專利名稱：：用于產(chǎn)生發(fā)酵產(chǎn)物的方法用于產(chǎn)生發(fā)酵產(chǎn)物的方法對序列表的涉及本申請包含計算機(jī)可讀形式的序列表。將所述計算機(jī)可讀形式作為參考并入本文。發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及用于從含淀粉材料例如粒狀淀粉(granularstarch)產(chǎn)生發(fā)酵產(chǎn)物的方法，所述方法在該含淀粉材料的初始糊化溫度以下的溫度進(jìn)行。本發(fā)明還涉及酶組合物及其在本發(fā)明的方法中的用途。發(fā)明背景谷粒(grain)、谷物(cereal)或植物的塊莖含有淀粉。淀粉是微觀顆粒的形式，其在室溫不溶于水。當(dāng)加熱含水淀粉漿時，顆粒膨脹并且最終脹裂，將淀粉分子分散至溶液中。在這種"糊化"過程中，存在粘度的顯著增加。因為在常規(guī)工業(yè)方法中固體水平是大約30-40%，所以不得不將淀粉沖淡或"液化"，從而能夠?qū)ζ溥M(jìn)行操作。通常通過在被稱作液化的方法中的酶降解來實現(xiàn)這種粘度的降低。在液化期間，通過a-淀粉酶將長鏈淀粉降解為較小的支鏈和直鏈葡萄糖單元(糊精)。常規(guī)的酶液化方法可以作為三步熱漿法(three-stephotslurryprocess)來進(jìn)行。將漿料加熱至80-85。C，再添加熱穩(wěn)定的a-淀4分酶來起始液化。其后在105-125°C的溫度噴射蒸煮(jet-cook)漿料以將該漿料完全糊化，冷卻至60-95。C，并且通常添加額外的a-淀粉酶來完成水解。液化過程通常在pH5-6進(jìn)行。經(jīng)研磨和液化的整谷粒稱作醪(mash)。在糖化期間，將來自液化的糊精進(jìn)一步水解以產(chǎn)生發(fā)酵生物如酵母能夠代謝的低分子糖(DPw)。通常使用葡糖淀粉酶來完成所述水解，可以代替葡糖淀粉酶使用或與葡糖淀粉酶一起使用的是a-葡糖苷酶和/或酸性a-淀粉酶。完全糖化步驟通常持續(xù)多至72個小時，然而，經(jīng)常只進(jìn)行預(yù)糖化，例如在50°C以上的溫度預(yù)糖化40-90分鐘，其后在稱為同時糖化和發(fā)酵(SSF)的方法中在發(fā)酵期間完全糖化。使用發(fā)酵生物例如酵母來進(jìn)行發(fā)酵，將所述發(fā)酵生物添加至醪。其后回收發(fā)酵產(chǎn)物。對于乙醇，例如燃料乙醇、可食用乙醇或工業(yè)乙醇，發(fā)酵在通常為大約32。C的溫度進(jìn)行通常35-60小時。當(dāng)發(fā)酵產(chǎn)物是啤酒時，發(fā)酵在通常為大約14°C的溫度進(jìn)行通常多至8天。在發(fā)酵之后，可以使用醪，例如，用作啤酒，或可以將醪蒸餾以回收乙醇。乙醇可以用作例如燃料乙醇、飲用乙醇和/或工業(yè)乙醇。從以上討論中顯而易見的是，由于多個步驟中不同的溫度要求，常規(guī)方法中的淀粉水解非常耗能。美國專利No.4,316,956提供用于將粒狀淀粉轉(zhuǎn)化成乙醇的發(fā)酵方法。歐洲專利No.EP140410-A提供用于淀粉水解的酶組合物。WO2004/081193涉及在植物材料發(fā)酵期間產(chǎn)生高水平的醇。所述方法包括i)制備用于糖化的植物材料，ii)將制備的植物材料不經(jīng)烹煮(withoutcooking)轉(zhuǎn)化成糖，和iii)發(fā)酵糖。WO2004/0106533涉及從粒狀淀粉產(chǎn)生醇產(chǎn)物的方法，包括在所述粒狀淀粉初始糊化溫度以下的高溫進(jìn)行預(yù)處理，繼而進(jìn)行同時糖化和發(fā)酵。該方法在酸性a-淀粉酶活性、產(chǎn)生麥芽糖的酶活性和a-葡糖苷酶存在下進(jìn)行。本發(fā)明的目的是提供將含淀粉材料如粒狀淀粉轉(zhuǎn)化成發(fā)酵產(chǎn)物如乙醇的改進(jìn)的方法。發(fā)明概述本發(fā)明涉及從含淀粉材料(例如，分級的(fractionated)含淀粉材料)產(chǎn)生發(fā)步驟。在第一個方面，本發(fā)明涉及從含淀粉材料產(chǎn)生發(fā)酵產(chǎn)物的方法，其包括(a)在如下酶存在下，在所述含淀粉材料的初始糊化溫度以下的溫度糖化含淀粉材料i)比所述含淀粉材料中內(nèi)源存在的cc-葡糖苷酶量多0.001-50AGU/gDS,優(yōu)選0.01-10AGU/gDS的a-葡糖苷酶，和ii)從0(零)以上至10FAU-F/gDS的a-淀粉酶，(b)使用發(fā)酵生物發(fā)酵。在實施方式中，本發(fā)明涉及從源自經(jīng)修飾植物的含淀粉材料產(chǎn)生發(fā)酵產(chǎn)物的方法，其包括(a)在如下酶活性存在下，在初始糊化溫度以下糖化含淀粉材料i)oc-葡糖芬酶活性，和ii)從0(零)以上至10FAU-F/gDS的a-淀粉酶活性，(b)使用發(fā)酵生物發(fā)酵，其中步驟(a)中a-葡糖苦酶的量高于相應(yīng)的未經(jīng)修飾的含淀粉植物材料中內(nèi)源a-葡糖苷酶的天然量。在第二個方面，本發(fā)明涉及從含淀粉材料產(chǎn)生發(fā)酵產(chǎn)物的方法，其包括步驟(a)在a-淀粉酶存在下液化含淀粉材料；(b)在如下酶存在下，在20-60°C的溫度范圍糖化步驟(a)中獲得的液化材料i)比所述含淀粉材料中存在的內(nèi)源cc-葡糖苷酶的天然量多0.001-50AGU/gDS，優(yōu)選0.01-10AGU/gDS的a-葡糖苷酶，和ii)從0(零)以上至10FAU-F/gDS的a-淀粉酶，(c)使用發(fā)酵生物發(fā)酵。在實施方式中，本發(fā)明涉及從源自經(jīng)修飾植物的含淀粉材料產(chǎn)生發(fā)酵產(chǎn)物的方法，其包括(a)在a-淀粉酶存在下液化含淀粉材料；(b)在如下酶活性存在下，在初始糊化溫度以下糖化含淀粉材料i)a-葡糖苷酶活性，和任選地ii)從0(零)至10FAU-F/gDS的a-淀粉酶活性，(c)使用發(fā)酵生物發(fā)酵，其中步驟(a)中a-葡糖苷酶的量高于相應(yīng)的未經(jīng)修飾的含淀粉植物材料中內(nèi)源a-葡糖苷酶的天然量。在第三個方面，本發(fā)明涉及包含a-葡糖苷酶和a-淀粉酶的組合物。在第四個方面，本發(fā)明涉及本發(fā)明的組合物的用途。附圖簡述圖1顯示當(dāng)使用玉米a-葡糖苷酶與a-淀粉酶A組合來水解玉米淀粉時的麥芽糖產(chǎn)生。圖2顯示當(dāng)使用玉米a-葡糖苷酶與ot-淀粉酶A組合來水解玉米淀粉時的葡萄糖產(chǎn)生。圖3顯示一步發(fā)酵方法中的乙醇產(chǎn)率，在所述方法中用不同濃度的玉米a-葡糖脊酶和a-淀粉酶A來處理磨碎的玉米。圖4顯示與稻a-葡糖苷酶相比玉米a-葡糖苷酶的pH穩(wěn)定性。圖5顯示與稻a-葡糖苷酶相比玉米a-葡糖苷酶的溫度穩(wěn)定性。圖6顯示在乙醇濃度為20體積％時，與稻a-葡糖苷酶相比玉米a-葡糖苷酶的穩(wěn)定性。圖7比較以下各項在一步同時糖化和發(fā)酵方法(SSF)中的性能(乙醇g/l):1)源自玉米的a-葡糖苷酶(2.6AGU/gDS);2)a-淀粉酶A(0.127FAU-F/gDS;3)a-淀粉酶A(0.127FAU-F/gDS和葡糖淀粉酶TC(0.34AGU/gDS;4)源自玉米的a-葡糖苷酶(2.6AGU/gDS)、a-淀粉酶A(0.127FAU-F/gDS)和葡糖淀粉酶TC(0.34AGU/gDS。圖8比較以下各項在一步同時糖化和發(fā)酵方法(SSF)中的性能(乙醇g/l):1)a-淀粉酶A(0.057FAU-F/gDS和葡糖淀粉酶AN(1.0AGU/gDS);2)源自玉米的a-葡糖苷酶(2.6AGU/gDS)、a-淀粉酶A(0.057FAU-F/gDS)和葡糖淀粉酶AN(1.0AGU/gDS)。圖9比較以下各項在一步同時糖化和發(fā)酵方法(SSF)中的性能(乙醇g/1):1)a-淀粉酶A(0、0.57FAU-F/gDS和葡糖淀粉酶SF(1.68AGU/gDS);2)源自玉米的a-葡糖苷酶(2.6AGU/gDS)、a-淀粉酶A(0.57FAU-F/gDS)和葡糖淀粉酶SF(1.68AGU/gDS)。圖10比較以下各項在一步同時糖化和發(fā)酵方法(SSF)中的性能(乙醇g/l):1)a-淀粉酶A(0.57FAU-F/gDS和葡糖淀粉酶TC(0.34AGU/gDS;2)a-淀粉酶A(0.57FAU-F/gDS)、葡糖淀粉酶TC(0.34AGU/gDS和源自嗜熱脂肪芽孢桿菌C6ac/〃wWeara決ermop/H7w力的a-葡糖苷酶(10單位/gDS);3)a-淀粉酶A(0.57FAU-F/gDS)、葡糖淀粉酶TC(0.34AGU/gDS)和源自酵母的a-葡糖苷酶(25單位/gDS)。發(fā)明詳述本發(fā)明涉及從含淀粉材料(例如，分級的含淀粉材料)產(chǎn)生發(fā)酵產(chǎn)物的方法。在開始產(chǎn)生期望的發(fā)酵產(chǎn)物時，含淀粉植物材料中有活性的天然內(nèi)源酶的量很大程度上依賴于收獲的含淀粉植物材料的質(zhì)量和對該植物材料的收獲后處理。例如，如果將含淀粉植物材料干燥和/或長時間l&藏，即使不是全部，也可能損失部分內(nèi)源酶活性。本發(fā)明涉及這個問題。發(fā)見天然內(nèi)源玉米a-葡糖苷酶以相當(dāng)于1至2AGU/gDS高的酶活性水平存在于磨碎的玉米中(不經(jīng)任何其它處理)(參見實施例3)。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)在同時糖化和發(fā)酵(SSF)未烹煮的含淀粉植物材料期間存在的植物ot-葡糖苷酶的實際總量對最終發(fā)酵產(chǎn)率具有顯著影響。發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)通過添加比天然存在于含淀粉植物材料中更多的a-葡糖苷酶可以增加發(fā)酵產(chǎn)率。在實施例5中顯示當(dāng)在SSF期間與a-淀粉酶(其通常在未經(jīng)烹煮的含淀粉材料的SSF期間添力。)組合添加1.13AGU/gDS、2.25AGU/gDS和4.51AGU/gDS的玉米a-葡糖苷酶時，乙醇產(chǎn)率顯著增加。發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)通過選擇特定組合的a-葡糖苷酶和a-淀粉酶可以使發(fā)酵產(chǎn)率進(jìn)一步增力口。因此，在第一個方面本發(fā)明涉及從含淀粉材料產(chǎn)生發(fā)酵產(chǎn)物的方法，其包括(a)在如下酶活性存在下，在初始糊化溫度以下糖化含淀粉材料i)比所述含淀粉材料中存在的內(nèi)源a-葡糖苷酶的天然量多0.001-50AGU/gDS，優(yōu)選0.01-10AGU/gDS的a-葡糖苷酶活性，和ii)從0(零)以上(fromabove0(zero))至10FAU-F/gDS的a-淀粉酶活性，(b)使用發(fā)酵生物發(fā)酵。應(yīng)該理解的是，在一個實施方式中可以通過使用經(jīng)修飾的植物材料來提供較高的a-葡糖苷酶量，所述修飾使該植物材料與源自未經(jīng)修飾植物的含淀粉植物材料相比含有較高的a-葡糖苷酶量。還應(yīng)該理解的是，還可以向本發(fā)明的方法提供其它酶活性，例如葡糖淀粉酶和/或a-淀粉酶活性，其通過修飾植物材料以表達(dá)所述酶活性來進(jìn)行。修飾植物材料的方法是本領(lǐng)域內(nèi)公知的。如何在轉(zhuǎn)基因植物中表達(dá)a-葡糖苷酶和其它酶活性將在下文的"在轉(zhuǎn)基因植物中表達(dá)a-葡糖苷酶"中進(jìn)一步描述。在這種情況下，本發(fā)明涉及從源自經(jīng)修飾植物的含淀粉材料產(chǎn)生發(fā)酵產(chǎn)物的方法，其包括(a)在如下酶活性存在下，在初始糊化溫度以下糖化含淀粉材料i)a-葡糖苷酶活性，和ii)從0(零)以上至10FAU-F/gDS的a-淀粉酶活性，(b)使用發(fā)酵生物發(fā)酵，其中步驟(a)中a-葡糖苦酶的量高于相應(yīng)的未經(jīng)修飾的含淀粉植物材料中內(nèi)源a-葡糖苦酶的天然量。在優(yōu)選的實施方式中，a-葡糖苷酶活性量比相應(yīng)的未經(jīng)修飾的含淀粉材料中內(nèi)源(x-葡糖苷酶天然量高0.001-50AGU/gDS，優(yōu)選0.01-10AGU/gDS。經(jīng)修飾的含淀粉植物材料可以源自轉(zhuǎn)基因植物。可以使用本領(lǐng)域公知的技術(shù)來制備轉(zhuǎn)基因植物。在下文的"在轉(zhuǎn)基因植物中表達(dá)a-葡糖苷酶"的部分中將描述實例。根據(jù)本發(fā)明的這個實施方式，與相應(yīng)的未經(jīng)修飾的含淀粉植物材料中內(nèi)源a-葡糖苷酶的天然量相比，轉(zhuǎn)基因植物材料具有較高的內(nèi)源a-葡糖苷酶活性量。在實施方式中，在發(fā)酵之后回收發(fā)酵產(chǎn)物。步驟(a)和(b)可以順序或同時進(jìn)行。在步驟(a)之前，可以制備含淀粉材料例如粒狀淀粉的漿，其具有20-55重量％的含淀粉材料的干固體，優(yōu)選25-45重量％的干固體，更優(yōu)選30-40重量％的干固體或30-45重量％的干固體。所述漿可以包含水和/或工藝水(processwater),例如釜餾物(stillage)(逆流(backset))、洗滌水、蒸發(fā)器濃縮物或蒸餾物、來自蒸餾的側(cè)線洗提水(sidestripperwater)或其它發(fā)酵產(chǎn)物工廠的工藝水。由于本發(fā)明的方法在糊化溫度以下進(jìn)行，因此不發(fā)生顯著的粘度增加，如有需要可以使用高水平的釜餾物。在實施方式中，含水漿料含有大約1至大約70體積％的釜餾物，優(yōu)選15-60體積％的釜餾物，特別是大約30-50體積°/。的菱餾物。在經(jīng)過本發(fā)明的方法之后，將含淀粉材料的干固體的至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95°/。、至少96%、至少97%、至少98%或優(yōu)選至少99%轉(zhuǎn)化成可溶的淀粉水解物。在優(yōu)選的實施方式中，步驟(a)和步驟(b)作為同時糖化和發(fā)酵方法來進(jìn)行。在這種優(yōu)選的實施方式中，通常在25°C至40°C，優(yōu)選28。C至36。C,例如28。C至35。C，例如28。C至34。C,例如大約32。C進(jìn)行所述方法。根據(jù)本發(fā)明，可以在發(fā)酵期間上調(diào)或下調(diào)溫度。在實施方式中，進(jìn)行同時糖化和發(fā)酵從而將糖水平例如葡萄糖水平保持在低水平，例如大約6重量％以下，優(yōu)選大約3重量％以下，優(yōu)選大約2重量%以下，更優(yōu)選大約1重量％以下，甚至更優(yōu)選大約0.5重量％以下，或甚至更優(yōu)選大約0.25重量％以下。能夠通過簡單地采用受調(diào)節(jié)的酶量和發(fā)酵生物量來實現(xiàn)這種低糖水平。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠簡單地決定所使用的酶量和發(fā)酵生物的量。還可以選擇使用的酶量和發(fā)酵生物的量來保持發(fā)酵液中麥芽糖的低濃度。例如，可以將麥芽糖水平保持在大約0.5重量％以下或大約0.2重量％以下。本發(fā)明的方法可以在pH3-7進(jìn)行，優(yōu)選在pH3-6，或更優(yōu)選pH3.5-5.0。含淀粉材料基于期望的發(fā)酵產(chǎn)物來選擇起始材料。適合于在本發(fā)明的方法中使用的含淀粉起始材料的實例包括塊莖、根、莖、整谷粒、玉米、穗軸、小麥、大麥、黑麥、西米(sago)、木薯(cassava)、木薯淀粉(tapioca)、高粱(sorgh蘭)、稻、豌豆、豆類(bean)、甘薯(sweetpotato)或它們的混合物，或谷物，含糖原料，例如糖蜜、水果材料、甘蔗或甜菜，馬鈴薯和含纖維素材料，例如木材和植物殘余物。玉米和大麥的蠟質(zhì)和非蠟質(zhì)兩種類型均是期望的。術(shù)語"粒狀淀粉"的意思是生的未經(jīng)烹煮的淀粉，即，以其天然形式存在于谷物、塊莖或谷粒中的淀粉。淀粉在植物細(xì)胞中形成不溶于水的微小顆粒。當(dāng)置于冷水中時，淀粉顆?？梢晕招×康囊后w并且膨脹。在高至50。C至75。C的溫度，膨脹可以是可逆的。然而，在較高的溫度則開始稱為"糊化"的不可逆膨脹。待加工的粒狀淀粉可具有高度精制的淀粉質(zhì)量，優(yōu)選是至少90%、至少95%、至少97%或至少99.5%純的；或者待加工的粒狀淀粉可以是含有更多粗制的淀粉的材料，所述材料包含例如經(jīng)研磨整谷粒，其包括非淀粉級分如胚殘余物和纖維。術(shù)語"初始糊化溫度"的意思是淀粉糊化開始的最低溫度。在水中加熱的淀粉在50。C至75°C之間開始糊化；精確的糊化溫度依賴于具體的淀粉，并且能夠由熟練技術(shù)人員容易地測定。因此，初始糊化溫度可根據(jù)植物的種、植物種的具體變種以及生長條件而改變。在本發(fā)明的上下文中，提供的含淀粉材料的初始糊化溫度是^吏用Gorinstein.S.andLii.C.,Starch/Smrke，Vol.44(12)，pp.461-466(1992)描述的方法時淀粉顆粒損失5。/。雙折射的溫度(thetemperatureatwhichbirefringenceislostin5%ofthestarchgranules)。分級含淀粉材料在實施方式中，將含淀粉植物材料分級成一種或多種成分，包括纖維、胚以及淀粉和蛋白質(zhì)的混合物(胚乳)?？梢允褂萌魏魏线m的技術(shù)和設(shè)備根據(jù)本發(fā)明來進(jìn)行分級。例如，Satake制造了適合于分級植物材料例如玉米的系統(tǒng)?？梢詮呐呷榈氖Ｓ嗖糠址旨壟吆屠w維成分。在本發(fā)明的實施方式中，含淀粉材料是植物胚乳，優(yōu)選玉米胚乳。另外，可將胚乳減小為顆粒大小并且與較大塊的分級的胚和纖維成分組合用于發(fā)酵。例如，可使用美國專利申請no,2004/0043117(作為參考并入本文)中公開的設(shè)備。適合于分級的方法和設(shè)備包括篩、篩分和淘析。合適的設(shè)備還包括摩擦碾磨機(jī)(frictionmill)，例如稻或谷拋光碾磨機(jī)(polishingmill)(例如，由Satake、Kett或Rapsco制造的那些)。減小含淀粉植物材料的顆粒大小可優(yōu)選減小在本發(fā)明的方法中使用的含淀粉植物原料(例如整谷粒)的顆粒大小，從而打開結(jié)構(gòu)并且允許進(jìn)一步的加工。這可以通過研磨來進(jìn)行。才艮據(jù)本發(fā)明優(yōu)選兩種研磨方法濕磨和干磨。在干磨中，研磨并使用完整的谷粒(kemel)。濕磨提供充分分離的胚和粗粉(meal)(淀粉顆粒和蛋白質(zhì))并且通常應(yīng)用于將淀粉水解產(chǎn)物用于糖漿生產(chǎn)的場合。干磨和濕磨均為本領(lǐng)域公知的淀粉加工，并且對于本發(fā)明的方法而言將干磨和濕磨等同地考慮。其它預(yù)期用于減小含淀粉植物材料顆粒大小的技術(shù)的實例包括乳化技術(shù)和回旋脈動(rotarypulsation)?？梢詫⒑矸鄄牧系念w粒大小減小至0.05至3.0mm，或減小至使至少30%，優(yōu)選至少50%，更優(yōu)選至少70%，甚至更優(yōu)選至少90%的含淀粉材料恰好通過0.05至3.0mm篩網(wǎng)(screen)的篩，優(yōu)選0.1-0.5mm篩網(wǎng)的篩。發(fā)酵產(chǎn)物術(shù)語"發(fā)酵產(chǎn)物"的意思是通過包括使用發(fā)酵生物的發(fā)酵步驟的方法產(chǎn)生的產(chǎn)物。根據(jù)本發(fā)明期望的發(fā)酵產(chǎn)物包括醇(例如，乙醇、曱醇、丁醇)；有機(jī)酸(例如，檸檬酸、乙酸、衣康酸、乳酸、葡糖酸)；酮(例如，丙酮)；氨基酸(例如，谷氨酸)；氣體(例如，H2和C02);抗生素(例如，青霉素和四環(huán)素)；酶；維生素(例如，核黃素、B,2、P-胡蘿卜素)；和激素。在優(yōu)選的實施方式中，發(fā)酵產(chǎn)物是乙醇，例如燃料乙醇；飲用乙醇，即，可飲用的中性酒精(potableneutralspirit);或工業(yè)乙醇或在以下工業(yè)中4吏用的產(chǎn)物可消費(fèi)的醇工業(yè)(例如，啤酒和葡萄酒)、乳制品工業(yè)(例如，發(fā)酵乳制品)、皮革工業(yè)和煙草工業(yè)。優(yōu)選的啤酒類型包括愛兒啤酒(ale)、烈性黑啤酒(stout)、缽爾透黑啤酒(porter)、陳貯啤酒(lager)、苦味酒(bitter)、麥芽酒(maltliquor)、低麥芽啤酒(happoushu)、高醇啤酒(high-alcoholbeer)、低醇啤酒(low-alcoholbeer)、低熱量啤酒(low-caloriebeer)或清淡啤酒(lightbeer)。使用的優(yōu)選發(fā)酵方法包括醇發(fā)酵方法，如本領(lǐng)域公知的。優(yōu)選的發(fā)酵方法是厭氧發(fā)酵方法，如本領(lǐng)域公知的。發(fā)酵生物"發(fā)酵生物"指適合用于發(fā)酵方法并且能夠產(chǎn)生期望的發(fā)酵產(chǎn)物的任何生物，包括細(xì)菌和真菌生物。特別合適的發(fā)酵生物能夠發(fā)酵，即，將糖例如葡萄糖或麥芽糖直接或間接地轉(zhuǎn)化成期望的發(fā)酵產(chǎn)物。發(fā)酵生物的實例包括真菌生物，例如酵母。優(yōu)選的酵母包括酵母屬的菌種OSbcc/wramj;c^spp.)，具體地是釀酒酵母(&7cc/wrawycMcereWw'ae)。商業(yè)上能夠獲得的酵母包括，(可從BumsPhilpFoodInc.,USA的分^i^司Fleischmann，sYeast獲得)、SUPERSTART(可從Alltech獲得)、GERTSTRAND(可從GertStrandAB，Sweden獲得)和FERMIOL(可從DSMSpecialties獲得)。酶a-葡糖苷酶根據(jù)本發(fā)明，可以根據(jù)本發(fā)明使用任何a-葡糖苷酶(包括分類為EC3.2丄20或EC3.2丄48的酶)。根據(jù)本發(fā)明期望的a-葡糖苷酶的實例包括源自微生物和植物的那些，所述微生物例如細(xì)菌和真菌，包括酵母和絲狀真菌，放線菌類(Actinomycetes)。在實施方式中，a-葡糖苷酶是酸性a-葡糖苷酶。這表示最適pH是7.0以下，優(yōu)選在pH3-7之間。在優(yōu)選的實施方式中，a-葡糖苷酶在所述發(fā)酵產(chǎn)物以濃度10體積°/。以下，優(yōu)選12體積％以下，更優(yōu)選15體積％以下，更優(yōu)選18體積％以下，更優(yōu)選20體積％以下，更優(yōu)選25體積。/。以下發(fā)酵產(chǎn)物存在時是穩(wěn)、定的。在具體的實施方式中，a-葡糖苷酶在乙醇存在下穩(wěn)定，優(yōu)選濃度為10體積％以下，優(yōu)選12體積％，更優(yōu)選15體積o/。以下，更優(yōu)選18體積％以下，甚至更優(yōu)選20體積％以下，甚至更優(yōu)選25體積％以下乙醇。可以將乙醇穩(wěn)定性作為在實施例6中描述的條件下的乙醇穩(wěn)定性來測定。這意味著在30-40°C，優(yōu)選在大約37。C溫育IO分鐘之后，優(yōu)選30分鐘之后，更優(yōu)選60分鐘之后，相對活性是50%以上，優(yōu)選70%以上，更優(yōu)選90%以上。細(xì)菌a-葡糖苦酶包括源自芽孢桿菌屬菌抹的那些，例如源自嗜熱脂肪芽孢桿菌的菌抹。商業(yè)嗜熱脂肪芽孢桿菌a-葡糖苷酶可以從Sigma獲得(Sigmacat.No,G3651)。真菌a-葡糖苦酶包括源自酵母或絲狀真菌的那些。源自酵母的a-葡糖苷酶的實例包括源自念珠菌屬菌種(Ca"A^sp)菌抹的那些，例如源自Caw^fee&x，優(yōu)選CBD6451;或源自酵母屬菌林的那些，優(yōu)選源自釀酒酵母。源自酵母的其它a-葡糖苷酶包括源自畢赤酵母屬菌種(尸/c/n'asp.)的那些，例如源自尸/c/7/aam_y/op/z//a、尸/c/z/aw^s/wjw.eww^、威克畢赤酵母CP/c/z/aiW/zer/zaw")和羅丹畢赤酵母CP/c/n'ar/7ct/awem7'力。源自絲狀真菌的a-葡糖苷酶包括源自曲霉屬C4^e/^7/itf)、鐮孢屬(Fw5an'wm)、毛霉屬(Mwco。和青霉屬CPem'c/〃z'Mm)的那些。源自曲霉屬菌抹的a-葡糖香酶的實例包括源自以下菌種的那些構(gòu)巢曲霉(y^erg亂s1m'c/w/am')(Katoetal.，2002,Appl.EnvironMicrobiol.68:1250-1256)、煙曲霉(J^e,^7/ws/wm;'gafMs)(RudickandElbein，1974,ArchivesofBiochemistryandBiophysics161:281-290)、黃曲霉(A/erg7'〃wsy/avw力(Olutiola,1981,Mycologia73:1130)、構(gòu)巢曲霉(Katoetal.，2002，Appl.Environ.Microbiol.68:1250-1256)、黑曲霉(y^/e/^/〃w(Rudicketal.，1979，ArchivesofBiochemistryandBiophysics193:509和Nakamuraet.al.，1997,J.Biotechnol53:75-84)、米曲霉(/^/w'腸(Minetokietal.，1995，Biosci.Biotech.Biochem59:1516-1521;LeibowitzandMechlinski,1926,Hoppe-Seyler，sZeitschriftffirPhysiologischeChemie154:64)和煙曲霉(美國公開no.2006/0008879)。已知的a-葡糖苷酶還包括源自以下菌種菌抹的那些根瘤菌屬菌種(腸'zo6/,sp.)(Berthelotetal.,1999，Appl.EnvironMicrobiol.65:2907-2911)、爪哇毛霉(Mucor,w'CM(Yamasakietal"1978,BerichtedesOharaInstitutsf(irLandwirtschaftlicheBiologie17:123)、總狀毛霉(A/wcwraceway—(Yamasakietal.,1977,AgriculturalandBiologicalChemistry41:1553)、J》氏毛審(Mwco廠rota")(Flores-CarreonandRuiz-Herrera,1972,BiochemicaetBiophysicaActa258:496)、產(chǎn)^^青霉^Pew'cz'〃〖w附/M/wroge"wm)(Yamasakietal.，1976，AgriculturalandBiologicalChemistry40:669)和草酸青莓(Pem.d〃/wwoxfl/Zcw附)(Yamasakietal"1977，AgriculturalandBiologicalChemistry41:1451)以及鑲片鐮孑包(F"s"WMWvenenatum)(美國乂〉開no.2006/0156437)。在優(yōu)選的實施方式中，真菌a-葡糖苷酶源自曲霉屬菌株，包括構(gòu)巢曲霉、黑曲霉、米曲霉和煙曲霉。在優(yōu)選的實施方式中，a-葡糖苷酶是植物a-葡糖苷酶。植物a-葡糖苷酶可以源自任何植物材料，優(yōu)選為選自玉米(玉蜀黍(maize))、穂軸、小麥、大麥、黑麥、買羅高粱(milo)、西米、木薯、木薯淀粉、高粱、稻、豌豆或豆類、甘薯或它們的混合物。在優(yōu)選的實施方式中，a-葡糖苷酶源自玉米。當(dāng)使用術(shù)語"內(nèi)源(植物)a-葡糖苷酶"時，它的意思是由所述植物例如玉米天然產(chǎn)生的a-葡糖苷酶。根據(jù)本發(fā)明應(yīng)該理解可以使用本領(lǐng)域公知的4支術(shù)從所述植物克隆植物a-葡糖苷酶并且在合適的宿主細(xì)胞中重組表達(dá)。或者可以在用于本發(fā)明的方法之前，從所述植物純化植物a-葡糖苷酶。在下文的實施例1和2中描述內(nèi)源玉米a-葡糖苷酶的純化。另外，根據(jù)本發(fā)明還期望通過修飾天然植物來增加在本發(fā)明的方法中的a-葡糖苷酶活性。這可以通過制備轉(zhuǎn)基因植物來進(jìn)行，所述轉(zhuǎn)基因植物表達(dá)a-葡糖苷酶的量增加。制備能夠表達(dá)增加量的a-葡糖苷酶的轉(zhuǎn)基因植物能夠使用本領(lǐng)域熟知的方法由本領(lǐng)域技術(shù)人員來實現(xiàn)。ot-葡糖苷酶編碼基因可以是任何a-葡糖苷酶編碼基因，優(yōu)選植物來源，特別是玉米來源。然而，還期望的是細(xì)菌和真菌來源的a-葡糖芬酶基因。合適的實例在本部分中公開。還期望的是與任何上述a-葡糖苷酶顯示高同一性的a-葡糖苷酶，即與成熟酶序列顯示多于70%、多于75%、多于80%、多于85%多于90%、多于95%、多于96%、多于97%、多于98%、多于99%或甚至100%同一性。根據(jù)本發(fā)明，添加0.01-10AGU/gDS的a-葡糖苷酶活性。在優(yōu)選的實施方式中，在糖化或同時糖化和發(fā)酵(即，步驟(a))期間存在比含淀粉植物材料中存在的天然量多0.1-8AGU/gDS,優(yōu)選l-6AGU/gDS的植物a-葡糖苷酶活性。根據(jù)本發(fā)明，存在的植物a-葡糖苷酶活性的總量，即內(nèi)源植物ct-葡糖苷酶活性和添加的植物a-葡糖苦酶活性可為1以上或2以上至12AGU/gDS，例如3-10AGU/gDS，優(yōu)選4-8AGU/gDS。在轉(zhuǎn)基因植物中表達(dá)a-葡糖苷酶如上所述，可以通過制備a-葡糖苷酶表達(dá)量增加的轉(zhuǎn)基因組植物，使本發(fā)明方法中的a-葡糖芬酶的量增加至特定的量。還應(yīng)該理解的是還可以向本發(fā)明的方法提供其它酶活性，包括淀粉降解酶活性，例如葡糖淀粉酶和/或a-淀粉酶活性，其通過修飾植物材料以表達(dá)所述酶活性來提供。可以使用熟知的技術(shù)，例如如下所述，將編碼酶例如a-葡糖苷酶的DNA序列轉(zhuǎn)化并且在轉(zhuǎn)基因植物中表達(dá)。對于所述植物，特別是玉米，所述酶(優(yōu)選為a-葡糖苷酶)可以是異源或同源的。"含淀粉材料"部分，包括谷物，例如小麥、燕麥、黑麥、大麥、稻、高粱，并且特別是玉蜀黍(玉米)。優(yōu)選ot-葡糖苷酶至少在種子中表達(dá)，優(yōu)選在玉米粒(comkemel)中表達(dá)，例如在胚(embryo)、胚乳、糊粉和/或種皮中表達(dá)。在本發(fā)明方法中使用的表達(dá)a-葡糖苷酶的轉(zhuǎn)基因植物或植物細(xì)胞可以根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法構(gòu)建。簡言之如下構(gòu)建所述植物或植物細(xì)胞通過將一個或多個編碼ot-葡糖苷酶的表達(dá)構(gòu)建體并入植物宿主基因組，并且使產(chǎn)生的修飾的植物或植物細(xì)胞增殖成轉(zhuǎn)基因植物或植物細(xì)胞。方便地，表達(dá)構(gòu)建體是DNA構(gòu)建體，其包含編碼所述酶(優(yōu)選a-葡糖苷酶)的基因，所述基因與在植物中表達(dá)該基因所需的合適的調(diào)節(jié)序列可操作地連接。另外，表達(dá)構(gòu)建體可以包含用于鑒定整合了表達(dá)構(gòu)建體的宿主細(xì)胞的選擇性標(biāo)記，和對于將構(gòu)建體引入所述植物中所必需的DNA序列(后者依賴于使用的DNA引入方法)。調(diào)節(jié)序列的選擇基于例如期望在何時、何處以及如何表達(dá)所述酶來決定，所述調(diào)節(jié)序列例如啟動子和終止子序列，以及任選地信號或轉(zhuǎn)運(yùn)序列。例如，編碼a-葡糖苷酶的基因的表達(dá)可以是組成型或誘導(dǎo)型，或可以是發(fā)育、階段或組織特異性的，并且基因產(chǎn)物可以靶向特定細(xì)胞區(qū)室、組織或植物部分，如由Tagueetal.,1988,Plant,Phys.，86:506描述。就組成型表達(dá)而言，可以使用35S-CaMV、玉米泛素1和稻月幾動蛋白1啟動子(Francketal.,1980,Cell21:285-294,ChristensenAH,SharrockRAandQuail1992.Maizepolyubiquitingenes:structure,thermalperturbationofexpressionandtranscriptsplicing,andpromoteractivityfollowingtransfertoprotoplastsbyelectroporation.PlantMo.Biol.18，675-689.;Zhang^W，McElroyD,andWuR1991,AnalysisofriceActl5，regionactivityintransgenicriceplants.PlantCell3,1155-1165)。器官特異性啟動子可以是例如，來自貯存庫組織(storagesinktissue)如種子、馬鈴薯塊莖和果實的啟動子(Edwards&Comzzi,1990,AmmRev.Genet.24:275-303)，或來自代謝庫組織(metabolicsinktissue)如分生組織的啟動子(Itoetal.,1994，PlantMol.Biol.24:863-878)，種子特異性啟動子，如來自稻的谷蛋白、醇溶谷蛋白、球蛋白或白蛋白啟動子(Wuetal.,PlantandCellPhysiologyVol.39,No.8pp.885-889(1998》，來自豆球蛋白B4的蠶豆(Viciafaba)啟動子和來自Co歸dU.etal，JournalofPlantPhysiologyVol.152，No.6pp.708-711(1998)描述的蠶豆的未知種子蛋白基因，來自油籽體蛋白(seedoilbodyprotein)的啟動子(Chenetal.，Plantandcellphysiologyvol.39,No.9pp.935-941(1998),來自歐洲油菜(Brassicanapus)的貯存蛋白napA啟動子，或本領(lǐng)域已知的任何其它種子特異性啟動子，例如如WO91/14772中所描述的。此外，啟動子也可以是葉特異性啟動子，例如來自稻或番茄的rbcs啟動子(Kyozukaetal,,PlantPhysiologyVol.102，No.3pp.991-1000(1993)，小球藻病毒腺嘌呤曱基轉(zhuǎn)移酶基因啟動子(Mitra,A.andHiggins,DW，PlantMolecularBiologyVol.26,No.1pp.85-93(1994)，或來自稻的aldP基因啟動子(Kagayaetal"MolecularandGeneralGeneticsVol.248,No.6pp.668-674(1995),或傷口誘導(dǎo)啟動子如馬鈴薯pin2啟動子(Xuetal,PlantMolecularBiologyVol.22,No.4pp.573-588(1993)。同樣，啟動子可通過非生物處理例如溫度、干旱或鹽度改變來誘導(dǎo)，或由激活啟動子的外源施加的物質(zhì)，例如乙醇、雌激素、植物激素如乙烯、脫落酸和赤霉酸以及重金屬所誘導(dǎo)。在植物中可以使用啟動子增強(qiáng)元件來取得酶的較高表達(dá)。例如，啟動子增強(qiáng)元件可以是位于啟動子和編碼酶的核苷酸序列之間的內(nèi)含子。例如，Xu等人(PlantMolecularBiology,Vol.22，No.4,pp.573-588(1993))公開使用稻肌動蛋白1基因的第一內(nèi)含子來增強(qiáng)表達(dá)。選擇標(biāo)記基因和表達(dá)構(gòu)建體的任何其它部分可通過本領(lǐng)域可用的那些來選擇。根據(jù)本領(lǐng)域已知的常規(guī)技術(shù)將DNA構(gòu)建體并入植物基因組，所述常規(guī)技術(shù)包括農(nóng)桿菌(Jgra6acfen'Mw)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化、病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化、微注射(microinjection),粒子轟擊、生物射彈轉(zhuǎn)化(biolistictransformation)和電穿孑L(Gasseretal"Science,244:1293;Potrykus,Bio/Techn.8:535(1990);Shimamotoetal.,Nature,338:274(1989))。目前，沖艮癌農(nóng)桿菌(Jgra/)a"en'i/w加we/ac/era)介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移是用于產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因雙子葉植物的優(yōu)選方法(參見綜述Hooykas&Schilperoort，1992.PlantMol.Biol.19:15-38)，并且也能用于轉(zhuǎn)化單子葉^i物，盡管對這些才直物通常使用其它轉(zhuǎn)化方法。目前，用于產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因單子葉植物的優(yōu)選方法除了農(nóng)桿菌法以外，還有胚愈傷組織或發(fā)育中的胚的粒子轟擊(用轉(zhuǎn)化DNA涂覆的精細(xì)金(microscopicgold)或鎢顆粒)(Christou,1992.PlantJ.2:275-281;Shimamoto,1994.Curr.Opin.Biotechnol.5:158-162;Vasiletal.,1992.Bio/Technology10:667-674)。轉(zhuǎn)化單子葉植物的可選方法基于原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化，如OmirullehS，etal.，PlantMolecularbiologyVol,21，No.3pp.415-428(1993)所述。轉(zhuǎn)化后，根據(jù)本領(lǐng)域熟知方法選擇并入了表達(dá)構(gòu)建體的轉(zhuǎn)化體并將其再生成全植抹。通常將轉(zhuǎn)化方法設(shè)計成通過使用例如兩種獨(dú)立T-DNA構(gòu)建體的共轉(zhuǎn)化或使用特異性重組酶位點特異性切除選擇基因，在再生期間或在后代中選擇性地消除選擇基因。a-淀粉酶根據(jù)本發(fā)明，可以將a-淀粉酶與a-葡糖苷酶組合使用。在糖化和/或發(fā)酵期間a-淀粉酶以有效量存在，其包括0.01-3FAU-F/gDS,優(yōu)選0.05-0.2FAU-F/gDS。在優(yōu)選實施方式中，a-淀粉酶是酸性a-淀粉酶，例如，真菌酸性a-淀粉酶或細(xì)菌酸性a-淀粉酶。術(shù)語"酸性a-淀粉酶"的意思是以有效量添加的a-淀粉酶(E.C.3.2丄l)在pH3-7,優(yōu)選在pH3.5-6，或更優(yōu)選在pH4-5具有最優(yōu)活性。細(xì)菌(X-淀粉酶根據(jù)本發(fā)明，細(xì)菌a-淀粉酶優(yōu)選源自芽孢桿菌屬。在優(yōu)選的實施方式中，芽孢桿菌屬a-淀粉酶源自地衣芽孢桿菌CB.//c/7emybrm/》、角罕;定4分芽孑包才干菌(5.am少/o/z々we^7c/era)、才古草芽孑包牙干菌(及st/6/^7/力或嗜熱脂肪芽孢桿菌，但是也可源自其它芽孢桿菌屬菌種。期望的a-淀粉酶的特定實例包括WO99/19467中SEQIDNO:4所示的地衣芽孢桿菌a-淀粉酶，WO99/19467中SEQIDNO:5所示的解淀粉芽孢桿菌a-淀粉酶和WO99/19467中SEQIDNO:3所示的嗜熱脂肪芽孢桿菌a-淀粉酶(將全部序列作為參考并入本文)。在本發(fā)明的實施方式中，a-淀粉酶可以是與WO99/19467中SEQIDNOS:1、2或3所示序列中任一分別具有至少60%,優(yōu)選至少70%,更優(yōu)選至少80%,甚至更優(yōu)選至少卯％,例如至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%同一性程度的酶。芽孢桿菌屬a-淀粉酶還可以是變體和/或雜合體，特別是WO96/23873、WO96/23874、WO97/41213、WO99/19467、WO00/60059和WO02/10355的任一中所述的芽孢桿菌屬a-淀粉酶(將全部文件作為參考并入本文)。特別期望的a-淀粉酶變體在美國專利no.6,093,562、6,297,038和6,187,576(作為參考并入本文)中公開，并且包括嗜熱脂肪芽孢桿菌a-淀粉酶(BSGa-淀粉酶)變體，其在位置R179至G182中缺失一個或兩個氨基酸，優(yōu)選是WO1996/023873中公開的雙缺失——參見例如第20頁第l-10行(作為參考并入本文)，優(yōu)選與WO99/19467中公開的SEQIDNO:3中所述野生型BSGa-淀粉酶氨基酸序列相比相應(yīng)于delta(181-182)或使用WO99/19467中SEQIDNO:3進(jìn)行編號時缺失氨基酸R179和G180(將該參考文件作為參考并入本文)。甚至更優(yōu)選的是芽孢桿菌屬a-淀粉酶，特別是嗜熱脂肪芽孢桿菌a-淀粉酶，其相較于WO99/19467中公開的SEQIDNO:3中所述野生型BSGa-淀粉酶氨基酸序列具有相應(yīng)于delta(181-182)的雙缺失，并且進(jìn)一步包含N193F取代(也表示為1181*+G182*十N193F)。細(xì)菌雜合a-淀粉酶特別期望的雜合a-淀粉酶包含地衣芽孢桿菌a-淀粉酶(WO99/19467的SEQIDNO:4中所示)的445個C-末端氨基酸殘基和源自解淀粉芽孢桿菌(WO99/19467的SEQIDNO:5中所示)的a-淀粉酶的37個N-末端氨基酸殘基，并且具有以下取代中的一個或多個，優(yōu)選具有全部G48A+T49I+G107A+H156Y+A181T+N190F+I201F+A209V+Q264S(使用WO99/19467的SEQIDNO:4中的地衣芽孢桿菌編號)。還優(yōu)選的是具有一個或多個下述突變(或其它芽孢桿菌屬a-淀粉酶主鏈中的相應(yīng)突變)的變體H154Y、A181T、N1卯F、A209V和Q264S，和/或在位置176和179之間缺失兩個殘基，優(yōu)選缺失E178和G179(使用WO99/19467的SEQIDNO:5編號)。真菌a-淀粉酶真菌a-淀粉酶包括源自曲霉屬菌抹的a-淀粉酶，例如米曲霉、黑曲霉和川i也曲霉0^pe/^77tofewac/H7)a"定4分酶。優(yōu)選的酸性真菌a-淀粉酶是源自米曲霉菌抹的Fungamyl-樣a-淀粉酶。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語"Fungamyl-樣a-淀粉酶"指與WO96/23874中SEQIDNO:10所示氨基酸序列的成熟部分顯示高同一性的a-淀粉酶，即多于70%、多于75%、多于80%、多于85%多于90%、多于95%、多于96%、多于97%、多于98%、多于99%或甚至100%同一性的a-淀粉酶。另外的優(yōu)選的酸性a-淀粉酶源自黑曲霉菌抹。在優(yōu)選的實施方式中，酸性真菌a-淀粉酶是來自黑曲霉的a-淀粉酶，其作為"AMYA—ASPNG"以初始登錄號P56271公開于Swiss-prot/TeEMBL數(shù)據(jù)庫，并且在WO89/01969(實施例3)中描述。商業(yè)上能夠獲得的源自黑曲霉的酸性真菌a-淀粉酶是SP288(可從N()vozymesA/S,Denmark獲得)。其它期望的野生型a-淀粉酶包括源自根毛霉屬CR/7/z0mMc0r)和多孔菌屬(iVfen;p//ws)菌抹的那些，優(yōu)選源自微小根毛霉(W/n'zomwcor戸s〃/ks)(WO2004/055178，作為參考并入)或巨多孑L菌(Men》//jg/g，tew勻菌抹。在優(yōu)選的實施方式中，a-淀粉酶源自川地曲霉，并且由Kanekoetal.,J.Ferment.Bioeng.81:292-298(1996)"Molecular-cloninganddeterminationofthenucleotide-sequenceofageneencodinganacid-stablea-amylasefrom/^/erg7'〃wskwac^'"公開；且進(jìn)一步作為EMBL'JAB008370公開。真菌a-淀粉酶還可以是包含淀粉結(jié)合域(SBD)和a-淀粉酶催化域的野生型酶(即，非雜合體(none-hybrid))或其變體。在實施方式中，野生型a-淀粉酶源自川地曲霉菌抹的菌抹。真菌雜合Ot-淀粉酶最優(yōu)選的實施方式中，真菌酸性a-淀粉酶是雜合a-淀粉酶。真菌雜合a-淀粉酶的優(yōu)選實例包括WO2005/003311或美國專利公開no.2005/0054071(Novozymes)或美國專利申請no.60/638,614(Novozymes)中披露的a-淀粉酶，其作為參考并入本文。雜合a-淀粉酶可以包含a-淀粉酶催化域(CD)和糖結(jié)合域/模塊(CBM)，例如淀粉結(jié)合域，和任選的接頭。預(yù)期的雜合a-淀粉酶的具體實例包括共同未決的(co-pending)美國專利申請no.60/638,614中實施例的表1至5中公開的那些，包括具有催化域JA118和A/ze/Zara//WSBD的Fungamyl變體(本文的SEQIDNO:2和US60/638,614中的SEQIDNO:100)，具有AMG接頭和SBD的微小根毛霉a-淀粉酶(本文的SEQIDNO:3和US60/638,614的SEQIDNO:lOl)，具有黑曲霉葡糖淀粉酶接頭和SBD的微小根毛霉a-淀粉酶(其公開于美國申請no.11/316,535中的表5作為氨基酸序列SEQIDNO:20SEQIDN():72和SEQIDNO:96的組合，并且進(jìn)一步作為本文的SEQIDNO:13)或如WO2006/069290中表5中的V039,和帶有A/7e//ara訴//葡糖淀粉酶接頭和SBD的巨多孔菌a-淀粉酶(本文的SEQIDNO:4和US60/638,614中的SEQIDN():102)。其它特別預(yù)期的雜合a-淀粉酶是美國申請no.11/316,535或WO2006/069290(作為參考并入本文)的實施例4中的表3、4、5和6中所列的任何一種。預(yù)期的雜合a-淀粉酶的其它具體實例包括美國專利公開no.2005/0054071中公開的那些，包括第15頁表3中公開的那些，例如具有川地曲霉接頭和淀粉結(jié)合域的黑曲霉a-淀粉酶。還預(yù)期的是與上述a-淀粉酶中任一顯示高同一性的a-淀粉酶，即，與成熟酶序列顯示多于70%、多于75%、多于80%、多于85°/。多于90%、多于95%、多于96%、多于97%、多于98%、多于99%或甚至100%同一性。商業(yè)a-淀粉酶產(chǎn)品優(yōu)選的包含a-淀粉酶的商業(yè)組合物包括來自DSM的MYCOLASE(GistBrocades),BANTM、TERMAMYLSC、FUNGAMYLTM、LIQUOZYMETMX和SANSUPER、SANTMEXTRAL(NovozymesA/S)，以及CLARASE丁mL-40，000、DEX-LO頂、SPEZYMEFRED、SPEZYMEAA和SPEZYME2DELTAAA(GenencorInt.)，和以商品名SP288出售的酸性真菌a-淀粉酶(可從NovozymesA/S,Denmark獲得)。葡糖淀粉酶根據(jù)本發(fā)明可以使用源自任何合適來源的葡糖淀粉酶，例如，源自微生物或植物的葡糖淀粉酶。優(yōu)選的葡糖淀粉酶是真菌或細(xì)菌來源，其選自下組曲霉屬葡糖淀粉酶，具體為黑曲霉Gl或G2葡糖淀粉酶(Boeletal.(1984),EMBOJ.3(5),p.1097-1102)，或其變體，例如WO92/00381、WO00/04136和WO01/04273(來自Novozymes，Denmark)中公開的那些；WO84/02921中公開的泡盛曲霉(Aawamw7')葡糖淀粉酶，米曲霉葡糖淀粉酶(Agric.Biol.Chcm.,1991,55(4):941-949)，或它們的變體或片段。其它曲霉屬葡糖淀粉酶變體包括具有增強(qiáng)的熱穩(wěn)定性的變體G137A和G139A(Chenetal.，1996,Prot.Eng.9:499-505);D257E和D293E/Q(Chenetal.(1995)，Prot.Eng.8,575-582);Nl82(Chenetal.(1994)，Biochem.J.301:275-281);二硫鍵，A246C(Fierobeetal.，1996，Biochemistry,35:8698-8704;和在位置A435和S436引入Pro殘基(Lietal.,1997,ProteinEng.10:1199-1204。其它葡糖淀粉酶包括A/7e//ara訴//(先前表示為羅耳伏革菌(Cw^c&mra/加7》葡糖淀粉酶(參見美國專利No.4,727,026和(Nagasaka,Y.etal"1998,"Purificationandpropertiesoftheraw-starch-degradingglucoamylasesfromCoWc'/wmra/yj",ApplMicrobiolBiotechnol50:323-330);3果節(jié)菌屬(7^/arawyce力葡糖淀粉酶，具體為源自r"/"ram_ycweweraow7(WO99/28448)、7^/ara附y(tǒng)c"/e戸加?。?美國專利no.Re.32,153)、r"/aram戸st/wpcw/1/、嗜熱踝節(jié)菌(7^/arc>7"_ycey^e廠m6^/z〃M力(美國專矛jno.4,587,215)。預(yù)期的細(xì)菌葡糖淀粉酶包括來自梭菌屬(genusC/o欲誠wm)的葡糖淀粉酶，具體為來自C.〃犯mw"/，/o/,'cww(EP135,138)和熱硫化氫梭菌(CZ/zemo/7;^ra//wn'cMm)(WO86/01831)的葡糖淀粉酶，和來自瓣環(huán)栓菌(rrametoc/wgi/^to)的葡糖淀粉酶，其公開于2005年2月7日^是交的共同未決的美國臨時申請no.60/650,612或共同未決的國際申請no.PCT/US05/46724(作為WO2006/069289公開)，并披露于本文的SEQIDNO:5(將上述文件作為參考并入本文)。根據(jù)本發(fā)明還預(yù)期的是雜合葡糖淀粉酶。實例包括WO2005/045018中公開的雜合葡糖淀粉酶。具體實例包括實施例1的表1和4中公開的雜合葡糖淀粉酶(將所述雜合體作為參考并入本文)。還預(yù)期的是與上述葡糖淀粉酶中任一顯示高同一性的葡糖淀粉酶，即，與成熟酶序列顯示多于70%、多于75%、多于80%、多于85%多于卯％、多于95%、多于96%、多于97%、多于98%、多于99%或甚至100%同一性。商業(yè)上能夠獲得的包含葡糖淀粉酶的組合物包括MG200L;AMG300L;SANTMSUPER、SANTMEXTRAL、SPIRIZYMEPLUS、SPIRIZYMETMFUEL、SPIRIZYMEB4U和AMGTME(來自NovozymesA/S);OPTIDEXTM300(來自GenencorInt.);AMIGASE丁m和AMIGASEPLUS(來自DSM);G-ZYMETMG900、G-ZYME丁m和G990ZR(來自GenencorInt.)。在實施方式中，可以將葡糖淀粉酶以0.02-20AGU/gDS的量添加，優(yōu)選以0.1-10AGU/gDS,特別是以1-5AGU/gDS,例如以0.5AGU/gDS的量添力口。蛋白酶在本發(fā)明的實施方式中，在糖化和/或發(fā)酵期間可以存在蛋白酶。在優(yōu)選的實施方式中，蛋白酶是微生物來源的酸性蛋白酶，優(yōu)選真菌或纟田菌來源。合適的蛋白酶包括微生物蛋白酶，例如真菌和細(xì)菌蛋白酶。優(yōu)選的蛋白酶是酸性蛋白酶，即，該蛋白酶的特征在于在pH7以下的酸性條件下水解蛋白質(zhì)的能力。預(yù)期的酸性真菌蛋白酶包括源自如下的真菌蛋白酶曲霉屬、毛霉屬、根霉屬(7/z/加;my)、念珠菌屬、革蓋菌屬(Cbr/o/w》、內(nèi)座殼屬(￡"^^/^)、蟲霉屬(^^/zowop/7Zra)、耙菌屬(/rpex)、青霉屬、小核菌屬(5b/eraft'ww)和球擬酵母屬(rorw/o戸Z力。特別預(yù)期的是源自如下的蛋白酶黑曲霉(參見，例如，Koazeetal"1964,Agr.Biol.Chem.Japan,28:216)，齋藤曲霉(卻一腸儲'to/)(參見，例如，Yoshida,1954,J.Agr.Chem.Soc.Japan,28:66)，泡盛曲霉(Hayashidaetal"1977，Agric.Biol.Chem.,42(5):927-933，棘孢曲霉(Ape廠g/〃wacw/ea^"(WO95/02044)，或米曲霉，例如蛋白酶pepA;和源自微小毛霉(Afwcw"/ww7/M力或米黑毛霉(Mwor/wW/e/)的酸性蛋白酶。還預(yù)期的是中性或堿性蛋白酶，例如源自芽孢桿菌屬菌林的蛋白酶。對2于本發(fā)明預(yù)期的具體蛋白酶源自解淀粉芽孢桿菌并且具有在Swissprot可以作為登錄號P06832獲得的序列。還預(yù)期的是與在Swissprot可以作為登錄號P06832獲得的氨基酸序列具有至少90%同一性的蛋白酶，例如具有至少92%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98。/。或者特別是至少99%同一性的蛋白酶。'進(jìn)一步預(yù)期的是與WO2003/048353中SEQ.ID.NO:1公開的氨基酸序列具有至少90%同一性的蛋白酶，例如具有至少92%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或者特別是至少99%同一性的蛋白酶。還預(yù)期的是木瓜蛋白酶樣蛋白酶(papain-likeprotease),例如E.C.3.4.22.*之內(nèi)的蛋白酶(半胱氨酸蛋白酶)，例如C3.4.22.2(木瓜蛋白酶)、EC3.4.22.6(木瓜凝乳蛋白酶)、EC3.4.22.7(蘿摩蛋白酶)、EC3.4.22.14(actinidain)、EC3.4.22.15(組織蛋白酶L)、EC3.4.22.25(甘氨酰內(nèi)肽酶)和EC3.4.22.30(caricain)?？梢詫⒌鞍酌敢?.1-1000AU/kgdm，優(yōu)選1-100AU/kgDS，并且最優(yōu)選5-25AU/kgDS的量添加。附加成分在糖化和/或發(fā)酵期間可以存在附加成分以增加本發(fā)明方法的效率。例如，營養(yǎng)物(例如，發(fā)酵生物微量營養(yǎng)物)，抗生素，鹽(例如，鋅或鎂鹽)，其它酶例如肌醇六磷酸酶、支鏈淀粉酶、蛋白酶、p-淀粉酶、纖維素酶、葡糖淀粉酶和半纖維素酶，或它們的混合物?；厥瞻l(fā)酵產(chǎn)物可以在發(fā)酵之后任選地回收發(fā)酵產(chǎn)物，例如乙醇?？梢酝ㄟ^常規(guī)方法例如蒸餾來進(jìn)行所述回收。產(chǎn)生發(fā)酵產(chǎn)物的方法在進(jìn)一步的方面，本發(fā)明涉及用于從含淀粉材料產(chǎn)生發(fā)酵產(chǎn)物的方法，其包括步驟(a)在a-淀粉酶存在下液化含淀粉材料；(b)在如下酶活性存在下，在20-60。C范圍的溫度糖化步驟(a)中獲得的液i)比所述含淀粉材料中存在的內(nèi)源a-葡糖苦酶的天然量多0.001-50AGU/gDS,優(yōu)選O.Ol-10AGU/gDS的a-葡糖芬酶活性，和任選地ii)從0(零)以上至10FAU-F/gDS的a-淀粉酶活性，(c)使用發(fā)酵生物發(fā)酵。在發(fā)酵之后可以任選地例如通過蒸餾來回收發(fā)酵產(chǎn)物，例如特別是乙醇。合適的含淀粉起始材料列于上文的"含淀粉材料"部分。預(yù)期的含淀粉材料的實例可參見上文的"含淀粉材料，，部分。特別預(yù)期的是玉米(玉蜀黍)、穗軸、小麥、大麥、黑麥、買羅高粱、西米、木薯、木薯淀粉、高粱、稻、豌豆、豆類、甘薯或它們的混合物，優(yōu)選是玉米。在實施方式中，含淀粉材料是植物胚乳，優(yōu)選玉米胚乳。預(yù)期的酶和量列于上文的"酶"部分。發(fā)酵優(yōu)選在酵母存在下進(jìn)行，優(yōu)選在酵母屬菌抹存在下進(jìn)行。合適的發(fā)酵生物列于下文的"發(fā)酵生物"部分。在實施方式中，同時進(jìn)行步驟(b)和(c)(SSF方法)。在具體實施方式中，本發(fā)明的方法在步驟(a)之前進(jìn)一步包括步驟x)減小含淀粉材料的顆粒大小，優(yōu)選通過研磨；y)形成包含含淀粉材料和水的漿。含水漿料可以含有20-55重量％，優(yōu)選25-45重量％，更優(yōu)選30-40重量%或30-45重量％含淀粉材料。將漿料加熱至糊化溫度以上，并且可以添加a-淀粉酶，優(yōu)選細(xì)菌和/或酸性真菌a-淀粉酶來起始液化(沖淡)。在實施方式中，可以噴射蒸煮漿料以在進(jìn)行本發(fā)明步驟(a)的(x-淀粉酶處理之前進(jìn)一步糊化漿料。更具體地液化可以作為三步熱漿法來進(jìn)行。將漿料加熱至60-95。C，優(yōu)選80-85。C，再添加a-淀粉酶以起始液化(沖淡)。其后可以在95-140°C之間的溫度，優(yōu)選105-125。C噴射蒸煮漿料l-15分鐘，優(yōu)選3-10分鐘，特別是大約5分鐘。將漿料冷卻至60-95。C，并且添加更多的a-淀粉酶以完成水解(二次液化)。液化方法通常在pH4.5-6.5進(jìn)行，具體為pH5-6。研磨并且液化的整谷粒稱為醪?？梢栽诒绢I(lǐng)域熟知的條件下進(jìn)行步驟(b)的糖化。完全糖化處理可持續(xù)多至大約24至大約72小時。在同時糖化和發(fā)酵方法(SSF)中的發(fā)酵期間進(jìn)行完全糖化之前，可以在30-65。C的溫度，通常為大約60°C進(jìn)行通常為40-90分鐘的預(yù)糖化。通常在30-65。C的溫度，通常為大約60。C，和pH4-5，通常大約pH4.5來進(jìn)行糖化。在乙醇生產(chǎn)中最廣泛使用的方法是同時糖化和發(fā)酵(SSF)方法，其中不存在糖化的保持步驟，意思是可以將發(fā)酵生物如酵母和酶一起添加。同樣如上文所述，在一個實施方式中可以通過使用修飾的植物材料來提供較高的oc-葡糖苷酶量，所述修飾使經(jīng)修飾植物材料含有與源自未經(jīng)修飾植物的含淀粉植物材料相比較高的a-葡糖苷酶量。在這種情況下，本發(fā)明涉及用于從源自經(jīng)修飾植物的含淀粉材料產(chǎn)生發(fā)酵產(chǎn)物的方法，其包括(a)在a-淀粉酶存在下液化含淀粉材料；(b)在如下酶活性存在下，在初始糊化溫度以下糖化含淀粉材料i)a-葡糖苷酶活性，和任選地ii)從0(零)至10FAU-F/gDS的a-淀粉酶活性，(c)使用發(fā)酵生物發(fā)酵，其中步驟(a)中a-葡糖苷酶的量高于相應(yīng)的未經(jīng)修飾含淀粉植物材料中內(nèi)源a-葡糖苷酶的天然量。在實施方式中，在發(fā)酵之后回收發(fā)酵產(chǎn)物。在優(yōu)選的實施方式中，a-葡糖苷酶活性量比相應(yīng)的未經(jīng)修飾含淀粉材料中內(nèi)源a-葡糖苦酶天然量高0.001-50AGU/gDS,優(yōu)選0.01-10AGU/gDS。經(jīng)修飾含淀粉材料可以源自轉(zhuǎn)基因植物?？梢允褂帽绢I(lǐng)域熟知的技術(shù)來制備轉(zhuǎn)基因植物。實例在上文的"在轉(zhuǎn)基因植物中表達(dá)a-葡糖苷酶"部分中描述。糖苷酶的天然量相比具有較高的內(nèi)源a-葡糖苷酶活性量。根據(jù)本發(fā)明使用的全部酶包括在上文"酶"部分中提到的任何酶。例如，a-葡糖苦酶可以是任何a—葡糖苷酶，優(yōu)選在上文"a-葡糖苷酶"部分中描述的那些，并且以在該部分中描述的量。a-淀粉酶也可以是任何a-淀粉酶，優(yōu)選在上文"a-淀粉酶"部分中描述的那些，并且以在該部分中描述的量。在優(yōu)選的實施方式中，糖化步驟(b)和發(fā)酵步驟(c)同時進(jìn)行。發(fā)酵條件可以是如上所述。在實施方式中，進(jìn)行糖化時可以存在其它酶活性，例如蛋白酶、葡糖淀粉酶、纖維素酶、半纖維素酶、(3-淀粉酶和肌醇六磷酸酶，或它們的混合物。在實施方式中，在糖化和發(fā)酵期間將糖濃度保持在大約6重量°/。以下，優(yōu)選3重量％以下，特別是0.25重量％以下的水平。本發(fā)明的組合物在這個方面，本發(fā)明涉及包含a-葡糖苷酶和a-淀粉酶的組合物。a-葡糖苦酶可以源自微生物，優(yōu)選細(xì)菌或真菌，或源自植物。在優(yōu)選的實施方式中，a-葡糖脊酶是植物來源，特別是玉米a-葡糖苷酶。a-葡糖苷酶的實例在上文"a-葡糖苷酶"部分中給出。a-淀粉酶可以源自真菌或細(xì)菌a-淀粉酶，優(yōu)選酸性a-淀粉酶。a-淀粉酶的實例在上文"a-淀粉酶"部分中給出。在優(yōu)選的實施方式中，a-淀粉酶包含一個或多個淀粉結(jié)合域(SBD)。本發(fā)明的組合物還可以含有其它成分，包括營養(yǎng)物、抗生素、鹽或酶，例如月幾醇六磷酸酶、支鏈淀粉酶、蛋白酶、[3-淀粉酶、纖維素酶、葡糖淀粉酶和半纖維素酶，或它們的混合物。本發(fā)明的組合物的用途在最后的方面，本發(fā)明涉及組合物用于糖化或同時糖化和發(fā)酵的用途。還可以將組合物使用在發(fā)酵產(chǎn)物加工中，優(yōu)選用于產(chǎn)生乙醇。還可以將組合物使用在本發(fā)明的方法中。在本文中描述并且要求保護(hù)的發(fā)明不限于本文公開的具體實施方式的范圍，因為這些實施方式旨在說明本發(fā)明的幾個方面。任何等同的實施方式應(yīng)在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。事實上，除了本文顯示和說明的那些內(nèi)容之外，根據(jù)前述落入所附權(quán)利要求范圍之內(nèi)。在發(fā)生沖突的情況下，以包括定義的本公開為準(zhǔn)。本文引用了多篇參考文件，將其全部內(nèi)容并入作為參考。才才津十禾。方法酶*a-淀粉酶A:由微小根毛霉a-淀粉酶(本文的SEQIDNO:7)組成的本文SEQIDNO:13中公開的雜合a-淀粉酶，所述微小根毛霉a-淀粉酶具有黑曲霉葡糖淀粉酶接頭(本文的SEQIDNO:9)和SBD(本文的SEQIDNO:11)，其作為V039公開于共同未決的國際申請no.PCT/US05/46725(作為WO2006歸2卯公開)的表5中。*稻a-葡糖苷酶(SigmaCat.No.G9259-100UN)。*玉米a-葡糖苷酶，如實施例1和2中所述制備。*嗜熱脂肪芽孢桿菌a-葡糖苷酶可以從Sigma獲得(Sigmacat.No.G3651)。*來自釀酒酵母的酵母a-葡糖苷酶可以從Sigma獲得(SigmaCat.No.G0660)。*葡糖淀粉酶TC:WO2006/069289的SEQIDNO:2中公開的源自瓣環(huán)栓菌的葡糖淀粉酶，并且可從NovozymesA/S獲得。*葡糖淀粉酶AN:Boeletal.，1984,EMBO丄，3(5):1097-1102中公開的源自黑曲霉的葡糖淀粉酶，并且可從NovozymesA/S獲得。*葡糖淀粉酶SF:如WO99/28448中SEQIDNO:7公開的源自的葡糖淀粉酶，并且可從NovozymesA/SDenmark獲得。酵母可以從RedStar/Lesaffre,USA獲得的REDSTARTM測定同一性在本發(fā)明的上下文中，通過GCG程序包中提供的計算機(jī)程序GAP(ProgramManualfortheWisconsinPackage,Version8,August1994,GeneticsComputerGroup,575ScienceDrive,Madison,Wisconsin,USA53711)(Needleman,S.B.andWunsch，C.D,,1970，JournalofMolecularBiology,48:443-453來測定兩個氨基酸序列之間的同一性程度。使用以下設(shè)定用于多肽序列比較GAP產(chǎn)生罰分(GAPcreationpenalty)3.0，和GAP延伸罰分(GAPextensionpenalty)0.1。a-淀粉酶活性(KNU)可以使用馬鈴薯淀粉作為底物來測定淀粉分解活性。這種方法基于改性的馬鈴薯淀粉通過酶的分解，并通過將淀粉/酶溶液的樣品與碘溶液混合來跟蹤所述反應(yīng)。最初，形成黑藍(lán)色，但是在淀粉分解期間藍(lán)色變淡，并且逐漸成為紅褐色，將其與有色玻璃標(biāo)準(zhǔn)比較。將1千Novoa-淀粉酶單位(KNU)定義為在標(biāo)準(zhǔn)條件下(即，在37。C+/-0.05;0.0003MCa2+;和pH5.6)糊津青化5260mg淀4分干物質(zhì)MerckAmylumsolubile的酉爭量。更詳細(xì)描述這種分析方法的文件EB-SM-0009.02/01可根據(jù)要求從NovozymesA/S,Denmark獲得，將該文件作為參考并入本文。酸性a-淀粉酶活性當(dāng)根據(jù)本發(fā)明使用時，可以將任何酸性a-淀粉酶活性以AFAU(酸性真菌(x-淀粉酶單位)來測量?；蛘呖梢园碅AU(酸性a-淀粉酶單位)來測量酸性a-淀粉酶的活性。酸性(x-淀粉酶單位(AAU)可以以AAU(酸性a-淀粉酶單位)來測量酸性a-淀粉酶活性，其是一種絕對方法。1酸性淀粉酶單位(AAU)是在標(biāo)準(zhǔn)化的條件下每小時將1g淀4分(100。/。干物質(zhì))轉(zhuǎn)化成如下產(chǎn)物的酶量，所述產(chǎn)物與已知濃度的碘溶液反應(yīng)之后在620nm具有的透射與顏色參照相等。'標(biāo)準(zhǔn)條件/反應(yīng)條件底物可溶淀粉。濃度大約為20gDS/L.緩沖液檸檬酸鹽，大約0.13M,pH=4.2碘溶液40.176g碘化鉀+0.088g捵/L自來水(citywater)15。陽20。dH(德國硬度(Germandegreehardness)pH:4.2溫百溫度30oC反應(yīng)時間11分鐘波長620畫酶濃度0.13-0.19AAU/mL酶工作范圍0.13-0.19AAU/mL所述淀粉應(yīng)該是Lintner淀粉，其是微弱煮沸(thin-boiling)淀粉，用在實驗室中作為比色指示劑。Lintner淀粉通過稀鹽酸處理天然淀粉獲得，因而其保持了與碘反應(yīng)變?yōu)樗{(lán)色的能力。進(jìn)一步的細(xì)節(jié)可見EP0140410B2，該公開作為參考文獻(xiàn)包括在本文中。測定FAU-F相對于公開(declared)濃度的酶標(biāo)準(zhǔn)品來測量FAU(F)真菌a-淀粉酶單位(Fungamyl)(￡ungala-旦mylaseUnits(￡ungamyl))。觀'H式底4勿是4,6—亞乙基(G)-對硝基苯基(01)-01,0-麥芽七糖苷(4,6《11^^6加(07)卞-1^1"(^1^1^1(01)^^11&，0-maltoheptaoside)(亞乙基-G-PNP)。<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>更詳細(xì)描述這種標(biāo)準(zhǔn)方法的文件(EB-SM-0216.02)可根據(jù)要求從NovozymesA/S，Denmark獲得，將該文件作為參考并入本文。酸性a-淀粉酶活性(AFAU)可以以AFAU(AcidEungalAlpha-amylaseUnits;酸性真菌a-淀粉酶單位)測量酸性ot-淀粉酶活性，其相對于酶標(biāo)準(zhǔn)品測定。將1AFAU定義為在下述標(biāo)準(zhǔn)條件下每小時降解5.260mg淀粉干物質(zhì)的酶量。酸性(x-淀粉酶是內(nèi)型-a-淀粉酶(l，4-a-D-葡聚糖-葡聚糖水解酶，E.C.3.2丄1)，其水解淀粉分子內(nèi)部區(qū)域的a-l,4-糖苷鍵以形成不同鏈長的糊精和寡糖。與碘形成的顏色強(qiáng)度與淀粉濃度成正比。在指定的分析條件下，使用反向比色法將淀粉濃度的減少測定為淀粉酶活性。a-淀粉酶淀粉+碘_^糊精+篡糖40',pH2,5A=590細(xì)藍(lán)/紫1=23秒脫色標(biāo)準(zhǔn)條件/反應(yīng)條件底物緩沖液碘(12):CaCl2:pH:可溶淀粉，大約0.17g/L檸檬酸鹽，大約0.03M0.03g/L1.85mM2.50±0.05溫育溫度40°C反應(yīng)時間23秒波長590nm酶濃度0.025AFAU/mL酶工作范圍0.01-0.04AFAU/mL更詳細(xì)描述這種分析方法的文件EB-SM-0259.02/01可才艮據(jù)要求從NovozymesA/S，Denmark獲得，將該文件作為參考并入本文。葡糖淀粉酶和a-葡糖苦酶活性(AGU)將Novo葡糖淀粉酶單位(AGU)定義為在標(biāo)準(zhǔn)條件下每分鐘水解i微岸爾麥芽糖的酶量，所述標(biāo)準(zhǔn)條件是37。C,pH4.3，底物麥芽糖23.2mM，緩沖劑乙酸0.1M，反應(yīng)時間5分鐘。可以使用自動分析系統(tǒng)。將變旋酶(Mutarotase)添加至葡萄糖脫氫酶試劑，從而使存在的任何a-D-葡萄糖轉(zhuǎn)化為(3-D-葡萄糖。在上述反應(yīng)中，葡萄糖脫氫酶特異性地與P-D-葡萄糖反應(yīng)，形成NADH，使用光度計在340nm測定NADH作為對初始葡萄糖濃度的量度。AMG溫育底物麥芽糖23.2mM緩沖液乙酸0.1MpH:4.30士0.05溫育溫度37。C±1反應(yīng)時間5分鐘酶工作范圍0.5-4.0AGU/mL顏色反應(yīng)GlucDH:430U/L變旋酶9U/LNAD:0.21mM緩沖液磷酸鹽0.12M;0.15MNaClpH:7.60士0.05溫育溫度37。C士l反應(yīng)時間5分鐘波長340蘭更詳細(xì)描述這種分析方法的文件(EB-SM-0131.02/01)可根據(jù)要求從NovozymesA/S，Denmark獲得，將該文件作為參考并入本文。蛋白水解活性(AU)可以用變性的血紅蛋白作為底物來測定蛋白水解活性。在用于測定蛋白水解活性的Anson-Hemoglobin方法中，將變性的血紅蛋白消化，并且將未消化的血紅蛋白用三氯乙酸(TCA)析出。用酚試劑測定TCA可溶產(chǎn)物的量，其與酪氨酸和色氨酸產(chǎn)生藍(lán)色。將1Anson單位(AU)定義為在標(biāo)準(zhǔn)條件(即，25°C、pH7.5和10分鐘反應(yīng)時間)下以如下初始速率消化血紅蛋白的酶量，所述初始速率使得每分鐘壽奪放的TCA可溶產(chǎn)物量與酚試劑產(chǎn)生的顏色與1毫當(dāng)量(milliequivalent)的酪氨酸相同。更詳細(xì)描述該分析方法的文件AF4/5可根據(jù)要求從NovozymesA/S，Denmark獲得，將該文件作為參考并入本文。測定a-葡糖苷酶的最適pH在2-8的多種pH，在37。C持續(xù)1小時測定a-葡糖苷酶的活性(AGU試驗)。實施例實施例1從研磨玉米分離a-葡糖苷酶通過1mm篩將玉米整谷粒研磨成粉并且立即在冰冷的(ice-chilled)緩沖液中懸浮，所述緩沖液由20mM乙酸鈉/乙酸(pH4.5)、0.1mM二石克蘇并唐醇(DTT)和0.1mM苯曱基磺酰氟(PMSF)組成。將懸液在4°C快速攪拌3小時。將平衡的玉米漿在3700rpm離心30分鐘。收集上清作為玉米酶提^f又物。通過濾紙過濾所述玉米酶提取物以去除不可溶物質(zhì)，其后通過0.45微米濾器進(jìn)一步過濾以去除微粒。將澄清的溶液通過裝備有10,000Dalton截留膜盒(10,000Daltoncut-offmembranecassette)的超濾裝置(PelliconXL,fromMilliporeCorp)來濃縮。將濃縮的溶液保持在4。C過夜。放置過夜之后，將濃縮的溶液在3700rpm離心30分鐘。收集的上清的活性試驗給出4.0AGU/ml的cc-葡糖苷酶活性和非常低的a-淀粉酶活性。使用配有10,000Ddton截留膜的Amicon超濾設(shè)備來進(jìn)一步濃縮所述溶液。使用具有25,000Dalton截留大小的透析膜(SpectrumLaboratories,Inc.CA,USA,VCAT#132554)將濃縮的樣品相對于緩沖液透析20小時。最終濃縮的酶提取物具有16.8AGU/ml的a-葡糖苷酶活性并且對其進(jìn)行進(jìn)一步純化。實施例2純化玉米a-葡糖普酶在整個純化過程中除非另有說明，全部步驟在2-5°C進(jìn)行，并且使用的緩沖液是含有0.1mMDTT和0.1mMPMSF的20mM乙酸鈉/乙酸(pH4.0)。步驟1:將0-20。/o飽和度(saturation)的固體硫酸銨(106g/L)添加至實施例1中獲得的玉米酶提取物。攪拌所述混合溶液2小時。在離心之后(15，000rpm,持續(xù)10分鐘)回收上清，添加20-75%飽和度的固體硫酸銨(349g/L),并且攪拌2小時。在離心之后，將沉淀用40ml緩沖液溶解，并且相對于緩沖液透析20小時。步驟2:將透析的樣品加樣至之前用緩沖液平衡的CM-Toyopearl柱。在用緩沖液洗滌柱之后，用0-0.75M線性梯度的氯化鈉洗脫a-葡糖苷酶。組合活性級分并且通過AmiconTM超濾設(shè)備濃縮。步驟3:將濃縮的酶加樣至用含有0.2M氯化鈉的緩沖液平衡的S印harose]2HR10/30，并且用相同的緩沖液洗脫。將活性級分用于進(jìn)一步研究。實施例3測定玉米谷粒中的天然內(nèi)源a-葡糖普酶活性將10%(重量/體積)玉米谷粒粉懸浮在30mM的乙酸鈉/乙酸(緩沖pH是4.())中并且混合1小時。在連續(xù)攪拌的同時，取出1ml玉米漿并且添加至含有1ml2°/。(重量/體積)麥芽糖的反應(yīng)試管。將所述反應(yīng)混合物在37。C搖動溫育30-60分鐘。用20微升40%(體積/體積)疏酸(H2S04)來終止反應(yīng)，并且在3700rpm離心10分鐘。收集上清，通過0.45微米濾器過濾，其后注入HPLC。將Agilent1100HPLC系統(tǒng)與RI檢測器偶連并且用于測定麥芽糖和葡萄糖。分離柱是來自BioRad丁M的AminexHPX-87H離子排阻柱(300mmx7.8mm)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)使用HPLC測定的天然內(nèi)源玉米a-葡糖苷酶活性是1-2AGU/gDS。實施例4玉米a-葡糖苷酶與a-淀粉酶A組合對于玉米淀粉的性能將三種酶劑量的a-淀粉酶A與純化的玉米a-葡糖苦酶組合。a-淀粉酶A的劑量分別是0.024、0.047和0.094FAU-F/gDS，而玉米a-葡糖苷酶的劑量分別是0、0.1、0.2和0.4AGU/gDS。在32°C伴隨搖動將酶組合添加至3%(重量/體積)玉米淀粉漿，所述玉米淀粉漿之前已在含有0.025%NaN3和1mMCaCl2的50mM乙酸鈉/乙酸，pH4.0中平衡。在HPLC上分析在19小時反應(yīng)之后產(chǎn)生的寡糖。HPLC制備由以下組成通過添加50微升40%H2S04來終止，離心，和通過0.45微米濾器過濾。在分析之前將樣品貯藏于4°C。使用與RI檢測器偶連的Agilent1100HPLC系統(tǒng)來測定乙醇和糖。分離一主是來自BioRadTM的AminexHPX-87H離子排阻柱(300mmx7.8mm)。結(jié)果測試了不同組合的玉米a-葡糖苷酶和a-淀粉酶A劑量對于玉米纟定4分的水解。測試顯示隨著a-淀粉酶劑量的增加，從玉米淀粉產(chǎn)生更多的寡沖唐，特別是麥芽糖。通過添加玉米a-葡糖苷酶將產(chǎn)生的寡糖特別是麥芽糖進(jìn)一步水解成葡萄糖。發(fā)現(xiàn)葡萄糖產(chǎn)生隨玉米a-葡糖苷酶劑量的增加而增加。測試的結(jié)果示于圖1和2。實施例5在一歩同時糖化和發(fā)酵(SSF)中玉米a-葡糖苷酶與a-淀粉酶A組合的性化3匕通過小規(guī)模(mini-scale)發(fā)酵來評估全部處理。將410g研磨的黃色馬齒形玉米(yellowdentcom)(具有大約0.5mm的平均顆粒大小)添加至590g自來水。向這種混合物補(bǔ)充3.0mllg/L青霉素和lg尿素。用5NNaOH將這種漿料的pH調(diào)節(jié)至4.5(調(diào)節(jié)之前的初始pH是大約3.8)。測定DS水平是35重量%。將大約5g的這種漿料添加至20ml小管。向每個小管按劑量添加合適量的酶，其后添加200微升酵母增殖物/5g漿料。實際酶劑量以各個小管中玉米漿的精確重量為基礎(chǔ)。將純化的玉米a-葡糖苷酶和a-淀粉酶用于本研究。將小管在32。C溫育。每個處理進(jìn)行9個重復(fù)發(fā)酵。選擇三個重復(fù)用于24小時、48小時和70小時時間點分析。在24、48和70小時渦旋振蕩(vortex)小管并且通過HPLC分析。HPLC制備由以下組成通過添加50微升40%H2S04來終止，離心，和通過0.45微米濾器過濾。在分析之前將樣品貯藏于4°C。使用與RI檢測器偶連的Agilent1100HPLC系統(tǒng)來測定寡糖。分離柱是來自BioRad頂?shù)腶minexHPX-87H離子排阻柱(300mmx7.8mm)。結(jié)果結(jié)果示于下文的表1和圖3。玉米o(hù)i-葡糖苷酶量的增加致使乙醇產(chǎn)率的增力口。當(dāng)將玉米a-葡糖苷酶與a-淀粉酶A組合使用時獲得了更高的乙醇產(chǎn)率。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>實施例6玉米a-葡糖苷酶與稻a-葡糖苷酶的比較將玉米a-葡糖苷酶的pH穩(wěn)定性、溫度穩(wěn)定性和乙醇穩(wěn)定性與稻a-葡糖苦酶(SigmaCat.No.G9259-100UN)比較。pH穩(wěn)定性在pH2-8的多個pH在37。C溫育1小時之后測定玉米和稻a-葡一唐苷酶的殘余活性。結(jié)果示于圖4。溫度穩(wěn)定性在pH4.0在多個溫度溫育2小時之后測定玉米和稻a-葡糖苷酶的殘余活性。結(jié)果示于圖5。乙醇穩(wěn)定性將各個酶(0.2mg/ml;40微克/測試)添加至緊密密封的Ependorf管中的緩沖混合物(0.2MNaAc，pH4.0)中，所述緩沖混合物含有20體積％終〖農(nóng)度的乙醇，并且在32。C溫育。定期取出合適量的混合物(大約l微克酶)并且用麥芽糖作為底物測定殘余活性。通過葡萄糖試驗試劑盒(WakoPureChemical,Japan)來測定產(chǎn)生的葡萄糖，試驗期間的乙醇濃度是不干擾試驗分析的0.7%。結(jié)果示于圖6。.實施例7在一歩同時糖化和發(fā)酵方法(SSF)中來自玉米、芽孢桿菌屬或酵母的a-葡糖苦酶與a-淀粉酶A和葡糖淀粉酶TC組合的性能通過小規(guī)模發(fā)酵來評估全部處理。將410g研磨的黃色馬齒形玉米(具有大約0.5mm的平均顆粒大小)添加至590g自來水。向這種混合物補(bǔ)充3.0mllg/L青霉素和lg尿素。用5NNaOH將這種漿料的pH調(diào)節(jié)至4.5(調(diào)節(jié)之前的初始pH是大約3.8)。測定DS水平是35重量。/。。將大約5g的這種漿料添加至20ml小管。向每個小管按劑量添加合適量的酶，其后添加200微升酵母增殖物/5g漿料。實際酶劑量以各個小管中玉米漿的精確重量為基礎(chǔ)。將純化的玉米、嗜熱脂》沐芽孑包4干菌(SigmaG365l)或酵母(SigmaG0660),oc-葡糖苷酶和a-淀粉酶和葡糖淀粉酶用于本研究。將小管在32。C溫育。每個處理進(jìn)行9個重復(fù)發(fā)酵。選擇三個重復(fù)用于24小時、48小時和70小時時間點分析。在24、48和70小時渦旋振蕩小管并且通過HPLC分析。HPLC制備由以下組成通過添加5(M鼓升400/。H2S04來終止，離心，和通過0.45微米濾器過濾。在分析之前將樣品貯藏于4。C。使用與RI檢測器偶連的Agilent1100HPLC系統(tǒng)來測定寡糖。分離柱是來自BioRacP'M的aminexHPX-87H離子排阻柱(300mmx7.8mm)。使用的酶劑量示于下表:酶/附圖編號圖7圖8圖9圖10玉米a-葡糖苷酶(AGU/gDS)2.62.62.6-嗜熱脂肪芽孢桿菌a-葡糖苷酶(單位/gDS)一一-10酵母a-葡糖苷酶(單位/gDS)---25a-淀粉酶A(FAU-F/gDS0.1270.0570.0570.057葡糖淀粉酶TC(AGU/gDS)0,34一-0.34葡糖淀粉酶AN(AGU/gDS)-1.0一-葡糖淀粉酶SF(AGU/gDS)—一1.68-結(jié)果示于圖7-10?？偨Y(jié)段落在權(quán)利要求書和所附說明書中對本發(fā)明進(jìn)行了限定。方便起見，在此通過編號段落的方式來表示本發(fā)明的其它方面。1.用于從含淀粉材料產(chǎn)生發(fā)酵產(chǎn)物的方法，其包括(a)在如下酶活性存在下，在初始糊化溫度以下糖化含淀粉材料i)比所述含淀粉材料中存在的內(nèi)源a-葡糖芬酶天然量多0.001-50AGU/gDS,優(yōu)選0.01-10AGU/gDS的a-葡糖芬酶活性，和ii)從0(零)以上至10FAU-F/gDS的a-淀粉酶活性，(b)使用發(fā)酵生物發(fā)酵。2.用于從源自經(jīng)修飾植物的含淀粉材料產(chǎn)生發(fā)酵產(chǎn)物的方法，其包括(a)在如下酶活性存在下，在初始糊化溫度以下糖化含淀粉材料i)a-葡糖芬酶活性，和ii)乂人0(零)以上至IOFAU-F/gDS的a-淀粉酶活性，(b)使用發(fā)酵生物發(fā)酵，其中步驟(a)中ot-葡糖苷酶的量高于相應(yīng)的未經(jīng)修飾的含淀粉植物材料中內(nèi)源oc-葡糖苷酶的天然量。3.段落2的方法，其中所述a-葡糖苷酶活性的量比相應(yīng)的未經(jīng)修飾的含淀粉材料中內(nèi)源a-葡糖苷酶天然量高0.001-50AGU/gDS,優(yōu)選0.01-10AGU/gDS。4.段落2或3的方法，其中所述經(jīng)修飾的含淀粉植物材料源自轉(zhuǎn)基因植物材料。5.段落4的方法，其中與相應(yīng)的未經(jīng)修飾的含淀粉植物材料中內(nèi)源a-葡糖苦酶的天然量相比，所述轉(zhuǎn)基因植物材料具有較高的內(nèi)源a-葡糖苷酶活性量。6.段落l-5中任一項的方法，其中在發(fā)酵之后回收發(fā)酵產(chǎn)物。7.段落l-6中任一項的方法，其中步驟(a)和(b)順序進(jìn)行或同時進(jìn)行(即，一步發(fā)酵)。8.段落l-7中任一項的方法，其中所述a-葡糖苷酶活性來自a-葡糖苷酶，所述a-葡糖苷酶源自微生物，優(yōu)選細(xì)菌、真菌生物，或源自植物。9.段落l-8中任一項的方法，其中所述a-葡糖苷酶是酸性a-葡糖苷酶。10.段落l-9中任一項的方法，其中所述a-葡糖苷酶是植物a-葡糖芬酶，優(yōu)選源自選自下組的植物玉米(玉蜀黍)、穗軸、小麥、大麥、黑麥、買羅高粱、西米、木薯、木薯淀粉、高粱、稻、豌豆、豆類、甘薯，或它們的混合物，優(yōu)選玉米。11.段落l-9中任一項的方法，其中所述真菌a-葡糖苷酶源自酵母，優(yōu)選念珠菌屬菌種的菌抹，優(yōu)選Ow^'血ec/ax;或源自酵母屬菌種菌林，優(yōu)選釀酒酵母。12.段落l-9中任一項的方法，其中所述真菌a-葡糖普酶源自絲狀真菌，優(yōu)選曲霉屬菌抹，優(yōu)選構(gòu)巢曲霉、黑曲霉、米曲霉或煙曲霉。13.段落l-9中任一項的方法，其中所述a-葡糖苷酶源自細(xì)菌，優(yōu)選芽孢桿菌屬菌種的菌抹，優(yōu)選嗜熱脂肪芽孢桿菌。14.段落l-13中任一項的方法，其中所述a-葡糖苷酶活性水平與糖化前含淀粉材料中存在的內(nèi)源a-葡糖普酶的天然量相比高0.1-8AGU/gDS，優(yōu)選l-6AGU/gDS。15.段落1-14中任一項的方法，其中在糖化和/或發(fā)酵期間存在的內(nèi)源a-葡糖苷酶的總量是從2以上至12AGU/gDSa-葡糖苷酶活性，優(yōu)選3-10AGU/gDS,優(yōu)選4-8AGU/gDSa-葡糖苦酶活性。16.段落l-15中任一項的方法，其中所述a-淀粉酶以0.01-3FAU-F/gDSa-淀粉酶活性，優(yōu)選0.05-0.2FAU-F/gDSa-淀粉酶活性存在于糖化步驟(a)期間，或存在于同時糖化和發(fā)酵步驟(a)和(b)期間。17.段落1-16中任一項的方法，其中所述含淀粉材料是選自下組的才直物材料玉米(玉蜀黍)、穗軸、小麥、大麥、黑麥、買羅高粱、西米、木薯、木薯淀粉、高粱、稻、豌豆、豆類、甘薯，或它們的混合物，優(yōu)選玉米。18.段落1-16中任一項的方法，其中所述含淀粉材料源自轉(zhuǎn)基因植物材料，例如源自轉(zhuǎn)基因玉米材料，所述轉(zhuǎn)基因植物材料與相應(yīng)的未經(jīng)+務(wù)飾的植物材料相比具有較高的a-葡糖苷酶活性量。19.段落1-18中任一項的方法，其中所述含淀粉材料是植物胚乳，優(yōu)選玉米胚乳。20.段落1-19中任一項的方法，其中所述含淀粉材料是粒狀淀粉。21.段落l-20中任一項的方法，其中所述方法在pH3-7的范圍進(jìn)行，優(yōu)選pH3-6，或更優(yōu)選pH3.5-5.0。22.段落l-21中任一項的方法，其中所述干固體含量(DS)的范圍是20-55重量％,優(yōu)選25-45重量％,更優(yōu)選30-40重量％或30-45重量％。23.段落l-22中任一項的方法，其中在糖化和發(fā)酵期間將糖濃度保持在大約6重量％以下，優(yōu)選3重量％以下，特別是0.25重量°/。以下的水平。24.段落l-23中任一項的方法，其中在步驟(a)之前制備漿料，所述漿料包含顆粒大小減小的含淀粉材料和水。25.段落l-24中任一項的方法，其中通過減少含淀粉材料的顆粒大小來制備含淀粉材料，優(yōu)選通過研磨，由此使所述含淀粉材料的至少50%具有0.1-0.5mm的顆粒大小。26.段落l-25中任一項的方法，其中干磨或濕磨所述含淀粉材料。27.段落l-26中任一項的方法，其中使用顆粒大小乳化技術(shù)來減小所述含淀粉植物材料的顆粒大小。28.段落l-27中任一項的方法，其中將所述發(fā)酵進(jìn)行30-150小時，優(yōu)選48-96小時。29.段落l-28中任一項的方法，其中步驟(b)中發(fā)酵期間或步驟(a)和(b)中同時糖化和發(fā)酵期間的溫度是25。C-40。C,優(yōu)選28。C-36。C,例如28。C-35。C,例如28。C-34°C,例如大約32。C。30.段落l-29中任一項的方法，其中在糖化和/或發(fā)酵期間存在蛋白酶。31.段落l-30中任一項的方法，其中在糖化和/或發(fā)酵之前和/或期間添加逆流。32.段落l-32中任一項的方法，其中在糖化和/或發(fā)酵之前和/或期間添加氮源。33.段落l-32中任一項的方法，其中所述a-淀粉酶活性源自真菌或細(xì)菌a-淀粉酶，優(yōu)選酸性a-淀粉酶。34.段落l-33中任一項的方法，其中所述a-淀粉酶活性來自野生型a-淀粉酶或其變體。35.段落l-34中任一項的方法，其中所述a-淀粉酶活性來自真菌ct-淀粉酶，優(yōu)選源自曲霉屬，特別是黑曲霉、米曲霉、泡盛曲霉或川地曲霉菌抹。36.段落l-35中任一項的方法，其中所述a-淀粉酶活性來自野生型a-淀粉酶或其包含一個或多個淀粉結(jié)合域(SBD)的變體。37.段落l-36中任一項的方法，其中所述a-淀粉酶活性來自川地曲霉a-淀粉酶。38.段落l-37中任一項的方法，其中所述a-淀粉酶活性來自源自根毛霉屬或多孔菌屬的菌抹的a-淀粉酶，所述根毛霉屬的菌林優(yōu)選微小根毛霉的菌抹，所述多孔菌屬的菌抹優(yōu)選巨多孔菌的菌抹。39.段落l-38中任一項的方法，其中所述a-淀粉酶活性來自雜合a-淀粉酶，其包含一個或多個淀粉結(jié)合域(SBD)。40.段落l-39中任一項的方法，其中所述a-淀粉酶活性來自雜合a-淀粉酶，其選自下組具有催化域JA118和y^/ze/ZaSBD的Fungamyl變體(本文的SEQIDNO:2)，具有^/2￡//ra訴"葡糖淀粉酶接頭和SBD的微小根毛霉a-淀粉酶(本文的SEQIDNO:3)，具有A/ze/z'ara拆"葡糖淀粉酶接頭和SBD的巨多孔菌a-淀粉酶(本文的SEQIDNO:4)或具有黑曲霉葡糖淀粉酶接頭和SBD的微小根毛霉a-淀粉酶(SEQIDNO:13)。41.段落l-40中任一項的方法，其中所述a-淀粉酶活性來自雜合a-淀粉酶，其包含具有川地曲霉接頭和川地曲霉淀粉結(jié)合域(SBD)的黑曲霉a-淀粉酶。42.段落1-41中任一項的方法，其中所述a-淀粉酶活性來自細(xì)菌a-淀粉酶，優(yōu)選源自芽孢桿菌屬菌林，優(yōu)選地衣芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、嗜熱脂肪芽孢桿菌或枯草芽孢桿菌的菌抹。43.段落l-42中的方法，其中所述細(xì)菌a-淀粉酶源自嗜熱脂肪芽孢桿菌的菌抹，其與WO99/19467的SEQIDNO:3中所示野生型氨基酸序列相比具有突變1181*+G182*，優(yōu)選1181*+G182*十N193F。44.段落43的方法，其中所述細(xì)菌a-淀粉酶是雜合a-淀粉酶，其包含WO99/19467的SEQIDNO:4中所示地衣芽孢桿菌a-淀粉酶的445個C-末端氨基酸殘基和WO99/19467的SEQIDNO:5中所示源自解淀粉芽孢桿菌的a-淀粉酶的37個N-末端氨基酸殘基，所述a-淀粉酶具有取代G48A+T49I+G107A+H156Y+A181T+N190F+I201F+A209V+Q264S(使用WO99A9467中的SEQIDNO:4編號)。45.段落l-44中任一項的方法，其中在糖化或發(fā)酵期間，或在同時糖化和發(fā)酵(SSF)期間，存在選自下組的一種或多種酶葡糖淀粉酶、肌醇六磷酸酶、支鏈淀粉酶、(3-淀粉酶、纖維素酶和半纖維素酶，或它們的混合物。46.段落45的方法，其中所述葡糖淀粉酶源自如下屬或種曲霉屬，優(yōu)選黑曲霉、米曲霉、泡盛曲霉菌抹；或A/zeto屬，優(yōu)^//^//"ra拆"菌林；踝節(jié)菌屬,優(yōu)選ra/arowycesemeMow7菌才朱；或根霉屬,例如雪白才艮霉(A/n'zopusw'v/—菌抹；或腐質(zhì)霉屬，優(yōu)選7/w冊'co/agr&eavar.^zerwo/(ie(2菌抹；或檢菌屬(rrawefe。菌抹，優(yōu)選瓣環(huán)栓菌菌抹。47.段落45或46的方法，其中葡糖淀粉酶以0.001-10AGU/gDS的量，優(yōu)選0.01-5AGU/gDS的量，特另'J是O.1-0.5AGU/gDS的量存在。48.段落-47中任一項的方法，其中所述發(fā)酵產(chǎn)物是醇，優(yōu)選乙醇，特別是燃料乙醇、可飲用乙醇和/或工業(yè)乙醇。49.用于從含淀粉材料產(chǎn)生發(fā)酵產(chǎn)物的方法，其包括步驟(a)在a-淀粉酶存在下液化含淀粉材料；(b)在如下酶活性存在下，在20-60。C的溫度范圍，糖化步驟(a)中獲得的液化材料i)比所述含淀粉材料中存在的內(nèi)源a-葡糖苷酶天然量多0.001-50AGU/gDS，優(yōu)選0.0-10AGU/gDS的a-葡糖苷酶活性，和任選地ii)從0(零)至10FAU-F/gDS的a-淀粉酶活性，(c)使用發(fā)酵生物發(fā)酵。50.用于從源自經(jīng)修飾植物的含淀粉材料產(chǎn)生發(fā)酵產(chǎn)物的方法，其包括(a)在a-淀粉酶存在下，液化含淀粉材料；(b)在如下酶活性存在下，在初始糊化溫度以下糖化含淀粉材料i)a-葡糖苦酶活性，和任選地ii)從0(零)至10FAU-F/gDS的a-淀粉酶活性，(c)使用發(fā)酵生物發(fā)酵，其中步驟(a)中a-葡糖苷酶的量高于相應(yīng)的未經(jīng)修飾含淀粉植物材料中內(nèi)源a-葡糖苦酶的天然量。51.段落50的方法，其中a-葡糖苷酶量比相應(yīng)的未經(jīng)+務(wù)飾含淀粉材料中內(nèi)源a-葡糖普酶天然量高0.001-50AGU/gDS,優(yōu)選O.01-10AGU/gDS。52.段落50或51的方法，其中所述經(jīng)修飾含淀粉植物材料源自轉(zhuǎn)基因植物材料。53.段落52的方法，其中與相應(yīng)的未經(jīng)修飾的含淀粉植物材料中內(nèi)源a-葡糖苷酶的天然量相比，所述轉(zhuǎn)基因植物材料具有較高的內(nèi)源a-葡糖香酶活性量。54.段落49-53中任一項的方法，其中在發(fā)酵之后回收發(fā)酵產(chǎn)物。55.段落49-54中任一項的方法，其中步驟(b)和(c)順序進(jìn)行或同時進(jìn)行(即，一步發(fā)酵)。56.段落49-55中任一項的方法，其中所述發(fā)酵產(chǎn)物是醇，優(yōu)選乙醇，特別是燃料乙醇、可飲用乙醇和/或工業(yè)乙醇。57.段落49-56中任一項的方法，其中所述含淀粉起始材料是整谷粒，優(yōu)選整玉米或小麥谷粒。58.段落49-57中任一項的方法，其中所述發(fā)酵生物是酵母屬菌抹，優(yōu)選釀酒酵母的菌才朱。59.段落49-58中任一項的方法，在步驟(a)之前進(jìn)一步包括步驟x)減小含淀粉材料的顆粒大小；y)形成包含含淀粉材料和水的漿料。60.段落59的方法，其中將所述漿料加熱至糊化溫度以上。61.段落59或60的方法，其中在95-140。C,優(yōu)選105-125。C將所述漿料噴射蒸煮1-15分鐘，優(yōu)選3-10分鐘，特別是大約5分鐘。62.段落49-61中任一項的方法，其中所述起始材料的干固體含量(DS)是20-55重量％，優(yōu)選25-45重量％,更優(yōu)選30-40重量％或30-45重量％。63.段落49-62中任一項的方法，其中所述a-葡糖苷酶活性來自源自微生物，優(yōu)選細(xì)菌、真菌生物，或源自植物的a-葡糖苷酶。64.段落49-63中任一項的方法，其中所述a-葡糖苷酶是酸性a-葡糖苷酶。65.段落49-64中任一項的方法，其中所述a-葡糖苷酶是植物a-葡糖苷酶，優(yōu)選源自選自下組的植物玉米(玉蜀黍)、穗軸、小麥、大麥、黑麥、買羅高粱、西米、木薯、木薯淀粉、高粱、稻、豌豆、豆類、甘薯，或它們的混合物，優(yōu)選玉米。66.段落49-65中任一項的方法，其中所述真菌a-葡糖苷酶源自酵母，優(yōu)選念珠菌屬菌種的菌抹，優(yōu)選C朋力'^2Wa;c;或酵母屬菌種菌林，優(yōu)選釀酒酵母。67.段落49-66中任一項的方法，其中所述真菌a-葡糖苷酶源自絲狀真菌，優(yōu)選曲霉屬菌林，優(yōu)選構(gòu)巢曲霉、黑曲霉、米曲霉或煙曲霉。68.段落49-67中任一項的方法，其中所述a-葡糖苷酶源自細(xì)菌，優(yōu)選芽孢桿菌屬菌種菌抹，優(yōu)選嗜熱脂肪芽孢桿菌。69.段落49-68中任一項的方法，其中所述a-葡糖苷酶活性水平與糖化前含淀粉材料中存在的內(nèi)源a-葡糖苷酶的天然量相比高0.1-8AGU/gDS，優(yōu)選1-6AGU/gDSa-葡糖普酶活性。70.段落49-69中任一項的方法，其中在糖化和/或發(fā)酵期間存在的內(nèi)源a-葡糖苦酶的總量是從2以上至12AGU/gDSa-葡糖苷酶活性，優(yōu)選3-10AGU/gDS，優(yōu)選4-8AGU/gDSa-葡糖苷酶活性。71.段落49-70中任一項的方法，其中a-淀粉酶以0.01-3FAU-F/gDSa-淀粉酶活性，優(yōu)選0.05-0.2FAU-F/gDSa-淀粉酶活性存在于糖化步驟(b)期間，或存在于同時糖化和發(fā)酵步驟(b)和(c)期間。72.段落49-71中任一項的方法，其中所述含淀粉材料是選自下組的植物材料玉米(玉蜀黍)、穗軸、小麥、大麥、黑麥、買羅高粱、西米、木薯、木薯淀粉、高粱、稻、豌豆、豆類、甘薯，或它們的混合物，優(yōu)選玉米。73.段落49-72中任一項的方法，其中所述含淀粉材料源自轉(zhuǎn)基因植物材料，例如源自轉(zhuǎn)基因玉米材料，所述轉(zhuǎn)基因植物材料與相應(yīng)的未經(jīng)修飾的植物材料相比具有較高的a-葡糖苷酶活性量。74.段落49-73中任一項的方法，其中所述含淀粉材料是植物胚乳，優(yōu)選玉米胚乳。75.段落49-74中任一項的方法，其中所述方法在pH3-7，優(yōu)選pH3-6，或更優(yōu)選pH3.5-5.0的范圍進(jìn)行。76.段落49-75中任一項的方法，其中在糖化和發(fā)酵期間將糖濃度保持在大約6重量。/。以下水平，優(yōu)選3重量％以下，特別是0.25重量％以下。77.段落49-76中任一項的方法，其中將發(fā)酵進(jìn)行30-150小時，優(yōu)選48-96小時。78.段落49-77中任一項的方法，其中步驟(c)中發(fā)酵或步驟(b)和(c)中同時糖化和發(fā)酵期間的溫度是25。C-40。C，優(yōu)選28。C-36。C，例如28。C-35。C,例如28°C-34°C，例如大約32。C。79.段落49-78中任一項的方法，其中在糖化和/或發(fā)酵期間還存在蛋白酶。80.段落49-79中任一項的方法，其中在糖化和/或發(fā)酵之前和/或期間添加逆流。81.段落49-80中任一項的方法，其中在糖化和/或發(fā)酵之前和/或期間添加氮源。82.段落49-81中任一項的方法，其中所述a-淀粉酶活性源自真菌或細(xì)菌a-淀粉酶，優(yōu)選酸性a-淀粉酶。83.段落49-82中任一項的方法，其中所述a-淀粉酶活性來自野生型ot-淀粉酶或其變體。84.段落49-83中任一項的方法，其中所述a-淀粉酶活性來自真菌a-淀粉酶，優(yōu)選源自曲霉屬，特別是黑曲霉、米曲霉、泡盛曲霉或川地曲霉菌林。85.段落49-84中任一項的方法，其中所述a-淀粉酶活性來自野生型a-淀粉酶或其包含一個或多個淀粉結(jié)合域(SBD)的變體。86.段落49-85中任一項的方法，其中所述a-淀粉酶活性來自川地曲霉a-淀粉酶。87.段落49-86中任一項的方法，其中所述a-淀粉酶活性來自源自根毛霉屬或多孔菌屬的菌抹的a-淀粉酶，所述根毛霉屬的菌抹優(yōu)選微小根毛霉的菌林，所述多孔菌屬的菌林優(yōu)選巨多孔菌的菌株。88.段落49-87中任一項的方法，其中所述a-淀粉酶活性來自包含一個或多個淀粉結(jié)合域(SBD)的雜合a-淀粉酶。89.段落49-88中任一項的方法，其中所述a-淀粉酶活性來自選自下組的雜合a-淀粉酶具有催化域JA118和A/ze/Zflra/々"SBD的Fungamyl變體(本文的SEQIDNO:2),具有A/2e/Zaw訴"葡糖淀粉酶接頭和SBD的微小根毛霉a-淀粉酶(本文的SEQIDNO:3)，具有y^/ze/Zara拆"葡糖淀粉酶接頭和SBD的巨多孔菌a-淀粉酶(本文的SEQIDNO:4)或具有黑曲霉葡糖淀粉酶接頭和SBD的微小根毛霉a-淀粉酶(本文的SEQIDNO:13)。卯.段落49-90中任一項的方法，其中所述a-淀粉酶活性來自雜合a-淀粉酶，其包含具有川地曲霉接頭和川地曲霉淀粉結(jié)合域(SBD)的黑曲霉a-淀粉酶。91.段落49-90中任一項的方法，其中所述a-淀粉酶活性來自細(xì)菌a-淀粉酶，優(yōu)選源自芽孢桿菌屬的菌株，優(yōu)選地衣芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、嗜熱脂肪芽孢桿菌或枯草芽孢桿菌的菌抹。92.段落91中的方法，其中所述細(xì)菌a-淀粉酶源自嗜熱脂肪芽孢桿菌的菌抹，其與WO99/19467的SEQIDNO:3中所示野生型氨基酸序列相比具有突變1181*+G182*,優(yōu)選1181*+G182*,+N193F。93.段落91的方法，其中所述細(xì)菌a-淀粉酶是雜合a-淀粉酶，其包含WO99/19467的SEQIDNO:4中所示地衣芽孢桿菌a-淀粉酶的445個C-末端氨基酸殘基和WO99/19467的SEQIDNO:5中所示源自解淀粉芽孢桿菌的a-淀粉酶的37個N-末端氨基酸殘基，所述a-淀粉酶具有取代G48A+T49I+G107A+H156Y+A181T+N190F+I201F+A209V+Q264S(使用WO99/19467中的SEQIDNO:4編號)。94.段落49-93中任一項的方法，其中在糖化或發(fā)酵期間，或在同時糖化和發(fā)酵(SSF)期間，存在選自下組的一種或多種酶葡糖淀粉酶、肌醇六磷酸酶、支鏈淀粉酶、|3-淀粉酶、纖維素酶和半纖維素酶，或它們的混合物。95.段落94的方法，其中所述葡糖淀粉酶源自如下屬或種曲霉屬，優(yōu)選黑曲霉、米曲霉、泡盛曲霉的菌抹；或^/^/^屬，優(yōu)^^/^/^^//^的菌抹；躁節(jié)菌屬，優(yōu)選7h/arawyceemeraow7的菌株；或根霉屬，例如雪白根霉的菌才朱；或腐質(zhì)霉屬，4尤選7/ww/co/"V(3T.決emwz'(ie"的菌才朱；或^全菌屬的菌抹，優(yōu)選瓣環(huán)栓菌的菌抹。96.段落94或95的方法，其中葡糖淀粉酶以0.001-10AGU/gDS的量，優(yōu)選0.01-5AGU/gDS的量，特另'J是0.1-0.5AGU/gDS的量存在。97.包含a-葡糖芬酶和a-淀粉酶的組合物。98.段落97的組合物，其中所述a-葡糖苷酶源自微生物，優(yōu)選細(xì)菌或真菌；或源自4直物。99.段落97或98的組合物，其中所述a-葡糖苷酶是植物a-葡糖苦酶，優(yōu)選源自選自下組的植物玉米(玉蜀黍)、穗軸、小麥、大麥、黑麥、買羅高粱、西米、木薯、木薯淀粉、高粱、稻、豌豆、豆類、甘薯，或它們的混合物，優(yōu)選玉米。100.段落97-99中任一項的組合物，其中所述a-葡糖苷酶源自酵母，優(yōu)選念珠菌屬菌種的菌抹，優(yōu)選C朋力V/aet/似；或源自酵母屬菌種的菌抹，優(yōu)選釀酒酵母。101.段落97-100中任一項的組合物，其中所述a-葡糖苦酶源自絲狀真菌，優(yōu)選曲霉屬的菌抹，優(yōu)選構(gòu)巢曲霉、黑曲霉、米曲霉或煙曲霉。102.段落97-101中任一項的組合物，其中所述a-葡糖香酶源自細(xì)菌，優(yōu)選芽孢桿菌屬菌種，優(yōu)選嗜熱脂肪芽孢桿菌的菌抹。103.段落97-102中任一項的組合物，其中所述a-淀粉酶源自真菌或細(xì)菌cx-淀粉酶，優(yōu)選酸性a-淀4分酶。104.段落97-103中任一項的組合物，其中所述a-淀粉酶是野生型a-淀粉酶或其變體。105.段落97-104中任一項的組合物，其中所述a-淀粉酶是真菌a-淀粉酶，優(yōu)選源自曲霉屬，特別是黑曲霉、米曲霉、泡盛曲霉或川地曲霉的菌抹。106.段落97-105中任一項的組合物，其中所述ot-淀粉酶是野生型a-淀粉酶或其包含一個或多個淀粉結(jié)合域(SBD)的變體。107.段落97-106中任一項的組合物，其中所述a-淀粉酶是川地曲霉a-淀粉酶。108.段落97-107中任一項的組合物，其中所述a-淀粉酶是源自根毛霉屬的菌林或多孔菌屬的菌抹的a-淀粉酶，所述根毛霉屬的菌株優(yōu)選微小根毛霉的菌抹；所述多孔菌屬的菌林優(yōu)選巨多孔菌的菌林。109.段落97-108中任一項的組合物，其中所述a-淀粉酶是包含一個或多個淀粉結(jié)合域(SBD)的雜合a-淀粉酶。110.段落97-109中任一項的組合物，其中所述a-淀粉酶是選自下組的雜合a-淀粉酶具有催化域JAll8和y^/2e"aSBD的Fungamyl變體(本文的SEQIDNO:2)，具有A/7e/Za,^/>〃葡糖淀粉酶接頭和880的微小根毛霉01-淀粉酶(本文的SEQIDNO:3),具有A/^/Zara拆"葡糖淀粉酶接頭和SBD的巨多孔菌oc-淀粉酶(本文的SEQIDNO:4)或具有黑曲霉葡糖淀粉酶接頭和SBD的微小根毛霉a-淀粉酶(SEQIDNO:13)。111.段落97-U0中任一項的組合物，其中所述a-淀粉酶是雜合a-淀粉酶，其包含具有川地曲霉接頭和川地曲霉淀粉結(jié)合域(SBD)的黑曲霉a-淀粉酶。112.段落97-lll中任一項的組合物，其中所述ct-淀粉酶是細(xì)菌a-淀粉酶，優(yōu)選源自芽孢桿菌屬的菌抹，優(yōu)選地衣芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、嗜熱脂肪芽孢桿菌或枯草芽孢桿菌的菌株。113.段落97-112中任一項的組合物，其中所述細(xì)菌a-淀粉酶源自嗜熱脂肪芽孢桿菌的菌抹，其與WO99/19467的SEQIDNO:3中所示野生型氨基酸序列相比具有突變118*+G182*,優(yōu)選1181*+G182*,+N193F。114.段落97-113中任一項的方法，其中所述細(xì)菌a-淀粉酶是雜合a-淀粉酶，其包含WO99/19467的SEQIDNO:4中所示地衣芽孢桿菌a-淀粉酶的445個C-末端氨基酸殘基和WO99/19467的SEQIDNO:5中所示源自解淀粉芽孢桿菌的a-淀粉酶的37個N-末端氨基酸殘基，所述a-淀粉酶具有取代G48A+T49I+G107A+H156Y+A181T+N190F+I201F+A209V+Q264S(使用WO99/19467中的SEQIDNO:4編號)。115.段落97-114中任一項的組合物，其中所述組合物進(jìn)一步包含選自下組的一種或多種成分營養(yǎng)物、抗生素、鹽或酶，所述酶例如肌醇六磷酸酶、葡糖淀粉酶、支鏈淀粉酶、蛋白酶、(3-淀粉酶、纖維素酶和半纖維素酶，或它們的混合物。116.段落115的組合物，其中所述葡糖淀粉酶是真菌葡糖淀粉酶。117.段落15或]16的組合物，其中所述葡糖淀粉酶源自如下屬或種曲霉屬，優(yōu)選黑曲霉、米曲霉、泡盛曲霉的菌林；或A/ze/Za屬，優(yōu)i4^/ze/Za的菌抹；踝節(jié)菌屬，優(yōu)選ra/aram少c^emerTOw7菌抹；或根霉屬，例如雪白根霉的菌才朱；或腐質(zhì)霉屬，<尤選/7wm/co/avar.Aewzo/ciea的菌才朱；或才全菌屬菌抹，優(yōu)選瓣環(huán)栓菌的菌株。118.段落97-l17中任一項的組合物用于同時糖化和發(fā)酵的用途。119.段落97-117中任一項的組合物用于乙醇生產(chǎn)的用途。120.段落97-117中任一項的組合物在段落l-96中任一項的方法中的用途。權(quán)利要求1.用于從含淀粉材料產(chǎn)生發(fā)酵產(chǎn)物的方法，其包括(a)在如下酶活性存在下，在初始糊化溫度以下糖化含淀粉材料i)比所述含淀粉材料中存在的內(nèi)源α-葡糖苷酶天然量多0.001-50AGU/gDS，優(yōu)選0.01-10AGU/gDS的α-葡糖苷酶活性，和ii)從0(零)以上至10FAU-F/gDS的α-淀粉酶活性，(b)使用發(fā)酵生物發(fā)酵。2.用于從源自經(jīng)修飾植物的含淀粉材料產(chǎn)生發(fā)酵產(chǎn)物的方法，其包括(a)在如下酶活性存在下，在初始糊化溫度以下糖化含淀;盼材料i)a-葡糖苷酶活性，和ii)從0(零)以上至10FAU-F/gDS的a-淀粉酶活性，(b)使用發(fā)酵生物發(fā)酵，其中步驟(a)中a-葡糖苷酶的量高于相應(yīng)的未經(jīng)修飾含淀粉植物材料中內(nèi)源a-葡糖苷酶的天然量。3.權(quán)利要求2的方法，其中(x-葡糖苷酶活性量比相應(yīng)的未經(jīng)修飾的含淀粉材料中內(nèi)源a-葡糖苷酶天然量高0.001-50AGU/gDS，優(yōu)選高0.01-10AGU/gDS。4.權(quán)利要求2或3的方法，其中所述經(jīng)修飾的含淀粉植物材料源自轉(zhuǎn)基因植物材料。5.-葡糖苷酶的天然量相比，所述轉(zhuǎn)基因植物材料具有較高量的內(nèi)源a-葡糖苷酶活性。6.權(quán)利要求1-5中任一項的方法，其中在發(fā)酵之后回收發(fā)酵產(chǎn)物。7.權(quán)利要求1-6中任一項的方法，其中步驟(a)和(b)順序進(jìn)行或同時進(jìn)行(即，一步發(fā)酵)。8.權(quán)利要求1-7中任一項的方法，其中所述a-葡糖苷酶活性來自a-葡糖芬酶，所述a-葡糖普酶源自微生物，優(yōu)選細(xì)菌、真菌生物，或源自植物。9.權(quán)利要求1-8中任一項的方法，其中所述a-葡糖苷酶活性水平與糖化前含淀粉材料中存在的內(nèi)源a-葡糖苷酶的天然量相比高0.1-8AGU/gDS，優(yōu)選l-6AGU/gDS。10.權(quán)利要求1-9中任一項的方法，其中在糖化和/或發(fā)酵期間存在的內(nèi)源a-葡糖普酶的總量是從2以上至12AGU/gDSa-葡糖苦酶活性，優(yōu)選3-10AGU/gDS,尤其是4-8AGU/gDSa-葡糖苦酶活性。11.權(quán)利要求1-10中任一項的方法，其中在糖化步驟(a)期間，或同時糖化和發(fā)酵步驟(a)和(b)期間所述a-淀粉酶以0.01-3FAU-F/gDSa-淀粉酶活性，優(yōu)選0.05-0.2FAU-F/gDSa-淀粉酶活性存在。12.權(quán)利要求]-ll中任一項的方法，其中所述含淀粉材料是選自下組的植物材料玉米(玉蜀黍)、穗軸、小麥、大麥、黑麥、買羅高粱、西米、木薯、木薯淀粉、高粱、稻、豌豆、豆類、甘薯，或它們的混合物，優(yōu)選玉米。13.權(quán)利要求1-12中任一項的方法，其中所述方法在pH3-7，優(yōu)選pH3-6，或更優(yōu)選pH3.5-5.0的范圍進(jìn)行。14.權(quán)利要求1-13中任一項的方法，其中所述干固體含量(DS)的范圍是20-55重量％,優(yōu)選25-45重量％，更優(yōu)選30-40重量％或30-45重量％。15.權(quán)利要求1-14中任一項的方法，其中在糖化和發(fā)酵期間將糖濃度保持在大約6重量％以下，優(yōu)選3重量％以下，特別是0.25重量。/。以下的水平。16.權(quán)利要求1-15中任一項的方法，其中在步驟(a)之前制備漿料，其包含顆粒大小減小的含淀粉材料和水。17.權(quán)利要求1-16中任一項的方法，其中通過減小含淀粉材料的顆粒大小，優(yōu)選通過研磨來制備所述含淀粉材料，由此使所述含淀粉材料的至少50%具有0.1-0.5mm的顆粒大小。18.權(quán)利要求1-17中任一項的方法，其中將所述含淀粉材料干磨或濕磨。19.權(quán)利要求1-18中任一項的方法，其中使用顆粒大小乳化技術(shù)來減小所述含淀粉植物材料的顆粒大小。20.權(quán)利要求1-19中任一項的方法，其中將所述發(fā)酵進(jìn)行30-150小時，優(yōu)選48-96小時。21.權(quán)利要求1-20中任一項的方法，其中步驟(b)中發(fā)酵期間的溫度或步驟(a)和(b)中同時糖化和發(fā)酵期間的溫度是25°C-40°C，優(yōu)選28°C-36。C，例如28°C-35°C，例如28。C-34。C，例如大約32°C。22.權(quán)利要求1-21中任一項的方法，其中在糖化和/或發(fā)酵期間存在蛋白酶。23.權(quán)利要求1-22中任一項的方法，其中在糖化和/或發(fā)酵之前和/或期間添力口逆流。24.權(quán)利要求1-23中任一項的方法，其中在糖化和/或發(fā)酵之前和/或期間添力。氮源。25.權(quán)利要求1-24中任一項的方法，其中在糖化或發(fā)酵期間，或在同時糖化和發(fā)酵(SSF)期間，存在選自下組的一種或多種酶葡糖淀粉酶、肌醇六磷酸酶、支鏈淀粉酶、卩-淀粉酶、纖維素酶和半纖維素酶，或它們的混合物。26.權(quán)利要求1-25中任一項的方法，其中所述發(fā)酵產(chǎn)物是醇，優(yōu)選乙醇，特別是燃料乙醇、可飲用乙醇和/或工業(yè)乙醇。27.用于從含淀粉材料產(chǎn)生發(fā)酵產(chǎn)物的方法，其包括步驟(a)在a-淀粉酶存在下液化含淀粉材料；(b)在如下酶活性存在下，在20-60。C范圍的溫度將步驟(a)中獲得的液化的材料糖化i)比所述含淀粉材料中存在的內(nèi)源a-葡糖苷酶的天然量多0.001-50AGU/gDS，優(yōu)選0.01-10AGU/gDS的a-葡糖苷酶活性，和任選地ii)從0(零)至10FAU-F/gDS的a-淀粉酶活性，(c)使用發(fā)酵生物發(fā)酵。28.用于從源自經(jīng)修飾植物的含淀粉材料產(chǎn)生發(fā)酵產(chǎn)物的方法，其包括(a)在ot-淀粉酶存在下液化含淀粉材料；(b)在如下酶活性存在下，在初始糊化溫度以下糖化含淀粉材料i)a-葡糖芬酶活性，和任選地ii)從0(零)至10FAU-F/gDS的a-淀粉酶活性，(c)使用發(fā)酵生物發(fā)酵，其中步驟(a)中a-葡糖芬酶的量高于相應(yīng)的未經(jīng)修飾的含淀粉植物材料中內(nèi)源a-葡糖苷酶的天然量。29.權(quán)利要求27或28的方法，其中所述發(fā)酵生物是酵母屬的菌抹，優(yōu)選釀酒酵母的菌株。30.權(quán)利要求27-29中任一項的方法，在步驟(a)之前還包括步驟x)減d、含淀粉材料的顆粒大?。粂)形成包含含淀粉材料和水的漿料。31.權(quán)利要求30的方法，其中將所述漿料加熱至糊化溫度以上。32.權(quán)利要求30或31的方法，其中在95-140。C,優(yōu)選105-125。C將所述漿料噴射蒸煮l-15分鐘，優(yōu)選3-IO分鐘，特別是大約5分鐘。33.權(quán)利要求27-32中任一項的方法，其中所述起始材料的干固體含量(DS)的范圍是20-55重量％,優(yōu)選25-45重量％，更優(yōu)選30-40重量％或30-45重量％。34.組合物，其包含a-葡糖苷酶和a-淀粉酶。35.權(quán)利要求34的組合物用于同時糖化和發(fā)酵的用途。36.權(quán)利要求34的組合物用于乙醇生產(chǎn)的用途。37.權(quán)利要求34的組合物在權(quán)利要求1-33中任一項的方法中的用途。全文摘要本發(fā)明涉及用于產(chǎn)生發(fā)酵產(chǎn)物的方法，其包括(a)在如下酶活性存在下，在初始糊化溫度以下糖化含淀粉材料i)多于所述含淀粉材料中存在的內(nèi)源α-葡糖苷酶天然量0.001-50AGU/gDS，優(yōu)選0.01-10AGU/gDS的α-葡糖苷酶活性，和ii)從0(零)以上至10FAU-F/gDS的α-淀粉酶活性，和(b)使用發(fā)酵生物發(fā)酵。本發(fā)明還涉及用于本發(fā)明的方法的酶組合物。文檔編號C12P7/06GK101331232SQ200680047542公開日2008年12月24日申請日期2006年12月20日優(yōu)先權(quán)日2005年12月22日發(fā)明者劉繼銀,宋子良,福山志朗申請人:諾維信北美公司