專利名稱：結(jié)合tweak的抗體的制作方法
結(jié)合TWEAK的抗體交叉引用的相關(guān)申請本申請要求2005年5月27日提交的美國申請60/685,149的優(yōu)先權(quán)，該 申請全部內(nèi)容通過引用并入本文。
技術(shù)背景與腫瘤壞死因子(TNF)-相關(guān)的細(xì)胞因子都?xì)w屬于同一 個蛋白質(zhì)超家族， 它們具有很多功能，包括涉及免疫調(diào)節(jié)和凋亡調(diào)節(jié)的那些功能。TWEAK (TNF-樣的誘導(dǎo)凋亡的弱誘導(dǎo)物)是此超家族中的 一 員。發(fā)明概述抗TWEAK抗體可用來治療多種疾病如炎性疾病，神經(jīng)性疾病或其它本 文所述的疾病。當(dāng)用于治療人類受試者時，所述抗體優(yōu)選是人的(HUMAN)、 人源化的或是有效人化的(EFFECTIVELY HUMAN)抗體。一方面，本發(fā)明公開了包含第一和第二種免疫球蛋白可變區(qū)序列、并結(jié) 合TWEAK (例如人TWEAK)的蛋白質(zhì)。所述蛋白質(zhì)能以，比如，K。低于10—7 M，如l(T8， l(T9， 10"°, 10"1 M或更好的親和力結(jié)合TWEAK。所述蛋白質(zhì)在 本文中也稱為"抗TWEAK抗體"。所述第 一和第二種免疫球蛋白可變區(qū)序列 可包括免疫球蛋白可變區(qū)中至少足以形成結(jié)合TWEAK的抗原結(jié)合位點的 部分。通常，第一和第二種免疫球蛋白可變區(qū)序列分別對應(yīng)于免疫球蛋白重 鏈和輕鏈(如成對的或者另外匹配的重鏈和輕鏈)的可變區(qū)序列。所述抗體能結(jié)合TWEAK上包括由P2D10識別的表位中的至少一個、 兩個、三個或四個氨基酸殘基的表位，能結(jié)合P2D10識別的TWEAK的肽(例 如長度不足25、 20或15個氨基酸的肽)或能結(jié)合P2D10所識別的TWEAK 的區(qū)域。例如，所述抗體特異性結(jié)合TWEAK(尤其人TWEAK，例如TWEAK 的可溶性區(qū)域)的表位，例如線性或構(gòu)象性表位。所述抗體可與P2D10竟?fàn)?結(jié)合TWEAK,例如人TWEAK。所述抗體可竟?fàn)幮砸种芇2D10結(jié)合TWEAK， 如人TWEAK。 一個實施方案中，所述抗體可結(jié)合與P2D10的表位重疊的表 位，如與P2D10表位有至少一個、兩個、三個或四個氨基酸相同，或通過結(jié) 合而在空間上(stericaily)阻礙TWEAK與P2D10相互作用的表位。例如，抗TWEAK抗體能結(jié)合TWEAK并調(diào)控(例如抑制)TWEAK和 TWEAK受體如Fnl4 (如人Fnl4)之間的相互作用(如結(jié)合)。所述抗體也可降 低TWEAK受體的信號傳導(dǎo)活性。所述抗體可靶向TWEAK、隔離(sequester) TWEAK、和/或調(diào)控TWEAK的體內(nèi)穩(wěn)定性。一個實施方案中，所述抗體特異性結(jié)合TWEAK上與Fnl4(如人Fnl4) 接觸的相互作用位點的至少一部分。所述抗體可與Fnl4竟?fàn)幗Y(jié)合TWEAK, 如人TWEAK。所述抗體可竟?fàn)幮砸种艶nl4結(jié)合TWEAK。所述抗體可與 TWEAK上的表位相互作用，所述表位是因與抗體結(jié)合而在空間上阻礙 TWEAK與Fnl4 (如人TWEAK與人Fnl4)相互作用的表位。一個實施方案中，所述抗體能抑制一或多種TWEAK-相關(guān)活性，其ICso 為約50 nM-5 pM，通常為約100-250 pM或更j氐。例如，所述抗體能抑制 TWEAK促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖或新血管形成的能力。 一個實施方案中，抗 TWEAK抗體降低至少一種TWEAK-相關(guān)活性，從而例如在將所述抗體給予 受試者后能調(diào)控炎性疾病。在其它實施方案中，所述抗體能以0、1()Sm-V1,通常io4-io7m-V'的 動力學(xué)結(jié)合(associatew他)TWEAK。另一實施方案中，所述抗體有10義1(T6 s人通常10-2-10-5^的解離動力學(xué)。 一個實施方案中，所述抗體以與單克隆 抗體P2D10或其修飾形式，如其嵌合形式或人源化形式(如本文所述的人源 化形式)類似(如5或10倍以內(nèi))的親和力和/或動力學(xué)結(jié)合TWEAK，如人 TWEAK?？捎美缟飩鞲衅骷夹g(shù)(BIACORETM)，檢測抗TWEAK抗體的 親和力和結(jié)合動力學(xué)。一個實施方案中，所述抗體是全長抗體的抗原結(jié)合片段，如Fab、F(ab，)2、 Fv或單鏈Fv片段。通常，所述抗體是全長抗體。所述抗體可以是單克隆抗 體或單特異性抗體。例如，所述抗體在包含不足20種其它的抗TWEAK抗體的組合物中，如在不包含其它種類的抗TWEAK抗體的組合物中。所述抗體可以是有效人化的。"有效人化的"抗體是包含足夠數(shù)量的人氨 基酸位置、因而不在正常人體內(nèi)激發(fā)免疫應(yīng)答的抗體。優(yōu)選地，所述蛋白質(zhì) 不引起中和抗體應(yīng)答，如人抗鼠抗體(HAMA)應(yīng)答。很多情況下，HAMA會 帶來問題，如需要重復(fù)給予抗體時，如在治療慢性或復(fù)發(fā)性疾病時。HAMA 反應(yīng)可以因抗體的血清清除增力口(見例如Saleh et al.， Cancer Immunol.Immunother., 32:180-190 (1990))、以及還因潛在的變態(tài)反應(yīng)(見例如LoBuglio etal. (1986)//WnV/oma, 5:5117-5123)，而使重復(fù)給予抗體有可能變得失效。例如，所述抗體可以是人的、人源化的、CDR-移植的、嵌合的、突變 的、親和力成熟的、脫敏的(deimmunized)、合成的或者體外產(chǎn)生的抗體，及 它們的組合。 一個實施方案中，抗TWEAK抗體是人源化抗體?？筎WEAK抗體的重鏈和輕鏈可以基本上是全長的。所述蛋白質(zhì)可包含 至少一條、優(yōu)選兩條完整重鏈，和至少一條、優(yōu)選兩條完整輕鏈，或可包含 抗原結(jié)合片段(如Fab，F(xiàn)(ab，)2,Fv或單鏈Fv片段)。其它實施方案中，所述抗 體具有重鏈恒定區(qū)，其選自如IgGl， IgG2， IgG3， IgG4， IgM， IgAl， IgA2， IgD, 和IgE;尤其選自如IgGl，IgG2,IgG3，和lgG4，更尤其為IgGl(如人IgGl)。 通常，重鏈恒定區(qū)是人的或是人恒定區(qū)的修飾形式。另一個實施方案中，所述抗體具有輕鏈恒定區(qū)，其選自K或X，尤其K(如人K)。一個實施方案中，所述蛋白質(zhì)包含本文公開的抗體(如P2D10)的輕鏈或 重4連可變區(qū)的至少一個、兩個、優(yōu)選三個CDR。上下文中，CDR指Chothia 超變環(huán)所限定的CDR。例如，所述蛋白質(zhì)在重鏈可變區(qū)序列的CDR區(qū)中， 可以包含至少1個、2個或3個如下序列GFTFSRYAMS (CDR1)(SEQ IDNO:l),E工SSGGSYPYYPDTVTG (CDR2) (SEQ ID NO:2)，VLYYDYDGDR工EVMDY (CDR3) (SEQ ID NO:3)，或具有與上述序列相比有差異(如差異數(shù)與CDR長度成比例)的氨基酸 序列，所述差異是，每10個氨基酸有不超過4、 3、 2.5、 2、 1.5、 1或0.5 個改變(如取代、插入或缺失)，如每個CDR有至少1個、但不超過2、 3或 4個改變。重鏈可變區(qū)序列可以將這些CDR序列具體包含在CDR3中，或 包含在至少兩個CDR(如CDR1和CDR3, CDR2和CDR3)中，或包含在所 有三個CDR中。所述蛋白質(zhì)的重鏈可變區(qū)序列的CDR區(qū)中可包含至少一個、兩個或三 個如下序列(括號中的氨基酸代表在具體位置的可選氨基酸)(i) G-(YF)-(NT)-F-(STDN)-(RY)畫Y-A-(MIL)-(HS); (SEQ ID NO:4)，或(ii) Y-Y-(PV)-D-(TS)-V-(TK)陽G; (SEQ ID NO:5)和(iii) (VL)-(ILHYF)-(YF)-D-(YF)畫D; (SEQ ID NO:6)或 (DE)-(RK)-(ILVM)-(EQD)-(VAL)-M-(DE); (SEQ ID NO:7)。所述蛋白質(zhì)的輕鏈可變區(qū)序列的CDR區(qū)中，可包含至少一個、兩個或 三個如下序列RSSQSLVSSKGNTYLH; (CDR1) (SEQ ID NO:8)， KVSNRFS; (CDR2)(SEQIDNO:9),和 SQSTHFPRT; (CDR3) (SEQ ID NO: 10),或具有與上述序列相比有差異(如差異數(shù)與CDR長度成比例)的氨基酸 序列，所述差異是，每10個氨基酸有不超過4、 3、 2.5、 2、 1.5、 1或0.5 個改變(如取代、插入或缺失)，如每個CDR有至少1個、但不超過2、 3或 4個改變。輕鏈可變區(qū)序列可以將這些CDR序列具體包含在CDR3中，或 包含在至少兩個CDR(如CDR1和CDR3, CDR2和CDR3)中，或包含在所 有三個CDR中。所述蛋白質(zhì)的輕鏈可變區(qū)序列的CDR區(qū)中可包含至少一個、兩個或三 個如下序列(括號中的氨基酸代表在具體位置的可選氨基酸)(i) (RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-S-S-(KR)-G-N-(TN)-Y-L-(EHDNQY); (SEQ ID NO: 11),或(RK)-S-S-Q-S-(LI)-V-S-S-(KR)-G-N-(TN)-Y-L-H; (SEQ ID NO: 12)(ii) (KE)-(LVI)-S-(NYS)-(RW)-(FAD)-S; (SEQ ID NO: 13),或 K(LVI)-S-(NYS)-R-(FAD)-S; (SEQ ID NO: 14)，和(iii) (SM)-Q-(GSA)-(ST)-(HEQ)陽(FWL)-P; (SEQ ID NO:15)或 S-Q-(GSA)-(SIT)-(HEQ)-F-P; (SEQ ID NO:16)。在優(yōu)選的實施方案中，所述蛋白質(zhì)包含P2D10的所有六個CDR或緊密 相關(guān)的CDR，如相同的CDR，或具有至少一個、但不超過兩個、三個或四 個氨基酸改變(如取代、插入或缺失)的CDR，或本文所述其它CDR。在另一個實施例中，所述蛋白質(zhì)包含與P2D10有相同的規(guī)范結(jié)構(gòu) (canonical structures)和對應(yīng)的Chothia CDR區(qū)的至少 一個、兩個或三個CDR 區(qū)，如與P2D0的重鏈和/或輕鏈可變區(qū)的至少CDRl和/或CDR2相同的規(guī) 范結(jié)構(gòu)。所述蛋白質(zhì)可包含如下序列之一CSQSTHFPRT (SEQ ID NO: 17)* DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSIiVSSKGNTYLHWYLQKPG CSQSTHFPRT (SEQIDNO:18)* dvvmtqsplslpvtlgqpas工scrssqs:lvsskgntyl冊fqqrpgCSQSTHFPRT (SEQIDNO:19)CSQSTHFPRT (SEQ ID NO:20)CSQSTHFPRT (SEQ ID NO:21)CSQSTHFPRT (SEQ ID NO:22)CSQSTHFPRT (SEQ ID NO:23)CSQSTHFPRT (SEQ ID NO:24)CSQSTHFPRT (SEQ ID NO:25)CSQSTHFPRT (SEQ ID NO:26) 或具有少于八個、七個、六個、五個、四個、三個、或兩個改變(如取代、 插入或缺失，如保守取代或?qū)2D10、 huP2D10-Ll或huP2D10-L2對應(yīng)位置 的氨基酸殘基的取代)的序列。取代舉例在如下Kabat位置之一2， 4， 6， 35, 36, 38, 44, 47, 49， 62， 64-69, 85, 87, 98， 99， 101和102。所述取代可例如，將P2D10的一或多個氨基酸取代到框架區(qū)(如人框架區(qū))的對應(yīng)位置，如在FR2中(如將 根據(jù)保守編號的位置46取代為Phe)以及在FR3中(如將位置87取代為Phe)。 所述蛋白質(zhì)的重鏈可變區(qū)可包括如下序列之一* QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFTFSRYAMSWVRQAPGQGLEVYYCARVLYYDYDGDR工E (SEQIDNO:27)* QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFTFSRYAMSWVRQAPGQRLEVYYCARVLYYDYDGDR工E (SEQ ID NO:28)VYYCARVLYYDYDGDR工E (SEQIDNO:29)VYYCARVLYYDYDGDR工E (SEQIDNO:30)VYYCATVLYYDYDGDR工E (SEQIDNO:31)MYYCARVLYYDYDGDRIE (SEQ ID NO:32)VYYCARVLYYDYDGDR工E (SEQ ID NO:33)VYYCAAVLYYDYDGDRIE (SEQ ID NO:34)VYYCARVLYYDYDGDR工E (SEQIDNO:35)evqlvesggglvqpgrslrlscaasgftfsryamswvrqapgkgle wvse工ssggsypyypdtvtgrft工srdnakns;ly:lqmns:lraedta lyycakdvlyydydgdr工e (seq id no:36) qvqlvesggglvkpggslrlscaasgftfsryamswirqapgkglevyycarvlyydydgdrie (seqidno:37) evqlvesggglvkpggslrlscaasgftfsryamswvrqapgkglevyycttvlyydydgdr工e (seqidno:38)lyhcarvlyydydgdr工e (seqidno:39)vyycarvlyydydgdrie (seq id no:40)vyycakvlyydydgdrie (seqidno:41)vyycakvlyydydgdrie (seq id no:42)vyycarvlyydydgdrie (seqidno:43)vyycakvlyydydgdrie (seq id no:44)vyycarvlyydydgdrie (seq id no:45)* EVQLVESGGVVVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYAMSWVRQAPGKGLE WVSEISSGGSYPYYPDTVTGRFTISRDNSKNSLYLQMNSLRTEDTA LYYCAKDVLYYDYDGDR工E (SEQ ID NO:46)* EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYAMSWVRQAPGKGLEVYYCARVLYYDYDGDR工E (SEQIDNO:47)VYYCTRVLYYDYDGDRIE (SEQ ID NO:48)VYYCARVLYYDYDGDR工E (SEQ ID NO:49) 或具有少于八個、七個、六個、五個、四個、三個、或兩個改變(如取代、 插入或缺失，如保守取代或?qū)2D10中對應(yīng)位置的氨基酸殘基的取代)的序 列。取代舉例在如下Kabat位置之一2， 4, 6, 25, 36， 37， 39, 47， 48, 93, 94， 103, 104, 106和107。所述取代可例如，將P2D10的一或多個氨基酸取代到框架 區(qū)(如人框架區(qū))的對應(yīng)位置。一個實施方案中，重鏈框架(如分別的FR1, FR2, FR3，或包含F(xiàn)R1、 FR2和FR3、但不包含CDR的序歹'J)包括氨基酸序列，其與如下種系V區(qū)段 序列之一的重鏈框架有至少80%, 85%， 90%， 95%, 97%, 98%, 99%或更高的 相同性DP-25, DP-1, DP-12, DP-9, DP-7， DP-31, DP-32， DP-33, DP-58, DP-54,其它VHI亞組(subgroup)種系序列，其它VH III亞組種系序列，或 另 一個V基因，該基因與規(guī)范結(jié)構(gòu)等級1-3 (見例如Chothia et al. (1992) J Mo/. 歷o/. 227:799-817; Tomlinson et al. (1992) J Mo/. 5/o/. 227:776-798)匹配 (compatible)。其它與規(guī)范結(jié)構(gòu)等級l-3匹配的框架包括具有按照Kabat編號 的一或多個如下殘基的框架位置26的Ala， Gly, Thr或Val;位置26的Gly; 位置27的Tyr， Phe或Gly;位置29的Phe， Val, lie或Leu;位置34的Met, lie, Leu, Val, Thr， Tip或lie;位置94的Arg， Thr， Ala， Lys;位置54的Gly, Ser, Asn 或Asp;和4立置71的Arg。一個實施方案中，輕鏈框架(如分別的FR1, FR2, FR3,或包含F(xiàn)Rl、 FR2和FR3、但不包含CDR的序列)包括氨基S吏序列，其與VkII亞組種系序列或如下種系V區(qū)段序列之一的輕鏈框架有至少80%， 85%, 90%, 95%, 97%， 98%, 99%或更高的相同性A17， A1, A18， A2， A19/A3， A23， Vk I亞組種 系序列(如DPK9序列)，或另一個V基因，該基因與規(guī)范結(jié)構(gòu)等級4-l(見例 如Tomlinson et al. (1995) J! 14:4628)匹配。其它與規(guī)范結(jié)構(gòu)等級4-l匹配的框架包括具有按照Kabat編號的一或多個如下殘基的框架位置2的 Val， Leu或lie;位置25的Ser或Pro;位置27b的lie或Leu;位置29的Gly; 位置33的Phe或Leu;和位置71的Phe。另外，按照Kabat編號，位置48 可以是Ile或Val。另一個實施方案中，輕鏈框架(如分別的FRl， FR2， FR3,或包含F(xiàn)Rl、 FR2和FR3、但不包含CDR的序歹'j)包含氨基酸序列，其與Vid亞組種系序 列(如DPK9序歹'j)的輕鏈框架有至少80%, 85%, 90°/。， 95%, 97%， 98%, 99%或更高的相同性。一個實施方案中，輕鏈或重鏈可變區(qū)框架(如至少包含F(xiàn)Rl, FR2， FR3， 任選包含F(xiàn)R4的區(qū)域)可選自如下(a)輕鏈或重鏈可變區(qū)框架，其包含至少 80%、 90%、 95%、或優(yōu)選100Q/。的來自人輕鏈或重鏈可變區(qū)框架的氨基酸殘 基，如來自人成熟抗體、人種系序列、人共有序列、或本文所述人抗體的輕 鏈或重鏈可變區(qū)框架殘基；(b)輕鏈或重鏈可變區(qū)框架，其包含20%-80%、 40%-60%、 60%-90%、或70%-95%的來自人輕鏈或重鏈可變區(qū)框架的氨基酸 殘基，如來自人成熟抗體、人種系序列、人共有序列的輕鏈或重鏈可變區(qū)框 架殘基；(c)非人框架(如嚙齒動物框架)；或(d)已修飾過的非人框架，如用 于除去免疫原性或細(xì)胞毒性決定簇，如脫敏的，或部分人源化的。 一個實施 方案中，重鏈可變區(qū)序列包括在一或多個如下位置的人殘基或人共有序列殘 基(優(yōu)選至少五個、十個、十二個或所有)(在輕鏈可變區(qū)的FR中)4L， 35L, 36L, 38L, 43L, 44L, 58L, 46L, 62L, 63L, 64L, 65L, 66L, 67L, 68L, 69L, 70L, 71L, 73L, 85L, 87L, 98L和/或(在重鏈可變區(qū)的FR中)2H, 4H, 24H, 36H, 37H, 39H, 43H, 45H, 49H, 58H, 60H, 67H, 68H, 69H， 70H， 73H, 74H, 75H， 78H， 91H, 92H, 93H和/或103H (按照Kabat編號)。一個實施方案中，所述蛋白質(zhì)包含至少一個非人CDR,如鼠CDR，如 P2D10的CDR,或其突變體，和至少一個框架，該框架與P2D10的框架有 至少一個氨基酸，如至少5、 8、 10、 12、 15或18個氨基酸不同。例如，所 述蛋白質(zhì)包含一個、兩個、三個、四個、五個或六個這樣的非人CDR,并且在HCFR1、 HCFR2、 HCFR3、 LCFR1、 LC FR2和LC FR3的至少三個 中有至少一個氨基酸不同。一個實施方案中，所述蛋白質(zhì)的重鏈或輕鏈可變區(qū)序列包含氨基酸序 列，它與本文所述抗體(如P2D10、 huP2D10-l或huP2D10-2)的可變區(qū)序列 有至少80%，85%，90%，95%,97%，98%,99%或更高的相同性；或者與本文所 述抗體(如P2D10、 huP2D10-l或huP2D10-2)的可變區(qū)序列有至少1或5個 殘基、但少于40、 30、 20、或10個殘基不同。一個實施方案中，兩個可變區(qū)中的一個或全部兩個包含分別源自鼠抗體 (如P2D10)和人源化抗體(如56-84m和K107)或種系序列的框架區(qū)氨基酸位 置。例如，所述可變區(qū)包括一些與鼠抗體和人抗體(或種系序列)都相同的位 置，因為后兩種抗體在那個位置是相同的。剩余的那些在鼠抗體和人抗體中 有不同的框架位置中，至少50、 60、 70、 80或90%的可變區(qū)位置優(yōu)選與人 抗體(或種系序列)相同，而不是與鼠抗體相同。這些剩余的框架位置無一、 或至少有一個、兩個、三個或四個可以與鼠抗體相同，而不是與人抗體相同。 例如，HCFR1中的一個或兩個這些位置可以是鼠的；HCFR2中的一個或兩 個這些位置可以是鼠的；FR3中的一個、兩個、三個或四個這些位置可以是 鼠的；LCFR1中的一個、兩個、三個或四個這些位置可以是鼠的；LCFR2 中的一個或兩個這些位置可以是鼠的；LC FR3中的一個或兩個這些位置可 以是鼠的。一個實施方案中，所述蛋白質(zhì)的重鏈或輕鏈可變區(qū)序列包含氨基酸序 列，該氨基酸序列由本文所述核酸序列編碼，或由與本文所述核酸序列(例 如具體的核酸序列或編碼本文所述氨基酸序列的核酸序列)或其互補鏈雜交的核酸編碼，所述雜交例如在低嚴(yán)謹(jǐn)度、中嚴(yán)謹(jǐn)度、高嚴(yán)謹(jǐn)度、或極高嚴(yán)謹(jǐn) 度條件進(jìn)行。抗TWEAK抗體可以衍生或連接另一個功能分子，如另一個肽、蛋白質(zhì) 或化合物。例如，所述抗體可以(如通過化學(xué)偶聯(lián)、基因融合、非共價締合 或其它方式)功能性連接一或多個其它分子實體(entities)，如另 一種抗體(如雙 特異性或多特異性抗體)、毒素、放射性同位素、聚合物、細(xì)胞毒劑或細(xì)胞 生長抑制劑等。另一方面，本發(fā)明公開了組合物，如藥物組合物，其包含可藥用載體和 抗TWEAK抗體，例如本文所述抗TWEAK抗體。另一實施方案中，將抗TWEAK抗體(如其藥物組合物)給予受試者，該 受試者需要抗TWEAK抗體療法，或其狀況可^l該抗體改善。例如，可以將 抗TWEAK抗體給予受試者，該受試者已患有或有風(fēng)險患有炎性疾病、免疫 病、自身免疫病、神經(jīng)性疾病(neuronal disorder)、瘤形成性疾病(neoplastic disorder)或本文所述其它疾病。 一個實施方案中，本文所述抗TWEAK抗體 用于制備治療炎性疾病、免疫病、自身免疫病、神經(jīng)性疾病、瘤形成性疾病 或其它本文所述疾病的藥物。另一方面，本發(fā)明涉及治療受試者的TWEAK-相關(guān)性病癥的方法。所述 方法包括給予受試者足夠治療(如改善或預(yù)防)TWEAK-相關(guān)性病癥的量的 抗TWEAK抗體?？梢詫⒖筎WEAK抗體單獨給予受試者，或與其它本文所 述的治療性方式聯(lián)用。 一個實施方案中，該受試者是哺乳動物，如人，例如 患有TWEAK-相關(guān)性病癥(如本文所述病癥)的人。所述抗體可用于改善這些 病癥的一或多種癥狀。術(shù)語"治療"指以有效的量、方式和/或模式施用療法， 來改善或預(yù)防與病癥(如本文所述病癥)有關(guān)的狀況、癥狀或參數(shù)，或預(yù)防病 癥的發(fā)作、進(jìn)展或惡化，達(dá)到統(tǒng)計學(xué)顯著的程度或?qū)Ρ绢I(lǐng)域技術(shù)人員而言可 檢測的程度。因此，治療可獲得治療性和/或預(yù)防性益處。有效的量、方式或 模式可因受試者而異并可以為受試者定制(tailor)。 一個實施方案中，本文所 述抗TWEAK抗體被用于制備治療TWEAK-相關(guān)性病癥的藥物。另 一方面，本發(fā)明涉及調(diào)控TWEAK和TWEAK受體蛋白質(zhì)之間的相互 作用的方法。例如，抗TWEAK抗體可用于降低或抑制TWEAK與TWEAK 受體如Fnl4結(jié)合。該方法包括使TWEAK或含TWEAK的復(fù)合物與該抗體 接觸。該方法可用于體外細(xì)胞，如培養(yǎng)的細(xì)胞，如體外或離體(e;c Wvo)培養(yǎng) 的細(xì)胞。例如，表達(dá)TWEAK受體的細(xì)胞能夠在體外在培養(yǎng)基中培養(yǎng)，而且 可以通過將抗TWEAK抗體加入培養(yǎng)基來實現(xiàn)接觸步驟。或者，該方法可以 在存在于受試者中的細(xì)胞上進(jìn)行，如作為體內(nèi)(如治療性或預(yù)防性)方案的一 部分。例如，抗TWEAK抗體可以局部或全身遞送。 一個實施方案中，本文 所述抗TWEAK抗體用于制備調(diào)控TWEAK和TWEAK受體蛋白質(zhì)之間的 相互作用的藥物。該方法可包括在允許TWEAK與TWEAK受體復(fù)合物或其亞基相互作 用的條件下，使TWEAK與TWEAK受體復(fù)合物或其亞基接觸，從而形成 TWEAK/TWEAK受體混合物。通常，可以以有效量提供抗TWEAK抗體，從而TWEAK7TWEAK受體混合物與抗TWEAK抗體的接觸會調(diào)控如干擾 (如抑制、阻斷或降低)TWEAK和該受體蛋白質(zhì)之間的相互作用或TWEAK 的至少一種功能，如TWEAK介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)。本發(fā)明公開還涉及包含核苷酸序列的核酸，其編碼抗TWEAK抗體的重 鏈和輕鏈可變區(qū)，如本文所述。例如，本發(fā)明涉及分別編碼P2D10的重鏈和 輕鏈可變區(qū)的第一和第二核酸。另一方面，本發(fā)明涉及包含本文所述核酸的 宿主細(xì)胞和載體。本發(fā)明公開還涉及TWEAK(如人TWEAK)的表位，其被P2D10和能與 所述表位相互作用的蛋白質(zhì)識別。例如，包含該表位的蛋白質(zhì)和肽可用于產(chǎn) 生或篩選其它與所述表位相互作用的可結(jié)合化合物，例如蛋白質(zhì)如抗體或d、 分子。例如，包含該表位的肽可用作免疫原或篩選表達(dá)文庫的靶標(biāo)。也可以 評價化合物與所述肽相互作用的能力，或通過確定圖譜(mapping)或結(jié)構(gòu)，來 評價化合物與所述表位(如在成熟TWEAK中)相互作用的能力。評價例如包 含確定在存在竟?fàn)幮訮2D10抗體時所述化合物是否能夠與TWEAK相互作 用。本發(fā)明還公開了體內(nèi)將試劑，如藥物(包括遺傳試劑(genetic agent))或細(xì) 胞毒劑與抗TWEAK抗體(如P2D10或其它本文所述的抗體)一起，遞送或靶 向到表達(dá)TWEAK的細(xì)胞或結(jié)構(gòu)的方法。* * 氺本文所用的術(shù)語"抗體"指蛋白質(zhì)，其包含至少一個免疫球蛋白可變區(qū)， 如提供免疫球蛋白可變區(qū)或免疫球蛋白可變區(qū)序列的氨基酸序列。例如，抗 體可包含重鏈(H)可變區(qū)(本文縮寫為VH)，和輕鏈(L)可變區(qū)(本文縮寫為 VL)。在另一個例子中，抗體包含兩個重鏈(H)可變區(qū)和兩個輕鏈(L)可變區(qū)。 術(shù)語"抗體，，包含抗體的抗原結(jié)合片段(例如單鏈抗體、Fab片段、F(ab')2片段、 Fd片段、Fv片段、和dAb片段)以及全長抗體，如全長的IgA，IgG(如IgGl, IgG2， IgG3， IgG4), IgE, IgD， IgM (及其亞型)類型的免疫J求蛋白。術(shù)語"全長抗 體，，指被加工去除了任何信號序列的具有天然抗體至少96%長度的抗體。全 長抗體能夠包含天然抗體的全長，如天然抗體(如IgGl， IgG2， IgG3， IgG4)從 氨基末端殘基到羧基末端殘基的殘基。"免疫球蛋白可變區(qū)序列，，指形成免疫球蛋白可變區(qū)結(jié)構(gòu)的氨基酸序列。如，所述序列可以包含或不包含一個、兩個或更多個N-或C-末端氨基酸，或可以包含其它與蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的形成匹配的改變。"分離的組合物"指從含有該組合物的天然樣本至少一種組分的至少90%取出的組合物。人工制備的或天然的組合物可以是"至少，，具有某種純度 的"組合物"，如果所需的種類或種類群基于重量比(weight-weight basis)是至 少5， 10， 25， 50， 75， 80, 90, 95， 98或99%純的。"表位"指抗體所結(jié)合的靶化合物上的位點。當(dāng)靶化合物是蛋白質(zhì)時，例 如，表位可指抗體所結(jié)合的氨基酸(具體為氨基酸側(cè)鏈)。重疊表位包含至少 一個共同的氨基酸殘基，如至少2,3,4或5個共同的氨基酸殘基。本文所用的術(shù)語"在低嚴(yán)謹(jǐn)度、中嚴(yán)謹(jǐn)度、高嚴(yán)謹(jǐn)度、或極高嚴(yán)謹(jǐn)度條 件雜交"描述了雜交和洗滌的條件。進(jìn)行雜交反應(yīng)的指導(dǎo)可見于O^rew 尸ratocoZs i" MoZecwZar Bio/ogy, John Wiley & Sons, N.Y. (1989)， 6.3.1-6.3.6。此 文獻(xiàn)中描述了水相和非水相方法，任一種都可用。本文的具體雜交條件如下 l)低嚴(yán)謹(jǐn)度雜交條件是在6X氯化鈉/檸檬酸鈉(SSC)中在約45°C雜交，之后 在0.2X SSC, 0.1% SDS中至少在50。C(對于低嚴(yán)謹(jǐn)度條件，洗滌的溫度應(yīng)升 高到55。C)洗滌兩次；2)中嚴(yán)謹(jǐn)度雜交條件是在6XSSC中在約45。C雜交， 之后在0.2X SSC， 0.1% SDS中在60°C洗滌一或多次；3)高嚴(yán)謹(jǐn)度雜交條件 是在6XSSC中在約45。C雜交，之后在0.2XSSC, 0.1%SDS中在65。C洗滌 一或多次；并且優(yōu)選4)極高嚴(yán)謹(jǐn)度雜交條件是在0.5M磷酸鈉，7% SDS中 在65。C雜交，之后在0.2XSSC, 1%SDS中在65。C洗滌一或多次。高嚴(yán)謹(jǐn) 度條件(3)是優(yōu)選的，除特別指出之外應(yīng)使用該條件。"TWEAK-相關(guān)疾病"是由TWEAK引起或因給予TWEAK阻斷劑而改變 其狀況、癥狀或發(fā)病風(fēng)險的任何疾病。除非另外指出，本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語都具有本發(fā)明所屬領(lǐng)域的一般技術(shù)人員通常理解的含義。如下描述了合適的方法和材料，但在本文 所述的實踐或試驗中也可以使用與本文所述的類似或等同的方法和材料。另 外，本發(fā)明關(guān)于ChothiaCDR所述的實施方案也可用KabatCDR實現(xiàn)。所有出版物、專利申請、專利和本文所述的其它參考文獻(xiàn)都全文引入本 文作為參考。如有矛盾，以本發(fā)明說明書(包括定義)為準(zhǔn)。另外，材料、方 法和實施例僅用于舉例并不應(yīng)起限制作用。發(fā)明內(nèi)容P2D10是舉例的鼠抗體，其特異性結(jié)合人TWEAK并抑制TWEAK功能。 也公開了 P2D10抗體的變體，包括舉例的人源化變體。這些抗體、其它抗 TWEAK抗體、及其它TWEAK阻斷劑可用于治療或預(yù)防TWEAK-介導(dǎo)的疾 病，如炎性疾病及其它本文 >開的疾病?？筎WEAK抗體本文的7>開包4舌具體舉例的抗TWEAK抗體如P2D10、 huP2D10-l 、和 huP2D10-2的序列。可例如，通過制備并表達(dá)編碼所述(recited)氨基酸序列的 合成基因，或者通過突變?nèi)朔N系基因來提供編碼所述氨基酸序列的基因，從 而制備具體抗體如上述這些抗體。進(jìn)一步地，這些抗體及其它抗TWEAK抗 體可例如用一或多種以下方法來制備。現(xiàn)有多種獲得抗體，尤其人抗體的方法。 一種舉例的方法包括篩選蛋白 質(zhì)表達(dá)文庫，例如噬菌體或核糖體展示文庫。對噬菌體展示的描述見例如美 國5,223,409; Smith (1985) S".e"ce 228:1315-1317; WO 92/18619; WO 91/17271; WO 92/20791; WO 92/15679; WO 93/01288; WO 92/01047; WO 92/09690;和WO 90/02809。對Fab在噬菌體上展示的描述見例如美國專利 5,658,727; 5,667,988;和5,885,793。除了應(yīng)用展示文庫，其它方法也可用于獲得結(jié)合TWEAK的抗體。例如， 可以用TWEAK蛋白質(zhì)或其肽作為非人動物如嚙齒類動物如小鼠、倉鼠或大 鼠的抗原。一個實施方案中，非人動物包含人免疫球蛋白基因的至少一部分。例如， 可以用人Ig基因座的大片段改造有小鼠抗體生成的缺陷的小鼠品系。用雜 交瘤技術(shù)，可以制備并選擇具有所需特異性的由所述基因衍生的抗原特異性 單克隆抗體。參見例如XENOMOUSE , Green et al. (1994)胸臟 7:13-21, U.S. 2003-0070185, WO 96/34096,和WO 96/33735。另一個實施方案中，從非人動物獲得單克隆抗體，然后進(jìn)行修飾，如人 源化或脫敏。Winter描述了舉例的可用于制備本文所述人源化抗體的CDR-移植方法(U.S. 5,225,539)。具體人抗體的所有或一些CDR可以用非人抗體的 至少部分來置換?？赡軆H需要置換結(jié)合所需的CDR或這些CDR的結(jié)合決定 簇，來獲得結(jié)合TWEAK的有效人源化抗體。人源化抗體可以通過用來自人Fv可變區(qū)的等效序列置換不直接參與抗 原結(jié)合的Fv可變區(qū)序列來制備。制備人源化抗體的常用方法見Morrison, S.L. (1985) Sc/e"ce 229:1202-1207, Oi et al. (1986) 5/o歸m々廳4:214，和US 5，585，089; US 5,693,761; US 5，693，762; US 5,859,205;和US 6，407,213。那些 方法包括分離、操作(manipulate)和表達(dá)核酸序列，該序列編碼來自至少一條 重鏈或輕鏈的所有或部分的免疫球蛋白Fv可變區(qū)。這些核酸的來源是本領(lǐng) 域技術(shù)人員公知的，并且例如，可以從產(chǎn)生抗預(yù)定靶的抗體的雜交瘤(如上 述)，從種系免疫球蛋白基因，或從合成的構(gòu)建體獲得。然后將編碼人源化 抗體的重組DNA克隆到合適的表達(dá)載體中。人種系序列，例如，公開在Tomlinson, LA. et al. (1992) J Mo/. B/o/. 227:776-798; Cook, G. R et al. (1995)/www"o/. 16: 237-242; Chothia， D.et al. (1992) J. Mo/.歷o. 227:799-817;和Tomlinson et al. (1995) ￡MBO J 14:4628-4638中。V BASE目錄提供了人免疫球蛋白可變區(qū)序列的全面目錄 (Tomlinson, I.A. e/1 a/.編輯的MRC Centre for Protein Engineering, Cambridge, UK)。這些序列也可用作人序列(如框架區(qū)和CDR)的來源。例如美國專利 6,300,064所述，也可使用共有人框架區(qū)。也可以通過具體缺失人T細(xì)胞表位或用WO 98/52976和WO 00/34317 公開的方法"脫敏"，來修飾非人的結(jié)合TWEAK的抗體，簡而言之，可以分 析抗體的重鏈和輕鏈可變區(qū)中結(jié)合MHCII類的肽；這些肽代表潛在的T-細(xì) 胞表位(如WO 98/52976和WO 00/34317所限定)。為了纟全測潛在的T-細(xì)胞表 位，可以應(yīng)用稱為"肽聯(lián)系(threading)，，的計算機建模方法，另外可以在人MHC II類結(jié)合肽的數(shù)據(jù)庫中檢索在Vh和Vl序列中存在的基序，如WO 98/52976 和WO 00/34317所述。這些基序結(jié)合18個主要MHC II類DR同種異型 (allotype)中的任一個，由此構(gòu)建潛在的T細(xì)胞表位?？梢酝ㄟ^取代可變區(qū)中 的少量氨基酸殘基，或優(yōu)選通過多個單氨基酸取代，去除所檢測的潛在T-細(xì)胞表位。盡可能地進(jìn)行保守取代。通常，但不是絕對地，可以使用在人種 系抗體序列的位置常見的氨基酸。在確定了脫敏性改變后，通過誘變或其它 合成方法(如從頭合成，盒式置換等)構(gòu)建編碼Vh和Vl的核酸。誘變后的可 變區(qū)序列可任選與人的恒定區(qū)，如人IgGl或k恒定區(qū)融合。在一些情況下，潛在的T細(xì)胞表位可包括已知或據(jù)預(yù)測對抗體功能重要 的殘基。例如，潛在的T細(xì)胞表位通常偏向(biased)CDR。另外，潛在的T 細(xì)胞表位可出現(xiàn)在對于抗體結(jié)構(gòu)和結(jié)合重要的框架殘基上。導(dǎo)致去除這些潛 在表位的那些改變有時需要更多檢查(scmtiny),如通過制備并測試有無此改變的鏈來檢查。如果可以，與CDR重疊的潛在T細(xì)胞表位可以通過CDR區(qū) 域外的取代來除去。有時，CDR區(qū)域內(nèi)的改變是唯一選擇，因此可以測試 有無此取代的變體。其它時候，去除潛在T細(xì)胞表位所需的取代是位于框架 內(nèi)可能對抗體結(jié)合關(guān)鍵的殘基位置上。此時，測試有無此取代的變體。因此， 有時設(shè)計多種用不同方式脫敏的重鏈和輕鏈可變區(qū)，并測試多種重鏈/輕鏈組 合，來鑒定最佳脫敏抗體。然后，通過考慮不同變體的結(jié)合親和力及脫敏程 度，尤其可變區(qū)中仍存在的潛在T細(xì)胞表位數(shù)，來選擇最終的脫敏抗體?？?用脫敏修飾任何抗體，如包含非人序列的抗體，如合成抗體、鼠抗體、其它 非人單克隆抗體，或從展示文庫分離的抗體。也可使用其它人源化抗體的方法。例如，其它方法可以依賴于抗體的三 維結(jié)構(gòu)，在結(jié)合決定簇的三維結(jié)構(gòu)附近的框架位置，以及免疫原性肽序列。 參見例如WO 90/07861;美國專利5,693,762; 5,693,761; 5,585,089; 5,530,101; 和6,407,213; Tempest et al. (1991) B/o/ec/wo/o^ 9:266-271。還有另 一種方法 稱為"人源化改造(humaneering)"，對其的描述見例如U.S. 2005-008625。所述抗體可包含人Fc區(qū)，如野生型Fc區(qū)或包含一或多個改變的Fc區(qū)。 一個實施方案中，改變?nèi)缤蛔兒愣▍^(qū)以修飾所述抗體的性質(zhì)(如提高或降低 如下的一或多個Fc受體結(jié)合，抗體糖基化，半胱氨酸殘基數(shù)目，效應(yīng)細(xì)胞 功能，或補體功能)。例如，人IgGl恒定區(qū)可在一或多個殘基，如殘基234 和237之一或多個發(fā)生突變。抗體可在重鏈CH2區(qū)有突變，所述突變降低 或改變效應(yīng)功能，如Fc受體結(jié)合和補體活化。例如，抗體可有美國專利 5，624，821和5,648,260所述的突變?？贵w也可有穩(wěn)定免疫球蛋白兩條重鏈之 間二辟b鍵的突變，如IgG4鉸鏈區(qū)中的突變，這在本領(lǐng)域已經(jīng)公開(如Angal et al. (1993) Mo/. //www"o/. 30:105-08)。也見例如U.S. 2005-0037000。親和力成熟。 一個實施方案中，例如通過誘變修飾抗TWEAK抗體，來 提供經(jīng)修飾的抗體的庫(pool)。然后評價這項經(jīng)修飾的抗體，來鑒定功能性 特征發(fā)生改變(如結(jié)合提高，穩(wěn)定性提高，抗原性降低或體內(nèi)穩(wěn)定性提高) 的一或多種抗體。 一個方案(implementation)中，用展示文庫技術(shù)來選擇或篩 選經(jīng)修飾的抗體的庫。然后，例如通過使用較高的嚴(yán)謹(jǐn)度或更有竟?fàn)幜Φ慕Y(jié) 合和洗滌條件從第二文庫中鑒定出具有較高親和力的抗體。也可使用其它篩 選技術(shù)。一些方案中，所述誘變靶向那些已知或很有可能位于結(jié)合界面的區(qū)域。 例如，如果所鑒定的結(jié)合蛋白質(zhì)是抗體，那么誘變可以針對本文所述重鏈或輕鏈的CDR區(qū)。進(jìn)一步地，誘變可以針對鄰近或鄰接CDR的框架區(qū)，如特 別是在與CDR相距(junction) 10、 5或3個氨基酸殘基范圍內(nèi)的框架區(qū)。對 于抗體，誘變也可限于一或數(shù)個CDR,如進(jìn)行逐步改進(jìn)。一個實施方案中，用誘變來使抗體更類似一或多個種系序列。 一種舉例 的種系化方法包括鑒定與所述分離的抗體的序列類似(具體數(shù)據(jù)庫中最類 似)的一或多個種系序列。然后在該分離的抗體中以增加方式(incrementally)、 組合方式或兩種方式一起(在氨基酸水平)進(jìn)行突變。例如，制備核酸文庫， 使其包含編碼一部分或所有可能的種系突變的序列。然后評估被突變的抗 體，從而例如鑒定相比于分離的抗體具有一或多個其它種系殘基、且仍有效 (如具有功能許不敢活性)的抗體。 一個實施方案中，向分離的抗體中引入盡 可能多的種系殘基。一個實施方案中，用誘變將一或多個種系殘基取代或插入到CDR區(qū)中。 例如，種系CDR殘基可以來自與被修飾的可變區(qū)類似(如最類似)的種系序 列。誘變后，可以評估所述抗體的活性(結(jié)合或其它功能活性)，來確定所述 一或多個種系殘基是否被耐受。在框架區(qū)可進(jìn)行類似誘變?？梢砸圆煌绞竭x擇種系序列。例如，選擇符合預(yù)定的可選性或相似性 標(biāo)準(zhǔn)的種系序列，所述標(biāo)準(zhǔn)為，例如與供體非人抗體相比有至少某個百分比 的同一性，如至少75, 80, 85, 90， 91, 92, 93, 94， 95, 96, 97, 98, 99，或99.5%的 同一性?？捎弥辽?,3,5，或IO個種系序列進(jìn)行選擇。對于CDR1和CDR2, 鑒定相似的種系序列包括選擇一個這樣的序列。對于CDR3，鑒定相似的種 系序列包括選擇一個這樣的序列，但也可包括使用兩個分別構(gòu)成氨基末端部 分和羧基末端部分的種系序列。其它方案中，使用超過一個或兩個種系序列， 從而例如形成共有序列。其它實施方案中，可修飾所述抗體，使之具有改變的糖基化模式(即從 原來的或天然的糖基化模式發(fā)生改變)。本文中的"改變"指缺失了 一或多個碳 水化合物部分和/或?qū)⒁换蚨鄠€糖基化位點添加到原來的抗體中。將糖基化位 點加入迄今公開的抗體中可通過改變氨基酸序列、使其包含糖基化位點共有 序列而實現(xiàn)；這些技術(shù)是本領(lǐng)域公知的。其它增加抗體上的碳水化合物部分 數(shù)目的方法是通過化學(xué)方法或酶促方法將糖苦與抗體的氨基酸殘基偶聯(lián)。對這些方法的描述見WO 87/05330和Aplin and Wriston (1981) C7 C CWf. T ev. 歷oc/2ew. 22:259-306。可以如本領(lǐng)域所述通過化學(xué)方法或酶促方法去除在抗 體上存在的任何碳水化合物部分(Hakimuddin et al. (1987) Jrc/ .歷oc/zew. B/op/7;As. 259:52; Edge et al. (1981)爿"a/. B/oc/zem. 118:131;和Thotakura et al. (1987) Me仇五wz;;wo/. 138:350)。美國專利5,869,046介紹了 一種修飾，其通 過提供拯救受體結(jié)合表位來延長體內(nèi)半壽期。一個實施方案中，抗體具有與P2D10的CDR序列非實質(zhì)區(qū)別的CDR 序列。非實質(zhì)區(qū)別包括次要氨基酸改變，如CDR，如Chothia或Kabat CDR 序列中任何通常的5-7個氨基酸中有1或2個被取代。通常氨基酸被具有相 似電荷、疏水性或立體化學(xué)特征的相關(guān)氨基酸取代。這些取代在本領(lǐng)域一般 技術(shù)人員了解的范圍內(nèi)。與CDR中不同，可以在結(jié)構(gòu)框架區(qū)(FR)進(jìn)行更為 實質(zhì)許不敢的改變而不會負(fù)面影響抗體的結(jié)合性質(zhì)。對FR的改變包括但不 限于，人源化非人衍生的框架或改造那些對抗原接觸或穩(wěn)定結(jié)合位點重要的 框架殘基，如改變恒定區(qū)的類或亞類，改變那些可能改變效應(yīng)功能如Fc受 體結(jié)合功能的具體氨基酸殘基(Lund et al. (1991) / /讓w". 147:2657-62; Morgan et al. (1995) /mm朋o/ogy 86:319-24),或改變該恒定區(qū)的來源物種。抗TWEAK抗體可以是全長抗體形式，或是抗體片段形式，如Fab, F(ab，)2, Fd, dAb和scFv片段。其它片段包括包含單個可變區(qū)的蛋白質(zhì)，如 camel或camdized domain。參見例如U.S. 2005-0079574和Davies et al. (1996) 尸廠她/w5"g. 9(6):531-7?？贵w制備?？梢栽诩?xì)菌細(xì)胞如大腸桿菌細(xì)胞中制備一些抗體如Fab。也 可以在真核細(xì)胞中制備抗體。 一個實施方案中，抗體(如scFv)在畢赤酵母 (P油'a)(參見，例如Powers et al. (2001) J Immunol Methods. 251:123-35)、漢 遜酵母(Z/朋化w/a)或糖酵母(5bcc^rawyce"等酵母細(xì)胞中表達(dá)。在優(yōu)選的實施方案中，抗體在哺乳動物細(xì)胞中產(chǎn)生。表達(dá)抗體的哺乳動 物宿主細(xì)胞例如包括中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞(包括W /FCHO細(xì)胞，見 Urlauband Chasin (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77: 4216-4220，使用DHFR 選擇標(biāo)記，例如見KaufmanandSharp(1982)Mo1. Biol. 159: 601-621)、淋巴 細(xì)胞系例如NS0骨髓瘤細(xì)胞和SP2細(xì)胞、COS細(xì)胞、以及轉(zhuǎn)基因動物(例如 轉(zhuǎn)基因哺乳動物)的細(xì)胞。例如，所述細(xì)胞是哺乳動物上皮細(xì)胞。重組表達(dá)載體除了攜帶編碼多樣化免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的核酸序列，還可 以攜帶其它序列，如調(diào)節(jié)宿主細(xì)胞中的載體復(fù)制的序列(如復(fù)制起點)和選擇 性標(biāo)記基因。選擇性標(biāo)記基因有利于選出引入了所述載體的宿主細(xì)胞(參見，例如美國專利4,399,216， 4,634,665和5,179,017)。例如，通常選擇性標(biāo)記基 因賦予已經(jīng)引入載體的宿主細(xì)胞對藥物，如G418、潮霉素或曱氨蝶呤 (methotrexate)的4元'l"生。在一例抗體表達(dá)系統(tǒng)中，將編碼抗體重鏈和抗體輕鏈的重組表達(dá)載體通 過磷酸鈣介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染引入^ /rCHO細(xì)胞。在該重組表達(dá)載體內(nèi)，所述抗體 的重鏈和輕鏈基因各自與增強子/啟動子調(diào)節(jié)元件(如源自SV40、 CMV、腺 病毒等，諸如CMV增強子/AdMLP啟動子調(diào)節(jié)元件或SV40增強子/AdMLP 啟動子調(diào)節(jié)元件)可操作連接，來驅(qū)動所述基因的高水平轉(zhuǎn)錄。重組表達(dá)載體也攜帶DHFR基因，其允許通過曱氨蝶呤選4奪/擴(kuò)增來選出轉(zhuǎn)染了所述載 體的CHO細(xì)胞。對選出的轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞進(jìn)"f亍培養(yǎng)，使之表達(dá)抗體重鏈和輕 鏈，并從培養(yǎng)基中回收所述抗體。用標(biāo)準(zhǔn)分子生物學(xué)技術(shù)制備重組表達(dá)載體， 轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞，選出轉(zhuǎn)化體，培養(yǎng)宿主細(xì)胞，并從培養(yǎng)基回收所述抗體。例 如，可以利用蛋白A或蛋白G偶聯(lián)基質(zhì)通過親和層析分離一些抗體。對于一些含F(xiàn)c區(qū)的抗體，抗體制備系統(tǒng)優(yōu)選合成含糖基化Fc區(qū)的抗體。 例如，IgG分子的Fc區(qū)在CH2區(qū)的天冬酰胺297處糖基化。該天冬酰胺是 用雙觸角型寡糖(biantennary-type oligosaccharide)進(jìn)行修飾的位置。已證實， 這種糖基化是Fc丫受體和補體Clq介導(dǎo)的效應(yīng)功能所必需的(Burton and Woof (1992)廟/m騰"o/. 51:1-84; Jefferis et al. (1998) /畫畫/.仏v. 163:59-76)。在一個實施方案中，F(xiàn)c區(qū)可以在哺乳動物表達(dá)系統(tǒng)中產(chǎn)生，從 而使對應(yīng)于天冬酰胺297的殘基適當(dāng)糖基化。所述抗體的Fc區(qū)或其它區(qū)域 也可包括其它真核翻譯后修飾?？贵w也可以由轉(zhuǎn)基因動物產(chǎn)生。例如，美國專利5，849，992描述了在轉(zhuǎn) 基因哺乳動物乳腺中表達(dá)抗體的方法。構(gòu)建轉(zhuǎn)基因，使其含有乳特異性啟動 子、編碼目標(biāo)抗體的核酸序列、以及用于分泌的信號序列。由這類轉(zhuǎn)基因哺 乳動物中的雌性動物產(chǎn)出的乳汁含有分泌至其中的目標(biāo)抗體。所述抗體可以 從乳汁中純化，或在一些情況下直接使用。鑒定抗體的結(jié)合特性可以用任何標(biāo)準(zhǔn)方法如下述方法之一來測量 BIACOREtm分析，酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)，熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET), X線晶體成像技術(shù)，序列分析和掃描誘變。可以在體外或在患如本文所述疾 病的動物模型中評價蛋白質(zhì)抑制TWEAK的一或多種活性的能力。優(yōu)選地， 所述抗體具有統(tǒng)計學(xué)顯著的效果，這表明所述抗體抑制TWEAK的一或多種 活性。一個實施方案中，評價抗體對TWEAK刺激皮膚成纖維細(xì)胞中IL-8、 MMP-l 、 PGE2、 IL-6、 IP-10和RANTES生成的能力的抑制。合適的實驗條 件參見Chicheportiche et al. (2002)爿w/7n'他4(2):126-133。另一個實施方案中，評價抗體抑制TWEAK刺激內(nèi)皮細(xì)胞增殖的能力。 見例如US. 2003-0211993，其描述了如下進(jìn)行的增殖試驗(及其它可用的實 驗)將HVEC接種在96孔微滴板中達(dá)到亞匯合(subconfluence) (4000細(xì)胞/ 孔)，并在不加供應(yīng)商的生長補充物(supplier growth supplement)的CS-C培養(yǎng) 基中過夜培養(yǎng)。將培養(yǎng)基換成完全培養(yǎng)基或基礎(chǔ)培養(yǎng)基。在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中培 養(yǎng)細(xì)胞，該培養(yǎng)基中含或不含TWEAK (100 ng/ml), bFGF (1/500至1/1000 稀釋的bFGF生長補充物(Clonetics)或1 ng/ml (R&D Systems)), VEGF (10 ng/ml)或這些因子的組合。在指定情況下，也加入10嗎/ml的被測抗體或?qū)?照抗體。細(xì)胞在37。C、 5。/。C02溫育3天，用3&胸苷脈沖最后10小時的培 養(yǎng)物來測量增殖。用BETAPLATE (EG&G Wallac， Gaithersburg, Md.)測量 結(jié)合細(xì)胞的放射性。由TWEAK或由TWEAK與bFGF組合介導(dǎo)的增殖下降 表明，所述抗體有效阻斷TWEAK活性。表面等離子體共振(SPR)。目標(biāo)蛋白質(zhì)與靶(如TWEAK)的結(jié)合相互作用互作用，而無需標(biāo)記任何相互作用物(interactant)。在BIA芯片結(jié)合表面的質(zhì) 量改變(指示發(fā)生了結(jié)合)導(dǎo)致鄰近表面的光折射率的改變(表面等離子體共 振(SPR)的光學(xué)現(xiàn)象)。折射率的改變產(chǎn)生了可檢測信號，測定該信號作為生 物分子之間的實時反應(yīng)的指標(biāo)。對使用SPR的方法的描述見例如美國專利 5，641，640; Raether (1988) 5""/^zceSpringer Verlag; Sjolander and Urbaniczky (1991)」"a/. C7zem, 63:2338-2345; Szabo et al. (1995) Cw庁.Qp/". Sfra". 5Zo/. 5:699-705和BIAcore International AB (Uppsala, Sweden)提供的網(wǎng)上資源。來自SPR的信息可用于提供對生物分子與靶結(jié)合的平衡解離常數(shù)(Kd)及動力學(xué)參數(shù)包括K。n和Koff的準(zhǔn)確定量測量?？梢杂肂IAcore層析技術(shù)通過評估不同抗體彼此竟?fàn)幗Y(jié)合TWEAK(如人 TWEAK,尤其可溶性人TWEAK)的能力來直接定位表位，所述技術(shù)參見 Pharmacia BIAtechnoIogy Handbook, "Epitope Mapping", Section 6.3.2， (May 1994);也參見Johne et al. (1993) J /mww"o/. Me決o&， 160:191-198。在例如 Western印跡和免疫沉淀試驗中評價抗體的其它一般指導(dǎo)可參見^""6o^w /4丄aZ orato M朋wa/， ed. by Harlow and Lane, Cold Spring Harbor press (1988》。TWEAK-相關(guān)疾病抗TWEAK抗體(例如本文所述抗體)可用于治療多種病癥，如TWEAK-相關(guān)性疾病。例如，所述抗體可用于治療患者的炎性、免疫性或自身免疫性 疾病，以及瘤形成疾病。炎性TWEAK-相關(guān)疾病的例子包括，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié) 炎，4艮屑病關(guān)節(jié)炎(psoriatic arthritis), 強直'l"生脊斗主炎(ankylosing spondylitis), 炎'hi腸病(inflammatory bowel disease)(包才舌;貴瘍'l"生纟吉腸炎(ulcerative colitis) 禾口克隆病(Crohn's disease)), 4艮屑病(psoriasis)或炎'l"生月幾炎(inflammatory myositis)。可治療的炎性疾病的其它例子包括，郎格漢斯細(xì)胞(Langerhans-cell) 的組織細(xì)胞增多癥(histiocytosis),成人呼吸窘迫綜合征(adult respiratory distress syndrome)/閉塞性細(xì)支氣管炎(bronchiolitis obliterans),韋格納肉芽月中 病(Wegener's granulomatosis),月永管炎(vasculitis), 惡病質(zhì)(cachexia), 口炎 (stomatitis), 特發(fā)性肺纖維化(idiopathic pulmonary fibrosis)—, 皮月幾炎 (dermatomyositis)或多月幾炎(polymyositis), 非傳染性鞏月莫炎(non-infectious scleritis), 牽累肺的'f曼性結(jié)節(jié)'病(chronic sarcoidosis with pulmonary involvement),脊髓增生異常綜合征/有過多的未成熟細(xì)胞的難治性貧血 (myelodysplastic syndrome/refractory anemia with excess blasts), 潰瘍性結(jié)腸 炎，中度到重度的慢性阻塞性肺病和巨細(xì)胞動脈炎(giant cell arteritis)?？梢越o有風(fēng)險、已確診、或患有這些疾病之一的受試者施用抗TWEAK 抗體，其用量和施用時間導(dǎo)致提供總體(overal)治療效果。抗TWEAK抗體 可以單獨施用或與其它藥劑^:用。例如，USSN 60/679,518描述了if關(guān)用 TWEAK阻斷劑與TNF-a阻斷劑的方法。在組合療法的情況中，施用的量和 時間可以提供，例如協(xié)同治療效果。進(jìn)一步地，可以將施用TWEAK阻斷劑(有或無第二種藥劑)作為初步(primary)治療，例如一線治療(first line treatment)，或作為第二步(secondaiy)治療，例如在受試者對之前施用的療法 (即除了用TWEAK阻斷劑的療法之外的療法)反應(yīng)不足的情況下。 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)抗TWEAK抗體(如本文所述抗體)可用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及相關(guān)疾 病。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎("RA")是導(dǎo)致要見于關(guān)節(jié)的痛、肺(swelling)、僵硬 (stiffness)和功能喪失的慢性炎性疾病。RA常始于滑膜，即圍繞關(guān)節(jié)產(chǎn)生保 護(hù)性囊的膜。在很多患RA的個體中，白細(xì)胞從循環(huán)浸潤到滑膜造成持續(xù)的 異常炎癥(如滑膜炎(synovitis))。因此，滑膜發(fā)炎，引起發(fā)熱(warmth)、紅、 腫和痛。軟骨中的膠原蛋白(collagen)逐漸被破壞，使關(guān)節(jié)腔變窄，并最終破 壞骨。炎癥導(dǎo)致病變區(qū)的侵蝕性骨破壞。在這個階段，滑膜的細(xì)胞異常地生 長分裂，使正常的薄滑膜變厚，并導(dǎo)致關(guān)節(jié)觸之腫脹且浮腫(puffy)。隨RA進(jìn)展，異常的滑膜細(xì)胞侵入并破壞關(guān)節(jié)內(nèi)的軟骨和骨。支持并穩(wěn) 定關(guān)節(jié)的周圍肌肉、韌帶和肌腱(tendon)可變?nèi)?，不能正常工作。RA也可引 起更廣泛的骨流失(loss)，這可導(dǎo)致骨質(zhì)疏松(osteoporosis)，使骨變脆和更易 折斷。所有這些作用都導(dǎo)致與RA有關(guān)的痛、損害(impairment)和變形 (deformities)。會受影響的區(qū)域包括腕、指節(jié)(knuckle)、膝和足跖球(the ball of the foot)。通常，多個關(guān)節(jié)可受牽涉，甚至脊柱(spine)都可受累。在約25% 患RA的人中，小血管的炎癥可在皮下引起類風(fēng)濕小結(jié)，或腫塊(lump),它 們常形成于緊靠關(guān)節(jié)處。隨疾病進(jìn)展，還可積液，尤其是在踝(ankle)。很多 患RA的患者也發(fā)生貧血，或紅細(xì)胞正常數(shù)目降低。RA包括多種疾病亞型，如費爾蒂綜合征(Felty's syndrome),血清陰性的 RA，"經(jīng)典(classical)"RA,進(jìn)展性和/或復(fù)發(fā)性RA,和伴有脈管炎的RA。 一 些專家將此病分為1型和2型。l型較不常見，最多持續(xù)數(shù)月，不留下永久 殘疾。2型是慢性的，持續(xù)數(shù)年，有些例子中持續(xù)終生。RA也能表現(xiàn)為皮 下類風(fēng)濕小結(jié)，內(nèi)臟結(jié)節(jié)(visceral nodule),脈管炎導(dǎo)致的腿潰瘍或多發(fā)性單 神經(jīng)炎(mononeuritis multiplex), 胸月空或心包積液(pleural or pericardial effusions)，淋巴結(jié)病(lymphadenopathy)，費爾蒂綜合征，千燥綜合征(Sjogren's syndrome)和鞏膜外層炎(episcleritis)。這些疾病亞型以及顯示一或多種上述癥 狀的受試者可用本文所述抗體來治療。RA可用多種臨床衡量標(biāo)準(zhǔn)(measure)來評價。 一些指標(biāo)(indicia)舉例包括 總Sharp得分(TSS)， Sharp侵蝕得分，及HAQ殘疾指數(shù)(index)。本文的方 法可用于改進(jìn)這些指標(biāo)的至少一項。用于治療RA的抗TWEAK抗體的治療 性能可以在動物模型上評估，如用小鼠膠原蛋白誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎(mCIA)模型 (參見例如Stuart et al.， / C"". /"veM. 69:673-683 (1982)。多發(fā)性硬化抗TWEAK抗體(如本文所述抗體)可用于治療多發(fā)性硬化(MS)及相關(guān)疾 病。MS是中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，其特征為炎癥和脫髓鞘(loss of myelin sheath)。MS患者可用診斷臨床確診的(definite)MS的標(biāo)準(zhǔn)來鑒定，該標(biāo)準(zhǔn)是由診 斷MS的工作室(workshop)確立的(Poser et al.,爿朋.A^wra/. (1983) 13:227)。簡 單的說，患臨床確診的MS的個體已有兩次發(fā)病(attack)，并有任何(either)兩 種損害(lesion)的臨床實證(clinical evidence),或一種損害的臨床實證以及另 一種損害的能產(chǎn)生臨床癥狀體征的解剖或生化異常(paradinical)的實證。確 診的MS也可以用兩次發(fā)病的實證、腦脊液中IgG的寡克隆(oligoclonal)帶， 或發(fā)病、兩種損害的臨床實證及腦脊液中IgG的寡克隆帶的組合來診斷。對多發(fā)性硬化的有效治療可用多種不同方式來4全驗。用如下參數(shù)來評定 (gauge)治療的有效性。使用三個主要標(biāo)準(zhǔn)EDSS(殘疾狀況拓展量化表)、惡 化表現(xiàn)或MRI(磁共振成像(magnetic resonance imaging))。 EDSS是給MS所 致的臨床損傷(impairment)分級的工具(Kurtzke (1983) A^wo/o" 33:1444)。評 價8個功能系統(tǒng)的神經(jīng)學(xué)損傷的種類和嚴(yán)重程度。主要地，在治療前，評價 患者如下系統(tǒng)的損傷錐體(pyramidal)，小腦，腦干，感覺，腸和膀胱，視 覺，大腦等等。以指定的(defmed)間隔進(jìn)行隨訪。評分從0 (正常)到10 (MS 致死)。EDSS下降表示治療有效(Kurtzke (1994)」"".A^wra/. 36:573-79)。多發(fā)性硬化的動物模型例如實驗性自身免疫性腦炎(autoimmune encephalitis, EAE)小鼠才莫型，如Tuohy et al. (</ /mm畫/. (1988) 141: 1126-1130), Sobel et al. (J /www"o/. (1984) 132: 2393-240l)和Traugott (CW/ /mmw朋/. (1989) 119: 114-129)所述?？稍谡T導(dǎo)EAE前給小鼠施用本文所述抗 體。用特征性(characteristic)標(biāo)準(zhǔn)評價小鼠來確定所述抗體的效力。中風(fēng)抗TWEAK抗體(如本文所述抗體)可用于治療(如在最近的48， 24， 12， 8 或2小時內(nèi))患中風(fēng)如血檢才全塞性(thromboembolic)或出血性(hemorrhagic)中風(fēng)的受試者，或預(yù)防中風(fēng)，例如在有中風(fēng)風(fēng)險的受試者中預(yù)防中風(fēng)。方法例如參見USSN 60/653,811所述。中風(fēng)是由血管病導(dǎo)致的急性腦損傷的統(tǒng)稱。 中風(fēng)可分為至少兩大類出血性中風(fēng)(由血液滲漏到正常血管外導(dǎo)致)和缺血 性中風(fēng)(由于供血不足導(dǎo)致的腦缺血)。 一些可導(dǎo)致缺血性中風(fēng)的事件包括血 栓癥(thrombosis)，栓塞(embolism),和全身性灌注不足(systemic hypoperfusion) (導(dǎo)致缺血和低氧(hypoxia))。中風(fēng)通常由于缺氧(oxygen deprivation)和繼發(fā)事件導(dǎo)致神經(jīng)性死亡和腦 損傷。由于缺乏供血或其它損害導(dǎo)致死亡的腦區(qū)域被稱為梗死(infarct)。有時， 本文所述治療可用于縮小梗死范圍或使之最小化，如通過減少引起神經(jīng)性死 亡或損傷的繼發(fā)事件來實現(xiàn)。由在腦動脈壁上形成的血栓導(dǎo)致的腦動脈阻塞通稱為腦血栓形成。在腦 栓塞中，阻斷(blocking)腦動脈的栓塞性(occlusive)物質(zhì)來自(arises downstream)循環(huán)(如血栓從心臟被運到腦動脈)。因為難于分辨中風(fēng)是由于血 栓還是栓塞，使用術(shù)語血栓栓塞(thromboembolism)來包括這兩種中風(fēng)。全身 性灌注不足可能是血量(bloodlevel)下降，紅細(xì)胞壓積下降，低血壓或心臟不 能充分泵血的結(jié)果。而且，抗TWEAK抗體可用作預(yù)防性中風(fēng)療法或為其一部分，例如施用的受試者。神經(jīng)性疾病抗TWEAK抗體(如本文所述抗體)可用于治療或預(yù)防神經(jīng)性疾病，如才幾 才成寸生4申經(jīng)性創(chuàng)傷(mechanical neuronal trauma)禾口4申經(jīng)變'f生(neurodegenerative) 疾病。機械性神經(jīng)性創(chuàng)傷例如有脊髓損傷(SCI)和創(chuàng)傷性腦損傷(TBI)。神經(jīng) 變性疾病例如有肌萎縮性側(cè)索硬化(amyotrophic lateral sclerosis, ALS),進(jìn)行 性球麻痹(progressive bulbar palsy ， PBP),原發(fā)性側(cè)索硬化(primary lateral sclerosis, PLS)，進(jìn)4亍'l"生月幾萎縮(progressive muscular atrophy' PMA)，巾白金才兔 病(Parkinson's disease),亨廷頓病(Huntington's disease, HD),和阿爾茨海默 病(Alzheimer's Disease)。參見例如USSN 60/653,813。 一個實施方案中，神 經(jīng)性疾病主要特征為神經(jīng)細(xì)胞的石皮壞或死亡，所述神經(jīng)細(xì)胞如運動神經(jīng)元 (如ALS),基底神經(jīng)節(jié)(basal ganglia)的紋狀體神經(jīng)元(striatal neuron)和/或皮 質(zhì)(cortical)神經(jīng)元(如亨廷頓病)，黑質(zhì)(substantia nigra)神經(jīng)元(如帕金森病)。癌癥TWEAK及其受體可參與至少一些類型的癌癥如胰腺癌的發(fā)病?？?TWEAK抗體(如本文所述抗體)可用于治療或預(yù)防癌癥(如腺癌)及其它瘤形 成性疾病。參見例如2005年5月27日提交的"TREATMENT OF CANCER," USSN 60/685,465。藥物組合物抗TWEAK抗體(如本文所述抗體)可以配制成藥物組合物給受試者施 用，用于如治療本文所述的疾病。藥物組合物通常含有可藥用栽體。本文所 用的"可藥用載體"包括任何及所有溶劑、分散介質(zhì)(dispersionmedia)、包衣 (coating)、抗細(xì)菌劑和抗真菌劑、等滲劑和吸收延遲劑等生理相容性試劑。 該組合物可包括可藥用鹽，如酸加成鹽或堿加成鹽(參見例如Berge, S.M.，" g/. (1977)/尸/7。rw. Sc/. 66:1-19)。藥物配制是公知技術(shù)，并且進(jìn)一步描述在例如Gennaro (ed.), Aem/"gto": T7ze 5Wewce a"<i尸rac"ce o/尸/zarwaqy， 20th ed., Lippincott, Williams & Wilkins (2000) (ISBN: 0683306472); Ansel et al"尸W廳cew"ca/ D謹(jǐn)ge Fo隱aw/ Z>wg De"ve^y S,ms， 7th Ed" Lippincott Williams & Wilkins Publishers (1999) (ISBN: 0683305727); and Kibbe (ed,)， Z/a"必ooA: o/P/wmwcewf/ca/五扁) Ze"" 爿me".固尸/7畫a酒"cflM，",如'o"， 3rd ed. (2000) (ISBN: 091733096X)中。藥物組合物可以為多種形式。這些形式包括例如，液體、半固體及固 體劑型，如溶液(如注射液和灌注(infbsion)液)、分散體(dispersion)或懸浮液 (suspension)、 片劑、丸劑、粉劑、脂質(zhì)體和栓劑。優(yōu)選形式可以取決于用 藥才莫式和治療目的。通常，本文所述試劑的組合物采用注射液或灌注液的形 式。一個實施方案中，抗TWEAK抗體與賦形劑物質(zhì)，如氯化鈉，七水磷 酸氳二鈉(sodium dibasic phosphate heptahydrate)、 磷酸二氬鈉(sodium monobasic phosphate),以及穩(wěn)定劑 一起配制。它可以以例如緩沖溶液中的 合適濃度提供，并可以貯存在2-8。C。這些組合物可以經(jīng)非腸胃方式施用(如靜脈，皮下，腹腔或肌內(nèi)注射)。 本文所使用的術(shù)語"非腸胃施用"指除了腸道施用和局部表面施用以外的施 用模式，通常經(jīng)注射而施用，包括但不限于經(jīng)以下模式注射和輸注靜脈內(nèi) (intravenous)、月幾肉內(nèi)(intramuscular),動月':K內(nèi)(intraarterial)、鞘內(nèi)(intrathecal)、目艮眶內(nèi)(intraorbital)、心內(nèi)(intracardiac)、皮內(nèi)(intradermal)、 腹腔(intraperitoneal)、 經(jīng)氣管(transtracheal)、皮下(subcutaneous)、表皮下 (subcuticular)、 關(guān)節(jié)內(nèi)(intraarticular) 、 #皮膜下(subcapsular)、 蛛網(wǎng)膜下 (subarachnoid)、脊斗主內(nèi)(intraspinal)、石更膜夕卜(epidural)以及胸骨內(nèi)(intrasternal)。可以將組合物配制成溶液、微乳液、分散體、脂質(zhì)體或其它適于在高濃 度穩(wěn)定貯存的有序結(jié)構(gòu)。將合適的溶劑中的所需量的本文所述試劑，根據(jù)需 要摻入上文所列的一種或多種成分，再過濾除菌，可以制得無菌注射液。通 常，將本文所述試劑摻入含有基本M介質(zhì)和上文所列的所需其它成分的無 菌媒介物(vehicle)中，可制得分散體。在制備無菌注射液所用的無菌粉末的 情況下，優(yōu)選的制備方法是真空干燥和凍干，其從本文所述試劑和任何其它 所需成分的事先過濾除菌的溶液產(chǎn)生4分末。溶液的適當(dāng)流動性(proper fluidity) 可以通過以下方法維持，例如，利用卵磷脂之類的包衣、在分散體的情況下 維持所需的粒徑(particle size)、以及利用表面活性劑。注射組合物通過在組 合物中包含單硬脂酸鹽和明膠之類的延遲吸收劑，可延長吸收時間。在一些實施方案中，抗TWEAK抗體可以與保護(hù)該化合物免于快速釋 放的載體(carrier)—起制備，如控釋配制劑，包括植入體(implant)以及微嚢 遞送體系(microencapsulated delivery system)?？梢?吏用生物可降解的生物相 容性聚合物，如乙烯乙酸乙酯(ethylene vinyl acetate)、 聚酸酐 (polyanhydride)、聚乙醇酸(polyglycolic acid)、膠原蛋白、聚原酸酯 (polyorthoester)和聚乳酸(polylactic acid)。制備這類配制劑的多種方法已有 專利或者是眾所周知的。參見，例如^Sksto/"ed ""〃 Co"m3〃ed 7 e/eoye Z>wg DWv" 5y他ms,丄R. Robinson, ed.， Marcel Dekker, Inc., New York (1978)。抗TWEAK抗體可以用例如改進(jìn)其在循環(huán)(如血液、血清)或其它組織中 的穩(wěn)定性和/或滯留時間的組分(moiety)進(jìn)行修飾，所述改進(jìn)例如是改進(jìn)至少 1.5、 2、 5、 10或50倍。可以評估被修飾的抗體是否到達(dá)炎癥位置如關(guān)節(jié)。例如，抗TWEAK抗體可以與聚合物締合(如偶聯(lián))，所述聚合物例如基 本上無抗原性的聚合物，如聚環(huán)氧烷烴(polyalkylene oxide)或聚環(huán)氧乙烷 (polyethylene oxide)。合適的聚合物分子量可以差別很大?？梢圆捎梅肿恿?平均約200-約35,000道爾頓(或約1,000-約15,000、以及2,000-約12,500)的 聚合物。例如，抗TWEAK抗體可以與水溶性聚合物偶聯(lián)，所述聚合物例如親水 聚乙烯聚合物，如聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮。這類聚合物的例子包括，聚 環(huán)氧烷烴均聚物如聚乙二醇(PEG)或聚丙二醇、聚氧乙烯化多元醇 (polyoxyethylenated polyols)、它們的共聚物和嵌段共聚物，只要維持所述嵌 段共聚物的水溶性即可。其它可用的聚合物包括，聚氧化烯(polyoxyalkylenes) 如聚氧化乙烯(polyoxyethylene)、聚氧化丙烯(polyoxypropylene)、以及聚氧化 乙烯和聚氧化丙烯的嵌段共聚物；聚曱基丙烯酸酯(polymethacrylates);丙烯 酸共聚物(carbomer);以及分支或非分支多糖。在一些方案中，抗TWEAK抗體也可以偶聯(lián)或締合標(biāo)記物或其它試劑如 其它的治療劑如細(xì)胞毒劑或細(xì)胞生長抑制劑，但在很多實施方案中，此構(gòu)型 是不必要的。細(xì)胞毒劑和化療劑舉例包括紫杉醇(taxol)、松胞菌素 B(cytochalasin B)、短桿菌肽D(gramicidin D)、長春花石咸(vinblastine)、多柔比 星(doxorubicin)、柔纟工霉素(daunorubicin)、美登木素生4勿石成(maytansinoid)(^口 美登木醇(maytansinol)或DM1美登木素生物堿、美登素(maytansine)的含巰 基衍生物)、米托蒽S昆(mitoxantrone)、光輝霉素(mithramycin)、放線菌素 (actinomycin) D、 l-去氫睪酮(l-dehydrotestosterone)、糖皮質(zhì)激素類，普魯卡 因(procaine),紫杉烷(taxane)、 丁卡因(tetracaine)、利多卡因(lidocaine)、普萘 洛爾(propranolol)和嘌呤霉素(puromycin)以及它們的類似物或同系物。當(dāng)抗TWEAK抗體與第二種試劑(如抗-TNF-a抗體或其它試劑)聯(lián)用時， 這兩種試劑可以分開或 一起配制?？梢砸詤f(xié)同(synergistically)有效的量配制 或者使用所述試劑。也可以使用一或全部兩種所述試劑，但它們的量比各自 單用的量低。例如，可以在例如施用前，混合各種藥物組合物并一起施用， 或可以分開施用，如在相同或不同的時間施用。也可以使用其它TWEAK阻斷劑，如USSN 60/679,518所述的試劑。所 述試劑可以是能夠給受試者施用的任何類型化合物(如有機或無機小分子、 核酸、蛋白質(zhì)或肽模擬物(peptide mimetic))。 一個實施方案中，所述阻斷劑 是生物學(xué)的，如分子量在5-300 kDa之間的蛋白質(zhì)。例如，TWEAK阻斷劑 可抑制TWEAK與TWEAK受體的結(jié)合。除結(jié)合TWEAK的抗體之外的 TWEAK阻斷劑舉例包括，結(jié)合TWEAK-R的抗體及與細(xì)胞表面的 TWEAK-R竟?fàn)幗Y(jié)合TWEAK的可溶形式的TWEAK-R(如Fnl4)。也可以例 如用常規(guī)方法或本文所述方法提供藥物組合物形式的本文所述其它治療劑。給藥可以用多種方法將抗TWEAK抗體施用給受試者，如人類受試者。在很 多應(yīng)用中，施用途徑是下述之一靜脈注射或灌注(IV)，皮下注射(SC),腹 腔(IP)或肌肉注射。也可以使用關(guān)節(jié)內(nèi)遞送。也可以使用其它非腸胃施用模 式。這些模式例如包括動脈內(nèi)、鞘內(nèi)、嚢內(nèi)、眼眶內(nèi)、心內(nèi)、皮內(nèi)、經(jīng)氣 管、表皮下、關(guān)節(jié)內(nèi)、被膜下、蛛網(wǎng)膜下、脊柱內(nèi)、硬膜外以及胸骨內(nèi)注射。 有些情況下，施用可以直達(dá)炎癥位置如關(guān)節(jié)或其它發(fā)炎的位置。施用所述抗體的途徑和/或模式也可以根據(jù)個案定制，如通過監(jiān)測受試 者，如使用斷層成像(tomographic imaging)，神經(jīng)學(xué)檢查(neurological exam), 及與具體疾病有關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)，如評價類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的標(biāo)準(zhǔn)來定制?？梢园垂潭▌┝?fixeddose),或者按mg/kg劑量施用所述抗體。也可以 選擇劑量來降低或避免產(chǎn)生針對抗TWEAK抗體的抗體?？梢詫┝糠桨?(dosage regimen)進(jìn)行調(diào)整，以產(chǎn)生所需反應(yīng)，例如治療反應(yīng)或組合治療效應(yīng) (combinatorial therapeutic effect)。通常，抗TWEAK抗體(以及可選的第二種 試劑)的用量可以給受試者提供生物可利用的(bioavailable)量的所述試劑。例 如，可以施用0.1-100 mg/kg, 0.5-100 mg/kg, 1 mg/kg-100 mg/kg, 0.5-20 mg/kg, 0.1-10mg/kg，或1-10 mg/kg的劑量。也可以-使用其它劑量。本文所用的單位劑量(Dosage unit form)或"固定劑量"指物理離散單位， 是適合對受治受試者施用的單次藥劑(unitary dosage);每一單位含有預(yù)定量 的活性化合物和所需的藥用載體，還可以任選含有其它試劑，所述活性化合 物的預(yù)定量是經(jīng)過計算可以產(chǎn)生所需治療效應(yīng)的量?？梢越o予單一或多重劑 量?？蛇x地或另外地，所述抗體可經(jīng)連續(xù)灌注來施用。例如，可以在一^殳時間(一個療程)內(nèi)以定期間隔(periodic interval)施用抗 TWEAK抗體，所述一段時間足以包括至少2次(dose)， 3次，5次，10次， 或更多，如每日l或2次，或每周約l-4次的給藥，或優(yōu)選每周，每兩周， 每月，如約1-12周，優(yōu)選2-8周，更優(yōu)選約3-7周，甚至更優(yōu)選約4、 5或6 周給藥?？赡苡绊懹行е委熓茉囌咚璧膭┝康囊蛩睾蜁r間(timing),包括如 疾病或病癥嚴(yán)重程度，配制劑，遞送途徑，治療史，受試者的總體健康狀況 和/或年齡，以及其它存在的疾病。另外，用治療有效量的化合物治療受試者 可包括單次治療或，優(yōu)選包括系列治療(series of treatment)。也可用動物模型 來確定有用的劑量，如起始劑量或方案。如果受試者有發(fā)生炎癥或其它本文所述疾病的風(fēng)險，所述抗體可以在疾 病完全發(fā)作前施用，如作為預(yù)防措施。此種預(yù)防性治療的持續(xù)時間可以是所 述抗體的單個劑量，或者所述治療可以持續(xù)(如多重劑量)。例如，對有疾病 風(fēng)險或有發(fā)病傾向的受試者，可以用所述抗體治療數(shù)日，數(shù)周，數(shù)月或甚至數(shù)年，從而避免疾病的發(fā)生或暴發(fā)(flilminate)。藥物組合物可包含"治療有效量"的本文所述試劑。這些有效量可以基于 所施用試劑的效用，或在使用一種以上的試劑時試劑的組合效用來確定。試 劑的治療有效量也可以因個體的疾病狀態(tài)、年齡、性別、體重，以及該化合 物在該個體體內(nèi)激發(fā)所需反應(yīng)的能力等因素而有不同，所述能力例如改進(jìn)至 少一個疾病參數(shù)或改進(jìn)該疾病的至少一種癥狀。治療有效量也可以是，治療 有益效果超過該組合物的任何毒副作用或有害作用的量。用于治療的設(shè)備和試劑盒可以利用醫(yī)療設(shè)備(medical devices)來施用包含抗TWEAK抗體的藥物 組合物。所述設(shè)備可設(shè)計具有以下性能例如便攜性(portability)，室溫貯藏 (storage),以及使用簡易性，從而可以在緊急條件下使用它，如由未受訓(xùn)者 或本領(lǐng)域急救人員從醫(yī)療設(shè)備和其它醫(yī)療裝備正取出。該設(shè)備可以包括，如 用于貯存含有抗TWEAK抗體的藥物制劑的一或多個腔(housing)，并可被構(gòu) 建(configure)成遞送所述抗體的一或多個單位劑量的形狀?？梢赃M(jìn)一步構(gòu)建 該設(shè)備的形狀來施用第二種試劑，如抗-TNF-a抗體，為另外還包含抗 TWEAK抗體的單 一 藥物組合物或為兩種分開的藥物組合物。例如，藥物組合物可以用無4十式皮下注射i殳備(needleless hypodermic injection device)來施用，所述設(shè)備參見例如美國專利5,399,163, 5,383,851， 5,312,335， 5,064,413, 4,941,880, 4,790,824或4,596,556。眾所周知的才直入體和 模塊(module)有美國專利4,487,603公開了 一種可植入的顯微-輸注泵，用 于以控制速率分配(dispensing)藥物;美國專利4,486,194公開了 一種治療設(shè) 備，用于穿過皮膚施用藥物；美國專利4,447,233公開了一種藥物輸注泵， 用于以精確的輸注速率遞送藥物；美國專利4,447,224公開了一種可變流植 入型輸注裝置，用于連續(xù)遞送藥物；美國專利4,439,196公開了一種滲透型 藥物遞送體系，其具有多室隔間(multi-chamber compartment); 美國專利 4,475,196公開了 一種滲透型藥物遞送體系。當(dāng)然，多種其它的設(shè)備、植入體、 遞送體系和模塊也是已知的。可以用試劑盒形式提供抗TWEAK抗體。 一個實施方案中，所述試劑盒 包括(a)裝有組合物的容器，所述組合物含有抗TWEAK抗體，還可以含有(b) 信息材料(informational material)。所述信息材料可以是描述性(descriptive)、 指導(dǎo)性(instructional)、商品廣告性(marketing)或其它性質(zhì)的材料，它們與本 文所述方法和/或使用所述試劑的治療益處有關(guān)。一個實施方案中，所述試劑盒包括用于治療炎性疾病的第二種試劑，如 抗-TNF-oc抗體。例如，所述試劑盒包括裝有包含抗TWEAK抗體的組合物 的第一個容器，和裝有該第二種試劑的第二個容器。試劑盒中的信息物質(zhì)其形式不限。在一個實施方案中，所述信息物質(zhì)包 含關(guān)于該化合物的制備、該化合物的分子量、濃度、有效期、批號或生產(chǎn)地 信息等等的信息。在一個實施方案中，所述信息物質(zhì)涉及，例如以合適的劑 量(dose)、劑型、或施用模式(如本文所述劑量、劑型、或施用模式)施用抗 TWEAK抗體的方法，來治療患有炎性疾病或其它本文所述疾病或有相關(guān)風(fēng) 險的受試者。所述信息物質(zhì)可以以多種形式提供，包括印刷的文字(text)、計 算機可讀形式、視頻記錄、或聲頻記錄，或提供實質(zhì)性材料的鏈接(link)或地 址(如在互聯(lián)網(wǎng)上)的信息。試劑盒的組合物中，除了含有所述抗體，還可以含有其它成分，如溶劑 或緩沖液、穩(wěn)定劑、或保存劑(preservative)。所述抗體可以以任何形式，例 如液體、千燥形式或凍干形式，優(yōu)選基本純的和/或無菌的形式提供。當(dāng)所述 試劑以溶液形式提供時，該溶液優(yōu)選是含水溶液。當(dāng)所述試劑以干燥形式提 供時， 一般加入合適的溶劑來重建。所述溶劑，例如無菌水或緩沖液,可以 選擇包含在試劑盒中。所述試劑盒可以包括一或多個容器用于裝載含有所述試劑的一或多種 組合物。在一些實施方案中，所述試劑盒包括相互分隔的容器、分隔體(divider) 或分隔室(compartment),用于裝載組合物和信息材料。例如，可以將組合物 裝在大瓶(bottle)、小瓶(vial)或注射器(syringe)中，將信息材料裝在塑料的套 (sleeve)或包(packet)中。在其它實施方案中，將試劑盒的不同組件裝在一個 不分隔的容器中。例如，將組合物裝在大瓶、小瓶或注射器中，而所述大瓶、 小瓶或注射器上貼有標(biāo)簽形式的信息材料。在一些實施方案中，試劑盒包括 一組(a plurality)(如一 包(pack))容器，其中每一容器裝有一或多個單位劑型(如 本文所述劑型)的所述試劑。所述容器可以包括一個組合(combination)單位劑量(unit dosage),例如含有抗TWEAK抗體和第二種試劑(如按所需比例)的單 位。例如，所述試劑盒包括一組注射器、安瓿(ampues)、箔制包(foil packet)、 帶氣泡的包裝袋(blister pack)、或醫(yī)療設(shè)備，例如每一個都容納一個單位劑 量。試劑盒中的這些容器可以是隔絕空氣的(airtight)、防水的(waterproof)(如 濕度或蒸發(fā)引起的變化都無法透過)、和/或避光的(light-tight)。所述試劑盒還可以選擇含有適于施用所述組合物的裝置，例如注射器或 其它合適的遞送裝置。所述裝置可以預(yù)先裝栽所述試劑的一或全部兩種，或 者也可以是空的但適于裝栽試劑。靶向表達(dá)TWEAK的細(xì)胞本文所述的抗TWEAK抗體可用于將其所攜帶的有效物質(zhì)(payload)靶向 表達(dá)TWEAK的細(xì)胞或組織或其它與TWEAK有關(guān)的結(jié)構(gòu)。例如，所述抗體 可以與能遞送外源基因的病毒或病毒樣顆粒(如用于基因療法)或脂質(zhì)體(如 包容有治療劑或外源基因的脂質(zhì)體)連接。用抗體靶向病毒的方法舉例見 Roux et al. (1989) Proc Natl Acad Sci USA (1989) 86:9079-9083所述。也參見 例如CwrTTzer. (2005) 5:63-70,TTzer (2004) 15:1034-1044。本發(fā)明的抗-TWEAK Ab也可以連接到含治療劑如化療劑的脂質(zhì)體上。 抗體與脂質(zhì)體的連接可以用任何已知的交聯(lián)劑來實現(xiàn)，如廣泛用于將毒素或 化療劑與抗體偶聯(lián)來進(jìn)行定向遞送的異源雙功能(heterobifunctional)交聯(lián)劑。 例如，與脂質(zhì)體偶聯(lián)可以用定向碳水化合物的交聯(lián)試劑4-(4-馬來酰亞氨苯基) 丁酸酰肼(4-(4-maleimidophenyl) butyric acid hydrazide ， MPBH)來實現(xiàn) (Duzgunes et al. (1992) J Ce〃. B/oc/zew. Abst. Suppl. 16E 77)。.含脂質(zhì)體的抗體 也可用公知方法制備(參見例如DE 3,218,121; Epstein et al, (1985)尸rac. iVa" 爿c^/. 82:3688-92; Hwang et al. (1980)尸rac. A^". ^co^. 5W.77:4030-34; U.S. 4,485,045和4,544,545)。診斷用途抗TWEAK抗體可在檢測有無TWEAK的體外(如生物樣本，如組織， 活檢標(biāo)本)或體內(nèi)(如受試者的體內(nèi)成像)診斷方法中使用。例如，可以將人的 或有效人化的抗TWEAK抗體施用到受試者來檢測該受試者內(nèi)的TWEAK。 例如，所述抗體可用，例如MRI可檢測標(biāo)記物或放射性標(biāo)記物來標(biāo)記。該 受試者可用^r測該可檢測標(biāo)記物的工具來評價。例如，可以掃描該受試者來評價所述抗體在受試者體內(nèi)的定位。例如，該受試者可以用例如NMR或其它斷層工具來成像。用于診斷成像的標(biāo)記物舉例包括放射性標(biāo)記物，如131I， mIn， 123I, 99mTc, 32p， 33p， 125l， 3H， "c，和i88Rh,熒光標(biāo)記物如熒光素(fluorescein)和羅丹明(rhodamine)，核/磁共振活性標(biāo)記物，用正電子發(fā)射斷層攝影術(shù)("PET")掃描儀 可檢測的發(fā)射正電子的同位素，化學(xué)發(fā)光物(chemiluminescer)，如安光素 (luciferin),和酶標(biāo)標(biāo)記物如過氧化物酶或磷酸酶。也可使用短程輻射源 (short-range radiation emitter),如用近程檢測探針可才企測的同位素?？捎眠@ 些試劑用已知技術(shù)標(biāo)記蛋白質(zhì)配體。例如，涉及放射性標(biāo)記抗體的技術(shù)參 見Wensel and Meares (1983) ^(i/o/w附wwo/w喂'"g朋d i fl i/o/wwi/wo//2era/3>>, Elsevier, New York,和Colcher (1986) Me仇￡，膨/. 121: 802-816。可以用已知技術(shù)如放射性核素掃描技術(shù)，用如y照相機或發(fā)射斷層攝影 術(shù)(emission tomography)給受試者體內(nèi)"造影"。見例如A.R. Bradwell W "/ ， "Developments in Antibody Imaging", M woc/owa/ v4w"'Z Wey CVwce/-D故c"ow 7T2era昆R.W. Baldwin et al., (eds.), pp 65-85 (Academic Press 1985)。或者，當(dāng)放射性標(biāo)記物(如"C, 18F， 150,及。N)發(fā)射正電子時，可以 使用正電子發(fā)射4黃斷面(transaxial)斷層4聶影術(shù)掃描儀，如位于Brookhaven National Laboratory的Pet VI。MRI造影劑(contrast agent)。磁共振成像(MRI)利用NMR來觀察活體受 試者的內(nèi)部特征，并用于預(yù)后、診斷、治療和手術(shù)。MRI的明顯益處在于其 不使用放射性示蹤化合物。對一些MRI技術(shù)的總結(jié)見于EP0 502 814A。 一 般利用不同環(huán)境中與水質(zhì)子弛豫(relaxation)時間常數(shù)Tl和T2相關(guān)的差異來 成像。然而，這些差異不足以提供清晰的高分辨率的影像。這些弛豫時間常數(shù)的差異可以用造影劑改善。這些造影劑的例子包括多 種石茲性劑(magnetic agent),順石茲性劑(paramagnetic agent)(主要改變Tl)和4失 磁性或超磁性物質(zhì)(主要改變T2反應(yīng))。螯合劑(如EDTA, DTPA和NTA螯 合劑)可用于一些順磁性物質(zhì)(如Fe3、 Mn2+， Gc^+)的連接(和毒性降低)。其它 試劑可以呈顆粒狀，如直徑小于10jom至約lOnm)。顆?？梢跃哂需F石茲性， 反鐵磁性，或超磁性。顆?？梢园ǎ绱盆F礦(Fe304), Y-Fe203,鐵酸鹽， 及屬于過渡元素的其它磁性礦物化合物。磁性顆?？砂ê安缓谴判晕镔|(zhì)的 一或多種磁性晶體。非磁性物質(zhì)可包含合成的或天然的聚合物(如Sepharose,葡聚糖，糊精，淀粉等)?？筎WEAK抗體也可用指示基團(tuán)標(biāo)記，所述基團(tuán)包含NMR-活性19F原 子，或多種這類原子，因為(i)基本上所有的天然富含氟的原子是19F同位 素，因此，基本所有的含氟化合物具有NMR-活性；(ii)多種化學(xué)活性多氟 化合物，如三氟乙酸酐可以用較低價格買到，并且(iii)已發(fā)現(xiàn)很多氟化化合 物是醫(yī)療上可用于人的，如全氟多醚(perfluorinated polyether)作為血紅蛋白 替代物來運送氧。在一#史時間的溫育后，用如Pykett (1982) 5We"^/ c 爿wen'cof", 246:78-88所述的裝備之一進(jìn)行全身MRL來定位并造影TWEAK 的分布。另一方面，本發(fā)明提供了檢測體外樣本(如生物樣本，如血清，血漿， 組織，活;險標(biāo)本)中TWEAK的存在的方法。所述方法可用于i會斷疾病，如 免疫細(xì)胞相關(guān)性疾病。所述方法包括(i)使樣本或?qū)φ諛颖九c抗TWEAK抗 體接觸；和(ii)評價樣本中TWEAK的存在，如通過4企測抗TWEAK抗體與 TWEAK形成的復(fù)合物，或者通過檢測所述抗體或TWEAK的存在來評價。 例如，可以將所述抗體固定在例如支持物上，檢測被留在支持物上的抗原， 和/或反之?？梢园▽φ諛颖尽Ｏ鄬τ趯φ諛颖?，試驗樣本中復(fù)合物形成的 統(tǒng)計學(xué)顯著改變可以指示樣本中TWEAK的存在。通常，抗TWEAK抗體可 用于包括熒光極化(polarization)、顯微鏡檢、ELISA、離心、層析和細(xì)胞分選 (如熒光活化細(xì)胞分選)在內(nèi)的應(yīng)用。實施例1鼠P2D10重鏈可變區(qū)的序列(CDR用下劃線標(biāo)記)是1EVQKVESGGG LVRPGGSLKL FCAASGFTFS RYAMSWVRQS PEKRLEWVAg 51issggsypyy pdtvtgrft工srdnaknt!ly lemsslksed tamyycarvl 101yydydgdr工e vmdywgqgta v工vss (seq id no:50)這是鼠亞組3D重鏈可變區(qū)。鼠P2D10輕鏈可變區(qū)的序列(CDR用下劃線標(biāo)記)是 i dwmtqspls :lsvslgdqas iscrssqsliV sskgnty:lhw y:lqkpgqspk51fliykvsnrf旦gvpdrfsgs gsgtdftlk工srvaaedlgv yfcsosthfp101 ^FGGGTTIjE IK (SEQ ID NO: 51)這是鼠亞組2 kappa輕鏈。為huP2D10選擇如下的人接受體框架人56-84m亞組3重鏈可變區(qū) (NCBI database accession number GI:33318898， Scamurra et al" direct submission)。序列(CDR用下劃線標(biāo)記)如下EVQLVESGGG LVQPGGSLRIj SCAASGFTFS SYWMSWVRQA PGKGLEWVA^ 51IKQDGSEKYY VDSVKGRFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCARDP 101 MTTWKPSIA TNDYWGQGTL VTVSS (SEQ ID NO: 52)人K107亞組2輕《連可變區(qū)的序歹'J(NCBI database accession number GI: 2] 669075, Akahori et al.， direct submission) (CDR用下劃線標(biāo)記)是1 DWMTQSPLiS LPVTPGEPAS ISCRSSQS!LIj HSNGYNYLiDW YIjQKPGQSPQ 51LLIYLGSNRA旦GVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDVGV YYCMQALiQTP 101!LTFGGGTKVE IK (SEQ ID NO: 53)在顯示的人接受體序列中，CDR(下劃線標(biāo)記的)與muP2D10可變區(qū)中的 那些具有相同長度和規(guī)范等級。如下顯示鼠P2D10(上)和人接受體56-84m(下)重鏈可變區(qū)的序列比對(68.8%相同)1 EVQLVESGGGiLVRPGGSLKLFCAASGFTFSRYAMSWVRQSPEKRIiEWVAB 50n出m((H.miw mmm i m出.i i im廠1 EVQIiVESGGG:LVQPGGSm:LSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGIiEWVA]j 50 51 ISSGGSYPYYPDTVTGRFTISRDNAKNTIjYLEMSSIjKSEDTAMYYCARVL 1001 ~ii ii i.i Miimiim,m小ii:.im-iiMi—51 IKQDGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSIjYLQMNSIiRAEDTAVYYCARpg 10 0 101 YYDYDGDRIEVMDYWGQGTAVrVSS- 125 (SEQ ID NO:54》^"~mmi I III101 MTTWKPSLATNDYWGQGTLVTVSS 125 (SEQ ID NO: 55)如下顯示鼠P2D10(上)和人接受體K107輕鏈(下)可變區(qū)的序列比對 (75.9%相同)1 DWMTQSPIaSLSVSLGDQASISCRSSQSLVSSKGKrmjHWYLOKPGOSPK 50immmi i. i: mmmii. i i 11 mmi ii-1 DWMTQSPLSIjPVTPGEPASISCRSSQSIiliHSNGYNYIiDWYLOKPGOSPr) 50 51 F"yKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVAAEDIiGVYFCSQSTHFP 100101 55]FGGGTTIjEIK 112 (SEQ ID N0:5S)"Tiim .III101 gFGGGTKVEIK 112 (SEQ ID NO: 57)huP2D 10輕鏈有兩個版本(L 1和L2)?？贵whuP2D 10-1指包含huP2D 10 H1 和huP2D10 LI的抗體?？贵whuP2D10-2指包含huP2D10 HI和huP2D10 L2的抗體。如下顯示56-84m人接受體(上)和huP2D10 Hl重鏈(下)可變區(qū)的序列比對:1 EVOIiVESGGGIjVQPGGSIjRLSCAASC3FTFSSYWMSWVRQAPGKGIjEWVAM 50 1 iio丄iESGGG丄4!)PGGSL丄llclis(3B"J:P丄ilYAMSWVRQAPeia3IjEWVAE 5。101 MTTWKPSIiATNDYWGQGTLVTVSS 125 (SEQ ID NO :58)101 YYDYDGDR工EVMDYWGQGTLVTVSS 125 (SEQ工D NO:59)架下劃線標(biāo)記CDR。 huP2D10重鏈?zhǔn)侵苯拥?straight)CDR移植物(即框 中無回復(fù)突變)。如下顯示K107人kappa接受體(上)和huP2D10 LI輕鏈(下)可變區(qū)的序 列比對1 DWMTOSPLSLPVTPGEPASISCRSSOSIjIjHSNGYNYIjDWYIjOKPGQSPQ 50mmimmi(mimm出i. i i 11 111mimi1 nVVMTOSPIiSIjPVTPGEPASISCRSSQSLVSSKGNTYLHWYIjQKPGQSPQ 50 SI LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTIjKISRVEAEDVGVYYCMQAIjQTP 100 SI f丄:mir丄FSG^DRFSC3S(3SGTDFTIJaSRVEAEDVC3VYfCSOSTH:FP 100101 gFGGGTKVEIK 112 (SEQ ID NO: SO)101 RTFGGGTKVE工K 112 (SEQ ID NO:51)下劃線標(biāo)記CDR。 huP2D10 U輕鏈在上面所示框架中有兩處用小寫字 母標(biāo)出的回復(fù)突變FR2中的L46F和FR3中的Y87F。如下顯示K107人接受體(上)和huP2D10L2輕鏈(下)可變區(qū)的序列比對1 DWMTQSPIjS3jPVTPGEPASISCRSSQSI)IjHSNGYNYIiDWYIiQKPGQSPQ 50 1 DWMTQSPIjSIaPVTPG邁PAS;rSCRSSQSLVSSKGNTYIiHWYIiQKPGQSPQ 50 51 LIj工YIjGSNRASGVPDRFSGSGSGTOFTIjKISRVEAEDVGVYYCMQALOTP 10 d5i丄L:[iKVs丄丄ps丄ipi!)RFSGSGSG4]y^LKismii:i!)i(ivY"l丄sQsrapl 1。。101 J^FGGGTKVE工K 112 (SEQ工D NO:S2)l"miiimi101 ^FGGGTKVEIK 112 (SEQ工D NO: S3)下劃線標(biāo)記CDR。 huP2D10 L2輕鏈?zhǔn)侵苯拥腃DR移植物(框架中無回復(fù)突變)。這是成熟huP2D10Hl IgGl重鏈的舉例氨基酸序列1 EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS RYAMSWVRQA PGKGL丑WVAE51 ISSGGSYPYY PDTVTGRFTI SRDNAKNSLY. LGMNSLRAED TAVTYCARVL101 YYDYDGDRIE VMDYWGGGTL VTVSSAS丁KG PSVFPLAPSS KSTSGGTAAL151 GCLVKDYFPE PVTVSWNSGA LTSGVHTFPA VLQSSGLYSL SSWTVPSSS2 01 LGTQTY工CNV MHKPSOTKVD KKVEPKSCDK THTCPPCPAP ELLGGPSVFL2 51 FPPKPKDTLM ISRTPEVTCV WDVSHEDPE VKFNWYVDGV EVHMAKTKPR 301 EEQYNSTYRV VSVLTVLHQD WLNGKEYKCK VSNKALPAPI EKT工SKAKGQ3 51 PREPQVYTLP PSRDELTKNQ VSLTCLVKGF YPSD工AVEWE SNGQPENNYK4 01 TTPPVLDSDG SFFLYSKLTV DKSRWQQGNV FSCSVMHEAL< HNHYTQKSLS 451 LSPG (SEQ工D NO:64)如下顯示重鏈可變區(qū)Vh區(qū)段(SEDIDNO:65)的Kabat編號Kabat編號 1234567890 12 3 4567 8 90 1234567890 1""67890hP2D10 EVQIiVESGGG IA/QPGGSLjRL SCAASGFTFS RYAMSWVRQA PGKGLEWVAEKabat編號 12a3456789 0123456789 0123456789 012abc:3"6 78901234hP2D10 ISSGGSYPYY PDTVTGRFTI SRDMAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCAR這是成熟huP2D10Ll輕鏈的舉例氨基酸序列1 DVVMTQSPLS LPVTPGEPAS工SCRSSQSLV SSKGNTYLHW YLQKPGQSPQ51 FL工YKVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDFT!jKI SRVEAEDVGV YFCSQSTHFP101 RTFGGGTKVE IKRTVAAPSV F工FPPSDEQL KSGTASWCL LNNFYPREAK151 VQWKVDNALQ SGNSQESVTE QDSKDSTYSL SSTI/IXSKAD YEKHKVYACE201 vthqg:lsspv TKSFNRGEC (SEQ ID NO:66)如下顯示此VL區(qū)段的Kabat編號(SEQ ID NO:67):Kabat No. 1234567890 1234567890 1234567abc de89012345 6789012345 hP2D10 DWMTQSPIiS LPVTPGEPAS ISCRSSQSLV SSKGNTY!LHW YLQKPGQSPQKabat恥.6789012345 6789012345 6789012345 6789012345 6789012345 hP2D10 FIjIYKVSNRF sgvpdrfsgs gsgtdftlki srveaedvgv yfcsgsthfp這是成熟huP2D10 L2輕鏈的舉例氨基酸序列1 DWMTQSPLiS LPVTPGEPAS ISCRSSQSIjV SSKGNTYLHW Y!LQKPGQSPQ51 KLIYKVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLK工SRVEAEDVGV YYCSGSTHFP101 RTFGGGTKVE工KRTVAAPSV FIFPPSDE&L KSGTASWCIi LNNFYPREAK151 VQWKVDNALiQ SGNSQESVTE QDSKDSTYSL SSTI/TLSKAD YEKHKVYACE201 VTHQGLiSSPV TKSFNRGEC (SEQ ID NO: 68)如下顯示此VL區(qū)段的Kabat編號(SEQ ID NO:69):Kabat No. 1234567890 1234567890 1234567abc de89012345 6789012345 hP2D10 DVVMTQSPLS LPVTPGEPAS ISCRSSQSIjV SSKGNTYIjHW Y!LQKPGQSPQKabat No. 6789012345 6789012345 6789012345 6789012345 6789012345 hP2D10 KL工YKVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDVGV YFCSQSTHFP實施例2封閉TWEAK的單克隆抗體mP2D10顯著降低了多發(fā)性硬化、中風(fēng)和類 風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的模型的臨床嚴(yán)重程度。針對抗TWEAK單克隆抗體mP2D10 在靜脈(IV)給藥后的藥物動力學(xué)(PK)建立模型。經(jīng)IV注射給予小鼠1、 10或100 mg/kg的mP2D10。用ELISA測定 mP2D10的血清濃度。濃度-時間PK分布圖(profile)用二室模型來分析，其采 用一級消除動力學(xué)(first-order elimination)或Michaelis-Menten消除動力學(xué)， 從具有VI體積的中央室進(jìn)行消除。二室間的速度常數(shù)是K12 (從1室釋放 (exiting)到2室)和K21(從2室釋放到1室)。對于一級消除動力學(xué)模型，消 除速度常數(shù)是K10。對于Michaelis-Menten消除動力學(xué)才莫型，藥物以 Vn^Cl/(Km+Cl)的速度清除，其中CI是在中央室的mP2D10濃度，Vm和 Km為常數(shù)。用軟件ADAPT II (D'Argenio， D.Z. and A. Schumitzky. JD^尸7V/ Leer's Gw/tfe,. /VzarwacoAiweWc /尸/zorwa!co(iywam/c Sj^fews Jwa/yw^1 S"q/hvflre.Biomedical Simulations Resource, Los Angeles, 1997.)， 用最大4以然4古i十 (Maximum Likelihood estimation)方法來擬合數(shù)據(jù)。對于二室線性消除模型，VI是23.2 mL/kg, K10是0.0096 h-l, K12是 2.501, K21是1.053。曲線下面積(AIC)值為298, Schwarz值為304.2。對于 二室非線性消除模型，VI是0.0235。 Vm是9.22 mg/kg/hr, Km是484.2 pg/mL。 K12是2.348 h畫l,K21是0.966 h-l。AIC值為269， Schwarz值為276。mP2D10 的PK用非線性模型預(yù)測比線性模型好。mP2D 10的濃度-時間分布圖用應(yīng)用Michaelis-Menten消除動力學(xué)的二室 模型預(yù)測比應(yīng)用 一 級消除動力學(xué)的二室模型好。本領(lǐng)域技術(shù)人員僅使用常規(guī)試驗就能得到或能確認(rèn)本文所述的具體實 施方案的很多等效方案。
權(quán)利要求
1.分離的蛋白質(zhì)，其包含重鏈可變區(qū)序列和輕鏈可變區(qū)序列，它們能形成與人TWEAK結(jié)合的抗原結(jié)合位點，其中所述蛋白質(zhì)具有一或多種如下性質(zhì)(a)該蛋白質(zhì)與P2D10、huP2D10-1或huP2D10-2競爭結(jié)合人TWEAK；(b)該蛋白質(zhì)結(jié)合人TWEAK上與P2D10、huP2D10-1或huP2D10-2所結(jié)合的表位重疊的表位；(c)其重鏈可變區(qū)序列和/或輕鏈可變區(qū)序列由在高嚴(yán)謹(jǐn)條件與編碼P2D10、huP2D10-1或huP2D10-2的核酸的互補鏈雜交的核酸編碼；(d)其重鏈可變區(qū)序列和/或輕鏈可變區(qū)序列與P2D10、huP2D10-1或huP2D10-2的對應(yīng)可變區(qū)的氨基酸序列至少80％相同；(e)其重鏈可變區(qū)序列和輕鏈可變區(qū)序列的多個CDR區(qū)(總體上)與P2D10、huP2D10-1或huP2D10-2的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的CDR區(qū)至少95％相同；或(f)其框架區(qū)(總體上)與P2D10、huP2D10-1或huP2D10-2的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的框架區(qū)至少95％相同。
2. 權(quán)利要求l的蛋白質(zhì)，其中所述重鏈可變區(qū)序列的CDR區(qū)中包含如 下的至少兩個序列GFTFSRYAMS (CDR1) (SEQ ID N0:1), EISSGGSYPYYPDTVTG (CDR2) (SEQ ID N0:2)， VLYYDYDGDRIEVMDY (CDR3) (SEQ ID NO:3)。
3. 權(quán)利要求1或2的蛋白質(zhì)，其中輕鏈可變區(qū)序列的CDR區(qū)中包含如 下的一或多個序列RSSQSLVSSKGNTYLH (CDR1) (SEQ ID NO:8), KVSNRFS (CDR2) (SEQ ID NO:9),和 SQSTHFPRT (CDR3) (SEQ ID NO: 10)。
4. 權(quán)利要求2的蛋白質(zhì)，其中重鏈可變區(qū)序列包含如下的CDR: GFTFSRYAMS (CDR1) (SEQ ID NO:l), EISSGGSYPYYPDTVTG (CDR2) (SEQ ID NO:2)， VLYYDYDGDRIEVMDY (CDR3) (SEQ ID NO:3);且輕鏈可變區(qū)序列的CDR區(qū)中包含如下的一或多個序列 RSSQSLVSSKGNTYLH (CDR1) (SEQ ID NO:8), KVSNRFS (CDR2) (SEQ ID NO:9),和 SQSTHFPRT (CDR3) (SEQ ID NO: 10)。
5. 權(quán)利要求l的蛋白質(zhì)，其為重組全長IgG。
6. 權(quán)利要求1的蛋白質(zhì)，其包含人的Fc區(qū)。
7. 權(quán)利要求l的蛋白質(zhì)，其包含人的Fc區(qū)，帶有三個或更少的氨基酸 取代。
8. 權(quán)利要求1的蛋白質(zhì)，其為Fab或scFv。
9. 權(quán)利要求1的蛋白質(zhì)，其包含與人種系框架區(qū)至少90%相同的框架區(qū)。
10. 權(quán)利要求1的蛋白質(zhì)，其中輕鏈可變區(qū)序列的多個框架區(qū)總體上與 Vk1亞組種系序列中的相應(yīng)序列至少95%相同。
11. 權(quán)利要求1的蛋白質(zhì)，其中重鏈可變區(qū)序列的多個框架區(qū)總體上與 DP54種系序列至少95%相同。
12. 權(quán)利要求I的蛋白質(zhì)，其中輕鏈可變區(qū)序列的多個框架區(qū)總共與 DPK9種系序列中的相應(yīng)序列至少95%相同。
13. 權(quán)利要求1的蛋白質(zhì)，其中重鏈可變區(qū)序列的多個框架區(qū)總體上與 VH I亞組種系序列中的相應(yīng)序列至少95%相同。
14. 權(quán)利要求1的蛋白質(zhì)，其包含與P2D10、 huP2D10-l或huP2D10-2 具有相同規(guī)范結(jié)構(gòu)的高變環(huán)。
15. 權(quán)利要求1的蛋白質(zhì)，其中重鏈可變區(qū)序列包含與SEQ ID NO:65 至少95%相同的序列。
16. 權(quán)利要求l的蛋白質(zhì)，其中重鏈可變區(qū)序列包含SEQIDNO:65。
17. 權(quán)利要求1的蛋白質(zhì)，其中輕鏈可變區(qū)包含與SEQ ID NO:67或69 至少95%相同的序列。
18. 權(quán)利要求l或15的蛋白質(zhì)，其中輕鏈可變區(qū)序列包含SEQIDNO:67或69。
19. 權(quán)利要求1的蛋白質(zhì)，其中重鏈可變區(qū)序列包含SEQ ID NO:27-49 中的任一個或與其至少95%相同的序列。
20. 權(quán)利要求1的蛋白質(zhì)，其中輕鏈可變區(qū)序列包含SEQ ID NO:17-26中的任一個或與其至少95°/。相同的序列。
21. 藥物組合物，其包含前述權(quán)利要求任一項的蛋白質(zhì)和可藥用載體。
22. 提供抗體的方法，該方法包括提供含有重組核酸序列的宿主細(xì)胞，所述序列用于表達(dá)包含重鏈可變區(qū) 序列和輕鏈可變區(qū)序列的蛋白質(zhì)，該蛋白質(zhì)是權(quán)利要求1的蛋白質(zhì)；以及 在使所迷蛋白質(zhì)表達(dá)的條件下維持所述細(xì)胞。
23. 權(quán)利要求22的方法，其還包括分離所述蛋白質(zhì)并將所述蛋白質(zhì)與可 藥用載體配成制劑。
24. 治療受試者的自身免疫病的方法，該方法包括 給予該受試者治療自身免疫病有效量的權(quán)利要求21的藥物組合物。
25. 治療受試者的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的方法，該方法包括 給予該受試者治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎有效量的權(quán)利要求21的藥物組合物。
26. 治療受試者的多發(fā)性硬化的方法，該方法包括 給予該受試者治療多發(fā)性硬化有效量的權(quán)利要求21的藥物組合物。
27. 治療受試者的中風(fēng)的方法，該方法包括給予該受試者治療中風(fēng)有效量的權(quán)利要求21的藥物組合物。
28. 治療受試者的癌癥的方法，該方法包括 給予該受試者治療癌癥有效量的權(quán)利要求21的藥物組合物。
29. 權(quán)利要求28的方法，其中所述癌癥是前列腺癌。
全文摘要
本發(fā)明描述了抗TWEAK抗體。
文檔編號C12P21/08GK101247830SQ200680027581
公開日2008年8月20日 申請日期2006年5月25日 優(yōu)先權(quán)日2005年5月27日
發(fā)明者亞歷克塞·盧戈夫斯科伊, 埃倫·加伯, 琳達(dá)·C·伯克利 申請人:比奧根艾迪克Ma公司