專利名稱：：一種腈水合酶工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)配方及發(fā)酵方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種腈水合酶工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)配方及發(fā)酵方法。背錄技術(shù)腈水合酵生產(chǎn)菌體在發(fā)酵生產(chǎn)過程中，在發(fā)酵初期受菌體對(duì)葡萄糖利用速度慢的影響，一方面使發(fā)酵生產(chǎn)周期過長，-般發(fā)酵生產(chǎn)周期為66個(gè)小時(shí)，另一方面使菌體的生長期相對(duì)過長而生產(chǎn)期相對(duì)過短，從而影響菌體的產(chǎn)酶量和酶活性，一般發(fā)酵生產(chǎn)的酶活性在600萬ugAAM/ml.h左右。通常采用的是在發(fā)酵過程中補(bǔ)加葡萄糖、氫氧化鈉等補(bǔ)料的方法來調(diào)節(jié)菌體的代謝過程。JP8173152和US2005239165公開了腈水解酶發(fā)酵生產(chǎn)配方中加入無機(jī)鹽作為緩沖液，公開了加入磷酸氫二鈉。雖然具有一定的效果，但實(shí)施起來麻煩，甚至還要增加新的設(shè)備設(shè)施目.操作難度大，在增加固定資產(chǎn)投資的同時(shí)，由于補(bǔ)料還常常會(huì)造成發(fā)酵罐染菌的事情發(fā)生。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是通過向工業(yè)發(fā)酵培養(yǎng)基中加入適量的磷酸三鈉來調(diào)節(jié)菌體在發(fā)酵過程中的代謝過程從而達(dá)到調(diào)節(jié)菌體發(fā)酵生產(chǎn)中生長期和生產(chǎn)期的比例，改善發(fā)酵生產(chǎn)效果的目的。磷酸三鈉由于其中磷酸根的作用使其能調(diào)節(jié)菌體細(xì)胞內(nèi)的ATP、腺苷酸、能核和cAMP等效應(yīng)，其中ATP能直接影響某些糖代謝中某些酶的活性，從而能夠加快糖的吸收利用，促進(jìn)菌體生長，進(jìn)而達(dá)到調(diào)節(jié)菌體發(fā)酵生產(chǎn)中生長期和生產(chǎn)期的比例，改善發(fā)酵生產(chǎn)效果的目的?！N腈水合醸工業(yè)發(fā)酵的生產(chǎn)配方，以現(xiàn)有腈水合酶工業(yè)發(fā)酵基液為基礎(chǔ)，發(fā)酵基液中添加磷酸三鈉，添加量為發(fā)酵液質(zhì)量的0.13—0.15%。一種腈水合酶工業(yè)發(fā)酵方法，采用上述配方，在投料完畢并溶解后，使用氫氧化鈉將PH值調(diào)節(jié)至78,然后進(jìn)行消毒，當(dāng)溫度升至110120'C吋，保持壓力1020分鐘，隨后將發(fā)酵罐中物料溫度迅速降至203(TC，當(dāng)菌種達(dá)到指標(biāo)后，轉(zhuǎn)種、發(fā)酵生產(chǎn)。本方法能將腈水合酶的活性提高50。/。以上的同時(shí)能使發(fā)酵罐的發(fā)酵生產(chǎn)周期縮短1/3,由于是在發(fā)酵罐投料時(shí)直接將磷酸三鈉加入到發(fā)酵罐中，因此不需要添加新的設(shè)備，實(shí)施起來簡單，與補(bǔ)糖、補(bǔ)氫氧化鈉等補(bǔ)料方法相比，減少了由于發(fā)酵中途補(bǔ)料所帶來的額外工作和操作控制難度，消除了由于補(bǔ)料而易造成發(fā)酵罐染菌的情況發(fā)生。特別是利用本方法能夠達(dá)到大幅度提高腈水合酶發(fā)酵生產(chǎn)中酶活性和縮短發(fā)酵生產(chǎn)周期的效果。具體實(shí)施例方式實(shí)施例l腈水合酶發(fā)酵生產(chǎn)中，發(fā)酵罐投料時(shí)的總質(zhì)量為6噸，加入磷酸三鈉的質(zhì)量比例為0.13%,則發(fā)酵權(quán)投料時(shí)應(yīng)加入的磷酸三鈉的質(zhì)量為7.8千克，將發(fā)酵罐所用的料全部加完并溶解后將溶液的PH用氫氧化鈉調(diào)至7.5左右，然后進(jìn)行消毒，當(dāng)溫度升至117TC時(shí)，保壓17分鐘，保壓結(jié)束后將發(fā)酵罐中物料的溫度迅速降至28C待用。當(dāng)種子罐中菌種達(dá)到規(guī)定指標(biāo)時(shí)，向發(fā)酵罐進(jìn)行轉(zhuǎn)種，然后開始發(fā)酵生產(chǎn)，發(fā)酵結(jié)果如下表<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>實(shí)施例2腈水合酶發(fā)酵生產(chǎn)中，發(fā)酵鐮投料時(shí)的總質(zhì)量為6噸，加入磷酸三鈉的質(zhì)量比例為0.14%，則發(fā)酵鐮投料時(shí)應(yīng)加入的磷酸三鈉的質(zhì)量為8.4千克，將發(fā)酵罐所用的料全部加完并溶解后將溶液的PH用氫氧化鈉調(diào)至7.5左右，然后進(jìn)行消毒，當(dāng)溫度升至117TC時(shí)，保壓17分鐘，保壓結(jié)束后將發(fā)酵罐中物料的溫度迅速降至28匸待用。當(dāng)種子罐中菌種達(dá)到規(guī)定指標(biāo)時(shí)，向發(fā)酵罐進(jìn)行轉(zhuǎn)種，然后開始發(fā)酵生產(chǎn)，發(fā)酵結(jié)果如下表<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>實(shí)施例3腈水合瞎發(fā)酵生產(chǎn)中，發(fā)酵瞎投料時(shí)的總質(zhì)量為6噸，加入磷酸三鈉的質(zhì)量比例為0.15%，則發(fā)酵權(quán)投料時(shí)應(yīng)加入的磷酸三鈉的質(zhì)量為9.0千克，將發(fā)酵罐所用的料全部加完并溶解后將溶液的PH用氫氧化鈉調(diào)至7.5左右，然后進(jìn)行消毒，當(dāng)溫度升至117"時(shí)，保壓17分鐘，保壓結(jié)束后將發(fā)酵罐中物料的溫度迅速降至28'C待用。當(dāng)種子罐中菌種達(dá)到規(guī)定指標(biāo)時(shí)，向發(fā)酵罐進(jìn)行轉(zhuǎn)種，然后開始發(fā)酵生產(chǎn)，發(fā)酵結(jié)果如下表-<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>比較例1:實(shí)驗(yàn)1為發(fā)酵培養(yǎng)基中未加磷酸三鈉的發(fā)酵實(shí)驗(yàn)結(jié)果，實(shí)驗(yàn)2為發(fā)酵培養(yǎng)基中加磷酸三鈉的發(fā)酵實(shí)驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>權(quán)利要求1、一種腈水合酶工業(yè)發(fā)酵的生產(chǎn)配方，以現(xiàn)有腈水合酶工業(yè)發(fā)酵基液為基礎(chǔ)，其特征在于發(fā)酵基液中添加磷酸三鈉，添加量為發(fā)酵液質(zhì)量的0.13-0.15％。2、一種腈水合酶工業(yè)發(fā)酵方法，其特征在于采用權(quán)利要求l所述配方，在投料完畢并溶解后，使用氫氧化鈉將PH值調(diào)節(jié)至78，然后進(jìn)行消毒，當(dāng)溫度升至110120℃時(shí)，保持壓力1020分鐘，隨后將發(fā)酵罐中物料溫度迅速降至2030℃,當(dāng)菌種達(dá)到指標(biāo)后，轉(zhuǎn)種、發(fā)酵生產(chǎn)。全文摘要一種腈水合酶工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)配方及發(fā)酵方法，以現(xiàn)有腈水合酶工業(yè)發(fā)酵基液為基礎(chǔ)，發(fā)酵基液中添加磷酸三鈉，添加量為發(fā)酵液質(zhì)量的0.13-0.15％；采用上述配方，在投料完畢并溶解后，使用氫氧化鈉將pH值調(diào)節(jié)至7～8，然后進(jìn)行消毒，當(dāng)溫度升至110～120℃時(shí)，保持壓力10～20分鐘，隨后將發(fā)酵罐中物料溫度迅速降至20～30℃，當(dāng)菌種達(dá)到指標(biāo)后，轉(zhuǎn)種、發(fā)酵生產(chǎn)。本方法能將腈水合酶的活性提高50％以上的同時(shí)能使發(fā)酵罐的發(fā)酵生產(chǎn)周期縮短1/3，不需要添加新的發(fā)備，實(shí)施起來簡單，與補(bǔ)糖、補(bǔ)氫氧化鈉等補(bǔ)料方法相比，堿少了由于發(fā)酵中途補(bǔ)料所帶來的額外工作和操作控制難度，消除了由于補(bǔ)料而易造成發(fā)酵罐染菌的情況發(fā)生。文檔編號(hào)C12N1/38GK101200702SQ20061016520公開日2008年6月18日申請日期2006年12月14日優(yōu)先權(quán)日2006年12月14日發(fā)明者晶劉,吳金海,周云霞,李紅梅,田文喜,俊高申請人:中國石油天然氣股份有限公司