專利名稱：：快速準(zhǔn)確地定位禽蛋胚盤的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明一般地涉及蛋，更具體而言是蛋加工方法。技術(shù)背景在家激瞎化場及其他蛋品加工機(jī)構(gòu)，蛋被大量處理加工。術(shù)語"加工"包括但不局限于當(dāng)胚胎還在蛋中(即還是卵)時(shí)，j柳藥物、營養(yǎng)物、、和/或其它有益物質(zhì)處理活的蛋。注射不同物質(zhì)進(jìn)入禽蛋已經(jīng)用于減少孵化后的發(fā)病率和死亡率，增大潛在生長率或成鳥的體型，甚至能影響胚胎性別。注射疫苗進(jìn)入活禽蛋已經(jīng)可以在蛋中有效地免疫禽類?，F(xiàn)已有許多用于向含有早期禽胚的禽蛋進(jìn)行注射的專利申請(qǐng)。例如，希望能輸注物質(zhì)進(jìn)入早期胚胎如胚盤的方法。如，希望在養(yǎng)禽工業(yè)中對(duì)蛋內(nèi)早期胚胎進(jìn)行操作從而將外源核酸分子(即產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因禽類)或外源細(xì)胞(即產(chǎn)生嵌合禽類)導(dǎo)入發(fā)育中的胚胎。但是，定位禽蛋內(nèi)的胚盤經(jīng)常比較困難，即使可以定位，其可見性，特別^1過蛋內(nèi)殼膜的可見性，都很差。另外胚盤和周圍的蛋物質(zhì)的顏色和對(duì)比度非常樹以，從ffiH頓剛艮檢出胚盤更加困難。如果在內(nèi)殼膜上形成開口(在蛋殼上開口后)，胚盤可被更容易地檢出。但是，內(nèi)殼膜的損壞可能破壞發(fā)育中的胚胎，并可能繼而導(dǎo)致無法孵化。另外注射物質(zhì)進(jìn)入胚盤的常規(guī)方法經(jīng)常因?yàn)榕弑P定位困難而不可靠。因此，在本領(lǐng)i^在著對(duì)在禽蛋內(nèi)定位和處理胚盤而不損傷蛋的改進(jìn)方法的需求。
發(fā)明內(nèi)容鑒于上述討論，此處提供了在禽蛋內(nèi)定位胚盤的方法。根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施方式，在蛋殼上形成一個(gè)開口，開口應(yīng)根據(jù)蛋的方向位于胚盤位置之上，并露出內(nèi)殼膜；獲得暴露的內(nèi)殼膜及其下方的物質(zhì)的影像；處理獲得的影像以增弓艦盤可視性；在所成影像中定位胚盤。在獲取影像前可以對(duì)蛋應(yīng)用物質(zhì)以增強(qiáng)內(nèi)殼膜的透明度。在影像中定位胚盤可包括確定胚盤在影像中的位置坐標(biāo)。這些位置坐標(biāo)可被傳至蛋品加工裝備以進(jìn)行后續(xù)蛋加工。根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施方式，隨后的蛋品加工程序可以包括推進(jìn)，3131蛋殼開口SA定位的胚盤。裝置可以是釋放物質(zhì)進(jìn)入胚盤的輸送裝置，禾口/或從胚盤中取出樣品物質(zhì)(例如，胚盤細(xì)胞、與胚盤鄰接的細(xì)胞，等等)的取樣，，和/或檢出蛋內(nèi)部信息的檢測裝置。根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施方式，蛋上的開口可以在獲取影像或進(jìn)一步操作(如向蛋中注射物質(zhì)、從蛋中移取物質(zhì)、檢測蛋內(nèi)部信息等)后封閉。封閉了的蛋可再被孵育至被孵化。根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施方式，一種確定禽蛋是否能育的方法，包括在蛋殼的一部份區(qū)域內(nèi)形成開口；獲得暴露的內(nèi)殼膜及其下物質(zhì)的影像；處理獲得的影像以確定胚盤在影像中的位置；以存在或缺失胚盤為基礎(chǔ)評(píng)估禽蛋的生育力。圖l是正常禽蛋的側(cè)面剖視圖。圖2是根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施方式說明在禽蛋之內(nèi)定位胚盤的操作流程圖。圖3A是描述根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施方式經(jīng)設(shè)置用于獲取開口的蛋的影像的高架數(shù)字視頻攝像機(jī)的方框圖。圖3B是通過圖3A的攝像機(jī)捕獲的胚盤的典型影像。圖3C顯示的是根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施方式進(jìn)行處理以增加胚m比度之后圖3B的典型影像。圖3D顯示的是根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施方式，圖3C的典型影像與放置在胚盤周邊的定位框。圖4A4D是開口禽蛋的照片，其中圖4A和4C中暴露的內(nèi)殼膜是未經(jīng)處理的，圖犯和4D中暴露的內(nèi)殼膜是用二甲基亞砜M以增加胚盤的可視性。具體實(shí)施方式現(xiàn)在結(jié)合附圖更全面地描述本發(fā)明，其中展示了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式。但是本發(fā)明可以包含在許多不同的形式之中，而不應(yīng)認(rèn)為僅限于在此闡述的實(shí)施方式；更恰當(dāng)?shù)卣f，提供這些的實(shí)施方式是為了公開的徹底和完整，并全面地向本領(lǐng)域技術(shù)人員描述本發(fā)明的范疇。相同的編號(hào)指f^f有相同的元件。圖中為了清晰起見，特定線條、圖層、組件、元件或部件的厚度可能有所夸張。為了清晰起見，除有另行說明，虛線用于顯示延續(xù)部分，并可以表明可選部件或操作。在此提到的所有出版物，專利申請(qǐng)，專利及其他參考全部納入此處作為參考。應(yīng)該理解，當(dāng)描述一個(gè)元件在另一個(gè)元件"上"時(shí)，它能直接位于另一個(gè)元件上，也能存在中介元件。相反，當(dāng)稱一個(gè)元件為"直接"在另一元件上時(shí)，就不存在中介元件。也應(yīng)該理解，當(dāng)稱一個(gè)元件"連接"或'附著'于另一元件時(shí)，它可以是直接連接或附著于另一個(gè)元件，或也可能存在中介元件。相反，當(dāng)稱一個(gè)元件"直接連疾或'直接附著"于另一元件時(shí)，將沒有中介元件存在。在此處使用的"向上地'，"向下他'，"垂直的"，"水平的"之類的術(shù)語僅為解釋的目的。本領(lǐng)域技術(shù)人員也應(yīng)理解，涉及一個(gè)結(jié)構(gòu)或部件與另一部件相連時(shí)，可能具有重疊#相鄰部件之下的部分。除非另外定義，所有在此使用的專業(yè)和科學(xué)名詞具有的含義與本發(fā)明隸屬的領(lǐng)域中的普通技術(shù)人員通常所理解的相同。在此發(fā)明說明書中使用的術(shù)語僅是為了描述具體實(shí)旨式而不是用于對(duì)本發(fā)明的限制。除非上下文有明確表述，在本發(fā)明說明書和附加的權(quán)禾腰求中使用的"a"，"an"，"the"單數(shù)形式也包括了復(fù)數(shù)形式。在此使用的術(shù)語"和/或，包括了一個(gè)或多個(gè)相關(guān)的列表項(xiàng)目的任意組合。在此使用的術(shù)語"禽鄰"受試禽，，包括了所有禽類的雄性和雌性，但主要包括用于商業(yè)化生產(chǎn)禽蛋、肉類或作為寵物的家禽。因此，術(shù)語"禽鄰"受試禽'具體地包括各種禽類，而不限于家雞、婦鳥、鴨、鵝、鵪鶉、^pheasant)、長尾鸚武l(parakeets)、鸚鵡、美冠鸚徵cockatoo)、澳洲l鸚武Kcockatiel)、鴕鳥、鴯鹋(emu)等。在此i頓的術(shù)語"早期胚胎"指一個(gè)禽類的胚胎，從產(chǎn)下的時(shí)間(胚盤階段)經(jīng)過大概的發(fā)育階段，該時(shí)期其原生殖細(xì)胞(PGCs)會(huì)^多移動(dòng)。對(duì)于雞胚胎特殊的是，一個(gè)"早期胚胎"通常大概是胚胎期20(H&H)胚胎或更早。家雞胚胎的發(fā)育階段在本領(lǐng)域中已廣為知曉，見例子，嫩鳥生長圖解TheAtlasOfChickDevelopment,R.BellairsM.Osmondeds.,AcademicPress,1998。在此使用的術(shù)語"胚盤"在本領(lǐng)域中有它明確的意思。通常，胚盤包括從產(chǎn)出到原腸期末期的胚胎。在本領(lǐng)域中，胚盤有時(shí)也用另外的名稱'種臍(germinaldisc)"或'胚胎盤(embiyonicdisc)"指代。胚盤可以被描述成是在早期胚胎分裂形成的細(xì)胞平盤，并持續(xù)到原腸期末。在產(chǎn)蛋的時(shí)候，兩個(gè)胚盤的主要結(jié)構(gòu)區(qū)域是可見的，處于中部的明區(qū)和末端的暗區(qū)(雛雞生長圖解TheAtlasOfChickDevelopment，R.BellairsM.Osmond,eds.，AcademicPress,1998)。家雞胚月臺(tái)特殊的一個(gè)方面是，胚盤一般被認(rèn)為從產(chǎn)出時(shí)(即DC期或X期EG&K)大概經(jīng)過Xm期(EG&K)或更晚期的胚胎。在此使用的術(shù)語"注射(名詞形式)"和"注射(動(dòng)名詞形式)"，包括將裝置插入蛋或胚胎的方法，包括傳遞或放出物質(zhì)進(jìn)入蛋或胚胎的方法、從蛋或胚胎中移取物質(zhì)的方法和/或插入檢測裝置進(jìn)入蛋艦胎的方法。術(shù)語"嵌合禽類"或'嵌合胚"指受體禽類或胚胎，含有從另外禽類或胚胎，即"供體'，來源的細(xì)胞。在此j頓的術(shù)語"轉(zhuǎn)基因禽類"和"轉(zhuǎn)基因胚胎"與他們?cè)诒绢I(lǐng)域的通常意義一致。轉(zhuǎn)基因禽類或轉(zhuǎn)基因的胚胎在一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞中含有外源核酸。在此使用的術(shù)語"膜"指在蛋中的任何間質(zhì)組織層。蛋中典型的膜包括，但不局限于外殼膜、內(nèi)殼膜、絨毛尿囊膜、卵黃膜和羊膜(內(nèi)胎膜)?，F(xiàn)參考圖l，圖解禽蛋10。圖中蛋10包括殼12，外殼膜14，內(nèi)殼膜16，和在蛋10鈍端內(nèi)殼膜14與外殼膜16之間的氣室18。圖中蛋10還包括蛋黃20和胚盤22，由內(nèi)部稀薄卵清蛋白24a、外部濃稠卵清蛋白24b和外部稀薄卵清蛋白24c圍繞。圖2是流程亂說明根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施方式定位禽蛋之內(nèi)胚盤的方法。應(yīng)該注意的是方框內(nèi)標(biāo)注的功能不一定按照?qǐng)D2標(biāo)注的順序執(zhí)行。連續(xù)顯示的兩個(gè)(或更多的)方框?qū)嶋H上可能是同時(shí)執(zhí)行或者有時(shí)方框可能逆序或以不同次;m行，這取決于涉及的功能。另外，應(yīng)該注意到本發(fā)明實(shí)施方式可以在禽蛋的不同胚胎發(fā)育階段應(yīng)用。本發(fā)明的實(shí)施方式不局限于禽蛋的胚盤階段。例如，本發(fā)明的實(shí)施方式可以應(yīng)用在經(jīng)過胚盤的階段，比如孵化的3-5天。首先，除去蛋的一部分蛋殼和一部分外殼膜以形成開口或窗口，以露出內(nèi)殼膜(方框100)。優(yōu)選的開窗過程不能對(duì)內(nèi)殼膜造成有害的影響并保持其完整?？梢訫多種方式開窗，包括如打L機(jī)、鉆孔機(jī)或其它本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的裝置。另外，可以在蛋的任何適合的位置開口，例如在蛋側(cè)面接近z繊軸的地方、蛋的任一端等等，在本發(fā)明一些實(shí)施方式中，在大致7K平放置蛋的殼面向上方的部份和氣室上方的開口蛋殼。本領(lǐng)域技術(shù)人員知道早期胚胎(例如，胚盤)一般定位在或靠近卵的最上面部份。因此，除非測定是為了操縱胚胎到卵內(nèi)不同的位置，蛋殼上的開口通常開在卵的最上面部分，即接近早期胚胎(例如，胚盤)應(yīng)在的位置。根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施方式，蛋的表面，至少在開窗位點(diǎn)的附近，可以消毒以減少細(xì)菌(或其它的)污染(例如，使用酒精或其它的消毒溶液)。但是，對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方式來說，消毒蛋，包括窗口的位點(diǎn)不是必需的。根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施方式，可以提高內(nèi)殼膜的透明度，例如應(yīng)用一，質(zhì)如二甲亞,MSO)或甘油處理內(nèi)殼膜(方框200)。也可用其它的可增強(qiáng)內(nèi)殼膜透明度的或在其它方面幫助成像的物質(zhì)，包括而非限于，7K、酒精、磷酸緩沖液(PBS)、蕓苔油、植物油、礦物油、三乙酸甘油酯、丙酮、乙二醇、單甲基醚等等。然后對(duì)暴露的內(nèi)殼膜及其下的物質(zhì)(包括胚盤)(方框300)進(jìn)行一種或多種數(shù)字成像。根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施方式，可以用一種數(shù)碼相機(jī)獲得單幀數(shù)字圖像和/或可以用數(shù)字視頻攝像機(jī)獲得數(shù)字視頻。但是，本發(fā)明的實(shí)施方式不局限于數(shù)字成像。也可以獲得暴露的內(nèi)殼膜及其下物質(zhì)的非數(shù)字圖像，然后轉(zhuǎn)變成為數(shù)字格式用于后續(xù)的圖像處理，如下所述。根據(jù)本發(fā)明實(shí)施方式，其它的成像方法和技術(shù)可以應(yīng)用于胚盤影像的獲取。例如可以應(yīng)用高^fJ摔超聲波和光學(xué)連續(xù)斷層照相衣OCT)。例如，一種小型的OCT探針可以安置在針的尖端或其它裝置上以插入蛋中。OCT可以fflMiS行一系列若干懸空掃描和觀察充滿液體的區(qū)域以產(chǎn)生胚盤及其下的囊胚腔的三維影像。然后可以將針插入蛋內(nèi)(例如，在基本完整的內(nèi)殼膜之下)。然后可對(duì)獲得的數(shù)字圖像進(jìn)行一種或多種圖像處理以增強(qiáng)胚盤的在影像(方框400)中的可視性。但是，根據(jù)本發(fā)明實(shí)施方式，圖像處理不是必需的。胚盤在未加工影像中的可視性也可能很好。然后使用"計(jì)算機(jī)視覺"軟設(shè)對(duì)方框500)定位胚盤。然后將胚盤在數(shù)字圖像中的坐標(biāo)位置傳送至加工設(shè)備，加工設(shè)備將艦窗口和內(nèi)殼膜插A^置iSA胚盤和/或與胚盤鄰接的區(qū)嫩方框600)。通機(jī)置可以注入物質(zhì)、禾口/或i辦材料、和/或探測蛋內(nèi)部信息。如果插入蛋內(nèi)的裝置是一種輸送裝置，一種或多種物質(zhì)可以通過輸送，釋放和沉積進(jìn)入胚盤和/或其鄰近位置。也可以在蛋內(nèi)的其它位置沉積一種或多種物質(zhì)。本發(fā)明實(shí)施方式不局限于一種或多種物質(zhì)在胚盤或鄰近位置的沉積。如果插入蛋內(nèi)的裝置是取樣體，一種或多種樣*(例如，胚盤細(xì)胞，等鉤可以從胚盤和/或其鄰近位置移去。一種或多種樣本可以從蛋的胚外部分取出(例如，蛋黃或卵清蛋白)。例如，可以從蛋清蛋白中取樣以確定是否存在微生物污染C例如，沙門菌屬)，等等。為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知的，從蛋中取樣的裝置可以是一種用于提取物質(zhì)(例如，尿囊液，其它的液體等等)的針。例如，針可以具有鈍尖和軸向的延伸的內(nèi)腔，內(nèi)腔終止于相鄰針頭部分內(nèi)的孔。使用真空裝置吸引，物質(zhì)可通過孔被n厄駐內(nèi)腔。鈍尖可阻止內(nèi)腔被物質(zhì)阻塞。一般來說，樣本從蛋中取出是為了獲取其中的信息。例如，取出樣本可能是為了用于胚胎的性別鑒定或活力確定。舉例說明，為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知，包含細(xì)胞的樣本可以從胚胎中取出，細(xì)胞可能用于分析(一般的在從蛋中取出之后)以檢測性染色體或染色體上的性-特異'性序列。樣品也可以用于其它任何基于DNA的檢驗(yàn)，例如，確定感興趣的特殊基因或同位基因在胚胎的存在。在一些實(shí)施方式中，可以使用多位點(diǎn)注射或取樣裝置，例如，在美國專利No.6,032,612中的描述。其它典型的運(yùn)送和/或取樣裝置包括如美國專利No.5,136,979;美國專利No.4，681,063和No.4,903,635;以及美國專利No.4，040，388,No.4,469,047和No.4，593,646在所述的。如果插入蛋內(nèi)的裝置是檢測器，可以從蛋內(nèi)鵬出各種信息。檢測器可以插入蛋的胚外部分中(例如，蛋黃或氣室)。或者，檢測器可置于大致靠近胚胎(按上述定義)處。在其它實(shí)施方式中，檢測器可以放入胚胎的明區(qū)或暗區(qū)或放入囊胚腔。檢測器裝置可以用于收集信息包括，但不限于，胚胎的大小、胚胎的位置、胚胎的發(fā)育階段和/艦胎的任何特征要素，胚胎的性別、禾口/艦胎的活力。檢測器裝置可以獲得關(guān)于胸臺(tái)和囊胚腔位置的信息。可以艦連接到檢測器的裝置捕維息(例如，電腦或其它的M鵬機(jī))?？梢詰?yīng)用各種型式的檢測器包括，但不限于，電學(xué)傳感器、光學(xué)傳感器、化學(xué)傳感器、溫度傳感器、聲音傳感器、壓力傳感器或任何其它的用于探測物理或化學(xué)參數(shù)的裝置。例如，典型的檢測器在美國專利No.6,244,214，授權(quán)于Hebrank，中描述。頓蛋注射物質(zhì)和/或移出樣本和/或探測信息之后，裝置將從蛋中退出?？捎妹芊鈩┓忾]蛋殼上的小孔，蛋可以孵育直到孵化。本領(lǐng)域技術(shù)人員能理解本發(fā)明的方法可以在大量蛋上進(jìn)行，例如，在商業(yè)家禽業(yè)中。而且，在此描述方法可以全手動(dòng)、全自動(dòng)或半自動(dòng)地操作。根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施方式，成像系統(tǒng)包括硬件和軟件部分。硬件部分包括光源(例如，150瓦鹵素?zé)艄庠矗溶?、?shù)字視頻攝像機(jī)和適當(dāng)?shù)木劢雇哥R、連接到攝像機(jī)的電腦或其它的i娥處理機(jī)，例如，顯卡(例如，正EE1394("火統(tǒng)')卡)。根據(jù)詳細(xì)的實(shí)施方式，應(yīng)用的攝像機(jī)具有12-brt或更高的^fjf率和高動(dòng)態(tài)范圍。典型的攝像機(jī)是具有高動(dòng)態(tài)范圍的601HDR(高至112dB)、具有16國bit^f,率和先進(jìn)的掃描CMOS傳^l技術(shù)的單色BaslerA601HDR。但是也可以采用不同的照相機(jī)。本發(fā)明的實(shí)施方式不局限于特殊的攝像機(jī)、透鏡和/或影像捕獲和存儲(chǔ)技炎例如CCD或CMOS)。本發(fā)明的實(shí)式不局限于特定種類的光源或特定的光源瓦數(shù)或光源的特定位置和/或方向。根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施方式，可以應(yīng)用額外的組件包括光學(xué)部件如濾光器和/或光源(包括那些商品來源的如Edmund鏡片，Omega鏡片等笱以幫助提高(白色的)胚盤與攻黃色的)周圍環(huán)境之間的對(duì)比度。例如申請(qǐng)人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)如果用藍(lán)光照明可以使胚盤的可見性變得更好。可以fflil使用藍(lán)光源或用藍(lán)色濾鏡濾過白光源產(chǎn)生藍(lán)光。這種可視性改善可有助于包含用于找尋獲得影像中胚盤的圖像獲取和處理算法的軟件部分。根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施方式，應(yīng)用圖像處理來定位影像中的胚盤，和可選地增強(qiáng)影像中胚盤的對(duì)比度。用于定位胚盤的圖像處理包括如圖像匹配和斑點(diǎn)分析之類的算法。用于增強(qiáng)影像中胚盤對(duì)比度的圖像處理包括紅綠藍(lán)層提取和各種其它的過濾算纟封例如，平滑、邊緣檢測、高斯化等等)。依照本發(fā)明實(shí)式的可用的典型圖像處理技術(shù)在美國專利No.6，219,452;6,222,940;6,229,921;6,256,625;6,370,270;6,366,686;6,493,079和6,535,640中有所描述。例如，圖像匹配中用戶選擇一種模板影像用于軟件來查找后續(xù)影像，然后設(shè)定其它參數(shù)比如查找的匹配數(shù)量、搜索的深與有禾盱粗查)，標(biāo)記限制和旋轉(zhuǎn)圖像。圖像匹配、斑點(diǎn)分析、紅綠藍(lán)層提取及其他圖像處理技術(shù)為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知，在此沒有進(jìn)一步描述的必要。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方式使用的典型的成像軟件包括用于自動(dòng)檢査的VisionBuilder,可從NationalInstruments,Inc.獲得。該軟件可很好的與LabVIEW軟件整合，LabVIEW軟件應(yīng)用于其它的蛋品加工程序，包括壓力傳感和注射，也可以從NationalInstruments,Inc.獲得。參考圖3A，俯視的數(shù)字視頻攝像機(jī)30被設(shè)定用于獲得開口蛋10的影像(即，如上所述的在殼上開口的蛋)，蛋被裝置或托架32固定。蛋可以Mil各種型式的裝置固定，并無限制。而且，根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施方式多個(gè)蛋可以同時(shí)處理。例如對(duì)于多個(gè)蛋處理，一個(gè)蛋托盤可以起到托架32的作用。ffiil攝影機(jī)30捕獲的胚盤22的典型影像在圖3B中展示。圖示的胚盤22難以同周圍的蛋黃20區(qū)分。本發(fā)明的實(shí)施方式不局限于圖示中的光源的方向。根據(jù)本發(fā)明的其它的實(shí)施方式，一軸向彌漫性照明^a(例如，從AdvancedIllumination,Inc.獲得)可以裝置于攝像機(jī)和蛋之間。軸向彌漫性照明裝置具有用(藍(lán)色)LED圍繞的楔角^fe鏡來控制光線適當(dāng)?shù)氐竭_(dá)胚盤然后返回?cái)z像機(jī)30。參考圖3C，Mii圖像處理軟件處理圖3B中的影像，生成的影像其中胚盤22相對(duì)于蛋黃20具有增強(qiáng)的對(duì)比度。圖3D中，軟件在影像中檢測出胚盤22，并放置方框40圍繞胚盤22。方框的坐標(biāo)(例如，幾何中點(diǎn))可供裝置來插入胚盤22和/敏爾入與之接近的位置，如上所述。根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施方式，如上所述的成像系統(tǒng)可擴(kuò)大至同時(shí)處理多個(gè)蛋，并可以包括多臺(tái)照相機(jī)。而且，實(shí)際上任何方向的蛋，包括水平、直立、傾斜等等，都可按本發(fā)明的一些實(shí)施方式進(jìn)行處理。本發(fā)明的一些實(shí)施方式具體適應(yīng)于準(zhǔn)確快速地定位在可育的、未孵過的0天蛋。本發(fā)明的一些實(shí)施方式也可以應(yīng)用在孵化期間的胚胎的成像，例如在0-5天內(nèi)。本發(fā)明的一些實(shí)施方式不局限于定位禽蛋內(nèi)的胚盤。fflil本發(fā)明的一些實(shí)施方式可以監(jiān)測胚胎的發(fā)育。根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施方式，可確定特殊血管的位置以利于運(yùn)送蛋白或載體進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)。根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施方式，成像技術(shù)可以應(yīng)用于確定蛋是否可育。根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施方式，成像技術(shù)可以與胚胎操作或定位技術(shù)聯(lián)合使用。胚胎操作和定位技術(shù)在美國專利申請(qǐng)?zhí)朜o.10/216,427中描述，該專利申請(qǐng)為本專利申請(qǐng)受讓人擁有。胚層(blastodisc)(—般僅僅一兩個(gè)細(xì)胞)是位于蛋黃表面的區(qū)域，是胚胎形成的發(fā)生位置，與蛋是否已經(jīng)受精無關(guān)。一旦受精，胚層最終將變盤(即，胚層將從一兩個(gè)細(xì)胞增殖成數(shù)以萬計(jì)細(xì)胞)。因此，非受精卵不會(huì)具有胚盤。根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施方式，確定禽蛋是否能育的方法包括在蛋殼的一部分內(nèi)形成開口，并獲取暴露內(nèi)殼膜及其下物質(zhì)的影像。處理獲得的影像以確定影像中胚盤的存在?；谔綔y在影像中胚盤的存在來確定蛋的孵化率。如果胚盤沒有被檢出或如果影像中的糊犬不能與胚盤的特征匹配(例如，形狀、大小等鉤，那么認(rèn)為蛋是不能育的。實(shí)施例實(shí)施例1通過內(nèi)殼膜向胚盤注射的主要障礙是M:膜難以看清胚盤，因?yàn)槟るm然有些透光，但一般是不透明的。為了解決這個(gè)困難，我們?cè)噲D通過在膜上涂上一些液體物質(zhì)而使膜變得，明。在操作之前，蛋依照標(biāo)準(zhǔn)工業(yè)實(shí)踐(75%相対濕度，16C,8天)存儲(chǔ)。移去在氣室位置的殼和外部的殼膜，暴露完整的內(nèi)殼膜。4頓棉簽將內(nèi)殼膜分別用4種不同的液恢7]C，礦物油，甘油，或二甲基亞砜)涂覆。4OT7jC和礦物油對(duì)內(nèi)殼膜的透明度沒有實(shí)際效果。甘油和二甲基亞砜則都能使內(nèi)殼膜變得清晰。雖然膜沒有表現(xiàn)出完，明，但透明度有了明顯的改善。如果本可隱約看見胚盤，添加甘油或二甲基亞砜可增加胚盤的可視性和景深感覺。在一些實(shí)例中，胚盤的位置完全看不見，添加甘油或二甲基亞砜后通常能夠看到胚盤，可增加判別未受精卵的能力(見圖4A4D)。圖4A-4D顯示使用二甲基亞砜提高了蛋內(nèi)胚盤的可視性。圖4A和4C顯示的是未經(jīng)處理的蛋，圖4B和4D顯示的是用二甲基亞砜^/g的相同蛋。在圖4B和4D中的胚盤由箭頭A指示。注意圖4A中的胚盤表現(xiàn)為一片模糊，用二甲基亞砜處理后則大大的增加了胚盤在影像中的銳利度。在圖4C中，胚盤完，不見，加上二甲基亞砜后影像中可清楚看到胚盤，如圖4D所示。二甲基亞砜似乎能比甘油造成更好一些的可視性。甘油的操作也比較困難(粘稠并在內(nèi)殼膜上留下液滴)。二甲基亞砜能腿的蒸發(fā)或:iffl:膜擴(kuò)散，不留下痕跡。對(duì)提高胚盤的可見性以進(jìn)行人工注射來說，用二甲基亞砜處理內(nèi)殼膜可能是一種很有用的技術(shù)。實(shí)施例2為了評(píng)價(jià)二甲基亞砜對(duì)胚胎發(fā)育的毒性，如實(shí)施例1中描述用二甲基亞砜處理胸臺(tái)并進(jìn)行孵化，然后與沒有i頓二甲基亞砜處理的胚胎相比較。為了更進(jìn)一步評(píng)價(jià)二甲基亞砜使內(nèi)殼膜清晰的效果，使用存儲(chǔ)僅4天的蛋。使用了三個(gè)實(shí)驗(yàn)組A)開窗+二甲基亞砜蛋在鈍端開窗，不破壞內(nèi)殼膜。用二甲基亞抹內(nèi)殼膜。本實(shí)驗(yàn)組僅保留看得見胚盤的蛋。胚盤用裝滿KRB培養(yǎng)基的Humagenma吸移管穿刺以模擬注射。蛋用硅樹脂+膠紙帶封口。N=42(即該組有42枚蜀。B)開窗+無二甲基亞砜在蛋的鈍端開窗，不破壞內(nèi)殼膜。蛋用硅樹脂+膠紙帶封口。忖=39(即本組有39枚蛋)。C)未處理蛋完全未處理并進(jìn)行孵化。N:54(即本組有54枚蛋)。孵化結(jié)果:<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>應(yīng)注意孵育箱中有腐壞的蛋(來自于另一研究)，在試驗(yàn)組A上有泄漏的細(xì)菌，可能導(dǎo)欽'腐壞"分類和雛雞的后期死亡。相對(duì)于僅開窗并封口的蛋來說，用二甲基亞砜處理的蛋有孵化量的減少。這些減少的部分原因也許是由于從孵化箱中其它蛋上的細(xì)菌污染所弓胞。在組A中也有比B或C更早期的死蛋。因?yàn)樵诮MA中幾乎沒有或沒有未受精卵，這些早期死亡的增加可能是由二甲基亞砜的毒性弓跑。提高胚盤的可視性和注射能力應(yīng)更重于二甲基亞砜毒性弓胞的較小危險(xiǎn)。上述內(nèi)容是為了對(duì)本發(fā)明進(jìn)行描述，而不應(yīng)被認(rèn)為是對(duì)其進(jìn)行限定。雖然已經(jīng)描述本發(fā)明的一些典型實(shí)施方式，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該容易理解在典型實(shí)施方式中可能有許多修改并沒有實(shí)質(zhì)地偏離本發(fā)明的新教導(dǎo)和優(yōu)點(diǎn)。因此，如權(quán)禾腰求所限定，所有這些修改被認(rèn)為包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。本發(fā)明由以下權(quán)利要求限定，并包括了同等的權(quán)禾腰求。權(quán)利要求1.一種定位禽蛋內(nèi)的胚盤的方法，包括在胚盤位置上方的蛋殼上形成開口以暴露內(nèi)殼膜；獲取暴露的內(nèi)殼膜和其下方物質(zhì)的影像；處理獲得的影像以增強(qiáng)影像中胚盤的可視性；和在影像中定位胚盤。2.如權(quán)利要求1所述的方法，該方法進(jìn)一步包括在獲，像之前對(duì)蛋應(yīng)用物質(zhì)至內(nèi)殼膜以增強(qiáng)其透明度。3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中在影像中定位胚盤包括確定胚盤在影像中的位置坐標(biāo)，并進(jìn)一步包括傳送胚盤的位置坐標(biāo)到蛋品加工裝備。4.如權(quán)利要求3所述的方法，進(jìn)一步包括響應(yīng)于所接收的位置坐標(biāo)M裝置M蛋殼上的開口并進(jìn)入胚盤。5，如權(quán)利要求4所述的方法，其中所述裝置是釋放物質(zhì)iJA胚盤的輸送裝置。6.如權(quán)利要求4所述的方法，其中所述裝置是從胚盤中移出試樣材料的取樣裝置。7.如權(quán)利要求4所述的方法，其中所述裝置是從蛋內(nèi)部探測信息的檢測器裝置。8.如權(quán)利要求l所述的方法，其中的蛋選自于由家雞、婦鳥、鴨、鵝、鵪鶇、雉、長尾小鸚鵡、鸚鵡、美冠鸚鵡、澳洲鸚鵡、鴕鳥和鸝鹋的蛋組成的組。9.如權(quán)利要求l所述的方法，進(jìn)一步包括在獲取影像后封閉蛋殼上的小開□。10.如權(quán)利要求所述1的方法，進(jìn)一步的包括孵育蛋直到孵化。11.如權(quán)利要求5所述的方法，其中的裝置是多重注射輸送裝置。12.如權(quán)利要求6所述的方法，其中從蛋中取出的樣品物質(zhì)包括胚盤細(xì)胞。13.如權(quán)利要求7所述的方法，其中檢測器裝置選自于由電學(xué)傳感器、光學(xué)傳感器、化學(xué)傳感器、溫度傳感器、聲音傳和壓力傳組成的組。14.一種定位禽蛋內(nèi)的胚盤的方法，包括在胚盤位置上方的蛋殼上形成開口，以暴露內(nèi)殼膜；對(duì)內(nèi)劑莫應(yīng)用物質(zhì)增強(qiáng)其透明度；獲取暴露的內(nèi)殼膜和其下方物質(zhì)的影像；處理獲得的影像以增強(qiáng)影像中胚盤的可視性；確定胚盤在影像中的位置坐標(biāo)；和傳送位置坐標(biāo)至蛋品加工裝備。15.如權(quán)利要求14所述的方法裝置Mil蛋殼上的開口并iSA胚盤。16.如權(quán)利要求15所述的方法裝置。17.如權(quán)利要求15所述的方法取樣裝置。18.如權(quán)利要求15所述的方法器裝置。19.如權(quán)利要求15所述的方法開口。20.—種確定禽蛋是否能育的方法，包括在胚盤可能所處的位置上方的蛋殼上形成開口，以暴露內(nèi)殼膜;獲取暴露的內(nèi)殼M^其下方物質(zhì)的影像；處理獲得的影像以確定影像中是否存在胚盤；禾口基于影像中胚盤的存在與否評(píng)估所述禽蛋的生育力。，進(jìn)一步包括響應(yīng)于所接收的位置坐標(biāo),，其中所述裝置是釋放物質(zhì)進(jìn)入胚盤的輸送，其中所述裝置是從胚盤中移出i^材料的，其中所述體是從蛋內(nèi)部探測信息的檢測，進(jìn)一步包括在獲取影像后封閉蛋殼上的小全文摘要本發(fā)明提供非侵入定位禽蛋內(nèi)胚盤的方法。根據(jù)蛋的方向，在胚盤所處位置上方的蛋殼上形成開口；獲取暴露的內(nèi)殼膜及其下方物質(zhì)的影像；處理所獲影像以增強(qiáng)影像中胚盤的可視性；在影像中定位胚盤。在獲取影像前，可能對(duì)蛋應(yīng)用物質(zhì)以增強(qiáng)內(nèi)殼膜的透明度。在影像中定位胚盤可以包括確定影像中胚盤的位置坐標(biāo)。這些位置坐標(biāo)可以被送到蛋品加工裝備以用于蛋的后續(xù)加工。文檔編號(hào)C12N5/00GK101283087SQ200680034356公開日2008年10月8日申請(qǐng)日期2006年9月20日優(yōu)先權(quán)日2005年9月20日發(fā)明者D·馬哈托,N·門杜,P·L·小賴巴茨克,S·P·沃爾夫申請(qǐng)人:恩布里克斯公司