專利名稱：：治療和診斷年齡相關(guān)性黃斑變性的方法和試劑的制作方法治療和診斷年齡相關(guān)性黃斑變性的方法和試劑相關(guān)文獻的交叉參考本申請要求U.S.臨時申請No.60/650,078(2005年2月14日提交)、60/717,861(2005年9月16日提交)、60/715,503(2005年9月9日提交)和60/735,697(2005年11月9日提交)的權(quán)益，所述文獻均以其全部內(nèi)容引入本文為參考。聯(lián)邦資助的研發(fā)中產(chǎn)生的發(fā)明的權(quán)利陳述本申請所述工作部分由NIH眼科研究院基金EY11515資助。美國政府擁有本發(fā)明的某些權(quán)利。
背景技術(shù)：
：年齡相關(guān)性黃斑變性(AMD)是發(fā)達國家中引起不可逆失明的最主要原因(綜述參閱，Zarbin，1998，2004;Klein等，2004;Ambati等，2003;deJong,2004;vanLeeuwen等，2003)，影響約15%的60歲以上個體。估計有6億個體在這一年齡統(tǒng)計范圍內(nèi)。AMD的患病數(shù)隨年齡提高，在75歲及以上的群體中，輕度或早期形式在近30。/Q的個體中發(fā)生，高級形式在約7%的個體中發(fā)生(Klein等，1992;Vingerling等，1995a，1995b)。在臨床上，AMD的特征為由黃斑中發(fā)生的退化性變化引起的漸進性中央視覺喪失，黃斑是一見網(wǎng)膜神經(jīng)中的特化區(qū)域及其下層組織。在最嚴重或滲出性的疾病形式下，來自脈絡(luò)膜脈管系統(tǒng)的新生血管葉突破了Bruch膜和視網(wǎng)膜色素上皮(RPE)，一般引起視網(wǎng)膜脫落和其后的變性。AMD作為遲發(fā)性復(fù)合疾病，似乎由遺傳和環(huán)境因素的組合引起和/或調(diào)節(jié)(Seddon和Chen，2004;Tuo等，2004;Klein和Francis,2003)。家族性聚集研究估計遺傳組分主要參與了多達25%的疾病(Klaver等，1998a)。根據(jù)流行的假說，多數(shù)AMD病例不是多種單基因病癥的集合，而是代表定量的表型、表示多種易患基因座的相互作用。所涉及的基因座數(shù)、所賦予的歸因危險度和多個基因座之間的相互作用仍不清楚。連鎖和候選基因篩選分析已經(jīng)對AMD的遺傳學(xué)提供了有限的了解。已經(jīng)報道了一個增加危險的基因，ABCA4(Allikmets等，1997)和一個降低危險的基因，ApoE4(Klaver等，1998b,Souied等，1998)對AMD的可靠關(guān)聯(lián)。，此外，一些小組報道了全基因組連鎖分析的結(jié)果(綜述于Tuo等，2004;Weeks等，2004)。已經(jīng)證明了一個有AMD表型的家族與特定染色體區(qū)域lq25-q31(ARMD1)的連鎖(Klein等，1998)。已經(jīng)提出HEMICENTIN-1基因為致病基因(Schultz等，2003)，盡管其作用還沒有可靠地得到確認。若干研究(Weeks等，2001;Iyengar等，2003;Weeks等，2004)中染色體lq上重疊基因座的鑒定提示該基因座可能包含一個或多個AMD相關(guān)基因。最近對玻璃疣(與AMD發(fā)病相關(guān)的特征性眼損傷)的研究已經(jīng)指出了炎癥和其他免疫介導(dǎo)過程(特別是補體活化)在AMD早期和晚期形式的病因?qū)W中的作用(Hageman等，1999，2001;Mullins等，2000，2001;Russell等，2000;Anderson等，2002，2004;Johnson等，2000，2001;Crabb等，2002;Ambati等，2003;Penfold等，2001;Espinosa-Heidman等，2003)。這些研究已經(jīng)揭示了沿著bruch膜(由彈性蛋白質(zhì)和膠原組成的分隔RPE和脈絡(luò)膜的細胞外層)的玻璃疣中和RPE細胞上的玻璃疣中的末端途徑補體組分(C5、C6、C7、C8和C9)和末端途徑的活化特異性補體蛋白質(zhì)片段(C3b、iC3b、C3dg和C5b-9)以及多種補體途徑調(diào)節(jié)子和抑制子(包括因子H、因子I、因子D、CD55和CD59)(Johnson等，2000，2001;Mullins等2000,2001;Crabb等，2002)。許多這些玻璃疣相關(guān)分子先前認為是主要由肝合成的循環(huán)血漿蛋白質(zhì)。有趣的是，許多這些玻璃疣相關(guān)分子似乎還由RPE和/或脈絡(luò)膜細胞局部合成。補體系統(tǒng)的活化在正常宿主的防御和損傷應(yīng)答中發(fā)揮關(guān)鍵作用(Kinoshita，1991)。這一系統(tǒng)的不適當(dāng)活化和/或控制(常由特異性補體相關(guān)基因的突變引起)可引起自身免疫后遺癥和局部組織破壞(Holers,2003;LiszewskiandAtkinson,1991;MorganandWalport，1991;ShenandMeri，2003),就像動脈粥樣硬化(Torzewski等，1997;Niculescu等，1999)、阿爾茨海默病(Akiyama等，2000)和腎小球腎炎(Schwertz等，2001)中所顯示的那樣。2型膜性增生性腎小球腎炎(MPGNII)—種罕見疾病，與補體級聯(lián)系統(tǒng)旁路途徑的非受控系統(tǒng)性活化相關(guān)。該疾病的特征為腎小球基底膜中異常電子密度物質(zhì)的沉積，最終導(dǎo)致腎衰竭，其中所述異常電子密度物質(zhì)由補體旁路途徑中涉及的蛋白質(zhì)C3和C3c組成。有趣的是，許多MPGNII患者發(fā)生了斑狀玻璃疣、RPE脫離和脈絡(luò)膜新生血管膜，它們在臨床上和組成上均與AMD中形成的有所不同，盡管它們常在十至二十歲中檢測到(Mullins等，2001;O'Brien等，1993;Huang等，2003;Colville等，2003;Duvall-Young等，1989a，1989b;Raines等，1989;Leys等，19卯；McAvoyandSilvestri，2004;Bennett等，1989;OrthandRitz，1998;Habib等，1975)。在多數(shù)MPGNII患者中，補體級聯(lián)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)失能是由針對C3bBb的自身抗體介導(dǎo)的。然而，其他MPGNII患者在因子H中存在突變(Ault等，1997;Dragon-Durey等，2004)，因子H是旁路補體途徑的主要抑制子。因子H中的點突變(I1166R)在約克豬中引起MPGNII(Jansen等，l外8)，因子H缺陷型小鼠發(fā)生嚴重腎小球腎炎(Pickering等，2002)。此外，一些患MPGNIII的擴大家族(相關(guān)疾病)的患病個體顯示對染色體lq31-32的連鎖(Neary等，2002)，lq31-32是與在AMD的全基因組連鎖研究(見上文)中已經(jīng)鑒定的基因座重疊的區(qū)域。這一特定基因座包含大量補體途徑相關(guān)基因。這些基因的一個組稱為補體活化調(diào)節(jié)子(RCA)基因簇，含有編碼因子H、五種因子H相關(guān)基因(CFHR1、CFHR2、CFHR3、CFHR4和CFHR5)和凝固因子XIIIP亞基的基因。補體途徑相關(guān)基因的第二個簇與lq25-31基因座毗鄰，包括C4BPA、C4BPB、C4BPAL2、DAF(CD55)CR1、CR2、CR1L和MCP(CD46)。發(fā)明概述本發(fā)明涉及補體因子H基因的多態(tài)性和單元型，所述基因與年齡相關(guān)性黃斑變性(AMD)和2型膜性增生性腎小球腎炎(MPGNII)的發(fā)生相關(guān)。本發(fā)明還涉及補體因子H相關(guān)5(CFHR5)基因的多態(tài)性和單元型，所述基因與AMD和MPGNII的發(fā)生相關(guān)。本發(fā)明提供診斷、監(jiān)測和治療這些以及其他疾病的方法。在一方面中，本發(fā)明提供用于確定受試者發(fā)生年齡相關(guān)性黃斑變性(AMD)的傾向的診斷方法，所述方法包括檢測因子H基因多個多態(tài)性位點中變異的存在與否。在一個實施方案中，本發(fā)明提供診斷對發(fā)生AMD的易感性增加的方法，包括檢測個體中因子H基因多態(tài)性的存在與否。該方法可包括獲得來自個體的DNA和分析來自該個體的DNA以確定該DNA是否在因子H基因中含有多態(tài)性。某些多態(tài)性指示，該個體與對照群體相比發(fā)生AMD的易感性增加。某些多態(tài)性指示該個體發(fā)生AMD的可能性降低。某些多態(tài)性指示該個體發(fā)生AMD的可能性既沒有增加也沒有降低。在一個實施方案中，受試者發(fā)生年齡相關(guān)性黃斑變性(AMD)的傾向的診斷方法包括獲得來自該受試者的DNA樣品和檢測該患者的DNA中是否存在與發(fā)生AMD相關(guān)的多態(tài)性，存在該多態(tài)性指示該受試者發(fā)生AMD的傾向提高，不存在該多態(tài)性指示該受試者發(fā)生AMD的傾向降低。在相關(guān)的方面中，本發(fā)明提供診斷對發(fā)生AMD的易感性的方法，包括確定個體的因子H單元型。該方法包括獲得來自個體的DNA和分析該個體的DNA以確定其因子H單元型。某些單元型(危險單元型)指示該個體對發(fā)生AMD的易感性提高。某些單元型(保護性單元型)指示該個體對發(fā)生AMD的易感性降低。某些單元型(中性單元型)指示該個體對發(fā)生AMD的可能性既不提高也不降低。在相關(guān)的實施方案中，通過分析該基因編碼的基因產(chǎn)物(如RNA或因子H蛋白質(zhì)(如蛋白質(zhì)同種型))來確定因子H基因的多態(tài)性位點中變異的存在與否。變體蛋白質(zhì)的表達指示因子H基因的變異，并可指示提高或降低的發(fā)生AMD的傾向?？梢允褂妹庖邷y定和其他方法檢測蛋白質(zhì)。在另一相關(guān)的實施方案中，本發(fā)明提供通過檢測個體生物樣品中的變體因子H多肽來診斷發(fā)生AMD或其他疾病的易感性的方法。在一個實施方案中，使用基于抗體的測定診斷個體中的AMD或其他疾病，其中使該個體的生物樣品(如血清樣品)接觸抗體并檢測變體因子H多肽的存在與否。在實施方案中，該抗體與變體因子H多肽特異性表位(即在野生型因子H多肽中未發(fā)現(xiàn))特異性相互作用。在實施方案中，使用基于分離的測定(如PAGE)診斷個體中的AMD或其他疾病，其中檢測個體的生物樣品(如血清樣品)中變體因子H多肽的存在與否。在一個方面中，本發(fā)明提供通過調(diào)節(jié)因子H的類型和/或全身和/或眼水平的量來治療患AMD(如其中檢測到指示發(fā)生癥狀A(yù)MD的危險提高的多態(tài)性或單元型的個體)或其他變體因子H基因相關(guān)疾病的個體的方法。該因子H多肽可以是野生型因子H多肽或變體因子H多肽。該因子H多肽可以是這樣的因子H多肽，即其具有中性或保護性等位基因而不是危險單元型相關(guān)等位基因編碼的序列。在一個實施方案中，該方法包括對個體施用有效量的因子H多肽，以降低疾病癥狀。在一個實施方案中，該方法包括對個體施用有效量的因子H多肽，以降低發(fā)生疾病癥狀的傾向并延緩疾病的發(fā)生和發(fā)展。在一個實施方案中，該方法包括施用包含因子H的血液。在一個實施方案中，該方法包括施用核酸(如轉(zhuǎn)基因)，所述核酸包含編碼因子H多肽的核苷酸序列。在一個實施方案中，該方法包括施用表達因子H多肽的細胞。在一個方面中，本發(fā)明提供治療患AMD(如其中檢測到指示發(fā)生癥狀A(yù)MD的危險提高的多態(tài)性或單元型的個體)或其他變體因子H基因相關(guān)疾病的個體的方法。在一個實施方案中，該方法包括對患者施用有效量的降低變體因子H的量或編碼因子H的基因表達的物質(zhì)，以減少患者的疾病癥狀。在相關(guān)實施方案中，對個體施用治療量的變體因子H多肽抑制劑(如滅活劑)。在一個實施方案中，對個體施用抑制性核酸(如與變體因子H多肽的核苷酸序列至少部分互補的RNA)。在一個實施方案中，施用純化的反義RNA，其與編碼變體因子H多肽的RNA互補。在另一實施方案中，對個體施用治療量的抗CFH抗體，所述抗體足以部分滅活變體因子H多肽。在另一實施方案中，治療個體以從血中除去因子H的有害形式(如通過血漿去除術(shù)、抗體指導(dǎo)的血漿去除術(shù)或與因子H結(jié)合部分如肝素的復(fù)合)。在一個方面中，本發(fā)明提供編碼變體因子H多肽的純化DNA、編碼變體因子H多肽的純化RNA，與編碼變體因子H多肽的RNA互補的純化反義RNA以及純化的變體因子H多肽。在相關(guān)方面中，本發(fā)明提供用于表達野生型或變體因子H多肽或因子H生物活性片段的核酸。在一個方面中，本發(fā)明提供包含編碼因子H多肽的核酸的基因治療栽體。該載體可包括驅(qū)動因子H基因在多種細胞類型中表達的啟動子。備選地，該載體可包括驅(qū)動因子H基因僅在特定細胞類型(如視網(wǎng)膜細胞或腎細胞)中表達的啟動子。在一個方面中提供了含有編碼因子H蛋白質(zhì)的基因治療載體和可藥用賦形劑的藥物組合物，其中該組合物不含有病原體，并適于對人類患者施用。在一個實施方案中，所編碼的因子H多肽為保護性變體。在一個方面中，本發(fā)明提供含有重組或純化的因子H多肽的組合物，其中所述多肽為保護性多肽。在相關(guān)方面中，本發(fā)明提供含有重組或純化的因子H多肽和可藥用賦形劑的藥物組合物，其中所述組合物不含有病原體，并適于對人類患者施用。在一個實施方案中，編碼的因子H多肽具有野生型序列。在一個實施方案中，編碼的因子H多肽為保護性變體。在一個方面中，本發(fā)明提供抗體，所述抗體與變體因子H多肽而不是野生型因子H多肽特異性相互作用。這些抗體可以是多克隆抗體或單克隆抗體，并可通過消減技術(shù)獲得。這些抗體足以滅活變體因子H多肽。在相關(guān)方面中，本發(fā)明提供含有抗因子H抗體和可藥用賦形劑的藥物組合物，其中所述組合物不含有病原體，并適于對人類患者施用。在一個方面中，本發(fā)明提供鑒定與發(fā)生AMD的危險提高或降低相關(guān)的變體因子H蛋白質(zhì)的方法。在一個實施方案中，本發(fā)明提供鑒定保護性因子H蛋白質(zhì)的方法，所述方法通過U)鑒定具有保護性單元型的個體，和(b)確定在個體基因組中編碼的因子H的M^列，其中保護性因子H蛋白質(zhì)由具有保護性單元型的等位基因編碼。在一個實施方案中，本發(fā)明提供鑒定中性因子H蛋白質(zhì)的方法，所述方法通過(a)鑒定具有中性單元型的個體，和(b)確定在個體基因組中編碼的因子H的氨基^列，其中中性因子H蛋白質(zhì)由具有中性單元型的等位基因編碼。在相關(guān)實施方案中，本發(fā)明提供鑒定與發(fā)生AMD的危險降低相關(guān)的因子H變體形式的方法，包括(a)鑒定具有與發(fā)生AMD的危險降低相關(guān)的單元型或二倍型(diplotype)的個體；(b)獲得來自個體的基因組DNA或RNA;和(c)確定在個體基因組中編碼的因子H的氨基酸序列，其中保護性因子H蛋白質(zhì)由具有與發(fā)生AMD的危險降低相關(guān)的等位基因編碼。在實施方案中，所述保護性或中性因子H蛋白質(zhì)不具有野生型因子H多肽的M酸序列。在相關(guān)方法中，鑒定與發(fā)生AMD的危險提高相關(guān)的因子H形式，是通過(a)鑒定具危險單元型的個體；和(b)確定在個體基因組中編碼的因子H的氨基酸序列，其中危險因子H蛋白質(zhì)由具危險單元型的等位基因編碼。在相關(guān)實施方案中，本發(fā)明提供了鑒定與發(fā)生AMD的危險提高相關(guān)的因子H的變體形式的方法，包括(a)鑒定具有與發(fā)生AMD的危險提高相關(guān)的單元型或二倍型的個體；(b)獲得來自該個體的基因組DNA或RNA;和(c)確定在個體基因組中編碼的因子H的氨基酸序列，其中危險因子H蛋白質(zhì)由具有與發(fā)生AMD的危險提高相關(guān)的單元型的等位基因編碼。在實施方案中，所述危險因子H蛋白質(zhì)不具有野生型因子H多肽的氨基^列。在一個方面中，本發(fā)明提供診斷發(fā)生AMD或其他疾病的傾向或易感性的方法，所述方法通過檢測患者的生物樣品中全長因子H與截短因子H的比值。在一個實施方案中，診斷受試者中發(fā)生AMD的傾向或易感性的方法包括獲得來自受試者的RNA樣品和檢測患者RNA中外顯子10(即全長因子H)與外顯子10A(即截短的因子H)表達的比值，比值提高指示該受試者發(fā)生AMD的傾向或易感性提高，比值降低指示該受試者發(fā)生AMD的傾向或易感性降低。在一個實施方案中，診斷受試者中發(fā)生AMD的傾向或易感性的方法包括獲得來自受試者的蛋白質(zhì)樣品和檢測患者蛋白質(zhì)中全長因子H與截短的因子H的表達比值，比值提高指示該受試者發(fā)生AMD的傾向或易感性提高，比值降低指示該受試者發(fā)生AMD的傾向或易感性降低。在一個方面中，本發(fā)明提供細胞，所述細胞含有編碼因子H蛋白質(zhì)或其片段的重組或純化核酸，例如來自因子H基因的核酸。細胞可以為細菌或酵母或用于研究和藥物開發(fā)的任何其他細胞。因此，本發(fā)明提供表達重組變體人因子H的分離宿主細胞或細胞系。在實施方案中，變體是危險變體且第第402位氨基酸具有組氨酸。在實施方案中，變體是保護性變體且第62位氨基酸為異亮氨酸。在實施方案中，變體為中性變體。在實施方案中，所述危險、保護性或中性變體因子H蛋白質(zhì)不具有野生型因子H多肽的氨基*列。在一個方面中，本發(fā)明提供轉(zhuǎn)基因非人動物，其體細胞和生殖細胞含有編碼人變體因子H多肽的轉(zhuǎn)基因。本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因動物可用作AMD模型和用于篩選治療AMD的有用物質(zhì)。動物可以是小鼠、蟲或用于研究和藥物開發(fā)(如重組產(chǎn)生因子H)的任何其他動物。在實施方案中，該因子H為變體人因子H，其中所述變體的第62位氨基酸為異亮氨酸或第402位氨基酸為組氨酸。在一個方面中，本發(fā)明提供篩選多態(tài)性位點的方法，所述多態(tài)性位點與表1A、1B和1C所述因子H基因中的多態(tài)性位點連鎖。這些方法包括鑒定基因中與因子H基因多態(tài)性位點連鎖的多態(tài)性位點，其中因子H基因中多態(tài)性位點的多態(tài)性形式與AMD相關(guān)；確定個體群中的單元型，以指示該連鎖的多態(tài)性位點是否具有與因子H基因的多態(tài)性形式平衡-不平衡的多態(tài)性形式，其中因子H基因的多態(tài)性形式與AMD表型相關(guān)。在一個方面中，本發(fā)明提供MPGNII的診斷、治療和篩選方法，如上述對AMD進行。在一個方面中，本發(fā)明提供用于確定受試者發(fā)生AMD或MPGNII的傾向的方法，包括檢測CFHR5基因的一個或多個多態(tài)性位點中是否存在一個或多個變異。在一個實施方案中，本發(fā)明提供診斷對發(fā)生AMD或MPGNII的易感性提高的方法，包括檢測個體CFHR5基因中是否存在多態(tài)性。該方法可包括獲得自個體的DNA和分析來自該個體的DNA以確定該DNA是否在CFHR5基因中含有多態(tài)性。某些多態(tài)性指示個體對發(fā)生AMD或MPGNII的易感性提高。某些多態(tài)性指示個體發(fā)生AMD或MPGNII的可能性降低。某些多態(tài)性指示個體發(fā)生AMD或MPGNII的可能性既不提高也不降低。在一個實施方案中，診斷受試者中發(fā)生AMD或MPGNII的傾向的方法包括從受試者獲得DNA樣品和檢測該患者的DNA中是否存在與發(fā)生AMD或MPGNII相關(guān)的多態(tài)性，存在該多態(tài)性指示該受試者發(fā)生AMD或MPGNII的傾向提高，不存在該多態(tài)性指示該受試者發(fā)生AMD或MPGNII的傾向降低。在相關(guān)的實施方案中，通過分析基因產(chǎn)物(如RNA或該基因編碼的CFHR5蛋白質(zhì)(如蛋白質(zhì)同種型))確定CFHR5基因多態(tài)性位點處的變異存在與否。變體蛋白質(zhì)的表達指示CFHR5基因中的變異，并可指示發(fā)生AMD或MPGNII的傾向提高或降低?？梢允褂妹庖邷y定和其他方法檢測蛋白質(zhì)。在相關(guān)方面中，本發(fā)明提供診斷對發(fā)生AMD或MPGNII的易感性的方法，包括確定個體的CFHR5單元型。該方法包括獲得來自個體的DNA和分析該個體的DNA以確定其CFHR5單元型。某些單元型(危險單元型)指示個體具有比對照群提高的對發(fā)生AMD或MPGNII的易感性。某些單元型(保護性單元型)指示該個體具有降低的對發(fā)生AMD或MPGNII的易感性。某些單元型(中性單元型)指示該個體發(fā)生AMD或MPGNII的可能性既不提高也不降低。在另一相關(guān)方面中，本發(fā)明提供通過檢測個體的生物樣品中變體CFHR5多肽來診斷對發(fā)生AMD或MPGNII或其他疾病的易感性的方法。在一個實施方案中，使用基于抗體的測定診斷個體中的AMD或MPGNII或其他疾病，其中通過使個體的生物樣品(如血清樣品)接觸該抗體并檢測是否存在該變體CFHR5多肽。在實施方案中，該抗體與變體CFHR5多肽特異性表位(即在野生型CFHR5多肽中未發(fā)現(xiàn)的)特異性相互作用。在實施方案中，使用基于分離的測定(如PAGE)診斷個體中的MPGNII或其他疾病，這是通過檢測該個體的生物樣品(如血清樣品)中是否存在該變體CFHR5多肽?？梢允褂枚喾N類型的免疫測定形式來測定樣品中的CFH或CFHR5的多肽或蛋白質(zhì)。包括夾層ELISA、i文射性免疫測定、熒光免疫測定、免疫組織化學(xué)測定、點印跡、量桿(dip-stick)和Western印跡。在一個方面中，本發(fā)明提供通過調(diào)節(jié)CFHR5的類型和/或全身性和/或腎水平的量來治療個體的方法，所述個體患有AMD或MPGNII(如其中檢測到指示發(fā)生AMD或MPGNII癥狀的危險提高的多態(tài)性或單元型的個體)或與變體CFHR5基因相關(guān)的其他疾病，或者有患病危險。CFHR5多肽可以是中性或保護性等位基因而不是與危險單元型相關(guān)的等位基因所編碼的CFHR5多肽。在一個實施方案中，該方法包括以有效降低疾病癥狀的量對個體施用CFHR5多肽。在一個實施方案中，該方法包括以有效降低發(fā)生疾病癥狀的傾向和延緩疾病的發(fā)生或發(fā)展的量對個體施用CFHR5多肽。在一個實施方案中，該方法包括施用含有CFHR5的血。在一個實施方案中，該方法包括施用包含編碼CFHR5多肽的核苷酸序列的核酸(如轉(zhuǎn)基因)。在一個方面中，本發(fā)明提供治療個體的方法，所述個體患有AMD或MPGNII(如檢測到指示發(fā)生AMD或MPGNII癥狀的危險提高的多態(tài)性或單元型的個體)或與變體CFHR5基因相關(guān)的其他疾病。在一個實施方案中，該方法包括以有效降低患者中疾病癥狀的量對患者施用物質(zhì)，所述物質(zhì)降低變體CFHR5的量或編碼CFHR5的基因的表達。CFHR5多肽可以是野生型CFHR5多肽或變體CFHR5多肽。在一個實施方案中，對個體施用抑制性核酸(如與變體CFHR5多肽的核苷酸序列至少部分互補的RNA)。在一個實施方案中，施用與編碼變體CFHR5多肽的RNA互補的純化的反義RNA。在另一實施方案中，對個體施用治療量的抗CFHR5抗體，所述抗體足以使該變體CFHR5多肽部分失活。在相關(guān)的實施方案中，對個體施用治療量的變體CFHR5多肽抑制劑(如滅活劑)。在另一實施方案中，治療個體以從血中除去CFHR5的有害形式(如通過血漿去除術(shù)、抗體指導(dǎo)的血漿去除術(shù)或與CFHR5結(jié)合部分如肝素的復(fù)合)。在一個方面中，本發(fā)明提供編碼變體CFHR5多肽的純化DNA、編碼變體CFHR5多肽的純化RNA、與編碼變體CFHR5多肽的RNA互補的純化的反義RNA以及純化的變體CFHR5多肽。在相關(guān)方面中，本發(fā)明提供用于表達野生型或變體CFHR5多肽或CFHR5的生物活性片段的核酸。在一個方面中，本發(fā)明提供包含編碼CFHR5多肽的核酸的基因治療載體。該載體可包括驅(qū)動CFHR5基因在多種細胞類型中表達的啟動子。備選地，該栽體可包括驅(qū)動CFHR5基因僅在特定細胞類型(例如視網(wǎng)膜細胞或腎細胞(如內(nèi)皮細胞、腎系膜細胞、足細胞))中表達的啟動子。在一個方面中，本發(fā)明提供含有編碼CFHR5蛋白質(zhì)的基因治療載體和可藥用賦形劑的藥物組合物，其中該組合物不含病原體，并適于對人類患者施用。在一個實施方案中，編碼的CFHR5多肽為保護性變體。在一個方面中，本發(fā)明提供含有重組或純化的CFHR5多肽的組合物，其中該多肽為保護性變體。在相關(guān)方面中，本發(fā)明提供含有重組或純化的CFHR5多肽和可藥用賦形劑的藥物組合物，其中該組合物不含病原體，并適于對人類患者施用。在一個實施方案中，編碼的CFHR5多肽為野生型序列。在一個實施方案中，編碼的CFHR5多肽為保護性變體。在一個方面中，本發(fā)明提供與變體CFHR5多肽特異性相互作用而不與野生型CFHR5多^bf目互作用的抗體。這些抗體可以是多克隆抗體或單克隆抗體，并都可通過消減技術(shù)獲得。這些抗體可以足以滅活變體CFHR5多肽。在相關(guān)方面中，本發(fā)明提供含有抗CFHR5抗體和可藥用賦形劑的藥物組合物，其中該組合物不含病原體，并適于對人類患者施用。在一個方面中，本發(fā)明提供鑒定與發(fā)生AMD或MPGNII的危險提高或降低相關(guān)的變體CFHR5蛋白質(zhì)的方法。在一個實施方案中，本發(fā)明提供鑒定保護性CFHR5蛋白質(zhì)的方法，所述方法通過(a)鑒定具有保護性單元型的個體，和(b)確定在個體基因組中編碼的CFHR5氨基酸序列，其中保護性CFHR5蛋白質(zhì)由具有保護性單元型的等位基因編碼。在一個實施方案中，本發(fā)明提供鑒定中性CFHR5蛋白質(zhì)的方法，所述方法通過(a)鑒定具有保護性單元型的個體，和(b)確定在個體基因組中編碼的CFHR5氨基酸序列，其中中性CFHR5蛋白質(zhì)由具有中性單元型的等位基因編碼。在相關(guān)實施方案中，本發(fā)明提供鑒定與發(fā)生AMD或MPGNII的危險降低相關(guān)的CFHR5變體形式的方法，包括(a)鑒定具有與發(fā)生AMD或MPGNII的危險降低相關(guān)的單元型或二倍型的個體；(b)獲得來自個體的基因組DNA或RNA;和(c)確定在個體基因組中編碼的CFHR5氨基酸序列，其中保護性CFHR5蛋白質(zhì)由具有與發(fā)生AMD或MPGNII的危險降低的單元型的等位基因編碼。在實施方案中，保護性或中性CFHR5蛋白質(zhì)不具有野生型CFHR5多肽的氨基酸序列。在相關(guān)方法中，鑒定了與發(fā)生AMD或MPGNII的危險提高相關(guān)的CFHR5形式，所述鑒定通過(a)鑒定具危險單元型的個體和(b)確定在個體基因組中編碼的CFHR5氨基酸序列，其中危險CFHR5蛋白質(zhì)由具危險單元型的等位基因編碼。在相關(guān)實施方案中，本發(fā)明提供鑒定與發(fā)生AMD或MPGNII的危險提高相關(guān)的CFHR5變體形式，包括(a)鑒定具有與發(fā)生AMD或MPGNII的危險提高相關(guān)的單元型或二倍型的個體；(b)獲得來自該個體的基因組DNA或RNA，和(c)確定在個體基因組中編碼的CFHR5氨基酸序列，其中危險CFHR5蛋白質(zhì)由具有與發(fā)生AMD或MPGNII的危險提高相關(guān)的單元型的等位基因編碼。在實施方案中，危險CFHR5蛋白質(zhì)不具有野生型CFHR5多肽的M酸序列。在一個方面中，本發(fā)明提供含有重組或純化的核酸的細胞，所述核酸來自CFHR5基因。該細胞可以為細菌或酵母，或用于研究和藥物開發(fā)的任何其他細胞。因此，本發(fā)明提供表達重組變體人CFHR5的分離的宿主細胞或細胞系。在實施方案中，CFHR5變體為危險變體，并且第46位氨基酸為絲氨酸。在實施方案中，CFHR5變體為中性變體。在實施方案中，危險、保護性或中性變體CFHR5蛋白質(zhì)不具有野生型CFHR5多肽的氨基酸序列。在一個方面中，本發(fā)明提供轉(zhuǎn)基因非人動物，其體細胞和生殖細胞含有編碼人變體CFHR5多肽的轉(zhuǎn)基因。本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因動物用作AMD或MPGNII的模型，并用于篩選用于治療AMD或MPGNII的物質(zhì)。所述動物可以為小鼠、蟲或用于研究和藥物開發(fā)(如重組產(chǎn)生CFHR5)的任何其他動物。在實施方案中，CFHR5為變體人CFHR5，其中所述CFHR5變體的第46位氨基酸為絲氨酸。在一個方面中，本發(fā)明提供篩選與表14或表15中所述CFHR5基因多態(tài)性位點連鎖的多態(tài)性位點的方法。這些方法包括鑒定與CFHR5基因多態(tài)性位點連鎖的基因中的多態(tài)性位點，其中CFHR5基因中多態(tài)性位點的多態(tài)性形式與AMD或MPGNII相關(guān)；以及測定個體群中的單元型，以因的多態(tài)性形式平衡-不平衡的多態(tài)性形式。在一個方面中，本發(fā)明提供用于分析因子H單元型的試劑盒。該試劑盒可用于診斷患者的AMD。該試劑盒可包括一個或多個因子H、因子H等位基因特異性寡核苷酸(如等位基因特異性引物或探針)或特異性識別因子H多肽的抗體。該因子H等位基因特異性寡核苷酸可包括來自因子H基因編碼(外顯子)或非編碼(啟動子、5，未翻譯、內(nèi)含子或3，未翻譯)區(qū)的序列。該因子H特異性抗體可識別正?；蛞吧虷多肽或變體因子H多肽，其中在該因子H編碼區(qū)中存在一個或多個非同義單核苷酸多態(tài)性(SNP)。該試劑盒可用于診斷AMD以及與因子H基因SNP相關(guān)的其他疾病，如MPGNII。作為替代或補充，該試劑盒可包括一個或多個因子H相關(guān)5(CFHR5)等位基因特異性寡核苷酸(如引物或探針)或特異性識別CFHR5多肽的抗體。CFHR5等位基因特異性引物和因子H相關(guān)5等位基因特異性寡核苷酸可包括來自因子H相關(guān)5基因的編碼(外顯子)或非編碼(啟動子、5'未翻譯、內(nèi)含子或3，未翻譯)區(qū)的序列。因子H相關(guān)5特異性抗體可識別正?；蛞吧虷多肽或變體因子H相關(guān)5多肽，其中在該因子H相關(guān)5編碼區(qū)中存在一個或多個非同義單核苷酸多態(tài)性(SNP)。在一個實施方案中，該試劑盒包含探針或引物，它們可以在表1A、表1B和/或表1C中列出的多態(tài)性位點處區(qū)分等位基因。在實施方案中，該探針為用于核酸擴增的引物，所述擴增為擴增跨越表1A、表1B和/或表1C中列出因子H基因多態(tài)性位點的區(qū)域。在實施方案中，該試劑盒具有探針或引物，它們在表1A、表1B和/或表1C中列出的一個以上多態(tài)性位點處區(qū)分等位基因。在實施方案中，該試劑盒具有在一個以上多態(tài)性位點處區(qū)分等位基因的探針或引物，其中所述多態(tài)性位點包括(a)rs529825;(b)rs800292;(c)rs3766404;(d)rsl061147;(e)rsl061170;②rs203674;(g)rs529825和rs800292中至少一個；(h)rsl061147、rs1061170和rs203674中至少一個；(i)rs529825和rs800292中至少一個，以及rs3766404;以及rsl061147，rsl061170和rs203674中至少一個；或者j)rs529825，rs800292，rs3766404，rsl061170和rs203674中至少一個。在相關(guān)實施方案中，試劑盒具有在一個以上多態(tài)性位點區(qū)分等位基因的探針或引物，其中所述多態(tài)性位點包括(a)rs529825;(b)rs800292;(c)內(nèi)含子2(IVS2或insTT)(d)rs3766404;(e)rsl061147;(f)rsl061170;(g)外顯子10A;(h)rs203674;(i)rs375046;j)rs529825和rs800292;(k)rsl061147、rsl061170和rs203674中至少兩個或三個；(1)rs529825和rs800292中至少一個；和內(nèi)含子2;和rs3766404;和rsl061147、rsl061170和rs203674中至少一個;和外顯子10A;和rs375046;(m)至少rs529825;rs800292;內(nèi)含子2;rs3766404;rsl061170;外顯子10A;rs203674;和rs375046;(n)rs529825、rs800292、內(nèi)含子2;rs3766404、rsl061170、夕卜顯子10A、rs203674和rs375046中至少兩個，或至少三個或至少四個；(o)外顯子22(1210);或(p)外顯子22(U10)與任意前述變異或一組變異(a-o)組合。在實施方案中，試劑盒具有在rs460897和rs460184中一處或兩處區(qū)分等位基因的探針或引物。在實施方案中，該試劑盒具有在一個以上多態(tài)性位點處區(qū)分等位基因的探針或引物，其中所述多態(tài)性位點選自(a)rs3753394;(b)rs529825;(c)rs謂292;(d)內(nèi)含子2(IVS2或insTT);(e)rs3766404;①rsl061147;(g)rsl061170;(h)rs2274700;①rs203674;(j)rs3753396;和(k)rsl065489。在一個實施方案中，作為上述探針的替代或補充，試劑盒含有區(qū)分CFHR5基因中多態(tài)性位點的探針、引物、抗體等。在一個方面中，本發(fā)明提供基于CFHR5基因變異的診斷患者AMD或MPGNII的試劑盒。試劑盒可包括一種或多種CFHR5特異性探針或CFHR5等位基因特異性寡核苷酸，或特異性識別CFHR5多肽的抗體。CFHR5特異性引物和CFHR5等位基因特異性寡核苷酸可包括來自CFHR5基因編碼(外顯子)或非編碼(啟動子、5，未翻譯、內(nèi)含子或3，未翻譯)區(qū)的序列。CFHR5特異性抗體可識別正?；蛞吧虲FHR5多肽或變體CFHR5多肽，其中在CFHR5編碼區(qū)中存在一個或多個非同義單核苷酸多態(tài)性(SNP)。該試劑盒可用在一個實施方案中，試劑盒含有在表14或表15中列出的多態(tài)性位點處區(qū)分等位基因的探針或引物。在實施方案中，4笨針為用于核酸擴增的引物，其中擴增是擴增跨越表14或表15中列出的CFHR5基因多態(tài)性位點的區(qū)域。在實施方案中，該試劑盒具有在表14或表15中列出的一個以上多態(tài)性位點處區(qū)分等位基因的探針或引物。在實施方案中，該試劑盒包含在一個、兩個或全部以下多態(tài)性位點處區(qū)分等位基因的探針或引物rs9427661(-249T>C);rs9427662(畫20T〉C)和rsl2097550(P46S)。在一個實施方案中，試劑盒含有在CFH基因中的多態(tài)性位點和CFHR基因(如CFHR5)的多態(tài)性位點處區(qū)分等位基因的探針或引物。在一個方面中，本發(fā)明提供用于確定受試者單元型的裝置。該裝置可用于例如診斷患者的AMD或其他疾病。在一個實施方案中，該裝置含有在表1A、1B和/或1C中列出的多態(tài)性位點處區(qū)分等位基因的探針或引物。在實施方案中，探針為用于核酸擴增的引物，其中擴增是擴增跨越表1A、1B和/或1C中列出的因子H基因多態(tài)性位點的區(qū)域。在實施方案中，該裝置具有在表1A、1B和/或1C中列出的一個以上多態(tài)性位點處區(qū)分等位基因的探針或引物。在實施方案中，該裝置具有在一個以上多態(tài)性位點處區(qū)分等位基因的探針或引物，其中所述多態(tài)性位點包括(a)rs529825;(b)rs800292;(c)rs3766404;(d)rsl061147;(e)rsl061170;(f)rs203674;(g)rs529825和rs800292中至少一個；(h)rsl061147、rsl061170和rs203674中至少一個；(i)rs529825和rs800292中至少一個；和rs3766404;以及rsl061147、rsl061170和rs203674中至少一個;或者j)至少rs529825、rs800292、rs3766404、rsl061170和rs203674。向或確定因子H單元型。在相關(guān)實施方案中，該裝置具有在一個以上多態(tài)性位點處區(qū)分等位基因的探針或引物，其中所述多態(tài)性位點包括(a)rs529825;(b)rs800292;(c)內(nèi)含子2(IVS2或insTT);(d)rs3766404;(e)rsl061147;(f)rsl061170;(g)外顯子10A;(h)rs203674;(i)rs375046;(j)rs529825和rs800292;(k)rsl061147、rsl061170和rs203674中至少兩個或三個；(1)rs529825和rs800292中至少一個；和內(nèi)含子2;和rs3766404;和rsl061147，rsl061170和rs203674中至少一個;和外顯子IOA;和rs375046;(m)至少rs529825;rs800292;內(nèi)含子2;rs3766404;rsl061170;外顯子10A;rs203674;和rs375046;(n)rs529825、rs800292、內(nèi)含子2、rs3766404、rsl061170、夕卜顯子10A、rs203674和rs375046中至少兩個，或至少三個或至少四個；(o)外顯子22(1210);或(p)外顯子22(1210)與任意前述變異或一組變異(a-o)組合。在實施方案中，裝置具有在rs460897和rs460184中一個或兩個處區(qū)分等位基因的探針或引物。在實施方案中，裝置具有在一個以上多態(tài)性位點處區(qū)分等位基因的探針或引物，其中所述多態(tài)性位點選自(a)rs3753394;(b)rs529825;(c)rs800292;(d)內(nèi)含子2(IVS2或insTT);(e)rs3766404;(f)rsl061147;(g)rsl061170;(h)rs2274700;(i)rs203674;(j)rs3753396和(k)rsl065489。在實施方案中，裝置具有在一個以上多態(tài)性位點處區(qū)分等位基因的4果針或引物，其中所述多態(tài)性位點選自(a)rs3753394;(b)rs529825;(c)rs800292;(d)內(nèi)含子2(IVS2或insTT);(e)rs3766404;(f)rsl061147;(g)rsl061170;(h)rs2274700;(i)rs203674;(j)rs3753396和(k)rsl065489。在一個方面中，本發(fā)明提供用于診斷患者的AMD或MPGNII的裝置。在一個實施方案中，該裝置含有在表14和表15列出的多態(tài)性位點處區(qū)分等位基因的探針或引物。在實施方案中，探針為用于核酸擴增的引物，其中擴增是擴增跨越表14或表15中列出的CFHR5基因多態(tài)性位點的區(qū)域。在實施方案中，該裝置具有在表14或表15中列出的一個以上多態(tài)性位點處區(qū)分等位基因的探針或引物。本發(fā)明的裝置可含有區(qū)分因子H和CHFR5變體的探針或引物，包括上文及本文公開內(nèi)容中其他處所述的位點的任何組合。上文所述裝置及其內(nèi)含物還可用于為任何目的而鑒定發(fā)生MPGNII的傾向或確定因子H單元型。在一個實施方案中，作為上述探針或引物的替代或補充，該裝置含有區(qū)分CFHR5基因中多態(tài)性位點的探針、引物、抗體等。在一個方面中，本發(fā)明提供基于CFHR5基因變異診斷患者的AMD或MPGNII的裝置。該裝置可包括一種或多種CFHR5特異性探針或CFHR5等位基因特異性寡核苷酸或特異性識別CFHR5多肽的抗體。CFHR5特異性引物和CFHR5等位基因特異性寡核苷酸可包括來自CFHR5基因編碼(外顯子)或非編碼(啟動子、5'未翻譯、內(nèi)含子或3，未翻譯)區(qū)的序列。該CFHR5特異性抗體可識別正常或野生型CFHR5多肽或變體CFHR5多肽，其中在該CFHR5編碼區(qū)中存在一個或多個非同義單核苷酸多態(tài)性(SNP)。該裝置可用于診斷AMD或MPGNII以及與CFHR5基因SNP相關(guān)的其他疾病。在一個實施方案中，該裝置含有在表14或表15中列出的多態(tài)性位點處區(qū)分等位基因的探針或引物。在實施方案中，該探針為用于核酸擴增的引物，其中擴增是擴增跨越表14或表15中列出的CFHR5基因多態(tài)性位點的區(qū)域。在實施方案中，該裝置具有在表14或表15中列出的一個以上多態(tài)性位點處區(qū)分等位基因的探針或引物。在實施方案中，該試劑盒具有在一個、兩個或全部以下多態(tài)性位點處區(qū)分等位基因的探針或引物rs9427661(-249T>C);rs9427662(-20TXT)和rsl2097550(P46S)。在一個實施方案中，該裝置含有在CFH基因中的多態(tài)性位點和CFHR基因(如CFHR5)的多態(tài)性位點區(qū)分等位基因的探針或引物。在閱讀全部公開內(nèi)容后，本發(fā)明的其他方面將是顯而易見的。附圖簡述圖1A-1L顯示人視網(wǎng)膜色素上皮中因子H(圖1A-1H)和末端互補復(fù)合物(C5b-9)(圖1I-1L)的免疫定位?？s寫(RPE)-脈絡(luò)膜(Chor)復(fù)合物；Bruch膜(BM);視網(wǎng)膜(Ret);玻璃疣(Dr)。圖2顯示使用來自人眼的RNA提取物對因子H基因表達(CFH和截短形式HFL1)的RT-PCR分析。圖3是人因子H基因的簡圖，顯示本分析中使用的12個SNP、因子H基因的22個外顯子、20個短共有重復(fù)序列(SCR)、病原體和其他底物的結(jié)合位點以及連鎖不平衡(LD)節(jié)段的大概位置。顯示CFH所有22個外顯子(但無內(nèi)含子)的簡圖未按比例拉伸。圖4是人因子H基因SNP的單元型網(wǎng)狀圖，顯示危險(實心圓)、保護性(劃線圓)、中性(空心圓)和始祖(標(biāo)出)單元型的關(guān)系以及單元型的相對頻率，以圓的大小和位置表示。圖5顯示人因子H基因單元型和二倍型的相關(guān)分析。在AMD病例和對照中分析了8個信息化SNP的配對連鎖不平衡。顯示了在編碼鏈上標(biāo)出的多態(tài)性位點處的核苷酸，除了IYS1，顯示了其非編碼鏈上的核苷酸。圖6顯示人因子HcDNA參照形式的3926威基核苷酸序列(GenBank登錄號Y00716[SEQIDNO:l)。ATG起始密碼子開始于第74位核苷酸，TAG終止密碼子終止于第3769位核苷酸。圖7顯示SEQIDNO:1編碼的多肽序列(GenBank登錄號Y00716[SEQIDNO:2D。1231個M酸的因子H多肽包括18個氨基酸的N端信號肽。圖8顯示HFL1——人因子H截短形式的參照形式的1658堿基核苷酸序列(GenBank登錄號X07523[SEQIDNO:3j)。ATG起始密碼子開始于第74位核苷酸，TGA終止密碼子終止于第1423位核苷酸。圖9顯示SEQIDNO:3編碼的HFL1參照形式的多肽序歹'j(GenBank登錄號X07523[SEQIDNO:4)。449個氨基酸的HFL1多肽包括18個氨基酸的N端信號肽。圖10顯示示例性人因子H保護性變體的多肽序列[SEQIDNO:51。這種保護性變體因子H多肽的第62位氨基酸為異亮氨酸，第402位氨基酸為酪氨酸(以粗體標(biāo)出)。圖11顯示示例性HFL1保護性變體-人因子H的截短形式的多肽序列(SEQIDNO:6)。這種保護性變體截短的因子H多肽的第62位氨基酸為異亮氨酸，第402位氨基酸為酪氨酸(以粗體標(biāo)出)。圖12顯示如(A)光學(xué)顯微鏡和(B)電子顯孩i鏡所見，具有密集膜內(nèi)沉積的顯著的腎小球細胞增多，其在MPGNII患者中引起毛細血管壁增厚。沉積可在腎小球基底膜(GBM)的致密板中形成分節(jié)的、間斷或彌散模式。通過光學(xué)顯微鏡可見，它們是嗜酸性并為折射體，用過碘酸希夫明亮染色并為高滲的，這解釋了其電子密度外觀(A)。甚至通過電子顯樹:鏡可見，沉積缺乏亞結(jié)構(gòu)，表現(xiàn)為非常暗的均勻斑點(B)。致密沉積的準(zhǔn)確組成仍然未知(條帶，5mm)。圖13是顯示補體級聯(lián)系統(tǒng)旁路途徑的激活和調(diào)節(jié)的圖，所述補體級聯(lián)系統(tǒng)在AMD和MPGNII患者中系統(tǒng)性高水平激活。補體級聯(lián)系統(tǒng)的旁路途徑在MPGNII/DDD患者中系統(tǒng)性高水平激活。正常情況下，自發(fā)的水解(稱為tick-over)過程低水平地持續(xù)激活C3。C3水解與圖上部顯示的大的蛋白質(zhì)構(gòu)象變化相關(guān)。該構(gòu)象變化使C3(H20)與C3b(C3的切割產(chǎn)物)類似。起始轉(zhuǎn)化酶C3(H20)Bb激活C3以形成C3b。盡管C3b具有短暫的半衰期，如果其與IgG、細胞或基底膜結(jié)合，則可被保護免于立即失活。(C3b)2-IgG復(fù)合物在流體相中形成，并與備解素(P)結(jié)合，這促進了因子B的結(jié)合和C3bBb的產(chǎn)生，C3bBb為旁路途徑的轉(zhuǎn)化酶，其在此處顯示為Bb(C3b)2-IgG-備解素復(fù)合物。擴增環(huán)以箭頭顯示。C3NeF延長了C3轉(zhuǎn)化酶的半衰期，在插圖中顯示。降解C3轉(zhuǎn)化酶的一種機制是通過其與補體因子H(CFH)的相互作用，在底部右側(cè)顯示為ffl。因子H的缺乏和突變與MPGNII/DDD相關(guān)。圖14為顯示補體激活調(diào)節(jié)子(RCA)基因簇在染色體lq32上的組構(gòu)以及已知為補體因子H(CFH)、因子H樣1(CFHL1)和因子H相關(guān)1、2、3、4和5(CFHR1、CFHR2、CFHR3、CFHR4和CFHR5)中短共有重復(fù)序列(SCR)的約60個氨基酸的結(jié)構(gòu)域的排列的圖。CFH具有20個SCR。已經(jīng)確定了這些SCR中一些的相互作用配偶體，在右上方顯示(CRP-C反應(yīng)蛋白質(zhì)；Hep,肝素)。補體因子H樣1(CFHL1)是CFH的剪接異構(gòu)體，而補體因子H相關(guān)蛋白質(zhì)1-5(CFHR1-5)各由單獨的基因編碼(CFHR1-5)。CFHR1-5的SCR與CFH中的一些SCR相似，以橢圓中的數(shù)字顯示。例如，CFHR5具有9個SCR，前兩個與因子H的SCR6和7相似，因此具有CRP和肝素結(jié)合特性。CFHR5的SCR5-7在相應(yīng)橢圓中具有數(shù)字12-14,因為這些SCR與因子H的SCR12-14相似，并具有C3b和肝素結(jié)合特性。圖15顯示連鎖不平衡曲線，表明A307A和Y402H在因子H中連鎖不平衡，-249T>C和-20TX:在CFHR5中連鎖不平衡。圖16顯示人CFHR5參照形式的2821個堿基的核苷酸序列(GenBank登錄號AF295327[SEQIDNO:刀)。ATG起始密碼子開始于第94位核苷酸，TGA終止密碼子終止于笫1803位核苷酸。圖17顯示SEQIDNO:7編碼的多肽序列(GenBank登錄號AAK15619SEQIDNO:8)。569個氨基酸的CFHR5多肽包括18個氨基酸的N端信號肽。圖18顯示CFH和因子H相關(guān)蛋白質(zhì)的基因中的基因組復(fù)制。外顯子以垂直線標(biāo)出。以相同字母標(biāo)出的區(qū)域(如A，A，和A")具有基本相同的序列。發(fā)明詳述I.引言本發(fā)明提供由因子H基因中和因子H相關(guān)基因如因子H相關(guān)5基因中多種變異組成的多態(tài)性和單元型的集合。這些多態(tài)性和單元型與年齡相關(guān)性黃斑變性(AMD)和其他因子H相關(guān)病癥相關(guān)。這些多態(tài)性和單元型中的某些導(dǎo)致變體因子H多肽。對這些和其他多態(tài)性和多態(tài)性組(如單元型)的檢測可用于設(shè)計和進行AMD的診斷測定?？梢酝ㄟ^核酸分析、通過因子H編碼序列所編碼的多肽(包括剪接變體編碼的多肽)的分析或通過本領(lǐng)域已知的其他方法檢測多態(tài)性和多態(tài)性組。分析這類多態(tài)性和單元型也可用于設(shè)計AMD的預(yù)防和治療方案。因子H是多功能蛋白質(zhì)，發(fā)揮補體系統(tǒng)關(guān)鍵調(diào)節(jié)子的功能。參閱Zipfd，2001，"FactorHanddisease:acomplementregulatoraffectsvitalbodyfunctions"SeminThrombHemost.27:191-9。因子H蛋白質(zhì)活性包括(1)與C反應(yīng)蛋白質(zhì)(CRP)結(jié)合，(2)與C3b結(jié)合，(3)與肝素結(jié)合，(4)與唾液酸結(jié)合，(5)與內(nèi)皮細胞表面結(jié)合，(6)與細胞整聯(lián)蛋白質(zhì)受體結(jié)合，(7)與病原體(包括微生物)結(jié)合(見圖3)和(8)C3b輔因子活性。因子H基因稱為HF1、CFH和HF，位于人染色體l,位置lq32。lq32特定基因座含有大量補體途徑相關(guān)基因。這些基因中的一組稱為補體激活調(diào)節(jié)子(RCA)基因簇，含有編碼因子H、五種因子H-相關(guān)基因(分別為FHR國1、FHR-2、FHR-3、FHR-4和FHR-5或者CFHR1、CFHR2、CFHR3、CFHR4和CFHR5)的基因，以及編碼凝結(jié)因子XIIIP亞基的基因。因子H和因子H相關(guān)基因幾乎完全由短共有重復(fù)序列(SCR)組成。因子H和FHL1分別由SCR1-20和1-7組成。FHR-1、FHR-2、FHR國3、FHR-4和FHR-5分別由5、4、5、5和8個SCR組成(見圖14)?；虻捻樞驈闹z粒到端粒為FH/FHL1、FHR-3、FHR-1、FHR-4、FHR-2和FHR-5。因子H基因已經(jīng)確定了人因子HcDNA的參照形式(SEQIDNO:l)(參閱Ripoche等，1988，BiochemJ249:593-602)和基因組序列。因子HcDNA編碼表觀分子量155kDa的長度為1231個氨基酸的多肽(SEQIDNO:2)。存在稱為FHL-1(也稱為HFL1或CFHT)的因子H替代性剪接形式。FHL-1(SEQIDNO:3)基本對應(yīng)于因子H的外顯子1至9(參閱Ripoche等，1988，BiochemJ249:593-602)。FHL1cDNA編碼表觀分子量45-50kDA的長度為449個氨基酸的多肽(SEQIDNO:4)。FH1和FHL1的前445個氨基酸相同，F(xiàn)HL1具有獨特的C端4個氨基酸(外顯子10A)D替代外顯子10A位于外顯子9與外顯子10之間的內(nèi)含子中。人因子H和FHL1的cDNA和^J^酸序列數(shù)據(jù)分別以登錄號Y00716和X07523見于EMBL/GenBank數(shù)據(jù)庫。人因子HcDNA參照形式的3926堿基的核苷酸序列(GenBank登錄號Y00716[SEQIDNO:l)示于圖6，SEQIDNO:l編碼的多肽序歹'j(GenBank登錄號Y00716[SEQIDNO:2)示于圖7。人因子H的截短形式——HFL1參照形式的1658個堿基的核苷酸序列(GenBank登錄號X07523[SEQIDNO:3)示于圖8,SEQIDNO:3編碼的多肽序列(GenBank登錄號X07523[SEQIDNO:4)示于圖9。因子H基因序列(長度為150626個堿基)以GenBank登錄號AL049744可見。因子H啟動子位于因子H基因編碼區(qū)的5，。FHR-1基因FHR-1基因也稱為CHFR1、CFHL1、CFHL、FHR1和HFL1。已經(jīng)確定了人HFR-lcDNA的參照形式(參閱Estaller等，1991，JImmunol.146:31卯-3196)和基因組序列。FHR-1cDNA編碼長度為330個氨基酸的多肽，預(yù)計分子量為39kDa。人FHR-1的cDNA和M酸序列數(shù)據(jù)以登錄號M65292見于EMBL/GenBank數(shù)據(jù)庫。FHR濕1基因序列以GenBank登錄號AL049741可見。FHR-2基因FHR-2基因也稱為CHFR2、CFHL2、FHR2和HFL3。已經(jīng)確定了人HFR-2cDNA的參照形式(參閱Strausberg等，Proc.Natl.Acad.Sci美國99:16899-16卯3)和基因組序列。FHR-2cDNA編碼長度為270個氨基酸的多肽，預(yù)計分子量為31kDa。人FHR-2的cDNA和^J^酸序列數(shù)據(jù)以登錄號BC022283見于EMBL/GenBank數(shù)據(jù)庫。FHR-2基因序列以GenBank登錄號AL139418可見。FHR-3基因FHR-3基因也稱為CHFR3、CFHL3、FHR3和HFL4。已經(jīng)確定了人HFR-3cDNA的參照形式(參閱Strausberg等，Proc.Natl.Acad.Sci美國99:16899-16卯3)和基因組序列。FHR-3cDNA編碼長度為330個氨基酸的多肽，預(yù)計分子量為38kDa。人FHR-3的cDNA和氨基^列數(shù)據(jù)以登錄號BC058009見于EMBL/GenBank數(shù)據(jù)庫。FHR-3基因序列以GenBank登錄號AL049741可見。FHR畫4基因FHR-4基因也稱為CHFR4、CFHL4和FHR4。已經(jīng)測定了人HFR-4cDNA的參照形式(參閱Skerka等，1991，J.Biol.Chem.272:5627-5634)和基因組序列。FHR-4cDNA編碼長度為331個氨基酸的多肽，預(yù)計分子量為38kDa。人FHR-4的cDNA和氨基酸序列數(shù)據(jù)以登錄號X98337見于EMBL/GenBank數(shù)據(jù)庫。FHR-4基因序列以GenBank登錄號AF1卯816(5，末端)、AL139418(3，末端)和BX248415可見。FHR-5基因FHR-5基因也稱為CHFR5、CFHL5和FHR5。已經(jīng)確定了人CHFR-5cDNA的參照形式(SEQIDNO:83)(參閱McRae等，2001,J.Biol.Chem.276:6747-6754)和基因組序列。CFHR5cDNA編碼長度為569個氨基酸的多肽(SEQIDNO:8)，表觀分子量為65kDa。人CFHR5的cDNA和^J^酸序列數(shù)據(jù)以登錄號AF295327見于EMBL/GenBank數(shù)據(jù)庫。人CFHR5參照形式的2821堿基的核苦酸序列(GenBank登錄號AF295327[SEQIDNO:7)示于圖16，SEQIDNO:7編碼的多肽序列(GenBank登錄號AAK15619SEQIDNO:8)示于圖17。CFHR-5基因序列以GenBank登錄號AL139418(5，末端)、AL353809(3，末端)可見。FHR-5啟動子位于CFHR5基因編碼區(qū)的5，。II.定義提供以下定義以幫助理解本發(fā)明。除非另外指明，本文使用的所有技術(shù)術(shù)語、注釋和其他科學(xué)或醫(yī)學(xué)術(shù)語或命名法具有醫(yī)學(xué)和分子生物學(xué)領(lǐng)域技術(shù)人員普遍理解的意義。在一些情況下，為了清楚和/或易于參考起見，本文定義了具有普遍理解意義的術(shù)語，不應(yīng)假定本文中這些定義的內(nèi)容代表與本領(lǐng)域一般理解相比存在的顯著差異。"核酸"、"多核苷酸"或"寡核苷酸"是任何長度的核苷酸聚合形式，可以是DNA或RNA,并且可以是單鏈或雙鏈。核酸可包括啟動子或其他調(diào)節(jié)序列。寡核苷酸基本通過合成的手段制備。核酸包括跨越任一多態(tài)性位點或位于其側(cè)翼的DNA節(jié)段或其互補序列，所示多態(tài)性位點示于表1A、表1B和/或1C,或者已知在因子H基因中。節(jié)段通常在5至100個連續(xù)堿基之間，范圍經(jīng)常從下限5、10、12、15、20或25個核苷酸至上限10、15、20、25、30、50或100個核苷酸(其中上限大于下限)。5-10、5-20、10-20、12-30、15-30、10-50、20-50或20-100之間的核酸是常見的。多態(tài)性位點可以在節(jié)段內(nèi)的任何位置出現(xiàn)。提到雙鏈核酸中的一條鏈的序列也定義了其互補鏈，除非本文中另外明確說明，提到核酸的一條鏈也指其互補物。對于某些應(yīng)用，可以修飾核酸(如RNA)以提高胞內(nèi)穩(wěn)定性和半衰期?？赡艿男揎棸ǖ粌H限于在分子骨架中使用硫代磷酸酯或2，-0-甲基而不是磷酸二酯酶鍵。修飾的核酸包括肽核酸(PNA)和具有內(nèi)源性內(nèi)切核酸酶不易識別的非常規(guī)堿基如肌苷、queosine和wybutosine以及腺嘌呤、胞嘧啶、鳥噤呤、胸腺嘧啶和尿嘧啶的乙酰基-、甲基-、硫代-及類似修飾形式的核酸。"雜交探針"是能以堿基特異性方式與核酸互補鏈結(jié)合的核酸。此類探針包括核酸和肽核酸(Nielsen等，1991)。可以在本領(lǐng)域已知的嚴格條件下進行雜交。例如，參閱如Berger和Kimmel(1987)MethodsInEnzymology,152巻GuideToMolecularCloningTechniques,SanDiego:AcademicPress,Inc.;Sambrook等，(1989)MolecularCloning:AaboratoryManual,第2版，1-3巻，ColdSpringHarborLaboratory;Sambook(2001)第3版；Rychlik，W.和Rhoads,R.E.，1989，Nucl.AddsRes.17，8543;Mueller,P.R.等(1993)InCurrentProtocolsinMolecularBiology15.5，GreenePublishingAssociates,Inc.和JohnWiley和Sons,NewYork;以及Anderson和Young,QuantitativeFilterHybridizationinNucleicAcidHybridization(1985))。本文使用的術(shù)語"探針"包括引物。探針和引物有時指"寡核苷酸"。術(shù)語"引物"指能在適當(dāng)條件下、在適當(dāng)?shù)木彌_液和適當(dāng)?shù)臏囟认伦鳛槟０逯笇?dǎo)的DNA合成的起始點的單鏈寡核苷酸。引物的適當(dāng)長度取決于引物的預(yù)期用途，但范圍一般從15至30個核苷酸。引物序列不需要與模板精確互補，但必須充分互補以與模板雜交。術(shù)語"引物位點"指靼DNA中與引物雜交的區(qū)域。術(shù)語"引物對"指一組引物，包括與待擴增DNA序列的5'末端雜交的5，上游引物以及與待擴增序列3，末端互補序列雜交的3'下游引物。用于短探針和引物的示例性雜交條件為所計算的Tm下約5至12°C。計算Tm的公式是已知的，包括對于小于14個堿基的寡聚物并假定反應(yīng)在50mM—價陽離子存在下進行時的Tm=4°Cx(引物中的G和C數(shù))+2'Cx(引物中的A和T數(shù))。對于較長的寡聚物，可以使用以下公式Tm=64.9°C+41°Cx(引物中的G和C數(shù)-16.4)/N，其中N為引物長度。另一普遍使用的公式考慮了反應(yīng)的鹽濃度(Rychlik，同上，Sambrook,同上，Mueller,同上)Tm=81.5°C+16.6°Cx(log10[Na++[K+)+0,41'Cx(%GC)-675/N,其中N為寡聚物中的核苷酸數(shù)。上述公式提供了某些應(yīng)用的起點，然而，特定探針和引物的設(shè)計可以考慮其他或不同的因素。設(shè)計用于本發(fā)明方法的探針和引物的方法為本領(lǐng)域所熟知。術(shù)語"危險，，、"保護性"和"中性"用于描述變異、SNP、單元型、二倍型和特征為這些變異模式的基因所編碼的群體中的蛋白質(zhì)。危險單元型U因(本文中為因子H或因子H相關(guān)基因)的等位基因形式，其包含至少一個與發(fā)生AMD的危險提高相關(guān)的變體多態(tài)性，優(yōu)選一組變體多態(tài)性。涉及因子H或因子H相關(guān)基因使用時，術(shù)語"變體"指核苷,列，其中該序列與種群(本文中為美國歐裔血統(tǒng)的人)中最常見的序列不同。變體多態(tài)性可以在基因的編碼或非編碼部分中。危險因子H單元型的實例為編碼氨基酸402處的組氨酸和/或氨基酸1210處的半胱氨酸的因子H基因等位基因。危險單元型可以是天然存在的，或者通過重組技術(shù)合成。保護性單元型A^因(本文中為因子H或因子H相關(guān)基因)的等位基因形式，其包含至少一個與發(fā)生AMD的危險降低相關(guān)的變體多態(tài)性，優(yōu)選一組多態(tài)性。例如，一種保護性因子H單元型具有編碼氨基酸62處為異亮氨酸的因子H基因。保護性單元型可以是天然存在的，或者通過重組技術(shù)合成。其不包含種群或人種群中與發(fā)生AMD的危險提高或降低相關(guān)的變體多態(tài)性。從以下的討論中顯然可見，當(dāng)施用于需要治療或預(yù)防AMD或其他病癥的患者時，"中性，，單元型編碼的蛋白質(zhì)可以是保護性的。即施用于例如患AMD或有發(fā)生AMD的受試者時，CFH或CFHR5的"中性，，和"保護性"形式可提供治療益處，從而"保護"受試者免于疾病。術(shù)語"野生型"指核酸或多肽，其中序列為種群(本文中為歐洲-美洲血統(tǒng)的人)中的普及形式(約40%普及，見圖5)。就本文公開內(nèi)容的目的而言，"野生型"因子H蛋白質(zhì)具有SEQIDNO:2的序列(圖7)，只是第402位氨基酸為酪氨酸(Y;[SEQIDNO:337)。就本文公開內(nèi)容的目的而言，編碼野生型因子H蛋白質(zhì)的因子H基因具有SEQIDNO:1的序列(圖6)，只是開始于堿基1277的密碼子(對應(yīng)于第402位氨基酸)編碼酪氨酸(TAT[SEQIDNO:336)。涉及因子H或因子H相關(guān)多肽時使用的術(shù)語"變體"指多肽，其中序列在改變所編碼多肽的M酸序列的位置上不同于正?；蛞吧托蛄小＠?，因子H基因核苷酸序列中的一些變異或取代改變密碼子，從而編碼不同的氨基酸(例如但不僅限于在一個或多個I62V、Y402H、D936E中的替代等位基因)，導(dǎo)致變體多肽。變體多肽可與危險相關(guān)(如第402位為組氨酸)、與保護相關(guān)(如第62位為異亮氨酸)，或者可以由中性單元型編碼(如936位為天冬氨酸)。變體CFHR5多肽可與危險相關(guān)(如第46位為絲氨酸)、與保護相關(guān)，或者可以是中性的。涉及因子H多肽時，術(shù)語"參照"指氨基酸序列與Ripoche等人，1988，BiochemJ.249:593-602所述的全長(FH1，SEQIDNO:2)或截短(FHL1，SEQIDNO:4)人因子H序列相同的多肽。涉及CFHR5多肽時，術(shù)語"參照，，指氨基酸序列與McRae等人，2001，J.Biol.Chem.276:6747-6754所述全長人CFHR5(SEQIDNO:8)的序列相同的多肽。任意地將第一種鑒定的等位基因形式稱為參照形式或等位基因；其他等位基因形式稱為替代或變體等位基因。野生型和變體形式可以與參照形式具有實質(zhì)的序列同一性(例如，野生型或變體形式可以在至少卯％的野生型或變體中氨基酸位置上與參照形式相同，有時在至少95%的位置、有時至少98%或99%的位置上與參照形式相同)。變體可以由于移碼突變或剪接變異而在某些蛋白質(zhì)區(qū)域中與參照形式不同。術(shù)語"多態(tài)性"指種群中存在兩種或更多遺傳確定的替代序列或等位基因。"多態(tài)性位點"M生序列趨異的基因座。多態(tài)性位點具有至少兩種等位基因。雙等位基因多態(tài)性具有兩種等位基因。三等位基因多態(tài)性具有三種等位基因。二倍體生物的等位基因形式可以是純合或雜合的。多態(tài)性位點可以小至一個堿基對。多態(tài)性位點的實例包括限制性片段長度多態(tài)性(RFLP);可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)(VNTR);高變區(qū)；小衛(wèi)星；雙核苷酸重復(fù)；三核苷酸重復(fù)；四核苷酸重復(fù)和簡單序列重復(fù)。本文^f吏用的術(shù)語"多態(tài)性，，可包括一組多態(tài)性(即單元型)。"單核苷酸多態(tài)性(SNP)"在單核苷酸占據(jù)的多態(tài)性位點發(fā)生，所述位點是等位基因序列之間的變異位點。該序列之前和之后一般為高度保守的等位基因序列。SNP通常由于多態(tài)性位點處一個核苷酸取代另一個而產(chǎn)生。用一個嘌呤取代另一個嘌呤或者用一個嘧咬取代另一個嘧啶稱為轉(zhuǎn)換(transition)。用嘧夂取代嘌呤或相反稱為顛換(transversion)。同義SNP指編碼區(qū)中用一個核苷酸取代另一個而不改變所編碼多肽氨基酸序列。非同義SNP指編碼區(qū)中用一個核苷酸取代另一個而改變所編碼多肽氨基酸序列。SNP還可以由相對于參照等位基因的核苷酸缺失或插入而產(chǎn)生。一"組"多態(tài)性指多于一種多態(tài)性，如表1A、表1B和/或表1C中所示或已知在因子H基因或其他基因中的至少2種、至少3種、至少4種、至少5種、至少6種或多于6種多態(tài)性。術(shù)語"單元型，，指個體基因中一組多態(tài)性或多態(tài)性位點的等位基因的命名。例如，"112"因子H單元型指該因子H基因在前兩個多態(tài)性位點處均包含等位基因1，在第三個多態(tài)性位點處包含等位基因2。"二倍型"為單元型對。"分離的"核酸指是組合物中存在的優(yōu)勢種的核酸種類。分離的指核酸從至少一種與其天然相關(guān)的化合物分離。純化的核酸包含(基于摩爾)至少約50%、80%或90%的所存在的所有大分子種類。當(dāng)兩氨基酸序列至少約80%—致、優(yōu)選至少約卯％—致、更優(yōu)選至少約95%、至少約98%—致或至少約99%—致時，認為其具有"實質(zhì)的同一性"。一般通過確定兩序列間的最佳比對和比較兩序列來計算序列同一性百分比?？梢酝ㄟ^觀察，或使用Smith和Waterman,1981，Adv.Appl.Math.2:482的局部同源性算法、使用Needleman和Wmisch，1970,J.Mol.Biol.48:443的同源性比對算法、使用Pearson和Lipman，1988,Proc.Natl.Acad.SciU.S.A.85:2444的相似性搜索方法，通過這些算法的計算機化的實施(例如WisconsinGenetics軟件包中，GeneticsComputerGroup,575ScienceDr.，Madison,Wis.)使用用于氨基酸比較的默認參數(shù)(例如用于缺口評分等)來進行序列的最適比對。有的時候需要描述兩個序列之間關(guān)于具體長度或區(qū)域的序列同一性(例如兩個序列可以被描述為在至少500堿基對的長度上具有至少95%的同一性)。通常所述長度可以是至少約50、100、200、300、400、500、600、700、800、卯0或1000個#^酸，或是參照蛋白質(zhì)的全長。如果兩個氨基酸序列有l(wèi)、2或3個殘基，或2-20個殘基、2-10個殘基、3-20個殘基或3-10個殘基不同，則也認為它們具有實質(zhì)的同一性。"連鎖"描述了基因、等位基因、基因座或遺傳標(biāo)記由于其位于相同染色體上，所以被一起遺傳的趨勢。連鎖可通過兩個基因、等位基因、基因座或遺傳標(biāo)記之間的重組百分比測量。通常，以彼此間50厘摩(cM)以內(nèi)的距離存在的基因座是連鎖的。連鎖的標(biāo)記可存在于相同的基因或基因簇內(nèi)。"連鎖不平衡"或"等位基因關(guān)聯(lián)"是指具體的等位基因或遺傳標(biāo)記與位于鄰近染色體位點上特定的等位基因或遺傳標(biāo)記，以比群體中對任何具體等位基因可能估計的頻率更頻繁地優(yōu)先關(guān)聯(lián)。連鎖不平衡的標(biāo)記特別適用于檢測對疾病的易感性，即使標(biāo)記本身不引起所述疾病。術(shù)語"診斷"是指確定個體是否具有發(fā)生疾病的傾向(包括有無體征或癥狀)的能力。診斷發(fā)生疾病的傾向還可被稱為"篩選"，在本文中使用時，術(shù)語診斷和篩選可交換使用。應(yīng)當(dāng)明白具有提高的或降低的發(fā)生病癥的傾向是指相對于未患有所述病癥的群體中的個體，發(fā)生所述病癥的可能性。III,表格本文涉及到的某些表格在下文實施例之后提供。提供以下描述以幫助閱讀者表1A-1C顯示人因子H基因多態(tài)性及其與年齡相關(guān)性黃斑變性的關(guān)聯(lián)。(1A)顯示人因子H基因中dbSNP號、定位、跨越多態(tài)性的編碼(頂部，5，到3'方向)和非編碼(底部)鏈的序列、氨基酸改變、對照和AMD病例的等位基因頻率，和lSNP的^與P-值。(1B)顯示人因子H基因中dbSNP號、被查詢的序列、黑猩猩因子H基因中相應(yīng)的核苷酸、定位、氨基酸改變以及引物與探針組。(1C)顯示在dbSNP數(shù)據(jù)庫中沒有找到的人因子H基因中定位、跨越多態(tài)性的序列、氨基酸位置和14SNP的氨基酸改變(如果有的話)。表2顯示一組AMD病例和對照中人因子H基因中八個SNP的單元型分析。表3顯示人因子H基因中六個SNP的單元型分析以及它們與AMD的關(guān)聯(lián)。表4顯示11個人因子H基因SNP與年齡相關(guān)性黃斑變性的關(guān)聯(lián)。表5顯示用于人因子H的SSCP、DHPLC和DNA測序分析的引物。表6顯示AMD患者和對照的基因分型數(shù)據(jù)。表7顯示多個人種群中危險單元型的頻率。表8顯示若干種因子H的二倍型。指出了普遍危險和保護性二倍型。表9顯示用于擴增因子H編碼序列的引物序列。表10顯示用于擴增CFHR5編碼序列的引物序列。表11顯示22個MPGNII患者中因子HSNP分析。表12顯示22個MPGNII患者和AMD-陰性的、人種相匹配的對照中因子HSNP頻率的比較。表13列出與MPGNII相關(guān)聯(lián)的因子HSNP及其相關(guān)的SCR。表14顯示22個MPGNII患者中CFHR5SNP的分析。表15顯示22個MPGNII患者和AMD-陰性的、人種相匹配的對照中CFHR5SNP頻率的比較。表16顯示用于檢測因子H基因中多態(tài)性的示例性的等位基因特異的探針(16A)和引物(16B)。IV.補體因子H多態(tài)性在一個方面，本發(fā)明提供與下述發(fā)現(xiàn)相關(guān)的新的診斷、治療和藥物篩選方法，所述發(fā)現(xiàn)為補體因子H(HF1)基因中的多態(tài)位點與對AMD的易感性和AMD的發(fā)展有關(guān)。與AMD相關(guān)的因子H多態(tài)性如實施例1所述蜂皮鑒定，其才艮據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案使用SSCP分析、DHPLC分析和直接測序法檢查因子H(包括外顯子IOA，其被轉(zhuǎn)錄為因子H的同種型FHL1)的編碼區(qū)和鄰近內(nèi)含子區(qū)域的變體。剩余的多態(tài)性通過5，核酸酶(Taqman，ABI)方法分型。如所述的進行Taqman基因分型和關(guān)聯(lián)分析(Gold等，2004)。使用MacVector軟件設(shè)計用于SSCP和DNA測序分析的引物，以擴增各外顯子及其鄰近的內(nèi)含子區(qū)域。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案通過SSCP和DHPLC，針對序列變異篩選PCR得到的擴增子。通過SSCP和DHPLC檢測到的所有改變根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案通過雙向測序證實。使用x方tf)和Fisher's精確檢測(P值)進行統(tǒng)計學(xué)分析。使用兩組獨立的AMD病例和年齡匹配的對照。所有參與的個體都是美國歐裔血統(tǒng)、大于60歲年齡并依照知情同意在IRB-批準(zhǔn)的方案下招募。這些組由以下組成來自TheUniversityofIowa的352名患有臨床上被證明的AMD的無關(guān)聯(lián)的患者(平均年齡79.5±7.8歲)和113名無關(guān)聯(lián)的對照患者(平均年齡78.4±7.4歲；通過年齡和人種匹配)，和來自ColumbiaUniversity的550名患有臨床上被證明的AMD的無關(guān)聯(lián)的患者(平均年齡71.32±8.9)和275名無關(guān)聯(lián)的、通過年齡和人種匹配的對照(平均年齡68.84士8.6歲)。由視網(wǎng)膜研究員訓(xùn)練的眼科醫(yī)師通過間接檢眼鏡檢查法和裂隙燈顯微鏡檢查法來檢查患者。Fundas照片根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化的、國際分類體系(Bird等，1995)分級。如果對照患者未顯示任何可辨別的黃斑疾病體征或不具有已知的AMD家族史，則將他們選擇并包括。AMD患者根據(jù)他們參與研究時最嚴重的眼分類被細分為表型類別早期AMD(ARM)、地圖樣萎縮(GA)和滲出性(CNV)AMD。TheUniversityofIowa的ARM和GA病例凈皮進一步細分為不同的表型(單獨的RPE改變、>10的斑狀硬玻璃疣、斑狀軟玻璃疣、BB(表皮)玻璃疣、PED、"Cherokee"萎縮、半島狀地圖樣萎縮(peninsulargeographicatrophy)和牙匡式地圖才羊萎縮(patterngeographicatrophy))。所有病例的最早的可被證明的表型也被記錄并用于分析。如表1A中所示，在兩個獨立組的檢測中發(fā)現(xiàn)因子H基因多態(tài)位點與AMD的高度顯著的關(guān)聯(lián)，所述兩個獨立組一共包括約900個AMD病例和400個匹配的對照。表1A-1B中列出十六(16)個因子H基因中的多態(tài)性。其中有十二(12)個在SNP數(shù)據(jù)庫(dbSNP)中發(fā)現(xiàn)，所述數(shù)據(jù)庫可在國家生物技術(shù)信息中心(NCBI)找到。dbSNP是人因子H基因中SNP的集合，所述SNP分散于因子H基因的22個編碼外顯子中，分歉于因子H基因的啟動子、5'未翻譯區(qū)、內(nèi)含子和3，未翻譯區(qū)中。以下列出在dbSNP數(shù)據(jù)庫中找到的人因子H基因中379個SNP的登錄號。這些SNP可用于實施本發(fā)明的方法。表A<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>ts柳40465is50i4733rsl928432ts柳翻2rs5003626rs521605rs3縱5Srsl紹備2(rsll3鄉(xiāng)40rs5003溢5rs腿282rs520992慮5,rs,0419rsl13^441rs75說63ra鄉(xiāng)鄉(xiāng)4xs38S543rsl6840410is5O02娜rs腿280rrs51鵬？rs3咖9iisl6840401rsU318544rsl410997rs551397rs405306rel1285593ra簡7"6rs5002875rsl41卿61rs544.rsl紹船94rs752細rs5002874rs402柳rsl6840381rsl0922108rs7519439rs465S046rs!32942Srs536564rs402056rs腦EB79rsl0922107fs7514261tsl329427rs536539rs399柳rsl09221加M7513157rs435014Srs515299ts39讓rsl0922105rs74l別3禱4卿8rsl32簡rs5簡63瞎4rsl0922104rs74:t3卿rs4044SS4rsi329422rs514591rs3柳90rsl2726柳tsl09221(Brs7機37rs4044幼2jcs!329421irs3,60rsi25鵬29認34咖rsl299282rs512卿rs379鄉(xiāng)rsl2565418rs3765405rs濯487rs50柳5rs375046rsl2406047rsl0922100rs鄉(xiāng)0啦rs3766404rsl2,77rs374柳isl2405238rs4柳68rsl2402808rs紹S卯0953397rs。92475rs495222rs371647rs22238983is3753396rsl292474仿49336rs36,5rsm44柳rs,2嫩rs6,249is375339Srsl2924T3rs3(54947rsl213.ra柳22鵬rs490幼4rs2036S8rsl2l3柳5rsl0922094rs3043115rsl292471rs488738rs2綱8rsl2134598rel鵬2093齒43113rs，466ra487114rsl2127759ral0922092rs66774柳is3編mrsllS柳9rs4,4rs203鄉(xiāng)ts12124794rs66770約'rsll5柳8rs203684rsl211柳2rslO則560rs66750S8rs湖訓(xùn)rs恥6287rs203683rra6674960rsl065489,4798ral2085209rs鵬01558rs6673應(yīng)rs2878647婦3術(shù)rsl20S1550rsl0細S57fs6664877rs鄰0S97rs2036節(jié)isl0柳556rs艦4705ra2746船rs460787rs203磁fslOS01555ts2336225r痛imrs柳謝ns203678rsl2047106rs203677rsl2047103rsi0柳553is綱356rs2336223rs翻663454652raU045503rsl0754200rs2336222rsl040597ra436337ra203675rs薩41將ra5涌47rs233.131204,is577麵rs,293rs434536rs203防rs577,5IS230O429rs幼0292rs430173rs203(S72rs,卿5B5779S44ra22S4664rs,效lrs4280柳rs203671禱6鵬7rs5022901rs424535tsl2038333rsl0鵬術(shù)re5022卿rs2274700rs,280is422851rrsl0664537ts5022899rs2268343rs,271TS422404rs70621rai2032372rsl061艦2■173383rs70咖rsl0545544rs5022897rs2143912rs摘OOlrs420鄉(xiāng)rsl5抑9rsl20297S5ral054脇Srs幼16801rs2歸14禍5774raM473rsl0536S23rs鄰147鄰rs742855rs414539rs3645rsll鵬83is50147招rs2020130rs731557rs412&52rs,湖3ts測4738re572515rs410232rsU7卿56rs廳5S86rs5014B7rsl803696rs570618rs409953rs鄉(xiāng)219rs4鵬l9■ral1799380re5啦878rsl576340raS64657ts柳308rsl1584505rs9427,|rsl474792rs55935Gfs4073611兩個常見的非同義變體——外顯子2中的162V與外顯子9中的Y420H，和一個較不常見的變體——外顯子22中的R1210C顯示與AMD最顯著的關(guān)聯(lián)。表1A-1B中三個額外的多態(tài)性未在SNP數(shù)據(jù)庫中找到啟動子中的多態(tài)性(表1A中的啟動子1)、其中插入了兩個T核苷酸的內(nèi)含子2中的多態(tài)性和外顯子10A中的多態(tài)性。表1A中第一列列出因子H基因中多態(tài)性的dbSNP號。例如，rs800292是因子H基因中一個多態(tài)性的dbSNP名稱。該多態(tài)性的描述以及dbSNP中其他因子H基因多態(tài)性可在http:〃www.nCbi.nlm.nih.g0V(littp:〃www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgidb=snp&cind=search&tern^)獲得。第二列列出多態(tài)性的定位。例如，rs800292多態(tài)性定位于因子H基因的外顯子2中。未通過數(shù)據(jù)庫號鑒定的多態(tài)性可通過定位命名(例如"內(nèi)含子2")。第三列列出跨越多態(tài)性的DNA的編碼(頂部，5，到3，方向)和非編碼鏈(底部)的核酸序列。例如，顯示多態(tài)性5，和3，的20個核苷酸位于rs800292多態(tài)性(編碼鏈括號中指出的G或A)的側(cè)翼?？缭酵怙@子10A多態(tài)性的序列中的"N，，指出變體等位基因中單個核苷酸的插入(A、C、G或T任一)。第四列列出序列的SEQIDNO:。第五列列出與多態(tài)性相關(guān)的氨基酸改變(如果有的話)。例如，rs800292多態(tài)性導(dǎo)致因子H多肽的位置62處纈氨酸(V)到異亮氨酸(I)的M酸序列改變。第六列列出對照群體中多態(tài)性的等位基因頻率。數(shù)1和2是指第三列中多態(tài)位點處分別對應(yīng)于第一個和第二個核苷酸的等位基因。例如對rs800292多態(tài)性而言，G存在于78。/。的、A存在于22。/。的來自對照群體的所測序等位基因中。第七列列出AMD群體中多態(tài)性的等位基因頻率。例如對rs800292多態(tài)性而言，G存在于91。/。的、A存在于9%的來自AMD群體的所測序等位基因中。第八列列出用于對照和AMD群體中多態(tài)性的等位基因頻率之間比較的5C方檢驗和Fisher's精確檢驗(分別為f和P值)。例如對rs800292多態(tài)性而言，f值是16.19，P值是5.74xl(T5，指示G等位基因與AMD關(guān)聯(lián)。表IB的第(1)、(2)、(3)部分的第一列列出因子H基因中多態(tài)性的dbSNP號。對于第(l)部分，第二列列出跨越多態(tài)性的核酸序列(查詢序列)。對于rs529825(內(nèi)含子1)、rs800292(外顯子2)和rs203674(內(nèi)含子10)多態(tài)性而言，顯示人因子H基因的非編碼鏈的序列。第三列列出序列的SEQIDNO:。第四列列出存在于黑猩猩因子H基因中的等位基因。第五列列出SNP的定位。第六列列出與多態(tài)性關(guān)聯(lián)的氨基酸改變(如果有的話)。對于第(2)部分，第二列和第四列列出用于擴增多態(tài)性的正向和反向引物或AOD號。第三列和第五列列出引物的SEQIDNO:。對于第(3)部分，第二列和第四列列出用于檢測多態(tài)性的探針。第三列和第五列列出探針的SEQIDNO:。應(yīng)當(dāng)理解未在表1A-1B中列出的因子H基因中的其他多態(tài)位點可以與AMD關(guān)聯(lián)。因子H基因中的示范性多態(tài)位點已在上文列出，它們用于舉例而非限制。表1C列出未在dbSNP數(shù)據(jù)庫中找到的、可與AMD或其他疾病關(guān)聯(lián)的因子H基因中其他的14個多態(tài)位點。第一列列出SNP定位。第二列列出跨越多態(tài)性的核酸序列?？缭酵怙@子5多態(tài)性的序列中，"notG"指示變體等位基因中A、C或T核苷酸的存在，跨越外顯子6多態(tài)性的序列中，"notC"指示變體等位基因中A、G或T核苷酸的存在?？缭酵怙@子21多態(tài)性的序列中，"N"指示在變體等位基因中單個核苷酸(A、C、G或T之任一)的插入。第三列指出與多態(tài)性關(guān)聯(lián)的氨基酸變化(如果有的話)。第四列指出序列的SEQIDNO:。這些SNP也可用于實施本發(fā)明的方法。另外，應(yīng)當(dāng)理解這些CFH多態(tài)性適用于連鎖和關(guān)聯(lián)研究、對臨床群體基因分型、將基因型信息與表型信息相關(guān)聯(lián)、雜合子丟失分析和細胞樣品來源鑒定。表2顯示AMD病例和對照中人因子H基因中八個SNP的單元型分析。危險單元型以點狀框顯示，確定SNP(Y402H和IVS10)的單元型以稠密點顯示。保護性單元型以斜線框表示，確定SNP(IVS1、162V和IVS6)的單元型顯示為不稠密的斜線。第一列列出啟動子(Prom)中多態(tài)性的等位基因。第二列列出內(nèi)含子l(IVSl)中多態(tài)性非編碼鏈的等位基因。第三列列出外顯子2(162V)中多態(tài)性非編碼鏈的等位基因。第四列列出內(nèi)含子6(IVS6)中多態(tài)性的等位基因。第五列列出外顯子9(Y402H)中多態(tài)性的等位基因。第六列列出內(nèi)含子IO(IVSIO)中多態(tài)性的非編碼鏈的等位基因。笫七列列出外顯子13(Q672Q)中多態(tài)性的等位基因。第八列列出外顯子18(D936E)中多態(tài)性的等位基因。這八個SNP的dbSNP名稱列在表1A-1B中。第九列列出單元型的讓步比(OddsRatio,OR)。第十列列出危險和兩個保護性單元型的P值。第十一和十二列列出AMD病例和對照中單元型的頻率。表3顯示患有AMD的六個因子H多態(tài)性的單元型分析。第一列列出啟動子中多態(tài)性的某些等位基因(rs3753394)。第二列列出內(nèi)含子l中多態(tài)性的等位基因(rs529825)。第三列列出內(nèi)含子6中多態(tài)性的等位基因(rs3766404)。第四列列出內(nèi)含子10中的多態(tài)性(rs203674)。第五列列出夕卜顯子13中多態(tài)性的等位基因(rs3753396)。第六列列出外顯子18中多態(tài)性的等位基因(rs1065489)。第1到6列中數(shù)字1和2是指分別對應(yīng)于各多肽位點(見表1A)第一和第二個核苷酸的等位基因。因此，第1到6列列出因子H基因中從5，到3，的多態(tài)性的等位基因。第七列列出基于第l到6列中所列多態(tài)性的因子H單元型。第八列列出對照群體中所指示的因子H單元型的頻率。第九列列出AMD群體中所指示的因子H單元型的頻率。如表3中所示，單元型分析提示多種變體有助于關(guān)聯(lián)，并可賦予提高的或降低的AMD危險。表8顯示七個因子H多態(tài)性的二倍型分析。第一列指出該二倍型是否與提高的(危險二倍型)或降低的(保護性二倍型)發(fā)生AMD的危險相關(guān)。指出一般危險和保護性二倍型。第二列列出外顯子2(I62V)中多態(tài)性的等位基因。第三列列出內(nèi)含子2(IVS2-18)中多態(tài)性的等位基因。第四列列出外顯子9(Y402H)中多態(tài)性的等位基因。第五列列出外顯子18(D936E)中多態(tài)性的等位基因。第六列列出內(nèi)含子20(IVS20)中多態(tài)性的等位基因。危險相關(guān)的("危險")多態(tài)性和單元型表1A和表2中顯示包含與提高的AMD危險相關(guān)的多態(tài)性的位點。與提高的危險特別相關(guān)的多態(tài)性包括以下處的變體等位基因rsl061170U02H;外顯子9)、rs203674(內(nèi)含子IO)和殘基1210(R1210C，外顯子22)處的多態(tài)性。表2和表6和圖5中顯示了某些與提高的AMD危險相關(guān)的單元型。如表2和圖5中所示，一種普遍的危險單元型為Hl單元型，其包括位置402處(編碼組氨酸)的變體等位基因和在IVS10(內(nèi)含子10，rs203674)處的變體等位基因，并在49%的AMD病例中發(fā)現(xiàn)，但是僅在26%的對照中發(fā)現(xiàn)。危險二倍型(H1/H1)的純合子明顯處于危險中。其他危險單元型和二倍型如表2和表8所示。相似的數(shù)據(jù)呈現(xiàn)于表3中，其顯示在48%的AMD病例中發(fā)現(xiàn)的、但是僅在28%對照中發(fā)現(xiàn)的危險單元型(111211)。值得注意的是，百分之七十的MPGNII(II型膜性增生性腎小球腎炎)患者擁有該危險單元型(見表7)，這指示發(fā)生MPGNII的傾向可如本文所述用于AMD的方式檢測和治療。這些多態(tài)性位點的顯著相關(guān)性也在如實施例1中公開的多種AMD亞型中發(fā)現(xiàn)。因子H基因外顯子22中氨基酸位置1210處的非同義多態(tài)性與AMD強烈相關(guān)(見表1A)。編碼半胱氨酸代替精氨酸的變體等位基因在5%的AMD病例中的雜合狀態(tài)中發(fā)現(xiàn)，在對照中沒有發(fā)現(xiàn)，所述對照屬于由TheUniversityofIowa確定的919個個體組成的小組。迄今為止未鑒定到第1210號純合子。因此，因子HM酸位置1210處的半胱氨酸的存在提供了有力的提示個體患有AMD或很可能發(fā)生AMD。值得注意的是，1210C指示發(fā)生AMD或其他補體介導(dǎo)的病癥的傾向，甚至檢測到保護性等位基因(例如Y402)時也是如此。已知CFH位置1210(R1210C)的變異引起非典型溶血性尿毒癥綜合征(aHUS)--種伴隨腎癥狀的補體相關(guān)疾病。由此擴展可得，其他已知引起aHUS的CFH變體或突變可與提高的發(fā)生AMD的危險相關(guān)。最常見的已確定的引起aHUS的變異包括，但不限于T956M、(J1076E、D1119G、W1183L、T1184R、L1189R、L1189F、S1191W、S1191L、V1197A和R1215G(Esparza-Gordillo等2005;Perez-Caballero等2001;Richards等2001;Sanchez-Corral等2002);其他的引起aHUS的突變描述于Saunders(Saunders等2006)。在本發(fā)明的一個方面，在來自受試者的生物樣品(例如蛋白質(zhì)或核酸)中測定一種或多種aHUS相關(guān)的變異或突變的存在，所述aHUS相關(guān)的變異或突變的存在指示發(fā)生AMD的傾向。應(yīng)當(dāng)理解沒有在表1A-1C中列出的因子H基因中其他的多態(tài)性位點可進一步精煉該單元型分析。使用因子H基因中非同義多態(tài)性的單元型分析適用于鑒定變體因子H多肽。其他與危險相關(guān)的單元型可編碼下述蛋白質(zhì)，所述蛋白質(zhì)與中性或保護性單元型所編碼的蛋白質(zhì)序列相同，但是在啟動子或內(nèi)含子中含有等位基因，例如改變因子H表達水平或位點的等位基因。相關(guān)。相鄰基因的變異可導(dǎo)致所編碼的蛋白質(zhì)表達或形式的改變，并在載體中具有有害的或保護性的作用。保護性多態(tài)性和單元型意外地，還發(fā)現(xiàn)了保護性多態(tài)性和單元型。例如如表2和圖5中所示，包含IVS6(內(nèi)含子6，rs3766404)中變體等位基因的保護性H2單元型存在于12%的對照中，但僅存在于6%的AMD病例中。保護性H4單元型包括IVS1(內(nèi)含子l，rs529825)中的變體等位基因和變體等位基因(162)(外顯子2,rs800292)，并在18%的對照中發(fā)生，但是僅在12%的AMD病例中發(fā)生。相似的數(shù)據(jù)存在于表3中，其中單元型121111在21%對照中發(fā)生，但是僅在13%的AMD病例中發(fā)生，單元型112111在13%的對照中發(fā)生，但是僅在6%的AMD病例中發(fā)生。如圖5所示，具有保護性單元型的純合子明顯保護。在一些情況下，由表征為保護性單元型的基因編碼的蛋白質(zhì)與危險單元型蛋白質(zhì)具有序列差異(例如由于非同義SNP的存在)。例如，因子H蛋白質(zhì)的保護性形式通常在位置402上不含有組氨酸。在一些實施方案中，保護性形式在位置62具有異亮氨酸。其他的保護性形式可通過以下鑒定(l)鑒定個體或具有保護性單元型的個體，和(2)確定來自個體的因子HcDNA或蛋白質(zhì)的序列。其他保護性形式如下文在第VIII節(jié)所述鑒定。中性多態(tài)性和單元型某些單元型在群體中與發(fā)生AMD的提高的危險或降低的危險均不相關(guān)，并被稱為"中性"。白種人群體中鑒定的中性單元型的實例顯示在圖5中(H3和H5)。其他的或不同的中性單元型可以在人種/種族不同的群體中鑒定。由表征為中性單元型的基因編碼的蛋白質(zhì)是"中性"因子H蛋白質(zhì)。如上文所解釋的，當(dāng)給具危險單元型或診斷為患有AMD的患者施用"中性"因子H蛋白質(zhì)時，其可提供治療益處。例如由表征為中性單元型的基因編碼的示范性蛋白質(zhì)包括在位置402不具有組氨酸和/或位置62不具有異亮氨酸的蛋白質(zhì)。位置402不具有組氨酸的蛋白質(zhì)可在該位置具有酪氨酸，或具有除組氨酸或酪氨酸外的氨基酸。在位置62不具有異亮氨酸的蛋白質(zhì)可在該位置具有纈氨酸，或可具有除纈氨酸或異亮氨酸之外的氨基酸。因子H蛋白質(zhì)的中性形式通常在位置1210不具有半胱氨酸。V.因子H相關(guān)5(CFHR5)基因多態(tài)性在一個方面，本發(fā)明提供與下述發(fā)現(xiàn)相關(guān)的新的診斷、治療和藥物篩選方法，所述發(fā)現(xiàn)為因子H和CFHR5基因中的多態(tài)性位點與對MPGNII的易感性和MPGNII的發(fā)生相關(guān)。與MPGNII相關(guān)的因子H和GFHR5多態(tài)性如實施例2中所述如下鑒定通過使用PCR擴增在因子H或CFHR5的編碼和鄰近內(nèi)含子區(qū)域檢查變體，然后瓊脂糖凝膠電泳并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案雙向測序以驗證PCR產(chǎn)物。對照群體中新的和經(jīng)報道的SNP通過變性高效液相層析(DHPLC)分型。用于擴增因子H和CFHR5編碼序列的引物分別顯示在表9和表10中。由患有經(jīng)活檢證實的MPGII的患者組成的測試組在腎病科查明，并依照IRB批準(zhǔn)的方針招募在該研究中。對照組由種族匹配的但是年齡不匹配的、不相關(guān)的人組成，所述人已通過眼科檢查排除了AMD。如表11和表12所示，因子H基因中多態(tài)性位點與MPGNII之間的顯著相關(guān)在對22個MPGNII病例和131個種族匹配的對照的檢查中發(fā)現(xiàn)。因子H基因中十一(11)個多態(tài)性列于表ll和表12中。其中，六(6)個在國家生物技術(shù)信息中心(NCBI)的SNP數(shù)據(jù)庫(dbSNP)中發(fā)現(xiàn)。dbSNP是人基因組中SNP的集合因子H基因中的SNPM在因子H基因的22個編碼外顯子中，分布于因子H基因啟動子、5，未翻譯區(qū)、內(nèi)含子和3，未翻譯區(qū)中。在dbSNP數(shù)據(jù)庫中發(fā)現(xiàn)的人因子H基因中379個SNP的登錄號在上文列出。這些SNP可用于實施本發(fā)明的方法。表11和表12中五個額外的多態(tài)性未在SNP數(shù)據(jù)庫中找到內(nèi)含子2中的多態(tài)性，其中插入兩個T核苷酸(IVS2-18insTT);內(nèi)含子7中的多態(tài)性(IVS7-53G〉T);內(nèi)含子15中的多態(tài)性(IVS15-30OA);內(nèi)含子18中的多態(tài)性(IVS18-89TX:);和外顯子20中的多態(tài)性(N1050Y)。這些多態(tài)性適用于本發(fā)明的方法。另外，應(yīng)當(dāng)明白這些CFHR5多態(tài)性適用于連鎖和關(guān)聯(lián)研究、對臨床群體基因分型、將基因型信息與表型信息相關(guān)聯(lián)、雜合子丟失分析和細胞樣品來源鑒定。表ll中第一行列出因子H基因中SNP的外顯子或內(nèi)含子位置。對外顯子SNP而言，列出氨基酸位置和變化(如果有的話)。例如外顯子2SNP位于因子H多肽的位置62，并有纈氨酸(V)到異亮氨酸(I)的改變。對于內(nèi)含子SNP而言，指出SNP的性質(zhì)。例如內(nèi)含子2SNP是兩個核苷酸TT的插入。表ll的第二行列出多態(tài)性的dbSNP號(如果有的話)。例如，rs800292是因子H基因中外顯子2中多態(tài)性的dbSNP名稱。該多態(tài)性以及dbSNP中其他因子H(CFH)基因的多態(tài)性的描述可在http:〃www.ncbi.nlm.nih.gov(http:〃www.ncbi.iilm.iiih.gov/entrez/query.fcgidb=snp&cmd-search&term-)獲得。表11的第三行到第五行列出具體的二倍型存在于22個MPGNII患者中的次數(shù)。例如對于外顯子2SNP而言，GG存在于20個患者中，GA存在于2個患者中，AA在患者中不存在，所述患者患有MPGNII。表ll的第六行和第七行列出具體的單元型存在于22個MPGNII患者中的頻率。例如對于外顯子2SNP而言，G存在于95%的，A存在于5%的22個MPGNII患者的等位基因中。第八行列出22個MPGNII患者的因子H基因中一般單元型的核苷酸。例如，在22個MPGNII患者的因子H基因中，G是外顯子2SNP中更頻繁的核苷酸，9T在內(nèi)含子2SNP中比11T更頻繁地觀察到。剩余的行列出22個MPGNII患者中每個的因子H基因中的11個SNP的二倍型。應(yīng)該理解，表ll中未列出的因子H基因中的其他多態(tài)性位點可能與MPGNII相關(guān)。例如但非限制地，上文列出了因子H基因中的示例性多態(tài)性位點。表12顯示MPGNII患者與AMD陰性的人種匹配對照個體之間SNP頻率的比較。表12的第一列列出了因子H基因中的SNP。表12的第二和第三列列出了特定單元型在22名MPGNII患者中出現(xiàn)的頻率。表12的第四和第五列列出了特定單元型在131名對照個體中出現(xiàn)的頻率。表12的第六列列出了對每個數(shù)據(jù)集計算的P值。如表11和12所示，兩種常見的非同義變體外顯子2中的I62V和外顯子9中的Y420H;同義變體外顯子10中的A307A以及內(nèi)含子2中的多態(tài)性顯示與MPGNII顯著相關(guān)。如圖14和15所示，在22個MPGNII病例和103個人種匹配的對照中進行的檢查中發(fā)現(xiàn)，CHFR5基因的多態(tài)性位點與MPGNII顯著相關(guān)。表14和15中列出了CFHR5基因中的五種(5)多態(tài)性；它們以dbSNP見于NCBI。CFHR5基因中的SNP分布在CFHR5基因的10個編碼外顯子中，并且分布在CFHR5基因的啟動子、5，未翻譯區(qū)、內(nèi)含子和3，未翻譯區(qū)中。下文列出的是見于dbSNP數(shù)據(jù)庫的人CFHR5基因中82種SNP的登錄號。這些SNP可用于實施本發(fā)明的方法。表Brs應(yīng)2151譜27縱rs6畫2isB32斜rs鵬譲幽2附rs柳2162rs磁7256rsl臓S3rsl255054rs腦2350,27659is7528757rs665717irsl2750576rsl2CM6Q2is7527910柳7鄉(xiāng)5rsl170881isl2745733rs直2064805rsl06額6rs3748557rslH08柳rsl273卿7rsl2049041rsl0588279rs7554757rs腦柳組273鄉(xiāng)7:rs7550柳rs7419075rsll7術(shù)8rs，1583363rs755節(jié)5is7366339fsl8551i6歳844Qrsl,粒3ra942濯isl75鄉(xiāng)6rs鄉(xiāng)439rsl273.isl0922153rs7547265爐023鄰rsm鄉(xiāng)71922152rs9427663rs75375M表14的第一行列出了CFHR5基因中SNP的外顯子、啟動子或內(nèi)含子位置。對于外顯子SNP，列出了氨基酸位置和改變(如果有的話)。例如，外顯子2SNP位于CFHR5多肽的第46位，由脯氨酸(P)改變成絲氨酸(S)。對于啟動子和內(nèi)含子SNP，標(biāo)出了SNP的性質(zhì)。例如，-249位的啟動子SNP用C置換T。表14的第二行列出了多態(tài)性的dbSNP號(如果有的話)。例如，rs9427661是CFHR5基因啟動子區(qū)中多態(tài)性的dbSNP名稱。該多態(tài)性以及dbSNP中其他CFHR5基因多態(tài)性的描述在http:〃www.iicbi.iilm.iiih.gov(http:〃www.iicbi.iilm.nih.gov/entrez/query.fcgidb-snp&cmd-search&terii^)提供。表14的第三到第五行列出了特定二倍型在22名MPGNII患者中的出現(xiàn)次數(shù)。例如，對于外顯子2SNP,CC在19名MPGNII患者中出現(xiàn)，CT在3名MPGNII患者中出現(xiàn)，TT未在MPGNII患者中出現(xiàn)。表14的第六和第七行列出了特定單元型在22名MPGNII患者中的頻率。例如，對于外顯子2SNP,在22名MPGNII患者的等位基因中，C(編碼脯氨酸)在93%中出現(xiàn)，T(編碼絲氨酸)在7%中出現(xiàn)。第八行列出了22名MPGNII患者中CFHR5基因一般單元型的核苷酸。例如，在22名MPGNII患者中，在CFHR5基因的外顯子2SNP中，C是更為常見的核苷酸。剩下的行列出了22名MPGNII患者中每一名的CFHR5基因中5SNP的二倍型。應(yīng)該理解，表14中未列出的CFHR5基因中其他多態(tài)性位點可能與MPGNII相關(guān)。例如但非限制地，上文列出了CFHR5基因中的示例性多態(tài)性位點。表15顯示MPGNII患者與AMD陰性人種匹配對照個體中SNP頻率的比較。表15的第一列列出了CFHR5基因中的SNP。表15的第二和第三列列出了特定單元型在22名MPGNII患者中出現(xiàn)的頻率。表15的第四和第五列列出了特定單元型在103名對照個體中出現(xiàn)的頻率。表15的第六列列出了對每個數(shù)據(jù)集計算的P值。如表14和15所示，一個非同義變體外顯子2中的P46S以及兩個啟動子多態(tài)性-249T>C和-2-T>C顯示與MPGNII顯著相關(guān)。MPGNII患者中鑒定的危險相關(guān)("危險")多態(tài)性和單元型包含與MPGNII危險提高相關(guān)的因子H及CFHR5多態(tài)性的位點分別示于表11和12以及表14和15。因子H和CFHR5中與危險提高尤其相關(guān)的多態(tài)性分別包括rsl061170(外顯子9中的Y420H)和rsl2097550(外顯子2中的P46S)處的變體等位基因。與MPGNII危險提高相關(guān)的某些單元型示于表12和15。如表12所示，因子H基因中的一種危險單元型包括第402位的變體等位基因(編碼組氨酸)，可見于64%的MPGNII病例中，但僅見于33%的對照。如表15所示，CFHR5基因中的一種危險單元型包括第46位的變體等位基因(編碼絲氨酸)，可見于7%的MPGNII病例，但僅見于<1%的對照。應(yīng)該理解，表11-12和14-15中未列出的因子H和CFHR5基因中其他多態(tài)性位點可能進一步精煉這些單元型分析。使用因子H或CFHR5基因中非同義多態(tài)性的單元型分析可用于鑒定變體因子H或CFHR5多肽。與危險相關(guān)的其他單元型可能編碼與中性或保護性單元型所編碼蛋白質(zhì)序列相同的蛋白質(zhì)，但在啟動子或內(nèi)含子中含有等位基因，例如改變因子H或CFHR5表達的水平或位置的等位基因。保護性多態(tài)性和單元型意外地，還發(fā)現(xiàn)了保護性多態(tài)性和單元型。例如，如表12所示，外顯子2中具有變體等位基因(rs800292，I62V)的單元型在23%的對照中出現(xiàn)，但僅在<3%的MPGNII病例中出現(xiàn)，IVS2(內(nèi)含子2，-18insTT)中具有變體等位基因的單元型在26%的對照中出現(xiàn)，但僅在<3%的MPGNII病例中出現(xiàn)。外顯子IO中具有變體等位基因(rs2274700，A473A)的單元型在對照中出現(xiàn)的頻率比MPGNII病例出現(xiàn)的頻率高。在一些情況下，特征為保護性單元型的基因所編碼的蛋白質(zhì)具有與危險單元型蛋白質(zhì)不同的序列。例如，因子H蛋白質(zhì)的保護性形式通常第402位不是組氨酸。在一些實施方案中，保護性形式的第62位是異亮氨酸?？梢酝ㄟ^以下方法鑒定其他保護性形式(1)鑒定具有保護性單元型的一個或多個個體和(2)確定來自該個體的因子HcDNA或蛋白質(zhì)序列。一些保護性形式比全長短。可以類似地鑒定CFHR5蛋白質(zhì)的保護性形式。中性多態(tài)性和單元型某些單元型與發(fā)生MPGNII的危險提高或降低均不相關(guān)，稱為"中性"。特征為中性單元型的基因所編碼的蛋白質(zhì)為"中性"因子H或CFHR5蛋白質(zhì)。例如，特征為中性單元型的基因所編碼的示例性蛋白質(zhì)包括第402位不是組氨酸或第62位不是異亮氨酸的因子H蛋白質(zhì)以及第46位不是絲氨酸的CFHR5蛋白質(zhì)。MPGNII患者中多態(tài)性的重要性如實施例2所示，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)與發(fā)生AMD的傾向相關(guān)的相同CFH多態(tài)性也與發(fā)生2型膜性增生性腎小球腎炎(MPGNII)相關(guān)。事實上，最初在AMD患者中發(fā)現(xiàn)的危險單元型(Y402H和IVS10)也可見于70%測試的患2型膜性增生性腎小球腎炎(MPGNII)患者中，表明本發(fā)明的診斷方法可用于檢測該病癥。此外，CFHR5基因中的變異和單元型與患MPGNII的危險提高強烈相關(guān)。從這些數(shù)據(jù)中得出一個結(jié)論MPGNII和AMD是同一遺傳損傷的替代性表現(xiàn)。值得注意的是，MPGNII患者發(fā)生玻璃疣，它與AMD中形成的玻璃疣在臨床上和組成上均無法區(qū)分。區(qū)別這兩種基底表型的惟一特征是發(fā)病年齡——MPGNII中的玻璃疣發(fā)生較早，經(jīng)常在10-20歲，而AMD中的玻璃疣發(fā)生年齡較晚。我們推斷，在任一群體(AMD或MPGNII)中鑒定的因子H基因和CFHR5基因可以是對兩種疾病易感性的預(yù)兆?？赡苡写俪蒑PGNII和引起早期表型的其他因素。由于AMD很普遍而MPGNII很罕見，因此CFH和CFHR5基因的單元型分析以及本文所述的其他方法將可用于篩選和治療患有AMD或發(fā)生AMD的可能性提高的患者。功能缺失因子H或CFHR5正?；蛞吧凸δ艿娜笔Э赡芘cAMD相關(guān)。顯示與AMD相關(guān)性最強并導(dǎo)致變體因子H多肽或變體CFHR5多肽變異的因子H基因中的非同義多態(tài)性(如表1A、1B、1C、11、14和15所示)可能在AMD發(fā)揮原因作用。這樣的作用可以通過產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因非人動物并確定該動物是否發(fā)生AMD來確認，所述動物表達帶有這些非同義多態(tài)性的人因子H或CFHR5。因子H或CFHR5編碼區(qū)中引入終止密碼子的多態(tài)性可能通過減少或消除功能性因子H或CFHR5蛋白質(zhì)而導(dǎo)致AMD。終止密碼子還可能引起產(chǎn)生截短的因子H或CFHR5肽，其活性相對于全長蛋白質(zhì)是異常的。調(diào)節(jié)區(qū)如啟動子和內(nèi)含子中的多態(tài)性可能通過降低因子H或CFHR5基因表達而導(dǎo)致AMD。內(nèi)含子(如CFH的內(nèi)含子2)中的多態(tài)性也可能通過改變基因剪接模式(導(dǎo)致因子H或CFHR5蛋白質(zhì)的改變)而導(dǎo)致AMD?？梢詼y定CFHRNA或蛋白質(zhì)以檢測剪接變體表達的變化，其中所述變化指示發(fā)生AMD的傾向。已經(jīng)對因子H基因本身報道了選擇性剪接模式。可以通過若干手段確定因子H基因或CFHR5基因中多態(tài)性對AMD的影響?？梢酝ㄟ^測量樣品中的蛋白質(zhì)水平來確定變體因子H或CFHR5多肽的表達水平的改變，所述樣品來自患或未患AMD或多種AMD亞型的個體組?？梢酝ㄟ^測定來自上述個體組的樣品中因子H或CFHR5的體外活性(如與C3b或肝素結(jié)合)來檢測變體因子H或CFHR5多肽生物活性的改變。VI.基因組重復(fù)位點處的多態(tài)性如圖18所示，CFH基因和因子H相關(guān)(CFHR)l-5基因具有共享的高度保守區(qū)域，所述區(qū)域可能是由基因組重復(fù)產(chǎn)生的序列。可見于CFH或CFHR5的某些SNP和變異(如本文所述)預(yù)期也在CFHR1、CFHR2、例如，CF及外顯子22的相應(yīng)序列可見于CFH、CFHR1和CFHR2，可能在CF及外顯子22中鑒定的多態(tài)性(如R1210C)也可見于CFHR1和/或CFHR2，并且這些改變可能與AMD、MPGNII和其他補體相關(guān)病癥的發(fā)生傾向相關(guān)聯(lián)。在CFH和CFHR5中鑒定的多態(tài)性位點側(cè)翼序列的同源節(jié)段可以通過比對這些區(qū)域中的cDNA或基因組序列來鑒定。多態(tài)性位點側(cè)翼的保守性序列通常包含至少10bp(在多態(tài)性位點的任一側(cè))，更常為至少20bp、或至少50bp或至少100bp，它們在核苷酸水平具有至少95%同一性，有時具有98%同一性、至少99%同一性或甚至100%同一性。同一性可通過觀察或使用熟知的算法(Smith和Waterman,1981或Needleman和Wunsch，1970，均同上文)來測定。因此本發(fā)明提供確定受試者發(fā)生年齡相關(guān)性黃斑變性(AMD)或其他病癥的方法，所述方法是通過檢測對應(yīng)于CFH或CFHR5基因中同源多態(tài)性位點的因子H相關(guān)基因多態(tài)性位點處是否存在變異。CFH和因子H相關(guān)基因的序列為本領(lǐng)域所公知(見本文中其他各處提供的序列和登錄號)。還參閱RodriquezdeCordoba,S.，等，2004，MolImmunol41:355-67;Zipfel等，1999，Immunopharmocology42:53-60;Zipfel等，F(xiàn)actorHfamilyproteins:oncomplement,microbesandhumandiseases,BiochemSocTrans.2002年11月；30(Pt6):971-8;Diaz-GuillenMA,等，AradiationhybridmapofcomplementfactorHandfactorH-relatedgenes,Immunogenetics，1999年6月；49(6):549畫52;SkerkaC，等,,Anovelshortconsensusrepeat-containingmoleculeisrelatedtohumancomplementfactorH，JBiolChem.1993年2月5日；268(4):2904畫8;SkerkaC，等，ThehumanfactorH-relatedgene2(FHR2):structureandlinkagetothecoagulationfactorXIIIbgene,Immunogenetics,1995;42(4):268曙74;MaleDA，等，ComplementfactorH:sequenceBimlysisof221kbofhumangenomicDNAcontainingtheentirefH，沮R-landfHR-3genes,MolImmunol.2000年1-2月；37(l國2):41-52;HellwageJ，等"Biochemicalandfunctionalcharacterizationofthefactor畫H-relatedprotein4(FHR曙4)，Immimopharmacology.1997年12月；38(1誦2):149-57;SkerkaC，等.，ThehumanfactorH-relatedprotein4(FHR-4).Anovelshortconsensusrepeat-containingproteinisassociatedwithhumantriglyceride-richlipoproteins,JBiolChem.1997年2月28日；272(9):5627-34;HellwageJ，等，F(xiàn)unctionalpropertiesofcomplementfactorH-relatedproteinsFHR-3andFHR-4:bindingtotheC3dregionofC3banddifferentialregulationbyheparin,FEBSLett.1999年12月3日；462(3):345-52;JozsiM，等，F(xiàn)HR-4A:anewfactorH國rdatedproteinisencodedbythehumanFHR-4gene,EurJHumGenet.2005年3月；13(3):321-9;McRae幾，等，LocationandstructureofthehumanFHR-5gene,Genetica.2002年3月;114(2):157-61;McRae幾，等.，HumanfactorH-relatedprotein5hascofactoractivity,inhibitsC3convertaseactivity,bindsheparinandC-reactiveprotein,andassociateswithlipoprotein,JImmunol.2005年5月15日；174(10):6250-6;MurphyB，等.，F(xiàn)actorH-relatedprotein-5:anovelcomponentofhumanglomerularimmunedeposits,AmJKidneyDis.2002年1月；39(l):24-7。VII.檢測和分析與AMD相關(guān)的因子H多態(tài)性因子H基因和CFHR5基因中的多態(tài)性位點和單元型與AMD(和MPGNII)相關(guān)這一發(fā)現(xiàn)具有多種特定應(yīng)用，包括篩選個體以查明發(fā)生AMD的危險以及鑒定患有AMD或發(fā)生AMD的危險提高的個體的新的和最佳的治療方法。不限于特定機制地，因子H基因中的多態(tài)性以多種方式影響個體的表型。因子H蛋白質(zhì)編碼區(qū)中出現(xiàn)的多態(tài)性可能通過影響蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和/或功能來影響表型。因子H非編碼區(qū)中出現(xiàn)的多態(tài)性可能通過其對復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和/或翻譯的影響而間接施加表型影響。因子H基因中的某些多態(tài)性可能使個體易感于特定突變，所述突變可與特定的AMD表型原因性相關(guān)。備選地，如上文所指出，CFH基因或CFHR5中的多態(tài)性可能與相鄰基因(包括但不僅限于CFHR-1、2、3或4)的變異相關(guān)聯(lián)。相鄰基因的變異可能引起編碼蛋白質(zhì)表達或形式的變化，并對載體產(chǎn)生有害或保護性影響。A.制備用于分析的樣品在分離自待評估個體的靶核酸中檢測多態(tài)性。一般分析基因組DNA。對于基因組DNA的測定，事實上任何含有基因組DNA或RNA的生物樣品(如有核細胞)都是合適的。例如，在實施例1所述試驗中，從收集自病例和對照受試者的外周血白細胞獲得基因組DNA(QIAampDNABloodMaxikit,Qiagen,Valencia,CA)。其他合適的樣品包括唾液、頰刮除物、視網(wǎng)膜活檢、腎或肝或其他器官或組織；皮膚活檢；羊水或CVS樣品等。備選地，可以測定RNA或cDNA。備選地，如下文討論地，所述測定可檢測變體因子H蛋白質(zhì)。用于純化或部分純化來自患者樣品的核酸或蛋白質(zhì)以用于診斷或其他測定的方法是熟知的。B.檢測把核酸中的多態(tài)性可以使用本領(lǐng)域熟知的任一方法在個體(如所分析的患者)中確定占據(jù)表1A、1B、1C、11、14和15中所述因子H基因和因子H相關(guān)5基因多態(tài)性位點以及位于因子H或CFHR5基因之中或附近的dbSNP組中其他多態(tài)性位點(見上文列表)中的堿基。實例包括使用等位基因特異性探針；使用等位基因特異性引物；直接序列分析；變性梯度凝膠電泳(DGGE)分析；單鏈構(gòu)象多態(tài)性(SSCP)分析以及變性高效液相層析(DHPLC)分析。檢測DNA多態(tài)性的其他熟知方法包括使用分子信標(biāo)技術(shù)(參閱如Piatek等，1998;Nat.Biotechnol.16:359-63;Tyagi和Kramer,1996，Nat.Biotechnology14:303-308;和Tyagi等，1998，Nat.Biotechnol.16:49-53)、侵入物技術(shù)(參閱如Neri等，2000，AdvancesinNucleicAcidandProteinAnalysis3826:117-125和美國專利號6,706,471)、基于核絲列的擴增(Nasba)(Compton，1991)、蝎技術(shù)(Thelwell等，2000，Nuc.AcidsRes，28:3752-3761和Solinas等,2001,"DuplexScorpionprimersinSNPanalysisandFRETapplications"Nuc.AcidsRes,29:20.)、限制性片段多態(tài)性(RFLP)分析等。其他方法對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。例如，用于分析多態(tài)性的等位基因特異性探針的設(shè)計和使用描述于Saiki等，1986;Dattagupta，EP235,726，Saiki，WO89/11548。簡言之，如果兩種節(jié)段代表不同的多態(tài)性形式，則將等位基因特異性探針設(shè)計成與來自一個個體的靶DNA節(jié)段雜交，但不與來自另一個體的相應(yīng)節(jié)段雜交。選擇充分嚴格的雜交條件，以使給定的探針僅與兩種等位基因之一顯著雜交。一般將等位基因特異性探針設(shè)計成與靶DNA的節(jié)段雜交，以使多態(tài)性位點與探針的中心位置匹配。用于分析因子H多態(tài)性的示例性等位基因特異性揮:針示于表16A。以使用多態(tài)性dbSNPNo.rs1061170為例，等位基因特異性探針的實例包括5'-TTTCTTCCATAATTTTG-3'[SEQIDNO:234(參照等位基因探針)和5'-TTTCTTCCATGATTTTG-3'[SEQIDNO:235(變體等位基因探針)以及5'隱TAATCAAAATTATGGAA-3'[SEQIDNO:232(參照等位基因探針)和5'-TAATCAAAATCATGGAA-3'[SEQIDNO:233(變體等位基因探針)。在該實例中，第一組等位基因特異性探針與跨越外顯子9多態(tài)性的因子H基因非編碼鏈雜交。第二組等位基因特異性探針與跨越外顯子9多態(tài)性的因子H編碼鏈雜交。這些探針長度為17個堿基?？梢允褂帽绢I(lǐng)域已知方法便利地確定等位基因特異性探針的最佳長度。等位基因特異性探針經(jīng)常成對使用，將一對的一個成員設(shè)計成與靶序列的參照等位基因雜交，而另一成員設(shè)計成與變體等位基因雜交?？梢栽谕恢С治锷瞎潭ㄈ舾商结槍Γ酝瑫r分析同一靶基因序列內(nèi)的多種多態(tài)性。用于分析多態(tài)性的等位基因特異性引物的設(shè)計和使用描述于例如WO93/22456和Gibbs，1989。簡言之，將等位基因特異性引物設(shè)計成與耙DNA上與多態(tài)性重疊的位點雜交，僅在引物與特定等位基因形式顯示完全的互補性時才根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)PCR操作引發(fā)DNA擴增。單堿基錯配防止DNA擴增，不形成可檢測的PCR產(chǎn)物。當(dāng)多態(tài)性位點位于引物的3，最末端時該方法效果最好，因為該位置是從引物延長時最不穩(wěn)定的。用于分析因子H多態(tài)性的示例性等位基因特異性引物示于表16B。以dbSNPNo.rsl061170為例，等位基因特異性引物的實例包括5'-CAAACTTTCTTCCATA-3'[SEQIDNO:294(參照等位基因引物)和5'-CAAACTTTCTTCCATG-3'[SEQIDNO:295(變體等位基因引物)以及5'-GGATATAATCAAAATT-3'[SEQIDNO:292(參照等位基因引物)和5'-GGATATAATCAAAATC-3'[SEQIDNO:293(變體等位基因引物)。在該實例中，第一組等位基因特異性引物與外顯子9中多態(tài)性緊鄰的因子H基因非編碼鏈雜交，與參照或變體多態(tài)性等位基因互補的最后一個核苷酸已標(biāo)出。將這些引物與其他普通引物一起用于標(biāo)準(zhǔn)PCR操作，所述普通引物在多態(tài)性下游的特定位置與因子H基因編碼鏈雜交。第二組等位基因特異性引物與外顯子9中多態(tài)性位點直接相鄰的因子H基因編碼鏈雜交，與參照或變體多態(tài)性等位基因互補的最后一個核苷酸已標(biāo)出。將這些引物與其他普通引物一起用于標(biāo)準(zhǔn)PCR操作，所述普通引物在多態(tài)性上游的特定位置與因子H基因非編碼鏈雜交。選擇普通引物以使產(chǎn)生的PCR產(chǎn)物的長度可從約100至約300個堿基內(nèi)變化，或長度在約150至約250個堿基內(nèi)變化，盡管更小(長度約50至約100個堿基)或更長(長度約300至約500個堿基)的PCR產(chǎn)物也是可能的。引物的長度可在約10至30個堿基內(nèi)變化，或長度在約15至25個堿基內(nèi)變化。可以通過觀察因子H基因組序列來確定普通引物的序列，所述因子H基因組序列以GenBank登錄號AL049744可見。用于檢測多態(tài)性的許多方法涉及擴增來自耙樣品的DNA或RNA(如使用因子H特異性引物擴增個體因子H基因的節(jié)段)并分析擴增的基因。這可以通過標(biāo)準(zhǔn)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR&RT-PCR)操作或本領(lǐng)域已知的其他方法實現(xiàn)。擴增可以引起因子H等位基因特異性寡核苷酸的產(chǎn)生，其跨越因子H基因中的單核苷酸多態(tài)性位點。因子H特異性引物序列和因子H等位基因特異性寡核苷酸可來自因子H基因的編碼(外顯子)或非編碼(啟動子、5，非翻譯、內(nèi)含子或3，非翻譯)區(qū)。可以通過使用變性梯度凝膠電泳(DGGE)分析PCR產(chǎn)生的擴增產(chǎn)物。可以基于溶液中序列的依賴性熔解特性和電泳遷移來鑒定不同的等位基因。參閱Erlich編著,PCRTechnology,PrinciplesandApplicationsforDNAAmplification,第7章(W.H.Freeman和Co,NewYork,1992)。可以使用單鏈構(gòu)象多態(tài)性(SSCP)分析區(qū)分靼序列的等位基因。可以基于單鏈PCR產(chǎn)物的序列及結(jié)構(gòu)依賴性電泳遷移來鑒定不同的等位基因(Orita等，1989)?？梢园凑諛?biāo)準(zhǔn)操作產(chǎn)生擴增的PCR產(chǎn)物，并加熱或另外變性以形成單鏈產(chǎn)物，所述單鏈產(chǎn)物可以重新折疊或形成部分取決于堿基序列的二級結(jié)構(gòu)?？梢允褂米冃愿咝б合鄬游?DHPLC)分析區(qū)分耙序列的等位基因?？梢酝ㄟ^單鏈PCR產(chǎn)物層析遷移的改變，基于堿基差異鑒定不同的等位基因(Frueh和Noyer-Wddner，2003)?？梢园凑諛?biāo)準(zhǔn)操作產(chǎn)生擴增的PCR產(chǎn)物，并加熱或另外變性以形成單鏈產(chǎn)物，所述單鏈產(chǎn)物可以重新折疊或形成部分取決于堿基序列的二級結(jié)構(gòu)?？梢允褂帽绢I(lǐng)域熟知的DNA測序方案實現(xiàn)多態(tài)性的直接序列分析。參閱Sambrook等，MolecularCloning,ALaboratoryManual(第2版，CSHP，NewYork1989)和Zyskind等，RecombinantDNALaboratoryManual(Acad.Press,1988)。多種用于檢測生物樣品中多態(tài)性的其他方法為本領(lǐng)域已知。參閱如Ullman等"Methodsforsinglenucleotidepolymorphismdetection"美國專利號6,632,606;Shi，2002，"Technologiesforindividualgenotyping:detectionofgeneticpolymorphismsindrugtargetsanddiseasegenes"AmJPharmacogenomics2:197-205;Kwok等,2003，"Detectionofsinglenucleotidepolymorphisms"CurrIssuesBiol.5:43-60)。通過4^Hf內(nèi)容指導(dǎo)，對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言顯而易見的是，可以檢測多種多態(tài)性和單元型以評估個體發(fā)生因子H相關(guān)病癥的傾向。以下實施例和組合以及本文提供的其他實施例用于說明而非限制。在本發(fā)明的一個方面中，確定患者在一個或多個以下因子H基因多態(tài)性位點處的等位基因rs529825、rs800292、rs3766404、rsl061147、rsl061170和rs203674。在一個實施方案中，確定患者在rs529825處的等位基因。在一個實施方案中，確定患者在rs800292處的等位基因。在一個實施方案中，確定患者在rs3766404處的等位基因。在一個實施方案中，確定患者在rs1061147處的等位基因。在一個實施方案中，確定患者在rs1061170處的等位基因。在一個實施方案中，確定患者在rs203674處的等位基因。在一個實施方案中，確定rs529825和rs800292中至少一處。在一個實施方案中，確定rsl061147、rsl061170和rs203674中至少一處。在一個實施方案中，確定rs529825和rs800292中至少一處，確定rs3766404并確定rsl061147、rsl061170和rs203674中至少一處。在一個實施方案中確定rs529825、rs800292、rs3766404、rsl061170和rs203674處的等位基因。本文提供上述多態(tài)性和多態(tài)性組合用于說明，而不是意在以任何方式限制本發(fā)明。即，用于實施本發(fā)明的其他多態(tài)性和單元型基于;^^開是顯而易見的。在本發(fā)明的相關(guān)方面中，確定患者在一個或多個以下因子H基因多態(tài)性位點處的等位基因rs529825、rs800292、內(nèi)含子2(IVS2或insTT)、rs3766404、rsl061147、rsl061170、外顯子IOA、rs203674、rs375046和外顯子22(1210)。在一個實施方案中，確定患者在rs529825處的等位基因。在一個實施方案中，確定患者在rs800292處的等位基因。在一個實施方案中，確定患者在內(nèi)含子2處的等位基因。在一個實施方案中，確定患者在rs3766404處的等位基因。在一個實施方案中，確定患者在rsl061147處的等位基因。在一個實施方案中，確定患者在rs1061170處的等位基因。在一個實施方案中，確定患者在外顯子10A處的等位基因。在一個實施方案中，確定患者在rs203674處的等位基因。在一個實施方案中，確定患者在rs375046處的等位基因。在一個實施方案中，確定患者在外顯子22(1210)處的等位基因。在一個實施方案中，確定rs529825和rs800292中至少一個；確定內(nèi)含子2;確定rs3766404;確定rsl061147、rsl061170和rs203674中至少一個；確定外顯子10A;確定rs375046并確定外顯子22(1210)。在一個實施方案中，確定rs529825、rs800292、內(nèi)含子2、rs3766404、rsl061170、外顯子10A、rs203674、rs375046和外顯子22(1210)處的等位基因。在一個實施方案中，確定一個、兩個、三個、四個、五個或五個以上下列因子H基因多態(tài)性位點rs529825、rs800292、內(nèi)含子2(IVS2或insTT)、rs3766404、rsl061147、rsl061170、rs2274700、外顯子IOA、rs203674、rs375046和外顯子22(1210)。提供上述多態(tài)性和多態(tài)合用于說明，而不是意在以任何方式限制本發(fā)明。如上文所討論的，因子H基因外顯子22中第1210位氨基酸的非同義多態(tài)性與AMD強烈相關(guān)，因此在因子H的Jt^酸位置1210處存在半胱氨酸提供了對個體患AMD或可能發(fā)生AMD的強烈指示。值得注意的是，甚至在檢測為另外有保護性的等位基因(如Y402)時，1210C仍指示發(fā)生AMD或其他補體介導(dǎo)病癥的傾向。因此就發(fā)生AMD或其他因子H相關(guān)疾病的危險而言，患者在外顯子22(1210)處的等位基因是非常有參考意義的。在本發(fā)明的相關(guān)方面中，確定個體在一個或多個以下C7^W5基因多態(tài)性位點處的等位基因rs9427661(-249T>C)、rs9427662(-20TX:)和rsl2097550(P46S)。在一個實施方案中，確定患者在rs9427661處的等位基因。在一個實施方案中，確定患者在rs9427662處的等位基因。在一個實施方案中，確定患者在rsl2097550處的等位基因。在一個實施方案中，確定rs9427661和rs9427662中至少一處。在一個實施方案中，確定rs9427661和rs9427662中至少一處，并確定rsl2097550。在一個實施方案中，確定rs9427661、rs9427662和rsl2097550。提供上述多態(tài)性和多態(tài)性組合用于說明，而不是意在以任何方式限制本發(fā)明。即，用于實施本發(fā)明的其他多態(tài)性和單元型基于本公開是顯而易見的。C.蛋白質(zhì)變體的檢測在本發(fā)明的一個實施方案中，進行蛋白質(zhì)測定以表征受試者CFH或CFHR5基因中的多態(tài)性。可適用于檢測變體CFH、HFL1和CFHR5的方法是眾所周知的。這些方法包括分析生物化學(xué)法如電泳(包括毛細管電泳和雙向電泳)、層析法如高效液相層析(HPLC)、薄層層析(TLC)、超擴散層析、質(zhì)鐠法以及多種免疫學(xué)方法如流體或凝膠沉淀素反應(yīng)、免疫擴散(單或雙)、免疫電泳、放射免疫測定(RIA)、酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)、免疫熒光測定、western印跡等。例如，適用于實行本發(fā)明的大量已良好建立的免疫結(jié)合測定形式是已知的(參閱如Harlow,E.;Lane,D.Antibodies:alaboratorymanual.ColdSpringHarbor,N.Y:ColdSpringHarborLaboratory;1988和Ausubel等，(2004)CurrentProtocolsinMolecularBiology,JohnWiley&Sons,NewYorkNY。例如，所述測定可以是竟?fàn)幮曰蚍蔷範(fàn)幮缘?。免疫結(jié)合測定(或免疫測定)一般使用"捕捉劑"與分析物特異性結(jié)合，并經(jīng)常固定分析物。在一個實施方案中，捕捉劑為與變體CFH或CFHR5多肽或亞序列特異性結(jié)合的部分?？梢允褂萌缈蓹z測標(biāo)記的抗CFH/CFHR5抗體檢測結(jié)合的蛋白質(zhì)。在一個實施方案中，至少一種抗體對變體形式具有特異性(例如不與野生型CFH或CFHR5多肽結(jié)合)。在一個實施方案中，使用免疫印跡(Western印跡)形式檢測變體多肽。D.AMD患者篩選/i貪斷與AMD或AMD特定亞型相關(guān)的因子H基因多態(tài)性(如表1A、表1B、表1C所示或如本文所述鑒定的)可用于診斷AMD或AMD特定亞型或?qū)ζ涞囊赘行?。與AMD或AMD特定亞型相關(guān)的CFHR5基因多態(tài)性(如表14和15所示或如本文所述鑒定的)可用于診斷AMD或AMD特定亞型或?qū)ζ涞囊赘行?。這些多態(tài)性還可用于篩選MPGNII和其他因子H相關(guān)疾病。鑒定為具有發(fā)生AMD高危險的個體可以采取一些步驟降低危險，包括經(jīng)常進行眼科檢查和下文所述本領(lǐng)域已知或?qū)⒃谖磥黹_發(fā)的治療。如實施例1所述，危險的CFH單元型與觸發(fā)事件(如感染)的組合看來對于疾病表型是足夠的。鑒定為AMD危險的患者可以在早期感染體征時接受進取性治療(如使用抗生素、抗炎劑、用保護性形式的CFH/CFHR5進行治療或使用其他CFH活性調(diào)節(jié)劑治療)。若干這些多態(tài)性形式(即特定位點存在或不存在多態(tài)性)的組合檢測(例如表1A、表IB和/或表1C中列出的1，2,3，4，5，6，7，8，9，10或全部因子H基因多態(tài)性單獨或與表1A-1C中未包括的其他因子H基因多態(tài)性組合)可提高準(zhǔn)確診斷的可能性。類似地，若干CFHR5基因多態(tài)性形式的組合檢測(例如表14和15中列出的1，2，3，4，5，6，7，8，9，10或全部CFHR5基因多態(tài)性單獨或與表1A-1C中未包括的其他CFHR5基因多態(tài)性組合)可提高準(zhǔn)確診斷的可能性。在一個實施方案中，篩選包括確定是否存在至少一種因子H基因多態(tài)性和至少一種CFHR5基因多態(tài)性。在一個實施方案中，篩選包括確定是否存在至少2、3或4種因子H基因多態(tài)性與至少2、3或4種CFHR5基因多態(tài)性的組合。因子H和CFHR5基因的多態(tài)性可用于在AMD患者的家族成員中以及在一般群體中診斷AMD或AMD的特定亞型或其易感性。在診斷方法中，可以將因子H多態(tài)性和/或CFHR5多態(tài)性的分析與其他AMD相關(guān)基因的多態(tài)性分析、AMD蛋白質(zhì)標(biāo)志物的檢測(參閱如Hageman等，專利申請US20030017501;US20020102581;WO0184149和WO0106262)、其他AMD危險因素(如家族病史)的評估組合，與眼科檢查或其他測定和方案組合。E)鑒定用于藥物治療的患者因子H基因和CFHR5基因的多態(tài)性還可用于鑒定合適的患者，所述患者用于進行AMD候選藥物的臨床試驗。這些試驗在治療或?qū)φ杖褐羞M行，所述治療和對照群在因子H基因和/或CFHR5基因多態(tài)性位點的指定集合具有相似或相同的多態(tài)性鐠，或者具有相似或相同的因子H單元型和/或CFHR5單元型。使用在遺傳上匹配的群體消除或降低了由于遺傳因素造成的治療結(jié)果，^^尋可以準(zhǔn)確地評估潛在藥物的效力。F)篩選用于移植的供體組織器官(如肝)和組織(如血、肝細胞)的移植日益廣泛。在進行這些移植中，期望避免在受者中引入有害形式的因子H或因子H相關(guān)蛋白質(zhì)而提高受者發(fā)生AMD的危險。因此，在本發(fā)明的一個方面中，測試供體組織以檢測因子H或CFHR5基因多態(tài)性位點是否存在變異，從而鑒定帶危險單元型或其他有害序列的宿主組織。作為補充或備選，可以測試器官和組織中因子H或CFHR蛋白質(zhì)形式的表達，例如通過使用本文所述的免疫測定。在一個實施方案中，移植的組織為血或血漿(即在輸血或血漿置換中給予)。對提供的血進行常規(guī)篩選以避免施用危險相關(guān)的蛋白質(zhì)(如CFH的1210C)可避免使受者受害。G)表型分類可以基于與特定單元型的相關(guān)性鑒定對AMD特定亞型的易感性。因此，篩選可用于確定對具有不同AMD遺傳亞型的患者組合適的療法。該方法可用于診斷AMD，AMD可細分成表型分類(例如，早期AMD(ARM)、地圖樣萎縮(GA)和滲出性AMD(CNV))。ARM和GA表型可進一步細分為不同的表型(例如單獨的RPE改變、>10的斑狀硬玻璃疣、斑狀軟玻璃疣、BB(表皮)玻璃疣、色素上皮脫離(PED)、"Cherokee"萎縮、半島狀地圖樣萎縮和模式地圖樣萎縮)。這些表型的描述參閱如Bird等，1995，SurvOphthalmol39，367-74和Klaver等，2001，InvestOphthalmolVisSci42,2237-41。H)其他疾病因子H和CFHR5基因的多態(tài)性(如表1A、1B、1C、11、14和15所示)還可測試與涉及旁路補體途徑失調(diào)的其他疾病(如阿爾茨海默病、多發(fā)性硬化、狼疾和哮喘)和病癥(如燒傷、移植和中風(fēng))的關(guān)聯(lián)，所述途徑具有已知但尚未作圖的遺傳組分。不限于任何特定作用機制地，本文提出變體因子H和/或CFHR5多肽的表達與備選補體途徑的失調(diào)相關(guān)。因子H和/或CFHR5的變體形式可能是涉及備選補體途徑缺陷的疾病的原因，或者因子H和/或CFHR5變體形式的存在可以表明備選補體途徑中涉及的另一基因具有原因性作用。因子H基因多態(tài)性還可用于疾病的作圖和治療，所述疾病位于染色體lq上，特別是在因子H基因位于的lq32處或附近。這一特定基因座含有大量補體途徑相關(guān)基因。這些基因中的一個組稱為補體活化調(diào)節(jié)子(RCA)基因簇，含有編碼因子H、五種因子H相關(guān)基因和凝固因子XIIIP亞基的基因。包括C4BPA、C4BPB、C4BPAL2、DAF(CD55)CRl、CR2、CRIL和MCP(CD46)的第二個補體相關(guān)基因簇緊鄰lq25-31基因座。VIII.AMD的預(yù)防和治療可以通過對患者施用變體因子H多肽和/或變體CHFR5多肽的拮抗劑來治療具有因子H多態(tài)性的患者。拮抗劑可包括治療量的與變體因子H多肽和/或變體CHFR5多肽或者與變體因子H多肽和/或變體CHFR5多肽特異性相互作用并中和其活性的抗體的核苷酸序列互補的RNA。備選地，與因子H多態(tài)性和/或CFHR5多態(tài)性相關(guān)的AMD可以通過對患者施用與危險提高無關(guān)的因子H和/或CHFR5形式(例如正?；蛞吧鸵蜃親蛋白質(zhì)和/或正?；蛞吧虲HFR5多肽)來治療。在本發(fā)明的一種方法中，對患者施用因子H保護性變體形式和/或CHFR5保護性變體形式。鑒定為具有AMD高危險的受試者中的治療和預(yù)防方法包括但不限于(1)提高中性或保護性形式因子H和/或中性或保護性形式CHFR5的量或表達；(2)降低危險相關(guān)形式因子H和/或危險相關(guān)形式CHFR5的量或表達；和(3)降低補體旁路途徑的活性。這些治療和預(yù)防方法的實例包括(1)施用中性或保護性形式的因子H蛋白質(zhì)，或治療活性片段和/或中性，或保護性形式CHFR5或治療活性片段；(2)另外提高中性和保護性形式因子H的表達；(3)干擾具危險單元型的個體所編碼的變體因子H和/或變體CHFR5蛋白質(zhì)的表達(例如通過施用反義RNA);(4)降低有害變體形式的量或表達。治療劑(如提高或降低野生型或變體因子H的水平或調(diào)節(jié)其活性的藥物和/或提高或降低野生型或變體CFHR5的水平或調(diào)節(jié)其活性的藥物)可以全身(如通過靜脈注射或輸注)施用或局部(如至眼睛RPE附近以治療AMD)施用。將藥物施用至眼睛的方法是醫(yī)學(xué)領(lǐng)域所熟知的，并可用于施用本文所述的AMD治療。示例性方法包括眼內(nèi)注射(如眼球后、視網(wǎng)膜下、玻璃體內(nèi)和絨毛膜內(nèi)(intrachoridal))、離子電滲療法、滴眼劑和眼內(nèi)植入(如玻璃體內(nèi)、Tenons下和結(jié)膜下)。例如，已經(jīng)通過玻璃體內(nèi)注射將抗VEGF抗體引入獼猴(參閱如Gaudreault等，2005，"PreclinicalpharmacokineticsofRanibizumab(rhuFabV2)afterasingleintravitrealadministration"InvestOphthalmolVisSci46:726-33)，并且已經(jīng)通過玻璃體內(nèi)植入持續(xù)釋放片劑在眼中表達生物活性VEGF和bFGF(Wong等，2001,"IntravitrealVEGFandbFGFproducefloridretinalneovascularizationandhemorrhageintherabbit"CurrEyeRes.22:140-7)。重要的是，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)因子H通過視網(wǎng)膜色素上皮局部合成(見實施例l)，表明局部施用藥物具有治療益處。A.施用治療性因子H多肽對具有發(fā)生AMD(和/或具有早期疾病)的受試者施用中性或保護性展:',,知'。、、，在一種方法中，對患者施用重組因子H多肽。在一個實施方案中，重組因子H由中性單元型序列編碼，所述序列可以是全長的(CFH/HF1)、截短的(FHL1)或選擇性剪接的形式或其生物活性片段。在另一實施方案中，重組因子H具有全長或截短形式的保護性等位基因的序列或其保護性生物活性片段。用于產(chǎn)生治療性重組蛋白質(zhì)的方法是眾所周知的，并包括下文所述的方法。治療性多肽可以全身性(如靜脈內(nèi)或輸注)或局部(如直接送至器官或組織，如眼或肝)施用。因子H和CHFL1蛋白質(zhì)的一些保護性形式比全長短。例如，可以施用中性或保護性形式因子H的片段，以治療或預(yù)防AMD或MPGNII。在具體的實施方案中，施用在具有保護性表型個體中表達的CFH剪接變體所編碼的多肽?？梢酝ㄟ^在保護性或中性單元型純合個體中篩選CFH相關(guān)RNA的表達來鑒定這些蛋白質(zhì)。在具體的實施方案中，保護性蛋白質(zhì)具有對應(yīng)于CFH基因序列中一個或多個外顯子的序列。例如，保護性蛋白質(zhì)可以具有全長或截短CFH蛋白質(zhì)的序列，只是缺失了1、2、3或更多個外顯子(可以是連續(xù)或不連續(xù)的)所編碼的氨基酸殘基。在一個實施方案中，本發(fā)明的保護性因子H蛋白質(zhì)具有與SEQIDNO:2基本相同的氨基酸序列，只是第402位殘基不是組氨酸，并且第1210位殘基不是半胱氨酸。在一個實施方案中，第62位殘基不是纈氨酸。優(yōu)選地，第62位殘基為異亮氨酸。優(yōu)選地，第62位殘基為異亮氨酸，第402位殘基為酪氨酸，并且第1210位殘基為精氨酸。優(yōu)選地，保護性因子H蛋白質(zhì)與SEQIDNO:2或其片段具有95。/。的M酸同一性；有時與SEQIDNO:2的參照因子H多肽具有至少95%的氣基酸同一性；有時為至少98%的氨基酸同一性，有時為至少99%的同一性。示例性人因子H保護性變體的多肽序列SEQIDNO:5示于圖10。該保護性變體因子H多肽第62位氨基酸為異亮氨酸，第402位氨基酸為酪氨酸(以粗體標(biāo)出)。示例性HFL1(人因子H截短形式)保護性變體的多肽序列[SEQIDNO:6示于圖11。該保護性變體截短的因子H多肽第62位氨基酸為異亮氨酸，第402位氨基酸為酪氨酸(以粗體標(biāo)出)。在一個實施方案中，本發(fā)明的保護性因子H蛋白質(zhì)具有與SEQIDNO:4(FHL1)基本相同的氨基^列。在一個實施方案中，第62位殘基不是纈氨酸。優(yōu)選地，第62位殘基為異亮氨酸。優(yōu)選地，保護性因子H蛋白質(zhì)與SEQIDNO:4或其片段具有95%的氨基酸同一性；有時與SEQIDNO:4的參照因子H多肽具有至少95%的氨基酸同一性；有時為至少98%的氨基酸同一性，有時為至少99%的同一性。在一些實施方案中，保護性因子H蛋白質(zhì)具有參照因子H多肽的一種或多種活性。在一個實施方案中，所述活性為與肝素結(jié)合。在一個實施方案中，所述活性為與CRP結(jié)合。在一個實施方案中，所述活性為與C3b結(jié)合。在一個實施方案中，所述活性為與內(nèi)皮細胞表面結(jié)合。在一個實施方案中，所述活性為C3b輔因子活性。在一個實施方案中，保護性因子H蛋白質(zhì)具有高于蛋白質(zhì)SEQIDNO:2的正常功能的活性。在一個實施方案中保護性因子H蛋白質(zhì)具有高于蛋白質(zhì)SEQIDNO:4的正常功能的活性。用于因子H活性的測定是眾所周知的，并描述于科學(xué)文獻中。為了說明而非限制，將簡要描述測定實施例。保護性蛋白質(zhì)(CFH變體)與C3b或CRP結(jié)合如上文所述，可以<吏用Biacore3000系統(tǒng)(BiacoreAB,Uppsala，Sweden)通過表面共振來分析C3b與CFH蛋白質(zhì)的相互作用(Manudian等，2003，MutationsinfactorHreducebindingaffinitytoC3bandheparinandsurfaceattachmenttoendothelialcellsinhemolyticuremicsyndrome.JClinInvest111,1181-90)。簡言之，使用標(biāo)準(zhǔn)氨偶聯(lián)將C3b(CalBiochem，Inc)與傳感器芯片(CarboxylatedDextranChipCM5，BiacoreAB，Uppsala，Sweden)的流動細胞偶聯(lián)。活化兩個細胞并將C3b(50ng/ml，用10mM乙酸緩沖液，pH5.0透析)注射進一個流動細胞，直至達到4000共振單位的相應(yīng)偶聯(lián)水平。使用鹽酸乙醇胺將未反應(yīng)的基團失活。通過注射無C3b的偶聯(lián)緩沖液將另一細胞制備為參照細胞。在每次結(jié)合測定前，通過兩次注射10mM乙酸鹽緩沖液中的2MNaCl，pH4.6和電泳緩沖液(PBS，pH7.4)，徹底洗滌流動細胞。在25。C下，以5^1/分鐘的流動速率將因子H蛋白質(zhì)注射進與C3b偶聯(lián)的流動細胞或?qū)φ占毎?。通過測量共振單位隨時間的變化來定量因子H與C3b的結(jié)合，如Manuelian等，2003，同上所述?？梢栽趥鞲衅餍酒牧鲃蛹毎杏肅RP替換C3b，以相同的方式通過表面共振分析CRP與CHF蛋白質(zhì)之間的相互作用。與內(nèi)皮細胞表面的結(jié)合通過HUVEC和FACS分析的免疫熒光染色來測定CHF蛋白質(zhì)與內(nèi)皮細胞表面的結(jié)合。在測定前，將HUVEC細胞保持在無血清的DMEM(BioWhittaker)中24小時。用DPBS/EDTA使細胞從表面脫離并用DPBS洗滌兩次；將5xl()S個細胞轉(zhuǎn)移至塑料管，用1。/。BSA/DPBS封閉非特異性結(jié)合位點15分鐘，之后與純化的因子H等位基因變體(5ng)—起醉育。對照在無因子H同種型時進行。結(jié)合因子H之后，用DPBS徹底洗滌細胞。使用多克隆山羊抗人FH抗血清作為一抗(CalBiochem)(1:100稀釋)，在4°C孵育細胞15分鐘。使用在封閉液中1:100稀釋的綴合Alexa-fluor488的山羊抗血清作為二抗。通過流式細胞術(shù)檢查細胞(FACScalibur，Becton-DickinsonImmunocytometry，MountainView,California,美國)。一般計數(shù)10000個事件。流體相中的輔因子活性就流體相輔因子測定而言，在30jil總體積中使用C3b生物素(100ng/反應(yīng))、因子I(200ng/反應(yīng))和100ng純化的因子H。在還原條件下通過SDS-PAGE分離在加入因子I前后收集的樣品，并通過Western印跡分析、通過Strepavidin-POD-綴合(l:10000)檢測并定量C3b降解產(chǎn)物。按照生產(chǎn)商的說明書，使用生物素標(biāo)記試劑盒(RocheDiagnostics,Mannheim,Germany)將C3b(40jig)(CalBiochem)生物素化。簡言之，在25"C下，用D-生物素-s-氨基己酸-N-羥基琥珀酰亞胺酯標(biāo)記30jigC3b(CalBiochem)2小時。使用以PBS平衡的PD10柱(AmershamBiosciences)，通過凝膠過濾除去過量的生物素。還參閱Sanchez-Corral等，2002，AmJ.Hum.Genet.71:1285-95。肝素結(jié)合測定使用肝素親和層析在高效液相層析(HPLC)系統(tǒng)中分析純化的CFH蛋白質(zhì)(CFH402Y和CFH402H)與肝素的結(jié)合。將10CFH蛋白質(zhì)稀釋在1/2xPBS中，并以0.5ml/分鐘的流動速率應(yīng)用于肝素-瓊脂糖親和柱(HiTrap，AmershamBiosciences)。用1/2xpBS充分洗柱，并用75至500mMNaCl范圍的線性鹽梯度，以10ml總體積和0.5ml/分鐘的流動速率洗脫結(jié)合的CFH蛋白質(zhì)。通過SDS-PAGE和Western印跡分析測定洗脫的級分。同種型在不同級分中洗脫表明CFH蛋白質(zhì)中特定的M酸變異可調(diào)節(jié)該蛋白質(zhì)與肝素的結(jié)合。還參閱如Pangburn等，1991，Localizationoftheheparin畫bindingsiteoncomplementFactorH,JBiolChem.266:16847-53。施用CFHR5在另一方法中，對患者施用重組CFHR5多肽。在一個實施方案中，重組CFHR5具有中性型序列或其生物活性片段。在另一實施方案中，重組CFHR5具有保護性等位基因或其保護性生物活性片段的序列。用于產(chǎn)生治療性重組蛋白質(zhì)的方法是眾所周知的，并包括下文所述方法。治療性多肽可以全身性(如靜脈內(nèi)或通過輸注)或局部(如直接送至器官或組織，例:in目艮或肝)。含有CFH或CFHR5多肽的治療組合物本發(fā)明提供因子H多肽的治療性制品，所述多肽可以是野生型或變體(如中性或保護性變體)，并且可以是全長形式、截短形式或變體因子H多肽的生物活性片段。如本文所述，可以通過鑒定具有保護性單元型的個白質(zhì)(及其編碼基因)，其中保護性因子H蛋白質(zhì)由具有保護性單元型的等位基因編碼。生物活性片段可包括全長因子H多肽的任何部分，其賦予變體蛋白質(zhì)生物功能。在一些情況下，保護性單元型將與短于全長形式的因子H(即除了FHL-1以外)的表W目關(guān)，所述表達例如是由于在基因中存在提前密碼子。還可以通過測試蛋白質(zhì)在AMD生物標(biāo)志表達上的作用來鑒定治療活性片段。示例性AMD生物標(biāo)志物包括補體途徑組分(例如因子I、因子H、Clr、C3、C3a)、C反應(yīng)蛋白質(zhì)、觸珠蛋白質(zhì)、載脂蛋白質(zhì)E、免疫球蛋白質(zhì)重鏈或輕鏈、al抗胰蛋白質(zhì)酶、ot2巨球蛋白質(zhì)、運甲狀腺素蛋白質(zhì)、肌酸酐和名為"BiomarkersAssociatedWithAge醒RelatedMacularDegeneration"的共同未決臨時申請No.60〃15，503中所述的其他生物標(biāo)志。本發(fā)明提供CFHR5多肽的治療性制品，所述多肽可以是野生型或變體(如中性或保護性變體)，并且可以是全長形式或變體CFHR5多肽的生物活性片段。如本文所述，可以通過鑒定具有保護性單元型的個體并確定該個體基因組中編碼的CFHR5氨基酸序列來鑒定保護性CFHR5蛋白質(zhì)(及其編碼基因)，其中保護性CFHR5蛋白質(zhì)由具有保護性單元型的等位基因編碼。生物活性片段可包括全長CFHR5多肽的任何部分，其賦予變體蛋白質(zhì)生物功能。治療活性片段還可以通過測試蛋白質(zhì)在上文所述因子H的AMD生物標(biāo)志表達上的作用來鑒定。因子H和CFHR5的一些形式可從基因分型的供體血中分離，從來自基因分型的眼供體的培養(yǎng)或轉(zhuǎn)化的RPE細胞中分離或者從表達內(nèi)源因子H的細胞系(如神經(jīng)膠質(zhì)細胞或肝細胞)中分離。備選地，治療性蛋白質(zhì)可以重組產(chǎn)生(如在培養(yǎng)的細菌或真核細胞中產(chǎn)生)并使用本領(lǐng)域熟知并描述于本文的方法進行純化。如上文所指出，已經(jīng)重組表達了因子H和CFHR5的一些形式用于研究目的。然而此類研究制品不適于治療用途。本發(fā)明提供適于對患者施用的重組多肽，包括根據(jù)GoodManufacturingPractice(GMP)要求產(chǎn)生并測試的多肽。例如，送交FDA批準(zhǔn)的重組多肽必須對效力和同一性進行測試、必須是無菌、不含外來物質(zhì)，，并且產(chǎn)品中的所有成分(即防腐劑、稀釋劑、佐劑等)必須符合純度、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)并對患者無害。本發(fā)明提供包含因子H多肽或CFHR5多肽以及可藥用賦形劑或載體的組合物。術(shù)語"可藥用賦形劑或載體"指用于制備所需化合物劑量形式的介質(zhì)?？伤幱觅x形劑或載體可包括一種或多種溶劑、稀釋劑或其他液體載體、分散或懸浮助劑、表面活性劑、等滲劑、增厚或乳化劑、防腐劑、固體粘合劑、潤滑劑等。Remington'sPharmaceuticalSciences,15版，E.W.Martin(MackPublishingCo.,Easton，PA，1975)和HandbookofPharmaceuticalExcipients，3版,A.H.Kibbe編著(AmericanPharmaceuticalAssoc.2000)公開了藥物組合物配制中使用的多種載體及其已知的制備技術(shù)。在一個實施方案中，可藥用賦形劑在施用至眼(例如通過眼內(nèi)注射)時對哺乳動物(如人類患者)無害。就眼內(nèi)給藥而言，例如但不僅限于，治療劑可以在平衡鹽溶液(BSS)或平衡鹽溶液Plus(BSSPlus)(AlconLaboratories,FortWorth,Texas,美國)中施用。在相關(guān)方面中，本發(fā)明提供含有可治療用因子H蛋白質(zhì)(任選地為凍干制品)的無菌容器，如小瓶。治療性因子H蛋白質(zhì)或CFHR5多肽可以如上文所述重組制備。備選地，因子H蛋白質(zhì)或CFHR5多肽可以從培養(yǎng)的RPE細胞(如原代培養(yǎng)物)或內(nèi)源表達因子H或CFHR5的其他細胞中分離。因子H的正常血漿濃度在116至562pg/ml之間變化，因子H在血漿中的半衰期約為6.5天(最近的綜述參閱Esparza-Gordillo等，2004"GeneticandenvironmentalfactorsinfluencingthehumanfactorHplasmalevels"Immunogenetics56:77-82)。在一個實施方案中，可以對個體施用外源因子H，所施用量要足以實現(xiàn)與健康個體中因子H血漿濃度相似的水平，即其量足以實現(xiàn)50至600mg/ml的血漿水平，例如100至560mg/ml。對個體(如160磅的受試者)施用的因子H的量可以為，例如但不僅限于，每次給藥10毫克至5000亳克，每次給藥50毫克至2000毫克，每次給藥100毫克至1500毫克，每次給藥200毫克至1000毫克或每次給藥250毫克至750毫克。對個體施用因子H的頻率可以為，例如但不僅限于，每天兩次、每天一次、每周兩次、每周一次、兩周一次、每月一次、兩月一次、六個月一次或每年一次。對個體施用因子H的量和頻率可以通過監(jiān)測療程由醫(yī)生方便地確定。B)基因治療方法在另一方法中，因子H蛋白質(zhì)或CFHR5多肽通過由外源多核苷酸編碼的蛋白質(zhì)的體內(nèi)表達(即通過基因治療)施用。在一個實例中，基因治療涉及向細胞引入載體，所述栽體表達因子H多肽或生物活性片段或CFHR5多肽或生物活性片段。載體可以是病毒或非病毒。可獲得大量來自動物病毒的載體，包括來自腺病毒、腺伴隨病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、痘病毒、a病毒、彈狀病毒和乳頭瘤病毒。通常病毒被減毒至不再復(fù)制(參閱例如Kay等2001,NatureMedicine7:33-40)編碼因子H多肽或CFHR5多肽的核酸一般與調(diào)節(jié)元件例如啟動子和增強子連接，所述調(diào)節(jié)元件驅(qū)動DNA在個體靶細胞中的轉(zhuǎn)錄。啟動子可驅(qū)動因子H基因或CFHR5基因在所有細胞類型中的表達。備選地，啟動子可僅在特定細胞類型中驅(qū)動因子H基因或CFHR5基因的表達，例如在視網(wǎng)膜或腎細胞中。與編碼因子H多肽或CFHR5多肽的核酸有效連接的調(diào)節(jié)元件通常被克隆進載體中。如本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)知道的，基因治療載體含有用于轉(zhuǎn)錄和翻譯所插入的編碼序列的必需元件(并可包括例如啟動子、增強子、其他調(diào)節(jié)元件)。啟動子可以是組成型或誘導(dǎo)型的。啟動子可被選擇為在靶組織中靶向優(yōu)選的基因表達，例如RPE(近期綜述參閱Sutanto等，2005，"DevelopmentandevaluationofthespecificityofacathepsinDproximalpromoterintheeye"CuirEyeRes.30:53-61;Zhang等,2004，"Concurrentenhancementoftranscriptionalactivityandspecificityofaretinalpigmentepithelialcell-preferentialpromoter"MolVis.10:208-14;Esumi等，2004,"AnalysisoftheVMD2promoterandimplicationofE-boxbindingfactorsinitsregulation"JBiolChem279:19064-73;Camacho誦Hubner等，2000，"TheFugurubripestyrosinasegenepromotertargetstransgeneexpressiontopigmentcellsinthemouse"Genesis.28:99-105及其中的參考文獻)。合適的病毒載體包括DNA病毒載體(例如腺病毒載體、腺伴隨病毒載體、慢病毒載體和痘苗病毒栽體)和RNA病毒載體(如逆轉(zhuǎn)錄病毒載體)。在一個實施方案中，使用腺伴隨病毒(AAV)載體。近期綜述參閱Auricchio等，2005,"Adeno-associatedviralvectorsforretinalgenetransferandtreatmentofretinaldiseases"CurrGeneTher.5:339-48;Martin等，2004，Genetherapyforopticnervedisease,Eye18:1049-55;Ali，2004，"Prospectsforgenetherapy"NovartisFoundSymp.255:165-72;Hennig等，2004,"AAV-mediatedintravitrealgenetherapyreduceslysosomalstorageintheretinalpigmentedepitheliumandimprovesretinalfunctioninadultMPSVIImice"MolTher.10:106-16;Smith等，2003，"AAV-MediatedgenetransferslowsphotoreceptorlossintheRCSratmodelofretinitispigmentosa"MolTher.8:188-95;Broderick等,2005，"Localadministrationofanadeno-associatedviralvectorexpressingIL-10reducesmonocyteinfiltrationandsubsequentphotoreceptordamageduringexperimentalautoimmuneuveitis"MolTher.12:369-73;Cheng等，2005,"Efficientgenetransfertoretinalpigmentepitheliumcellswithlong-termexpression.Retina25:193-201;Rex等,"Adenovirus-mediateddeliveryofcatalasetoretinalpigmentepithelialcellsprotectsneighboringphotoreceptorsfromphoto-oxidativestress.HumGeneTher.15:960-7;以及本文引用的參考文獻)?；蛑委熭d體必須根據(jù)GoodManufacturingPractice(GMP)的要求制造，使得產(chǎn)品適用于施用給患者。本發(fā)明提供適用于施用給患者的基因治療載體，包括根據(jù)GMP要求制造和測試的基因治療載體。進行FDA批準(zhǔn)的基因治療載體必須測試過效力和同一性、是無菌的、不含外來物質(zhì)，并且產(chǎn)品中的所有成分(即防腐劑、稀釋劑、佐劑等)必須符合純度、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并對患者無害。例如，核酸制品要證明不含支原體。參閱例如Islam等，1997，Anacademiccentreforgenetherapyresearchandclinicalgrademanufacturingcapability,AnnMed29，579-583。用于施用基因治療載體的方法是已知的。在一個實施方案中，因子H或CFHR5表達載體全身性引入(例如靜脈內(nèi)或通過輸注)，在一個實施方案中，因子H或CFHR5表達載體局部引入(即直接到具體的組織或器官，例如肝)。在一個優(yōu)選的實施方案中，因子H或CFHR5表達載體直接引入眼(例如通過眼注射)。最近的綜述參閱例如Dinculescu等，2005,"Adeno-associatedvirus-vectoredgenetherapyforretinaldisease"HumGeneTher.16:649-63;Rex等，2004，"Adenovirus國mediateddeliveryofcatalasetoretinalpigmentepithelialcellsprotectsneighboringphotoreceptorsfromphoto-oxidativestress"HumGeneTher.15:960-7;Bennett,2004，"GenetherapyforLebercongenitalamaurosis"NovartisFoundSymp.255:195-202;Hauswirth等，"RangeofretinaldiseasespotentiallytreatablebyAAV-vectoredgenetherapy"NovartisFoundSymp.255:179-188，及其中所列參考文獻)。因此在一個方面，本發(fā)明提供包含基因治療載體(其編碼因子H蛋白質(zhì)或CFHR5多肽)，任選地包含病毒載體的制品，其中基因治療載體適用于施用給人受試者，并處于適用于施用給人受試者的賦形劑中(例如使用GLP技術(shù)產(chǎn)生的)。任選地，包含啟動子的基因治療載體在視網(wǎng)膜色素上皮細胞中優(yōu)先的或特異地表達。也可使用非病毒方法引入因子H或CFHR5序列，例如包被在生物可降解聚合物中(例如聚乳酸(plolyacticacid，PLA);聚乙醇酸(polyglycolicacid，PGA)和共聚物(PLGA))中(最近綜述參閱例如Bejjani等，2005，"Nanoparticlesforgenedeliverytoretinalpigmentepithelialcells"MolVis.11:124-32;Mannermaa等，2005,"Long-lastingsecretionoftransgeneproductfromdifferentiatedandfilter-grownretinalpigmentepithelialcellsafternonviralgenetransfer"CurrEyeRes.200530:345-53，及其中引用的參考文獻)。備選地，編碼因子H多肽或CFHR5多肽的核酸可包裝進脂質(zhì)體內(nèi)，或核酸可不使用載體不包裝地遞送給個體。C)DNA修復(fù)在另一方法中，處于發(fā)生AMD危險下(和/或患有早期疾病)的受試者可通過DNA修復(fù)將危險形式的因子H或CFHR5用中性或保護性形式的因子H或CFHR5替換。在一個實施方案中，可將形成三聯(lián)體的寡核苷中的多態(tài)位點)通過病毒或非病毒方法施用給個體。形成三聯(lián)體的寡核苷酸以序列特異性方式與雙鏈DNA的大溝結(jié)合并引起DNA修復(fù)，導(dǎo)致基因組的靼向修飾(最近綜述參閱Kuan等，2004，"Targetedgenemodificationusingtriplex-formingoligonucleotides"MethodsMolBiol.262:173-94)。結(jié)合跨越與危險單元型相關(guān)的多態(tài)性序列的形成三聯(lián)體的寡核苷酸引起DNA修復(fù)，導(dǎo)致來自危險等位基因的序列成為中性或保護性等位基因，并可改善疾病的發(fā)生或*。D)引入表達中性或保護性形式的因子H蛋白質(zhì)或CFHR5多肽的細胞、組織或器官在另一方法中，對患者施用表達中性或保護性形式的因子H或因子H相關(guān)蛋白質(zhì)(例如CFHR5)的細胞。在一個實施方案中，受者對危險單元型是雜合的，或更經(jīng)常地是純合的。例如，已經(jīng)使用肝細胞移植作為對全器官移植的備選方案以支持許多形式的肝功能不全(參閱例如Ohashi等，Hepatocytetransplantation:clinicalandexperimentalapplication,JMolMed.200179:617-30)。根據(jù)該方法，向需要治療的患者施用(例如輸注)肝細胞或其他表達CFH或CFHR5的細胞。這些細胞移動至肝或其他器官，并產(chǎn)生治療性蛋白質(zhì)。也參閱例如Alexandrova等，2005，"Large-scaleisolationofhumanhepatocytesfortherapeuticapplication"CellTransplant.14(10):845-53;Cheong等，2004，"AttemptedtreatmentoffactorHdeficiencybylivertransplantation"PediatrNephrol.19:454-8;Ohashi等,2001，"Hepatocytetransplantation:clinicalandexperimentalapplication"JMolMed.79:617-30;Serralta等,2005，"Influenceofpreservationsolutionontheisolationandcultureofhumanhepatocytesfromlivergrafts"CellTransplant.14(10):837國43;Yokoyama等，2006，"Invivoengineeringofmetabolicallyactivehepatictissuesinaneovascularizedsubcutaneouscavity"Am.J.Transplant.6(1):50畫9;Dhawan等，2005，"Hepatocytetransplantationformetabolicdisorders,experienceatKing'sCollegehospitalandreviewofliterature."ActaGrastroenterol.Belg.68(4):457-60;Br觀等，2005，"Injectableliver:anovelapproachusingfibringelasamatrixforcultureandintrahepatictransplantationofhepatocytes"TissueEng.11(11-12):1718-26。其他可寸吏用的細胞類型包括(用于說明而非限制)腎和胰細胞。在一個實施方案中，將所施用的細胞改造為表達重組形式的蛋白質(zhì)。在另一相關(guān)方法中，使用治療性的器官移植。大部分身體系統(tǒng)性因子H由肝產(chǎn)生，使得肝組織移植成為優(yōu)選的方法。參閱Gerber等，2003，"Successful()therapyofhemolytic-uremicsyndromewithfactorHabnormality"PediatrNephrol.18:952-5。在另一方法中，通過注射進眼(例如玻璃體內(nèi))或通過^皮嚢細胞將保護性形式的CFH蛋白質(zhì)遞送至眼背部。作為實例的Neurotech，s被嚢細胞技術(shù)(Neurotech'sEncapsulatedCellTechnology(ECT))是允許將治療性因子持續(xù)、長期地遞送至眼背部的獨特技術(shù)。參閱http:〃www.neurotech.fr。ECT移植物由被遺傳修飾以產(chǎn)生特定治療性蛋白質(zhì)的細胞組成，所述細胞包被在半通透性空心纖維膜中。所述細胞持續(xù)產(chǎn)生治療性蛋白質(zhì)，所述治療性蛋白質(zhì)擴散出移植物并進入眼中(Bush等2004)。通過ECT裝置遞送至人眼的CNTF最近顯示是完全成功的，并在I期臨床試驗所招募的10名患者中與最少的并發(fā)癥相關(guān)(Sieving等2005)。也參閱Song等，2003;Tao2002.和Hammang等，美國專利號6,649,184。在本發(fā)明的一個實施方案中，在細胞中表達保護性形式的因子H(包括所謂的中性形式)并將其以被嚢形式施用。在一個實施方案中，使用的細胞是可得自美國典型培養(yǎng)物保藏中心P.O.Box1549，Manassas，VA20108的NTC-201人RPE系(ATCC#CRL誦2302)。E)降低因子H或CFHR5危險變體水平的治療因子H或CFHR5的正?；虮Ｗo性功能的喪失可與AMD相關(guān)。顯示與AMD最強烈相關(guān)并導(dǎo)致變體因子H多肽或CFHR5多肽的因子H和CFHR5基因中的非同義多態(tài)性(例如表1A、1B、1C、11、14和15中所示的那些)可能在AMD中具有原因性作用。例如，變體因子H或CFHR5可起到妨礙正常因子H或CFHR5功能的所謂的"顯性失活"突變體的作用。降低眼中或全身的危險形式因子H或CFHR5水平的任何方法可用于治療，包括例如抑制因子H或CFHR5基因的轉(zhuǎn)錄、抑制因子H或CFHR5RNA的翻譯、提高中性或保護性形式因子H,或截短的因子H或其生物活性片段的量或活性、提高中性或保護性形式CFHR5多肽或其生物活性片段的量或活性，或降低因子H蛋白質(zhì)或CHFR5多肽的量或活性(例如通過血漿去除術(shù)、抗體指導(dǎo)的血漿去除術(shù)，或與因子H或CFHR5結(jié)合部分(例如肝素或變體特異性抗體)復(fù)合)。在一些實施方案中，相對于其他組織，優(yōu)選在眼中(例如RPE)降低了因子H或CFHR5的水平。為了說明而非限制，下文概述了若干方法。在一種方法中，施用肝素治療鑒定為處于AMD危險下的受試者。肝素和肝素衍生物(包括類肝素)可具有用于治療多種補體相關(guān)疾病的有希望的治療性特征，所述疾病包括MPGNII(Floege等，1993;Girardi，2005;DiamondandKarnovsky，1986;Striker,1999;Rops等，2004)?？紤]到本文公開的AMD和MPGNII之間的相關(guān)性，肝素和肝素衍生物(包括肝素類似物)可能對治療AMD有效。在臨床試驗中，患有慢性增生性腎小球腎炎的患者在一年中接受每天皮下注射肝素，Cade和同事報告了改善的肌酸酐清除率和血管小球細胞過多的退化(Cade等，1971)。肝素和低分子量肝素(Enoxaparin)均顯示通過阻斷補體級聯(lián)系統(tǒng)的旁路途徑和經(jīng)典途徑預(yù)防小鼠中抗磷脂抗體綜合征的進展(Girardi等，2004)。肝素的抗補體活性包括通過旁路途徑阻斷擴增轉(zhuǎn)變酶C3bBb的生成；流體相肝素通過抑制C3b與因子B和因子D的相互作用阻止C3bBb的生成(Weiler等，1976)。F)施用抑制性核酸反義核酸——反義核酸如純化的、與編碼變體因子H多肽的RNA互補的反義RNA可用于抑制危險單元型相關(guān)因子H基因的表達。最近的綜述參閱例如Gomes等,2005，"Intraoculardeliveryofoligonucleotides"CurrPharmBiotechnol.6:7-15;和Henry等，2004，"Settingsightsonthetreatmentofocularangiogenesisusingantisenseoligonucleotides"TrendsPharmacolSci25:523-7及其中引用的參考文獻。RNA干擾——雙鏈RNA(dsRNA)抑制方法也可用于抑制HF1的表達。用于這類方法的RNA被設(shè)計為dsRNA的至少一個區(qū)與HF1基因的一個區(qū)基本相同；在一些實例中，所述區(qū)與HF1基因100%相同。就用在哺乳動物中而言，dsRNA長度一般約19-30個核苷酸(即使用短干擾RNA(siRNA或RNAi))，最常見長度為約21個核苷酸。適用于進行dsRNA和siRNA的方法和組合物討論于例如PCT公開WO98/53083;WO99/32619;WO99/53050;WO00/44914;WO01/36646;WO01/75164;WO02/44321和美國專利號6,107,094中。siRNA可在體外合成并施用給患者。備選地，RNAi策略可成功地與基于載體的方法組合，以實現(xiàn)在轉(zhuǎn)染的細胞中從DNA模板合成小RNA(參閱例如Sui等，2002，"ADNAvector-basedRNAitechnologytosuppressgeneexpressioninmammaliancells"ProcNatlAcadSci美國99:5515畫20;和KasaharaandAoki，2005，"GenesilencingusingadenoviralRNAivectorinvascularsmoothmusclecellsandcardiomyocytes"MethodsMolMed.112:155-72及其中所引用的參考文獻)。核酶——核酶是能夠催化RNA特異剪接的酶性RNA分子。核酶作用的機制涉及核酶分子與互補靼RNA的序列特異性雜交，然后是核內(nèi)切割。能夠特異并有效地催化人因子H編碼序列的內(nèi)核分離的經(jīng)改造的錘頭狀基序核酶分子屬于本發(fā)明的范圍內(nèi)。任何可能的RNA靶標(biāo)中特異的核酶切割位點通過在靶分子中掃描核酶切割位點被最初鑒定，所述切割位點包括例如GUA、GUU和GUC的序列。一旦^皮鑒定后，對應(yīng)于含有切割位點的靶基因區(qū)的15和20個核糖核苷酸之間的短RNA序列可評價其二級結(jié)構(gòu)特征，該特征可能使得寡核苷酸不能被切割。候選靶標(biāo)的適合性也可通過使用核糖核酸酶保護測定法檢測與互補的寡核苷酸雜交的程度來評價。核酶的性質(zhì)為本領(lǐng)域公知；一般描述參閱Cech的專利(US6180399;US5869254;US6025167;US5854038;US5591610;US5667969;US5354855;US5093246;US5180818;US5116742;US5037746和US4987071)。核酶和其他抑制性核酸可纟皮i殳計為優(yōu)先抑制具危險單元型相關(guān)序列的基因的表達。因此，識別跨越多態(tài)性的序列并在鄰近GUA處切割的核酶識別危險形式，但是不識別中性或保護性形式，允許選擇性的切割(Dawson等，2000，"HammerheadribozymesselectivelysuppressmutanttypeIcollagenmRNAinosteogenesisimperfectafibroblasts"NucleicAcidsRes.28:4013-20;Blalock等，2004"HammerheadribozymetargetingconnectivetissuegrowthfactormRNAblockstransforminggrowthfactor-betamediatedcellproliferation"ExpEyeRes.78:1127-36)。形成三聯(lián)體的寡核苷酸一形成三聯(lián)體的寡核苷酸以序列特異的方式與雙鏈DNA的大溝結(jié)合并引起DNA修復(fù)，導(dǎo)致基因組的乾向修飾(最近的綜述參閱Kuan等，2004，"Targetedgenemodificationusingtriplex-formingoligonucleotides"MethodsMolBiol.262:173-94)。寡核苦酸可被設(shè)計為與在危險單元型相關(guān)因子H基因中的多態(tài)性位點特異地結(jié)合。與跨越危險單元型相關(guān)多態(tài)性的序列結(jié)合的形成三聯(lián)體的寡核苷酸引起DNA修復(fù)，導(dǎo)致將序列從危險等位基因修飾到中性或保護性等位基因。如上所述的類似反義核酸、RNA干擾、核酶和形成三聯(lián)體的寡核苷酸方法可用于降低眼中危險形式的CFHR5水平，或全身性地用于治療AMD。應(yīng)當(dāng)理解抑制性核酸可作為藥物組合物或使用基因治療方法而施用。G)抗體治療在一個方面，將與變體因子H多肽特異性相互作用并中和其活性的抗HFl抗體施用給患有AMD或處于AMD危險下的個體。在一個實施方案中，抗體識別野生型和變體因子H蛋白質(zhì)。在一個實施方案中，抗體識別變體因子H蛋白質(zhì)，但不識別野生型因子H蛋白質(zhì)。在另一個方面，將與變體CFHR5多肽特異性相互作用并中和其活性的抗CFHR5抗體施用給患有AMD或處于AMD危險下的個體。在一個實施方案中，抗體識別野生型和突變體CFHR5蛋白質(zhì)。在一個實施方案中，抗體識別變體CFHR5蛋白質(zhì)，但不識別野生型?？贵w可全身或局部施用(參閱例如Gaudreault等,2005，"PreclinicalpharmacokineticsofRanibizumab(rhuFabV2)afterasingleintravitrealadministration"InvestOphthalmolVisSci.46:726-33)。用于制備抗HFl和抗CFHR5抗體的方法為本領(lǐng)域已知，并包括下文所述方法。在相關(guān)的方面，將與變體因子H多肽和/或CFHR5多肽優(yōu)先相互作用并降低其活性的藥物施用給患有AMD或處于AMD危險下的個體。H)旁路途徑的調(diào)節(jié)物在一個方面，本發(fā)明提供了治療AMD的方法，所述方法通過將指導(dǎo)調(diào)節(jié)補體級聯(lián)系統(tǒng)旁路途徑(AP)的藥物(例如天然蛋白質(zhì)、重組蛋白質(zhì)、抗體或小分子)局部施用至眼或以全身性水平施用。在一個實施方案中，治療包括施用直接調(diào)節(jié)AP的藥物。在一個實施方案中，治療包括施用調(diào)節(jié)AP觸發(fā)的藥物(例如微生物)。在一個實施方案中，治療包括施用調(diào)節(jié)AP下游途徑的藥物。調(diào)節(jié)AP的示范性藥物為本領(lǐng)域已知，并包括但不僅限于DFP、PR226、BCX隱1470、FUT-175、sMCP、PS-oligo、Compstatin、Fucan和GCRF(參閱伊j3口Makrides，1998,"Therapeuticinhibitionofthecomplementsystem"PharmacolRev.50:59-87;Holland等，2004，"Syntheticsmallmoleculecomplementinhibitors"CurrOpinInvestigDrugs5:1163-73;Holers等，2004,"Thealternativepathwayofcomplementindisease:opportunitiesfortherapeutictargeting"MolImmunol.41:147-52)。AP調(diào)節(jié)物可全身施用，或通過眼球內(nèi)注射或其他已知方法將化合物遞送至眼。1)藥物篩選/危險變體因子H或變體CFHR5的拮抗劑本發(fā)明提供了篩選有效治療AMD的藥物的方法，所述方法通過將變體蛋白質(zhì)、表達因子H或CFHR5變體的宿主細胞或轉(zhuǎn)基因動物接觸并監(jiān)測變體的結(jié)合、表達、加工或活性。在一個實施方案中，因子H變體在氨基酸第62位具有纈氨酸和/或氨基酸第402位具有組氨酸和/或氨基酸第1210位具有半胱氨酸。在一個實施方案中，CFHR5變體在氨基酸第46位具有絲氨酸。變體因子H多肽(例如與危險單元型相關(guān)的變體)的拮抗劑可用于治療AMD。拮抗劑可抑制變體因子H的表達、抑制活性或降低RNA或蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性。拮抗劑可通過產(chǎn)生并篩選巨大的組合文庫獲得，所述文庫可以以多種類型化合物的分段的和高通量的模式制備。這類化合物包括肽、多肽、P轉(zhuǎn)角擬態(tài)、多糖、磷脂、激素、前列腺素、類固醇、芳香族化合物、雜環(huán)化合物、苯二氮雜、寡聚N-取代的甘氨酸和寡聚氨基甲酸酯(oligocarbamate)等?；衔锏木薮蟮慕M合文庫可通過本領(lǐng)域已知方法構(gòu)建。參閱例如WO95/12608;WO93/06121;WO94/08051;WO95/35503;WO95/30642和WO91/18980。最初從化合物文庫中篩選對變體因子H多肽的特異性結(jié)合。具有體外結(jié)合活性的化合物也可測定它們干涉變體因子H多肽生物活性的能力，例如與C3b或肝素的結(jié)合。拮抗劑活性可在基于細胞的體系中或在轉(zhuǎn)基因動物模型中測定，其中被表達外源變體因子H多肽。變體CFHR5多肽的拮抗劑(例如與危險單元型相關(guān)的變體)可用于治療AMD,并可如上文針對變體因子H拮抗劑的所述獲得。J)患者特異性治療可以基于因子H基因或CFHR5基因中某些多態(tài)性的存在對具有不同AMD遺傳亞型的患者組設(shè)計專門的治療，所述多態(tài)性在AMD中發(fā)揮原因性作用，并且已經(jīng)解釋了這些多態(tài)性對變體因子H多肽或CFHR5多肽的表達水平和/或生物活性的影響。例如，如果因子H或CFHR5中的多態(tài)性通過提高變體因子H多肽或CFHR5多肽的表達水平和/或生物活性而在動物模型中引起AMD,則與該因子H或CFHR5多態(tài)性相關(guān)的AMD可通過對患者施用該變體因子H多肽或變體CFHR5多肽的拮抗劑進4亍治療。K)使用AMD生物標(biāo)志評估療效如上文指出的，還可以通過測試蛋白質(zhì)對AMD生物標(biāo)志表達的影響來確定CFH或CFHR蛋白質(zhì)特定片段的療效。示例性AMD生物標(biāo)志包括上文所述的。這些AMD相關(guān)蛋白質(zhì)(生物標(biāo)志)以不同于健康個體的水平(提高或降低)存在于AMD個體中。本發(fā)明提供評估治療AMD功效并監(jiān)控AMD進展的方法，所述方法通過確定接受該疾病治療的患AMD個體中生物標(biāo)志的水平，并將該生物標(biāo)志水平與生物標(biāo)志先前確定的水平或參照水平進行比較。如共同未決的臨時申請No.60/715,503所述，可以通過任何合適的方法確定生物標(biāo)志的水平，例如本領(lǐng)域已知的常規(guī)技術(shù)，例如但不僅限于基于分離的方法(如凝膠電泳)、免疫測定法(如基于抗體的檢測)和基于功能的方法(如酶或結(jié)合活性)。在一個實施方案中，評估個體中治療AMD功效的方法包括獲得來自該個體的樣品以及通過以雙向差異凝膠電泳(DIGE)分離蛋白質(zhì)來確定生物標(biāo)志水平。VIII.因子H和CFHR5核酸A)引物和纟笨針本發(fā)明提供毗鄰或跨越多態(tài)性位點的核酸。所述核酸可作為探針或引物(包括侵入物、分子信標(biāo)和其他焚光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)型探針)用于檢測因子H多態(tài)性。在一個實施方案中，探針或引物識別內(nèi)含子2中的插入，但不識別野生型序列。示例性核酸包括跨越表1A、1B、1C、11、14和15列出的至少一個多態(tài)性位點的序列，其中多態(tài)性位置為該位置的備選堿基所占據(jù)。該位置中在對照群中更常見的堿基稱為正?；蛞吧托蛄校撐恢弥性趯φ杖后w中較不常見的備選堿基稱為變體序列。該核酸還包含跨越因子H和CFHR5基因中其他已知多態(tài)性(例如上文表A和B中鑒定的多態(tài)性)的序列。B)因子H和CFHR5多肽的表達栽體以及重組產(chǎn)生本發(fā)明提供包含編碼因子H多肽的核酸的栽體。因子H多肽可以是野生型或變體(如保護性變體)，并且可以是全長形式(如HF1)或截短形式。核酸可以是DNA或RNA,并且可以是單鏈或雙鏈的。一些核酸編碼全長的、變體形式的因子H多肽。變體因子H多肽可以在密碼子編碼的氨基酸上不同于正?；蛞吧鸵蜃親，所述密碼子包括因子H基因中任一已知非同義多態(tài)性位置。在一個實施方案中，變體因子H多肽可以在密碼子編碼的氛基酸上不同于正?；蛞吧鸵蜃親，所述密碼子包括表1A、表1B和/或表1C中所示非同義多態(tài)性位置中的一個，該位置由表1A、表1B和/或表1C中所示氨基酸占據(jù)。應(yīng)該理解，可以產(chǎn)生這樣的變體因子H基因其編碼變體因子H多肽，該多肽在因子H基因中多個多態(tài)性位點上具有備選氛基酸。本發(fā)明提供包含編碼CFHR5多肽的核酸的載體。CFHR5多肽可以是野生型或變體(如保護性變體)。核酸可以是DNA或RNA，并且可以是單鏈或雙鏈的。一些核酸編碼全長的、變體形式CFHR5多肽。變體CFHR5多肽可以在密碼子編碼的氨基酸上不同于正?；蛞吧虲FHR5，所述密碼子包括CFHR5基因中任一已知非同義多態(tài)性位置。在一個實施方案中，變體CFHR5多肽可以在密碼子編碼的氨基酸上不同于正?；蛞吧虲FHR5多肽，所述密碼子包括表14和15中所示非同義多態(tài)性位置中的一個，該位置由表14和15中所示氨基酸占據(jù)。應(yīng)該理解，可以產(chǎn)生這樣的變體CFHR5基因其編碼變體CFHR5多肽，所述多肽在CFHR5基因中多個多態(tài)性位點上具有備選氨基酸。用于產(chǎn)生重組蛋白質(zhì)和多肽的表達載體是眾所周知的(參閱Ausubel等，2004,CurrentProtocolsInMolecularBiology,GreenePublishingandWiley-Interscience，NewYork)。此類表達載體包括與調(diào)節(jié)元件(如啟動子)連接的因子H多肽的編碼核酸序列，所述調(diào)節(jié)元件驅(qū)動DNA轉(zhuǎn)錄并且適用于在原核(如大腸桿菌(E.coli))和真核(如酵母、昆蟲或哺乳動物細胞)宿主中表達?？梢栽诒磉_載體中表達變體因子H或CFHR5多肽，在所述表達載體中變體因子H或CFHR5基因與啟動子有效連接。啟動子通常為用于哺乳動物細胞表達的真核啟動子。轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)序列通常包括異源啟動子和任選的為宿主細胞所識別的增強子?？梢允褂檬惺鄣谋磉_栽體。表達載體可包括宿主識別的復(fù)制系統(tǒng)、可擴增基因、可選擇標(biāo)記、用于插入宿主基因組的宿主序列等。合適的宿主細胞包括細菌如大腸桿菌、酵母、絲狀真菌、昆蟲細胞以及通常是永生化的哺乳動物細胞，包括小鼠、倉鼠、人和猴細胞系及其衍生物。宿主細胞能夠加工變體因子H或CFHR5基因產(chǎn)物，以產(chǎn)生正確加工的成熟多肽。此類加工可包括糖基化、泛素化、二硫鍵形成等?；诰唧w的構(gòu)建和靶宿主，將含有變體因子H或CFHR5基因的表達構(gòu)建體引入宿主細胞。合適的方法以及原核和真核宿主細胞是本領(lǐng)域熟知的。已經(jīng)在S/9昆蟲細胞中表達了重組全長人因子H以用于研究目的(參閱Sharma和Pangburn，1994,BiologicallyactiverecombinanthumancomplementfactorH:synthesisandsecretionbythebaculovirussystem,Gene143:301-2)。已經(jīng)在多種細胞類型中表達了人因子H的重組片段用于研究目的(參閱如Cheng等，2005,"ComplementfactorHasamarkerfordetectionofbladdercancer"ClinChem.5:856-63;Vaziri-Sani等，2005，"FactorHbindstowashedhumanplatelets"JThrombHaemost.3:154-62;Gordon等，1995,"IdentificationofcomplementregulatorydomainsinhumanfactorH"JImmunol.155:348-56)。已經(jīng)在S"昆蟲細胞中表達了重組全長人CF開及5以用于研究目的(參閱McRae等，2001，HumanFactorH國relatedProtein5(FHR國5)，J.Biol.Chem.276:6747-6754)。可以通過蛋白質(zhì)生物化學(xué)和純化的常規(guī)手段分離變體因子H或CFHR5多肽，以獲得基本純的產(chǎn)物。一般方法參閱Jacoby，MethodsinEnzymology104巻，AcademicPress,NewYork(1984);Scopes,ProteinPurification,PrinciplesandPractice,2版Springer-Verlag，NewYork(1987);和Deutscher(編著)GuidetoProteinPurification,MethodsinEnzymology,182巻(1990)。分泌蛋白質(zhì)如因子H或CFHR5可以從培養(yǎng)宿主細胞的培養(yǎng)基中分離。如果不分泌變體因子H或CFHR5多肽，可以從細胞裂解液中分離。在一個實施方案中，載體為用于產(chǎn)生變體因子H蛋白質(zhì)的表達載體，所述蛋白質(zhì)具有在圖1A、IB和/或1C所示一個或多個多態(tài)性位點上為非野生型序列的序列。在一個實施方案中，栽體為用于產(chǎn)生變體因子H蛋白質(zhì)的表達載體，所述蛋白質(zhì)具有因子H保護性變體的序列。在一個實施方案中，載體為用于產(chǎn)生變體CFHR5蛋白質(zhì)的表達載體，所述蛋白質(zhì)具有在圖14和15所示一個或多個多態(tài)性位點上為非野生型序列的序列。在一個實施方案中載體為用于產(chǎn)生變體CFHR5蛋白質(zhì)的表達載體，所述蛋白質(zhì)具有因子H保護性變體的序列。C)基因治療載體表達用于基因治療的因子H多肽或CFHR5多肽的方法是已知的，并描述于上文IV(A)—節(jié)。XI.抗體本發(fā)明提供因子H特異性抗體，所述抗體可識別正常或野生型因子H多肽或變體因子H多肽，其中在因子H編碼區(qū)中存在一個或多個非同義單核苷酸多態(tài)性(SNP)。在一個實施方案中，本發(fā)明提供特異性識別變體因子H多肽或其片段而不識別多態(tài)性位點處無變異的因子H多肽的抗體。本發(fā)明還提供CFHR5特異性抗體，所述抗體可識別正?；蛞吧虲FHR5多肽或變體CFHR5多肽，其中在CFHR5編碼區(qū)中存在一個或多個非同義單核苷酸多態(tài)性(SNP)。在一個實施方案中，本發(fā)明提供特異性識別變體CFHR5多肽或其片段而不識別多態(tài)性位點處無變異的CFHR5多肽的抗體?？贵w可以是多克隆抗體或單克隆抗體，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法制備。可以通過用變體因子H或變體CFHR5多肽或其片段或其合成肽片段注射適當(dāng)?shù)膭游飦碇苽淇贵w。可以按照標(biāo)準(zhǔn)方法篩選單克隆抗體(Koehler和Milstein1975，Nature256:495;Dower等，WO91/17271;McCafferty等，WO92/01047;Vaughan等，1996，NatureBiotechnology,14:309;以及下文提供的參考文獻)。在一個實施方案中，測定單克隆抗體分別對變體因子H或CFHR5多肽的特異性免疫活性，而對相應(yīng)野生型因子H或CFHR5多肽無特異性免疫活性。鑒定特異性結(jié)合變體多肽而非相應(yīng)野生型多肽的抗體的方法為本領(lǐng)域熟知。就方法(包括抗體篩選和消減法)而言，參閱Harlow&Lane,Antibodies,ALaboratoryManual,ColdSpringHarborPress,NewYork(1988);CurrentProtocolsinImmunology(J.E.Coligan等編著，1999，包括整個2005年的增刊)；Goding，MonoclonalAntibodies,PrinciplesandPractice(2版)AcademicPress,NewYork(1986);Burioni等，1998，"Anewsubtractiontechniqueformolecularcloningofrareantiviralantibodyspecificitiesfromphagedisplaylibraries"ResVirol.149(5):327國30;Ames等，1994，Isolationofneutralizinganti-C5amonoclonalantibodiesfromafilamentousphagemonovalentFabdisplaylibrary.JImmunol.152(9):4572-81;Shinohara等，2002，Isolationofmonoclonalantibodiesrecognizingrareanddominantepitopesinplantvascularcellwallsbyphagedisplaysubtraction.JImmunolMethods264(1-2):187-94。免疫或篩選可以針對全長變體蛋白質(zhì)，或者備選地(經(jīng)常更方便)針對包含已知在變體和野生型形式之間不同的表位的肽或多肽片段。具體的變體包括CFH和HFL1的Y402H或I62V變體、CFH的R1210C變體、CFHR5的P46S變體和CFH的截短形式。在一個實施方案中，測量HF1。如上文所述，在一個實施方案中，測量HFL1與CHF的比例。對變體因子H或CFHR5多肽具有特異性的單克隆抗體(即不與野生型蛋白質(zhì)結(jié)合或以低親和力結(jié)合)可在診斷測定中用于檢測因子H或CFHR5的變體形式，或者作為藥物組合物中的活性成分。本發(fā)明提供適于對患者施用的重組多肽，包括依照GoodManufacturingPracctice(GMP)的要求產(chǎn)生和測試的抗體。例如，提交FDA批準(zhǔn)的重組抗體必須測試其效力和同一性、是無菌的、不含外來物質(zhì)，并且產(chǎn)品中的所有成分(如防腐劑、稀釋劑、佐劑等)必須符合純度、質(zhì)量要求，并對患者無害。本發(fā)明提供包含抗體和可藥用賦形劑或載體的組合物，所述抗體特異性識別因子H或CFHR5多肽(如正?；蛞吧鸵蜃親多肽或變體因子H多肽，或者正?；蛞吧虲FHR5多肽或變體CFHR5多肽)。在相關(guān)方面中，本發(fā)明提供含有可治療用的因子H特異性或CFHR5特異性抗體的無菌容器，如小瓶。在一個實施方案中為凍干制品。在相關(guān)方面中，本發(fā)明提供用于對患者施用的人或人源化抗因子H或抗CFHR5抗體的藥物制品。人源化抗體具有基本來自人抗體(稱為受體抗體)的可變區(qū)構(gòu)架殘基和基本來自小鼠抗體(稱為供體免疫球蛋白質(zhì))的互補決定區(qū)。參閱Peterson,2005，Advancesinmonoclonalantibodytechnology:geneticengineeringofmice,cells,andimmunoglobulins,ILARJ.46:314-9，Kashmiri等，2005，SDRgrafting-anewapproachtoantibodyhumanization，Methods356:25-34，Queen等，Proc.Natl:Acad.Sci美國86:10029-10033(1989)，WO卯/07861，美國專利No.5,693,762，美國專利No.5,693,761，美國專利No.5，585，089，美國專利No.5，530，101，和Winter,美國專利No.5,225,539。恒定區(qū)(如果有)也基本或完全來自人免疫球蛋白質(zhì)。人可變區(qū)通常選自人抗體，所述人抗體的構(gòu)架序列顯示與CDR來源小鼠可變區(qū)結(jié)構(gòu)域的高度序列同一性。重鏈和輕鏈可變區(qū)構(gòu)架殘基可來自相同或不同的人抗體序列。人抗體序列可以是天然存在的人抗體序列，或者可以是若干人抗體的共有序列。參閱Carter等，WO92/22653?；谀承┌被釋DR構(gòu)象和/或與抗原結(jié)合的可能影響，選擇對來自人可變區(qū)構(gòu)架殘基的某些氨基酸進行取代。這些可能影響的研究是通過建模、檢查特定位置氨基酸的特征或經(jīng)驗性地觀察特定氨基酸的取代或誘變的效應(yīng)。例如，當(dāng)小鼠可變區(qū)構(gòu)架殘基與選定的人可變區(qū)構(gòu)架殘基的氨基酸不同時，在可以合理預(yù)期該氨基酸具有以下性質(zhì)時，一般應(yīng)該用來自小鼠抗體的等價構(gòu)架氨基酸取代人構(gòu)架氨基酸(l)與抗原直接非共價結(jié)合，(2)毗鄰CDR區(qū)，(3)還與CDR區(qū)相互作用(即在CDR區(qū)約6A內(nèi))，或(4)參與VL-VH界面。其他取代候選者為在人免疫球蛋白質(zhì)該位置上不常見的受體人構(gòu)架氨基酸。這些氨基酸可以用來自小鼠供體抗體等價位置或來自更典型人免疫球蛋白質(zhì)等價位置的氨基酸取代。其他取代候選者為在人免疫球蛋白質(zhì)該位置上不常見的受體人構(gòu)架氨基酸。人源化免疫球蛋白質(zhì)可變區(qū)構(gòu)架一般表現(xiàn)出與人可變區(qū)構(gòu)架序列或此類序列的共有序列至少85%的序列同一性。IX.鑒定危險、保護性和中性變異和單元型本發(fā)明提供篩選與表1A、1B、1C、11、14和15所述因子H基因和/或CFHR5基因多態(tài)性位點連鎖的多態(tài)性位點的篩選方法。這些方法包括鑒定基因中與因子H基因或CFHR5基因多態(tài)性位點連鎖的多態(tài)性位點，其中因子H基因或CFHR5基因多態(tài)性位點的多態(tài)性形式與AMD相關(guān)(如危險提高或降低)，以及確定個體群中的單元型，以指示連鎖的多態(tài)性位點是否具有與因子H基因或CFHR5基因多態(tài)性形式平衡或不平衡的多態(tài)性形式，所述因子H基因或CFHR5基因多態(tài)性形式與AMD表型相關(guān)。因子H基因或CFHR5基因多態(tài)性(如表1A、1B、1C、11、14和15所示)可用于在目的性狀相關(guān)遺傳基因座與多態(tài)性標(biāo)志物之間建立物理連鎖，所述多態(tài)性標(biāo)志物與該性狀無關(guān)，但在物理上與負責(zé)該性狀的遺傳基因座接近，并與其共分離。與目的性狀相關(guān)的遺傳基因座的作圖有助于按照本領(lǐng)域熟知的方法克隆負責(zé)該性狀的基因。因子H基因或CFHR5基因多態(tài)性(如表1A、1B、1C、11、14和15所示)可用于家族連鎖研究，以確定哪種多態(tài)性與表型性狀共分離、確定需要治療的個體和確定療效。通過計算LOD(優(yōu)勢對數(shù))分數(shù)來分析連鎖，LOD是當(dāng)標(biāo)志物與遺傳基因座位于重組分數(shù)e時，與二者不連鎖(獨立分離)的情況相比，對于二者獲得所觀察的分離數(shù)據(jù)的可能性的logl()。參閱Thompson&Thompson,GeneticsinMedicine(第5版,W.B.SaundersCompany,Philadelphia,1991)和Strachan，"Mappingthehumangenome"inTheHumanGenome(BIOSScientificPublishersLtd,Oxford)，第4章)。LOD分數(shù)為3表示表觀觀察到的連鎖為交叉并發(fā)的幾率為1000比1。+3或更高的LOD分數(shù)認為是兩基因座連鎖的確定證據(jù)，而-2或更低的LOD分數(shù)認為是非連鎖的確定證據(jù)。X.轉(zhuǎn)基因非人動物本發(fā)明提供能表達人變體因子H或CFHR5多肽的轉(zhuǎn)基因非人動物。轉(zhuǎn)基因非人動物可以具有失活的內(nèi)源因子H或CFHR5基因的一個或兩個等位基因。外源變體因子H或CFHR5基因的表達通常通過將基因與啟動子和任選的增強子有效連接、接著按照標(biāo)準(zhǔn)操作將該構(gòu)建體顯微注射進合子中來實現(xiàn)。參閱Hogan等，"ManipulatingtheMouseEmbryo,ALaboratoryManual,"ColdSpringHarborLaboratory?？梢酝ㄟ^本領(lǐng)域已知的方法使內(nèi)源因子H或CFHR5基因失活(Capecchi，1989)。因子H缺陷型小鼠可用于引入外源人變體因子H基因。表i^A或非人變體因子H或CFHR5多肽的轉(zhuǎn)基因動物提供了有用的藥物篩選系統(tǒng)，并作為AMD和其他補體相關(guān)疾病的才莫型。轉(zhuǎn)基因動物還可用于產(chǎn)生本發(fā)明的重組CFH和CFHR5蛋白質(zhì)(參閱如美國專利No.6,066,725;6,013,857;5,994,616和5,959,171;Lillico等，2005;Houdebine，2000)。XI.試劑盒本發(fā)明提供檢測因子H或CFHR5多態(tài)性和單元型的試劑、裝置和試劑盒。盡管特別適用于篩選發(fā)生AMD的危險和/或鑒定預(yù)防或改善受試者AMD的適當(dāng)治療，但應(yīng)該理解，在某些實施方案中，這些試劑、裝置和體相關(guān)病癥的危險)用于分析因子H和CFHR5多態(tài)性和單元型。大量測定系統(tǒng)是本領(lǐng)域已知的，確定AMD相關(guān)變異的存在在本領(lǐng)域技術(shù)范圍內(nèi)可以實現(xiàn)的。在用于診斷或篩選之前，試劑盒試劑如多種引物、多種探針、引物組合或探針組合可以包含在分開的容器中。在實施方案中，試劑盒包括含有本文所述第一種CFH或CFHR5等位基因的探針、引物或引物對的第一個容器以及含有本文所述第二種CFH或CFHR5等位基因的探針、引物或引物對的第二個容器。在一個實施方案中，本發(fā)明提供包含至少一種因子H或CFHR5等位基因特異性寡核苷酸的試劑盒，所述寡核苷酸與因子H或CFHR5基因中的特定多態(tài)性雜交。該試劑盒可以含有與不同多態(tài)性形式雜交的一對或多對因子H或CFHR5等位基因特異性寡核苷酸對。因子H或CFHR5等位基因特異性寡核苷酸可包括來自因子H或CFHR5基因編碼區(qū)(外顯子)或非編碼區(qū)(啟動子、5，未翻譯、內(nèi)含子或3，未翻譯)的序列?？梢蕴峁┕潭ㄔ诨|(zhì)上的因子H或CFHR5等位基因特異性寡核苷酸。所述基質(zhì)可包含因子H或CFHR5等位基因特異性寡核苷酸探針，所述探針用于檢測表1A、1B、1C、11、14和15所示多態(tài)性和/或因子H或CFHR5基因的其他多態(tài)性(例如包括上文列出的可見于SNP數(shù)據(jù)庫的多態(tài)性)中至少2、3、4、5或多于5(如至少6、7或8)種或全部。在一個實施方案中，該試劑盒用于診斷AMD。在相關(guān)實施方案中，該試劑盒用于篩選與因子H或CFHR5基因變異相關(guān)的其他疾病。該試劑盒可包括至少一種因子H或CFHR5特異性引物，所述引物雜交跨越或毗鄰因子H或CFHR5基因中特定多態(tài)性的區(qū)域。因子H或CFHR5特異性引物可包括來自因子H或CFHR5基因編碼區(qū)(外顯子)或非編碼區(qū)(啟動子、5，未翻譯、內(nèi)含子或3，未翻譯)的序列。該試劑盒經(jīng)常含有一對或多對因子H或CFHR5特異性引物對，所述引物與因子H多態(tài)性附近核酸的相反鏈雜交。在適當(dāng)?shù)木彌_液和酶存在下，因子H或CFHR5特異性引物對可用于擴增因子H或CFHR5基因中的特定多態(tài)性。通過本文的公開內(nèi)容的指導(dǎo)，對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言顯而易見的是可以檢測多種多態(tài)性和單元型以評估個體發(fā)生因子H相關(guān)病癥的傾向。提供以下實施例和組合用于說明而非限制。在一些情況下，所述測定鑒定因子H或CFHR5基因中至少一個、至少兩個、至少三個、至少四個、至少五個或至少六個多態(tài)性位點處的等位基因。在一些情況下，所述測定鑒定了表1A、1B、1C、11、14和15中列出的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10處，或全部因子H或CFHR5基因多態(tài)性處的等位基因。在一個實施方案中，位點選自rs529825、rs800292、rs3766404、rsl061147、rsl061170、rs203674，并任選地包括外顯子22(R120C)。在一個實施方案中，位點選自rs3753394、rs529825、rs800292、內(nèi)含子2(IVS2或insTT)、rs3766404、rsl061147、rsl061170、rs2274700、rs203674、rs3753396、rsl065489，并任選地包括外顯子22(R120C)。在一個實施方案中，位點選自rs800292(I62V)、IVS2(-18insTT)、rsl061170(Y402H)和rs2274700(A473A)。在一個實施方案中，位點選自rs9427661(-249T>C)、rs9427662(-20T〉C)和rsl2097550(P46S)。在優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的診斷/篩選測定鑒定因子H或CF好及5基因中至少兩個多態(tài)性位點上的等位基因。在優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的診斷/篩選測定鑒定因子H或CFHR5基因中至少三個多態(tài)性位點上的等位基因。在優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的診斷/篩選測定鑒定因子H或CFHR5基因中至少四個多態(tài)性位點上的等位基因。在一些情況下，該試劑盒包含引物或探針("寡核苷酸")，以鑒定表1A、1B、1C、11、14和15中列出的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10處，或全部因子H或CFH及5基因多態(tài)性處的等位基因。在一個實施方案中，試劑盒包括引物或探針，以確定至少一個以下多態(tài)性位點處的等位基因rs529825、rs800292、rs3766404、rsl061147、rsl061170、rs203674，并任選地包括外顯子22(R120C)。在一個實施方案中，試劑盒包括引物或探針，以確定至少一個以下多態(tài)性位點處的等位基因rs529825、rs800292、內(nèi)含子2(IVS2或insTT)、rs3766404、rsl061147、rsl061170、外顯子IOA、rs203674、rs375046，并任選地包括外顯子22(R120C)。在一個實施方案中，試劑盒包括引物或探針，以確定至少一個以下多態(tài)性位點處的等位基因rs3753394、rs529825、rs800292、內(nèi)含子2(IVS2或insTT)、rs3766404、rsl061147、rsl061170、rs2274700、rs203674、rs3753396、rs1065489，并任選地包括外顯子22(R120C)。在一個實施方案中，位點選自rs800292(162V)、IVS2(-18insTT)、rsl061170(Y402H)和rs2274700(A473A)。在一個實施方案中，位點選自rs9427661(-249T>C)、rs9427662(-20T>C)和rs12097550(P46S)。試劑盒可包括引物或探針，以確定兩個、至少三個、至少四個、至少五個或至少六個上述位點處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分rs529825處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分rs800292處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分rs3766404處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分rsl061147處的等位基因。在一個實施方案中，引物或揮:針區(qū)分rsl061170處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分rs203674處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分外顯子22(R1210C)處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分rs529825和rs800292處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分rsl061147、rsl061170和rs203674中至少兩或三處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分以下多態(tài)性位點處的等位基因rs529825和rs800292中至少一個；和rs3766404;和rs1061147、rs1061170和rs203674中至少一個。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分rs529825、rs800292、rs3766404、rs1061170和rs203674處的等位基因。在一個實施方案中，引物或揮:針區(qū)分外顯子22(R1210C)以及以下多態(tài)性位點處的等位基因(a)rs529825、rs800292、rs3766404、rsl061147、rsl061170、rs203674、rs529825、rs800292;(b)rsl061147、rsl061170和rs203674中至少兩個或三個;rs529825和rs800292、rs3766404,以及rsl061147，rsl061170和rs203674中至少兩個或三個；或rs529825、rs800292、rs3766404、rsl061170和rs203674。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分以下多態(tài)性位點處的等位基因rs529825和rs800292中至少一個；以及rs3766404;以及rs1061147、rs1061170和rs203674中至少一個。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分rs529825、rs800292、rs3766404、rsl061170和rs203674處的等位基因。試劑盒可以包括引物或探針，以測定兩個上述位點或至少三個上述位點處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分rs800292處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分rsl061170處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分外顯子22(R1210C)處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分外顯子22(R1210C)和rs800292和/或外顯子22和rsl061170和外顯子22處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分rs800292、rsl061170和外顯子22(R1210C)處的等位基因。試劑盒可以包括引物或探針，以測定確定至少兩個、至少三個、至少四個、至少五個或至少六個上述位點處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分rs529825處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分rs800292處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分內(nèi)含子2(IVS2或insTT)處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分rs3766404處的等位基因。在一個實施方案中，引物或4笨針區(qū)分rsl061147處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分rs1061170處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分rs2274700處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分外顯子10A處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分rs203674處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分rs375046處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分外顯子22(R1210C)處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分rs529825和rs800292處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分rsl061147、rsl061170和rs203674中兩或三處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分以下位點的等位基因rs529825和rs800292處、內(nèi)含子2處、rs3766404處、rsl061147、rsl061170和rs203674中兩或三處、rs2274700處、外顯子10A處和rs375046處。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分rs529825、rs800292、內(nèi)含子2(IVS2或insTT)、rs3766404、rsl061170、rs2274700、外顯子IOA、rs203674和rs375046處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分外顯子22(R1210C)處以及rs529825、rs800292、內(nèi)含子2(IVS2或insTT)、rs3766404、rsl061147、rsl061170、rs2274700、外顯子IOA、rs203674、rs375046、rs529825和rs800292中一或多處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分外顯子22(R1210C)及以下位點處的等位基因(a)rsl061147、rsl061170和rs203674中任何兩個或三個；(b)rs529825和rs800292;內(nèi)含子2(IVS2或insTT);rs3766404;rsl061147;rsl061170和rs203674中兩個或三個;rs2274700;外顯子10A和rs375046;或在rs529825;rs800292;內(nèi)含子2(IVS2或insTT);rs3766404;rsl061170;rs2274700;外顯子10A;rs203674和rs375046。在一個實施方案中，試劑盒含有用于檢測因子H基因中至少一種變異的探針或引物以及用于檢測CHFR-5基因中至少一種變異的探針或引物。在該實施方案中，該試劑盒任選地含有用于檢測因子H基因和CHFR-5基因的一種或兩種中一種以上變異的揮:針或引物，例如2種、3種或3種以上的變異。多種用于確定單元型并可適用于本發(fā)明的測定方式是已知的。參閱如G6rgens等，2004，One-StepAnalysisofTenFunctionalHaplotypeCombinationsoftheBasicRETPromoterwithaLightCyclerAssay"ClinicalChemistry50:1693-1695;Dawson，1989，"CarrieridentificationofcysticfibrosisbyrecombinantDNAtechniques."MayoClinProc64:325-34;Lee等，2005，"GeneSNPsandmutationsinclinicalgenetictesting:haplotype-basedtestingandanalysis."MutatRes.573:195-204。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分以下位點的等位基因(a)rs529825、rs800292、rs3766404、rsl061147、rsl061170和rs203674中任何一個或多個；(b)內(nèi)含子2(IVS2或insTT)、rs2274700、外顯子10A和rs375046中任何一個或多個；(c)rs529825和rs800292中一個或兩個；(d)rsl061147、rsl061170和rs203674中一個或多個；(e)rs529825和rs800292中至少一個，以及rs3766404，和rsl061147、rsl061170和rs203674中至少一個；(i)至少rs529825、rs800292、rs3766404、rsl061170和rs203674;(g)外顯子22(R1210C);(h)外顯子22(R1210C)和(a)-(g)任何一個；或者(i)rs529825、rs800292、rs3766404、rsl061147、rsl061170、rs203674、內(nèi)含子2(IVS2或insTT)、rs2274700、外顯子IOA、rs375046和外顯子22(R1210C)中任何一個或多個以及rs9427661、rs9427662和rsl2097550中任何一個或多個。在一個實施方案中，該試劑盒中包括在裝置背景下足以區(qū)分下文列出的位點處等位基因任何組合的寡核苷酸。試劑盒可包括特異性識別因子H或CFHR5多肽的抗體。因子H或CFHR5特異性抗體可識別正常的功能性因子H或CFHR5多肽，或變體因子H或CFHR5多肽，其中在因子H或CFHR5編碼區(qū)中存在一個或多個非同義單核苷酸多態(tài)性(SNP)。XII.診斷裝置提供了用于診斷、預(yù)防、藥物篩選和其他方法的裝置和試劑。在一個方面中，提供了包含固定的引物或探針的裝置，所述引物或探針對一個或多個因子H和/或CFHR5多態(tài)性位點具有特異性。在實施方案中，因子H和/或CFHR5多態(tài)性位點是本文所述與AMD相關(guān)的多態(tài)性位點。在一個方面中，提供了包含固定的引物或探針的裝置，所述引物或4笨針對一個或多個因子H和/或CFHR5基因產(chǎn)物(多核苷酸或蛋白質(zhì))具有特異性。該引物或探針能與多核苷酸(如基于與特定多態(tài)性位點的雜交)或多肽(如基于與變體多肽的特異性結(jié)合)結(jié)合。在一個實施方案中，使用其中固定了多種(至少2種，一般為3種或更多)不同的引物或探針的陣列形式。術(shù)語"陣列，，以其常用含義使用，指每一組多種引物或探針(通常固定在基質(zhì)上)具有限定的位置(地址)，例如在基質(zhì)上的位置。陣列上引物或探針的數(shù)目可以根據(jù)裝置的性質(zhì)和用途而有所不同。例如，量桿(dipstick)形式的陣列可具有少至2種不同的引物或探針，盡管通常多于2種引物或探針，并且經(jīng)常為更多。將核酸附著在表面上的一種方法是通過制備高密度寡核苷酸陣列(參閱Fodor等，1991，Science251:767-73;Lockhart等，1996，NatureBiotech14:1675和美國專利No.5，578，832;5，556，752和5,510,270)。還考慮在一些實施方案中可使用包含單個固定探針的裝置。在一個實施方案中，使用其中固定了多種(至少2種，通常3種或更多)不同引物或探針的陣列形式。術(shù)語"陣列，，以其常用含義使用，指每一組多種引物或探針(通常固定在基質(zhì)上)具有限定的位置(地址)，例如在基質(zhì)上的位置。陣列上引物或探針的數(shù)目可以根據(jù)裝置的性質(zhì)和用途而有所不同。在一個實施方案中，固定的探針為抗體或其他因子H或CFHR5結(jié)合部分。通過本文的公開內(nèi)容指導(dǎo)，對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言顯而易見的是可以檢測多種多態(tài)性和單元型以評估個體發(fā)生因子H相關(guān)病癥的傾向。提供以下實例和組合用于說明而非限制。在一些情況下，陣列包括引物或探針以鑒定表1A、1B、1C、11、14和15中列出的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10處，或全部因子H或CFHR5基因多態(tài)性處的等位基因。在一個實施方案中，陣列包括探針或引物，以確定至少一個以下多態(tài)性位點處的等位基因rs529825、rs800292、rs3766404、rsl061147、rsl061170、rs203674，并任選地包括外顯子22(R120C)。在一個實施方案中，陣列包括探針或引物，以確定至少一個以下多態(tài)性位點處的等位基因rs529825、rs800292、內(nèi)含子2(IVS2或insTT)、rs3766404、rsl061147、rsl061170、外顯子IOA、rs203674、rs375046，并任選地包括外顯子22(R1210C)。在實施方案中，陣列包括探針或引物，以確定至少一個以下多態(tài)性位點處的等位基因(a)rs3753394;(b)rs529825;(c)rs糊292;(d)內(nèi)含子2(IVS2或insTT);(e)rs3766404;(f)rsl061147;(g)rsl061170;(h)rs2274700;(i)rs203674;(j)rs3753396;(j)rsl065489，并任選地包括外顯子22(R1210C)。在一個實施方案中，陣列包括探針或引物，以確定至少一個以下多態(tài)性位點處的等位基因rs800292(I62V)、IVS2(畫18insTT)、rsl061170(Y402H)和rs2274700(A473A)。在一個實施方案中，陣列包括探針或引物，以確定至少一個以下多態(tài)性位點處的等位基因rs9427661(-249T>C)、rs9427662(-20T>C)和rsl2097550(P46S)。陣列可以包括引物或探^l十，以確定兩個、至少三個、至少四個、至少五個或至少六個上述位點處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分rs529825處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分rs800292處的等位基因。在一個實施方案中，引物或4果針區(qū)分rs3766404處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分rsl061147處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分rsl061170處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分rs203674處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分外顯子22(R1210C)處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分rs529825和rs800292處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分rs1061147、rsl061170和rs203674中兩或三處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分以下位點的等位基因rs529825和rs800292處，rs3766404處，rsl061147、rsl061170和rs203674中兩或三處。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分rs529825、rs800292、rs3766404、rsl061170和rs203674處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分外顯子22(R1210C)處以及rs529825處、rs800292處、rs3766404處、rsl061147處、rsl061170處、rs203674處、rs529825和rs綱292處、rsl061147、rsl061170和rs203674中兩或三處,rs529825和rs800292處，rs3766404處，和rsl061147處、rsl061170和rs203674中兩或三處，或rs529825和rs800292處，rs3766404處，rsl061170和rs203674處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分以下位點處的等位基因(a)rs529825、rs800292、rs3766404、rsl061147、rsl061170和rs203674中任何一處或多處；(b)內(nèi)含子2(IVS2或insTT)、rs2274700、外顯子10A和rs375046中任何一處或多處；(c)rs529825和rs800292中一處或兩處；(d)rsl061147、rsl061170和rs203674中一處或多處；(e)rs529825和rs800292中至少一處，以及rs3766404處，以及rsl061147、rsl061170和rs203674中至少一處；(f)至少rs529825、rs800292、rs3766404、rs1061170和rs203674處；(g)外顯子22(R1210C)處；(h)外顯子22(R1210C)處和(a)-(g)任何一處；或者(i)rs529825、rs800292、rs3766404、rsl061147、rsl06U70、rs203674、內(nèi)含子2(IVS2或insTT)、rs2274700、外顯子IOA、rs375046和外顯子22(R1210C)中任何一處或多處，以及rs9427661、rs9427662和rsl2097550中任何一處或多處。陣列可以包括引物或探針，以確定兩個、至少三個、至少四個、至少五個或至少六個上述位點處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分rs529825處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分rs800292處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分內(nèi)含子2(IVS2或insTT)處的等位基因。在一個實施方案中，引物或4笨針區(qū)分rs3766404處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分rsl061147處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分rs1061170處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分外顯子10A處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分rs2274700處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分rs203674處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分rs375046處的等位基因。在一個實施方案中，引物或揭:針區(qū)分外顯子22(R1210C)處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分rs529825和rs800292處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分rs1061147、rsl061170和rs203674中兩或三處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分以下位點處的等位基因rs529825和rs800292處，內(nèi)含子2處，rs3766404處，rsl061147、rsl061170和rs203674中兩或三處，外顯子10A處，rs2274700處和rs375046處。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分rs529825、rs800292、內(nèi)含子2(IVS2或insTT)、rs3766404、rsl061170、外顯子IOA、rs2274700、rs203674和rs375046處的等位基因。在一個實施方案中，引物或探針區(qū)分外顯子22(R1210C)處以及rs529825、rs800292、內(nèi)含子2(IVS2或insTT)、rs3766404、rsl061147、rsl061170、rs2274700、外顯子IOA、rs203674、rs375046、rs529825和rs800292中任一處；rsl061147、rsl061170和rs203674中兩或三處；rs529825和rs800292處，內(nèi)含子2(IVS2或insTT)，rs3766404，rsl061147、rsl061170和rs203674中兩個或三個，rs2274700，外顯子10A和rs375046，或者rs529825、rs800292、內(nèi)含子2(IVS2或insTT)、rs3766404、rsl061170、rs2274700、外顯子10A、rs203674和rs375046處的等位基因。在一個實施方案中，該裝置在試劑盒背景中區(qū)分上文中列出位點處等位基因的任何組合。在一個實施方案中，基質(zhì)包含少于約1000種不同引物或探針，經(jīng)常少于約IOO種不同引物或探針，少于約50種不同引物或探針，或少于約10種不同引物或探針。如在此上下文中用到的，如果兩種引物不與同一多核苷酸特異性結(jié)合(即例如不同基因的cDNA引物)，則引物與另一引物"不同"。如在此上下文中用到的，如果兩種揮:針不與同一多肽或多核苷酸特異性結(jié)合(即例如不同基因的cDNA探針)，則探針與另一探針"不同"。如果引物或探針識別同一基因(即CFH或CFHR5)的不同等位基因，則也可以將其描述為不同。因此，在一個實施方案中，本發(fā)明的診斷裝置僅檢測CFH、僅檢測CFHR5、僅檢測CFH和CFHR5或者CFH、CFHR5和多至20種、優(yōu)選多至10種或優(yōu)選多至5種除CFH和/或CFHR5之外的基因的等位基因。即，該裝置特別適用于篩選AMD和相關(guān)的補體相關(guān)疾病。在一個實施方案中，該裝置包含僅識別CFH和/或CFHR1-5中一種或多種的引物或探針。在相關(guān)實施方案中，該裝置包含用于多至20種、優(yōu)選多至10種或優(yōu)選多至5種除CFH或CFHR1-5之外其他基因的引物和探針。在一個實施方案中，固定的引物為區(qū)分因子H或C好及F5基因多態(tài)性位點處的等位基因的等位基因特異性引物。鑒定因子H基因多態(tài)性位點處的等位基因的示例性等位基因特異性引物示于表16A。固定的等位基因特異性引物優(yōu)先結(jié)合具有引物互補序列的核酸(RNA或DNA)。雜交可以通過多種方法檢測，包括使用熒光檢測的單堿基延伸、寡核苷酸連接測定等(參閱Shi，M.M.，2001，Enablinglarge-scalepharmacogeneticstudiesbyhigh-throughputmutationdetectionandgenotypingtechnologies"Clin.Chem.47(2):164-172)。用于檢測多態(tài)性位點的基于微陣列的裝置是市售的，包括Affymetrix(SantaCalar，CA)、Protogene(MenloPark,CA)、Genometrix(TheWoodland,TX)、MotorolaBioChipSystems(Northbrook，IL)和PerlegenSciences(MountainView,CA)。在一個實施方案中，固定的探針為區(qū)分因子H或CHRF5基因多態(tài)性位點處的等位基因的等位基因特異性探針。鑒定因子H基因多態(tài)性位點處的等位基因的示例性等位基因特異性探針示于表16B。固定的等位基因特異性探針優(yōu)先結(jié)合具有探針互補序列的核酸(RNA或DNA)。雜交可以通過多種方法檢測，包括雜交的核苷酸的熒光(參閱Shi，M.M.，2001，Enablinglarge-scalepharmacogeneticstudiesbyhigh-throughputmutationdetectionandgenotypingtechnologies"Clin.Chem.47(2):164-172)。用于檢測多態(tài)性位點的基于微陣列的裝置是市售的，包括Affymetrix(SantaCalar，CA)、Protogene(MenloPark,CA)、Genometrix(TheWoodland,TX)、MotorolaBioChipSystems(Northbrook，IL)和PerlegenSciences(MountainView,CA)。在某些實施方案中，從本發(fā)明的試劑盒或裝置中排除對特定SNP和變異具有特異性的探針或引物。例如，在一些實施方案中，試劑盒或裝置不包括一種或多種以下可以排除的SNP:(i)rs529825;(ii)rs900292;(iii)內(nèi)含子2(IVS2或insTT);(iv)rs3766404;(v)rsl061147;(vi)rsl061170;(vii)rs2274700;(viii)外顯子10A;(ix)rs203674;(x)rs375046;(xi)rs3753396;(xii)rsl065489;或(xiii)外顯子22(R1210C)。XIII.實施例實施例1年齡相關(guān)性黃斑變性易感個體中因子H基因(/W^/CFH)的普遍單元型年齡相關(guān)性黃斑變性(AMD)是發(fā)達國家老年人中不可逆失明的最常見原因，全世界每年有超過5千萬人患病。我們先前的研究涉及眼玻璃疣(AMD的標(biāo)志性損傷)的形成中旁路補體途徑的活化。我們還顯示AMD患者中的斑狀玻璃疣與患有2型膜性增生性腎小球腎炎(MPGNII)個體中早期形成的玻璃疣不可區(qū)分，MPGNII是特征為補體級聯(lián)系統(tǒng)旁路途徑的非受控活化的疾病。本文中我們顯示旁路補體途徑的主要抑制劑因子H蛋白質(zhì)(HF1)在玻璃疣中累積，并由視網(wǎng)膜色素上皮局部合成。先前的連鎖分析將含有因子H基因(HF7/CFi7)的染色體lq25-32鑒定為主要的AMD易感性基因座。我們在由約卯0個AMD病例和400個匹配對照組成的兩個獨立群中分析了的遺傳變異。我們發(fā)現(xiàn)在這些群中8種普遍的HF1SNP與AMD非常顯著相關(guān)，兩種普遍的錯義變體顯示非常顯著的相關(guān)性(I62V;x2=36.1，p=3.2xl07和Y402H;x2=54.4，p=1.6x1013)。單元型分析提示多種HF1變體賦予提高或降低的AMD危險。一種常見的危險單元型在AMD病例中以49%的頻率存在，在對照中為26%(OR=2.67，95%CI[1.80-2.85)。該單元型的純合子占病例的22.1%和對照的5.1°/。(OR=5.26，95%CI[2.84-9.76)。還鑒定了若干保護性單元型(OR=0.44-0.55)。危險單元型在70%MPGNII患者中存在這一發(fā)現(xiàn)進一步加強了這些數(shù)據(jù)。我們提出，與觸發(fā)事件如感染組合時，補體系統(tǒng)調(diào)節(jié)子中遺傳上預(yù)先確定的變異成為人群中一大部分AMD的基礎(chǔ)。引言年齡相關(guān)性黃斑變性(AMD)是發(fā)達國家中引起不可逆失明的最主要原因(Klein等，2004;vanLeeuwen等，2003)，影響約15%的60歲以上個體或估計有6億個體。AMD的特征為由變性和新生血管變化引起的漸進性中央視覺喪失，所述變性和新血管變化發(fā)生在神經(jīng)視網(wǎng)膜及其下層脈絡(luò)膜之間的界面上。該位置上分布了光感受器、臨近的視網(wǎng)膜色素上皮(RPE)、稱為Bruch膜(BM)的基膜復(fù)合物以及脈絡(luò)膜毛細血管網(wǎng)。流行的觀點是AMD是由多種遺傳和環(huán)境危險因素的相互作用引起的復(fù)雜疾病(Klein等，2003;Tuo等，2004)。家族性聚集研究表明，遺傳組分可以在多達25%的病例中鑒定到(Klaver等，1998a)。由此，AMD似乎是多種易感性基因座之間相互作用的產(chǎn)物，而不是單基因病癥的集合。所涉及的基因座數(shù)、所賦予的歸因危險度和多個基因座之間的相互作用仍不清楚。連鎖分析和候選基因篩選已經(jīng)對AMD的遺傳學(xué)提供了有限的了解。已經(jīng)報道了一個基因與危險提高的可靠關(guān)聯(lián)，^BC44(Allikmets等，1997;Allikmets等，2000)和一個基因與危險降低的可靠關(guān)聯(lián)，j/wf(Klaver等，1998，Souied等，1998)。一些小組報道了全基因組連鎖分析的結(jié)果(Tuo等，2004;Weeks等，2001)。迄今已經(jīng)證明了一個AMD表型(ARMD1;MIM603075)與特定染色體區(qū)域lq25-q31的連鎖(Klein等，1998)。已經(jīng)暫時將HEMICENTIN-1(也稱為鑒定為致病基因(Schultz等,2003)，盡管它還不能解釋顯著的疾病負荷(Abecasis等，2004;Hayashi等，2004)。若干小組(Weeks等，2001;Iyengar等，2003)的染色體lq上重疊基因座的鑒定提示該基因座可能包含主要的AMD相關(guān)基因。在AMD以及許多其他疾病如阿爾茨海默病(Akiyama等，2000)、動脈粥樣硬化(Torzewski等，1997)和腎小球腎炎(Schwertz等，2001)中，特征性損傷和沉積物促成了疾病的發(fā)病和發(fā)展。盡管這些疾病的分子發(fā)病機制可能不同，但沉積物含有許多共同的分子組分，它們部分是由于局部炎癥和補體級聯(lián)系統(tǒng)(先天性免疫系統(tǒng)中宿主防御的關(guān)鍵元件)的活化。玻璃疣是與早期AMD相關(guān)的標(biāo)志性沉積物，最近的研究也涉及在其形成中的局部炎癥和補體級聯(lián)系統(tǒng)的活化。(Hageman等，1999;Espinosa-Heidmann等，2003)。玻璃祝含有多種補體激活劑、抑制劑、激活特異性補體片段和末端途徑組分，包括膜攻擊復(fù)合物(MAC)——由于補體活化而形成的裂解復(fù)合物。MAC對宿主細胞和組織以及外源病原體而言可能是致死性的。許多患II型膜性增生性腎小球腎炎(MPGNII)——特征為補體旁路活化途徑的非受控全身性活化的罕見腎病——的個體也在黃斑中發(fā)生眼玻璃疣，其在組成和外觀上與AMD的玻璃疣無法區(qū)分(Mullins等，2001;O，brien等，1993;McAvoy等，2004)。而且，一名診斷為MPGNII的患者在補體活化旁路途徑的主要抑制子KF7中帶有突變(Zipfel，私人通信)。此外，一些患MPGNIII的擴大家族(相關(guān)疾病)的個體顯示與定位在lq31-32的染色體區(qū)連鎖(Neary等，2002)，lq31-32與在AMD的全基因組連鎖研究中已經(jīng)鑒定的基因座重疊?？傊?，這些發(fā)現(xiàn)提供了檢查/r/57是否與發(fā)生AMD和MPGNII相關(guān)的動因。在該研究中，我們確定了AMD和MPGNII患者及匹配對照中i/F/序列變體的頻率，并分析了其與疾病表型的聯(lián)系。我們還檢查了來自正常和AMD供體的黃斑RPE-脈絡(luò)膜復(fù)合物中的HF1轉(zhuǎn)錄和HF1蛋白質(zhì)的分布。方法患者、表型和DNA——^研究使用AMD病例和年齡匹配對照的兩個獨立組。所有參與的個體均為美國歐裔血統(tǒng)，60歲以上，并在征得同意后在IRB批準(zhǔn)的方案下加入。這些組由來自UniversityofIowa的404名臨床記錄為AMD的無關(guān)患者(平均年齡79.5±7.8)和131名無關(guān)對照個體(平均年齡78.4±7.4，年齡和種族匹配)，以及來自ColumbiaUniversity大學(xué)的550名臨床記錄為AMD的無關(guān)患者(平均年齡71.32±8.9歲)和年齡和種族匹配的275名無關(guān)對照個體(平均年齡68.84±8.6歲)組成。由經(jīng)視網(wǎng)膜研究員訓(xùn)練的眼科醫(yī)師通過間接檢眼鏡檢查和裂隙燈顯微鏡檢查法來檢查患者。CarolineKlaver博士和其后Klaver博士訓(xùn)練的個體根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化國際分類系統(tǒng)(Bird等，1995)在兩種體系下將眼底照片分級。如果對照患者未顯示任何可辨別的黃斑疾病體征或不具有已知的AMD家族病史，則將其選擇為對照并納入。基于其參與研究時最嚴重的眼的分類，將AMD患者細分為表型分類——早期AMD(eAMD)、地圖樣萎縮(GA)和滲出性(CNV)AMD。將TheUniversityofIowa的eAMD和GA病例進一步細分為不同表型(單獨的RPE改變，>10的斑狀硬玻璃疣、斑狀軟玻璃疣、BB(表皮)玻璃疣、PED、"Cherokee，，萎縮、半島狀地圖樣萎縮和框式地圖樣萎縮)。所有病例的最早的可被證明的表型也被記錄并用于分析。使用QIAampDNABloodMaxi試劑盒(Qiagen，Valencia,CA)從取自病例和對照受試者的外周血白細胞中制備基因組DNA。Rrapanui-在UnidaddeBioetica，MinisteriodeSalud(Santiago,Chile)批準(zhǔn)的知情同意過程之后，對447名(66%女性，34%男性)EasterIsland居民提供完整的眼檢查，包括放大眼底鏡檢查。采用醫(yī)療史、家族史和眼科病史，使用當(dāng)?shù)蒯t(yī)師和社區(qū)領(lǐng)導(dǎo)的記錄并協(xié)助劃分受試者的種族。檢查的患者中49%為純種Rapanui人，9%為混合種(Rapanui與歐洲人、智利人、Mapuchi人和/或新近的波利尼西亞人的混合)，42%為大陸人(主要為智利歐洲人)。從201名老年個體中收集外周靜脈血和血清，其中114名個體為純種Rapanui人(108名>50歲，89名>60歲)。在該研究中使用來自65歲以上的60名純種Rapanui居民和13名智利居民的DNA。人供體眼——人供體眼在死亡5小時內(nèi)得自IowaLions眼庫(IowaCity，IA)、OregonLions眼庫(Portland，OR)和CentralFloridaLions眼和組織庫(Tampa，F(xiàn)L)?？色@得時，閱讀這些眼的總病理學(xué)特征以及眼底照片和血管造影片，并由視網(wǎng)膜專家分類。基底由至少兩位個體根據(jù)修訂版本的國際AMD分級系統(tǒng)(Bird等，1995)分類。使用RNeasyMiniKit(Qiagen，Valencia,CA)從來自眼的視網(wǎng)膜、RPE/脈絡(luò)膜和RPE細胞中制備總RNA。使用QiaShredder(Qiagen，Valencia,CA)剪切基因組DNA并用DNAse(Promega)消化殘余的基因組DNA。使用AgilentBioAnalyzer評估RNA完整性。將來自38名臨床記錄為AMD的無關(guān)供體(平均年齡81.5±8.6)和19名無關(guān)對照供體(平均年齡80.5+8.8，年齡和種族匹配)的DNA用于SSCP分析，并評估潛在的基因型-表型關(guān)聯(lián)。免疫組織化學(xué)——固定后極部(包括鋸齒緣和黃斑)并如上述處理(Hageman等，1999)。將一些后極部直接包埋進OCT中而不預(yù)先固定。在恒冷切片機上將組織切成6-8jim厚度的切片，如上述進行免疫標(biāo)記(Hageman等，1999)。使用僅與二抗一起孵育的臨近切片作為對照。制備一些經(jīng)免疫標(biāo)記的標(biāo)本，并通過共聚焦激光掃描顯微鏡觀察，如上文所述(Anderson等，2002)。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)-使用Superscript逆轉(zhuǎn)錄酶(GibcoBRL)和隨機六聚體從總RNA中合成第一鏈cDNA。PCR反應(yīng)使用以下引物組進行FH1(外顯子8至外顯子10)5'-GAACATTTTGAGACTCCGTC國3'[SEQIDNO:324和5'國ACCATCCATCTTTCCCAC-3'[SEQIDNO:325；FH1(外顯子9至外顯子10)5'-TCCTGGCTACGCTCTTC-3'[SEQIDNO:326和5'-ACCATCCATCTTTCCCAC-3'SEQIDNO:325；HFL1(外顯子8至外顯子10)5'TCCGTCAGGAAGTTACTGG-3，[SEQIDNO:327和5'-AGTCACCATACTCAGGACCC-3'[SEQIDN0.328；HFL1(外顯子9至外顯子10)，5'-GGCTACGCTCTTCCAAAAG-3'[SEQIDNO:329和5'-AGTCACCATACTCAGGACCC-3'SEQIDNO:330。使用MacVector軟件(SanDiego,CA)設(shè)計PCR引物(IDT，Coralville，IA)。反應(yīng)參數(shù)為94。C3分鐘的1個循環(huán)、94t:45秒、51.4°C(FH1)/55°C(FHL1)1分鐘、72°C1分鐘的40個循環(huán)和72°C3分鐘的1個循環(huán)。PCR產(chǎn)物在2%瓊脂糖凝膠上電泳并使用與QuantityOne⑧軟件(Bio-Rad，Hercules,CA)—起使用的GelDoc2000TM記錄系統(tǒng)進行記錄。微陣列分析使用從在死亡5小時內(nèi)收集的天然人RPE或RPE-脈絡(luò)膜復(fù)合物中提取的總RNA(RNeasyminikit,Qiagen,Valencia,CA)進行DNA微陣列分析。使用三種不同平臺18,380種非冗余DNA的微陣列(IncytePharmaceuticals;St.Louis,MO)、Affymetrix基因芯片系統(tǒng)和完整人基因組或人1AV2寡聚物微陣列(AgilentInc.,PaloAlto,CA)。各自的操作按各生產(chǎn)商的說明書進行。對于Incyte分析，在隨機引發(fā)反應(yīng)中用33-P標(biāo)記來自黃斑和視網(wǎng)膜赤道部區(qū)域6mm孑L的cDNA，將其純化并與含有18,380種非冗余cDNA的基于尼龍的陣列雜交。膜用射線影像(phosphoimage)檢測，將信號標(biāo)準(zhǔn)化并使用GenomeDiscovery軟件包分析數(shù)據(jù)。對于Affymetrix分析，使用標(biāo)準(zhǔn)化操作將RPE和RPE/脈絡(luò)膜(來自6-8mm的黃斑和夕卜纟彖孑U)cRNA與Affymetrix基因芯片(HG-U133A:直接雜交。這些方法在UniversityofIowaDNA核心實驗室進行，其配備了流控站和GeneArray掃描儀。Agilent數(shù)據(jù)得自黃斑和視網(wǎng)膜赤道部的孔。使用AgilentLowInputRNA擴增試劑盒，用來自同一供體的黃斑和外緣RNA產(chǎn)生來自黃斑和外緣RPE/脈絡(luò)膜的CY3和CY5標(biāo)記的擴增cRNA。Agilent陣列數(shù)據(jù)使用VersArray掃描儀得自3名正常年輕供體、3名AMD供體和3名年齡匹配的非AMD對照，使用VersArrayAnalyzer軟件(BioRad)定量數(shù)據(jù)。使用總體背景消減計算每個點的中間凈強度，使用局部回歸法使數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化。突變篩選和分析-使用單鏈構(gòu)象多態(tài)性(SSCP)分析、變性高效液相層析(DHPLC)和直接測序檢查HF7編碼區(qū)和毗鄰的內(nèi)含子區(qū)(包括轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生截短的FHL1同種型的外顯子10A)中的變體。剩余的SNP通過5，核酸酶(Taqman,ABI)法分型。如所述進行Taqman基因分型和關(guān)聯(lián)性分析(Gold等，2004)。使用MacVector軟件(SanDiego,CA)設(shè)計用于SSCP、DHPLC和DNA測序分析的引物(表5),以擴增每個外顯子及其毗鄰的內(nèi)含子區(qū)。如前述通過SSCP和DHPLC在PCR產(chǎn)生的擴增子中篩選序列變異(Allikmets等，1997;Hayashi等，2004)。按照標(biāo)準(zhǔn)操作通過雙向測序確認SSCP和DHPLC檢測到的所有變化。統(tǒng)計學(xué)分析使用卡方檢驗和Fisher精確檢驗進行。結(jié)果RPE-脈絡(luò)膜界面處的因子H在得自6名具有早期AMD病史的供體和3名無AMD或玻璃疣的年齡相近供體的眼中評估因子H蛋白質(zhì)在來自黃斑和黃斑外的RPE/脈絡(luò)膜復(fù)合物中的分布(圖1A-1L)。在AMD供體中，在玻璃疣中、RPE下(即亞RPE空間)和脈絡(luò)膜毛細血管周圍存在強烈的HFl免疫反應(yīng)性(IR)(圖1A-1D、1E、1G)。在不存在一抗時，RPE/脈絡(luò)膜中無標(biāo)記(圖IF)。五哦有因子H抗體以均一方式在一定程度上標(biāo)記黃斑(圖1C和1E)。一種抗體還標(biāo)記了黃斑內(nèi)的亞結(jié)構(gòu)元件(圖1A和1B)。這些結(jié)構(gòu)也可使用針對與HFl結(jié)合的活化補體組分C3b/iC3b的抗體標(biāo)記(Anderson等，2004;Johnson等，2001)。與年齡匹配的對照相比，因子H免疫反應(yīng)性在AMD供體中更強，在AMD供體的黃斑中也比外緣更顯著(圖1G和1H)。黃斑中的抗HF1模式(圖1G)與抗C5b-9的模式(圖II和IK)高度近似，在兩種情況下，標(biāo)記一般都包括脈絡(luò)膜毛細血管。黃斑外的位置顯示低得多的抗C5b-9免疫反應(yīng)性(圖1J)。在無AMD的50歲以下供體的RPE-脈絡(luò)膜中觀察到?jīng)]有或幾乎沒有C5b-9免疫反應(yīng)性(圖1L)。圖1的描述(A-B)來自診斷為萎縮性AMD的84歲老年男性供體的高倍放大共聚焦免疫熒光圖像。在Cy2/熒光素通道上使玻璃疣和亞RPE空間中亞結(jié)構(gòu)元件(白色箭頭)的抗HF1(AdvancedResearchTechnologies)標(biāo)記成像。亞RPE空間;L^底RPE表面與Bruch膜內(nèi)膠原層之間的細胞外區(qū)室。這些元件也可以使用針對C3片段(iC3b、C3d、C3dg)的單克隆抗體顯示免疫反應(yīng)性(IR)，所述C3片段與補體激活表面共價結(jié)合(Johnson等，2001;2003)。在該供體的脈絡(luò)膜毛細血管腔(星號)中強烈的抗因子H標(biāo)記最有可能反映血流中HF1的高循環(huán)水平。RPE胞質(zhì)中自身熒光脂褐質(zhì)顆粒在Cy3/Texas紅通道上標(biāo)記。放大率標(biāo)記A)5nm;B)3jim.(C-D)使用不同的HF1多克隆抗體(Quidel)在83歲AMD老年男性的玻璃疣和亞RPE空間中進行HF1的共聚焦免疫熒光定位(Cy2/螢光素通道；綠色)。C)在該供體眼中，玻璃疣(Dr)標(biāo)記模式是均一的。D)RPE-脈絡(luò)膜的低倍放大圖像?？笻F1IR在整個脈絡(luò)膜和亞RPE空間(箭頭)、解剖區(qū)室中存在，其中玻璃疣和其他沉積物與年齡和AMD形式相關(guān)。脂褐素自發(fā)熒光(Cy3通道；紅色)。放大率標(biāo)記C)10jim;D)20jim。(E-F)玻璃疣中HF1的免疫組織化學(xué)定位。E)紫色堿性磷酸酶反應(yīng)產(chǎn)物表示的抗HF1單克隆抗體(Quidel)標(biāo)記在玻璃疣中、沿著Bruch膜以及在脈絡(luò)膜毛細血管壁(箭頭)上很明顯。F)來自同一眼的對照切片。不存在一抗時，未發(fā)生標(biāo)記。RPE胞質(zhì)和脈絡(luò)膜中的褐色色素為黑色素。放大率標(biāo)記=10,。(G-H)黃斑中的HF1免疫定位。G)AMD供體中沿著BM、脈絡(luò)膜毛細柱(箭頭)存在廣泛的標(biāo)記。H)來自無AMD供體黃斑的對照切片，在相同結(jié)構(gòu)中標(biāo)記明顯較低。放大率標(biāo)記-20fim。(I-J)來自同一AMD供體眼的黃斑下(圖II)和黃斑外(圖1J)的RPE-脈絡(luò)膜中補體膜攻擊復(fù)合物(C5b-9)的免疫組織化學(xué)定位。在黃斑中，強烈的抗C5b-9標(biāo)記與玻璃疣、Bruch膜和脈絡(luò)膜毛細血管內(nèi)皮相關(guān)。黃斑外的抗C5b-9標(biāo)記局限在Bruch膜附近的窄帶中。RPE胞質(zhì)和脈絡(luò)膜中的褐色色素代表黑色素色素形成。放大率標(biāo)記-20fim。(K-L)來自AMD供體(圖1K)和來自無AMD的另一供體(圖1L)的黃斑中C5b-9的免疫組織化學(xué)定位。RPE胞質(zhì)和脈絡(luò)膜中的褐色色素形成代表黑色素?？笴5b-9標(biāo)記主要與脈絡(luò)膜毛細血管壁(黑色箭頭)和毛細血管間支柱(白色箭頭)相關(guān)。標(biāo)記在AMD眼中強得多。注意與圖G所示來自同一供體的黃斑中抗HF1標(biāo)記模式的強相似性。放大率標(biāo)記1<:=15jim;L=20pm。視網(wǎng)膜色素上皮是因子H的局部來源通過RT-PCR和DNA微陣列分析評估和FHZJ在RPE、RPE/脈絡(luò)膜和視網(wǎng)膜中的表達。在來自患和未患AMD的供體的人眼中，兩種基因產(chǎn)物的適當(dāng)大小的PCR產(chǎn)物在新分離的RPE和RPE/脈絡(luò)膜復(fù)合物中存在，但在神經(jīng)視網(wǎng)膜中不存在(圖2)。在HF1編碼序列的外顯子8、9、IOA(用于產(chǎn)生截短的同種型FFZJ的外顯子)和IO中選擇引物。PCR反應(yīng)使用從RNA制備的cDNA進行，所述RNA提取自來自臨床記錄AMD病史的供體的人感覺神經(jīng)視網(wǎng)膜(泳道2)、RPE和脈絡(luò)膜(泳道3)和新分離的RPE細胞(泳道4)。將基因組DNA作為才莫板用于擴增(泳道5),泳道6描述的混合物中未加入才莫板。泳道I含有IOObp的序列梯。跨越HF1的外顯子8至外顯子10(左圖)、外顯子9至外顯子10(右圖)以及FHL1的外顯子8至外顯子IOA(左圖)和外顯子8至外顯子IOA(右圖)的擴增引物為預(yù)計的大小(分別為376、210、424和248bp)。通過RT-PCR在RPE或RPE/脈絡(luò)膜中未檢測到FHR1-5的轉(zhuǎn)錄物，但在神經(jīng)視網(wǎng)膜中檢測到FHR1-4(數(shù)據(jù)未顯示)。來自三種平臺的基因表達陣列數(shù)據(jù)確認，RPE和脈絡(luò)膜細胞局部表達HF1和FHL1轉(zhuǎn)錄物，但HF1相關(guān)蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄物(FHR1可能是例外)則很少(如果有的話)。使用來自9名AMD供體和3名年齡匹配對照的RPE/脈絡(luò)膜cDNA作為探針探測的Incyte陣列得到的數(shù)據(jù)顯示，在AMD供體中HFlmRNA平均水平提高2-3倍。與黃斑外區(qū)域相比，在黃斑區(qū)中也存在水平稍高的趨勢，盡管該差異不具有統(tǒng)計學(xué)顯著性。使用Affymetrix陣列進行的分離RPE和毗鄰的RPE/脈絡(luò)膜制品的檢查所產(chǎn)生的數(shù)據(jù)證實在這些組織中存在及F7轉(zhuǎn)錄物，并顯示H/^7信息中的顯著部分存在于RPE層中(數(shù)據(jù)未顯示)，所述制品來自兩名AMD供體和兩名年齡匹配的對照供體。HF1中的變異與AMD和MPGNII相關(guān)為了測試基因的等位基因變體是否與AMD相關(guān)，在UniversityofIowa在404名AMD患者和131名匹配對照的群體中篩選了全部22個編碼外顯子和50-100bp的側(cè)翼內(nèi)含子序列。檢測到總計26種序列變體、編碼區(qū)中的17種SNP(cSNP)(包括5種同義和12種非同義取代)以及9種內(nèi)含子SNP9(—些變體示于圖3)。圖3顯示分析中使用的ll種SNP、20種短共有重復(fù)序列(SCR)和連鎖不平衡(LD)節(jié)段的大致定位，并且基于先前公開的數(shù)據(jù)，病原體和其他底物的大致結(jié)合位點示于下圖(Zipfel等，2002;RodriguezdeCordoba等，2004)。cSNP包括先前描述的普遍的非同義變體，如外顯子2中的I62V、外顯子9中的Y402H和外顯子18中的D936E(圖3)。可能具有功能效應(yīng)的常見內(nèi)含子SNP的實例為IVS2-18intTT變體。還在AMD患者和對照中都檢測到了五種罕見(<0.5%)變體，排除了疾病表型由罕見好F7等位基因(即疾病導(dǎo)致的突變)引起的可能性。在404名患者和131名對照中的一些或全部中獲得了6種SNP的詳細基因型數(shù)據(jù)(表4和6A-6C)，使用病例-對照研究設(shè)計進行相關(guān)性分析。在若干個體變體中發(fā)現(xiàn)了十分顯著的相關(guān)性，包括I62V(X2=15.0，p-l.lx104)和Y402H(x2=49.4,p=2.1x1012)。在這個群體中，外顯子10中的同義A473A變體觀察到與AMD的最強相關(guān)性，得到的讓步比(OR)為3.42(95。/。置信區(qū)間(CI)[2.27-5.151)。這些結(jié)果在ColumbiaUniversity,NewYork獲得的AMD患者(n=550)和匹配對照(n=275)獨立群體中得到了證實(表4)。在第二個群體中，相同的兩種非同義SNP也與AMD高度相關(guān)(I62V;x2=36.l，p-3.2xlO-7和Y402H;x2=54.4，p=1.6xl0-13)。此外，基于商業(yè)測定的頻率和可用性選擇了若千其他內(nèi)含子SNP(總計11種SNP)。在該群體中觀察到與內(nèi)含子10中的SNPrs203674的最強相關(guān)性(x2=66,l,p=4.29xlO"6)。該變體顯示與AMD的OR為2.44(95%CI=1.97-3.03)。盡管OR中等，但該變體十分普遍，30.5%的病例是等位基因B純合的，但在對照中僅為12.9%。外顯子13和18中的Q672Q和D936E等位基因未顯示統(tǒng)計學(xué)顯著的相關(guān)性，提示HF1的N端一半(包括病原體和底物分子識別的結(jié)構(gòu)域，(圖3，也見下文))中的變異與AMD相關(guān)。兩組翁:據(jù)十分相似，其中，這兩個群體中不僅基因分型的SNP以十分顯著的方式與AMD相關(guān)，而且相關(guān)性的頻率和程度也非常相似(表4和6)。將整個AMD患者群體與對照相比時，相關(guān)性非常顯著(表4)。對AMD的主要亞表型(如早期AMD(eAMD，特征為斑狀玻璃疣和/或色素異常)、CNV(新生血管膜和/或盤狀疤)和GA(地圖樣萎縮))分別進行分析時，相關(guān)性在eAMD和CNV病例中尤為突出。在一些病例中，GA組顯示與總體趨勢存在偏差，特別是就外顯子13(Q672Q)和18(D936E)等位基因定義的單元型而言(數(shù)據(jù)未顯示)。盡管這一偏差就病因?qū)W變化而言是顯著的，但其未達到統(tǒng)計學(xué)顯著，很可能是由于GA患者數(shù)相對較小。連鎖不平衡(LD)分析顯示在整個i/P7基因上存在廣泛的LD(表2和圖3)。外顯子2-3區(qū)中的三種SNP實質(zhì)上如同外顯子7和9中的A307A和Y402H變體，以及外顯子13和18中的Q672Q和D936E變體，為完全LD(表6和圖5)。在病例和對照中進行的單元型估計在49%的病例中鑒定到最常見的危險單元型，而在對照中僅為26%(OR-2.9395%CI[2.29-3.74)。該單元型的純合子存在于22.1%的Columbia病例和5.1%的對照中(OR=5.26，95%CI[2.84-9.76)。兩種普遍的保護性單元型可見于30%的對照和18%的病例中(OR=0.47695%CI5，-AAGTTCTG纖AAAGGTGTCC"nSEQID職332〗'如生產(chǎn)商(Invitrogen,Carlsbad,CA)所述，用PlatinumTaq使用SuperscriptIIIOne-StepHighFidelity進行RT-PCR反應(yīng)。從瓊脂糖凝膠上切下大小正確的產(chǎn)物(3769bp)并使用離心柱分離。如生產(chǎn)商(Invitrogen)的推薦，在載體pCR2.1-TOPO中使用TOPO-TA克隆系統(tǒng)克隆PCR產(chǎn)物。通過直接測序確定來自四名患者中每一名的克隆的完整遺傳序列。相對于示例性保護性參照序列(H2)，來自一名患者(患者#498-01)的DNA中核苷酸多態(tài)性的數(shù)目最少，盡管該DNA編碼第402位氨基酸處的危險序列(組氨酸)，并編碼第62位氛基酸處的纈氨酸。為了制備編碼CFH保護性形式的基因，我們使用QuikChange誘變系統(tǒng)(Stratagene，LaJolla，CA)改變編碼氨基酸62的堿基以使其編碼異亮氨酸，改變第402位的堿基以使其編碼酪氨酸，產(chǎn)生SEQIDNO:33S。該蛋白質(zhì)的第1210位氛基酸為精氨酸。使用的寡核苷酸如下(加上正確的反義形式)位5，"TAXAGATCTCTTGGAAATATAAXAATGGXATGCAOG'3,[SEQIDNO:333]402:5，-ATGGATATAATCAAAATTATGGAAGAAAGTTraTAC-3,[SEQH)NO:334通過直接測序完整基因來確認所引入突變的保真性。將得到的保護性基因克隆進在巨細胞病毒啟動子控制下的真核表達載體pcDNAll(Invitrogen)中。使用Exgen500轉(zhuǎn)染試劑(Fermentas,Hanover，MD)將這種表達載體轉(zhuǎn)染ii^肺癌細胞系A(chǔ)549(ATCC，Manassas,VA)。轉(zhuǎn)染后，在無血清培養(yǎng)基(Hybridoma-SFM，Invitrogen)中培養(yǎng)細胞。在轉(zhuǎn)染后48小時收集上清液，并進行Western印跡分析。使用針對人CFH的單克隆抗體和多克隆抗體(Quidel，SanDiego，CA)確認大小正確(約150kDa)的產(chǎn)物的存在?；颊?498-01(621，402Y)CFH基因[SEQIDNO:335<formula>formulaseeoriginaldocumentpage122</formula>AGTTGGAGA03窗TGAiyOTCTCCTGCJyyVCCAG鍵TTACBAmGTTGGACCTJUOTCCGrrCAGTGCTACCACTTTGGMTOTCTCCTGACCTCCCAATATGTajyiGAGCAAGTACAATCATGTGGTCCACCTCCTGAaCTCCTCAACimTGTGTTGATGGAGAGTGGACAACTT1ACCAGTGTGTATTGTGGAGGAGAGTACCTGTGGAGMAmCCTG逾CTTGAM:MGGCTGGGCCCAGCTTTCTTCCCCTCCTTATTAC窗GGAGATTCAGTGG腿TTCAATTGCTCAGMTCATTTACMTGATTGGACACAGATCAATTACGTGmTCATGGAGTATGGACCCAACTTCCCCAGTGTGTGGCMTAGATAAAOTiyw^GTGCAftATCATCAAATTTMT窗ACTTGAC3(3皿CAIT1MAAAACAAGAAGGAATTCGATCATiUOTCT池CAT皿GGTACAGMGTA涯GGAAAAGAAGGATC體ACACAC船TCTGCATAAATGGAAGATGGGATCCAGAAGTGAACTGCTCJyVTGGCACAAATACAAT窗GCCCACCTCCACCTC肌ATTCCCBJVTTCTCACAATATGACAACCACACTGAATTATCGGGATGGAGAAAAAGTATCTGTTCTTTGCCAAGAAAATTATCT腿TTCAGGBAGGAG緣GBJyiTTACMGCAiyiGATGGAAGATGGCAGTCAATACCACTCTGTGTTGMJyy\ATTCCATCTTCACMCeACCKAGA遂AACACGGAACCATTAATTCATCCAGGTCTTCACAAGmAGTTATCCMmTGGGACTAAATTGAGTTATACTTGTGAGGGTGGTTTCAGGATATCTGAA(mMATGMACAACATGCTACATGGGAAAATGGAGTTCTCCACCTCAGTGTGAA(5GCCTTCC宵GTAyiTCTCCACCTGAGATTTCTCATGGTGTTGTAGCTCACMGTCAGACAGTTATCAGTATGGAGAAGAAGTTACGTACi^ATGTTTTGAaGGTTTTGGAATTGATGGGCCTGCAATTGCAAIATGCTTAGGAGAZIAAATGGTCTCACCCTCCATCATGCATAAMACAGATTCTCTCAGTTTACCTAGCTTTGAMATGCCATACCCATGGGAGAGi\AGAAGGATGTGTATAAGGCGGGTGAGCAAGTGACTIACACTTGTGCAACATATAGGAAGGCCAHCATGCAGAGACACCTCCTGTGTG艦TCCGCCCACAGTACCTACAGGiy^ATGTGGGCCCCCTCCACCTMTG且CAM^GGGACMTACTTCATTCCCGTTGTCAGmTATGCTCCAGCTTCATCAGTTGAGTATCaATGCCAGAACTTGTATCMCTTGAGGGmACAAGCG逾T雄CATGTAGiy^TCGM:MTGGTCaGAACCACCAAAATGCTTACATCCCTG窗AAraTCCCGAGjyyvrTATGGjymATTAT站CATAGCATimGGTCGACmGCCAAACAGIlAGCTTTATTCGAG嵐CAGGTG漁TCAGTTGiyOTTCTGT(3TAMCGGGGATAAACTGGAG窗CC逾CTTGTGCMAAAGATAGAATCAJkTCmTAAaCTGC表1Ad<table>tableseeoriginaldocumentpage124</column></row><table>(*)顯示了基因組序列的非編碼鏈。<table>tableseeoriginaldocumentpage125</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage126</column></row><table><image>imageseeoriginaldocumentpage127</image><table>tableseeoriginaldocumentpage128</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage129</column></row><table>表5SSCP、DHPLC和測序引物<table>tableseeoriginaldocumentpage130</column></row><table>表6<table>tableseeoriginaldocumentpage131</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage132</column></row><table>表6(續(xù)2)<table>tableseeoriginaldocumentpage133</column></row><table>從Y402H變體和/或IVSIO基因座，在來自不同群體的樣品中評估危險單元型的頻率。這些包括65歲以上的土生Rapanui人(在EsterIsland群體中，AMD極為稀少，很可能是沒有)、來自ColumbiaUniversity的對照(年齡>65歲)、西班牙一般群體、來自UniversityofIowa的對照(年齡>65歲)美國非裔一般群體、來自ColumbiaUniversity的AMD病例、美國歐裔一般群體、來自UniversityofIowa的AMD病例，以及患有MPGNII的個體。N:個體數(shù)表7在患有或沒有AMD的多種人種群中危險等位基因的頻率危險單元型RapanuiColumbia對照西班牙0.200.350.3S52272.24l0W3美國Columbia美國對照非裔病例歐裔0.360.470.550.571314954956MPGNII0.6920;20680012494.9勢溢也被127/1515t鵬i湖MJS病d4表8因子H二倍型<table>tableseeoriginaldocumentpage135</column></row><table>G、A、T、C是指在指示的多態(tài)性上的核苷酸。S、L是指內(nèi)含子2多態(tài)性的短和長(插入2個T核苦酸)等位基因。135表9<table>tableseeoriginaldocumentpage136</column></row><table>22表io用來擴增CFJKR5編碼序列的引物<table>tableseeoriginaldocumentpage136</column></row><table>表ll<table>tableseeoriginaldocumentpage137</column></row><table>表12相對于對照22名MPGNII患者中因子H的SNP頻率比較(作為fl和f2給出的等位基因頻率)<table>tableseeoriginaldocumentpage138</column></row><table>表13與MPGNII相關(guān)的編碼SNP和因子H相關(guān)的短共有重復(fù)序列<table>tableseeoriginaldocumentpage138</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage139</column></row><table>表15相對于對照22名MPGNII患者中CFF及5的SNP頻率比較(作為fl和O給出的等位基因頻率)<table>tableseeoriginaldocumentpage140</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage141</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage142</column></row><table>表16A(續(xù))表16B<table>tableseeoriginaldocumentpage143</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage144</column></row><table>XV參考文獻就上述作者和數(shù)據(jù)引用的參考文獻在下文中提供完整引用。Abecasis等"Age-relatedmaculardegeneration:ahigh-resolutiongenomescanforsusceptibilitylociinapopulationenrichedforlate-stagedisease."AmericanJournalofHumanGenetics74，482-94(2004).Akiyama等"InflammationandAlzheimer'sdisease."NeurobiolAging2000;21:383-421.Allikmets等"MutationoftheStargardtdiseasegene(ABCR)inage-relatedmaculardegeneration."Science1997;277:1805-1807.Allikmets."FurtherevidenceforanassociationofABCRalleleswithage-relatedmaculardegeneration.TheInternationalABCRScreeningConsortium."AmJHumGenet67，487-91(2000).Ambati等"Age-relatedmaculardegeneration:etiology,pathogenesis,andtherapeuticstrategies."SurvOphthalmol2003;48(3):257曙293.Anderson等"Aroleforlocalinflammationintheformationofdrusenintheagingeye."AmJOphthalmol2002，134:411-431.Anderson等'，Characterizationofj5eta-amyloidassembliesindrusen:thedepositsassociatedwithagingandage-relatedmaculardegeneration."Exp.EyeRes.2004;78:243-256.Angaku-."Complementregulatoryproteinsinglomerulardiseases."KidneyInt1998;54:1419-1428.Appel等'，MembranoproliferativeglomerulonephritistypeII(DenseDepositDisease):anupdate."JamSocNephrol2005;16:1392-1403.Ault等"HumanfactorHdeficiency.MutationsinframeworkcysteineresiduesandblockinHproteinsecretionandintracellularcatabolism."JBiolChem1997;272:25168-25175.Bao等"Decay-acceleratingfactorexpressionintheratkidneyisrestrictedtotheapicalsurfaceofpodocytes."KidneyInt2002;62:2010-2021.BarbianodiBelgiojoso等"Theprognosticvalueofsomeclinicalandhistologicalparametersinmembranoproliferativeglomerulonephritis."N印hron1977;19:250-258.Barrett等"Haploview:analysisandvisualizationofLDandhaplotypemaps,"Bioinformatics2004;21:263-5.Bennett等"Mesangiocapillaryglomerulonephritistype2(densedepositdisease):Clinicalfeaturesofprogressivedisease."AmJKidneyDis1989;13:469-476.Bird等"Aninternationalclassificationandgradingsystemforage-relatedmaculopathyandage-relatedmaculardegeneration.TheInternationalARMEpidemiologicalStudyGroup."SurvOphthalmol1995，39:367-374.BushRA，LeiB，TaoW，RazD，ChanCC，CoxTA，Santos-MuffleyM，SievingPA.2004.Encapsulatedcell-basedintraoculardeliveryofciliaryneurotrophicfactorinnormalrabbit:dose-dependenteffectsonERGandretinalhistology.InvestOphthalmolVisSci.45:2420-30.CadeJR，DeQuesadaAM,ShiresDL，LevinDM,HackettRL，SpoonerGR，SchleinEM，PickeringMJ，HolcombA.1971.TheEffectofLongTermHighDoseHeparinTreatmentontheCourseofChronicProliferativeGlomerulonephritis.Nephron.8:67-80.Cameron等"Idiopathicmesangiocapillaryglomerulonephritis.ComparisonoftypesIandIIinchildrenandadultsandlong-termprognosis."AmJMed1983;74:175-192.Capecchi.Science1989;244:1288-1292.Caprioli等"ComplementfactorHmutationsandgenepolymorphismsinhaemolyticuraemicsyndrome:theC-257T，theA2089GandtheG2881Tpolymorphismsarestronglyassociatedwiththedisease."HumMolGenet12，3385-95(2003).Chong等"DecreasedthicknessandintegrityofthemacularelasticlayerofBruch'smembranecorrespondtothedistributionoflesionsassociatedwithage-relatedmaculardegeneration"AmJPathol166，241-51(2005).Colville等"Visualimpairmentcausedbyretinalabnormalitiesinmesangiocapillary(membranoprolifeative)glomerulonephritistypeII("densedepositdisease")."AmJKidneyDis2003;42:E2-5.Compton.Nature1991;350:91-91.Cousins等"Monocyteactivationinpatientswithage-relatedmaculardegeneration:abiomarkerofriskforchoroidalneovascularization"ArchOphthalmol122，1013-8(2004).Crabb等"Drusenproteomeanalysis:Anapproachtotheetiologyofage-relatedmaculardegeneration."Proc.Natl.Acad.Sci.美國.2002;99:14682-14687.deJong."Riskprofilesforageingmaculardisease."Ophthalmologia2004;218S叩pl1:5-16,DiamondJR，KarnovskyMJ.1986.NonanticoagulantProtectiveEffectofHeparininChronicAminonudeosideNephrosis.RenalPhysiol,Basel9:366-374.Dragon-Durey等"HeterozygousandhomozygousfactorHdeficienciesassociatedwithhemolyticuremicsyndromeormembranoproliferativeglomerulonephritis:reportandgeneticanalysisof16cases."JAmSocNephrol2004;15:787-795.alongtermedesglomerulonephritesmembranoproliferativedel'adulte:remissionspontaneedurablechez13maladesavecetudedebiopsiesrenalesiterativesdans5cas."Neprhrologie1982;3:6-11.Duvall-Young等"Funduschangesin(typeII)mesangiocapillaryglomerulonephritisstimulatingdrusen:ahistopathologiocalreport."BrJOphthalmol1989a;73(4):297-302.Duvall-Young等"FunduschangesinmesangiocapillaryglomerulonephritistypeII:clinicalandfluoresceinangiographicfindings."BrJOphthalmol1989b;73(11):卯0-卯6.Edwards等"ComplementfactorHPolymorphismandage-relatedmaculardegeneration."Science2005;308:421-424.Esparza-GordilloJ，GoicoecheadeJorgeE，BuilA，CarrerasBergesL，Lopez-TrascasaM，Sanchez-CorralP，RodriguezdeCordobaS.2005.Predispositiontoatypicalhemolyticuremicsyndromeinvolvestheconcurrenceofdifferentsusceptibilityallelesintheregulatorsofcomplementactivationgeneclusterinlq32.HumanMol.Genetics14:703-712.Espinosa-Heidman等"Macrophagedepletiondiminisheslesionsizeandseverityinexperimentalchoroidalneovascularization."Invest.Ophthalmol.Vis.Sci2003;44:3586-3592.Estaller等"Cloningofthe1.4-kbmRNAspeciesofhumancomplementfactorHrevealsanovelmemberoftheshortconsensusrepeatfamilyrelatedtothecarboxyterminaloftheclassical150-kDamolecule.，'JImmunol1991;146(9):3190-3196.FloegeJ，EngE，YoungBA,Co脂rWG，Joh謂nRJ.1993.Heparinsuppressesmesangialcellproliferationandmatrixexpansioninexperimentalmesangioproliferativeglomerulonephritis.KidneyInternational43:369-380.Frueh等CHnChemLabMed2003;41(4):452-461.Gibbs.NuclAcidsRes1989;17:2427-2448.GirardiG，RedechaP，SalmonJE.2004.Heparinpreventsantiphospholipidantibody-inducedfetallossbyinhibitingcomplementactivation.NatureMedicine10:1222-1226.GirardiG.2005.Heparintreatmentinpregnancyloss:Potentialtherapeuticbenefitsbeyondanticoagulation.J.Reproduc.Immunol.66:45-51.Gold等"Estrogenreceptorgenotypesandhaplotypesassociatedwithbreastcancerrisk."CancerRes2004;64:8891-8900.Habib等"Densedepositdisease.Avariantofmembranoproliferativeglomerulonephritis."KidneyInt1975;7:204-15.Habib等"Glomerularlesionsinthetransplantedkidneyinchildren."AmJKidneyDiseas1987^10:198-207.Hageman等"Anintegratedhypothesisthatconsidersdrusenasbiomarkersofimmune-mediatedprocessesattheRPE-Bruch'smembraneinterfaceinagingandage-relatedmaculardegeneration."ProgRetinEyeRes2001;20:705-732.Hageman等"Commonhaplotypeinthecomplementregulatorygene,factorH(HF1/CFH)，predisposesindividualstoage-relatedmaculardegeneration."ProcNatAcadSci2005;102:7227-32.Hageman等"Vitronectinisaconstituentofoculardrusenandthevitronectingeneisexpressedinhumanretinalpigmentedepithelialcells."FASEBJournal1999;13:477-484.Haines等"ComplementfactorHvariantincreasestheriskofage-relatedmaculardegeneration."Science2005;308:419-421.Hayashi等"EvaluationoftheARMDllocusonlq25-31inpatientswithage-relatedmaculopathy:geneticvariationinlaminingenesandinexon104ofHEMICENTIN-1."OphthalmicGenetics25，111-9(2004).Houdebine,2000，Transgenicanimalbioreactors,TransgenicRes.9:305-20Holers."Thecomplementsystemasatherapeutictargetinautoimmunity."ClinImmunol2003;107:140.Holz.等"Pathogenesisoflesionsinlateage-relatedmaculardisease."AmJOphthalmol2004;137:504-510.Huang等"Peripheraldruseninmembranoproliferativeglomerulonephritis."Retina2003;23(3):429-431.Iyengar等"ModelFreeLinkageAnalysisinExtendedFamiliesConfirmsaSusceptibilityLocusforAgeRelatedMacularDegeneration(ARMD)onIq31[ARVOAbstract]."InvestOphthalmolVisSci2003;44:2113.Jansen等"InsitucomplementactivationinporcinemembranoproliferativeglomerulonephritistypeII."KidneyInt1998;53(2):331-349.Johnson等"Apotentialroleforimmunecomplexpathogenesisindrusenformation."ExpEyeRes2000;70:441-449.Johnson等"Complementactivationandinflammatoryprocessesindrusenformationandage-relatedmaculardegeneration."Exp.EyeRes.2001;73:887-896.Johnson等"TheAlzheimer'sAbeta-peptideisdepositedatsitesofcomplementactivationinpathologicdepositsassociatedwithagingandage-relatedmaculardegeneration."ProcNatlAcadSci美國99，11830-5(2002).Kinoshita."Biologyofcomplement:theoverture."ImmunolToday1991;12:291.Klaver等"Geneticriskofage-relatedmaculopathy.Population-basedfamilialaggregationstudy."ArchOphthalmol1998a;116:1646-1651.Klaver等GeneticassociationofapolipoproteinEwithage-relatedmaculardegeneration.AmJHumGenet1998b;63:200-206.Klein等"Age-relatedmaculardegeneration.Clinicalfeaturesinalargefamilyandlinkagetochromosomelq."ArchOphthalmol1998;116:1082-1088.Klein等"ComplementfactorHpolymorphisminage-relatedmaculardegeneration."Science2005;308:385-389.Klein等"Geneticsofage-relatedmaculardegeneration."OphthalmolClinNorthAm2003;16(4):575畫582.Klein等"Prevalenceofage-relatedmaculopathy."Opthalmol1992;99(6):933-943.Klein等"Theepidemiologyofage-relatedmaculardegeneration."AmJOphthalmol2004;137(3):504隱510.Leys等"SubretinalneovascularmembranesassociatedwithchronicmembranoproliferativeglomerulonephritistypeII."Graefe，sArchClinExperOphthalmol1990;228:499-504.Lillico等，2005,Transgenicchickensasbioreactorsforprotein-baseddrugs.DmgDiscovToday.10:191-6Liszewski等"Theroleofcomplementinautoimmunity."ImmunolSer1991;54:13.Manuelian等"MutationsinfactorHreducebindingaffinitytoC3bandheparinandsurfaceattachmenttoendothelialcellsinhemolyticuremicsyndrome."JClinInvest2003^111:1181-11卯.McAvoy等"Retinalchangesassociatedwithtype2glomerulonephritis."Eye200519:985-9McEnery."Membranoproliferativeglomerulonephritis:TheCincinnatiexperiencecumulativerenalsurvivalfrom1957to1989."JPediatr1990;116:S109國S114.McRae等"HumanfactorH-relatedprotein5(FHR-5).Anewcomplement-associatedprotein."JBiolChem2001;276(9):6747-6754.Meri等"Regulationofalternativepathwaycomplementactivationbyglycosaminoglycans:specificityofthepolyanionbindingsiteonfactorH."BiochemBiophysResCommun1994;198:52-59.Miller等"Theassociationofpriorcytomegalovirusinfectionwithneovascularage-relatedmaculardegeneration."AmJOphthalmol138，323-8(2004).Morgan等"Complementdeficiencyanddisease."ImmunolToday1991;12:301.Morgan."Regulationofthecomplementmembraneattackpathway."CritRevImmunol19，173-98(1999).Mullins等"Characterizationofdrusen-associatedglycoconjugates."Ophthalmology104，288-94(1997).Mullins等"Drusenassociatedwithagingandage-relatedmaculardegenerationcontainmolecularconstituentscommontoextracellulardepositsassociatedwithatherosclerosis,elastosis,amyloidosisanddensedepositdisease."FASEB丄2000;14:835-846.Mullins等"Structureandcompositionofdrusenassociatedwithglomerulonephritis:Implicationsfortheroleofcomplementactivationindrusenbiogenesis."Eye2001;15:3卯-395.Murphy等"FactorH-relatedprotein陽5:anovelcomponentofhumanglomerularimmunedeposits."AmJKidDis2002;39:24-27.Neary等"LinkageofagenecausingfamilialmembranoproliferativeglomerulonephritistypeIIItochromosome1."JAmSocNephrol.2002;13(8):2052-2057.Neri等Adv.NuclAcidProtAnalysis2000;3826:117-125.Niculescu等"Complementactivationandatherosclerosis."Mol.Immunol.1999;36:949-955.Nielsen等Science1991;254:1497-1500.O'Brien等"ElectrophysiologyoftypeIImesangiocapillaryglomerulonephritiswithassociatedfundusabnormalities."BrJOphthalmol1993;77:778-80.Orita等ProcNatlAcadSci1989;86:2766-2770.Orth等Thenephroticsyndrome.NewEnglJMed1998;338:1202-1211.Pascual等"Identificationofmembrane-boundCRl(CD35)inhumanurine:evidenceforitsreleasebyglomerularpodocytes."JExpMed1994;79:889-899.Penfold等"Immunologicalandaetiologicalaspectsofmaculardegeneration."ProgressinRetinalandEyeResearch2001;20:385-414.Pcrcz-CaballcroGonzalcz-RubioC，GsllardoME,VersM5Lopez-TrascasaM，RodriguezdeCordobaS，Sanchez-CorralP.2001.ClusteringofMissenseMutationsintheC國TerminalRegionofFactorHinAtypicalHemolyticUremicSyndrome.Am.J.Hum.Genet.68:478-484.Piatek等NatBiotechnol1998;16:359-363.Pickering等"UncontrolledC3activationcausesmembranoproliferativeglomerulonephritisinmicedeficientincomplementfactorH."NatGenet2002;31:424-428.Prasad等"PendredsyndromeandDFNB4-MutationscreeningofSLC26A4bydenaturinghigh-performanceliquidchromatographyandtheidentificationofsevennovelmutations."AmJMedGenet2004;124A:1-9.Raines等"FunduschangesinmesangiocapillaryglomerulonephritistypeII:vitreousfl匿ophotometry."BrJOphthalmol1989;73:907-910.RichardsA,BuddiesMR,DonneRL，KaplanBS，KirkE,VenningMC，TielemansCL，GoodshipJA，GoodshipTHJ.2001.FactorHMutationsinHemolyticUremicSyndromeClusterinExons18-20，aDomainImportantforHostCellRecognition.Am.J.Hum.Genet.68:485畫4亂Ripoche等"ThecompleteaminoacidsequenceofhumancomplementfactorH."BiochemJ1988，249:593-602.RodriguezdeCordoba等'ThehumancomplementfactorH:functionalroles,geneticvariationsanddiseaseassociations."MolImmunol41,355-67(2004).RopsAngeliqueL.W.M.M.，VanDerVlagJ，LensenJoostF.M.，WijnhovenTessaJ.M.，VanDenHeuvelLambertP.W.J.,vanKuppeveltTH，BerdenJoH.M.2004.Heparansulfateproteoglycansinglomerularinflammation.KidneyInternational65:768-785.Russell等"Location,substructureandcompositionofbasallaminardrusencomparedwithdrusenassociatedwithagingandage-relatedmaculardegeneration."Am.J.Ophthalmol.2000;129:205-214.Saiki等Nature1986;324:163-166.Sanchez-CorralP，Perez-CaballeroD，HuarteO，SimckesAM,GoicoecheaE，Lopez-TrascasaM，RodriguezdeCordobaS.2002.StructuralandFunctionalCharacterizationofFactorHMutationsAssociatedwithAtypicalHemolyticUremicSyndrome.Am.J.Genet.71:1285-1295.SaundersRE，GoodshipTHJ，ZipfelPF，PerkinsSJ.AnInteractiveWebDatabaseofFactorH國AssociatedHemolyticUremicSyndromeMutations:InsightsIntotheStructuralConsequencesofDisease-AssociatedMutations.HumanMutation2006.27:21-30.Schultz等"AnalysisoftheAJRMD1locus:evidencethatamutationinHEMICENTIN-1isassociatedwithage-relatedmaculardegenerationinalargefamily."HumMolGenet2003;12(24):3315-3323.Schwertz等"Complementanalysisinchildrenwithidiopathicmembranoproliferativeglomerulonephritis:Along-termfollow-up."PediatrAllergyImmunol2001;12:166-172.Seddon等，，AssociationbetweenC-reactiveproteinandage-relatedmaculardegeneration."Jama291，704-10(2004).Seddon等'，Theepidemiologyofage-relatedmaculardegeneration."OphthalmolClin2004;44:17-39.Sharma等"BiologicallyactiverecombinanthumancomplementfactorH:synthesisandsecretionbythebaculovimssystem."Gene143:301-302.Sharma等"IdentificationofthreephysicallyandfunctionallydistinctbindingsitesinhumancomplementfactorHbydeletionmutagenesis."ProcNatlAcadSci美國1996,93:10996-11001.Shen等"YingandYang:complementactivationandregulationofAlzheimer'sdisease."ProgNeurobiol2003;70(6):463-472.Sieving,P.A.,R.C.Car勵，W.Tao，D.J.S.Thompson,K.R.Fullmer,H.RodriquezColemanandR.A.Bush.2005.PhaseIstudyofciliaryneurotrophicfactor(CNF)deliveredbyintravitrealimplantofencapsulatedcelltechnology(ECT)deviceinpatientswithretinitispigmentosa.Skerka等"ThehumanfactorH-relatedprotein4(FHR-4).Anovelshortconsensusrepeat-containingproteinisassociatedwithhumantriglyceride誦richlipoproteins."JBiolCjhem1997;272(9):5627國5634.SongY，ZhaoL，TaoW，LatiesAM，LuoZ和WenR.Photoreceptorprotectionbycardiotrophin-1intransgenicratswiththerhodopsinmutations334ter.IOVS，44(9):4069-75.2003.Souied等"Theepsilon4alleleoftheapolipoproteinEgeneasapotentialprotectivefactorforexudativeage-relatedmaculardegeneration."AmJOphthalmol.1998;125:353-359.Strausberg等"Generationandinitialanalysisofmorethan15,000full-lengthhumanandmousecDNAsequences."ProcNatlAcadSci美國2002;99(26):16899-16卯3.StrikerGE.1999.Therapeuticusesofheparinoidsinrenaldiseasepatients.Nephrol.Dial.Transplant.14:540-543.Swainson等"Mesangiocapillaryglomerulonephritis:Along-termstudyof40cases."JPathol1983;141:449-468.TaoW，WenR，GoddardMB,ShermanS，O，RourkePJ，StabilaPF，BellWJ，DeanBJ，KauperKA，BudzVA，TsiarasWG，AclandGM，Pearce-KellingS，LatiesAM和AguirreGDEncapsulatedCell-BasedDeliveryofCNTFReducesPhotoreceptorDegenerationinAnimalModelsofRetinitisPigmentosa.IOVS，43巻(10)3292-3298.2002.Thelwell等NucleicAcidsRes2000;28:3752-3761.Timmerman等"Differentialexpressionofcomplementcomponentsinhumanfetalandadultkidneys."KidneyInt1996;49:730-740.Torzerski等"Processesinatherogenesiscomplementactivation."Atherosclerosis.1997;132:131-138.Tuo等"Geneticfactorsinage-relatedmaculardegeneration."ProgRetinEyeRes2004;23(2):229-249.vandenDobbelsteen等"RegulationofC3andfactorHsynthesisofhumanglomerularmesangialcellsbyIL-Iandinterferon-gamma."ClinExpImmunol1994;95:173-180.VanLeeuwen等"Epidemiologyofage-relatedmaculardegeneration."EurJEpidemiol2003;18(9):845-854.Vingerling等"Epidemiologyofage-relatedmaculopathy."EpidemiolRev.1995;17(2):347-360.Vingerling等'Theprevalenceofage-relatedmaculopathyintheRotterdamStudy."Ophthalmol1995Feb;102(2):205陽210.Walport."Complement.Firstoftwoparts."NEnglJMed2001;344:1058-1066.Wang等"Systematicidentificationandanalysisofexonicsplicingsilencers."Cell119，831-45(2004).Weeks等"Age-relatedmaculopathy:agenomewidescanwithcontinuedevidenceofsusceptibilitylociwithintheIq31,10q26,and17q25regions."AmJHumGenet2004;75:174.Weeks等"Age-relatedmaculopathy:anexpandedgenome-widescanwithevidenceofsusceptibilitylociwithintheIq31and17q25regions."AmJOphthalmol2001;132:682-692.WeilerJM，DahaMR，AustenKF，F(xiàn)earonDT.1976.ControloftheamplificationconvertaseofcomplementbytheplasmaproteinplH.Proc.Natl.Acad.Sci.美國73:3268-3272.Zarbin."AgeRelatedMacularDegeneration:areviewofpathogenesis."EurJOphthalmol1998，8:199-206.Zarbin."Currentconceptsinthepathogenesisofage-relatedmaculardegeneration."ArchOphthalmol2004;122(4):598-614.Zipfel等"ComplementfactorHandhemolyticuremicsyndrome."IntImmunopharmacol1，461-8(2001).Zipfel等"FactorHfamilyproteins:oncomplement,microbesandhumandiseases."BiochemSocTrans30，971-8(2002).Zipfel等"Theroleofcomplementinmembranoproliferativeglomerulonephritis."InComplementandKidneyDisease2005Zipfel."ComplementfactorH:physiologyandpathophysiology."SeminThrombHemost27,191-9(2001).Zipfel."Hemolyticuremicsyndrome:howdofactorHmutantsmediateendothelialdamage"TrendsImmunol22，345-8(2001).盡管本發(fā)明已經(jīng)參考具體實施方案進行了詳細描述，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該認識到，改良和改善在如下文權(quán)利要求所闡述的本發(fā)明范圍和精神之內(nèi)。本文引用的所有出版物和專利文獻均引入本文為參考，如同每一篇出版物或文獻均特別且單獨指出引入本文為參考。引用出版物和專利文獻(專利、公開的專利申請和未公開的專利申請)并不意在承認任一這些文獻是適當(dāng)?shù)默F(xiàn)有技術(shù)，也不構(gòu)成對其內(nèi)容或數(shù)據(jù)的承認。本發(fā)明現(xiàn)已以書面說明的方式描述，本領(lǐng)域技術(shù)人員將會認識到，本發(fā)明可以以多種實施方案實行，上述描述用于說明目的，而非限制以下權(quán)利要求。權(quán)利要求1.確定受試者發(fā)生年齡相關(guān)性黃斑變性(AMD)的傾向的診斷方法，其包括檢測編碼補體調(diào)節(jié)子(RCA)的基因中多態(tài)性位點處是否存在變異。2.權(quán)利要求l的方法，其中所述基因為因子H或CFHR5。3.權(quán)利要求2的方法，其中所述多態(tài)性位點為因子H基因中的雙等位基因單核苷酸多態(tài)性。4.權(quán)利要求3的方法，其包括獲得來自患者的核酸樣品和檢測來自該患者DNA中因子H基因多態(tài)性位點處是否存在變異。5.權(quán)利要求4的方法，其中存在變異指示患者發(fā)生AMD的傾向提高。6.權(quán)利要求4的方法，其中存在變異指示患者發(fā)生AMD的傾向降低。7.權(quán)利要求2的方法，其中所述多態(tài)性位點為表1A-1C中列出的因子H基因中的單核苷酸多態(tài)性。8.權(quán)利要求7的方法，其中所述多態(tài)性為rs800292(I62V)。9.權(quán)利要求7的方法，其中所述多態(tài)性為rsl061170(Y402H)。10.權(quán)利要求7的方法，其中所述多態(tài)性在外顯子22(R1210C)中。11.權(quán)利要求4的方法，其中檢測步驟包括(i)將來自受試者的核酸樣品與一種或多種能與因子H基因等位基因選擇性雜交的單核苷酸探針在反應(yīng)中組合，和(ii)監(jiān)測反應(yīng)以確定樣品中因子H基因等位基因的存在。12.根據(jù)權(quán)利要求ll的方法，其中所述探針為能在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)中引發(fā)多核苷酸合成的寡核苷酸。13.權(quán)利要求2的方法，其中檢測變體因子H蛋白質(zhì)。14.權(quán)利要求13的方法，其中所述變體第62位氨基酸為異亮氨酸。15.權(quán)利要求13的方法，其中所述變體第402位氨基酸為組氨酸。16.權(quán)利要求13的方法，其中所述變體第1210位氨基酸為半胱氨酸。17.權(quán)利要求13的方法，其中監(jiān)測步驟包括(i)在免疫測定中將來自受試者的血或血清樣品與對變體蛋白質(zhì)等位基因具有特異性的抗體試劑混合，和(ii)監(jiān)測所述測定以確定抗體試劑與蛋白質(zhì)樣品之間的特異性結(jié)合。18.權(quán)利要求2的方法，其中所述多態(tài)性位點為CHFR5基因中選自如下的單核苷酸多態(tài)性rs9427661(-249T>C)、rs9427662(-20T>C)和rsl20977550(P64S)。19.權(quán)利要求18的方法，其中所述多態(tài)性為rsl20977550(P64S)。20.權(quán)利要求2的方法，其中檢測變體CFHR5多肽。21.權(quán)利要求20的方法，其中所述變體CFHR5多肽第第46位氨基酸由絲氨酸替換脯氨酸。22.*珍斷受試者對年齡相關(guān)性黃斑變性(AMD)的易感性的方法，包括篩選單元型，其中所述單元型為a)因子H或CFHR5基因中的危險單元型，其在診斷為AMD的個體中的存在比健康個體中更為常見，或b)因子H或CFHR5基因中的保護性單元型，其在健康個體中的存在比診斷為AMD的個體中更為常見，或c)因子H或CFHR5基因中的中性單元型。23.權(quán)利要求22的方法，其中所述單元型在因子H基因中。24.權(quán)利要求23的方法，其中所述單元型包含rsl061170和rs203674中至少一處的變體序列。25.權(quán)利要求23的方法，其中所述單元型為保護性單元型，其包含rs529825、rs800292和rs3766404中至少一處的變體序列。26.權(quán)利要求23的方法，其中所述篩選包括確定以下位置的變異a)rs529825、rs800292、rs3766404、rsl061147、rsl061170和rs203674中任何一處或多處；b)內(nèi)含子2(IVS2或insTT)、rs2274700、外顯子10A和rs375046中任何一處或多處；c)rs529825和rs800292中一處或兩處；d)rsl061147、rsl061170和rs203674中一處或多處；e)rs529825和rs800292中至少一處；和rs3766404;和rsl061147、rsl061170和rs203674中至少一處；f)至少rs529825、rs800292、rs3766404、rsl061170和rs203674;g)外顯子22(R1210C);或h)外顯子22(R1210C)和(a)-(g)中任一項。27.權(quán)利要求22的方法，其中所述單元型在CFHR5基因中。28.權(quán)利要求27的方法，其中所述單元型為CFHR5基因中的危險單元型，其包括rs9427661、rs9427662和rsl2097550中至少一處的變體序列。29.治療患者的方法，所述患者診斷為患有或具有發(fā)生年齡相關(guān)性黃斑變性(AMD)危險，所述方法包括對患者施用因子H多肽。30.根據(jù)權(quán)利要求29的方法，其中所述患者具有與AMD危險相關(guān)的因子H單元型。31.根據(jù)權(quán)利要求29的方法，其中所述因子H多肽由因子H保護性單元型編碼。32.根據(jù)權(quán)利要求29的方法，其中所述施用包括施用含有編碼因子H多肽的序列的多核苷酸或施用表達因子H多肽的細胞，所述序列與啟動子有效連接。33.權(quán)利要求32的方法，其中所述啟動子對RPE具有特異性。34.權(quán)利要求29的方法，其中對眼施用因子H多肽。35.權(quán)利要求34的方法，其中通過眼內(nèi)注射施用因子H多肽。36.治療患者的方法，所述患者具有與AMD危險相關(guān)的因子H單元型，其包括施用物質(zhì)以降低基因產(chǎn)物的表達，所述基因產(chǎn)物由編碼變體因子H多肽的因子H基因編碼。37.權(quán)利要求36的方法，其中所述物質(zhì)為RNA，其與變體因子H多肽的至少一部分核苷酸序列互補。38.權(quán)利要求37的方法，其中所述RNA為反義RNA。39.權(quán)利要求37的方法，其中所述RNA為核酶。40.權(quán)利要求37的方法，其中所述RNA為短干擾RNA(siRNA)。41.藥物組合物，其包含編碼因子H多肽的基因治療載體和可藥用賦形劑。42.包含重組因子H多肽的組合物，其中所述重組因子H多肽由保護性單元型編碼，并且第62位為異亮氨酸。43.包含重組因子H多肽和可藥用賦形劑的藥物組合物，其中所述組合物不含病原體，并且適于對人類患者施用。44.權(quán)利要求43的藥物組合物，其中所述重組因子H多肽由保護性單元型編碼。45.包含抗體的藥物組合物，所述抗體與變體因子H蛋白質(zhì)結(jié)合，但不與具有SEQIDNO:2或SEQIDNO:337序列的因子H蛋白質(zhì)結(jié)合。46.表達編碼變體人因子H的轉(zhuǎn)基因的轉(zhuǎn)基因非人動物，其中所述變體氨基酸的第62位由纈氨酸替換異亮氨酸(I62V)、所述變體氬基酸的第402位由組氨酸替換酪氨酸(Y402H)，或所述變體氨基酸的第1210位由半胱氨酸替換精氨酸(R1210C)。47.表達重組變體人因子H的分離的宿主細胞，其中所述變體氨基酸的第402位由組氨酸替換酪氨酸(Y402H)，或所述變體氨基酸的第1210位由半胱氨酸替換精氨酸(R1210C)。48.表達重組變體人因子H的分離的宿主細胞，其中所述變體由保護性單元型編碼。49.篩選能治療AMD的物質(zhì)的方法，其包括使權(quán)利要求47的宿主細胞接觸所述物質(zhì)；以及監(jiān)測Y402H或R1210C變體的表達或加工。50.鑒定保護性因子H蛋白質(zhì)的方法，其包括a)鑒定具有保護性單元型的個體；和b)確定所述個體基因組中編碼的因子H的序列。51.鑒定與發(fā)生AMD危險降低相關(guān)的因子H的變體形式的方法，其包括i)鑒定具有與發(fā)生AMD危險降低相關(guān)的單元型或二倍型的個體；ii)獲得來自該個體的基因組DNA或RNA;和iii)確定該個體基因組中編碼的因子H的氨基酸序列。52.用于診斷受試者對AMD易感性的裝置或試劑盒，其包括在表1A-1C中列出的至少一個因子H基因多態(tài)性位點處區(qū)分等位基因的寡核苷53.權(quán)利要求52的裝置或試劑盒，其中所迷寡核苷酸為引物，其用于跨越表1A-1C中列出的因子H基因多態(tài)性位點的區(qū)域的核酸擴增。54.權(quán)利要求52的裝置或試劑盒，其中所述寡核苷酸為探針，其用于跨越表1A-1C中列出的因子H基因多態(tài)性位點的區(qū)域的核酸雜交。55.權(quán)利要求52的裝置或試劑盒，其具有在表1A-1C中列出的一個以上多態(tài)性位點處區(qū)分等位基因的寡核苷酸。56.權(quán)利要求55的裝置或試劑盒，其中所述多態(tài)性位點包括a)rs529825、rs800292、rs3766404、rsl061147、rsl061170和rs203674中任何一個或多個；b)內(nèi)含子2(IVS2或insTT)、rs2274700、外顯子10A和rs375046中任何一個或多個；c)rs529825和rs800292中一個或兩個；d)rsl061147、rsl061170和rs203674中一個或多個；e)rs529825和rs800292中至少一個;和rs3766404;和rsl061147、rsl061170和rs203674中至少一個；f)至少rs529825、rs800292、rs3766404、rsl061170和rs203674;g)外顯子22(R1210C);或h)外顯子22(R1210C)和(a)-(g)中任一項。57.權(quán)利要求55的裝置或試劑盒，其中所述多態(tài)性位點包括a)rs529825、rs800292、rs3766404、rsl061147、rsl061170、rs203674、內(nèi)含子2(IVS2或insTT)、rs2274700、外顯子IOA、rs375046和外顯子22(R1210C)中任何一個或多個；和b)rs9427661、rs9427662和rsl2097550中<壬<可一個或多個。58.用于診斷受試者對AMD的易感性的裝置或試劑盒，其包含在表l4列出的至少一個CFHR5基因多態(tài)性位點處區(qū)分等位基因的寡核苷酸。59.用于確定受試者發(fā)生II型膜性增生性腎小球腎炎(致密沉積物性腎小球腎炎)(MPGNII)的傾向的診斷方法，其包括檢測在因子H基因和/或補體因子H相關(guān)5(CFHR5)基因多態(tài)性位點處是否存在變異。60.權(quán)利要求59的方法，其中存在變異指示患者發(fā)生MPGNII的傾向提高。全文摘要本發(fā)明涉及與AMD危險提高或降低相關(guān)的因子H基因多態(tài)性和單元型。本發(fā)明提供了診斷和治療AMD的方法和試劑。文檔編號C12Q1/68GK101160412SQ200680012494公開日2008年4月9日申請日期2006年2月14日優(yōu)先權(quán)日2005年2月14日發(fā)明者G·S·哈格曼,R·J·史密斯申請人:愛荷華大學(xué)研究基金會