 1.5g，MgSO4·7H2O 0.3g，pH7.2，121℃滅菌15min；發(fā)酵溫度過高或過低不僅對發(fā)酵速度有影響，也影響輔酶Q10的積累，以30～32℃為宜，溶氧30％，輔酶Q10產(chǎn)量在pH6.0時(shí)最高，但此pH值不利于菌體生長，適合的pH值應(yīng)在7.0～7.2之間，48小時(shí)后，可用硝酸或鹽酸將pH值調(diào)至6.5左右，以利于輔酶Q10的積累。攪拌速度控制在200～1000rpm。發(fā)酵培養(yǎng)基在滅菌時(shí)還加入0.01％的消泡劑。
(3)發(fā)酵終止當(dāng)發(fā)酵時(shí)間72小時(shí)左右且發(fā)酵液顏色為黑褐色時(shí)，即可終止發(fā)酵，提取輔酶Q10。
與現(xiàn)有輔酶Q10生產(chǎn)方法相比，本發(fā)明具有如下有益效果(1)所用發(fā)酵菌株農(nóng)桿菌LQ10為安全性菌株；(2)所用發(fā)酵培養(yǎng)基價(jià)廉易得，可降低發(fā)酵成本；(3)發(fā)酵時(shí)不需要光照，可降低發(fā)酵成本；(4)發(fā)酵溫度適中，發(fā)酵條件要求低；(5)可進(jìn)行高密度發(fā)酵，從而提高單位產(chǎn)量具體實(shí)施方式
實(shí)施例1將石蠟油保存的斜面農(nóng)桿菌LQ10(Agrobacterium sp.)接種至5ml試管培養(yǎng)基中，30℃培養(yǎng)12小時(shí)，再接入400ml培養(yǎng)基三角瓶中30℃培養(yǎng)12小時(shí)。兩級種子培養(yǎng)的培養(yǎng)基組成(g/L)葡萄糖5g，蛋白胨5g，牛肉膏5g，酵母粉1g，MgSO4·7H2O 0.49g，瓊脂20g，121℃滅菌15min。
然后將4升培養(yǎng)液接入5升全自動(dòng)發(fā)酵罐發(fā)酵，培養(yǎng)基g/L)葡萄糖28g，蔗糖糖蜜50g，酵母粉5g，玉米漿28g，(NH4)2sO47g，KH2PO40.4g，Na2HPO4·12H2O 1.5g，MgSO4·7H2O 0.3g，121℃加入0.01％消泡劑滅菌15min。發(fā)酵培養(yǎng)溫度為30℃，溶氧量為30％攪拌速度為400rpm，pH值為7.2，培養(yǎng)48小時(shí)后將pH值調(diào)為6.5，以利于輔酶Q10的積累。
當(dāng)發(fā)酵時(shí)間為72小時(shí)左右，發(fā)酵液顏色為黑褐色時(shí)即可終止發(fā)酵，提取輔酶Q10。
權(quán)利要求
1.一種生產(chǎn)輔酶Q10的方法，采用發(fā)酵方法生產(chǎn)，其特征在于發(fā)酵所采用的菌種為農(nóng)桿菌LQ10。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述發(fā)酵方法具體包括如下步驟(1)種子培養(yǎng)農(nóng)桿菌LQ10在進(jìn)入發(fā)酵罐前先進(jìn)行兩級種子培養(yǎng)，種子培養(yǎng)基為葡萄糖5g，蛋白胨5g，牛肉膏5g，酵母粉1g，MgSO4·7H2O 0.49g，瓊脂20g，121℃滅菌15min；培養(yǎng)溫度均為30℃，培養(yǎng)時(shí)間均為12小時(shí)；(2)發(fā)酵培養(yǎng)經(jīng)過兩級種子培養(yǎng)后的農(nóng)桿菌LQ10培養(yǎng)液進(jìn)入發(fā)酵罐發(fā)酵，發(fā)酵培養(yǎng)基為葡萄糖28g，蔗糖糖蜜50g，酵母粉5g，玉米漿28g，(NH4)2SO47g，KH2PO40.4g，Na2HPO4·12H2O1.5g，MgSO4·7H2O0.3g，pH7.2，121℃滅菌15min；發(fā)酵溫度為30～32℃，溶氧30％，發(fā)酵時(shí)間48小時(shí)以前的pH值為7.0～7.2，發(fā)酵時(shí)間48小時(shí)以后pH值為6.5，攪拌速度控制在200～1000rpm；(3)發(fā)酵終止當(dāng)發(fā)酵時(shí)間72小時(shí)左右且發(fā)酵液顏色為黑褐色時(shí)，即可終止發(fā)酵，提取輔酶Q10。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述發(fā)酵培養(yǎng)基在滅菌時(shí)還加入0.01％的消泡劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及微生物發(fā)酵領(lǐng)域，具體涉及一種發(fā)酵生產(chǎn)輔酶Q
文檔編號C12R1/01GK1884562SQ20061003572
公開日2006年12月27日 申請日期2006年5月31日 優(yōu)先權(quán)日2006年5月31日
發(fā)明者董加喜, 張高賢, 陸勇軍, 熊輝華, 張?zhí)碓? 李運(yùn)南 申請人:廣州市微生物研究所, 中山大學(xué)