專利名稱：：白介素-1偶聯(lián)物及其用途的制作方法白介素-l偶聯(lián)物及其用途發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)、公共衛(wèi)生、免疫學(xué)、分子生物學(xué)和病毒學(xué)領(lǐng)域。本發(fā)明提供包含病毒樣顆粒(VLP)或病毒顆粒和至少一種抗原的組合物，其中所述抗原是與該VLP或病毒顆粒共價(jià)連接的白介素-1(IL-1)蛋白、IL-1片段或肽或IL-1突變蛋白。本發(fā)明也提供一種制備所述組合物的方法。本發(fā)明的組合物可以用于制備治療包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎等在內(nèi)的多種人類疾病的疫苗。本發(fā)明的組合物由此誘導(dǎo)有效的免疫應(yīng)答，特別是抗體應(yīng)答。相關(guān)纟支術(shù)IL-1是由包括巨噬細(xì)胞、樹突細(xì)胞、B細(xì)胞和T細(xì)胞在內(nèi)的各種細(xì)胞型產(chǎn)生的一種強(qiáng)促炎細(xì)胞因子(DinarelloCA.,1991.Blood77(8):1627-1652)。它由兩個(gè)分子類型組成，IL-la和IL-1(3,它們只有有限的序列相同性，但是通過與I型IL-1受體(IL-1RI)結(jié)合發(fā)揮類似的生物活性(DinarelloC.A.等人,1997,Cytokine&GrowthFactorRev.8:253)。兩種IL-1分子也都與第二種IL-1受體(IL-1RII)結(jié)合，該受體缺少細(xì)胞內(nèi)信號域，被認(rèn)為作為誘飾受體起調(diào)節(jié)作用(DinarelloC.A.等人，1997,Cytokine&GrowthFactorRev.8:253)。另外，IL國1家族的第三個(gè)成員，IL-1受體拮抗劑(IL-lm),與兩種受體結(jié)合，而不發(fā)揮任何對抗活性。IL-lra與IL-1RII和IL-1RI和IL-IRII的脫落形式一起4氐消IL-loc和IL-ip的活性，并且確保炎癥反應(yīng)的緊密調(diào)節(jié)。在許多人類疾病中觀察到IL-1介導(dǎo)的炎癥應(yīng)答的異常調(diào)節(jié)，包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎性腸病、腎病、骨質(zhì)疏松癥等。在每種這樣的疾病中，IL-1的過量產(chǎn)生和/或IL-lm的產(chǎn)生不足都會誘發(fā)疾病發(fā)展(ArendW.P.,2002,Cytokine&GrowthFactorReviews13:323-340)。重組形式的IL-lra(阿那白滯素，Kineret⑧)在減輕炎癥和防止幾種炎性疾病的組織損傷方面是有效的，但是該藥物需要高系統(tǒng)濃度，具有短半衰期，因此需要頻繁地(每天)施用高劑量(約100mg)，導(dǎo)致藥物成本高和潛在的患者依從性問題(加^0處方信息，Amgen;GranowitzE.V.等人1992,Cytokine4:353)。另外，一大部分患者產(chǎn)生抗Kineret⑧的抗體，該抗體潛在中和了藥物的生物活性(FleischmannR.M.，等人，2003，ArthritisRheum46:2287)。因此，新的治療技術(shù)集中于主動免疫策略，該策略誘導(dǎo)患者的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生IL-l-中和抗體。Svenson和同事(2000，J.Immunol.Methods236:1-8)用與純化的結(jié)核菌素蛋白衍生物(PPD)化學(xué)交聯(lián)的重組IL-1oc免疫了小鼠，觀察到中和IL-la的生物活性的抗體的誘導(dǎo)。這一策略依賴細(xì)胞幫助。美國專利6,093,405描述了一種通過用含有化學(xué)或物理滅活的細(xì)胞因子本身的免疫原性組合物進(jìn)行免疫，來降低循環(huán)細(xì)胞因子的水平的方法。在該方法中，通過物理或化學(xué)處理使天然細(xì)胞因子具有免疫原性，而本發(fā)明公開了一種通過將天然細(xì)胞因子以高度重復(fù)的方式展示在VLP表面上而使它們具有免疫原性的方法。此外，WO2003/084979描述了含有長度為5-40個(gè)氨基酸的細(xì)胞因子衍生肽的免疫原性化合物在治療與細(xì)胞因子過量產(chǎn)生有關(guān)的疾病中的用途。
發(fā)明內(nèi)容現(xiàn)在，我們驚奇地發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的分別包含至少一種IL-1分子的組合物和疫苗不僅能夠誘導(dǎo)針對IL-1的免疫應(yīng)答，特別是抗體應(yīng)答，而且能夠在體內(nèi)中和IL-1的促炎活性。另外，我們還驚訝地發(fā)現(xiàn)，IL-1分子當(dāng)根據(jù)本發(fā)明與VLP共價(jià)連接時(shí)，在小鼠類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型中能夠防止炎癥和關(guān)節(jié)炎的臨床體征。而且，我們還發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的組合物比重組IL-1受體拮抗劑Kineret(被批準(zhǔn)用于治療人類類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)更好地保護(hù)小鼠不發(fā)展關(guān)節(jié)炎癥狀(實(shí)施例7)。此外，我們還驚奇地發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的組合物當(dāng)注射到遺傳敏感的小鼠體內(nèi)時(shí)能夠抑制動脈粥樣硬化癥狀的發(fā)生(實(shí)施例4)，因此是一種有效的動脈粥樣硬化治療劑。此外，我們還證明了IL-1OC與動脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)理有關(guān)。因此，在第一方面，本發(fā)明提供一種組合物，其包含(a)具有至少一個(gè)第一附著位點(diǎn)的病毒樣顆粒(VLP);和(b)具有至少一個(gè)第二附著位點(diǎn)的至少一種抗原，其中所述至少一種抗原是優(yōu)選選自IL-1蛋白、IL-1成熟片段、IL-1肽和IL-1突變蛋白的IL-1分子，其中(a)和(b)通過所述至少一個(gè)第一附著位點(diǎn)和所述至少一個(gè)第二附著位點(diǎn)連接，優(yōu)選地形成有序且重復(fù)的抗原陣列。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，適合在本發(fā)明中使用的病毒樣顆粒包括病毒(優(yōu)選RNA噬菌體)的重組蛋白，優(yōu)選重組外殼蛋白、其突變體或片段。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物包含至少一種IL-1成熟片段，該片段優(yōu)選地具有IL-1的生物活性。因此，本發(fā)明利用在病毒樣顆粒上以高度重復(fù)的方式呈現(xiàn)自身抗原來刺激自身反應(yīng)性B細(xì)胞。在另一方面，本發(fā)明提供一種疫苗組合物。而且，本發(fā)明提供一種給人或動物、優(yōu)選給哺乳動物施用該疫苗組合物的方法。本發(fā)明的疫苗組合物一般且優(yōu)選地在不含至少一種佐劑的情況下能夠誘導(dǎo)強(qiáng)免疫應(yīng)答，特別是抗體應(yīng)答。因此，在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，該疫苗組合物不含佐劑。避免使用佐劑可以減少不希望的炎性T細(xì)胞應(yīng)答的可能的發(fā)生。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，VLP是RNA噬菌體的VLP。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述RNA噬菌體是選自QP、fr、GA和AP205的RNA噬菌體。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，分別在組合物和疫苗組合物中所含的所述RNA噬菌體的VLP在宿主中重組產(chǎn)生，并且所述RNA噬菌體的VLP基本不含宿主RNA，優(yōu)選宿主核酸。減少(或者優(yōu)選地消除)宿主RNA的量以避免不希望的T細(xì)胞應(yīng)答以及其他不希望的副作用(如發(fā)熱)是有利的。在一個(gè)方面，本發(fā)明才是供一種治療疾病的方法，所述疾病選自(a)血管疾病；(b)遺傳性IL-l-依賴的炎性疾病；(c)慢性自身免疫炎性疾??；(d)骨和軟骨變性性疾??；(e)變態(tài)反應(yīng)疾病；和(f)神經(jīng)疾病；在這些疾病中，IL-1蛋白介導(dǎo)其病癥或?qū)ζ洳“Y有貢獻(xiàn)，其中該方法包4舌給動物(優(yōu)選給人)分別施用本發(fā)明的組合物或本發(fā)明的疫苗組合物。其中IL-1蛋白介導(dǎo)或貢獻(xiàn)于其病癥的疾病例如是動脈粥樣硬化、家族性地中海熱、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎和變態(tài)反應(yīng)。在另一方面，本發(fā)明提供包含本發(fā)明的組合物和可接受的藥物載體的藥物組合物。再另一方面，本發(fā)明提供一種制備本發(fā)明的組合物的方法，包括(a)提供具有至少一個(gè)第一附著位點(diǎn)的VLP;(b)提供具有至少一個(gè)第二附著位點(diǎn)的至少一種抗原，其中所述抗原是IL-1分子、IL-1蛋白、IL-1成熟片段、IL-1肽或IL-1突變蛋白；和(c)將所述VLP與所述至少一種抗原相組合，產(chǎn)生所述組合物，其中所述至少一種抗原和所述VLP通過所述至少一個(gè)第一附著位點(diǎn)和所述至少一個(gè)第二附著位點(diǎn)連接。圖1:11111^1^119-269蛋白與Q(3衣殼蛋白的偶聯(lián)在還原條件下的12%SDS-聚丙烯酰胺凝膠上分析蛋白質(zhì)。用考馬斯亮藍(lán)將該凝膠染色。在左邊空白處給出了標(biāo)記蛋白質(zhì)的分子量，單位是kDa，右邊空白處標(biāo)明了蛋白質(zhì)帶的身份。泳道1:預(yù)染色的蛋白質(zhì)標(biāo)記物(NewEnglandBiolabs)。泳道2:衍生的Q卩衣殼蛋白。泳道3:游離的還原的mlL-l(3u9-269蛋白。泳道4:Q(3-mlL-iPn9々69偶聯(lián)反應(yīng)物。圖2:mlL-locu7.27o蛋白與Q卩衣殼蛋白的偶聯(lián)在還原條件下的12%SDS-聚丙烯酰胺凝膠上分析蛋白質(zhì)。用考馬斯亮藍(lán)將該凝膠染色。在左邊空白處給出了標(biāo)記蛋白質(zhì)的分子量，單位是kDa,右邊空白處標(biāo)明了蛋白質(zhì)帶的身份。泳道1:預(yù)染色的蛋白質(zhì)標(biāo)記物(NewEnglandBiolabs)。泳道2:衍生的Q(3衣殼蛋白。泳道3:游離的還原的mlL-locu7.27o蛋白。泳道4:Q(3-mlL-lotu7.27o偶聯(lián)反應(yīng)物。發(fā)明詳述除非另有定義，本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語與本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員的通常理解具有相同的含義。佐劑本文使用的術(shù)語"佐劑"涉及免疫應(yīng)答的非特異性刺激物或使宿主內(nèi)產(chǎn)生貯庫(depot)的物質(zhì)，當(dāng)與本發(fā)明的疫苗和藥物組合物分別組合時(shí)，可以提供增強(qiáng)的免疫應(yīng)答。優(yōu)選的佐劑包括完全和不完全弗氏佐劑，含鋁佐劑，優(yōu)選氫氧化鋁，和修飾的胞壁酰二肽。進(jìn)一步優(yōu)選的佐劑有礦物質(zhì)凝膠例如氫氧化鋁，表面活性物質(zhì)例如溶血卵磷脂、普盧蘭尼克多元醇、聚陰離子、肽、油乳膠、匙孔蜮血藍(lán)蛋白、二硝基酚，和人佐劑例如BCG(卡介苗)和短小棒狀桿菌。這些佐劑也是本領(lǐng)域已知的。可以和本發(fā)明的組合物一起施用的其他佐劑包括但不限于，單磷酸類脂免疫調(diào)節(jié)劑、AdjuVax100a、QS-21、QS-18、CRL1005、鋁鹽(明礬)、MF畫59、OM-174、OM-197、OM畫294、和病毒顆粒佐劑技術(shù)。所述佐劑也可以包含上述物質(zhì)的混合物。VLP通常被描述為佐劑。然而，在本申請上下文中使用的術(shù)語"佐劑"是指不是用于本發(fā)明組合物的VLP，而是涉及另外一種不同成分的佐劑。抗原本文所用的術(shù)語"抗原"是指如果被MHC分子呈遞，則能夠被抗體或T細(xì)胞受體(TCR)結(jié)合的分子。本文所用的術(shù)語"抗原"也包括T細(xì)胞表位?？乖€能夠被免疫系統(tǒng)識別，以及/或者能夠誘導(dǎo)體液免疫應(yīng)答和/或細(xì)胞免疫應(yīng)答，導(dǎo)致B和/或T淋巴細(xì)胞的活化。然而，至少在某些情況下，這可能需要抗原含有Th細(xì)胞表位或者連接于Th細(xì)胞表位上，并且在佐劑中提供。一個(gè)抗原可能具有一個(gè)或多個(gè)表位(B和T表位)。上面提到的特異性反應(yīng)的意思是，抗原優(yōu)選地一般以高選擇性方式與其相應(yīng)的抗體或TCR反應(yīng)，而不與可能由其它抗原誘導(dǎo)的其它許多抗體或TCR反應(yīng)。本文所用的抗原也可以是幾種不同抗原的混合物。表位術(shù)語表位是指抗原(優(yōu)選多肽)的連續(xù)或不連續(xù)的部分，其中所述部分可以被抗體或在MHC分子環(huán)境內(nèi)被T細(xì)胞受體特異性地結(jié)合。對于抗體，特異性結(jié)合排除了非特異性結(jié)合，但是不一定排除交叉反應(yīng)性。表位在對于該抗原性位點(diǎn)而言獨(dú)特的空間構(gòu)象中一般包含5-10個(gè)氨基酸。特異性結(jié)合(抗體/抗原)在本申請中，如果抗體與抗原以106m"或更高、優(yōu)選1(^m"或更高、更優(yōu)選1()Sm"或更高、最優(yōu)選109M"或更高的結(jié)合親和力(Ka)結(jié)合，則被定義為特異性結(jié)合?？贵w的親和力可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員容易地測定(例如，通過Scatchard分析、ELISA或Biacore分片斤)。特異性結(jié)合(IL-1/IL-1受體)受體和受體配體之間的相互作用可以用本領(lǐng)域公知的生物物理方法來表征，所述方法包括，例如，ELISA或Biacore分析。當(dāng)IL-1與IL-1受體的結(jié)合親和力(Ka)至少為105M"，優(yōu)選至少106M",更優(yōu)選至少107M"，再更優(yōu)選至少108M-、最優(yōu)選至少1(fM"時(shí)，認(rèn)為所述IL-1分子能夠特異性結(jié)合所述IL-1受體；其中優(yōu)選地所述IL-1受體是來自小鼠或人、最優(yōu)選地來自人的IL-1受體。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述IL-1受體包含序列SEQIDNO:166至SEQIDNO:169中的任一種或者更優(yōu)選地由該序列組成，最優(yōu)選地所述IL-1受體包含序列SEQIDNO:166和SEQIDNO:167中的任一種或者更優(yōu)選地由該序列組成。聯(lián)接的(associated):本文所用的術(shù)語"聯(lián)接的"或"聯(lián)接"是指所有可能的方式，優(yōu)選化學(xué)相互作用，通過這種方式，兩個(gè)分子連接在一起。化學(xué)相互作用包括共價(jià)和非共價(jià)的相互作用。非共價(jià)相互作用的典型例子是離子相互作用、疏水相互作用或氫鍵，而共價(jià)相互作用例如基于共價(jià)鍵如酯、醚、磷酯、酰胺、肽、碳-磷鍵、碳-硫鍵如石克醚或酰亞胺4建。第一附著位點(diǎn)本文所用的短語"第一附著位點(diǎn)，，是指VLP中天然存在的或者人工添加到VLP中的一種元件，第二附著位點(diǎn)可與之連接。第一附著位點(diǎn)可以是蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、肽、糖、多核苷酸、天然或合成的聚合物、次級代謝物或化合物(生物素、熒光素、視黃醇、洋地黃毒苷、金屬離子、苯曱基磺酰氟)、或化學(xué)反應(yīng)性基團(tuán)如氨基、羧基、巰基、羥基、胍基、組氨?；蚱浣M合。作為第一附著位點(diǎn)的化學(xué)反應(yīng)性基團(tuán)的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案是氨基酸(優(yōu)選賴氨酸)的氨基。第一附著位點(diǎn)一般位于VLP的表面上，優(yōu)選位于VLP的外表面上。多個(gè)第一附著位點(diǎn)一般以重復(fù)構(gòu)型存在于病毒樣顆粒的表面上，優(yōu)選外表面上。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，第一附著位點(diǎn)與VLP通過至少一個(gè)共價(jià)鍵、優(yōu)選通過至少一個(gè)肽鍵聯(lián)接。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，第一附著位點(diǎn)自然存在于VLP中?；蛘?，在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，第一附著位點(diǎn)^皮人工添加到VLP上。第二附著位點(diǎn)本文使用的短語"第二附著位點(diǎn)"是指天然存在于或者人工添加到IL-1分子上的一種元件，第一附著位點(diǎn)可以與之連接。IL-1分子的第二附著位點(diǎn)優(yōu)選地是蛋白質(zhì)、多肽、肽、氨基酸、糖、多核苷酸、天然或合成的聚合物、次級代謝物或化合物(生物素、熒光素、視黃醇、洋地黃毒苷、金屬離子、苯甲基磺酰氟)、或化學(xué)反應(yīng)性基團(tuán)，例如氨基、羧基、巰基、羥基、胍基、組氨?；?、或其組合。作為第二附著位點(diǎn)的化學(xué)反應(yīng)性基團(tuán)的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案是巰基，優(yōu)選氨基酸半胱氨酸的巰基。本文使用的術(shù)語"具有至少一個(gè)第二附著位點(diǎn)的IL-1分子"因此是指包含IL-1分子和至少一個(gè)第二附著位點(diǎn)的構(gòu)建體。然而，特別是對于并非天然存在于IL-1分子內(nèi)的第二附著位點(diǎn)，這種構(gòu)建體一般且優(yōu)選地進(jìn)一步含有"接頭"。在另一個(gè)實(shí)施方案中，第二附著位點(diǎn)與IL-1分子通過至少一個(gè)共價(jià)^:,優(yōu)選地通過至少一個(gè)肽鏈聯(lián)接。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，第二附著位點(diǎn)天然存在于IL-1分子內(nèi)。在另外一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，第二附著位點(diǎn)被通過接頭人工添加到IL-1分子上，其中所述接頭包含半胱氨酸或由半胱氨酸組成。優(yōu)選地，所述接頭與IL-1分子通過肽鍵融合。外殼蛋白本申請中的術(shù)語"外殼蛋白"和可交換使用的術(shù)語"衣殼蛋白"是指能夠摻入病毒衣殼或VLP內(nèi)的病毒蛋白質(zhì)，優(yōu)選病毒(優(yōu)選RNA噬菌體)的天然衣殼的亞單位。IL-1分子本文使用的術(shù)語"IL-1分子"或簡寫"IL-1"是指任何多肽，其氨基酸序列與選自SEQIDNO:36至SEQIDNO:116、SEQIDNO:130至SEQIDNO:140和SEQIDNO:163至SEQIDNO:165的任一種序列具有至少80%、優(yōu)選至少90%、更優(yōu)選至少95%、更優(yōu)選至少99%、最優(yōu)選100%的序列同一性。本文使用的術(shù)語"IL-1分子"優(yōu)選地是指任何IL-1蛋白、IL-1片段、IL-l成熟片段、IL-1肽或IL-1突變蛋白，其包含一種多肽或者由該多肽組成，該多肽的氨基酸序列與選自SEQIDNO:36至SEQIDNO:116、SEQIDNO:130至SEQIDNO:140和SEQIDNO:163至SEQIDNO:165的任一種序列具有至少80%、優(yōu)選至少90%、更優(yōu)選至少95%、更優(yōu)選至少99%、最優(yōu)選100%的序列同一性。本文使用的術(shù)語IL-1分子典型且優(yōu)選地還指任何動物種的IL-1蛋白的直向同源物。IL-1分子優(yōu)選地但不是必須地能夠與IL-1受體結(jié)合并且進(jìn)一步優(yōu)選地具有生物活性。IL-loc分子本文使用的術(shù)語"IL-loc分子"或簡寫"IL-la"是指IL-lot蛋白、IL-la片段、IL-la成熟片段、IL-loc肽或IL-la突變蛋白，其包含一種多肽或者由該多肽組成，該多肽的氨基酸序列與選自SEQIDNO:36至48、SEQIDNO:63、SEQIDNO:65、SEQIDNO:67至SEQIDNO:88和SEQIDNO:163的任一種序列具有至少80%、優(yōu)選至少90%、更優(yōu)選至少95%、更優(yōu)選至少99%、最優(yōu)選100%的序列同一性。IL-la的一種特別優(yōu)選的實(shí)施方案是人IL-la119-271(SEQIDNO:63)。IL-ip分子本文使用的術(shù)語"IL-ip分子"或簡寫"IL-l(3"是指IL-1(3蛋白、IL-ip片段、IL-ip成熟片段、IL-ip肽或IL-ip突變蛋白，其包含一種多肽或者由該多肽組成，該多肽的氨基酸序列與選自SEQIDNO:49至SEQIDNO:62、SEQIDNO:64、SEQIDNO:66、SEQIDNO:89至SEQIDNO:116、SEQIDNO:130至SEQIDNO:140、SEQIDNO:164和SEQIDNO:165的任一種序列具有至少80%、優(yōu)選至少90%、更優(yōu)選至少95%、更優(yōu)選至少99%、最優(yōu)選100%的序列同一性。IL-1(3的一種特別優(yōu)選的實(shí)施方案是人IL-ip117-269(SEQIDNO:64)。IL-1蛋白本文使用的術(shù)語"IL-1蛋白"是指一種天然存在的蛋白質(zhì)，其中所述天然存在的蛋白質(zhì)的氨基酸序列與SEQIDNO:36至SEQIDNO:62的任一種序列具有至少80%、優(yōu)選至少90%、更優(yōu)選至少95%、更優(yōu)選至少99%、最優(yōu)選100%的序列同一性；或者其中所述天然存在的蛋白質(zhì)能夠與IL-1受體結(jié)合，優(yōu)選地具有生物活性。本文使用的術(shù)語"IL-1蛋白"優(yōu)選地是指一種天然存在的蛋白質(zhì)，其中所述天然存在的蛋白質(zhì)的氨基酸序列與SEQIDNO:36至SEQIDNO:62的任一種序列具有至少80%、優(yōu)選至少90%、更優(yōu)選至少95%、更優(yōu)選至少99%、最優(yōu)選100%的序列同一性；并且其中所述天然存在的蛋白質(zhì)能夠與IL-1受體結(jié)合，優(yōu)選地具有生物活性。典型且優(yōu)選地，本文使用的術(shù)語"IL-1蛋白，，是指至少一種天然存在的蛋白質(zhì)，其中所述蛋白質(zhì)能夠與IL-1受體結(jié)合，并且具有生物活性，其中進(jìn)一步地所述蛋白質(zhì)包含一種多肽或由該多肽組成，所述多肽的氨基酸序列與SEQIDNO:36至SEQIDNO:62的任一種序列具有至少80%、優(yōu)選至少90%、更優(yōu)選至少95%、更優(yōu)選至少99%、最優(yōu)選100%的序列同一性。相應(yīng)地，術(shù)語"IL-loc蛋白"涉及包含一種多肽或者由該多肽組成的IL-1蛋白，所述多肽的氨基酸序列與SEQIDNO:36至SEQIDNO:48的任一種具有至少80%、優(yōu)選至少90%、更優(yōu)選至少95%、更優(yōu)選至少99%、最優(yōu)選100%的序列同一性，而術(shù)語"IL-1(3蛋白"涉及包含一種多肽或者由該多肽組成的IL-1蛋白，所述多肽的氨基酸序列與SEQIDNO:49至SEQIDNO:62的任一種具有至少80%、優(yōu)選至少90%、更優(yōu)選至少95%、更優(yōu)選至少99%、最優(yōu)選100%的序列同一性。IL-1片段本文使用的術(shù)語"IL-1片段"涉及含有IL-1蛋白的連續(xù)序列段的多肽，其中所述多肽的長度為至少50個(gè)、優(yōu)選至少100個(gè)、最優(yōu)選至少150個(gè)氨基酸。典型且優(yōu)選地，所述IL-1片段的長度最多為300個(gè)、更優(yōu)選最多250個(gè)、最優(yōu)選最多200個(gè)氨基酸。典型且優(yōu)選地，IL-1片段能夠與IL-1受體結(jié)合，進(jìn)一步優(yōu)選地具有生物活性。相應(yīng)地，術(shù)語"IL-la片段"和"IL-l(3片段"涉及如上定義的IL-1片段，其中所述IL-1蛋白分別是IL-1a蛋白或IL-1(3蛋白。IL-1成熟片段本文使用的術(shù)語"IL-1成熟片段"涉及IL-1片段，其中所述IL-1片段是IL-1蛋白的天然存在的成熟產(chǎn)物。相應(yīng)地，本文使用的術(shù)語"IL-la成熟片段"和"IL-ip成熟片段"涉及如上定義的IL-1成熟片段，其中所述IL-l蛋白分別是IL-la蛋白或IL-ip蛋白。IL-la成熟片段的優(yōu)選實(shí)施方案是SEQIDNO:63、SEQIDNO:65和SEQIDNO:163。IL-1(3成熟片段的優(yōu)選實(shí)施方案是SEQIDNO:64、SEQIDNO:66、SEQIDNO:130、SEQIDNO:164和SEQIDNO:165。優(yōu)選的IL-la成熟片段包含選自下組的氨基酸序列或者優(yōu)選地由所述氨基酸序列組成(a)人IL-la119-271(SEQIDNO:63);(b)小鼠IL畫la117-270(SEQIDNO:65);(c)小鼠IL-loc117-270(SEQIDNO:163);和(e)與SEQIDNO:63、SEQIDNO:65和SEQIDNO:163任一種至少80%、或優(yōu)選至少90%、更優(yōu)選至少95%、或最優(yōu)選至少99%相同的氨基酸序列。優(yōu)選的IL-1(3成熟片段包含選自下組的氨基酸序列或者優(yōu)選地由所述氨基酸序列組成(a)人IL-1(3117-269(SEQIDNO:64);(b)人IL-1卩116-269(SEQIDNO:165);(c)小鼠IL-1(3119-269(SEQIDNO:66);(d)小鼠IL-1(3119-269(SEQIDNO:164);和(e)與SEQIDNO:64、SEQIDNO:66、SEQIDNO:164和SEQIDNO:165任一種至少80%、或優(yōu)選至少90%、更優(yōu)選至少95%、或最優(yōu)選至少99%相同的氨基酸序列。IL-1肽本文^f吏用的術(shù)語"IL-1肽"涉及一種含有天然存在的蛋白質(zhì)的連續(xù)序列段的多肽，其中所述蛋白質(zhì)能夠與IL-1受體結(jié)合，并且優(yōu)選地具有生物活性，其中所述多肽的長度為4-49個(gè)，優(yōu)選6至35個(gè)，最優(yōu)選10至25個(gè)氨基酸。IL-1肽可以，但是一般不能夠結(jié)合IL-1受體，典型地沒有生物活性。相應(yīng)地，本文^[吏用的術(shù)語"11^101肽"和"11^1(3肽"涉及如上定義的IL-1肽，其中所述天然存在的蛋白質(zhì)分別是IL-loc蛋白或IL-ip蛋白。優(yōu)選的IL-1肽是SEQIDNO:82至SEQIDNO:116。IL-1突變蛋白本文使用的術(shù)語"IL-1突變蛋白"包含由IL-1分子、優(yōu)選地由IL-lot或IL-1(3蛋白、IL-lot或IL-1(3片I殳、IL-la或IL-ip成熟片段或IL-la或IL-ip肽衍生的任何多肽，或者優(yōu)選地由所述多肽組成，其中優(yōu)選地所述多肽顯示比衍生出它的IL-1分子降低的生物活性。相應(yīng)地，IL-la突變蛋白和IL-1(3突變蛋白是以上定義的IL-1突變蛋白，其中所述多肽分別衍生自IL-la分子或IL-l(3分子。在優(yōu)選的IL-1突變蛋白中，所述生物活性低于衍生出它的IL-1分子的生物活性的80%，更優(yōu)選低于60%,更優(yōu)選低于40%,更優(yōu)選低于20%。進(jìn)一步優(yōu)選的IL-1突變蛋白衍生自IL-1成熟片段，其中所述IL-1突變蛋白的生物活性低于衍生所述IL-1突變蛋白的IL-1成熟片段的生物活性的80%，更優(yōu)選低于60%，更優(yōu)選低于40%，更優(yōu)選低于20%。非常優(yōu)選的IL-1突變蛋白不顯示生物活性。進(jìn)一步優(yōu)選地，{旦不是必須地，IL-1突變蛋白能夠特異性結(jié)合IL-1受體。非常優(yōu)選的是衍生自以下物質(zhì)的IL-1突變蛋白(i)IL-1蛋白，優(yōu)選來自SEQIDNO:36至SEQIDNO:62;或(ii)更優(yōu)選IL-1成熟片,殳，優(yōu)選來自SEQIDNO:63至SEQIDNO:66、SEQIDNO:130和SEQIDNO:163至SEQIDNO:165中的任一種。在上下文中有用的IL-1突變蛋白已經(jīng)在以下文獻(xiàn)中描述Kamogashim等人(1988)J.Biochem.104:837-840;Gehrke等人(1990)TheJournalofBiologicalChemistry265(11):5922-5925;Conca等人(1991)TheJournalofBiologicalChemistry266(25):16265-16268;Ju等人(1991)PNAS88:2658-2662;Auron等人(1992)Biochemistry31:6632-6638;Guinet等人(1993)Eur.J.Biochem211:583-590;Camacho(1993)Biochemistry32:8749-8757;Baumann(1993)JournalofReceprorResearch13(l-4):245-262;Simon(1993)TheJournalofBiologicalChemistry268(13):9771-9779;和Simoncsits(1994)Cytokine6(2):206-214,它們的公開內(nèi)容在此引用作為參考。優(yōu)選的IL-1突變蛋白包含一種多肽或者優(yōu)選地由該多肽組成，所述多肽的氨基酸序列與IL-1蛋白、IL-1片段、IL-1成熟片段或IL-1肽的氨基酸序列有1至10個(gè)、優(yōu)選1至6個(gè)，更優(yōu)選1至5個(gè)，更優(yōu)選l至4個(gè)，更優(yōu)選1至3個(gè)，更優(yōu)選1至2個(gè)，最優(yōu)選正好l個(gè)氨基酸殘基不同，其中優(yōu)選地所述氨基酸殘基(i)從所述多肽上刪除，(ii)插入所述多肽內(nèi)，(m)更換為另外一種氨基酸殘基，或者(iv)(i)至(iii)的任意組合。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述氨基酸殘基是一個(gè)連續(xù)序列段。進(jìn)一步優(yōu)選的IL-1突變蛋白包含一種多肽或者優(yōu)選地由該多肽組成，所述多肽的氨基酸序列與IL-1蛋白、IL-1片段、或IL-1成熟片段的氨基酸序列有1至10個(gè)、優(yōu)選1至6個(gè)，更優(yōu)選1至5個(gè)，更優(yōu)選1至4個(gè)，更優(yōu)選1至3個(gè)，更優(yōu)選1至2個(gè)，最優(yōu)選正好1個(gè)氨基酸殘基不同，其中優(yōu)選地所述氨基酸殘基(i)從所述多肽上刪除，(ii)插入所述多肽內(nèi)，(iii)更換為另外一種氨基酸殘基，或者(iv)(i)至(iii)的任意組合。進(jìn)一步優(yōu)選的IL-1突變蛋白包含一種多肽或者更優(yōu)選地由該多肽組成，所述多肽具有的氨基酸序列與SEQIDNO:36至SEQIDNO:48或SEQIDNO:49至SEQIDNO:62中任一種的氨基酸序列有1至10個(gè)、優(yōu)選1至6個(gè)，更優(yōu)選1至5個(gè)，更優(yōu)選1至4個(gè)，更優(yōu)選1至3個(gè)，更優(yōu)選1至2個(gè)，最優(yōu)選正好1個(gè)氨基酸殘基不同，其中優(yōu)選地所述氨基酸殘基(i)從所述多肽上刪除，(ii)插入所述多肽內(nèi)，(iii)更換為另外一種氨基酸殘基，或者(iv)(i)至(iii)的任意組合。進(jìn)一步優(yōu)選的IL-1突變蛋白包含一種多肽或者更優(yōu)選地由該多肽組成，所述多肽具有的氨基酸序列與選自以下序列的氨基酸序列有1至10個(gè)、優(yōu)選1至6個(gè)，更優(yōu)選1至5個(gè)，更優(yōu)選1至4個(gè)，更優(yōu)選1至3個(gè)，更優(yōu)選l至2個(gè)，最優(yōu)選正好1個(gè)氨基酸殘基不同(i)SEQIDNO:63、SEQIDNO:65和SEQIDNO:163中的任一種，最優(yōu)選SEQIDNO:63;或(ii)選自SEQIDNO:64、SEQIDNO:66、SEQIDNO:130、SEQIDNO:164和SEQIDNO:165的任一種，最優(yōu)選SEQIDNO:64，其中優(yōu)選地所述氨基酸殘基(i)從所述多肽上刪除，(ii)插入所述多肽內(nèi)，(iii)更換為另外一種氨基酸殘基，或者(iv)(i)至(iii)的任意組合。進(jìn)一步優(yōu)選的IL-1突變蛋白是IL-la突變蛋白，其中所述IL-loc突變蛋白包含一種多肽或者更優(yōu)選地由該多肽組成，所述多肽具有的氨基酸序列與SEQIDNO:36至SEQIDNO:48中任一種的氨基酸序列有1至6個(gè)，優(yōu)選1至5個(gè)，更優(yōu)選1至4個(gè)，更優(yōu)選1至3個(gè)，更優(yōu)選1至2個(gè)，最優(yōu)選正好1個(gè)氨基酸殘基不同，其中優(yōu)選地所述氨基酸殘基(i)從所述多肽上刪除，(ii)插入所述多肽內(nèi)，(iii)更換為另外一種氨基酸殘基，或者(iv)(i)至(iii)的任意組合。進(jìn)一步優(yōu)選的IL-loc突變蛋白包含一種多肽或者優(yōu)選地由該多肽組成，所述多肽具有的氨基酸序列與選自SEQIDNO:63、SEQIDNO:65和SEQIDNO:163中任一種，最優(yōu)選SEQIDNO:63的氨基酸序列有1至6個(gè)，優(yōu)選1至5個(gè)，更優(yōu)選1至4個(gè)，更優(yōu)選1至3個(gè)，更優(yōu)選1至2個(gè)，最優(yōu)選正好1個(gè)氨基酸殘基不同，其中優(yōu)選地所述氨基酸殘基(i)從所述多肽上刪除，(ii)插入所述多肽內(nèi)，(iii)更換為另外一種氨基酸殘基，或者(iv)(i)至(iii)的任意組合。非常優(yōu)選的IL-lot突變蛋白包含一種多肽或者優(yōu)選地由該多肽組成，所述多肽具有的氨基酸序列與SEQIDNO:63的氨基酸序列有1至10個(gè)、優(yōu)選1至6個(gè)，更優(yōu)選1至5個(gè)，更優(yōu)選1至4個(gè)，更優(yōu)選l至3個(gè)，更優(yōu)選1至2個(gè)，最優(yōu)選正好1個(gè)氨基酸殘基不同，其中優(yōu)選地所述氨基酸殘基(i)從所述多肽上刪除，(ii)插入所述多肽內(nèi)，(iii)更換為另外一種氨基酸殘基，或者(iv)(i)至(iii)的任意組合。進(jìn)一步優(yōu)選的IL-1突變蛋白是IL-1(3突變蛋白，其中所述IL-lot突變蛋白包含一種多肽或者更優(yōu)選地由該多肽組成，所述多肽具有的氨基酸序列與SEQIDNO:49至SEQIDNO:62中任一種的氨基酸序列有1至6個(gè)，優(yōu)選1至5個(gè)，更優(yōu)選1至4個(gè)，更優(yōu)選1至3個(gè)，更優(yōu)選1至2個(gè)，最優(yōu)選正好1個(gè)氨基酸殘基不同，其中優(yōu)選地所述氨基酸殘基(i)從所述多肽上刪除，(ii)插入所述多肽內(nèi)，(iii)更換為另外一種氨基酸殘基，或者(iv)(i)至(iii)的任意組合。進(jìn)一步優(yōu)選的IL-ip突變蛋白包含一種多肽或者優(yōu)選地由該多肽組成，所述多肽具有的氨基酸序列與選自SEQIDNO:64、SEQIDNO:66、SEQIDNO:130、SEQIDNO:164和SEQIDNO:165,最優(yōu)選SEQIDNO:64的氨基酸序列有1至6個(gè)，優(yōu)選1至5個(gè)，更優(yōu)選1至4個(gè)，更優(yōu)選1至3個(gè)，更優(yōu)選1至2個(gè)，最優(yōu)選正好1個(gè)氨基酸殘基不同，其中優(yōu)選地所述氨基酸殘基(i)從所述多肽上刪除，(ii)插入所述多肽內(nèi)，(iii)更換為另外一種氨基酸殘基，或者(iv)(i)至(iii)的任意組合。非常優(yōu)選的IL-1(3突變蛋白包含一種多肽或者優(yōu)選地由該多肽組成，所述多肽具有的氨基酸序列與SEQIDNO:64的氨基酸序列有1至10個(gè)，優(yōu)選1至6個(gè)，優(yōu)選1至5個(gè)，更優(yōu)選1至4個(gè)，更優(yōu)選1至3個(gè)，更優(yōu)選1至2個(gè)，最優(yōu)選正好1個(gè)氨基酸殘基不同，其中優(yōu)選地所述氨基酸殘基(i)從所述多肽上刪除，(ii)插入所述多肽內(nèi)，(iii)更換為另外一種氨基酸殘基，或者(iv)(i)至(iii)的任意組合。更優(yōu)選的IL-1(3突變蛋白包含一種多肽或者優(yōu)選地由該多肽組成，所述多肽具有選自SEQIDNO:131至SEQIDNO:140中任一種的氨基酸序列。IL-1的促動效應(yīng)/生物活性本文用于IL-1的術(shù)語"生物活性"或"生物活性的"是指IL-1分子在給動物全身施用后誘導(dǎo)IL-6產(chǎn)生的能力，優(yōu)選地如實(shí)施例2E和實(shí)施例3E所述。IL-1分子的生物活性也指誘導(dǎo)胸腺細(xì)胞(Epps等人，Cytokine9(3):149-156(1997》、D10.G4.1T輔助細(xì)胞(O謹(jǐn)ole和Di腦llo，Cytokine1(1):14誦22(1989))增殖的能力，或誘導(dǎo)MG64或HaCaT細(xì)胞(Boraschi等人，J.Immunol.155:4719-4725(1995))或成纖維纟田月包(Dinarello等人,CurrentProtocolsinImmunology6.2.1-6-2-7(2000))產(chǎn)生IL-6的能力，或者誘導(dǎo)EL-4胸腺瘤細(xì)胞產(chǎn)生IL-2(Simon等人，J.Immunol.Methods84(l-2):85-94(1985))的能力,或者抑制人骨髓瘤細(xì)胞系A(chǔ)375生長的能力(Nakai等人，Biochem.Biophys.Res.Commun.154:1189-1196(1988》。連接的本文所用的術(shù)語"連接的"或"連接"是指所有可能的方式，優(yōu)選化學(xué)相互作用，通過這種方式，至少一個(gè)第一附著位點(diǎn)和至少一個(gè)第二附著位點(diǎn)連接在一起?；瘜W(xué)相互作用包括共價(jià)和非共價(jià)的相互作用。非共價(jià)相互作用的典型例子是離子相互作用、疏水相互作用或氫鍵，而共價(jià)相互作用例如基于共價(jià)鍵如酯、醚、磷酯、酰胺、肽、碳-磷鍵、碳-硫鍵如硫醚或酰亞胺鍵。在某些優(yōu)選實(shí)施方案中，第一附著位點(diǎn)和第二附著位點(diǎn)通過至少一個(gè)共價(jià)鍵連接，優(yōu)選通過至少一個(gè)非肽鍵連接，更優(yōu)選只通過非肽鍵連接。然而，本文所用的術(shù)語"連接"不僅指至少一個(gè)第一附著位點(diǎn)和至少一個(gè)第二附著位點(diǎn)的直接連接，而且可替代地并且優(yōu)選地，包括至少一個(gè)第一附著位點(diǎn)和至少一個(gè)第二附著位點(diǎn)通過中間分子的間接連接，典型且優(yōu)選地通過使用至少一個(gè)、優(yōu)選一個(gè)異雙功能交聯(lián)劑連接。在其他優(yōu)選實(shí)施方案中，第一附著位點(diǎn)和第二附著位點(diǎn)通過至少一個(gè)共價(jià)鍵連接，優(yōu)選通過至少一個(gè)肽鍵連接，更優(yōu)選只通過肽鍵連接。在一個(gè)非常優(yōu)選的實(shí)施方案中，第一附著位點(diǎn)和第二附著位點(diǎn)只通過肽結(jié)合連接，優(yōu)選通過直接基因融合或優(yōu)選地通過氨基酸接頭的基因融合連接。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，第二附著位點(diǎn)只通過肽結(jié)合，優(yōu)選地通過基因融合，與所述第一附著位點(diǎn)的C末端連接。接頭本文所用的"接頭"將第二附著位點(diǎn)與IL-1分子聯(lián)接，或者已經(jīng)包含第二附著位點(diǎn)、基本由、或者由第二附著位點(diǎn)組成。優(yōu)選地，本文所用的"接頭"已經(jīng)包含第二附著位點(diǎn)，典型且優(yōu)選地一但不是必需地一為一個(gè)氨基酸殘基，優(yōu)選半胱氨酸殘基。本文所用的"接頭"也被稱為"氨基酸接頭"，特別是當(dāng)本發(fā)明的接頭含有至少一個(gè)氨基酸殘基時(shí)。因此，術(shù)語"接頭"和"氨基酸接頭"在本文中可以交換使用。然而，這并不意味著這種接頭僅由氨基酸殘基組成，即使由氨基酸殘基組成的接頭是本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施方案。接頭的氨基酸殘基優(yōu)選地由本領(lǐng)域已知的天然氨基酸或非天然氨基酸、其全L型或全D型或混合物組成。本發(fā)明的接頭的進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案是包含巰基或半胱氨酸殘基的分子，這些分子因此也包括在本發(fā)明中?？捎糜诒景l(fā)明的其他接頭有包含Cl-C6烷基-、環(huán)烷基如環(huán)戊基或環(huán)己基、環(huán)烯基、芳基或雜芳基部分的分子。而且，優(yōu)選地包含Cl-C6烷基-、環(huán)烷基-(C5，C6)、芳基-或雜芳基-部分和另外的氨基酸的接頭也可以用作本發(fā)明的接頭，并且包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。接頭與IL-1分子優(yōu)選地通過至少一個(gè)共價(jià)鍵、更優(yōu)選地通過至少一個(gè)肽鍵聯(lián)接。在通過基因融合連接的情況中，接頭可以不存在，或者優(yōu)選地是氨基酸接頭，更優(yōu)選地是僅僅由氨基酸殘基組成的氨基酸接頭。非常優(yōu)選的用于基因融合的接頭是柔性氨基酸接頭。在通過基因融合連接的情況中，接頭優(yōu)選地由1-20個(gè)、更優(yōu)選2-15個(gè)、更優(yōu)選2-10個(gè)、更優(yōu)選2-5個(gè)、最優(yōu)選3個(gè)氨基酸組成。非常優(yōu)選的用于基因融合的接頭包含GSG(SEQIDNO:189)或者優(yōu)選地由GSG組成。有序且重復(fù)的抗原陣列本文所用的術(shù)語"有序且重復(fù)的抗原陣列"通常是指抗原的重復(fù)模式，或者其特征在于抗原相對于病毒樣顆粒的空間排列具有典型且優(yōu)選地高度的均一性。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，這種重復(fù)模式可以是幾何模式。本發(fā)明的某些實(shí)施方案，例如與RNA噬菌體的VLP偶聯(lián)的抗原，是合適的有序且重復(fù)的抗原陣列的典型且優(yōu)選的實(shí)例，而且其優(yōu)選地具有嚴(yán)格重復(fù)的類晶體抗原排列，優(yōu)選間隔l-30納米，優(yōu)選2-15納米，更優(yōu)選2-10納米，更優(yōu)選2-8納米,進(jìn)一步更優(yōu)選1.6-7納米。包裝的本文所用的術(shù)語"包裝的"是指聚陰離子大分子或免疫刺激物相對于VLP的狀態(tài)。本文所用的術(shù)語"包裝"包括結(jié)合，該結(jié)合可以是共價(jià)的，例如化學(xué)偶聯(lián)，也可以是非共價(jià)的，例如離子相互作用、疏水相互作用、氫鍵等。該術(shù)語也包括聚陰離子大分子的包封或部分包封。因此，聚陰離子大分子或免疫刺激物可以被VLP包封，而不需要存在實(shí)際上的結(jié)合，特別是共價(jià)結(jié)合。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，至少一個(gè)聚陰離子大分子或免疫刺激物被包裝在VLP內(nèi)，最優(yōu)選地以非共價(jià)的方式包裝。在所述免疫刺激物是核酸，優(yōu)選地是DNA的情況中，術(shù)語包裝的含意是所述核酸對于核酸酶水解而言是不可及的，優(yōu)選地對于DNAse水解(例如DNAseI或Benzonase)是不可及的，其中優(yōu)選地所述可及性如WO2003/024481A2的實(shí)施例11-17所述測定。多肽如此處所用的術(shù)語"多肽"是指由單體(氨基酸)通過酰胺鍵(也稱為肽鍵)線性連接組成的分子。它是指氨基酸分子鏈，而不是指特定長度的產(chǎn)物。因此，多肽的定義內(nèi)包括肽、二肽、三肽、寡肽和蛋白質(zhì)。該術(shù)語也包括多肽的翻譯后修飾，例如糖基化、乙?；⒘姿峄?。重組VLP:本文使用的術(shù)語"重組VLP"是指通過包括至少一個(gè)重組DNA技術(shù)步驟的方法獲得的VLP。本文使用的術(shù)語"重組產(chǎn)生的VLP"是指通過包括至少一個(gè)重組DNA技術(shù)步驟的方法獲得的VLP。因此，術(shù)語"重組VLP，，和"重組產(chǎn)生的VLP，，在本文中可以互換使用，具有相同的含義。病毒顆粒本文使用的術(shù)語"病毒顆粒"是指病毒的形態(tài)學(xué)形式。在某些病毒類型中，它包含由蛋白質(zhì)衣殼圍繞的基因組；另外一些具有額外的結(jié)構(gòu)(例如被膜、尾等)。本文使用的病毒樣顆粒(VLP)是指非復(fù)制性或非傳染性的、優(yōu)選非復(fù)制性且非傳染性的病毒顆粒，或者是指非復(fù)制性或非傳染性的、優(yōu)選非復(fù)制性且非傳染性的類似于病毒顆粒、優(yōu)選病毒衣殼的結(jié)構(gòu)。本文使用的術(shù)語"非復(fù)制性"是指不能復(fù)制VLP所含的基因組。本文使用的術(shù)語"非傳染性"是指不能進(jìn)入宿主細(xì)胞。優(yōu)選地，本發(fā)明的病毒樣顆粒是非復(fù)制性和/或非傳染性的，因?yàn)樗狈θ炕虿糠值牟《净蚪M或基因組功能。在一個(gè)實(shí)施方案中，病毒樣顆粒是其中病毒基因組已經(jīng)^皮物理或化學(xué)滅活的病毒顆粒。典型且更優(yōu)選地，病毒樣顆粒缺少病毒基因組的全部或部分復(fù)制性和傳染性部分。本發(fā)明的病毒樣顆?？赡芎信c其基因組不同的核酸。本發(fā)明的病毒樣顆粒的一個(gè)典型且優(yōu)選的實(shí)施方案是病毒衣殼，如相應(yīng)病毒、噬菌體、優(yōu)選RNA噬菌體的病毒衣殼。術(shù)語"病毒衣殼，，或"衣殼，，是指由病毒蛋白質(zhì)亞單位組成的大分子裝配體。典型地，有60、120、180、240、300、360個(gè)和360個(gè)以上的病毒蛋白亞單位。典型且優(yōu)選地，這些亞單位的相互作用導(dǎo)致形成具有固有的重復(fù)組織的病毒衣殼或病毒衣殼樣結(jié)構(gòu)，其中所述結(jié)構(gòu)一般是球形或管狀。例如，RNA噬菌體或HBcAg的衣殼具有二十面體對稱的球形形式。本文使用的術(shù)語"衣殼樣結(jié)構(gòu)"是指由病毒蛋白亞單位組成的大分子裝配體，其類似于上述定義的衣殼形態(tài)，但是不同于典型的對稱裝配體，同時(shí)保持足夠程度的順序和重復(fù)性。病毒顆粒和病毒樣顆粒的一個(gè)共同特征是其亞單位高度有序且重復(fù)的排列。RNA噬菌體的病毒樣顆粒本文使用的術(shù)語"RNA噬菌體的病毒樣顆粒"是指包含RNA噬菌體的外殼蛋白、其突變體或片段、或者優(yōu)選地基本由其組成、或者由其組成的病毒樣顆粒。另外，RNA噬菌體的病毒樣顆粒類似于RNA噬菌體的結(jié)構(gòu)，并且是非復(fù)制性或非傳染性的，并且至少缺少編碼RNA噬菌體的復(fù)制機(jī)制的基因，一般也缺少編碼負(fù)責(zé)病毒附著或進(jìn)入宿主的蛋白質(zhì)的基因。然而，該定義應(yīng)當(dāng)也包括上述基因仍然存在但是無活性的RNA噬菌體的病毒樣顆粒，這樣也可產(chǎn)生非復(fù)制性和/或非傳染性的RNA噬菌體的病毒樣顆粒。優(yōu)選的來源于RNA噬菌體的VLP表現(xiàn)為二十面體對稱，并且由180個(gè)亞單位(單體)組成。使RNA噬菌體的病毒樣顆粒成為非復(fù)制性和/或非傳染性的優(yōu)選方法是通過物理、化學(xué)滅活，如紫外線照射、曱醛處理，一般且優(yōu)選地是通過遺傳操作。一種或一個(gè)術(shù)語"一種"或"一個(gè)"在本申請中使用時(shí)，除非另外說明，是指"至少一種(個(gè))"或"一種(個(gè))或一種(個(gè))以上"。多肽的氨基酸序列同一性可以使用諸如Bestfit程序等已知計(jì)算機(jī)程序常規(guī)確定。當(dāng)使用Bestfit或其它任何序列比對程序、優(yōu)選使用Bestfit來確定一種特定序列與參照氨基酸序列是否例如95%相同時(shí)，將參數(shù)設(shè)置為使得在參照氨基酸序列的全長上計(jì)算同一性百分比，并且允許最多占參照序列中氨基酸殘基總數(shù)的5%的同源性缺口。上述測定多肽之間百分同一性的方法適用于本發(fā)明公開的所有蛋白質(zhì)、多肽或其片段。本發(fā)明提供增強(qiáng)動物或人體中對IL-1的免疫應(yīng)答的組合物和方法。本發(fā)明的組合物包含(a)具有至少一個(gè)第一附著位點(diǎn)的核心顆粒，其中所述核心顆粒是病毒樣顆粒(VLP)或病毒顆粒；和(b)具有至少一個(gè)第二附著位點(diǎn)的至少一種抗原，其中所述至少一種抗原是優(yōu)選選自IL-1蛋白、IL-1成熟片段、IL-1肽和IL-1突變蛋白的IL-1分子，其中(a)和(b)通過所述至少一個(gè)第一附著位點(diǎn)和所述至少一個(gè)第二附著位點(diǎn)連接。優(yōu)選地，所述IL-1分子與核心顆粒連接，從而形成有序且重復(fù)的抗原-VLP陣列。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，至少20個(gè)，優(yōu)選至少30個(gè)，更優(yōu)選至少60個(gè)，更優(yōu)選至少120個(gè)，進(jìn)一步更優(yōu)選至少180個(gè)IL-1分子與核心顆粒連接?？梢赃x擇本領(lǐng)域公知的任何具有有序且重復(fù)的結(jié)構(gòu)的病毒作為本發(fā)明的VLP或病毒顆粒。其外殼或衣殼蛋白能夠用于制備VLP的示例性的DNA或RNA病毒已經(jīng)在WO2004/009124的第25頁第10-21行，第26頁第11-28行，和第28頁第4行到第31頁第4行公開。這些公開的內(nèi)容在此引入作為參考。病毒或病毒樣顆?？梢詮牟《靖腥镜募?xì)胞培養(yǎng)物中產(chǎn)生和純化。獲得的用于疫苗目的的病毒或病毒樣顆粒優(yōu)選地是非復(fù)制性或非傳染性的，更優(yōu)選地是非復(fù)制性且非傳染性的。紫外線照射、化學(xué)處理，如曱醛或氯仿處理，是本領(lǐng)域公知的滅活病毒的常用方法。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，核心顆粒是病毒顆粒，并且其中優(yōu)選地所述病毒顆粒是噬菌體，其中進(jìn)一步優(yōu)選地所述噬菌體是RNA噬菌體，其中進(jìn)一步優(yōu)選地所述RNA噬菌體是選自Q(3、fr、GA或AP205的RNA嗟菌體。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，核心顆粒是VLP。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，VLP是重組VLP。幾乎所有7>知的病毒都已經(jīng):陂測序，并且可以容易地被公眾獲得。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠容易地確定編碼外殼蛋白的基因。通過在宿主中重組表達(dá)外殼蛋白制備VLP是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的常識。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，病毒樣顆粒包含或者由選自下組的病毒的重組蛋白、其突變體或片段組成a)RNA噬菌體；b)噬菌體；c)乙型肝炎病毒，優(yōu)選其衣殼蛋白(Ulrich等人，VimsRes.50:141-182(1998))或其表面蛋白(WO92/11291);d)麻滲病毒(Warnes等人，Gene160:173-178(1995));e)辛德畢斯病毒；f)輪狀病毒(US5,071,651和US5,374,426);g)口蹄疫病毒(Twomey等人,Vaccine13:1603-1610，(1995));h)諾沃克病毒(Jiang，X.等人,Science250:1580-1583(1990);Matsui,S.M.等人，J.Clin.Invest.87:1456-1461(1991));i)甲病毒；j)逆轉(zhuǎn)錄病毒，優(yōu)選其GAG蛋白(WO96/30523);k)逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子Ty,優(yōu)選蛋白pi;l)人乳頭瘤病毒(WO98/15631);m)多瘤病毒；n)煙草花葉病毒；和o)禽獸棚病毒。包含一種以上不同的重組蛋白的VLP在本申請中通常被稱為嵌合VLP。在一個(gè)實(shí)施方案中，VLP是嵌合VLP,其中所述嵌合VLP包含或者由一種以上的重組蛋白、優(yōu)選兩種重組蛋白、最優(yōu)選兩種重組衣殼蛋白、其突變體或片段組成。本文使用的術(shù)語"重組蛋白的片段"或術(shù)語"外殼蛋白的片段"被定義為一種多肽，其長度分別為野生型重組蛋白或外殼蛋白長度的至少70%,優(yōu)選至少80%,更優(yōu)選至少90%,更優(yōu)選至少95%,并且優(yōu)選地保留形成VLP的能力。優(yōu)選地，該片段通過至少一個(gè)內(nèi)部缺失、至少一個(gè)截短或至少一個(gè)其組合而獲得。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述片段通過最多5、4、3或2個(gè)內(nèi)部缺失、通過最多2個(gè)截短或通過恰好一個(gè)它們的組合獲得。術(shù)語"重組蛋白的片段"或術(shù)語"外殼蛋白的片段"還包括與以上定義的"重組蛋白的片段"或"夕卜殼蛋白的片段"分別具有至少80%,優(yōu)選90%，更優(yōu)選95%的氨基酸序列同一性并且優(yōu)選能夠裝配為病毒樣顆粒的多肽。術(shù)語"突變外殼蛋白"是指具有分別由野生型重組蛋白或外殼蛋白衍生的氨基酸序列的多肽，其中該衍生的氨基酸序列與野生型序列至少80%、優(yōu)選至少85%、90%、95%、97%或99%相同，并且優(yōu)選地保留裝配為VLP的能力。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的病毒樣顆粒是乙型肝炎病毒的病毒樣顆粒。乙型肝炎病毒樣顆粒的制備已經(jīng)在WO00/32227、WO01/85208和WO02/056905中公開，所有三篇文獻(xiàn)在此都引用以作參考。適合在本發(fā)明的實(shí)施中使用的HBcAg的其他變體在WO01/056905的第34-39頁已經(jīng)公開。在本發(fā)明的一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，將賴氨酸殘基導(dǎo)入HBcAg多肽中，來介導(dǎo)IL-1分子與HBcAg的VLP的連接。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，利用包含、或由SEQIDNO:1的氨基酸1-144、或1-149、1-185組成的HBcAg制備本發(fā)明的VLP和組合物，其中該氨基酸被修飾使得第79和80位的氨基酸被替代為具有Gly-Gly-Lys-Gly-Gly氨基酸序列(SEQIDNO:170)的肽。這個(gè)修飾將SEQIDNO:1改變?yōu)镾EQIDNO:2。在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，SEQIDNO:2的第48和110位的半胱氨酸殘基，或其相應(yīng)片段，優(yōu)選l-144或1-149,被突變?yōu)榻z氨酸。本發(fā)明進(jìn)一步包括包含具有上述相應(yīng)氨基酸改變的乙型肝炎核心蛋白突變體的組合物。本發(fā)明進(jìn)一步包括分別包含HBcAg多肽的組合物和疫苗，該HBcAg多肽包含、或由與SEQIDNO:21至少80%、85%、90%、95%、97%或99%相同的氨基酸序列組成。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的病毒樣顆粒包含RNA噬菌體的重組外殼蛋白、其突變體或片段，或者基本由其組成，或者由其組成。優(yōu)選地，該RNA噬菌體選自a)噬菌體QP;b)噬菌體R17;c)噬菌體fr;d)噬菌體GA;e)噬菌體SP;f)噬菌體MS2;g)噬菌體M11;h)噬菌體MXl;i)噬菌體NL95;k)噬菌體f2;1)噬菌體PP7;和m)謹(jǐn)菌體AP205。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述組合物包含RNA噬菌體的外殼蛋白、其突變體或片段，其中該外殼蛋白具有選自以下序列的氨基酸序列(a)SEQIDNO:3;涉及CP;(b)SEQIDNO:3和SEQIDNO:4的混合物(QpAI蛋白)；(c)SEQIDNO:5(R17衣殼蛋白)；(d)SEQIDNO:6(fr衣殼蛋白)；(e)SEQIDNO:7(GA衣殼蛋白)；(f)SEQIDNO:8(SP衣殼蛋白)；(g)SEQIDNO:8和SEQIDNO:9的混合物；(h)SEQIDNO:IO(MS2衣殼蛋白)；(i)SEQIDNO:ll(Mil衣殼蛋白)；(j)SEQIDNO:12(MXl衣殼蛋白)；(k)SEQIDNO:13(NL95衣殼蛋白)；(1)SEQIDNO:14(f2衣殼蛋白)；(m)SEQIDNO:15(PP7衣殼蛋白)；和(n)SEQIDNO:21(AP205衣殼蛋白)。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，VLP是嵌合VLP,包含RNA噬菌體的外殼蛋白、其突變體或片段的一種以上的氨基酸序列，優(yōu)選兩種氨基酸序列，或者由該氨基酸序列組成。在一個(gè)非常優(yōu)選的實(shí)施方案中，VLP包含RNA噬菌體的兩種不同的外殼蛋白，或者由所述外殼蛋白組成，所述兩種外殼蛋白具有CPQP(SEQIDNO:3)和CPQPAl(SEQIDNO:4)或CPSP(SEQIDNO:8)和CPSPAl(SEQIDNO:9)的氨基酸序列。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的病毒樣顆粒包含RNA噬菌體QP、fr、AP205或GA的重組外殼蛋白、其突變體或片段，或者基本由其組成，或者由其組成。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的VLP是RNA噬菌體Q(3的VLP。Q|3的衣殼或病毒樣顆粒顯示為二十面體噬菌體樣衣殼結(jié)構(gòu)，直徑25nm，T=3半對稱。該衣殼含有180個(gè)拷貝的外殼蛋白，這些外殼蛋白通過二硫鍵連接為共價(jià)五聚體和六聚體(GolmohammadiR.等人，Structure4:543-5554(1996))，使Q|3衣殼具有顯著的穩(wěn)定性。然而，由重組Q(3外殼蛋白構(gòu)成的衣殼或VLP可能含有不通過二硫鍵與衣殼內(nèi)的其它亞單位連接的或不完全連接的亞單位。Q(3的衣殼或VLP顯示對有機(jī)溶劑和變性劑有不同尋常的耐受性。我們驚奇地發(fā)現(xiàn)，高至30%的DMSO和乙腈濃度和高至IM的胍鹽濃度不影響衣殼的穩(wěn)定性。QP的衣殼或VLP的高穩(wěn)定性是一個(gè)有利的特征，特別是對于根據(jù)本發(fā)明免疫和接種哺乳動物和人的用途而言。根據(jù)本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)選的RNA噬菌體的病毒樣顆粒、特別是Q|3和fr的病毒樣顆粒，已經(jīng)在WO02/056905中公開，其公開內(nèi)容在此引用作為參考。特別地，WO02/056905的實(shí)施例18給出了由QP制備VLP顆粒的詳細(xì)描述。在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的VLP是RNA噬菌體AP205的VLP。在本發(fā)明的實(shí)踐中也可以使用AP205VLP的能夠裝配的突變形式，包括氨基酸5位的脯氨酸被置換為蘇氨酸的AP205外殼蛋白，這產(chǎn)生本發(fā)明的其他優(yōu)選的實(shí)施方案。WO2004/007538,特別是在實(shí)施例1和實(shí)施例2中，描述了如何獲得包含AP205外殼蛋白的VLP,以及特別是其表達(dá)和純化。WO2004/007538在此引入作為參考。AP205VLP具有高度免疫原性，能夠與本發(fā)明的IL-1分子連接，典型且優(yōu)選地產(chǎn)生以重復(fù)方式展示定向的IL-1分子的疫苗構(gòu)建體。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的VLP包含病毒(優(yōu)選RNA噬菌體)的突變外殼蛋白，或者由所述突變外殼蛋白組成，其中通過置換和/或通過刪除而除去至少一個(gè)賴氨酸殘基，從而修飾了該突變外殼蛋白。在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的VLP包含病毒(優(yōu)選RNA噬菌體)的突變外殼蛋白，或者由所述突變外殼蛋白組成，其中通過置換和/或通過插入而添加至少一個(gè)賴氨酸殘基，從而修飾了該突變外殼蛋白。至少一個(gè)賴氨酸殘基的刪除、置換或添加可以改變偶聯(lián)程度，即病毒(優(yōu)選RNA噬菌體)的VLP的每個(gè)亞單位上IL-1分子的量，特別是，用來匹配和適應(yīng)疫苗的要求。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物和疫苗具有0.5到4.0的抗原密度。本文使用的術(shù)語"抗原密度"是指VLP(優(yōu)選RNA噬菌體)的VLP的每個(gè)亞單位上(優(yōu)選每個(gè)外殼蛋白上)連接的IL-1分子的平均數(shù)。因此，該值可以計(jì)算為在本發(fā)明的組合物或疫苗中VLP(優(yōu)選RNA噬菌體的VLP)的所有亞單位上的平均數(shù)。QP外殼蛋白的VLP或衣殼在其表面上展示數(shù)量確定的賴氨酸殘基，具有確定的拓樸學(xué)，3個(gè)賴氨酸殘基指向衣殼內(nèi)部，并與RNA相互作用，其它4個(gè)賴氨酸殘基暴露于衣殼外部。優(yōu)選地，至少一個(gè)第一附著位點(diǎn)是賴氨酸殘基，指向或位于VLP的外部。其暴露的賴氨酸殘基被精氨酸取代的Q(3突變體可以用于本發(fā)明。這樣，在本發(fā)明另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，該病毒樣顆粒包含下列物質(zhì)，基本上由下列物質(zhì)組成，或由下列物質(zhì)組成突變QP外殼蛋白。優(yōu)選的突變外殼蛋白包含選自以下序列的氨基酸序列，或由該氨基酸序列組成；a)Q(3畫240(SEQIDNO:16;SEQIDNO:3的Lysl3-Arg),b)QP-243(SEQIDNO:17，SEQIDNO:3的AsnlO-Lys)，c)Q|3-250(SEQIDNO:18,SEQIDNO:3的Lys2-Arg)d)Q(3畫251(SEQIDNO:19，SEQIDNO:3的Lysl6-Arg);和e)Q|3-259(SEQIDNO:20,SEQIDNO:3的Lys2-Arg、Lysl6-Arg)。上述QP突變外殼蛋白、突變Q(3外殼蛋白VLP和衣殼的構(gòu)建、表達(dá)和純化在WO02/056905中有描述。特別參考上述申請的實(shí)施例18。在本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，病毒樣顆粒包含QP的突變外殼蛋白、或其突變體或片段和相應(yīng)的Al蛋白，或者基本由其組成，或者由其組成。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，病毒樣顆粒包含具有氨基酸序列SEQIDN0:16、17、18、19或20的突變外殼蛋白和相應(yīng)的A1蛋白，或者基本由其組成，或者由其組成。其它一些RNA噬菌體外殼蛋白在細(xì)菌宿主中表達(dá)后也顯示自裝配(Kastelein,RA.等人，Gene23:245-254(1983),Kozlovskaya，TM.等人，Dokl.Akad.NaukSSSR287:452-455(1986),Adhin,MR.等人，Virology170:238-242(1989),Priano，C.等人，J.Mol.Biol.249:283-297(1995))。特別是已經(jīng)公開了GA(Ni，CZ,等人，ProteinSci.5:2485-2493(1996)，Tars,K等人，J.Mol.Biol.271:759-773(1997))和fr(PushkoP.等人，Prot.Eng.6:883-891(1993)，Liljas，L等人.JMol.Biol.244:279-290,(1994))的生物學(xué)和生化性質(zhì)。幾種RNA噬菌體的晶體結(jié)構(gòu)已經(jīng)確定(Golmohammadi,R.等人，Structure4:543-554(1996))。利用這些信息，能夠確定表面暴露的殘基，從而能夠修飾RNA噬菌體的外殼蛋白，以便能夠通過插入或置換插入一個(gè)或多個(gè)反應(yīng)性氨基酸殘基。來源于RNA噬菌體的VLP的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是它們在細(xì)菌中的高表達(dá)產(chǎn)量，這允許以可承受的成本產(chǎn)生大量的物質(zhì)。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物包含至少一種抗原，優(yōu)選1至4種，更優(yōu)選1至3種，更優(yōu)選1-2種，最優(yōu)選正好1種抗原，其中所述至少一種抗原是IL-1分子，優(yōu)選IL-1蛋白、IL-1片段、IL-1成熟片段、IL-1肽或IL-1突變蛋白，其中所述IL-1分子優(yōu)選地含有一種多肽或更優(yōu)選地由該多肽組成，所述多肽所含的氨基酸序列與SEQIDNO:36至SEQIDNO:116、SEQIDNO:130至SEQIDNO:140和SEQIDNO:163至SEQIDNO:165中任一種具有至少80%、優(yōu)選至少90%、更優(yōu)選至少95%、更優(yōu)選至少99%、最優(yōu)選100%的序在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述抗原是來源于選自下組的生物的IL-1分子(a)人；(b)靈長類動物；(c)嚙齒類動物；(d)馬；(e)羊;(f)貓;(g)牛;(h)豬;(i)兔;(j)狗;(k)小鼠；和(g)大鼠。最優(yōu)選地，所述IL-1分子來源于人類，優(yōu)選地包含一種多肽，或者更優(yōu)選由該多肽組成，所述多肽與選自SEQIDNO:36、SEQIDNO:49、SEQIDNO:63、SEQIDNO:64的任一種序列、SEQIDNO:67-110的任一種序列、SEQIDNO:130-140的任一種序列和SEQIDNO:165具有至少80%、優(yōu)選至少90%、更優(yōu)選至少95%、更優(yōu)選至少99%、最優(yōu)選100%的序列同一性。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述IL-1分子來源于大鼠或小鼠，優(yōu)選小鼠，其中所述IL-1分子優(yōu)選地包含一種多肽，或者更優(yōu)選地由該多肽組成，所述多肽所含的氨基酸序列與SEQIDNO:45、SEQIDNO:46、SEQIDNO:53、SEQIDNO:54、SEQIDNO:65、SEQIDNO:66的任一種序列、SEQIDNO:lll-116的任一種序列、SEQIDNO:163、SEQIDNO:164具有至少80%、優(yōu)選至少90%、更優(yōu)選至少95%、更優(yōu)選至少99%、最優(yōu)選100%的序列同一性。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，IL-1分子是IL-loc分子，優(yōu)選IL-la蛋白、IL-la片段、IL-la成熟片段、IL-la肽或IL-la突變蛋白，其中所述IL-la分子優(yōu)選地包含一種多肽，或者更優(yōu)選地由一種多肽組成，所述多肽的氨基酸序列與選自SEQIDNO:36至48、SEQIDNO:63、SEQIDNO:65、SEQIDNO:67至88和SEQIDNO:165的任一種序列具有至少80%、優(yōu)選至少90%、更優(yōu)選至少95%、更優(yōu)選至少99%、最優(yōu)選100%的序列同一性。IL-la分子的特別優(yōu)選的實(shí)施方案是人IL-la分子，優(yōu)選人IL-la蛋白、人IL-la片段或人IL-la成熟片段，其中所述IL-la分子優(yōu)選地包含一種多肽或者更優(yōu)選由一種多肽組成，所述多肽的氨基酸序列與SEQIDNO:36、SEQIDNO:63和SEQIDNO:163中的任一種、最優(yōu)選與SEQIDNO:63具有至少80%、優(yōu)選至少90%、更優(yōu)選至少95%、更優(yōu)選至少99%、最優(yōu)選100%的序列同一性。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述IL-l分子是IL-ip分子，優(yōu)選IL-1(3蛋白、IL-ip片段、IL-1(3成熟片段、IL-ip肽或IL-ip突變蛋白，其中所述IL-1(3分子優(yōu)選地包含一種多肽，或者更優(yōu)選地由一種多肽組成，所述多肽的氨基酸序列與選自SEQIDNO:49至62、SEQIDNO:64、SEQIDNO:66、SEQIDNO:89至116、SEQIDNO:130至SEQIDNO:140、SEQIDNO:164和SEQIDNO:165中的任一種序列具有至少80%、優(yōu)選至少90%、更優(yōu)選至少95%、更優(yōu)選至少99%、最優(yōu)選100%的序列同一性。IL-ip分子的特別優(yōu)選的實(shí)施方案是人IL-1(3分子，優(yōu)選人IL-1(3蛋白、人IL-l(3片段或人IL-ip成熟片段，其中所述IL-1(3分子優(yōu)選地包含一種多肽，或者更優(yōu)選由一種多肽組成，所述多肽的氨基酸序列與SEQIDNO:49、SEQIDNO:64、SEQIDNO:130至SEQIDNO:140和SEQIDNO:165中的任一種，最優(yōu)選地與SEQIDNO:64具有至少80%、優(yōu)選至少90%、更優(yōu)選至少95%、更優(yōu)選至少99%、最優(yōu)選100%的序列同一性。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述IL-1分子是IL-1蛋白、IL-1片段或優(yōu)選IL-1成熟片段，其中所述IL-1蛋白、IL-1片段或IL-1成熟片段優(yōu)選地能夠與IL-1受體結(jié)合，更優(yōu)選地另外也具有生物活性。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述IL-1分子是IL-1蛋白，其中所述IL-1蛋白優(yōu)選地包含一種多肽，或者更優(yōu)選地由一種多肽組成，所述多肽的氨基酸序列與SEQIDNO:36至SEQIDNO:62中的任一種具有至少80%、優(yōu)選至少90%、更優(yōu)選至少95%、更優(yōu)選至少99%、最優(yōu)選100%的序列同一性。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述IL-l蛋白是IL-la蛋白，其中所述IL-la蛋白優(yōu)選地包含一種多肽，或者更優(yōu)選地由一種多肽組成，所述多肽的氨基酸序列與選自SEQIDNO:36至SEQIDNO:48的任一種序列具有至少80%、優(yōu)選至少90%、更優(yōu)選至少95%、更優(yōu)選至少99%、最優(yōu)選100%的序列同一性。最優(yōu)選地，所述IL-la蛋白是人IL-loc蛋白，其中所述人IL-la蛋白優(yōu)選地包含一種多肽，或者更優(yōu)選地由一種多肽組成，所述多肽的氨基酸序列與SEQIDNO:36具有至少80%、優(yōu)選至少90%、更優(yōu)選至少95%、更優(yōu)選至少99%、最優(yōu)選100%的序列同一性。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述所述IL-1蛋白是IL-ip蛋白，其中所述IL-ip蛋白優(yōu)選地包含一種多肽，或者更優(yōu)選地由一種多肽組成，所述多肽的氨基酸序列與選自SEQIDNO:49至SEQIDNO:62的任一種序列具有至少80%、優(yōu)選至少90%、更優(yōu)選至少95%、更優(yōu)選至少99%、最優(yōu)選100%的序列同一性。最優(yōu)選地，所述IL-ip蛋白是人IL-1(3蛋白，其中所述人IL-1(3蛋白優(yōu)選地包含一種多肽，或者更優(yōu)選地由一種多肽組成，所述多肽的氨基酸序列與SEQIDNO:49具有至少80%、優(yōu)選至少90%、更優(yōu)選至少95%、更優(yōu)選至少99%、最優(yōu)選100%的序列同一性。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述所述IL-1分子是IL-1片段，優(yōu)選IL-1成熟片段，其中所述IL-1片段或所述IL-1成熟片段優(yōu)選地來源于小鼠或人類，最優(yōu)選地來源于人類。優(yōu)選地，所述IL-1片段或所述IL-1成熟片段含有一種多肽或者更優(yōu)選地由一種多肽組成，所述多肽的氨基酸序列與SEQIDNO:63至SEQIDNO:66、SEQIDNO:130和SEQIDNO:163至SEQIDNO:165中的任一種具有至少80%、優(yōu)選至少90%、更優(yōu)選至少95%、更優(yōu)選至少99%、最優(yōu)選100%的序列同一性。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述IL-1成熟片段是IL-la成熟片段，其中所述IL-la成熟片段優(yōu)選地具有生物活性，并且其中進(jìn)一步，所述IL-la成熟片段優(yōu)選地含有一種多肽或者更優(yōu)選地由一種多肽組成，所述多肽的氨基酸序列與SEQIDNO:63或SEQIDNO:65任一種，最優(yōu)選地與SEQIDNO:63具有至少80%、優(yōu)選至少90%、更優(yōu)選至少95%、更優(yōu)選至少99%、最優(yōu)選100%的序列同一性。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述IL-1成熟片段是IL-ip成熟片段，其中所述IL-ip成熟片段優(yōu)選地具有生物活性，并且其中進(jìn)一步所述IL-1(3成熟片段優(yōu)選地含有一種多肽或者更優(yōu)選地由一種多肽組成，所述多肽的氨基酸序列與SEQIDNO:64、SEQIDNO:66、SEQIDNO:130中的任一種，最優(yōu)選地與SEQIDNO:64具有至少80%、優(yōu)選至少90%、更優(yōu)選至少95%、更優(yōu)選至少99%、最優(yōu)選100%的序列同一性。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述il-1分子是il-1肽，其中所述IL-1肽來源于小鼠、大鼠或人類，最優(yōu)選地來源于人類。優(yōu)選地，所述IL-1肽優(yōu)選地含有一種多肽或者更優(yōu)選地由一種多肽組成，所述多肽的氨基酸序列與SEQIDNO:67至SEQIDNO:l16中的任一種具有至少80%、優(yōu)選至少90%、更優(yōu)選至少95%、更優(yōu)選至少99%、最優(yōu)選100%的序列同一性。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述IL-1分子是IL-1突變蛋白，其中優(yōu)選地所述IL-1突變蛋白包含降低的生物活性或更優(yōu)選地沒有生物活性，并且其中進(jìn)一步所述IL-1突變蛋白能夠結(jié)合IL-1受體。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述IL-1突變蛋白包含一種多肽或優(yōu)選地由一種多肽組成，所述多肽的氨基酸序列與IL-1成熟片段的氨基酸序列有1至3個(gè)，更優(yōu)選1-2個(gè)，最優(yōu)選正好1個(gè)氨基酸殘基不同。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述IL-1突變蛋白是IL-ip突變蛋白，優(yōu)選人IL-1(3突變蛋白，最優(yōu)選選自SEQIDNO:131至SEQIDNO:140的人IL-1(3突變蛋白。本發(fā)明提供一種制備本發(fā)明的組合物的方法，包括(a)提供具有至少一個(gè)第一附著位點(diǎn)的VLP;(b)提供具有至少一個(gè)第二附著位點(diǎn)的至少一種抗原，其中所述抗原是IL-1分子、IL-1蛋白、IL-1片段，優(yōu)選IL-l成熟片^a、IL-1肽或IL-1突變蛋白；和(c)將所述VLP與所述至少一種抗原相組合，產(chǎn)生所述組合物，其中所述至少一種抗原和所述VLP通過所述至少一個(gè)第一附著位點(diǎn)和所述至少一個(gè)第二附著位點(diǎn)連接。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，提供具有至少一個(gè)第二附著位點(diǎn)的至少一種抗原，即IL-1分子、IL-1蛋白、IL-1片段、優(yōu)選IL-1成熟片段、IL-1肽或IL-1突變蛋白，是通過表達(dá)，優(yōu)選地通過在細(xì)菌系統(tǒng)中，優(yōu)選地在大腸桿菌中表達(dá)而實(shí)現(xiàn)的。為了有利于純化過程，通常添加純化標(biāo)簽，如His標(biāo)簽、Myc標(biāo)簽、Fc標(biāo)簽或HA標(biāo)簽。在另一方法中，特別可以化學(xué)合成具有不長于50個(gè)氨基酸的IL-1肽或IL-1突變蛋白。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，具有至少一個(gè)第一附著位點(diǎn)的VLP與具有至少一個(gè)第二附著位點(diǎn)的IL-1分子通過至少一個(gè)肽鍵連接。編碼IL-1分子(優(yōu)選IL-1成熟片段)的基因符合讀框地連接到編碼VLP外殼蛋白的基因的內(nèi)部或優(yōu)選連接到其N末端或C末端。也可以通過將IL-1的序列插入部分外殼蛋白序列已經(jīng)缺失的突變外殼蛋白(其進(jìn)一步稱為截短突變體)中實(shí)現(xiàn)融合。截短突變體可以具有外殼蛋白的部分序列的N末端或C末端或者內(nèi)部缺失。例如，對于特異性VLPHBcAg,氨基酸79-80被替換為外源表位。該融合蛋白優(yōu)選保留了在表達(dá)后裝配為VLP的能力，這可以通過電鏡檢查?？杉尤雮?cè)翼氨基酸殘基來增加外殼蛋白和外源表位之間的距離。甘氨酸和絲氨酸殘基是用于側(cè)翼序列的特別有利的氨基酸。這種側(cè)翼序列提供額外的柔性，可減少外源序列融合進(jìn)入VLP亞單位序列時(shí)可能的去穩(wěn)定效應(yīng)，并且可減少外源表位的存在對裝配的干擾。在另外一些實(shí)施方案中，至少一種IL-1分子，優(yōu)選IL-1成熟片段，能夠與大量其它病毒外殼蛋白融合，例如，與Qp的Al蛋白的截短形式的C末端融合(Kozlovska，T.M.，等人，Intervirology39:9-15(1996))，或者插入CP延伸的位點(diǎn)72和73之間。作為另一個(gè)實(shí)例，IL-1可以插入frCP的氨基酸2和3之間，產(chǎn)生IL-l-frCP融合蛋白(PushkoP.等人，Prot.Eng.6:883-891(1993))。此外，IL-1也可以與RNA噬菌體MS-2的外殼蛋白的N末端突出(3-發(fā)夾融合(W092/13081)。此外，IL-1也可以與乳頭瘤病毒的衣殼蛋白融合，優(yōu)選與l型牛乳頭瘤病毒(BPV-1)的主要衣殼蛋白Ll融合(Chackerian,B.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA96:2373-2378(1999),WO00/23955)。將BPV-1Ll的氨基酸130-136置換為IL-1也是本發(fā)明的實(shí)施方案。將IL-1分子與病毒的外殼蛋白、其突變體或片段融合的實(shí)施方案已經(jīng)在WO2004/009124的第62頁第20行至第68頁第17行公開，在此引入作為參考。US5,698,424描述了一種能夠形成衣殼的修飾的噬菌體MS-2外殼蛋白，其中通過向N端發(fā)夾區(qū)中插入半胱氨酸殘基，以及通過將位于N端發(fā)夾區(qū)外部的每一個(gè)半胱氨酸殘基置換為非半胱氨酸氨基酸殘基，修飾了該外殼蛋白。插入的半胱氨酸然后可以直接連接到欲呈遞的期望的分子種類如表位或抗原性蛋白質(zhì)上。然而我們注意到，衣殼中存在暴露的游離半胱氨酸殘基可導(dǎo)致衣殼通過形成二硫鍵而寡聚化。而且，衣殼和抗原性蛋白質(zhì)之間通過二硫鍵的連接是不穩(wěn)定的，特別是對于含有巰基部分的分子不穩(wěn)定，而且，在血清中例如比硫醚連接的穩(wěn)定性差(MartinFJ.和PapahadjopoulosD.(1982)IrreversibleCouplingofImmunoglobulinfragmentstoPreformedVesicles.J.Biol.Chem.257:286-288)。因此，在本發(fā)明的另一個(gè)非常優(yōu)選的實(shí)施方案中，VLP與至少一種抗原即IL-l分子的聯(lián)接或連接不包括二硫鍵。進(jìn)一步優(yōu)選的，所述至少一個(gè)第二附著位點(diǎn)包含，或優(yōu)選地是巰基。而且，在本發(fā)明一個(gè)非常優(yōu)選的實(shí)施方案中，VLP與至少一種IL-l分子的聯(lián)接或連接不包括硫-硫鍵。進(jìn)一步優(yōu)選地，至少一個(gè)第二附著位點(diǎn)包含或者優(yōu)選地是巰基。在另一個(gè)非常優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述至少一個(gè)第一附著位點(diǎn)不是或不包含巰基。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述至少一個(gè)第一附著位點(diǎn)不是或者不包含半胱氨酸的巰基。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述至少一個(gè)第一附著位點(diǎn)包含氨基，并且所述第二附著位點(diǎn)包含巰基。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，只有一個(gè)所述第二附著位點(diǎn)與所述第一附著位點(diǎn)通過至少一個(gè)非肽共價(jià)鍵連接，形成單一且均勻類型的所述IL-l分子與所述核心顆粒的結(jié)合，其中與所述第一附著位點(diǎn)連接的所述只有一個(gè)第二附著位點(diǎn)是巰基，并且其中所述IL-l分子和所述核心顆粒通過所述連接相互作用，形成有序且重復(fù)的抗原陣列。在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，IL-1分子，優(yōu)選IL-1蛋白，更優(yōu)選IL-1成熟片段，更優(yōu)選包含氨基酸序列SEQIDNO:63至SEQIDNO:66、最優(yōu)選SEQIDNO:63或SEQIDNO:64、或者由上述序列組成的IL-l成熟片段，與RNA噬菌體AP205的外殼蛋白、其突變體或片段的N-或C-末端、優(yōu)選與C-末端融合。含有RNA噬菌體AP205的外殼蛋白與抗原的融合蛋白的VLP在WO2006/032674A1中總體公開，在此引用作為參考。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，融合蛋白進(jìn)一步包含接頭，其中所述接頭與AP205的外殼蛋白、其突變體或片段和IL-1分子融合。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述IL-1分子與AP205的所述外殼蛋白、其突變體或片段通過所述接頭融合。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，IL-1分子，特別是包含至少100個(gè)、最多300個(gè)氨基酸、典型且優(yōu)選地大約140-160個(gè)氨基酸、最優(yōu)選大約155個(gè)氨基酸的IL-1蛋白和IL-1片段，可以與噬菌體的外殼蛋白融合，優(yōu)選地與AP205的外殼蛋白融合，同時(shí)保持該外殼蛋白自裝配為VLP的能力。鑒于IL-1蛋白、IL-1片段和IL-1成熟片段的大尺寸，以及由于空間原因，構(gòu)建了產(chǎn)生包含與IL-1分子融合的AP205外殼蛋白以及野生型外殼蛋白亞單位的嵌合VLP的表達(dá)系統(tǒng)。在該系統(tǒng)中，終止密碼子的抑制產(chǎn)生了AP205-IL-1外殼蛋白融合，而正確終止產(chǎn)生野生型AP205外殼蛋白。兩種蛋白質(zhì)在細(xì)胞中同時(shí)產(chǎn)生，并裝配為嵌合VLP。這種系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn)是可以展示大蛋白質(zhì)，而不干擾VLP的裝配。由于AP205-IL-1融合蛋白引入嵌合VLP中的水平依賴于阻抑水平，AP205-IL-1在已經(jīng)包含過量表達(dá)抑制t-RNA的質(zhì)粒的大腸桿菌細(xì)胞中表達(dá)。對于乳白阻抑，使用質(zhì)粒pISM3001(Smiley,B.K.,Minion,F.C.(1993)Enhancedreadthroughofopal(UGA)stopcodonsandproductionofAfycop/a扁a，e謹(jǐn)ow'aePIepitopesin_&c/zen'c/zz'flf<%>//.GW2e134，33-40),其編碼識別乳白終止密碼子的阻抑型t-RNA并引入Trp。應(yīng)用質(zhì)粒pISM579可以增加琥珀終止的阻抑，pISM579過量表達(dá)識別琥珀終止密碼子并引入Trp的阻抑型t-RNA。質(zhì)粒pISM579如下產(chǎn)生用限制性內(nèi)切核酸酶五coi/從pISM3001上切下trpT176基因，并將其替換為含有琥珀t-RNA阻抑基因的來自質(zhì)粒pMY579(MichaelYarus惠贈)的￡co^/片段。該t-RNA阻抑基因是trpTl75的突變體(RafteryLA.等人(1984)J.Bacteriol.158:849-859),與trpT在三個(gè)位點(diǎn)上不同G33，A24和T35。在具有琥珀阻抑0;^或g/w^)的大腸桿菌抹如大腸桿菌JM109中表達(dá)AP205-白介素-loc融合蛋白，除了在琥珀終止密碼子處引入Trp的AP205-IL-1融合蛋白以外，還可以產(chǎn)生一定比例的在琥珀終止密碼子處引入Gln而不是Trp的AP205-IL-1融合蛋白。在終止密碼子處翻譯的氨基酸身份因此可依賴于過量表達(dá)的阻抑型t-RNA和菌抹表型的組合。如MillerJH等人((1983)J.Mol.Biol.164:59-71)所述和本領(lǐng)域中公知的，阻抑效率是依賴于環(huán)境的。特別是，位于終止密碼子3'的密碼子和位于終止密碼子3'的第一個(gè)堿基特別重要。例如，后接。票呤堿的終止密碼子通常被很好地阻抑。因此，在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述VLP是嵌合VLP,其中所述嵌合VLP包含至少一個(gè)、優(yōu)選一個(gè)第一多肽和至少一個(gè)、優(yōu)選一個(gè)第二多肽，或優(yōu)選地由上述多肽組成，其中所述第一多肽是重組衣殼蛋白、其突變體或片段；并且其中所述第二多肽是優(yōu)選所述第一多肽的重組衣殼蛋白、其突變體或片段與IL-1分子的基因融合產(chǎn)物。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述第一多肽是噬菌體AP205的重組衣殼蛋白或其突變體或片段。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述第一多肽選自SEQIDNO:21、SEQIDNO:22、SEQIDNO:23。在一個(gè)非常優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述第一多肽是SEQIDNO:21。包含抗原的噬菌體AP205的嵌合VLP在WO2006/032674A1中總體乂^開，特別是在所述公開文本的第107段。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述第二多肽是優(yōu)選所述第一多肽的重組衣殼蛋白、其突變體或片段與IL-1分子的基因融合產(chǎn)物，其中所述IL-1分子與所述重組衣殼蛋白、其突變體或片段的C-末端融合，優(yōu)選地通過氨基酸接頭融合。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述IL-1分子包含100-300個(gè)氨基酸、典型且優(yōu)選地大約140-160個(gè)氨基酸、最優(yōu)選地大約155個(gè)氨基酸，或者優(yōu)選地由上述氨基酸組成。在一個(gè)非常優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述嵌合VLP中所述第一多肽與所述第二多肽的摩爾比為10:1至5:1，優(yōu)選8:1至6:1,最優(yōu)選大約7:1。在本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述組合物含有或者基本由具有至少一個(gè)第一附著位點(diǎn)的病毒樣顆粒組成，該病毒樣顆粒與具有至少一個(gè)第二附著位點(diǎn)的至少一種抗原(即IL-1分子)通過至少一個(gè)共價(jià)鍵連接，優(yōu)選地該共價(jià)鍵是非肽鍵。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，第一附著位點(diǎn)包含或優(yōu)選地是氨基，優(yōu)選賴氨酸殘基的氨基。在本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，第二附著位點(diǎn)包含，或者優(yōu)選地是巰基，優(yōu)選半胱氨酸的巰基。在本發(fā)明的一個(gè)非常優(yōu)選的實(shí)施方案中，至少一個(gè)第一附著位點(diǎn)是氨基，優(yōu)選賴氨酸殘基的氨基，并且至少一個(gè)第二附著位點(diǎn)是巰基，優(yōu)選半胱氨酸殘基的巰基。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，通過化學(xué)交聯(lián)，一般且優(yōu)選地通過使用異雙功能交聯(lián)劑，將IL-1分子與VLP連接。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述異雙功能交聯(lián)劑含有能夠與VLP的優(yōu)選的第一附著位點(diǎn)(優(yōu)選氨基，更優(yōu)選賴氨酸殘基的氨基)反應(yīng)的官能團(tuán)，和能夠與IL-1分子固有的或人工添加的優(yōu)選的第二附著位點(diǎn)(即巰基，優(yōu)選半胱氨酸殘基的巰基)反應(yīng)的另一個(gè)官能團(tuán)，任選地該另一個(gè)官能團(tuán)也可通過還原用于反應(yīng)。有幾種異雙功能交聯(lián)劑在本領(lǐng)域公知。包括優(yōu)選的交聯(lián)劑SMPH(Pierce)、Sulfo-MBS、Sulfo-EMCS、Sulfo誦GMBS、Sulfo-SIAB、Sulfo-SMPB、Sulfo-SMCC、SVSB、SIA和其它例^口可/人pierceChemicalCompany獲4尋的、具有一個(gè)氨基反應(yīng)'l"生官能團(tuán)和一個(gè)巰基反應(yīng)性官能團(tuán)的交聯(lián)劑。上述交聯(lián)劑均導(dǎo)致在與氨基反應(yīng)后形成酰胺鍵和與巰基反應(yīng)后形成硫醚鍵。適用于實(shí)施本發(fā)明的另一類交聯(lián)劑的特征在于偶聯(lián)時(shí)在IL-1分子與VLP之間引入二硫鍵。屬于這一類的優(yōu)選交聯(lián)劑包括，例如SPDP和Sulfo-LC-SPDP(Pierce)在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物還包含接頭。根據(jù)本發(fā)明的公開內(nèi)容，通過連接優(yōu)選包含適合作為第二附著位點(diǎn)的至少一個(gè)氨基酸的接頭，實(shí)現(xiàn)向IL-1分子上構(gòu)建第二附著位點(diǎn)。因此，在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，接頭通過至少一個(gè)共價(jià)鍵、優(yōu)選通過至少一個(gè)、通常一個(gè)肽鍵與IL-1分子連接。優(yōu)選地，接頭包含或者由第二附著位點(diǎn)組成。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，接頭包含巰基，優(yōu)選半胱氨酸殘基的巰基。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，氨基酸接頭是半胱氨酸殘基。接頭的選擇取決于IL-1分子的性質(zhì)，取決于其生化性質(zhì)，如pl、電荷分布和糖基化。柔性的氨基酸接頭通常是有利的。在本發(fā)明的一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，接頭由氨基酸組成，其中進(jìn)一步優(yōu)選地，接頭由最多25個(gè)，優(yōu)選最多20個(gè)，更優(yōu)選最多15個(gè)氨基酸組成。在本發(fā)明的另一優(yōu)選實(shí)施方案中，氨基酸接頭含有1-10個(gè)氨基酸。接頭的優(yōu)選實(shí)施方案選自(a)CGG(SEQIDNO:171);(b)N畫端yl接頭，優(yōu)選CGDKTHTSPP(SEQIDNO:172);(c)N-端y3接頭，優(yōu)選CGGPKPSTPPGSSGGAP(SEQIDNO:173);(d)Ig鉸鏈區(qū)；(e)N-端甘氨酸接頭，優(yōu)選GCGGGG(SEQIDNO:174);(f)(G)kC(G)n，其中n=0-12，k二0陽5(SEQIDNO:175);(g)N誦端甘氨酸誦絲氨酸接頭，優(yōu)選(GGGGS)n，n=l-3(SEQIDNO:176)，具有另外一個(gè)半胱氨酸；(h)(G)kC(G)m(S)l(GGGGS)n,其中n=0-3，k=0-5,m=0-10，1=0-2(SEQIDNO:177);(i)GGC(SEQIDNO:178);(k)GGC畫NH2(SEQIDNO:179);(l)C端yl接頭，優(yōu)選DKTHTSPPCG(SEQIDNO:180);(m)C-端y3接頭，優(yōu)選PKPSTPPGSSGGAPGGCG(SEQIDNO:181);(n)C-端甘氨酸接頭，優(yōu)選GGGGCG(SEQIDNO:182);(o)(G)nC(G)k，其中n=0-12，k=0-5(SEQIDNO:183);(p)C-端甘氨酸-絲氨酸接頭，優(yōu)選(SGGGG)n，n=l-3(SEQIDNO:184),具有另外一個(gè)半胱氨酸；(q)(G)m(S)l(GGGGS)n(G)oC(G)k，其中n=0-3，k=0-5,m=0-10,1=0-2，o=0-8(SEQIDNO:185)。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，接頭添加到IL-1分子的N末端。在本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，接連體添加到IL-1分子的C末端。本發(fā)明優(yōu)選的接頭是進(jìn)一步含有半胱氨酸殘基作為第二附著位點(diǎn)的甘氨酸接頭(G)n，如N-末端甘氨酸接頭(GCGGGG，SEQIDNO:174)和C-末端甘氨酸接頭(GGGGCG,SEQIDNO:182)。進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案是C-末端甘氨酸-賴氨酸接頭(GGKKGC，SEQIDNO:186)和N-末端甘氨酸-賴氨酸接頭(CGKKGG，SEQIDNO:187),位于肽的C畫末端的GGCG(SEQIDNO:188)和GGC(SEQIDNO:179,"NH2"代表酰胺化)接頭，或位于其N-末端的CGG(SEQIDNO:171)。甘氨酸殘基通常插入大氨基酸與作為第二附著位點(diǎn)的半胱氨酸之間，以避免偶聯(lián)反應(yīng)中較大氨基酸的潛在的空間位阻。根據(jù)上述優(yōu)選方法利用異雙功能交聯(lián)劑連接IL-1分子與VLP，使得本發(fā)明的抗原以定向方式與VLP偶聯(lián)。連接IL-1分子和VLP的其它方法包括使用碳二亞胺EDC和NHS交聯(lián)IL-1分子和VLP的方法。IL-1分子也可以首先通過例如與SATA、SATP或亞氨碌^醇(iminothiolane)反應(yīng)而硫醇化。必要時(shí)，在脫保護(hù)之后，IL-1分子可以和VLP如下所述偶聯(lián)。在分離過量的硫醇化試劑之后，IL-1分子與預(yù)先用含有半胱氨酸反應(yīng)性部分的異雙功能交聯(lián)劑活化的VLP反應(yīng)，該活化的VLP展示至少一個(gè)或幾個(gè)對半胱氨酸殘基具有反應(yīng)性的官能團(tuán)，如上所述的硫醇化的IL-1分子能夠與該官能團(tuán)反應(yīng)。任選地，在反應(yīng)混合物中含有少量的還原劑。另外一些方法使用同型雙功能交聯(lián)劑，如戊二醛、DSG、BM[PEO]4、BS3(Pierce)或含有對VLP的胺基或羧基有反應(yīng)性的官能團(tuán)的其它已知同型雙功能交聯(lián)劑，將IL-1分子與VLP連接。在本發(fā)明的其他實(shí)施方案中，組合物包含或者基本由通過化學(xué)相互作用與IL-1分子連接的病毒樣顆粒組成，其中這些相互作用的至少一種不是共價(jià)一睫。VLP與IL-1分子的連接可以通過將VLP生物素化并且將IL-1分子表達(dá)為鏈霉抗生物素-融合蛋白而實(shí)現(xiàn)。一個(gè)或幾個(gè)抗原分子，即IL-1分子，可以附著到優(yōu)選RNA噬菌體外殼蛋白的VLP的一個(gè)亞單位上，優(yōu)選通過RNA噬菌體外殼蛋白VLP的暴露的賴氨酸殘基附著，如果空間上允許的話。RNA噬菌體的VLP(特別是QP外殼蛋白VLP)的特定特征因此是每個(gè)亞單位能夠偶聯(lián)幾個(gè)抗原。這允許產(chǎn)生密集的抗原陣列。在本發(fā)明的非常優(yōu)選的實(shí)施方案中，IL-1分子通過添加到IL-1分子N末端或C末端上的半胱氨酸或IL-1分子內(nèi)的天然半胱氨酸殘基與RNA噬菌體的VLP的外殼蛋白(特別是Q(3的外殼蛋白)的賴氨酸殘基連接。如上所述，4個(gè)賴氨酸殘基暴露于Q(3外殼蛋白的VLP的表面。典型地，這些殘基通過與交聯(lián)劑分子反應(yīng)而衍生化。當(dāng)不是所有的暴露賴氨酸殘基都能與抗原偶聯(lián)時(shí)，在衍生化步驟后，已與交聯(lián)劑反應(yīng)的賴氨酸殘基就留下來，交聯(lián)劑分子附著到s-氨基上。這就使對VLP的溶解性和穩(wěn)定性可能不利的一種或幾種正電荷消失。通過例如在下文所述的QP外殼蛋白突變體中那樣用精氨酸取代某些賴氨酸殘基，我們避免了正電荷的過度消失，因?yàn)榫彼釟埢⒉荒芘c優(yōu)選的交聯(lián)劑反應(yīng)。此外，用精氨酸取代賴氨酸殘基會產(chǎn)生更確定的抗原陣列，因?yàn)橹挥休^少的位點(diǎn)可與抗原反應(yīng)。因此，在下列的QP外殼蛋白突變體中，用精氨酸取代暴露的賴氨酸殘基QP-240(Lysl3國Arg;SEQIDNO:16),Q卩-250(Lys2-Arg,Lysl3-Arg,SEQIDNO:18),Q卩-259(Lys2-Arg、Lysl6誦Arg;SEQIDNO:20)，和QP畫251(Lysl6-Arg;SEQIDNO:19)。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，我們公開了具有另外一個(gè)賴氨酸殘基的Q(3突變外殼蛋白Q卩-243(Asn10-Lys;SEQIDNO:17),它適合獲得較高密度的抗原陣列。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，RNA噬菌體的VLP由宿主重組產(chǎn)生，并且其中所述VLP基本不含宿主RNA,優(yōu)選宿主核酸。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述組合物還包含至少一種與VLP結(jié)合、優(yōu)選包裝或包封于VLP內(nèi)部的聚陰離子大分子。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，聚陰離子大分子是聚谷氨酸和/或聚天冬氨酸。在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述組合物進(jìn)一步包含至少一種與VLP結(jié)合、優(yōu)選包裝或包封于VLP內(nèi)部的免疫刺激物。在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述免疫刺激物是核酸，優(yōu)選DNA，最優(yōu)選含非曱基化CpG的寡核苷酸?；静缓拗鱎NA、優(yōu)選宿主核酸本文所用的術(shù)語"基本不含宿主RNA,優(yōu)選宿主核酸"是指VLP所含的宿主RNA、優(yōu)選宿主核酸的量，該量典型且優(yōu)選地為每mgVLP不到30pg，優(yōu)選不到20pg，更優(yōu)選不到10jig，甚至更優(yōu)選不到8fig,甚至更優(yōu)選不到6嗎，甚至更優(yōu)選不到4(ig,最優(yōu)選不到2嗎。在上述內(nèi)容中使用的宿主是指在其中重組產(chǎn)生VLP的宿主。測定RNA(優(yōu)選核酸)的量的常規(guī)方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。根據(jù)本發(fā)明測定RNA(優(yōu)選核酸)的量的典型且優(yōu)選的方法在WO2006/037787A2的實(shí)施例17中描述。對于含有Q|3以外的VLP的本發(fā)明的組合物，測定RNA(優(yōu)選核酸)的量典型且優(yōu)選地使用相同、相似或類似的條件。最終需要的條件的改變是本領(lǐng)域技術(shù)人員的常識。確定的量的數(shù)值應(yīng)當(dāng)?shù)湫颓覂?yōu)選地被理解為包括指定數(shù)值±10%、優(yōu)選±5%偏差的數(shù)值。聚陰離子大分子本文所用的術(shù)語"聚陰離子大分子"是指包含重復(fù)負(fù)電荷基團(tuán)的高相對分子量的分子，其結(jié)構(gòu)基本包括實(shí)際上或概念上來源于低相對分子量的分子的多個(gè)重復(fù)單位。聚陰離子大分子的分子量應(yīng)當(dāng)為至少2000道爾頓，更優(yōu)選至少3000道爾頓，甚至更優(yōu)選至少5000道爾頓。本文所用的術(shù)語"聚陰離子大分子"典型且優(yōu)選地指不能活化toll-樣受體的分子。因此術(shù)語"聚陰離子大分子"典型且優(yōu)選地不包括Toll-樣受體配體，甚至更優(yōu)選地不包括免疫刺激物，如Toll-樣受體配體、免疫刺激性核酸和脂多糖(LPS)。更優(yōu)選地，本文所用的術(shù)語"聚陰離子大分子"是指不能誘導(dǎo)細(xì)胞因子產(chǎn)生的分子。甚至更優(yōu)選地，術(shù)語"聚陰離子大分子"不包括免疫刺激物。本文所用的術(shù)語"免疫刺激物"是指能夠誘導(dǎo)和/或增強(qiáng)特別針對本發(fā)明中包括的抗原的免疫應(yīng)答的分子。宿主RNA、優(yōu)選宿主核酸本文使用的術(shù)語"宿主RNA、優(yōu)選宿主核酸，，或術(shù)語"具有二級結(jié)構(gòu)的宿主RNA、優(yōu)選宿主核酸"是指最初由宿主合成的RNA或優(yōu)選核酸。然而，RNA、優(yōu)選核酸在典型且優(yōu)選地通過本發(fā)明的方法減少或去除RNA、優(yōu)選核酸的量的過程中可能經(jīng)受化學(xué)和/或物理學(xué)改變，例如，RNA、優(yōu)選核酸的大小可能被縮短，或者其二級結(jié)構(gòu)可能改變。但是，甚至這種得到的RNA或核酸仍然被認(rèn)為是宿主RNA,或宿主核酸。2004年10月5日同一申請人提交的美國臨時(shí)申請中公開了確定VLP包含的RNA的量以及減少VLP包含的RNA的量的方法，因此整個(gè)申請引入本文作為參考。減少或消除宿主RNA、優(yōu)選宿主核酸的量，最小化或者減少了不希望的T細(xì)胞應(yīng)答，如炎性T細(xì)胞應(yīng)答和細(xì)胞毒性T細(xì)胞應(yīng)答，和其他不希望的副作用，如發(fā)熱，而同時(shí)保持特異性針對IL-1的強(qiáng)抗體應(yīng)答。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種制備本發(fā)明的組合物和本發(fā)明的RNA-噬菌體的VLP的方法，其中所述VLP由宿主重組產(chǎn)生，并且其中所述VLP基本不含宿主RNA,優(yōu)選宿主核酸，該方法包括以下步驟a)由宿主重組產(chǎn)生具有至少一個(gè)第一附著位點(diǎn)的病毒樣顆粒(VLP),其中所述VLP包含RNA-噬菌體的外殼蛋白、其突變體或片段；b)將所述病毒樣顆粒解裝配為所述RNA-噬菌體的所述外殼蛋白、其變體或片段；c)純化所述外殼蛋白、其變體或片段；d)將所述純化的所述RNA-噬菌體的外殼蛋白、其變體或片段重裝配為病毒樣顆粒，其中所述病毒樣顆?；静缓拗鱎NA,優(yōu)選宿主核酸；和(e)連接具有至少一個(gè)第二附著位點(diǎn)的至少一種本發(fā)明的抗原與步驟d)獲得的所述VLP。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，重裝配所述純化的外殼蛋白、其變體或片段的步驟在至少一種聚陰離子大分子的存在下實(shí)現(xiàn)。在一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種包含本發(fā)明的組合物的疫苗。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，在疫苗組合物中與VLP連接的IL-1分子可以是來源于動物，優(yōu)選來源于哺乳動物或人類。在優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的IL-1來源于人、牛、狗、貓、小鼠、大鼠、豬或馬。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，該疫苗組合物進(jìn)一步包含至少一種佐劑。所述至少一種佐劑的施用可以在施用本發(fā)明的組合物之前、同時(shí)或之后進(jìn)行。本文使用的術(shù)語"佐劑"是指免疫應(yīng)答的非特異性刺激物，或允許在宿主中產(chǎn)生儲庫(depot)的物質(zhì)，當(dāng)分別與本發(fā)明的疫苗和藥物組合物結(jié)合時(shí)能夠產(chǎn)生更強(qiáng)的免疫應(yīng)答。在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述疫苗組合物不含佐劑。本發(fā)明的一個(gè)有利的特征是組合物的高免疫原性，甚至在不含佐劑時(shí)依然如此。而且，不含佐劑使得不希望的炎性T細(xì)胞應(yīng)答的發(fā)生減至最少，炎性T細(xì)胞應(yīng)答是針對自身抗原接種中的一個(gè)安全性問題。因此，優(yōu)選地給患者施用本發(fā)明的疫苗而不需在施用該疫苗之前、同時(shí)或之后給同一患者施用至少一種佐劑。本發(fā)明進(jìn)一步公開了一種免疫方法，包括給動物或人施用本發(fā)明的疫苗。所述動物優(yōu)選地是哺乳動物，如貓、綿羊、豬、馬、牛、狗、大鼠、小鼠，特別是人。疫苗可以用本領(lǐng)域所知的各種方法給動物或人施用，但是通常通過注射、輸注、吸入、口服或其他適當(dāng)?shù)奈锢矸椒▉硎┯谩；蛘撸悸?lián)物可以肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)、經(jīng)粘膜、經(jīng)皮、鼻內(nèi)、腹膜內(nèi)或皮下施用。用于施用的偶聯(lián)物的成分包括無菌水溶液(例如生理鹽水)或非水溶液和懸液。非水溶劑的例子有丙二醇、聚乙二醇、^:物油如橄欖油、和注射用有才幾酯如油酸乙酯?？梢岳幂d體或封閉敷料提高皮膚通透性并促進(jìn)抗原吸收。如果接受個(gè)體能夠耐受本發(fā)明的疫苗的施用，則認(rèn)為本發(fā)明的疫苗是"藥學(xué)可接受的"。進(jìn)而，本發(fā)明的疫苗將以"治療有效量"(即產(chǎn)生希望的生理學(xué)效果的量)施用。免疫應(yīng)答的性質(zhì)或類型不是本申請公開內(nèi)容的限制因素。并非意在通過以下機(jī)制的解釋來限制本發(fā)明，本發(fā)明的疫苗可以誘導(dǎo)可與IL-1結(jié)合的抗體，從而降低了它的濃度和/或干擾它的生理學(xué)或病理學(xué)功能。在一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種包含本發(fā)明教導(dǎo)的組合物和可接受的藥物載體的藥物組合物。當(dāng)給個(gè)體施用本發(fā)明的疫苗時(shí)，它可以是含有鹽、緩沖液、佐劑或其他改善偶聯(lián)物效果所需的物質(zhì)的形式。適合在制備藥物組合物中使用的材料的例子在許多資料中提供，包括REMINGTON'SPHARMACEUTICALSCIENCES(Osol,A，ed，MackPublishingCo,(1990》。本發(fā)明教導(dǎo)了一種制備本發(fā)明的組合物的方法，該方法包括以下步驟(a)提供具有至少一個(gè)第一附著位點(diǎn)的VLP;(b)提供具有至少一個(gè)第二附著位點(diǎn)的IL-1分子；和(c)將所述VLP和所述IL-1分子組合，產(chǎn)生組合物，其中所述IL-1分子和所述VLP通過所述第一附著位點(diǎn)和第二附著位點(diǎn)連接。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，提供具有至少一個(gè)第一附著位點(diǎn)的VLP的步驟包括以下另外的步驟(a)將所述病毒樣顆粒解裝配為所述RNA噬菌體的所述外殼蛋白、其突變體或片段；(b)純化所述外殼蛋白、其突變體或片段；(c)將所述純化的所述RNA噬菌體的外殼蛋白、其突變體或片段重裝配為病毒樣顆粒，其中所述病毒樣顆?；静缓拗鱎NA,優(yōu)選宿主核酸。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述純化的外殼蛋白的重裝配在至少一種聚陰離子大分子的存在下實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明提供一種使用本發(fā)明的組合物治療和/或減輕其中IL-1發(fā)揮重要病理作用的動物或人類的疾病或病癥的方法。物組合物在制備治療動物疾病的藥物中的用途，所述動物優(yōu)選狗、貓、馬或人，最優(yōu)選人，其中所述疾病優(yōu)選地選自(a)血管疾病，優(yōu)選冠狀動脈疾病、動脈粥樣硬化和脈管炎，最優(yōu)選動脈粥樣硬化；(b)遺傳性IL-l-依賴的炎性疾病，優(yōu)選家族性地中海熱(FMF)、家族性冷自身炎性綜合征(FCAS)、新生兒發(fā)作多系統(tǒng)炎性疾病(NOMID)和MuckleWells綜合征，最優(yōu)選家族性地中海熱(FMF);(c)慢性自身免疫炎性疾病，優(yōu)選類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、全身發(fā)作青少年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎、成人發(fā)作Still病、銀屑病、克羅恩氏病和潰瘍性結(jié)腸炎，最優(yōu)選類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；(d)骨和軟骨變性性疾病，優(yōu)選痛風(fēng)、骨質(zhì)疏松癥和骨關(guān)節(jié)炎，最優(yōu)選骨關(guān)節(jié)炎；(e)變態(tài)反應(yīng)病，優(yōu)選接觸過敏、1型超每文反應(yīng)和變態(tài)反應(yīng)，最優(yōu)選變態(tài)反應(yīng)；和(f)神經(jīng)疾病，優(yōu)選阿爾茨海默病、癲癇癥、帕金森氏病和多發(fā)性硬化，最優(yōu)選多發(fā)性硬化。物組合物在制備治療動物疾病的藥物中的用途，所述動物優(yōu)選狗、貓、馬或人，最優(yōu)選人，其中所述疾病是血管疾病，優(yōu)選冠狀動脈疾病、動脈粥樣硬化和脈管炎，最優(yōu)選動脈粥樣石更化，并且其中所述組合物、所述疫苗或所述藥物組合物中包含的所述至少一種抗原是本發(fā)明的IL-loc分子，優(yōu)選IL-la成熟片段，最優(yōu)選SEQIDNO:63或其突變蛋白。物組合物在制備治療動物疾病的藥物中的用途，所述動物優(yōu)選狗、貓、馬或人，最優(yōu)選人，其中所述疾病選自(a)遺傳性IL-l-依賴的炎性疾病，優(yōu)選家族性地中海熱(FMF)、家族性冷自身炎性綜合征(FCAS)、新生兒發(fā)作多系統(tǒng)炎性疾病(NOMID)和MuckleWells綜合征，最優(yōu)選家族性地中海熱(FMF);(b)慢性自身免疫炎性疾病，優(yōu)選類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、全身發(fā)作青少年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎、成人發(fā)作Still病、銀屑病、克羅恩氏病和潰瘍性結(jié)腸炎，最優(yōu)選類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；(c)骨和軟骨變性性疾病，優(yōu)選痛風(fēng)、骨質(zhì)疏松癥和骨關(guān)節(jié)炎，最優(yōu)選骨關(guān)節(jié)炎；(d)變態(tài)反應(yīng)病，優(yōu)選接觸過敏、1型超敏反應(yīng)和變態(tài)反應(yīng)，最優(yōu)選變態(tài)反應(yīng)；和(e)神經(jīng)疾病，優(yōu)選阿爾茨海默病、癲癇癥、帕金森氏病和多發(fā)性硬化，最優(yōu)選多發(fā)性硬化，并且其中所述組合物、所述疫苗或所述藥物組合物中包含的所述至少一種抗原是IL-ip分子，優(yōu)選IL-1(3成熟片段，最優(yōu)選SEQIDNO:64或其突變蛋白°、、，曰、、、，',-、、、,，、、物組合物在制備治療動物、優(yōu)選人的疾病的藥物中的用途，其中所述疾病是血管疾病，優(yōu)選動脈粥樣硬化。本發(fā)明進(jìn)一步提供本發(fā)明的組合物或本發(fā)明的疫苗或本發(fā)明的藥物組合物在制備治療動物、優(yōu)選人的疾病的藥物中的用途，其中所述疾病是遺傳性IL-l-依賴的炎性疾病，優(yōu)選家族性地中海熱(FMF)。物組合物在制備治療動物、優(yōu)選人的疾病的藥物中的用途，其中所述疾病是慢性自身免疫炎性疾病，優(yōu)選類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。本發(fā)明進(jìn)一步提供本發(fā)明的組合物或本發(fā)明的疫苗或本發(fā)明的藥物組合物在制備治療動物、優(yōu)選人的疾病的藥物中的用途，其中所述疾病是骨和軟骨變性性疾病，優(yōu)選骨關(guān)節(jié)炎。物組合物在制備治療動物、優(yōu)選人的疾病的藥物中的用途，其中所述疾病是神經(jīng)疾病，優(yōu)選多發(fā)性石更化。本發(fā)明進(jìn)一步提供一種治療疾病的方法，所述方法包括給動物，優(yōu)選給狗、貓、馬或人，最優(yōu)選給人施用本發(fā)明的組合物或本發(fā)明的疫苗或本發(fā)明的藥物組合物，其中所述疾病優(yōu)選地選自(a)血管疾病，優(yōu)選冠狀動脈疾病、動脈粥樣硬化和脈管炎，最優(yōu)選動脈粥樣硬化；(b)遺傳性IL-l-依賴的炎性疾病，優(yōu)選家族性地中海熱(FMF)、家族性冷自身炎性綜合征(FCAS)、新生兒發(fā)作多系統(tǒng)炎性疾病(NOMID)和MuckleWells綜合征，最優(yōu)選家族性地中海熱(FMF);(c)慢性自身免疫炎性疾病，優(yōu)選類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、全身發(fā)作青少年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎、成人發(fā)作Still病、銀屑病、克羅恩氏病和潰瘍性結(jié)腸炎，最優(yōu)選類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；(d)骨和軟骨變性性疾病，優(yōu)選痛風(fēng)、骨質(zhì)疏松癥和骨關(guān)節(jié)炎，最優(yōu)選骨關(guān)節(jié)炎；(e)變態(tài)反應(yīng)病，優(yōu)選接觸過敏、1型超敏反應(yīng)和變態(tài)反應(yīng)，最優(yōu)選變態(tài)反應(yīng)；和(f)神經(jīng)疾病，優(yōu)選阿爾茨海默病、癲癇癥、帕金森氏病和多發(fā)性硬化，最優(yōu)選多發(fā)性硬化。本發(fā)明進(jìn)一步提供一種治療疾病的方法，所述方法包括給動物，優(yōu)選給狗、貓、馬或人，最優(yōu)選給人施用本發(fā)明的組合物或本發(fā)明的疫苗或本發(fā)明的藥物組合物，其中所述疾病優(yōu)選地是血管疾病，優(yōu)選冠狀動脈疾病、動脈粥樣硬化和脈管炎，最優(yōu)選動脈粥樣硬化，并且其中所述組合物、所述疫苗或所述藥物組合物中包含的所述至少一種抗原是IL-loc分子，優(yōu)選IL-la成熟片段，最優(yōu)選SEQIDNO:63或其突變蛋白。本發(fā)明進(jìn)一步提供一種治療疾病的方法，所述方法包括給動物，優(yōu)選給狗、貓、馬或人，最優(yōu)選給人施用本發(fā)明的組合物或本發(fā)明的疫苗或本發(fā)明的藥物組合物，其中所述疾病優(yōu)選地選自(a)遺傳性IL-l-依賴的炎性疾病，優(yōu)選家族性地中海熱(FMF)、家族性冷自身炎性綜合征(FCAS)、新生兒發(fā)作多系統(tǒng)炎性疾病(NOMID)和MuckleWells綜合征，最優(yōu)選家族性地中海熱(FMF);(b)慢性自身免疫炎性疾病，優(yōu)選類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、全身發(fā)作青少年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎、成人發(fā)作Still病、銀屑病、克羅恩氏病和潰瘍性結(jié)腸炎，最優(yōu)選類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；(c)骨和軟骨變性性疾病，優(yōu)選痛風(fēng)、骨質(zhì)疏松癥和骨關(guān)節(jié)炎，最優(yōu)選骨關(guān)節(jié)炎；(d)變態(tài)反應(yīng)病，優(yōu)選接觸過敏、1型超敏反應(yīng)和變態(tài)反應(yīng)，最優(yōu)選變態(tài)反應(yīng)；和(e)神經(jīng)疾病，優(yōu)選阿爾茨海默病、癲癇癥、帕金森氏病和多發(fā)性硬化，最優(yōu)選多發(fā)性硬化，并且其中所述組合物、所述疫苗或所述藥物組合物中包含的所述至少一種抗原是IL-ip分子，優(yōu)選IL-ip成熟片段，最優(yōu)選SEQIDNO:64或其突變蛋白。本發(fā)明進(jìn)一步提供一種治療疾病的方法，所述方法包括給動物，優(yōu)選給狗、貓、馬或人，最優(yōu)選給人施用本發(fā)明的組合物或本發(fā)明的疫苗或本發(fā)明的藥物組合物，其中所述疾病是遺傳性IL-l-依賴的炎性疾病，優(yōu)選家族性地中海熱(FMF)，并且其中所述組合物、所述疫苗或所述藥物組合物中包含的所述至少一種抗原是IL-ip分子，優(yōu)選IL-ip成熟片段，最優(yōu)選SEQIDNO:64或其突變蛋白。本發(fā)明進(jìn)一步提供一種治療疾病的方法，所述方法包括給動物，物，其中所述疾病是血管疾病，優(yōu)選動脈粥樣硬化。本發(fā)明進(jìn)一步提供一種治療疾病的方法，所述方法包括給動物，物，其中所述疾病是遺傳性IL-l-依賴的炎性疾病，優(yōu)選家族性地中海熱(FMF)。本發(fā)明進(jìn)一步提供一種治療疾病的方法，所述方法包括給動物，物，其中所述疾病是慢性自身免疫炎性疾病，優(yōu)選類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。本發(fā)明進(jìn)一步提供一種治療疾病的方法，所述方法包括給動物，物，其中所述疾病疾病是骨和軟骨變性性疾病，優(yōu)選骨關(guān)節(jié)炎。本文引用的所有參考文獻(xiàn)都全文引入作為參考。實(shí)施例實(shí)施例1鼠ILl0Cn-27Q和IL-iPn9-269的克隆、表達(dá)和純化使用寡核普酸ILlal(5，-ATATATGCTAGCCCCTTACACCTACCAGAGTGATTTG誦3，；SEQIDNO:24)和ILloc2(5,-ATATATCTCGAGTGATATCTGGAAGTCTGTCATAGAG-3，；SEQIDNO:25),通過PCR從TNFa-活化的鼠巨噬細(xì)胞cDNA文庫中擴(kuò)增編碼鼠IL-la的氨基酸117-270的核苷酸序列。使用相同的cDNA文庫，用寡核苷酸IL1(31(5'畫ATATATGCTAGCCCCCATTAGACAGCTGCACTACAGG國3，；SEQIDNO:26)和IL1卩2(5，畫ATATATCTCGAGGGAAGACACAGATTCCATGGTGAAG-3,;SEQIDNO:27)擴(kuò)增編碼鼠IL-ip前體的氨基酸119-269的核苷酸序列。兩條DNA片段用和X/ra/消化，并且克隆到表達(dá)載體pModECl(SEQIDNO:29)內(nèi)。載體pModECl(SEQIDNO:29)是pET22b(+)(NovagenInc.)的書亍生物，分兩步構(gòu)建。第一步，將pET22b(+)的Ndel和Xhol位點(diǎn)之間的原始序歹'J替換為退火的oligos引物MCS-1F(5，-TATGGATCCGGCTAGCGCTCGAGGGTTTAAACGGCGGCCGCAT-3，;SEQIDNO:30)和引物MCS隱1R(5'-TCGAATGCGGCCGCCGTTTAAACCCTCGAGCGCTAGCCGGATCCA-3，；SEQIDNO:31)(在15mMTrisHClpH8緩沖液中退火)，由此改變pET22b(+)的多克隆位點(diǎn)。得到的質(zhì)粒被命名為pMod00,在其多克隆位點(diǎn)中具有Ndel,BamHI、Nhel、Xhol、Pmel和Notl限制酶切位點(diǎn)。退火oligos對Bamhis6-EK-Nhe-F(5,-GATCCACACCACCACCACCACCACGGTTCTGGTGACGACGATGACAAAGCGCTAGCCC陽3，；SEQIDNO:32)和Bamhis6國EKNhe-R(5，畫TCGAGGGCTAGCGCTTTGTCATCGTCGTCACCAGAACCGTGGTGGTGGTGGTGGTGTG-3，；SEQIDNO:33)和退火oligo對1F-C-甘氨酸-接頭(5，-TCGAGGGTGGTGGTGGTGGTTGCGGTTAATAAGTTTAAACGC-3';SEQIDNO:34)和oligolR-C-甘氨酸-接頭(5，畫GGCCGCGTTTAAACTTATTAACCGCAACCACCACCACCACCC畫3';SEQIDNO:35)—起連接到BamHI-NotI消化的pMod00質(zhì)粒內(nèi)，獲得pModECl,其編碼N-末端六組氨酸標(biāo)簽，腸激酶酶切位點(diǎn)和含有一個(gè)半胱氨酸殘基的C-末端甘氨酸接頭。上述片段向pModECl內(nèi)的克隆分別產(chǎn)生質(zhì)粒pModECl-His-EK-mlLlocu7-27o和pModECl-His-EK-mILip119-269。這些質(zhì)粒分別編碼由N-末端His-標(biāo)簽、腸激酶酶切位點(diǎn)、成熟鼠IL-lot或IL-1(3和含C-末端半胱氨酸的接頭(GGGGGCG，SEQIDNO:28)組成的融合蛋白。對于表達(dá)，含有質(zhì)粒的大腸桿菌BL21細(xì)胞在37。C生長至600nm處的OD為1.0，然后加入1mM濃度的異丙基-P-D-硫代半乳糖吡喃糖苷誘導(dǎo)。細(xì)菌在37。C下生長4小時(shí)，離心收獲，重懸浮在80ml裂解緩沖液(10mMNa2HP04，30mMNaCl，pH7.0)中。然后超聲處理破碎細(xì)胞，在室溫下與64pi2MMgCl2和10|ulBenzonase孵育30分鐘消化細(xì)胞DNA和RNA。離心除去細(xì)胞碎片(SS34轉(zhuǎn)頭，20000rpm,4°C，60min)，將澄清的裂解液加到N產(chǎn)-NTA瓊脂糖柱(Qiagen,Hilden，Germany)上。用洗滌緩沖液(50mMNaH2P04,300mMNaCl,20mMImidazol,pH8.0)充分洗滌后，用洗脫緩沖液(50mMNaH2P04,300mMNaCl,200mMImidazol,pH8.0)洗脫蛋白質(zhì)。純化的蛋白質(zhì)用PBSpH7.2透析，在液氮中驟凍，并且貯存在-80。C直到進(jìn)一步使用。實(shí)施例2A.小鼠IL-1(3119-269與Q(3病毒樣顆粒的偶聯(lián)在PBSpH7.2中含有1.3mg/ml實(shí)施例1獲得的純化的鼠IL-ip119.朋蛋白(SEQIDNO:66)的溶液在室溫下與等摩爾量的TCEP孵育60分鐘，以還原C-末端半胱氨酸殘基。然后6ml2mg/mlQ(3衣殼蛋白在PBSpH7.2中的溶液在室溫下與131piSMPH溶液(65mM,在DMSO中)反應(yīng)60分鐘。反應(yīng)溶液在4。C下用3升20mMHEPES，150mMNaClpH7.2透析24小時(shí)，其中更換三次透析液。75書f生化并透析的QP溶液與117jLdH20和308|ul純化并預(yù)還原的小鼠工-1|3119-269蛋白混合，并且在15°C下孵育過夜，用于化學(xué)交聯(lián)。使用分子量截?cái)嘀禐?00,000Da的纖維素酯膜，通過相對于PBS正切流動過濾除去未偶聯(lián)的蛋白質(zhì)。偶聯(lián)的產(chǎn)物在還原條件下的12%SDS-聚丙烯酰胺凝膠上分析。圖1中顯示考馬斯染色的凝膠。可見幾條相對于QP衣殼單體分子量升高的帶，清楚地證明了小鼠工-幣119—269蛋白與Q(3衣殼的成功交聯(lián)。B.使用與Q(3衣殼偶聯(lián)的小鼠IL-l(3u9，蛋白(Q(3-mlL-iPn9-269)免疫小鼠對5只balb/c雌性小鼠用QP-mIL-l(3119—269(SEQIDNo:66)進(jìn)行免疫。將50嗎總蛋白質(zhì)用PBS稀釋到200(al，并在第0天、第21天皮下注射(100|il在腹部兩側(cè))。在第0天、第21天和第35天，對小鼠眶后取血，使用小鼠IL-l(3n9-269特異性的ELISA分析血清。C.ELISA使用濃度為1嗎/ml的小鼠IL-l(3u9-269蛋白包被ELISA板。封閉該板，然后與第0天、第21天、第35天的小鼠血清的連續(xù)稀釋液一起孵育。使用酶標(biāo)記的抗小鼠IgG抗體檢測結(jié)合的抗體。以在450nm處產(chǎn)生半數(shù)最大光密度的那些稀釋度的平均值來計(jì)算小鼠血清的抗體效價(jià)?？剐∈驣L-ip119-269的平均效價(jià)是第21天1:22262，第35天1:309276。這表明使用與小鼠IL-l(3119-269蛋白偶聯(lián)的Q(3免疫能夠克服免疫耐受，并產(chǎn)生特異性識別IL-l(3u9-269的高效價(jià)抗體。D.IL-ip的體外中和然后測試QP-mlL-l(3腦9(SEQIDNo:66)免疫小鼠的血清抑制小鼠IL-1(3蛋白與其受體結(jié)合的能力。因而使用濃度為1|ag/ml的重組mIL-l受體I-hFc融合蛋白包被ELISA板，并與免疫小鼠的血清的連續(xù)稀釋液共孵育，所述小鼠已用與Q(3衣殼偶聯(lián)的小鼠IL-iPn9-269免疫或者用與Q(3衣殼偶聯(lián)的小鼠IL-lau7.27o與100ng/ml的小鼠IL-l(3n9-269免疫。使用生物素化的抗小鼠IL-1(3抗體與辣根過氧化酶偶聯(lián)的鏈霉抗生物素蛋白來檢測IL-l(3n9-269與固定化的mIL-l受體I-hFc融合蛋白的結(jié)合。所有的針對鼠IL-l(3n9-269免疫的小鼠的血清在濃度為20.4。/o時(shí)完全抑制小鼠IL-l(3u9.269與其受體的結(jié)合，而針對小鼠IL-10CU7-270免疫的小鼠的血清甚至在最高使用濃度(3.3%)時(shí)都沒有顯示任何抑制效果。這些數(shù)據(jù)表明用偶聯(lián)到Qf3衣殼上的小鼠IL-lf3u9-269免疫能夠產(chǎn)生能夠特異性地中和小鼠IL-1p！19-269與其受體相互作用的抗體。E.IL-1(3的體內(nèi)中和然后研究了通過用Q(3-mlL-l(3u9-269免疫而產(chǎn)生的抗體的體內(nèi)中和能力。因而在第0天、第14天用Q(3-mlL-iPu9-269對4只balb/c雌性小鼠免疫兩次，同時(shí)單獨(dú)用QP衣殼對4只小鼠免疫。在第21天對所有小鼠靜脈注射1叫游離IL-l(3119-269。作為注射的IL-iPn9-269的炎癥活性的讀數(shù)，在注射3小時(shí)后分析血清樣本中促炎細(xì)胞因子IL-6濃度的相對增加。Q(3免疫的小鼠顯示出血清IL-6濃度平均增加1.01±0.61ng/ml，而用Q(3-mlL-l(3u9.269免疫的小鼠則顯示出平均增加只有0.11±0.30ng/ml(p=0.004)。作為對照，在第28天對所有小鼠注射1|iigmIL-la。注射3小時(shí)后，僅用Q(3載體免疫的小鼠顯示出血清IL-6濃度平均增加40.24±8.06ng/ml，而用QP-mIL-l(3119_269免疫的小鼠則顯示出增加57.98±29.92ng/ml(p=0.30)。這些數(shù)據(jù)表明用QP畫mlL-iPu9-269免疫產(chǎn)生的抗體能夠特異性地、有效地中和IL-la的促炎癥反應(yīng)活性。F.Qp-mIL-ip119—269對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎小鼠模型的有效性在膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎小鼠模型(CIA)中測試Q(3-mlL-l(3n9-269免疫的有效性。這個(gè)模型反映出人類類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的免疫學(xué)和組織學(xué)的大部分方面，因而常規(guī)地用來測試抗炎劑的有效性。對DBA/1雄性小鼠通過皮下單獨(dú)注射50jugQ(3國mlL-lp扁9(n=8)或者Q|3(n=8)來免疫三次(第0天、第14天和第28天)，然后在第42天皮內(nèi)注射混合有完全弗氏佐劑的200pg牛II型膠原。在第63天，加強(qiáng)注射混合有不完全弗氏佐劑的200嗎牛II型膠原后，每天檢查小鼠關(guān)節(jié)炎癥狀的發(fā)展。根據(jù)觀察到的紅腫程度和測得的所有后肢的踝關(guān)節(jié)厚度，對每個(gè)肢給予范圍從0-3的臨床評分。連續(xù)3周按照以下定義給予每個(gè)肢臨床評分0正常，1輕度紅斑和/或趾/爪腫脹，2紅斑和擴(kuò)展到全爪/關(guān)節(jié)的胂脹，3嚴(yán)重的胂脹，爪/關(guān)節(jié)變形，僵硬。計(jì)算單個(gè)小鼠的累積臨床評分，作為所有四肢的臨床評分總和，得到每只小鼠可能的最大累積評分為12。第二次膠原注射2周后，Q(3免疫的小鼠顯示出4.44的平均累積臨床評分，而Q(3-mlL-l(3u9-269免疫小鼠顯示出僅為1.06的平均累積臨床評分。而且，QP免疫的小鼠的后肢踝關(guān)節(jié)厚度平均增長18%,而已經(jīng)用Q(3-mlL-iPu9.269免疫的小鼠平均增長僅為1%。在第二次膠原注射1周后，測量血清IL-6水平，作為炎癥反應(yīng)的另外的讀數(shù)。Q(3免疫的小鼠的平均IL-6血清濃度為1.92±0.36,而Q(3-mlL-l(3u9.269免疫小鼠的平均IL-6血清濃度僅為0.79±0.16(p=0.01)。綜合考慮，這些數(shù)據(jù)顯示Qp-mlL-l(3n9-269免疫強(qiáng)有力地保護(hù)CIA模型小鼠不出現(xiàn)炎癥和關(guān)節(jié)炎的臨床體征。實(shí)施例3A.小鼠IL-lan7.27。與Q(3病毒樣顆粒的偶聯(lián)在PBSpH7.2中含有1.8mg/ml實(shí)施例1獲得的純化的鼠IL-laI17_"o蛋白(SEQIDNO:65)的溶液在室溫下與等摩爾量的TCEP孵育60分鐘，以還原C-末端半胱氨酸殘基。然后6ml2mg/mlQP衣殼蛋白在PBSpH7.2中的溶液在室溫下與131|ulSMPH溶液(65mM，在DMSO中)反應(yīng)60分鐘。反應(yīng)溶液在4。C下用3升20mMHEPES,150mMNaClpH7.2透析24小時(shí)，其中更換三次透析液。75fil衍生化并透析的Q(3溶液與192piH20和233pi純化并預(yù)還原的小鼠IL-l0Cu7.27。蛋白混合，并且在15。C下孵育過夜，用于化學(xué)交聯(lián)。使用分子量截?cái)嘀禐?00,000Da的纖維素酯膜，通過相對于PBS正切流動過濾除去未偶聯(lián)的蛋白質(zhì)。偶聯(lián)的產(chǎn)物在還原條件下的12%SDS-聚丙烯酰胺凝膠上分析。圖2中顯示考馬斯染色的凝膠?？梢妿讞l相對于Q(3衣殼單體分子量升高的帶，清楚地證明了小鼠IL-lan7—27o蛋白與QP衣殼的成功交聯(lián)。B.使用與Q(3衣殼偶聯(lián)的小鼠IL-lotu7-27o蛋白(Q(3-mIL-la117.270)免疫小鼠對5只balb/c雌性小鼠用QP-mlL-lotu7.27o進(jìn)行免疫。將50嗎總蛋白質(zhì)用PBS稀釋到200pl，并在第0天、第21天對小鼠皮下注射(lOO)iil在腹部兩側(cè))。在第0天、第21天和第35天，對小鼠眶后取血，使用小鼠IL-lotu7-27o特異性的ELISA分析血清。C.ELISA使用濃度為1lag/ml的小鼠IL-locu7.27o蛋白包被ELISA板。封閉該板，然后與第0天、第21天、第35天的小鼠血清的連續(xù)稀釋液一起孵育。使用酶標(biāo)記的抗小鼠IgG抗體檢測結(jié)合的抗體。以在450nm產(chǎn)生半數(shù)最大光密度的那些稀釋度的平均值來計(jì)算小鼠血清的抗體效價(jià)。抗小鼠IL-lan7.27Q的平均效價(jià)是第21天1:9252，第35天1:736912。這表明使用與小鼠IL-lau7-27o蛋白偶聯(lián)的Q(3免疫能夠克服免疫耐受，并產(chǎn)生特異性識別IL-lOCn7-270的高效價(jià)抗體。D.IL-la的體外中和然后測試QP-mlL-lotn7-27o免疫小鼠的血清抑制小鼠IL-lan7-27o蛋白與其受體結(jié)合的能力。因而使用濃度為1pg/ml的重組mlL-l受體I-hFc融合蛋白包被ELISA板，并與免疫小鼠的血清的連續(xù)稀釋液共孵育，所述小鼠已用與QP衣殼偶聯(lián)的小鼠IL-lOdn-270免疫或者用與QJ3衣殼偶聯(lián)的小鼠IL-l(3n9-269與5ng/ml的小鼠IL-la117-27Q免疫。使用生物素化的抗小鼠IL-la抗體與辣根過氧化酶偶聯(lián)的鏈霉抗生物素蛋白來檢測IL-lan7—27o與固定化的mIL-l受體I-hFc融合蛋白的結(jié)合。所有的針對鼠IL-lan7.27o免疫的小鼠的血清在濃度為^0.4。/。時(shí)完全抑制小鼠IL-lOCi17-270與其受體的結(jié)合，而針對小鼠IL-l(3u9-269免疫的小鼠的血清甚至在最高使用濃度(3.3%)時(shí)都沒有顯示明顯的抑制效果。這些數(shù)據(jù)表明用偶聯(lián)到Q(3衣殼上的小鼠IL-lau7.27。免疫能夠產(chǎn)生能夠特異性地中和'J、鼠IL-1od17.27。與其受體相互作用的抗體。E.IL-loc的體內(nèi)中和然后研究了通過用QP-mlL-lotu7々7o免疫而產(chǎn)生的抗體的體內(nèi)中和能力。因而在第0天、第14天用QP-mlL-lan7.27o對4只balb/c雌性小鼠免疫兩次，同時(shí)單獨(dú)用Q(3衣殼對4只小鼠免疫。在第21天對所有小鼠靜脈注射1嗎游離IL-la117.27o。作為注射的IL-l0Cn7-27。的炎癥活性的讀數(shù)，在注射3小時(shí)后分析血清樣本中促炎細(xì)胞因子IL-6濃度的相對增加。QP免疫的小鼠顯示出血清IL-6濃度平均增加8.16±2.33ng/ml，而用QP-mIL-la117—27o免疫的小鼠則顯示出平均增加只有0.15±0.27ng/ml(p=0.0005)。作為對照，在第28天對所有小鼠注射1|iigmIL-ip。注射3小時(shí)后，僅用QP載體免疫的小鼠顯示出血清IL-6濃度平均增加9.52±7.33ng/ml，而用QP-mlL-lan7-27o免疫的小鼠則顯示出增加21.46±27.36ng/ml(p=0.43)。這些數(shù)據(jù)表明用QP-mIL-la17—270免疫產(chǎn)生的抗體能夠特異性地、有效地中和IL-la的促炎活性。F.QP-mIL-1od!7.27。對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎小鼠模型的有效性在膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎小鼠模型(CIA)中測試QP-mlL-lau7-27o免疫的有效性。這個(gè)模型反映出人類類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的免疫學(xué)和組織學(xué)的大部分方面，因而常規(guī)地用來測試抗炎劑的有效性。對DBA/1雄性小鼠通過皮下單獨(dú)注射50嗎QP畫mIL-la腦o(n=8)或者QP(n=8)來免疫三次(第0天、第14天和第28天)，然后在第42天皮內(nèi)注射混合有完全弗氏佐劑的200嗎牛II型膠原。在第63天，加強(qiáng)注射混合有不完全弗氏佐劑的200|Lig牛II型膠原后，每天檢查小鼠關(guān)節(jié)炎癥狀的發(fā)展。根據(jù)觀察到的紅腫程度和測得的所有后肢的踝關(guān)節(jié)厚度，對每個(gè)肢進(jìn)行實(shí)施例2F定義的臨床評分。第二次膠原注射2周后，QP免疫小鼠顯示出4.44的平均累積臨床評分，而Q(3-mlL-lan7.27o免疫小鼠顯示出僅為2.31的平均累積臨床評分。而且，Q(3免疫小鼠的后肢踝關(guān)節(jié)厚度平均增長18%,而已經(jīng)用QP-mlL-lotn7-27o免疫的小鼠平均增長僅為7%。在第二次膠原注射l周后，測量血清IL-6水平，作為炎癥反應(yīng)的補(bǔ)充讀數(shù)。Q(3免疫小鼠的平均IL-6血清濃度為1.92±0.36，而QP-mlL-lan7.27o免疫小鼠的平均IL-6血清濃度僅為0.94±0.48。綜合考慮，這些數(shù)據(jù)顯示Q(3-mlL-locu7.27。免疫保護(hù)CIA模型小鼠不出現(xiàn)炎癥與關(guān)節(jié)炎的臨床體征。實(shí)施例4QP-mlL-lau7.27。對動脈粥樣硬化小鼠模型的有效性在第0、第14、第28、第56、第105和第133天，對7到8周齡的JpoZ雄性小鼠(Jackson實(shí)驗(yàn)室，BarHarborME)皮下注射50昭Q(3-mlL-lod諸疫苗(n=13)或者50figQP(n=12)(5只動物，QP-m!L-lai17—270組中的3只和Q(3組中的2只在第33天"l妄受第二次加強(qiáng)注射)。最初對小鼠用正常飲食喂養(yǎng)，在第21天時(shí)用西式飲食代替(20%脂肪,0.15%膽固醇，ProvimiKlibaAG，瑞士)。在實(shí)驗(yàn)中，對小鼠定期取血，測量血清中對IL-lot的抗體應(yīng)答。在第159天處死小鼠，基本上按照TangiralaR.K.等人(1995)/Z^W.^義36:2320-2328所述分離和準(zhǔn)備主動脈。另外，基本上按照PaigenB.等人(A/^myc/em^1987;68:231-24)和ZhouX.等人(爿rfehasc/w7Tzraw6Koyc5/。/2001;21:108-114)所述，取出心臟并在液氮中快速冷凍以備后續(xù)的組織學(xué)制備。通過心臟穿刺對動物取血，并灌注冷PBS。然后暴露主動脈，盡可能地原位去除外膜，最后從距心臟2mm處切斷主動脈。將心臟從中切開，將上半部分在液氮中塑料管中的Hank平衡鹽溶液中立即冷凍。用恒冷切片機(jī)穿過主動脈的起點(diǎn)進(jìn)行連續(xù)切片(7pm厚度)，在至少出現(xiàn)兩個(gè)瓣葉收集，直到最后一個(gè)瓣葉消失。在福爾馬林中固定切片，用油紅O染色，使用定量圖像分析評價(jià)每只小鼠的4-7個(gè)切片的斑塊負(fù)荷(QP組中每只動物3個(gè)切片)。根據(jù)用于評價(jià)的每個(gè)切片的斑塊面積來計(jì)算每只動物的平均斑塊面積。分別計(jì)算Q(3-mIL-la117.27。和QP組的組平均斑塊面積。通過Studentt檢驗(yàn)來進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。認(rèn)為PO.05在統(tǒng)計(jì)上有意義。為了評價(jià)整個(gè)主動脈的動脈粥樣硬化，在充滿冷PBS的玻璃培養(yǎng)皿中進(jìn)一步清除殘留的外膜，并從左鎖骨下動脈向下5mm切成拱形?？v切主動脈，別在黑蠟表面上，固定在4%的福爾馬林中過夜。然后在油紅O中過夜染色。用數(shù)碼照相的成像軟件(MoticImagePlus2.0)對斑塊定量。將取自直到髂骨分叉的主動脈的所有斑塊的表面總和除以測得的直到髂骨分叉的主動脈的總表面，以百分?jǐn)?shù)形式來表述斑塊負(fù)荷。以斑塊負(fù)荷的平均值或者中間值來分析QP-mlL-lotu7-27o和Q(3組之間的差別。使用重組IL-la包被的ELISA板，以經(jīng)典ELISA測量抗體應(yīng)答。使用山羊抗小鼠HRP偶聯(lián)物來檢測特異性抗體的結(jié)合。以在測試中獲得半數(shù)最大結(jié)合的血清稀釋度的倒數(shù)來計(jì)算抗IL-loc效價(jià)。通過測量免疫前血清來評價(jià)應(yīng)答的特異性。免疫前效價(jià)低于測試所用的最低血清稀釋度，并指定它為最低血清稀釋度值。QP-mlL-lan7-27o免疫動物的抗體應(yīng)答的測量結(jié)果如表1所示，清楚地顯示出用與Q(3偶聯(lián)的鼠IL-1a免疫產(chǎn)生了對IL-1a的強(qiáng)烈而持續(xù)的特異性抗體應(yīng)答，因?yàn)樵诿庖咔癠0)血清中幾乎沒有檢測到效價(jià)。而且，IL-loc特異性抗體應(yīng)答的誘導(dǎo)導(dǎo)致Q(3-mlL-lau7-27。組在主動脈起點(diǎn)的斑塊面積比QP組減少了37%(292803±21272jam2對464694土36545pm2,p=0.0005)。另夕卜，在整個(gè)制備的主動脈"正面"觀察到斑塊負(fù)荷中間值減少31%(5.7對8,3，p=0.06)。這些數(shù)據(jù)表明，QP-mlL-lau7-27o疫苗對抗IL-la抗體的誘導(dǎo)抑制了動脈粥樣硬化的發(fā)展，因而QP-mlL-lau7.27o疫苗是對動脈粥樣硬化的一種有效的治療。而且，這些數(shù)據(jù)表明IL-loc與動脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)理有關(guān)。表1:Qb-ILla免疫的^wZ小鼠中的抗ILla抗體效價(jià)的幾何平均值(幾何平均效價(jià)士平均標(biāo)準(zhǔn)差)<table>tableseeoriginaldocumentpage58</column></row><table>幾何平均值<1000225400±167867±522864±712061±621687±805370±±SEM093385121345106887144922184389155764*對于5只動物，第33天獲得的數(shù)值。實(shí)施例5使用Q(3-mlL-lan7.27o和/或Q(3-mIL-ip119-269免疫預(yù)防TNBS誘導(dǎo)的炎性腸病對8周齡的SJL雄性小鼠(每組5只)，以2周的間隔3次皮下注射50叱Q(3-mlL-lct"7-27Q或者50QP-mlL-iPu9-269或者各50jugQP-mlL-lotu7.27。與Q(3-mlL-iPn9-269的混合物。以同樣方案單獨(dú)注射QPVLP的5只小鼠作為對照。最后一次免疫2周后，將所有的小鼠用異氟烷輕度麻醉，在距離肛門4cm處通過聚乙烯導(dǎo)管直腸內(nèi)施用溶于100^150%乙醇的1mg三硝基苯磺酸(TNBS)。每日記錄體重作為疾病進(jìn)程的讀數(shù)，在施用TNBS7天后處死所有小鼠。取出每只小鼠的結(jié)腸，將位于臨近肛門2cm處的結(jié)腸標(biāo)本固定于PBS緩沖的福爾馬林中，依照NeurathM.F.等人(JEM(1995)，182:1281-1290)所述，根據(jù)蘇木精-和伊紅-染色的結(jié)腸橫切片對炎癥程度半定量評價(jià)。與Q(3免疫小鼠相比，單獨(dú)用QP-mlL-lotn7-27。或者Qp-mlL-ll3u9-269或者用Q(3-mlL-locn7-27。與Q(3-mlL-l(3n9-269的組合免疫，降低了TNBS誘導(dǎo)的體重減輕。而且，結(jié)腸橫切片的組織學(xué)檢查表明，與Q(3免疫小鼠相比，QP-mlL-lan7.27o和/或Q(3-mlL-l卩119-269免疫小鼠顯示出炎癥細(xì)胞向結(jié)腸組織的浸潤顯著減少。實(shí)施例6QP-mIL-1p!19—269免疫對于攜帶截短型MEFV基因的小鼠中內(nèi)毒素-超敏反應(yīng)的改善家族性地中海熱是一種隱性遺傳炎性疾病，特征為陣發(fā)性回歸熱以及腹膜炎、漿膜炎、關(guān)節(jié)炎和皮瘆。患者攜帶的MEFV基因發(fā)生錯(cuò)義突變，導(dǎo)致截短型熱蛋白(pyrin)的表達(dá)。MEFV基因具有類似突變的小鼠，顯示出增強(qiáng)的半胱天冬酶-1活性，導(dǎo)致成熟IL-1(3過量產(chǎn)生、體溫過低以及施用LPS后致死率的增加。對8周齡的純合熱蛋白國截短型小鼠(每組5只)以2周的間隔每次單獨(dú)使用50pgQP-mIL-113n9-269或者50jagQpVLP進(jìn)行3次免疫。最后一次免疫2周后，對所有小鼠腹膜內(nèi)注射20mgD-半乳糖胺與0.01jig/gLPS的混合物。與Qp免疫對照組相比，Q(3-mIL-1(3!19_269免疫小鼠顯示出明顯減少的體溫過低和降低的LPS施用引起的致死率。實(shí)施例7QP-mIL-lot117—27。、Q(3-mlL-iPu9-269免疫與Kineret⑧治療在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎小鼠模型中的比較Kineret(Anakinra,Amgen)是一種重組的人IL-1受體拮抗劑，被批準(zhǔn)用來治療人類類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。為了達(dá)到臨床效果，必須每天通過皮下注射使用相對高的劑量(100mg)。用膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型來比較Q(3-mIL-la117-27o、Qp-mIL-l(3119-269免疫與每日應(yīng)用不同劑量Kineret⑧的有效性。對DBA/1雄性小鼠用50|ugQ(3-mIL-la117-270(n=8)、Q(3-mIL-ip119_269(n=8)或者單獨(dú)Q(3(n=32)3次(第0天、第14天和第28天)皮下免疫，然后在第42天皮內(nèi)注射200iug與完全弗氏佐劑混合的牛II型膠原。從第42天起，用Q(3-mlL-locuw7o與QP-mlL-l(3n9-269免疫的小鼠與一組QP免疫的小鼠(n=8)每日接受腹膜內(nèi)注射200|alPBS，而另外三組Q(3免疫的小鼠每日接受腹膜內(nèi)注射37.5|ug(n=8)、375|ug(n=8)或者3.75mg(n=8)Kineret。每只小鼠每日注射37.5|agKineret大致相當(dāng)于1.5mg/kg的劑量，這在推薦的對于人類有效的劑量范圍內(nèi)UOOmg)。所有的小鼠在第63天加強(qiáng)注射200嗎與不完全弗氏佐劑混合的牛II型膠原，并每日檢查關(guān)節(jié)炎癥狀的發(fā)展。第二次膠原注射4周后，Q(3免疫的對照小鼠顯示出3.75的平均累積臨床評分(如實(shí)施例2F定義的)，而QP-mlL-lotn7-27o和Q(3-mIL-l卩119-269免疫的小鼠分別顯示出僅為0.81和1.44的平均評分(見表2)。用37,5|ug或者375嗎Kineret⑧治療的小鼠分別達(dá)到了2.44和2.63的平均評分，而用3.75mgKineret⑧治療的小鼠基本保持無癥狀，達(dá)到了僅為0.19的最高評分。定期測量所有動物的后踝關(guān)節(jié)厚度，作為炎癥反應(yīng)的附加讀數(shù)。第二次膠原注射4周后，Q(3免疫的對照小鼠顯示出后踝關(guān)節(jié)厚度平均增加16%，而QP-mlL-locn7.27o免疫的小鼠顯示出增加2%，Q(3-mlL畫lPii9-269免疫的小鼠顯示出增加6%。用37.5iug或者375iugKinere惚治療的小鼠分別顯示出13%和10%的平均增加,而用3.75mgKi薦t⑧治療的小鼠則顯示出后踝關(guān)節(jié)厚度完全沒有增加?？傊覀凅@奇地發(fā)現(xiàn)三次注射Q(3-mlL-l(Xu7-27?；蛘逹P-mIL-1P，269要比每日以與人類相當(dāng)?shù)膭┝炕蛘呱踔潦队谌祟惖膭┝孔⑸銴ineret⑧更好地保護(hù)小鼠免于關(guān)節(jié)炎癥狀的發(fā)展。只有應(yīng)用IOO倍于人類的劑量的Kineret⑧時(shí)才顯示出對應(yīng)于Q(3-mIL-la117—，或者Q(3-mIL-1P1i9-269免疫接種的增強(qiáng)的有益效應(yīng)。表2:膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型中的臨床疾病癥狀<table>tableseeoriginaldocumentpage62</column></row><table>序列。產(chǎn)生的構(gòu)建體是AP590(SEQIDNO:117):AP205外殼蛋白基因-琥珀密碼子-GSG(Kpn21-HindIII);AP592(SEQIDNO:118):AP205外殼蛋白基因-乳白密碼子-GSG(Kpn21-Hindin)。為了構(gòu)建質(zhì)粒pAP590，用NcoI和HindlII消化由寡核苷酸p1.44(5，畫NNCCATGGCAAATAAGCCAATGCAACCG-3，；SEQIDNO:119)和pINC-36(5，隱GTAAGCTTAGATGCATTATCCGGATCCCTAAGCAGTAGTATCAGACGATACG-3，；SEQIDNO:120)獲得的PCR片I殳，并將其克隆到已經(jīng)用相同的限制性內(nèi)切酶消化的pQbl85載體中。pQbl85是一個(gè)由pGEM載體衍生的載體。此載體中克隆基因的表達(dá)受,rp啟動子的控制(Kozlovska，T.M.等人，Ge恥"7:133-37(1993))。同樣地，通過克隆Ncol/Hindlll消化的由寡核苷酸pl.44和pINC-40(5，-GTAAGCTTAGATGCATTATCCGGATCCTCAAGCAGTAGTATCAGACGATACG畫3，；SEQIDNO:121)獲得的PCR片段到同樣的載體內(nèi)，構(gòu)建質(zhì)粒pAP592。使用將Kpn2I和HindIII限制性位點(diǎn)分別添加到5，和3'末端的引物pINC-34(5,-GGTCCGGAGCGCTAGCCCCTTACAC-3，；SEQIDNO:122)和pINC-35(5'-GTAAGCTTATGCATTATGATATCTGGAAGTCTGTCATAGA-3，；SEQIDNO:123),從質(zhì)粒pModECl-His-EK-mlLlauwTO(見實(shí)施例1)中PCR擴(kuò)增編碼鼠IL-la的氨基酸117-270的序列。獲得的DNA片段用Kpn2I和HindIII消化，并分別克隆到pAP590載體和pAP592載體中，分別產(chǎn)生出質(zhì)粒pAP594(琥珀阻抑)和pAP596(乳白阻抑)質(zhì)粒。為了表達(dá)在其表面上展示鼠IL-la的嵌合AP205VLP,分別用pAP594質(zhì)粒或者pAP596質(zhì)粒轉(zhuǎn)化包含pISM579質(zhì)?；蛘遬ISM3001質(zhì)粒的大腸桿菌JM109細(xì)胞。通過使用限制性核酸內(nèi)切酶五coi/從pISM3001上切除trpT176基因，并用來自pMY579質(zhì)粒(MichaelYams贈予)的包含琥珀t-RNA抑制基因的五coi/片段置換它，產(chǎn)生質(zhì)粒pISM579。此t-RNA阻抑基因是trpT175的突變體(RafteryLA.等人(1984)J.Bacteriol.158:849-859),在G33、A24和T35這3個(gè)位點(diǎn)不同于trpT175。在包含20嗎/ml氨千青霉素和10fig/ml卡那霉素的5毫升LB液體培養(yǎng)基中接種單一菌落，并在37。C下靜置培養(yǎng)16-24小時(shí)。制備的接種物用包含20嗎/ml氨節(jié)青霉素和10嗎/ml卡那霉素的M9培養(yǎng)基稀釋50倍，并在37。C下在搖床中過夜培養(yǎng)。通過離心分離收獲細(xì)胞。在裂解緩沖液(20mMTris-HCl、5mMEDTA、150mMNaCl、pH7.8、0.1%吐溫20)中通過超聲處理來裂解細(xì)胞(lg,用質(zhì)粒pAP594轉(zhuǎn)化，包含pISM579)。通過離心分離來清除裂解液，用裂解緩沖液來清洗細(xì)胞碎片。將合并的上清液加樣到瓊脂糖凝膠CL-4B柱上，用TEN緩沖液(20mMTris-HCl,5mMEDTA，150mMNaCl，pH7.8)洗脫。通過瓊脂糖凝膠電泳(1%TAE,溴化乙咬染色凝膠和UV檢測)證實(shí)在清除的裂解液和清洗的上清液中存在衣殼。通過SDS-PAGE或者310nm處的光散射UV光譜分析來檢測從柱上洗脫的兩個(gè)峰。將包含衣殼的第二個(gè)峰的級分集中并加樣到瓊脂糖凝膠CL-6B柱上。集中CL-6B柱的峰級分，并用離心過濾單元(AmiconUltra15MWCO30000Millipore)來濃縮。通過新一輪的CL-4B柱的凝膠過濾來進(jìn)一步純化蛋白質(zhì)，并集中產(chǎn)生的峰級分，如上所述用離心過濾單元來濃縮。將緩沖液交換為10mMHepes,pH7.5,并添加甘油到50%的最終濃度?；旧习凑找陨厦枋龅募兓痯AP594的步驟，從質(zhì)粒pAP596中純化AP205—mIL-la117—27o,在經(jīng)過最后的CL-4B柱后，增加另外一個(gè)蔗糖梯度純化步驟。蛋白質(zhì)在用以下蔗糖溶液制備的梯度上分層9ml36%，3ml30%，6ml25%，8ml20%,6ml15%,6ml10%和3ml5%蔗糖。通過紫外光譜鑒定級分，集中的含有衣殼的級分如上所述用離心過濾單元來濃縮，緩沖液交換為lOmMHepes，pH7.5。最后添加甘油到50%的最終濃度。B.使用AP205—mlL-lan7.27。免疫小鼠4只balb/c雌性小鼠用AP205—mlL-lotu7.27o免疫。將25嗎總蛋白用PBS稀釋到200|al,并在第O天、第14天和第28天對小鼠皮下注射(lOO)ul在腹部兩側(cè))。在第0天、第14天、第28天和第35天對小鼠眶后取血，使用鼠IL-lam-27o-特異性ELISA來分析血清。C.ELISA使用濃度為1|ag/ml的小鼠IL-lotn7.27o蛋白包被ELISA板。封閉板，然后與第14天、第28天和第35天的小鼠血清的連續(xù)稀釋液一起孵育。使用酶標(biāo)記的抗小鼠IgG抗體檢測結(jié)合的抗體。以在450nm處產(chǎn)生半數(shù)最大光密度的那些稀釋度的平均值來計(jì)算小鼠血清的抗體效價(jià)?？剐∈驣L-lan7-27。的平均效價(jià)是第14天1:4412,第28天1:27955,第35天1:34824。這表明使用AP205—mlL-lau7-27o免疫能夠克服免疫耐受，并產(chǎn)生特異性識別IL-l0Cn7.27。的高效價(jià)抗體。D.IL-la的體外中和檢測AP205—mlL-lam.27o免疫小鼠的血清抑制鼠IL-la蛋白與其受體結(jié)合的能力。因而使用濃度為1ng/ml的重組mIL-l受體I-hFc融合蛋白包被ELISA板，并與來自單獨(dú)用AP205—mlL-lotn7.27o或者單獨(dú)用AP205與100ng/ml的小鼠IL-la117-27()—起免疫的小鼠的血清的連續(xù)稀釋液共孵育。使用生物素化的抗小鼠IL-la抗體與辣根過氧化酶偶聯(lián)的鏈霉抗生物素來檢測IL-lan7-27o與固定化的mIL-l受體I-hFc融合蛋白的結(jié)合。所有的AP205—mlL-locu7.27Q免疫的小鼠的血清在濃度為^3.3%時(shí)完全抑制小鼠IL-lan7-27o與其受體結(jié)合，而AP205免疫的小鼠血清在任何濃度都沒顯示明顯的抑制效果。這些數(shù)據(jù)表明用AP205—mIL-10CU7-270免疫能夠產(chǎn)生能夠特異性地中和小鼠IL-l0Cn7-27。與其受體相互作用的抗體。E.IL-la的體內(nèi)中和然后研究通過AP205—mlL-locn7—27。免疫而產(chǎn)生的抗體的體內(nèi)中和能力。因而在第0天、第14天和第28天用AP205—mlL-lotn7.27Q對4只balb/c雌性小鼠免疫3次，同時(shí)有4只小鼠單獨(dú)用AP205免疫。在第42天對所有小鼠靜脈注射1pg游離的鼠IL-la117_27Q。作為注射的IL-la117-27。的炎癥活性的讀數(shù)，在注射前和注射3小時(shí)后取樣，并分析血清樣本中促炎細(xì)胞因子IL-6濃度的相對增加。AP205免疫的小鼠顯示出血清IL-6濃度平均增加12.92±3.95ng/ml，而用AP205—mIL-lot117.270免疫的小鼠則顯示出平均增加只有0.06±0.05ng/ml(p<0.01)。這些數(shù)據(jù)表明用AP205—mlL-locu7.27o免疫產(chǎn)生的抗體能夠特異性地、有效地中和IL-la的促炎活性。F.AP205一mlL-lau7.27o對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎小鼠模型的有效性在膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎小鼠模型(CIA)中測試AP205_mIL-la117-270免疫的有效性。對DBA/1雄性小鼠皮下單獨(dú)注射50|ugAP205—mIL畫la117-27Q(n=8)或者AP205(n=8)免疫3次(第0天、第14天和第28天)，然后在第42天皮內(nèi)注射混合有完全弗氏佐劑的200|iig牛型II膠原。在第63天，加強(qiáng)注射混合有不完全弗氏佐劑的200i!g牛II型膠原后，每天檢查小鼠關(guān)節(jié)炎癥狀的發(fā)展。根據(jù)觀察到的紅肺程度和測得的所有后肢的踝關(guān)節(jié)厚度，對每個(gè)肢給出0-3的臨床評分。第二次膠原注射4周后，Q(3免疫小鼠顯示出5.81的平均累積臨床評分，而AP205一mlL-lan7.27o免疫小鼠顯示出僅為2.06的平均累積臨床評分。而且，AP205免疫小鼠的后肢踝關(guān)節(jié)厚度平均增長為19%，而已經(jīng)用AP205—mlL-lotu7.27。免疫的小鼠僅為9%。綜合考慮，這些數(shù)據(jù)顯示AP205一mlL-1a7_27Q免疫強(qiáng)有力地保護(hù)CIA模型小鼠不出現(xiàn)炎癥和關(guān)節(jié)炎的臨床體征。實(shí)施例9A.與小鼠IL-lpn9-269基因融合的AP205外殼蛋白(AP205—mIL誦lp119-269)所組成的病毒樣顆粒的克隆和表達(dá)基本上按照實(shí)施例8中所述的對AP205—mlL-locu7-27o的搮:作來對與小鼠IL-l(3u9-269基因融合的AP205外殼蛋白所組成的病毒樣顆粒進(jìn)行克隆、表達(dá)和純化。使用引物pINC-75(5，-GATCCGGAGGTGGTGTCCCCATTAGACAGCT-3，，SEQIDN0:192)和pINC-77(5，畫GTAAGCTTAGGAAGACACAGATTCCAT國3，，SEQIDNO:193),從編碼鼠IL-ip的質(zhì)粒pModECl-His-EK-mILip119_269中擴(kuò)增鼠IL-1(3序列。這對引物擴(kuò)增帶有5，Kpn2I和3，HindlII位點(diǎn)的鼠IL-l(3基因，并且另外編碼在鼠IL-1P的N端的Gly-Gly氨基酸序列。將獲得的鼠IL-l卩片段用^^"2/和州"《7//消化，并克隆到載體pAP590(琥珀阻抑)的相同限制性位點(diǎn)，產(chǎn)生質(zhì)粒pAP630。用質(zhì)粒pAP630轉(zhuǎn)化包含質(zhì)粒pISM579并提供琥珀阻抑的大腸桿菌JM109。在包含20(ig/ml氨卡青霉素和10昭/ml卡那霉素的5mlLB液體培養(yǎng)基中接種單一菌落，并在37。C下靜置培養(yǎng)16-24小時(shí)。制備的接種物用包含20ng/ml氨千青霉素和10嗎/ml卡那霉素的M9培養(yǎng)基稀釋50倍，并在37。C下在搖床中過夜培養(yǎng)。通過離心分離收獲細(xì)胞。B.與人IL-iPu9-269基因融合的AP205外殼蛋白(AP205hlL-l(3脂69)所組成的病毒樣顆粒的克隆和表達(dá)使用引物pINC畫74(5，-GATCCGGAGGTGGTGCCCCTGTACGATCACTGAACTG-3，，SEQIDNO:194)和pINC-76(5，-GTATGCATTAGGAAGACACAAATTGCATGGTGAAGTC畫3，SEQIDNO:195),從編碼人IL-1(3的質(zhì)粒pET42T-hIL-l|3116-269上擴(kuò)增人IL畫1P序列，分別引入5，《p"2/和3，Mp/z/^3/位點(diǎn)。將獲得的人IL-1(3片段用《p"2/和A爾/27川3/消化，并克隆到載體pAP590(琥珀阻抑)的相同限制性位點(diǎn)，產(chǎn)生質(zhì)粒pAP649。用質(zhì)粒pAP649轉(zhuǎn)化包含有質(zhì)粒pISM579(提供琥珀阻抑)的大腸桿菌JM109。在包含20嗎/ml氨芐青霉素和iojig/ml卡那霉素的5mlLB液體培養(yǎng)基中接種單一菌落，并在37。C下靜置培養(yǎng)16-24小時(shí)。制備的接種物用包含20嗎/ml氨千青霉素和10嗎/ml卡那霉素的M9培養(yǎng)基稀釋50倍，并在37。C下在搖床中過夜培養(yǎng)。通過離心分離收獲細(xì)胞。C.使用AP205—mlL-l(3n9-269免疫小鼠4只balb/c雌性小鼠用AP205—mlL-l(3u9-269進(jìn)行免疫。將25jug總蛋白用PBS稀釋到200pl，并在第0天、第14天和第28天對小鼠皮下注射(lOOial在腹部兩側(cè))。在第0天、第14天、第28天和第35天對小鼠眶后取血，使用小鼠IL-l(3n9-269特異性ELISA來分析血清。D.ELISA使用濃度為1lag/ml的小鼠IL-iPu9.269蛋白包被ELISA板。封閉該板，然后與第0天、第14天、第28天和第35天的小鼠血清的連續(xù)稀釋液一起孵育。使用酶標(biāo)記的抗小鼠IgG抗體檢測結(jié)合的抗體。以在450nm處產(chǎn)生半數(shù)最大光密度的那些稀釋度的平均值來計(jì)算鼠血清的抗體效價(jià)。用八？205_11111^1(3119-269免疫產(chǎn)生特異性的高的抗鼠11^1卩119-269效價(jià)。這表明使用AP205—mlL-lpn9-269免疫能夠克服免疫耐受，并產(chǎn)生特異性識別IL-1(3119-269的高效價(jià)抗體。E.IL-1(3的體外中和然后測試AP205—mlL-l(3n9.269免疫小鼠的血清抑制小鼠IL-1(3蛋白與其受體結(jié)合的能力。因而使用濃度為1pg/ml的重組mIL-l受體I-hFc融合蛋白包被ELISA板，與來自單獨(dú)用AP205—mlL-iPu9-269或者單獨(dú)用AP205與100ng/ml小鼠11^幣119_269—起免疫的小鼠的血清的連續(xù)稀釋液共孵育。使用生物素化的抗小鼠IL-1P抗體與辣根過氧化酶偶聯(lián)的鏈霉抗生物素來檢測IL-l(3n9-269與固定化的mIL-l受體I-hFc融合蛋白的結(jié)合。所有的來自用AP205一mlL-l(3n9-269免疫的小鼠的血清強(qiáng)烈抑制小鼠工-1(3119.269與其受體的結(jié)合，而來自單獨(dú)用AP205免疫的小鼠的血清則沒有顯示任何抑制效果。這些數(shù)據(jù)表明用AP205—mIL-ip119_269免疫能夠產(chǎn)生能夠是和小鼠IL-lpn9-269與其受體相互作用的抗體。F.IL-1I3的體內(nèi)中和然后研究通過AP205—mIL-l(3U9-269免疫而產(chǎn)生的^凡體的體內(nèi)中和能力。因而在第0天、第14天和第28天用AP205—mlL-l(3u9-269對4只balb/c雌性小鼠免疫三次，同時(shí)有4只小鼠單獨(dú)用AP205免疫。在第35天對所有小鼠靜脈注射1pg游離的鼠IL-ip119-269。作為注射的IL-lPll9-269的炎癥活性的讀數(shù)，在注射前和注射3小時(shí)后取樣，并分析血清樣本中促炎細(xì)胞因子IL-6濃度的相對增加。AP205免疫的小鼠顯示出血清IL-6濃度顯著增加，而用AP205—mlL-l(3u9-269免疫的小鼠則只顯示出很輕微的增加。這些數(shù)據(jù)表明用AP205—mlL-iPu9—269免疫產(chǎn)生的抗體能夠特異性地、有效地中和IL-ip的促炎活性。G.AP205—mlL-iPu9.269對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎小鼠模型的有效性在膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎小鼠模型(CIA)中測試AP205_mIL-ip119_269免疫的有效性。對DBA/1雄性小鼠單獨(dú)用50嗎AP205—mIL-ip119_269(n=8)或者AP205(n=8)皮下注射免疫3次(第0天、第14天和第28天)，然后在第42天皮內(nèi)注射混合有完全弗氏佐劑的200|iig牛II型膠原。在第63天，加強(qiáng)注射混合有不完全弗氏佐劑的200嗎牛n型膠原后，每天檢查小鼠關(guān)節(jié)炎癥狀的發(fā)展。根據(jù)觀察到的紅胂程度和測得的所有后肢的踝關(guān)節(jié)厚度，對每個(gè)肢給出0-3的臨床評分。第二次膠原注射4周后，與AP205免疫的小鼠相比，AP205—mlL-lf3u9-269免疫小鼠顯示出顯著減少的平均臨床評分。而且，八？205一111工-13119.269免疫小鼠的后肢踝關(guān)節(jié)厚度只表現(xiàn)出較少增加，而AP205免疫小鼠的后肢踝關(guān)節(jié)厚度則表現(xiàn)出顯著增加。綜合考慮，這些數(shù)據(jù)顯示AP205_mIL-1P!19-269免疫強(qiáng)有力地保護(hù)CIA模型小鼠不出現(xiàn)炎癥與關(guān)節(jié)炎的臨床體征。實(shí)施例10A.人IL-l(3u6.269的克隆、表達(dá)和純化以人類肝組織的cDNA文庫為模板，使用寡核苷酸HIL-1(5，-ATATATGATATCCCTGTACGATCACTGAACTGCACG畫3，；SEQIDNO:124)和HIL-2(5,國ATATATCTCGAGGGAAGACACAAATTGCATGGTGAAG-3,;SEQIDNO:125)，通過PCR擴(kuò)增編碼人IL-1(3(hIL-l(3116.269)的氨基酸116-269的核苷酸序列，將擴(kuò)增的核苷酸序列用Xhol和EcoRV消化，并克隆到表達(dá)載體pET42T(+)中。通過用新的接頭序列置換pET-42a(+)(Novagen)的T7啟動子和T7終止子之間的整個(gè)區(qū)域分兩個(gè)步驟來構(gòu)建質(zhì)粒pET-42T(+)，這促進(jìn)將目標(biāo)蛋白質(zhì)表達(dá)為與包含His-標(biāo)簽的C末端標(biāo)簽(SEQIDNO:190)和含有半胱氨酸的接頭的融合蛋白。第一步，用限制性內(nèi)切酶Ndel和AvrII消化質(zhì)粒pET-42a(+),釋》文一個(gè)位于T7啟動子和T7終止子之間的958bp的由1個(gè)GST標(biāo)簽、S標(biāo)簽、2個(gè)His標(biāo)簽和多克隆位點(diǎn)組成的片段。分離包含pET-42a(+)載體主鏈的4792bp的殘留片段，并將其連接到退火的互補(bǔ)寡核苷酸42-1(5'-TATGGATATCGAATTCAAGCTTCTGCAGCTGCTCGAGTAATTGATTAC-3';SEQIDNO:126)和42-2(5'-CTAGGTAATCAATTACTCGAGCAGCTGCAGAAGCTTGAATTCGATATCCA誦3';SEQIDNO:127)上，產(chǎn)生質(zhì)粒pET-42S(+)。第二步，將質(zhì)粒pET-42S(+)通過用限制性內(nèi)切酶Xhol和AvrII消化而線性化，并連"l妻到互補(bǔ)的退火寡核苷酸42T-1(5'-TCGAGCACCACSEQIDNO:128)和42T-2(5'-CTAGGTATTAATCAATTATTATTAGCAACCACCGTGGTGGTGGTGGTGGTGC-3';SEQIDNO:129)上，產(chǎn)生質(zhì)粒pET-42T(+)。將上面提到的1111^1(3116-269片段克隆到pET-42T(+)中，產(chǎn)生了質(zhì)粒pET42T-hIL-l(3116.269。此質(zhì)粒編碼相當(dāng)于成熟的人IL-ip、1個(gè)His標(biāo)簽和1個(gè)C-末端包含半胱氨酸的接頭(GGC，SEQIDNO:178)的融合蛋白。因此，該融合蛋白由在C-末端融合到SEQIDNO:165上的SEQIDNO:190組成。位于人IL-1(3的117位點(diǎn)的原始丙氨酸殘基在此融合蛋白中轉(zhuǎn)變?yōu)楫惲涟彼??；旧习凑諏?shí)施例1所述的對于鼠mlL-l(3，269蛋白的操作進(jìn)行人IL-l(3u6，蛋白的表達(dá)與純化。B.人IL-iPn6-269突變蛋白的克隆、表達(dá)和純化通過對質(zhì)粒pET42T-hlL-lpu6.269的定向誘變，構(gòu)建10個(gè)不同的突變型人IL-iPn6-269融合蛋白表達(dá)載體。為實(shí)現(xiàn)此目標(biāo)，按照使用說明來使用Quik-Change定向誘變試劑盒(Stratagene)。這些突變型IL-lPii9-269蛋白的表達(dá)載體連同用于其構(gòu)建的寡核苷酸對列于表3中。按照實(shí)施例1所述進(jìn)行不同的人IL-iPu6-269突變蛋白的表達(dá)與純化。表3:IL-1突變蛋白、表達(dá)載體和用于其構(gòu)建的寡核苷酸的概括<table>tableseeoriginaldocumentpage70</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage71</column></row><table>(SEQ-IDNO:137)EE-2(5，-CACAGGTATTTTGTCATTACTTCCTTGTACAAAGGACATG-3，；SEQ-IDNO:154)pET42T-hIL-lp116-269(ASND52-54)hIL-1i6-269(△SND52-54)(SEQ-IDN。:B8)SND-1(5，-CTTTGTACAAGGAGAAGAAAAAATACCTGTGGCCTTG-3，；SEQ-IDNO:155)SND-2(5，-CAAGGCCACAGGTATTTTTTCTTCTCCTTGTACAAAG-3，；SEQ-IDNO:156)pET42T-hIL-l|3l6-269(K63S/K65S)hIL-1Pi16-269(K63S/K65S)(SEQ-IDNO:139)K6365S-1(5,-GTGGCCTTGGGCCTCAGCGAAAGCAATCTGTACCTGTCCTG-3，；SEQ-IDNO:157)K6365S-2(5，-CAGGACAGGTACAGATTGCTTTCGCTGAGGCCCAAGGCCAC-3，；SEQ-IDNO:158)pET42T-hIL-lpll6—269(Q126A/E128A)hIL-1Pi16-269(Q126A/E128A;i(SEQ-IDNO:140)QE-1(5，-gtacatcagcacctctgcagcagcaaacatGCCCGTCTTC-3，；SEQ-IDNO:159)QE陽2(5'-GAAGACGGGCATGTTTGCTGCTGCAGAGGTGCTGATGTAC-3，；SEQ-IDNO:160)實(shí)施例11人工-1(3116-269與人IL-l(3116-269突變蛋白的生物活性3只C3H/HeJ雌性小鼠為一組，對它們靜脈注射10嗎野生型人IL-l(3n9—269蛋白或者實(shí)施例10中人IL-iPn9-269突變蛋白中的一種。在注射前和注射3小時(shí)后取樣，并分析血清樣本中促炎細(xì)胞因子IL-6濃度的相對增加。注射野生型人正-1(3119-269蛋白的小鼠顯示出血清IL-6濃度顯著增長，而注射兩種人工-1(3119.269突變蛋白中的一種的小鼠卻僅僅顯示出輕微的增長或根本沒有增長。實(shí)施例12A.人IL-l(3n6-269及人11^-卬116-269突變蛋白與Q(3病毒樣顆粒的偶聯(lián)實(shí)施例10中的野生型人IL-l(3n9-269蛋白及人正-1(3119_269突變蛋白與QP病毒樣顆粒的化學(xué)交聯(lián)基本上如實(shí)施例2A所述進(jìn)行。B.使用與Q(3衣殼偶聯(lián)的人IL-iPn6，及人IL-l(3n6^9突變蛋白免疫小鼠4只balb/c雌性小鼠為一組，用與Q(3偶聯(lián)的野生型11化-1^116_269蛋白或者h(yuǎn)IL-l[3116—269突變蛋白中的一種對它們進(jìn)行免疫。將50pg總蛋白用PBS稀釋至200并在第0天、第14天和第28天進(jìn)行皮下注射(100)il在腹部兩側(cè))。在第35天對小鼠眶后取血，用對于用作免疫原的相應(yīng)人IL-l^6-269突變蛋白或者野生型人IL-iPu6-269蛋白特異性的ELISA分析血清。C.ELISA使用濃度為1pg/ml的野生型ML-lf3n6-269蛋白或者相應(yīng)的hIL-lPii6-269突變蛋白包被ELISA板。封閉該板，然后與第35天的鼠血清的連續(xù)稀釋液孵育。使用酶標(biāo)記的抗小鼠IgG抗體檢測結(jié)合的抗體。以在450nm處產(chǎn)生半數(shù)最大光密度的那些稀釋度的平均值來計(jì)算小鼠血清的抗體效價(jià)，并示于表4中。表4:用QP-hlL-l(3!!6-269或者QP-hlL-l(3u6-269突變蛋白疫苗免疫而產(chǎn)生的抗hlL-iPn6-269(野生型和突變型)特異性IgG的效價(jià)<table>tableseeoriginaldocumentpage73</column></row><table>Qp-hlL-l(3,陽(D145K)78365±2698393241±28856Q(3-hIL-lp6—269(AEE50'51)287625±143835229862±140169QP-hlL-l(3扁(ASND52.54)68895±14267106116±25295QP-hIL-1p!'6-269(K63S/K65S)403712±402594244552±173597Qf3-hlL-1(3!16.269(Q126A/E128A)195165±71436170434±86831Q(3-hlL-iPu6-269免疫誘導(dǎo)產(chǎn)生針對hIL-l(3116_269的高效價(jià)的IgG抗體。而且，用兩種Q(3-hlL-iPu6.269突變蛋白疫苗中的任一種免疫接種都能誘導(dǎo)產(chǎn)生針對用作免疫原的各自Q[3-hlL-l(3n6-269突變蛋白或者野生型ML-iPu6-269蛋白的高IgG效價(jià)。D.人IL-ip的體外中和測試用與Q(M禺聯(lián)的野生型1111^1(3116-269蛋白或者h(yuǎn)lL-iPu6-269突變蛋白中的一種免疫的小鼠血清抑制人IL-1(3蛋白與其受體結(jié)合的能力。因而使用濃度為1|ug/ml的重組人IL-1受體I-hFc融合蛋白包被ELISA板，與上面提到的血清的連續(xù)稀釋液和100ng/mlhlL-l(3u6-269蛋白共孵育。使用生物素化的抗人IL-ip抗體和與辣根過氧化酶偶聯(lián)的鏈霉抗生物素來檢測hlL-l(3u6—269與固定化的人IL-1受體I-hFc融合蛋白的結(jié)合。在血清濃度23.3%時(shí)，針對Q(3-hIL-l(3116_269突變蛋白疫苗產(chǎn)生所有的血清完全抑制100ng/ml野生型1111^1(3116_269與hIL-lRI的結(jié)合。E.IL-ip的體內(nèi)中和研究通過用與Q(3偶聯(lián)的野生型ML-l(3n6-269蛋白或者h(yuǎn)IL-l(3116_269突變蛋白中的一種免疫而產(chǎn)生的抗體的體內(nèi)中和能力。因而，在第0天、第14天和第28天用50pg的任一種疫苗對每組3只C3H/HeJ雌性小鼠免疫3次。在第35天，對所有的免疫過的小鼠靜脈注射1ng的游離野生型WL-l(3116-269。三只初次接受試驗(yàn)的小鼠同時(shí)注射相同量的野生型hlL-l(3n6-269作為對照。作為注射的hlL-iPu6，的炎癥活性的讀數(shù)，在注射前立即和注射3小時(shí)后取樣，并分析血清樣本中促炎細(xì)胞因子IL-6濃度的相對增加。初次接受試驗(yàn)的小鼠在注射hIL-l(3116_2693小時(shí)后顯示血清IL-6濃度顯著增加，而所有用與QP偶聯(lián)的野生型hIL-1(3116-269蛋白或者h(yuǎn)lL-iPn6-269突變蛋白中的一種免疫的小鼠則顯示血清IL-6沒有任何增加，表明注射的hIL-l|3116-269被疫苗誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體有效地中和了。實(shí)施例13Q[3-mIL-1p！19—269免疫對于MSU誘導(dǎo)的炎癥的改善痛風(fēng)是一種由于尿酸單鈉(MSU)晶體在關(guān)節(jié)及關(guān)節(jié)周圍組織沉淀所導(dǎo)致的痛苦的炎性疾病。已經(jīng)認(rèn)為MSU晶體激活所謂的NALP3inflammasome，導(dǎo)致產(chǎn)生活性的IL-ip，IL-ip主要負(fù)責(zé)開始并促進(jìn)疾病的炎癥應(yīng)答特征。對C57BL/6小鼠(每組5只)以2周為間隔用50|LigQ(3-mlL-iPu9.269或者單獨(dú)用50pgQ(3VLP進(jìn)行3次皮下免疫。最后一次免疫1周后對所有小鼠進(jìn)行1.5mgMSU晶體的腹膜內(nèi)刺激。刺激6小時(shí)后，處死小鼠，測定腹膜滲出物中的中性粒細(xì)胞數(shù)目和中性粒細(xì)胞化學(xué)引誘物KC和MIP-2的濃度。與Q(3免疫對照組相比，QP-mIL-1Pll9-269免疫小鼠表現(xiàn)出明顯的白細(xì)胞及MIP-2和KC濃度減少。實(shí)施例14Q(3-mlL-lf3u9-269免疫對于實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦炎的改善對多發(fā)性硬化癥小鼠模型的C57BL/6小鼠(每組8只)以2周為間隔用50嗎Q(3-mIL-ip119_269或者單獨(dú)用50嗎QPVLP進(jìn)行3次皮下免疫。最后一次免疫1周后對所有小鼠皮下注射混合有完全弗氏佐劑的100fig的MOG肽(MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGK，SEQIDNO:191)。當(dāng)天和兩天后，對所有小鼠腹膜內(nèi)注射400ng的百日咳毒素?；谏窠?jīng)癥狀的發(fā)展依據(jù)以下方案每天對小鼠評分0，沒有臨床疾??；0.5，尾巴末端無力；1，尾巴完全無力；1.5,尾巴無力和后肢虛弱(步態(tài)不穩(wěn)，后足抓握無力)；2,單側(cè)后肢部分癱瘓；2.5,兩側(cè)后肢部分癱瘓；3，兩側(cè)后肢完全癱瘓；3.5,兩側(cè)后肢完全癱瘓，單側(cè)前肢完全癱瘓；4,四肢完全癱瘓。與Q(3-免疫小鼠相比，Q(3-mIL-l(3119.269免疫小鼠的臨床癥狀明顯減輕。權(quán)利要求1.一種組合物，其包含(a)具有至少一個(gè)第一附著位點(diǎn)的病毒樣顆粒(VLP)；和(b)具有至少一個(gè)第二附著位點(diǎn)的至少一種抗原，其中所述至少一種抗原是IL-1分子，并且其中(a)和(b)通過所述至少一個(gè)第一附著位點(diǎn)和所述至少一個(gè)第二附著位點(diǎn)連接。2.權(quán)利要求l的組合物，其中所述IL-1分子選自(a)IL-1蛋白；(b)IL-1成熟片段；(c)IL-1片段；(d)IL-1肽；和(e)IL-1突變蛋白。3.權(quán)利要求2的組合物，其中所述IL-1分子來源于人類。4.權(quán)利要求l-3任一項(xiàng)的組合物，其中所述IL-1分子是IL-1(3分子。5.權(quán)利要求l-3任一項(xiàng)的組合物，其中所述IL-1分子是IL-loc分子。6.權(quán)利要求4的組合物，其中所述IL-ip分子選自(a)IL-1[3蛋白;(b)IL-1(3成熟片段；(c)IL-1(3片段；(d)IL-ip肽;和(e)IL-1(3突變蛋白。7.權(quán)利要求5的組合物，其中所述IL-la分子選自(a)IL畫lot蛋白；(b)IL-la成熟片段；(c)IL-loc片段；(d)IL-la肽；和(e)IL-la突變蛋白。8.權(quán)利要求l-4任一項(xiàng)的組合物，其中所述IL-1分子是包含選自下組的氨基酸序列或優(yōu)選地由該氨基酸序列組成的IL-1(3蛋白(a)人IL-l(3(SEQIDNO:49);(b)SEQIDNO:50至SEQIDNO:62中的任一種；和(c)與SEQIDNO:49至SEQIDNO:62中的任一種序列至少80%、或優(yōu)選至少90%、更優(yōu)選至少95%、或最優(yōu)選至少99%相同的氨基酸序列。9.權(quán)利要求l-4任一項(xiàng)的組合物，其中所述IL-1分子是包含選自下組的氨基酸序列或優(yōu)選地由該氨基酸序列組成的IL-1p成熟片段(a)人IL-1(3117-269(SEQIDNO:64);(b)人IL畫1p116-269(SEQIDNO:165);(c)小鼠IL-1(3119-269(SEQIDNO:164);和(d)與SEQIDNO:64、SEQIDNO:165和SEQIDNO:164中的任一種序列具有至少80%、或優(yōu)選至少90%、更優(yōu)選至少95%、或最優(yōu)選至少99%相同的氨基酸序列。10.權(quán)利要求l-4任一項(xiàng)的組合物，其中所述IL-1分子是包含選自下組的氨基酸序列或優(yōu)選地由該氨基酸序列組成的IL-lp肽(a)SEQIDNO:89至SEQIDNO:116中的任一種；和(b)與SEQIDNO:89至SEQIDNO:l16中的任一種至少80%、或優(yōu)選至少90%、更優(yōu)選至少95%、或最優(yōu)選至少99%相同的氨基酸序列。11.權(quán)利要求1-3或5中任一項(xiàng)的組合物，其中所述IL-l分子是包含選自下組的氨基酸序列或優(yōu)選地由該氨基酸序列組成的IL-la蛋白(a)人IL-1a(SEQIDNO:36);(b)SEQIDNO:37至SEQIDNO:48中的任一種；和(e)與SEQIDNO:36至SEQIDNO:48中的任一種至少80%、或優(yōu)選至少90%、更優(yōu)選至少95%、或最優(yōu)選至少99%相同的氨基酸序列。12.權(quán)利要求1-3或5中任一項(xiàng)的組合物，其中所述IL-1分子是包含選自下組的氨基酸序列或優(yōu)選地由該氨基酸序列組成的IL-lot成熟片段(a)人IL畫1a119-271(SEQIDNO:63);(b)小鼠IL-la117-270(SEQIDNO:163);和(c)與SEQIDNO:63或SEQIDNO:163的任一種至少80%、或優(yōu)選至少90%、更優(yōu)選至少95%、或最優(yōu)選至少99%相同的氨基酸序列。13.權(quán)利要求1-3或5中任一項(xiàng)的組合物，其中所述IL-1分子是包含選自下組的氨基酸序列或優(yōu)選地由該氨基酸序列組成的IL-lot肽(a)SEQIDNO:67至SEQIDNO:88中的任一種；和(b)與SEQIDNO:67至SEQIDNO:88中的任一種至少80%、或優(yōu)選至少90%、更優(yōu)選至少95%、或最優(yōu)選至少99%相同的氨基酸序列。14.權(quán)利要求1-13任一項(xiàng)的組合物，其中所述VLP包含或者由RNA噬菌體的重組外殼蛋白、其突變體或片段組成。15.權(quán)利要求l-14任一項(xiàng)的組合物，其中所述VLP是RNA噬菌體的VLP。16.權(quán)利要求14或15任一項(xiàng)的組合物，其中所述RNA噬菌體是選自Q卩和AP205的RNA噬菌體。17.權(quán)利要求l-16任一項(xiàng)的組合物，其中所述第一附著位點(diǎn)與所述第二附著位點(diǎn)通過至少一個(gè)共價(jià)鍵連接，其中優(yōu)選地所述共價(jià)鍵是非肽鍵。18.權(quán)利要求l-17任一項(xiàng)的組合物，其中所述第一附著位點(diǎn)包含或者優(yōu)選地是氨基，優(yōu)選賴氨酸的氨基。19.權(quán)利要求l-18任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二附著位點(diǎn)包含或者優(yōu)選地是巰基，優(yōu)選半胱氨酸的巰基。20.權(quán)利要求l-17任一項(xiàng)的組合物，其中所述第一附著位點(diǎn)不是巰基。21.權(quán)利要求l-17和20中任一項(xiàng)的組合物，其中所述VLP和所述至少一種抗原的所述連接不包含二硫鍵。22.權(quán)利要求l-19任一項(xiàng)的組合物，其中只有一個(gè)所述第二附著位點(diǎn)與所述第一附著位點(diǎn)通過至少一個(gè)非肽共價(jià)鍵連接，產(chǎn)生單一且均勻類型的所述IL-1分子與所述核心顆粒的結(jié)合，其中與所述第一附著位點(diǎn)連接的所述只有一個(gè)第二附著位點(diǎn)是巰基，并且其中所述IL-1分子和所述核心顆粒通過所述連接相互作用，形成有序且重復(fù)的抗原陣列。23.權(quán)利要求l-16任一項(xiàng)的組合物，其中所述抗原與AP205的外殼蛋白、其突變體或片段的N末端或C末端融合。24.權(quán)利要求l-22任一項(xiàng)的組合物，其進(jìn)一步包括接頭。25.權(quán)利要求l-24任一項(xiàng)的組合物，其中所述IL-1分子是SEQIDNO:64或其書于生的突變蛋白。26.權(quán)利要求l-24任一項(xiàng)的組合物，其中所述IL-1分子是SEQIDNO:63或其書于生的突變蛋白。27.—種疫苗，其包含權(quán)利要求1-26中任一項(xiàng)的組合物或者由該組合物組成。28，權(quán)利要求27的疫苗，其中所述疫苗不含佐劑。29.—種免疫方法，包括給動物或人施用權(quán)利要求27或28任一項(xiàng)的疫苗。30.—種藥物組合物，其包含(a)權(quán)利要求1-23任一項(xiàng)的組合物或權(quán)利要求27或28任一項(xiàng)的疫苗；和(b)可接受的藥物載體。31.—種制備權(quán)利要求l-26任一項(xiàng)的組合物或權(quán)利要求27或28任一項(xiàng)的疫苗的方法，包括(a)提供具有至少一個(gè)第一附著位點(diǎn)的VLP;(b)提供具有至少一個(gè)第二附著位點(diǎn)的至少一種抗原，其中所述抗原是IL-1分子、IL-l蛋白、IL-l成熟片段、IL-l肽或IL-l突變蛋白；和(c)將所述VLP與所述至少一種抗原相連接，產(chǎn)生所述組合物或所述疫苗，其中所述至少一種抗原和所述VLP通過所述至少一個(gè)第一附著位點(diǎn)和所述至少一個(gè)第二附著位點(diǎn)連接。32.權(quán)利要求l-26任一項(xiàng)的組合物、權(quán)利要求27或28任一項(xiàng)的疫苗或權(quán)利要求30的藥物組合物在制備用于治療疾病的藥物中的用途，其中所述疾病優(yōu)選地選自動物、優(yōu)選人類中的(a)血管疾?。?b)遺傳性IL-l-依賴的炎性疾??；(c)慢性自身免疫炎性疾??；(d)骨和軟骨變性性疾?。?e)變態(tài)反應(yīng)疾?。缓?f)神經(jīng)疾病。33.權(quán)利要求32的用途，其中所述疾病是血管疾病，其中所述血管疾病是動脈粥樣硬化。34.權(quán)利要求32的用途，其中所述疾病是遺傳性IL-l-依賴的炎性疾病，其中所述遺傳性IL-1-依賴的炎性疾病是家族性地中海熱(FMF)。35.權(quán)利要求32的用途，其中所述疾病是慢性自身免疫炎性疾病，其中所述慢性自身免疫炎性疾病是全身發(fā)作青少年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎或類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。36.權(quán)利要求32的用途，其中所述疾病是骨和軟骨變性性疾病，其中所述骨和軟骨變性性疾病是痛風(fēng)或骨關(guān)節(jié)炎。37.權(quán)利要求32的用途，其中所述疾病神經(jīng)疾病，其中所述神經(jīng)疾病是多發(fā)性硬化。全文摘要本發(fā)明涉及分子生物學(xué)、病毒學(xué)、免疫學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。本發(fā)明提供一種包含有序且重復(fù)的抗原陣列的組合物，其中所述抗原是IL-1蛋白、IL-1突變蛋白或IL-1片段。更具體地，本發(fā)明提供一種包含病毒樣顆粒和與該病毒樣顆粒連接的至少一種IL-1蛋白、IL-1突變蛋白或至少一種IL-1片段的組合物。本發(fā)明還提供一種制備所述組合物的方法。本發(fā)明的組合物可以用于制備治療炎性疾病和慢性自身免疫病、遺傳疾病和心血管疾病的疫苗。本發(fā)明的組合物有效地誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，特別是抗體應(yīng)答。而且，本發(fā)明的組合物尤其可用于在所述環(huán)境內(nèi)有效地誘導(dǎo)自身特異性免疫應(yīng)答。文檔編號C12N7/04GK101267834SQ200680034369公開日2008年9月17日申請日期2006年9月28日優(yōu)先權(quán)日2005年9月28日發(fā)明者A·蒂索特,G·斯龐,M·巴克曼申請人:賽托斯生物技術(shù)公司