專利名稱：血清中脂肪酶的化學(xué)發(fā)光測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種醫(yī)用試劑檢測(cè)方法，特別涉及血清中脂肪酶的化學(xué)發(fā)光測(cè)定方法。
背景技術(shù)：
利用現(xiàn)代生物技術(shù)所開(kāi)發(fā)的超微量測(cè)定方法，極大的推動(dòng)了生物和醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的各項(xiàng)臨床和科研工作的快速發(fā)展，為人類的科學(xué)事業(yè)和社會(huì)進(jìn)步作出了非凡的貢獻(xiàn)。
上世紀(jì)七十年代由Arakawa首先發(fā)表了應(yīng)用魯米諾——過(guò)氧化物酶的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)進(jìn)行酶免分析的技術(shù)，這一技術(shù)由于靈敏度高達(dá)10-18mol，可在20分鐘內(nèi)快速測(cè)定出結(jié)果，可簡(jiǎn)便實(shí)現(xiàn)完全自動(dòng)化，有效期長(zhǎng)達(dá)一年以上，無(wú)放射性和致畸物質(zhì)，利于環(huán)保而受到普遍歡迎，是目前發(fā)展最迅速的檢測(cè)技術(shù)。
目前，化學(xué)發(fā)光技術(shù)在免疫分析中已得到相當(dāng)普及的程度，已發(fā)展為能檢測(cè)多種生物活性物質(zhì)的常規(guī)監(jiān)床檢測(cè)方法，從免疫反應(yīng)方式分，該方法有兩種基本類型，即化學(xué)發(fā)光免疫分析(CLIA)和免疫化學(xué)發(fā)光分析(ICMA)；從發(fā)光方式上看，一是將發(fā)光物質(zhì)直接標(biāo)記到抗體或抗原上，免疫反應(yīng)后，在起動(dòng)劑的作用下而發(fā)光，另一種是用酶標(biāo)記抗體或抗原，免疫反應(yīng)后，加入化學(xué)發(fā)光底物，在酶催作用下而發(fā)光。
該方法雖有突出的優(yōu)點(diǎn)，但目前僅限于免疫分析，而在生化分析中還是空白。
胰腺是脂肪酶(LPS)主要來(lái)源。血清LPS增高常見(jiàn)于急性胰腺炎及胰腺癌，偶見(jiàn)于慢性胰腺炎。急性胰腺炎時(shí)，血清淀粉酶增加的時(shí)間較短，而LPS活性升高可持續(xù)10~15天。此外，總膽管結(jié)石或癌、腸梗阻、十二指腸穿孔等有時(shí)也會(huì)增高。
現(xiàn)在普遍使用的測(cè)定血清中脂肪酶的方法為滴定法，該法是用脂肪酶(LPS)將橄欖油水解成甘油單酯和脂肪酸，再用NaOH溶液滴定脂肪酸，根據(jù)NaOH的用量計(jì)算LPS的活力單位。該法的不足之處主要有
1、線性范圍窄。由于檢測(cè)光吸收，其分辨率不像化學(xué)發(fā)光那么敏感，線性范圍不能完全滿足臨床檢測(cè)的需要，對(duì)高濃度的樣品需要經(jīng)稀釋后測(cè)定，帶來(lái)一定不便。
2、靈敏度不如化學(xué)發(fā)光?；瘜W(xué)發(fā)光是測(cè)定光信號(hào)，靈敏度要比測(cè)光吸收高出許多。
3、試劑成份復(fù)雜，操作煩瑣，容易造成誤差，影響測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是一種提供能克服上述缺陷、且靈敏度高、線性范圍寬、方便、安全的血清中脂肪酶的化學(xué)發(fā)光測(cè)定方法。解決該技術(shù)問(wèn)題采用的主要技術(shù)方案血清中脂肪酶的化學(xué)發(fā)光測(cè)定方法，其特征在于用脂肪酶(LPS)催化將甘油單酯水解成甘油和脂肪酸，再用甘油激酶(GK)及三磷酸腺苷(ATP)將甘油磷酸化成3-磷酸甘油(G-3-P)，3-磷酸甘油(G-3-P)被磷酸甘油氧化酶(GPO)氧化，并產(chǎn)生過(guò)氧化氫，再經(jīng)過(guò)氧化物酶作用，過(guò)氧化氫使化學(xué)發(fā)光物氧化而發(fā)光；光信號(hào)的大小與血清脂肪酶的濃度呈正相關(guān)，即血清脂肪酶濃度越大發(fā)出的光信號(hào)越強(qiáng)；記錄這種光信號(hào)即可推測(cè)血清脂肪酶的濃度；用已知濃度的脂肪酶與測(cè)出的光信號(hào)，作出劑量-反應(yīng)曲線；未知樣品的脂肪酶含量可從該曲線推算出來(lái)；所述的化學(xué)發(fā)光物為魯米諾。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比有如下優(yōu)點(diǎn)用化學(xué)發(fā)光物代替顯色物，達(dá)到更靈敏、更穩(wěn)定、范圍寬、更安全的目的。用該方法可以制備相應(yīng)的定量測(cè)定血清中脂肪酶的商品試劑盒。具體優(yōu)點(diǎn)是①靈敏度更高。傳統(tǒng)方法是檢測(cè)顏色深淺，而化學(xué)發(fā)光是測(cè)光信號(hào)，可一個(gè)一個(gè)光子計(jì)數(shù)，所測(cè)的最低限更小，因而靈敏度更高。
②線性范圍寬。測(cè)顏色的深淺的分辨率比光子計(jì)數(shù)的精度要低得多，化學(xué)發(fā)光的檢測(cè)范圍高達(dá)105。
③安全適用?；瘜W(xué)發(fā)光物如魯米諾等很安全，整個(gè)檢測(cè)過(guò)程無(wú)有害物出現(xiàn)，無(wú)論是檢測(cè)或處理廢物都很安全，有利于環(huán)境保護(hù)。
④便于普及。本發(fā)明所制備的試劑盒，可用于全自動(dòng)測(cè)量，也可用于手工或半自動(dòng)測(cè)量，適宜大、中、小各層次的醫(yī)療和研究機(jī)構(gòu)使用。
⑤巨大的社會(huì)效益。用化學(xué)發(fā)光法測(cè)定生化指標(biāo)或免疫物質(zhì)，可同用一臺(tái)化學(xué)發(fā)光儀，不再需要進(jìn)口昂貴的生化儀，節(jié)省大量資金，不只降低了成本，對(duì)醫(yī)療機(jī)構(gòu)、患者及社會(huì)均大有益處。
具體實(shí)施例方式現(xiàn)舉例說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施例。用脂肪酶(LPS)催化將甘油單酯水解成甘油和脂肪酸，再用甘油激酶(GK)及三磷酸腺苷(ATP)將甘油磷酸化成3-磷酸甘油(G-3-P)，3-磷酸甘油(G-3-P)被磷酸甘油氧化酶(GPO)氧化，并產(chǎn)生過(guò)氧化氫，再經(jīng)過(guò)氧化物酶作用，過(guò)氧化氫使發(fā)光物氧化而發(fā)光；光信號(hào)的大小與血清脂肪酶的濃度呈正相關(guān)，即血清脂肪酶濃度越大發(fā)出的光信號(hào)越強(qiáng)；記錄這種光信號(hào)即可推測(cè)血清脂肪酶的濃度；用已知濃度的脂肪酶測(cè)出的光信號(hào)，作出劑量-反應(yīng)曲線；未知樣品的脂肪酶含量可從該曲線推算出來(lái)；所述的化學(xué)發(fā)光物為魯米諾；這便是本發(fā)明的血清中脂肪酶的化學(xué)發(fā)光測(cè)定方法。本發(fā)明的反應(yīng)原理用式子表示如下
一、試劑包括混合酶液；脂肪酶(或替代品)標(biāo)準(zhǔn)單一或系列濃度；底物液二、測(cè)定程序按下表進(jìn)行，加樣單位為μl。

三、用適當(dāng)方法處理作出劑量-反應(yīng)曲線，根據(jù)樣品的RLU值從該曲線求出其血清脂肪酶的濃度?；蛑苯佑晒角蟪鲋久笣舛龋?樣品RLU/標(biāo)準(zhǔn)RLU)×標(biāo)準(zhǔn)濃度四、也可用雙試劑測(cè)定。
本發(fā)明的靈敏度更高因?yàn)閭鹘y(tǒng)方法是檢測(cè)顏色深淺，而本發(fā)明是測(cè)光信號(hào)，可一個(gè)一個(gè)光子計(jì)數(shù)，所測(cè)的最低限更小，因而靈敏度更高。線性范圍寬這是因?yàn)閭鹘y(tǒng)的測(cè)顏色的深淺的分辨率比光子計(jì)數(shù)的精度要低得多，本發(fā)明的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)范圍高達(dá)105。安全適用本發(fā)明的化學(xué)發(fā)光物如魯米諾等很安全，整個(gè)檢測(cè)過(guò)程無(wú)有害物出現(xiàn)，無(wú)論是檢測(cè)或處理廢物都很安全，有利于環(huán)境保護(hù)。便于普及本發(fā)明所制備的試劑盒，可用于全自動(dòng)測(cè)量，也可用于手工或半自動(dòng)測(cè)量，適宜大、中、小各層次的醫(yī)療和研究機(jī)構(gòu)使用。社會(huì)效益巨大用本發(fā)明的化學(xué)發(fā)光測(cè)定方法測(cè)定生化指標(biāo)或免疫物質(zhì)，可同用一臺(tái)化學(xué)發(fā)光儀，不再需要進(jìn)口昂貴的生化儀，節(jié)省大量資金，不只降低了成本，對(duì)醫(yī)療機(jī)構(gòu)、患者及社會(huì)均大有益處。本發(fā)明方法簡(jiǎn)單，適于廣泛推廣應(yīng)用。
權(quán)利要求
1.血清中脂肪酶的化學(xué)發(fā)光測(cè)定方法，其特征在于用脂肪酶(LPS)催化將甘油單酯水解成甘油和脂肪酸，再用甘油激酶(GK)及三磷酸腺苷(ATP)將甘油磷酸化成3-磷酸甘油(G-3-P)，3-磷酸甘油(G-3-P)被磷酸甘油氧化酶(GPO)氧化，并產(chǎn)生過(guò)氧化氫，再經(jīng)過(guò)氧化物酶作用，過(guò)氧化氫使化學(xué)發(fā)光物氧化而發(fā)光；光信號(hào)的大小與血清脂肪酶的濃度呈正相關(guān)，即血清脂肪酶濃度越大發(fā)出的光信號(hào)越強(qiáng)；記錄這種光信號(hào)即可推測(cè)血清脂肪酶的濃度；用已知濃度的脂肪酶與測(cè)出的光信號(hào)，作出劑量-反應(yīng)曲線；未知樣品的脂肪酶含量可從該曲線推算出來(lái)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的血清中脂肪酶的化學(xué)發(fā)光測(cè)定方法，其特征在于所述的化學(xué)發(fā)光物為魯米諾。
全文摘要
本發(fā)明血清中脂肪酶的化學(xué)發(fā)光測(cè)定方法，涉及一種在生化分析中醫(yī)用試劑的化學(xué)發(fā)光測(cè)定方法。它所要解決的是現(xiàn)有檢測(cè)范圍窄、靈敏度低、試劑成份復(fù)雜等技術(shù)問(wèn)題。解決該技術(shù)問(wèn)題的主要技術(shù)方案血清中脂肪酶的化學(xué)發(fā)光測(cè)定方法，其特征在于用脂肪酶催化將甘油單酯水解成甘油和脂肪酸，再用甘油激酶及三磷酸腺苷將甘油磷酸化成3－磷酸甘油，3－磷酸甘油被磷酸甘油氧化酶氧化，產(chǎn)生的過(guò)氧化氫，經(jīng)過(guò)氧化物酶作用，過(guò)氧化氫使化學(xué)發(fā)光物氧化而發(fā)光；血清脂肪酶濃度越大發(fā)出的光信號(hào)越強(qiáng)；用已知濃度的脂肪酶與測(cè)出的光信號(hào)，作出劑量－反應(yīng)曲線；未知樣品的脂肪酶含量可從該曲線推算出來(lái)。它檢測(cè)方便、靈敏度高、線性范圍更寬，適于廣泛應(yīng)用。
文檔編號(hào)C12Q1/28GK1908631SQ20061011500
公開(kāi)日2007年2月7日 申請(qǐng)日期2006年8月10日 優(yōu)先權(quán)日2006年8月10日
發(fā)明者王京, 高淑舫 申請(qǐng)人:福建省洪誠(chéng)生物藥業(yè)有限公司