專利名稱：：鑒定、合成、優(yōu)化和表征蛋白調(diào)節(jié)劑的化合物和方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及鑒定、合成、優(yōu)化和表征為蛋白質(zhì)抑制劑或活化劑的化合物，所述蛋白質(zhì)為天然存在的內(nèi)源性蛋白質(zhì)及某些內(nèi)源性蛋白質(zhì)的變體形式，并涉及鑒定所述變體的新方法。通過命中鑒定的改進(jìn)、先導(dǎo)優(yōu)化、生物識別和毒性化合物的快速排除使藥物發(fā)現(xiàn)和生產(chǎn)方法簡化，所述方法加速了作為潛在治療有效藥物的化合物的鑒定和研發(fā)。由于效率的相應(yīng)增加，該實(shí)施導(dǎo)致藥物發(fā)現(xiàn)過程中的總成本降低。
背景技術(shù)：
：針對存在人細(xì)胞中的選擇性蛋白質(zhì)靶的現(xiàn)代新藥物的發(fā)現(xiàn)/生產(chǎn)方法的重要組成包括1.鑒定抑制或活化所選靶蛋白質(zhì)的"命中"化合物。(基于這些目者希望的效果和藥學(xué)性質(zhì)。然而，在現(xiàn)代藥學(xué)研究中，實(shí)際上命中只有在實(shí)質(zhì)性進(jìn)一步修飾后才能成為最終的臨床候選)；2.選擇先導(dǎo)化合物，在其基礎(chǔ)上進(jìn)一步研究和改進(jìn)最初的命中化合物；3.通過一系列設(shè)計主要用于改善先導(dǎo)化合物對靶蛋白質(zhì)的抑制或活化性質(zhì)的化學(xué)修飾，優(yōu)化先導(dǎo)化合物(其化學(xué)結(jié)構(gòu)與原始命中化合物相關(guān)或一致)，但所述的化學(xué)修飾還可以改善生物利用度、血漿半衰期、或降低毒性；4.表征指定先導(dǎo)化合物的生物活性鐠(包括優(yōu)化的先導(dǎo))以確定與其它非靶蛋白質(zhì)相比，其對所選的靶蛋白質(zhì)的相對特異性和選擇性，一些非靶蛋白質(zhì)與靶蛋白質(zhì)本身密切相關(guān)(例如蛋白質(zhì)家族的其它成員)；5.設(shè)計臨床前體外和體內(nèi)動物研究以評價劑量范圍、致癌性、吸收、分配、代謝、排泄、藥代動力學(xué)、口服生物利用度(如果需要的話)、藥效學(xué)、毒性和相關(guān)參數(shù)；6.在健康志愿者和患有疾病的患者中進(jìn)行的臨床測試，對其而言有效的治療性處置被認(rèn)為是有益的。本發(fā)明涉及實(shí)質(zhì)改進(jìn)上述步驟l-4的新方法。所述方法也可以用于產(chǎn)生和優(yōu)化化合物，所述化合物比用目前采用的標(biāo)準(zhǔn)且簡單的方法鲞定、優(yōu)化或表征的典型實(shí)驗(yàn)藥物有效得多且毒性低得多。作為努力研發(fā)先進(jìn)新藥學(xué)技術(shù)的一部分，研發(fā)了本文描述的方法，通過發(fā)明可預(yù)測、可信賴的方法學(xué)，將所述藥學(xué)技術(shù)將"藥物發(fā)現(xiàn)"過程變成一個被更精確地描述為"藥物生產(chǎn)"過程，所述方法學(xué)為本領(lǐng)域技術(shù)人員提供必需的工具以產(chǎn)生靶向人類疾病中重要的特異性蛋白質(zhì)的新藥物，同時減少與藥物發(fā)現(xiàn)/研發(fā)方法有關(guān)的時間和高額成本?；颊咧心退幮缘倪M(jìn)行性發(fā)展為使用許多類型藥物長期治療的標(biāo)志，尤其是在癌癥和感染性疾病的治療領(lǐng)域中。已經(jīng)鑒定了介導(dǎo)某些類型的耐藥性現(xiàn)象的分子機(jī)制，而在其它情況中，獲得的以及重新形成的耐受性的機(jī)制目前仍然未知。最初認(rèn)為在癌癥療法領(lǐng)域中相關(guān)的誘導(dǎo)的(獲得的)耐藥性的一種機(jī)制包括稱作P-糖蛋白(P-gp)的蛋白質(zhì)表達(dá)增加。P-gp位于細(xì)胞膜中并且起藥物流出泵的作用。該蛋白質(zhì)能夠從細(xì)胞中泵出毒性化學(xué)活性劑，包括許多類型的抗癌藥。因此，P-糖蛋白的增量調(diào)節(jié)通常產(chǎn)生對多種藥物的耐藥性。P-糖蛋白在腫瘤細(xì)胞中增量調(diào)節(jié)可以代表一種防御機(jī)制，該機(jī)制在哺乳動物細(xì)胞中發(fā)展以便防止受到毒性化學(xué)活性劑損害。目前已經(jīng)鑒定了具有與P-gP類似的功能的其它相關(guān)耐藥性蛋白質(zhì)，包括多藥物-抗性-相關(guān)蛋白家族成員，諸如MRP1和ABCG2。在任何情況下，在研發(fā)對指定靶蛋白具有特異性且毒性較低的化合物時，P-糖蛋白和相關(guān)ATP-結(jié)合彈夾(ABC)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在臨床顯著性耐藥性中的重要性已經(jīng)下降。另一種可能的獲得性耐藥的分子機(jī)制在于可選的信號途徑導(dǎo)致持續(xù)的細(xì)胞存活和代謝，即使原始藥物仍然對其靶標(biāo)有效。此外，藥物胞內(nèi)代謝的改變也可以導(dǎo)致治療功效喪失。此外，可以發(fā)生基因表達(dá)和基因擴(kuò)增結(jié)果的改變，從而導(dǎo)致指定靶蛋白的表達(dá)增加或減少，并且通常需要增加藥物劑量以便維持相同作用(Adcock和Lane,2003)。突變誘導(dǎo)的耐藥性通常為感染性疾病領(lǐng)域中出現(xiàn)的情況。例如，已經(jīng)研發(fā)了幾種抑制在人免疫缺陷(HIV)病毒基因組中編碼的病毒逆轉(zhuǎn)錄酶或病毒蛋白酶的藥物。在文獻(xiàn)中充分確立了使用例如逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑反復(fù)治療HIV-感染的AIDS患者最終產(chǎn)生了對藥物的敏感性減低的病毒突變體形式。已經(jīng)在編碼逆轉(zhuǎn)錄酶的基因中出現(xiàn)的突變賦予所述酶的突變體形式受藥物的影響降低?？紤]到錯誤被引入HIV基因組的比例，在HIV治療過程中耐藥性的出現(xiàn)并不令人意外。已知HIV逆轉(zhuǎn)錄酶特別具有錯誤趨向性，其中正向突變率約為3.4x10—5種突變/堿基對/復(fù)制循環(huán)(Mansky等，/.P7ro/.69:5087-94(1995))。然而，在哺乳動物細(xì)胞中編碼的內(nèi)源性基因的類似突變率低一個數(shù)量級以上。新的證據(jù)表明耐藥性還可能因涉及編碼藥物靶標(biāo)的基因的突變結(jié)果產(chǎn)生(Gorre等，Science,2001;PCT/US02/18729)。在這種情況中，使患者接觸具體的治療物質(zhì)，諸如靶向特異性摩爿^的蛋^#(P01或"靶"蛋白)的指定癌癥藥物后，隱含在編碼為治療物質(zhì)靶標(biāo)的蛋白質(zhì)的基因中出現(xiàn)的突變的一組細(xì)胞的過度生長。目前還不了解該細(xì)胞群的過度生長是否因已經(jīng)隱含產(chǎn)生藥物抗性的POI的突變的患者的小百分比的預(yù)先存在的細(xì)胞所致，或這類突變是否在動物或人接觸能夠活化或抑制所述POI的治療劑過程中或之后重新產(chǎn)生。任一情況中，這類突變結(jié)果均可以產(chǎn)生突變的蛋白(下文定義為Mera/zw"http://)，它受所述治療物質(zhì)的影響程度較低或可能完全不受影響。慢性髓細(xì)胞性白血病(CML)的特征在于在該病穩(wěn)定或慢性期過程中保持分化能力的骨髓先祖(progenitor)過度增殖。多線證據(jù)已經(jīng)確立了作為某些形式的CML中的致病性癌基因的Abl酪氨酸激酶的失調(diào)。這種失調(diào)通常與稱作費(fèi)城染色體(Ph)的染色體易位相關(guān)，導(dǎo)致由與Abe1son酪氨酸激酶融合的萬a基因產(chǎn)物組成的融合蛋白表達(dá)，由此形成具有酪氨酸激酶活性的p210B"—Abl。相關(guān)的融合蛋白稱作p190B"—Abl，其由^V基因中的不同斷點(diǎn)產(chǎn)生并且已經(jīng)證實(shí)出現(xiàn)在具有費(fèi)城染色體陽性(Ph+)的急性成淋巴細(xì)胞性白血病(ALL)的患者中(Melo，1994;Ravandi等，1999)。轉(zhuǎn)化看起來因多信號途徑，包括那些涉及RAS、MYC和JUN的途徑活化所致。甲磺酸伊馬替尼("STI-571，，或"Gleevec")為靼向AM的激酶結(jié)構(gòu)域的ATP結(jié)合位點(diǎn)的2-苯氨基嘧啶(Druker等，NEJM2001，p.1038)。隨后還通過其它方法已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了血小板^f汙生的生長因子(PDGF)P受體的抑制劑和Kit酪氨酸激酶，其中后者涉及胃腸道間質(zhì)瘤的發(fā)生(參見下文)。直到近期為止，尚未觀察到在使用指定內(nèi)源性細(xì)胞蛋白的特異性抑制劑治療的過程中，其相應(yīng)的力源'^基因中的突變可以導(dǎo)致蛋白質(zhì)不同的表達(dá)，所述蛋白質(zhì)變體的細(xì)胞功能耐受所述抑制劑。CharlesSawyers和同事所做的工作(Gorre等，Science293:876-80(2001);PCT/US02/18729)首次證實(shí)了使用能夠抑制p210B"—^酪氨酸激酶的藥物(即STI-571)治療患者后，在編碼產(chǎn)生p21(f"—Ab'癌的含有Abelson酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域的靶蛋白的基因中隱含突變的所述患者中可能出現(xiàn)具有臨床意義的細(xì)胞群。各種這類突變產(chǎn)生p21()B"—Abi的突變體形式，它們對Gleevec治療的反應(yīng)性低于產(chǎn)生最初癌癥的形式。值得注意的是，出現(xiàn)的突變對突變蛋白賦予了對蛋白激酶抑制劑藥物作用的相對抗性，同時維持了一定程度的突變蛋白激酶的原始底物特異性。在Gorre等的工作前，本領(lǐng)域技術(shù)人員一般認(rèn)為可以在接觸抑制Abelson蛋白激酶的化合物，諸如STI-571的患者中觀察到的抗性類型可能因上述藥物抗性的其它機(jī)制中的一種或多種或由某些其它尚不了解的機(jī)制導(dǎo)致，但在任何情況下，所述的抗性均可以涉及不同于藥物耙標(biāo)P01的耙標(biāo)(蛋白質(zhì)或其它)。因此，治療臨床相關(guān)的還為現(xiàn)存療法靶標(biāo)的蛋白質(zhì)突變體形式可能極為有用。這類突變蛋白(如下文定義的theramuteins)正在:f皮公認(rèn)和理解為復(fù)發(fā)性癌癥中的重要靶標(biāo)，并且還在其它疾病中變得具有重要性。存在對治療劑的需求，這類治療劑對可能在一般有效藥物療法之前、過程中或之后產(chǎn)生的細(xì)胞蛋白的這類藥物抗性變體形式具有活性。本發(fā)明的一個關(guān)鍵目的在于提供一種普遍的方法，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以利用所述方法從高通量篩選(HTS)系統(tǒng)中鑒定命中、產(chǎn)生和優(yōu)化先導(dǎo)化合物以及表征所述化合物的生物活性譜，而不需要依賴于較老的方法，例如無細(xì)胞的放射性配體結(jié)合測試等。本發(fā)明的另一個關(guān)鍵目的在于提供可以用作用于克服在內(nèi)源性出現(xiàn)的蛋白質(zhì)中的突變-誘導(dǎo)的耐藥性的潛在治療劑的化合物。發(fā)明概述本文描述的方法涉及基于細(xì)胞應(yīng)答的藥物發(fā)現(xiàn)和生產(chǎn)系統(tǒng)的產(chǎn)生，所述系統(tǒng)利用所定義、預(yù)先確定的細(xì)胞特征的調(diào)節(jié)(稱為表型反應(yīng))作為工具來測量指定化合物(化學(xué)試劑、調(diào)節(jié)劑)活化或抑制所選靶蛋白質(zhì)的能力。通過重復(fù)應(yīng)用該方法，可以利用本文描述的方法來鑒定蛋白質(zhì)調(diào)節(jié)劑(如本文所定義的)，在所述調(diào)節(jié)劑上進(jìn)行先導(dǎo)優(yōu)化，并生物表征所述調(diào)節(jié)劑的靶蛋白質(zhì)特異性和選擇性。可以對任何耙蛋白質(zhì)和任何真核細(xì)胞類型使用本文描迷的發(fā)明，然而條件是，首先鑒定并根據(jù)本文教導(dǎo)利用本發(fā)明稱為表型A^的一個基本元素。所述方法的一個實(shí)施方案給本領(lǐng)域技術(shù)人員提供鑒別所選靶蛋白質(zhì)的抑制劑或活性劑的能力。另一個實(shí)施方案允許本領(lǐng)域技術(shù)人員進(jìn)行快速先導(dǎo)優(yōu)化研究以得到潛在的臨床候選化合物。另一個實(shí)施方案給本領(lǐng)域技術(shù)人員提供設(shè)計具有對指定靶蛋白質(zhì)具有需要程具有選擇性的化合物的能力，所述靶蛋白質(zhì)家族成員可能與某些耙一起存在?；衔?包括已經(jīng)批準(zhǔn)的藥物)治療功效的改進(jìn)是藥學(xué)研究中一個重要的重復(fù)出現(xiàn)的問題。一個通常采用的方法是從已知的化學(xué)結(jié)構(gòu)開始，然后對所述結(jié)構(gòu)進(jìn)行其他化學(xué)修飾以改進(jìn)其效力、特異性(針對靶蛋白質(zhì))、或與患者治療功效相關(guān)的其它參數(shù)。在一些情況下，起始結(jié)構(gòu)可以是已知藥物。在其它情況下可以簡單地是使用無細(xì)胞或基于原代細(xì)胞篩選試驗(yàn)鑒定的最初篩選命中。在其它情況下，所述化合物可以是基于篩選命中或其它模型結(jié)構(gòu)的以最低限度定義的最初化學(xué)結(jié)構(gòu)，且通常稱為"骨架"。就本發(fā)明目的而言，骨架定義為相對于代表性化合物除去一個或多個側(cè)鏈或環(huán)取代的化學(xué)結(jié)構(gòu)，所述代表性化合物在其他方面其具有相同的骨架。例如，表4中第三個化合物可認(rèn)為是骨架。本發(fā)明一個重要的貢獻(xiàn)是表型反應(yīng)的使用，以及確定第一化合物相對于第二化合物的細(xì)胞特異性以便確定第一化合物相對于第二化合物是否展現(xiàn)出改進(jìn)的細(xì)胞特異性。本文描述的發(fā)明中首次報導(dǎo)的所述方法代表對現(xiàn)有技術(shù)的一個根本進(jìn)步?，F(xiàn)有技術(shù)依賴于無細(xì)胞測試系統(tǒng)，其利用純化或重組產(chǎn)生的蛋白質(zhì)來測試化合物活性，并比較指定化合物對耙蛋白質(zhì)與對其他蛋白質(zhì)的作用，所述的其他蛋白質(zhì)與靶蛋白質(zhì)通常(密切或不密切)相關(guān)?？梢栽谖墨I(xiàn)中發(fā)現(xiàn)許多這類現(xiàn)有技術(shù)方法的實(shí)例，包括Hanke等人，1996，Warmuth等人，US2003/0162222Al，KnightandShokat，2005，和其中的參考文獻(xiàn)。在鑒定和優(yōu)化指定骨架的細(xì)胞特異性和治療功效方面，所述較老類型的無細(xì)胞方法與本發(fā)明相比，效率要低得多或完全無效。本發(fā)明的實(shí)質(zhì)改進(jìn)來自至少三個關(guān)鍵元素。第一，表型反應(yīng)的概念，當(dāng)與測量指定化合物(例如通過確定其CSG來測定)的細(xì)胞特異性一起使用時，提供允許鑒定可能以改進(jìn)的、功能上更有效的方式與靶蛋白質(zhì)相互作用的化合物的系統(tǒng)。第二，本發(fā)明提供鑒定化合物的方法，所述化合物還能與其他不同于靶蛋白質(zhì)的細(xì)胞組分相互作用(其包括但不限于信號傳導(dǎo)途徑的上游或下游組分，所述信號傳導(dǎo)途徑涉及乾蛋白質(zhì)例如單或多亞基蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)復(fù)合物、蛋白質(zhì)/核酸復(fù)合物等)，其在特異性信號傳導(dǎo)途徑中起作用或在其中革巴蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)起作用的細(xì)胞傳導(dǎo)途徑的外圍，以促進(jìn)關(guān)注的疾病狀態(tài)，例如所選的人類癌癥形式。由于在更高級有序的生物體(例如人)細(xì)胞中存在的信號傳導(dǎo)級聯(lián)的復(fù)雜性，目前狀態(tài)的現(xiàn)有技術(shù)不能完全了解關(guān)于其中指定靶蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)起作用的所有機(jī)理。第三，本發(fā)明排除了與其他非靶蛋白質(zhì)交叉反應(yīng)的化合物，所述非靶蛋白質(zhì)不參與為其中靶蛋白質(zhì)起作用的疾病狀態(tài)的基礎(chǔ)的信號傳導(dǎo)途徑。本發(fā)明排除所述化合物(其將會對患者產(chǎn)生不利的副作用)的能力來自使用表型反應(yīng)的化合物的細(xì)胞特異性的直接比較測試，其根本上排除了對照細(xì)胞的作用。如果與參照化合物相比指定測試化合物的作用導(dǎo)致降低的細(xì)胞特異性，那么可以立即排除該化合物。測試化合物對靶蛋白質(zhì)的效果是否更低，或測試化合物是否與其他不參與靶蛋白質(zhì)的信號傳導(dǎo)途徑的非靶蛋白質(zhì)相互作用(所述信號傳導(dǎo)途徑調(diào)節(jié)與靶蛋白質(zhì)相關(guān)的表型反應(yīng))，或測試化合物是否只是細(xì)胞毒性的，這些都是不相關(guān)的且只是出于學(xué)術(shù)興趣。關(guān)鍵的一點(diǎn)是測試化合物治療有效性更低且不用作進(jìn)一步考慮。這為本領(lǐng)域技術(shù)研究人員節(jié)約了評價各種化學(xué)結(jié)構(gòu)的時間和精力。對于讀者來說重要的是，識別可能針對無細(xì)胞測試系統(tǒng)中的靶非常有效力并高度有效的化合物可能顯示相對低的CSG測定并因此可能被很快排除，從而節(jié)省了時間和先前的資源。本發(fā)明前述的關(guān)鍵優(yōu)點(diǎn)沒有在現(xiàn)有技術(shù)中發(fā)現(xiàn)，且提供了本發(fā)明相對現(xiàn)有技術(shù)本質(zhì)上的改進(jìn)。將這些優(yōu)點(diǎn)應(yīng)用于所有潛在治療靶蛋白質(zhì)，但對難處理、高度抗藥性的把蛋白質(zhì)(已知為theramuteins)而言是尤其重要的(WO2005/115992)。作為使用本發(fā)明的結(jié)果，大大簡化和提高了改進(jìn)和優(yōu)化指定化合物(相對于其他效率較低的化合物)的問題。本領(lǐng)域技術(shù)人員簡單地從第一化合物開始，無論它是否為批準(zhǔn)的藥物、篩選命中、或?yàn)橐阎种苹蚧罨P(guān)注蛋白質(zhì)的基本骨架，并使用第一化合物作為參考目的的起始點(diǎn)。然后，使用現(xiàn)在本領(lǐng)域中標(biāo)準(zhǔn)的基本藥物化學(xué)合成方法合成其他化合物，所述其他化合物為第一化合物的類似物、同系物、異構(gòu)體等(本文也稱為"起始化合物"或"參考化合物")。在本文的其他部分參考了部分這些化學(xué)合成方法，且讀者還可以參考Burbaum等人，1995和Goodnow等人，2003作為所述方法的一般參考。一旦合成了其他化合物，本領(lǐng)域技術(shù)人員開始使用本發(fā)明的方法而不是通常指由無細(xì)胞測試獲得的結(jié)果(通過測試新化合物對靶蛋白質(zhì)和一批其他非靶蛋白質(zhì)以嘗試使所述化合物與其他蛋白質(zhì)的交叉反應(yīng)最小化)的現(xiàn)有技術(shù)方法。相反，通過使用本發(fā)明，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以通過直接參考由使用基于本發(fā)明表型反應(yīng)的細(xì)胞測試系統(tǒng)測定每個待測化合物的CGS獲得的結(jié)果來指導(dǎo)起始化合物化學(xué)結(jié)構(gòu)的改進(jìn)。最重要地，整體排除了持續(xù)依賴于無細(xì)胞、純化蛋白質(zhì)測試的結(jié)果，包括上述在Hanke等人(1996)和KnightandShokat(2005)中參考的"kinase如本文鑒定的化合物的活性所示，其對高度抗藥性的theramuteinp210Bcr-AblT315I是有效的(如表4所示)。不限制本領(lǐng)域技術(shù)人員在無細(xì)胞系統(tǒng)中獨(dú)立測試所得的任何化合物用以獨(dú)立確認(rèn)(如果需要的話)，但這對于實(shí)施本發(fā)明是決不需要的。在本發(fā)明之前，尚未證實(shí)基于細(xì)胞應(yīng)答的藥物發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)能鑒定和對所選的耙蛋白質(zhì)的抑制劑或活性劑進(jìn)行排序，而不用先參考無細(xì)胞、純化蛋白配體結(jié)合測試或酶測試(當(dāng)靶蛋白質(zhì)是酶時)以確立正在研究的化合物確實(shí)與靶蛋白質(zhì)結(jié)合。這些結(jié)果首次證實(shí)，使用基于細(xì)胞應(yīng)答的測試系統(tǒng)作為主要工具從在高通量篩選(HTS)中評分為正的化合物中鑒定指定靶蛋白質(zhì)的抑制劑或活性劑。這些結(jié)果還證實(shí)一旦鑒定命中或先導(dǎo)化合物能活化或抑制指定靶蛋白質(zhì)(通過任何方法，包括本文公開的實(shí)施例或通過經(jīng)典的無細(xì)胞HTS方法)，所述化合物也可以是化學(xué)優(yōu)化的(即，可以對所述隨后依賴于無細(xì)胞純化蛋白質(zhì)測試系統(tǒng)以獨(dú)立驗(yàn)證/確認(rèn)在先導(dǎo)優(yōu)化過程中合成的各個連續(xù)化合物的抑制或活化能力。僅這個實(shí)施方案給本領(lǐng)域技術(shù)人員節(jié)省了大量的時間、精力和大量的實(shí)驗(yàn)室資源，這些通常在釆用經(jīng)典的無細(xì)胞純化蛋白質(zhì)測試、放射性配體結(jié)合測試等產(chǎn)生和獨(dú)立確認(rèn)抑制或活化性質(zhì)是需要花費(fèi)的。本文證實(shí)的方法使用涉及慢性骨髓性白血病(CML)的發(fā)展和進(jìn)行中的引起癌癥的蛋白質(zhì)的特異性突變形式。所述蛋白稱為Abelson蛋白激酶，以其引起癌癥的形式為某些酪氨酸激酶抑制劑例如甲磺酸伊馬替尼(imatinib)的一個已知的草巴。然而，如下面詳細(xì)討i侖的，所述生。Abelson激酶的所述形式稱為theramutein。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，鑒定了能抑制或活化指定theramutein的合適先導(dǎo)化合物。在本發(fā)明的另一個實(shí)施方案中，優(yōu)化先導(dǎo)化合物。所述方法對鑒定命中、所述命中的先導(dǎo)優(yōu)化(無論最初是如何鑒定了所述命中)、和涉及非theramutein內(nèi)源性靼蛋白質(zhì)的化合物的生物識別是有效的。使用由隱含賦予高度抗藥性的T3151突變的Abelson激酶的突變形式組成的theramutein證實(shí)了所述方法的一般用途。本發(fā)明進(jìn)一步涉及為蛋白質(zhì)的變體形式的抑制劑或活化劑的活性劑。本發(fā)明還涉及為內(nèi)源性蛋白質(zhì)的某些變體形式的抑制劑或活化劑的活性劑。特別關(guān)注的是由已經(jīng)突變的基因編碼的內(nèi)源性蛋白質(zhì)變體的抑制劑和活化劑，所述的變體通常在接觸已知為相應(yīng)未突變內(nèi)源性蛋白質(zhì)的抑制劑或活化劑的化學(xué)活性劑后產(chǎn)生或至少在已經(jīng)產(chǎn)生后首先得到鑒定。這類蛋白質(zhì)變體(突變蛋白)在本文中稱作"theramuteins"，它們可以自發(fā)在生物體內(nèi)出現(xiàn)(并且在某些情況中預(yù)先存在突變)或所述的突變體可以作為使用當(dāng)能夠抑制所述theramutein的未突變形式(本文稱作"prototheramutein")的指定化學(xué)活性劑治療生物體時產(chǎn)生的選擇壓力的結(jié)果產(chǎn)生。可以理解在某些情況中，prototheramutein可以為POI的"野生型"形式(例如因失調(diào)產(chǎn)生疾病的蛋白質(zhì))。在其它情況中，prototheramutein為引起疾病的"野生型"蛋白質(zhì)的變體，它已經(jīng)突變且由此促使作為所述在先突變結(jié)果的患病狀態(tài)發(fā)生。Prototheramutein的后一種類型的一個實(shí)例為P2W癌蛋白，并且在315位上隱含蘇氨酸(T)到異亮氨酸(I)突變的這種蛋白質(zhì)的突變體形式稱作P210腦-肌-T3151,并且為theramutein的一個實(shí)例。本文所用的命名"P210BeR-ABL"與術(shù)語"P210B"—Abl"、"野生型Bcr-Abl蛋白質(zhì)，，等為同義詞。Theramuteins為一類罕有的內(nèi)源性蛋白質(zhì)，它們隱含了賦予所述蛋白質(zhì)對藥物的抗性的突變，已知所述的藥物以治療有效方式抑制或活化它們的未突變對應(yīng)體。目前已知編碼少數(shù)幾種這類蛋白質(zhì)的內(nèi)源性基因在某些情況下表現(xiàn)出這類突變。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及抑制Abelson酪氨酸激酶蛋白質(zhì)的某些耐藥性突變體(theramuteins)的組合物，所述的Abelson酪氨酸激酶蛋白質(zhì)在文獻(xiàn)中最初稱作P210-Bcr-Ab1，它涉及慢性髓細(xì);l包性白血病的發(fā)生。本發(fā)明的方法特別涉及鑒定蛋白質(zhì)的掙^^抑制劑或化W的方法。術(shù)語"特異性"在上下文中術(shù)語"抑制劑，，或"活化劑，，中的應(yīng)用(參見下文中的定義)指的是所述的抑制劑或活化劑結(jié)合蛋白質(zhì)并且抑制或活化蛋白質(zhì)的細(xì)胞功能，但不結(jié)合和活化或抑制細(xì)胞中的各種其它蛋白質(zhì)或非-蛋白質(zhì)靶標(biāo)。本領(lǐng)域技術(shù)人員充分了解，在醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)中討論蛋白質(zhì)抑制劑或活化劑的作用時，在#"岸^押辦浙或掙^^活化浙的概念和靶蛋白"特異性"的相關(guān)概念方面存在一定程度的可變性。因此，就本發(fā)明的目的而言，物質(zhì)為指定theramutein的特異性抑制劑或特異性活化劑，條件是所述物質(zhì)能夠以指定濃度抑制或活化所述蛋白質(zhì)，4吏得相應(yīng)的表型反應(yīng)(phenoresponse)以適當(dāng)方式得到調(diào)節(jié)，而在相同指定濃度下對相應(yīng)對照細(xì)胞的表型反應(yīng)(如果有的話)不具有可感覺到的作用，所述的相應(yīng)對照細(xì)胞基本上不表達(dá)蛋白質(zhì)。在某些實(shí)施方案中，物質(zhì)可以為兩個密切相關(guān)的蛋白質(zhì)如prototheramutein和其相應(yīng)的theramutein之一的調(diào)節(jié)劑。在其它實(shí)施以調(diào)節(jié)具有相似功能的蛋白質(zhì)的活性。如上所述，除抑制p210^Ab'酪氨酸激酶外，曱磺酸伊馬替尼還能夠抑制在某些胃腸道間質(zhì)瘤中超表達(dá)的c-kit癌基因產(chǎn)物(也為酪氨酸激酶)以及在某些慢性骨髓單核細(xì)胞性白血病(CMML)中表達(dá)的PDGFP受體(也為酪氨酸激酶)。這類化合物有時稱作"適度特異性"抑制劑。一般方法，所述的物質(zhì)將theranmtein活化或抑制到相同程度、并且優(yōu)選到甚至大于能夠抑制該蛋白質(zhì)的相應(yīng)"野生型"形式的已知藥物物質(zhì)的程度(然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員充分了解這類蛋白質(zhì)的所述"野生型"形式已經(jīng)在產(chǎn)生所述蛋白質(zhì)參與的相應(yīng)疾病的過程中突變)。在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了具有通式I的p21(r,-T315Itheramutein的抑制劑<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>(I)其中環(huán)A為5-、6-或7-元環(huán)或7-至12-元稠合雙環(huán)；X'選自N、N-R"或C-R1;乂2選自N、N-R?；駽-R1;虛線表示任選的雙鍵；各個f獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CN、CF3、N02、OR11、_(CH2hC(0)(CH》《R11、-(CH2)PC(0)N(R12)(R13)、-(CH^CWCKCH^R^—(CH2hN(R11)(CH2)eC(0)Rn、-(CH2),N(R12)(R13)、-(CH丄N(R11)(Ciy。R11、-NOOX、-OC(0)N(R12)(R13)、-S02N(R12)(R13)、卣素、芳基和雜環(huán)組成的組，并且另外或可選地，相鄰環(huán)原子上的兩個R'基團(tuán)形成含有0-3個雜原子的5-或6-元稠合環(huán)；/為0-6;各個R"獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；各個1112和R"獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；或R"和R"可以與它們所連接的氮一起形成可以任選地含有一個額外雜原子的5-至7-元環(huán)；其中5-至7-元環(huán)可以任選被1至3個獨(dú)立選自烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CN、CF3、N02、0R。、C02R。、C(0)R。、閨素、芳基和雜環(huán)的取代基取代；/為0-4;《為0-4;R2選自-CR21「、-肌226-和-(C=R23)-;各個R21獨(dú)立地選自H、卣素、-NH2、-N(H)(Ch烷基)、-N(Ch烷基)2、-0-(Cw烷基)、0H和Cw烷基；各個R22獨(dú)立地選自H和Cw烷基；R"選自0、S、N-R。和N-0R。;R3選自-CR-、-NR3V、-S0f和-(C-R")-;各個R"基團(tuán)選自H、卣素、-NH2、-N(H)(R。)、-N(R°)2、-O-R0、0H和Cw烷基；各個R"基團(tuán)選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、C02R°、C(0)R。、芳基和雜環(huán)；R"選自0、S、N-R"和N-0R°;R"選自H、N02、CN、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；R4選自-CR"e-、-NR"廣、-(C=R43)-、-SO廣和-O-;各個R"選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、C02R°、C(0)R°、芳烷基、芳基和雜環(huán)；各個R"基團(tuán)選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、C02R°、C(0)R°、芳基和雜環(huán)；各個R"各自選自0、S、N-R。和N-0R。;條件是當(dāng)^為-NR、-且！^為-NR-時，113不為-NR-;f和r不同時分別選自-(OR33)-和-(OR")-;且R3和R4不同時選自-SO廣;R5選自-Y-R>-Z-R7;Y選自化學(xué)鍵、0、NR。；f選自烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；Z為帶有1-4個碳原子并且任選地被卣素、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、C02R°、C(0)R。、C(0)N(R。)2、CN、CF3、N(R。)2、N02和OR。中的一個或多個取代的烴鏈；R'為H或選自芳基和雜環(huán)；各個R"獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；a為1或2;6為0或1c為1或2d為0或1e為1或2;且/為0或1本發(fā)明提供了治療癌癥和其它疾病的基礎(chǔ)新方式，其中無論通過何種機(jī)制，使用現(xiàn)存的藥物化合物治療后均跟隨可鑒定的(臨床顯著的)theramutein-介導(dǎo)的藥物抗性，通過提供在theramuteins產(chǎn)生和照此鑒定時(Wakai等，2004報導(dǎo)了一個實(shí)例，其中theramutein可以在持續(xù)治療方案過程中產(chǎn)生)或在表達(dá)theramutein的細(xì)胞的臨床顯著性群體過度生長前預(yù)先給予備選藥物來進(jìn)行。此外，如果對特定疾病的藥物治療在表達(dá)藥物靶向的蛋白質(zhì)的某種theramutein的個體亞群中有效性較低，那么本發(fā)明能夠通過提供有效針對所述theramutein的備選藥物物質(zhì)來適應(yīng)那些受試者的治療。本發(fā)明提供了測定化學(xué)活性劑作為細(xì)胞中theramutein的調(diào)節(jié)劑是否至少與作為已知的相應(yīng)prototheramutein調(diào)節(jié)劑的物質(zhì)同樣有效的方法。該方法的一個實(shí)施方案包括〗吏表達(dá)prototheramutein并且能夠表現(xiàn)出反應(yīng)性表型特征(與細(xì)胞中prototheramutein的功能相關(guān))的對照細(xì)月包與已知的prototheramutein調(diào)節(jié)齊寸接觸，4吏表達(dá)theramutein并且也能夠表現(xiàn)出反應(yīng)性表型特征(與細(xì)胞中theramutein的功能相關(guān))的測試細(xì)胞與化學(xué)活性劑接觸，并且比較測試細(xì)胞的反應(yīng)與處理的對照細(xì)胞的反應(yīng)；以便確定該化學(xué)活性劑作為theramutein的調(diào)節(jié)劑至少與作為已知的prototheramutein調(diào)節(jié)劑的物質(zhì)同樣有效。在某些其它實(shí)施方案中，一種類型的對照細(xì)胞可能完全不表達(dá)prototheramutein。在其它實(shí)施方案中，對照細(xì)胞可以表達(dá)的prototheramutein的量與測試細(xì)胞表達(dá)的theramutein的量大體相同。在其它實(shí)施方案中，在某些條件下，對照細(xì)胞能夠表現(xiàn)出的反應(yīng)性表型特征的程度與測試細(xì)胞大體相同。在其他實(shí)施方案中，測試細(xì)胞可以表達(dá)指定蛋白質(zhì)，而對照細(xì)胞表達(dá)很少或基本上不表達(dá)所述蛋白質(zhì)。本發(fā)明特別關(guān)注的蛋白質(zhì)為那些涉及調(diào)節(jié)功能的Theramuteins,諸如酶；蛋白激酶；酪氨酸激酶；受體酪氨酸激酶；絲氨酸蘇氨酸蛋白激酶；雙向特異性蛋白激酶；蛋白酶；基質(zhì)金屬蛋白酶；磷酸酶；細(xì)胞周期控制蛋白；?？康鞍踪|(zhì)，諸如IRS家族成員；細(xì)胞表面受體；G-蛋白；離子通道；DNA-和RNA-結(jié)合蛋白；聚合酶等。不打算限止可以用于本發(fā)明的theramutein或其他蛋白質(zhì)的類型。同時，已知三種theramuteins:BCR-ABL、c-Kit和EGFR?？赡芘c細(xì)胞中存在的蛋白質(zhì)(包括，例如theramutein或prototheramutein)相關(guān)的任意反應(yīng)性表型特征可以用于本方法，包括例如生長或培養(yǎng)特性、theramutein底物的磷酸化狀態(tài)(或其它修飾)和任意類型的細(xì)胞的暫時特征，正如所定義和詳細(xì)討論的。附圖描述附圖1顯示了不同濃度的化合物2(C2)對未轉(zhuǎn)化的載體對照Ba/F3細(xì)胞(為IL-3依賴性)以及表達(dá)"野生型"p210B"—^的Ba/F3細(xì)胞(命名為p21(r—Abn》和表達(dá)p21()H""'藥物抗性突變林的Ba/FS細(xì)胞的生長和存活率的作用。如本說明書中詳細(xì)描述的用自動化細(xì)胞計數(shù)器測定細(xì)胞計數(shù)和存活率。細(xì)胞計數(shù)由實(shí)心顏色條表示；細(xì)胞存活率由虛線條表示。注意STI-571有效抑制P210細(xì)胞系生長(灰色條)，而甚至在IOlaM濃度下也不能抑制T315I細(xì)胞系生長(白色條)。500nMC2在該劑量響應(yīng)系列范圍內(nèi)表現(xiàn)出最大的特異性缺口。將IOiuM的STI-571與500nM的C2對T315I細(xì)胞系的作用進(jìn)行比較(白色條)?？s寫DMSO:二曱亞砜(用于藥物溶解的溶劑)。附圖2顯示了不同濃度的化合物6(C6)對未轉(zhuǎn)化的載體對照Ba/F3細(xì)胞以及表達(dá)p21()B"—Abl—T""藥物抗性突變林的Ba/F3細(xì)胞的生長和存活率的作用。所有其它詳細(xì)描述均如附圖l中所。附圖3顯示了通過比較篩選中鑒定的不同化合物就其對表達(dá)prototheramutein和theramutein的細(xì)胞系中的作用而言得到的特異性缺口的不同測定結(jié)果?；衔?(C3)顯示了用于鑒定化合物的能力的最佳實(shí)例，該化合物對theramutein所施加的作用甚至大于其相應(yīng)對prototheramutein的作用。(E組).A組對照組DMSO治療；B:陰性異源特異性缺口；C:輕度陽性的異源特異性缺口；D:顯著陽性的同源特異性缺口；e:陽性異源特異性缺口。參見用于解釋的正文。A組對照組DMSO治療；B:陰性異源特異性缺口；C:輕度陽性的異源特異性缺口；D:顯著陽性的同源特異性缺口；參見解釋部分。附圖4顯示了用于自磷酸化活性檢測的重組P210Bcr-Abl野生型和T315I突變體激酶結(jié)構(gòu)域的放射自顯影照片。將200ng蛋白質(zhì)預(yù)先與測試物質(zhì)在標(biāo)準(zhǔn)自磷酸化反應(yīng)條件下一起溫育1O分鐘，然后加入放射性標(biāo)記的ATP并使反應(yīng)在30。C下進(jìn)行30分鐘，此后通過SDS-PAGE分離樣品。將凝膠進(jìn)行銀染色，在真空中干燥并且接觸X-光片。注意在IO)iMSTI571對野生型P210Bcr-AM有效的同時，它實(shí)際上在濃度甚至達(dá)100jLiM時對T315I激酶結(jié)構(gòu)域無效。"P210細(xì)胞系"指的是表達(dá)p210BCR—肌-wt的細(xì)胞。"T315I細(xì)胞系，，指的是表達(dá)p210,ABl—13151的細(xì)胞。附圖5表示本發(fā)明有代表性的化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。附圖6表示本發(fā)明有代表性的化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。附圖7表示本發(fā)明有代表性的化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。附圖8表示本發(fā)明有代表性的化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。附圖9表示本發(fā)明有代表性的化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。附圖10表示本發(fā)明有代表性的化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。附圖ll表示本發(fā)明有代表性的化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。附圖12表示本發(fā)明有代表性的化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。附圖13表示本發(fā)明有代表性的化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。附圖14表示對測試細(xì)胞和對照細(xì)胞而言具有1的細(xì)胞特異性缺口的假定化合物對生長速率的抑制作用。附圖15表示對測試細(xì)胞和對照細(xì)胞而言具有40的細(xì)胞特異性缺口的假定化合物對生長速率的抑制作用。附圖16表示在顯著低于細(xì)胞毒性的表觀I"的濃度下曱磺酸伊馬替尼的生長抑制作用。附圖17表示不同濃度的C2和各種C2類似物對表達(dá)p2ioB"51抗藥性突變體的Ba/F3細(xì)胞的生長的作用。附圖18表示在20jiM濃度的C2和各種C2類似物存在下，T3151突變激酶結(jié)構(gòu)域的標(biāo)準(zhǔn)無細(xì)胞蛋白激酶自磷酸化測定結(jié)果。發(fā)明詳述本文所用的術(shù)語"鹵素(halo)"或"鹵素(halogen)"包括氟、氯、溴和石輿。本文所用的術(shù)語"烷基"關(guān)注的是帶有l(wèi)-6個碳原子的取代和未被取代的直鏈和支鏈烷基。優(yōu)選的烷基包括曱基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基等。另外，烷基可以任選地被一個或多個選自卣素、CN、C02R、C(0)R、C(0)NR2、NR2、環(huán)-氨基、N02和0R的取代基取代。本文所用的術(shù)語"環(huán)烷基"關(guān)注的是取代和未被取代的環(huán)烷基。優(yōu)選的環(huán)烷基為那些含有3-7個碳原子的單環(huán)，并且包括環(huán)丙基、環(huán)戊基、環(huán)己基等。其它環(huán)烷基可以選自C「d。雙環(huán)系或C9-C"三環(huán)系。另外，環(huán)烷基可以任選地被一個或多個選自鹵素、CN、C02R、C(0)R、C(0)NR2、NR2、環(huán)-氨基、N02和0R的取代基取代。本文所用的術(shù)語"鏈烯基"關(guān)注的是取代和未被取代的直鏈和支鏈烯基團(tuán)。優(yōu)選的鏈烯基為那些含有2-6個碳原子的鏈烯基。另外鏈烯基可以任選地被一個或多個選自卣素、CN、C02R、C(O)R、C(0)NR2、NR2、環(huán)-氨基、N02和0R的取代基取代。本文所用的術(shù)語"炔基"關(guān)注的是取代和未被取代的直鏈和支鏈炔基。優(yōu)選的炔基為那些含有2-6個碳原子的炔基。另外，炔基可以任選地被一個或多個選自鹵素、CN、C02R、C(0)R、C(0)NR2、NR2、環(huán)-氨基、N02和0R的取代基取代。本文所用的術(shù)語"芳烷基"關(guān)注的是帶有芳族基團(tuán)作為取代基的烷基，所述的芳族基團(tuán)可以被取代和未被取代。芳烷基可以任選地在芳基上被一個或多個取代基取代，所述的取代基選自面素、CN、CF3、NR2、環(huán)-氨基、N02、OR、CF3、—(CH2),R、-(CH2)X(0)(CH2)yR、-線)X(O)N(R')(R")、-(CH2),C(0)0(CH2)^、-(CH2),N(R')(R")、—N(R)S02R、-0(CH2),C(0)N(『)(R")、-S02N(R')(R")、一(CH2),N(R)-(CH2)廣R、-(CH2),N(R)-C(0)—(CH2)廣R、—線),N(R)-C(0)-0-(CH2),-R、-(CH2),-C(0)_N(R)-(CH2),.-R、-(CH2)X(0)N(R)-(CH》，-R、-O-(CH2)(0)—N(R)-(CH2),-R、取代和未被取代的烷基、取代和未被取代的環(huán)烷基、取代和未被取代的芳烷基、取代和未被取代的鏈烯基、取代和未被取代的炔基、取代和未被取代的芳基和取代和未被取代的雜環(huán)，其中所述取代的烷基、取代的環(huán)烷基、取代的芳烷基、取代的鏈烯基、取代的炔基、取代的芳基和取代的雜環(huán)可以被鹵素、CN、CF3、C02R、C(O)R、C(0)NR2、NR2、環(huán)-氨基、N02和0R中的一個或多個取代。本文所用的術(shù)語"雜環(huán)基"或"雜環(huán)"關(guān)注的是帶有至少一個雜原子作為環(huán)成員的芳族和非-芳族環(huán)狀基團(tuán)。優(yōu)選的雜環(huán)基為那些含有5或6個環(huán)原子的包括至少一個雜原子的雜環(huán)基，并且包括環(huán)狀胺類，諸如嗎啉代、p底咬子基、吡p各烷并等；和環(huán)醚類，諸如四氫呋喃、四氫吡喃等。芳族雜環(huán)基，也稱作"雜芳基"關(guān)注的是可以包括1-3個雜原子的單—環(huán)雜-芳族基團(tuán)，例如吡咯、呋喃、噢吩、咪唑、，，惡唑、漆哇、三哇、吡唑、吡咬、吡*、噠溱、嘧啶等。本文所用的術(shù)語雜芳基還包括帶有兩個或多個環(huán)的多環(huán)雜-芳族系統(tǒng)，其中的兩個原子為兩個相鄰的環(huán)共用(這些環(huán)是"稠合的")，其中環(huán)中的至少一個為雜芳基，例如其它環(huán)可以為環(huán)烷基、環(huán)烯基、芳基、雜環(huán)和/或雜芳基。多環(huán)雜芳族系統(tǒng)的實(shí)例包括喹啉、異喹啉、四氫異喹啉、喹喔啉、quinaxoline、苯并咪唑、苯并吹喃、噤呤、咪峻并p比咬、苯并三哇等。另外，雜環(huán)基可以任選地被如下基團(tuán)取代鹵素、CN、CF3、NR2、環(huán)-氨基、N02、0R、CF3、—(CH2)X(0)(CH2)yR、-(CH2)X(0)N(RO(R")、—(CH2)X(0)0(CH2),R、-(CH2)J(RO(R")、一N(R)S02R、—0(CH2)X(0)N(RO(R")、-S02NOT)(R")、-(C(R)-線),R、-(CH2),N(R)-C(0)-(CH2)廣R、-(CH2),N(R)—C(0)—0—(CH2)、-(CH2),C(0)-N(R)-(CH2),-R、-(CH2)X(0)N(R)-(CH2)「R、-0-(CH2),-C(0)-N(R)—(CH2)廠R，取代和未被取代的烷基、取代和未被取代的環(huán)烷基、取代和未被取代的芳烷基、取代和未被取代的鏈烯基、取代和未被取代的炔基、取代和未^皮取代的芳基和取代和未被取代的雜環(huán)，其中所述取代的烷基、取代的環(huán)烷基、取代的芳烷基、取代的鏈烯基、取代的炔基、取代的芳基和取代的雜環(huán)可以被鹵素、CN、CF3、C02R、C(0)R、C(0)NR2、NR2、環(huán)-氨基、N02和0R中的一個或多個取。本文所用的術(shù)語芳基或芳族基團(tuán)，關(guān)注的是帶有至少一個氮原子作為環(huán)成員的芳族和非-芳族環(huán)狀基團(tuán)。優(yōu)選的環(huán)氨基為那些含有5或6個環(huán)原子的包括至少一個氮原子的環(huán)氨基，并且包括嗎啉代、哌啶子基、吡咯烷并、艱p秦并、，朱唑、嚙唑、噢唑、三唑、p比唑、吡咬、吡，秦、噠嗪、嘧啶等。此外，環(huán)-氨基可以任選被鹵素、CN、CF3、NR2、N02、0R、CF3、取代和未被取代的烷基、取代和未被取代的環(huán)烷基、取代和未被取代的芳烷基、取代和未被取代的鏈烯基、取代和未被取代的炔基、取代和未被取代的芳基、和取代和未被取代的雜環(huán)取代，其中取代的烷基、取代的環(huán)烷基、取代的芳烷基、取代的鏈烯基、取代的炔基、取代的芳基和取代的雜環(huán)可以被一個或多個鹵素、CN、CF3、C02R、C(0)R、C(0)NR2、NR2、N。2和0R取代。本文所用的術(shù)語"芳基"或"芳族基團(tuán)"關(guān)注的是單-環(huán)芳族基團(tuán)(例如苯基、吡啶基、吡唑基等)和多環(huán)環(huán)系(萘基、會啉等)。多環(huán)可以帶有兩個或多個環(huán)，其中的兩個原子為兩個相鄰的環(huán)共用(這些環(huán)是"稠合的")，其中環(huán)中的至少一個為芳族環(huán)，例如其它環(huán)可以為環(huán)烷基、環(huán)烯基、芳基、雜環(huán)和/或雜芳基。另外，芳基可以任選地被一個或多個取代基取代，所述的取代基選自卣素、CN、CF3、NR2、環(huán)-氨基、N02、OR、CF3、-(CH2)X(0)咖，R、-(CH2)X(0)N(R')(R")、-(CH2)X(0)0(CH2),R、-(CH2),N(R')(R")、—N(R)S02R、—0(CH2)X(0)N(R')(R")、-S02N(R')(R")、-(CH2)細(xì)-(CH2)7-R、-(CH2),N(R)-C(0)-(CH2),-R、-(CH2),N(R)-C(0)-0-(CH2)廣R、-(CH2),C(0)-N(R)-(CH2)廣R、—(CH2),C(0)N(R)-(CH2)廣R、-O-(CH2)廣C(0)-N(R)—(CH2)廣R、取代和未被取代的烷基、取代和未被取代的環(huán)烷基、取代和未被取代的芳烷基、取代和未被取代的鏈烯基、取代和未^皮取代的炔基、取代和未被取代的芳基和取代和未被取代的雜環(huán)，其中所述取代的烷基、取代的環(huán)烷基、取代的芳烷基、取代的鏈烯基、取代的塊基、取代的芳基和取代的雜環(huán)可以被卣素、CN、CF3、C02R、C(O)R、C(0)NR2、NR2、環(huán)-氨基、N02和0R中的一個或多個取代。本文所用的術(shù)語"雜原子"，特別是作為環(huán)雜原子指的是N、O和S。各個R獨(dú)立地選自H、取代和未被取代的烷基、取代和未被取^的環(huán)烷基、取代和未被取代的芳烷基、取代和未被取代的芳基和取代和未被取代的雜環(huán)，其中所述取代的烷基、取代的環(huán)烷基、取代的芳烷基、取代的芳基和取代的雜環(huán)可以被一個或多個鹵素、CN、CF3、OH、C02H、N02、d—6烷基、-O-(CH烷基)、-NH2、-NH(C卜6烷基)和-N(d—6烷基)2取代。各個R'和R"獨(dú)立地選自H、或取代和未被取代的烷基、取代和未被取代的環(huán)烷基、取代和未被取代的芳烷基、取代和未被取代的芳基和取代和未被取代的雜環(huán)，其中所述取代的烷基、取代的環(huán)烷基、取代的芳烷基、取代的芳基和取代的雜環(huán)可以被一個或多個卣素、CN、CF3、0H、C02H、N02、d—6烷基、-O-(C卜6烷基)、-NH2、-NH(C^烷基)和-N(d—6烷基)2取代；或IT和R"可以與它們所連接的氮一起形成可以任選地含有至多三個額外雜原子的5-至7-元環(huán)，所述雜原子可以被Ch坑基取代。每個x^每個j^蟲立地選自0-4。在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了具有通式I的P210眼—ABL-T3151theramutein的抑制劑環(huán)A為5-、6-或7-元環(huán)或7-至12-元稠合雙環(huán)；X'選自N、N-R?；駽-R1;X'選自N、N-R?；駽-R1;虛線表示任選的雙鍵；各個f獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CN、CF3、N02、OR11、-(CH2)X(0)(CH2)R"、-(CH2)PC(0)N(R12)(R13)、-(CH2)PC(0)0(CH2)《R11、-(CH2)PN(R11)(CH2)9C(0)Ru、-(CH2),N(R12)(R13)、-N(R")S02R11、-OC(0)N(R12)(R13)、-S02N(R12)(R13)、卣素、芳基和雜環(huán)組成的組，并且另外或可選地，相鄰環(huán)原子上的兩個f基團(tuán)形成含有0-3個雜原子的5-或6-元稠合環(huán)；;7為0-6;各個RH獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；各個R"和R"獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；或R"和R"可以與它們所連接的氮一起形成可以任選地含有一個額外雜原子的5-至7-元環(huán)；其中5-至7-元環(huán)可以任選被1至3個獨(dú)立選自烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CN、CF3、N02、0R。、C02R°、C(0)R。、卣素、芳基和雜環(huán)的取代基取代；/為0-4;《為0-4;R2選自-CR21a-、-服226-和-(C-R23)-;各個R"獨(dú)立地選自H、卣素、-NH2、-N(H)(CH烷基)、-N(C卜3烷基)2、-0-(Cw烷基)、0H和CH烷基；其中:各個R22獨(dú)立地選自H和Cw烷基；R23選自-0、s、n-r。和n-or°;R3選自-cr-、-nr3V、-S02-和-(c-r")-；r"基團(tuán)各自選自h、鹵素、-nh2、-n(h)(r。)、-n(r°)2、-0-r。、oh和c卜3烷基；r"基團(tuán)各自選自h、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、C02rq、c(0)r。、芳基和雜環(huán)；r"選自0、s、n-r"和n-or°;r"選自h、N02、cn、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；R4選自-cr-、-nr,-、-(c=r43)-、-so廣和-o-；各個r"選自h、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、C02r°、c(0)r。、芳烷基、芳基和雜環(huán)；各個r"基團(tuán)選自h、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、C02r°、C(0)R。、芳基和雜環(huán)；各個r"選自0、s、n-r。和n-0R、條件是當(dāng)W為-nr"r且W為-nr",-時，f不為-nr-;113和114不同時分別選自-(c=r33)-和-(c=r43)-;且r3和r4不同時選自-so廣;115選自-Y-R6和-Z-R7;y選自化學(xué)鍵、0、nr°;W選自烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；Z為帶有1-4個碳原子并且任選地被面素、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、C02r°、c(o)ro、c(o)n(r。)2、cn、cf3、n(r°)2、N02和0R。中的一個或多個取代的烴鏈；W為h或選自芳基和雜環(huán)；r°各自獨(dú)立地選自h、烷基、環(huán)烷基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；a為1或2;6為0或1;c為1或2;c^為0或1;e為1或2;且/為0或1。本文所述的本發(fā)明中的重要組成部分和概念教導(dǎo)在于本發(fā)明化合物的112和113位置均非任意芳族或非-芳族環(huán)結(jié)構(gòu)的成員。我們發(fā)現(xiàn)帶有112和/或113位置作為任意芳族或非-芳族環(huán)結(jié)構(gòu)的成員的化合物無法有效地抑制T3151theramutein，而除具有其它優(yōu)選的活性基團(tuán)外，在這些位置上缺乏這樣的環(huán)成分的本發(fā)明化合物為T3151theramutein的有效抑制劑。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，環(huán)A為芳族環(huán)。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，乂1或乂2為!1。在另一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，Xi和X2均為N。在本發(fā)明特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，環(huán)A為吡啶環(huán)或嘧啶環(huán)。在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，環(huán)A選自如下提供的結(jié)構(gòu)在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，115是具有下面通式的基團(tuán):其中乂3為N或CH;R"選自芳基和雜環(huán)；Q選自化學(xué)鍵或具有式-O-、-(CH2)「、-(CH2),C(0)(CH2))-、-(CH2)「N(R62)-(CH2)r、-(CH丄C(0)—N(R62)-(CH》廣、-(CH2),C(0)0(CH2)「、—(CH2)iN(R62)C(0)-(CH2)乂-、-(CH2),OC(0)N(R62)—(CH2).一和一O-(CH2),一C(0)N(R62)—(CH2)廠的基團(tuán)；R62選自H、烷基、芳基和雜環(huán)；各個R。獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；力為0至4;i為0至4;且J'為0至4。在本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，R5是具有下面通式的基團(tuán)其中乂3為N或CH;Q'選自化學(xué)鍵或具有式-0-、-CH廣、-NH-、-C(O)-NH-、-C(0)0-、—NH-C(0)—、—0C(0)NH-和一O-C(0)NH-的基團(tuán)；各個R7。選自卣素、烷基、CN、N(R")2、環(huán)-氨基、N02、0R"和CF3;各個R"選自H、烷基、芳基、芳烷基和雜環(huán)；且k為0至4。在本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，115是具有下面通式的基團(tuán)其中X3為N或CH;Q'選自化學(xué)鍵或具有式-0-、-CH2-、-NH-、-C(O)-NH-、-C(O)O-、-NH-C(0)-、-OC(0)NH-和-O-C(0)NH-的基團(tuán)；R7o選自由素、烷基、CN、N(R71)2、環(huán)-氨基、N02、OR"和CF3;且各個R"選自H、烷基、芳基、芳烷基和雜環(huán)。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，做出了一個或多個的下述選擇(^為-NH-;乂3為&各個R"獨(dú)立地選自H、曱基和乙基，且各個R"優(yōu)選為甲基；和/或R"選自0H、OCH3、鹵素和CF"在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，如果R2或R4被分別選為-NR2V或-NR42-，那么R"不選自卣素、-NH2、-N(H)(R。)、-N(R°)2、-0-R?；?H。在另一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了具有通式L的P21(T普"151theramutein的抑制劑:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage28</formula>其中環(huán)A為5-、6-或7-元環(huán)或7-至12-元稠合雙環(huán)；X1選自N、N-R。或C-R1;X'選自N、N-R0或C-R、虛線表示任選的雙鍵；各個R'獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CN、CF3、N02、0R11、—(CH2),(0)(CH》,R11、—(CH2),C(0)N(R12)(R13)、-(CH2hC(0)0(C11、-(CH2)PN(R11)(CH丄C(O)R11、-(CH2),N(R12)(R13)、-N(R")S(U11、-OC(0)N(R12)(R13)、-S02N(R12)(R13)、鹵素、芳基和雜環(huán)組成的組，并且另外或可選地，相鄰環(huán)原子上的兩個^基團(tuán)形成含有0-3個雜原子的5-或6-元稠合環(huán)；n為0-6;各個R"獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；各個R"和R"獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；或^和R"可以與它們所連接的氮一起形成可以任選地含有一個額外雜原子的5-至7-元環(huán)；其中5-至7-元環(huán)可以任選被1至3個獨(dú)立選自烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CN、CF3、N02、0R°、C02RD、C(0)R°、卣素、芳基和雜環(huán)的取代基取代；p為0-4;q為0-4;各個R22獨(dú)立地選自H和C1-3烷基；R3選自-CR31C-、-NR32、-S02-和-(C-R33)-;各個R32基團(tuán)選自H、鹵素、-NH2、-N(H)(R0)、-N(R。)2、-0-R0、0H和d—3烷基；各個R3基團(tuán)選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、C02R0、C(0)R°、芳基和雜環(huán)；R"選自0、S、N-R"和N-OR°;R"選自H、N02、CN、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；R4選自-CR"廠、-NR"廣、-(C-R")-、-SO廠和-O-;各個R"選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、C02RQ、C(0)R°、芳烷基、芳基和雜環(huán)；各個R"基團(tuán)選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、C02R°、C(0)R°、芳基和雜環(huán)；各個R"選自0、S、N-R。和N-0R。；條件是當(dāng)^為-NR,-時，f不為-NR-;113和114不同時分別選自-(C=R33)-和-(C=R43)-;且R3和R4不同時選自-SO廣;R5選自-Y-R6和-Z-R7;Y選自化學(xué)鍵、0、N-R0;W選自烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；Z為帶有1-4個碳原子并且任選地被卣素、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、C02R。、C(0)R。、C(0)N(R。)2、CN、CF3、N(RQ)2、N02和0Rn中的一個或多個取代的經(jīng)鏈；R7為H或選自芳基和雜環(huán)；R。各自獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；■2為1或2:6為0或1c為1或2cT為0或1e為1或2;且/"為0或1。在另一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了具有通式Ib的P210腦一脂3151theramutein的抑制劑:其中環(huán)A為5-、6-或7-元環(huán)或7-至12-元稠合雙環(huán)；Xi選自N、N-RO或C-R1;X'選自N、N-R。或C-R1;虛線表示任選的雙鍵；W各自獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CN、CF3、N02、OR11、-(C(O)(CH2)。R11、-(CH2)PC(0歸12)(R13)、-(CH2)PC(0)0(CH2)。R11、-(CH2)PN(R11)(CH2)aC(0)R11、-(CH2)PN(R12)(R13)、-N(RH)S。2R11、-OC(0)N(R12)(R13)、-S02N(R12)(R13)、囟素、芳基和雜環(huán)組成的組，并且另外或可選地，相鄰環(huán)原子上的兩個W基團(tuán)形成含有0-3個雜原子的5-或6-元稠合環(huán)；/2為0-6;各個R"獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；各個1112和R"獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；或R"和R"可以與它們所連接的氮一起形成可以任選地含有一個額外雜原子的5-至7-元環(huán)；其中5-至7-元環(huán)可以任選被1至3個獨(dú)立選自烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CN、CF3、N02、OR0、C02R。、C(0)R。、卣素、芳基和雜環(huán)的取代基取代；/為0-4;《為0-4;各個R"各自獨(dú)立地選自H和Cw烷基；各個R"基團(tuán)選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、C02R°、C(0)R。、芳基和雜環(huán)；IT選自-CR41e-、-(C-R")-、-SO廣和-0-；R"各自選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈?；?、炔基、C02R°、C(0)R°、芳烷基、芳基和雜環(huán)；各個R"選自0、S、N-R。和N-0R°;R5選自-Y-R6和-Z-R、Y選自化學(xué)鍵、0、N-R。；W選自烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；Z為帶有1-4個碳原子并且任選地被卣素、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、C02R。、C(0)R。、C(0)N(R。)2、CN、CF3、N(R。)2、N02和OR。中的一個或多個取代的烴鏈；R'為H或選自芳基和雜環(huán)；R。各自獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；a為1或2:6為0或1:c為1或2d為0或1e為1或2;且/為0或1。在另一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了具有通式I。的<formula>formulaseeoriginaldocumentpage31</formula>其中-.環(huán)A為5-、6-或7-元環(huán)或7-至12-元稠合雙環(huán)；Xi選自N、N-R。或C-R1;義2選自N、N-R"或C-R1;虛線表示任選的雙鍵；f各自獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CN、CF3、N02、0R11、-(CH2);,C(0)(CH2)。R11、-(CH2)X(0)N(R12)(R13)、—(CH2),(0)0(CH2)。R11、一(CH2)PN(R11)(CH2)《C(0)R11、—(CH2),(R12)(R13)、-N(R")S02R11、-OC(0)N(R12)(R13)、-S02N(R12)(R13)、卣素、芳基和雜環(huán)組成的組，并且另外或可選地，相鄰環(huán)原子上的兩個W基團(tuán)形成含有0-3個雜原子的5-或6-元稠合環(huán)；/7為0-6;各個R"獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；各個R"和R"獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；或R"和R"可以與它們所連接的氮一起形成可以任選地含有一個額外雜原子的5-至7-元環(huán)；其中5-至7-元環(huán)可以任選被1至3個獨(dú)立選自烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CN、CF3、N02、0R°、C02R°、C(0)R°、卣素、芳基和雜環(huán)的取代基取代；/7為0-4;《為0-4;乂3為N、CH或C-R2;各個R2獨(dú)立地選自烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CN、CF3、N02、OR21、-(CH》X(0)(CH丄R21、-(CH2)X(0)N(R22)(R23)、-(CH2),C(0)0(CH2),R21、-(CH2),N(R21)C(0)R21、-(CH2),N(R22)(R23)、-N(R21)S02R21、-OC(0)N(R22)(R23)、-S02N(R22)(R23)、閨素、芳基和雜環(huán)組成的組，并且另外或可選地，相鄰環(huán)原子上的兩個R'基團(tuán)形成含有0-3個雜原子的5-或6-元稠合環(huán)；R"獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；R22和R"獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；或R"和R"可以與它們所連接的氮一起形成可以任選地含有一個額外雜原子的5-至7-元環(huán)；其中5-至7-元環(huán)可以任選被1至3個獨(dú)立選自烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CN、CF3、N02、0R°、C02Rfl、C(0)R。、卣素、芳基和雜環(huán)的取代基取代；r為0至4;i"為0至4;/z為0至4;R4選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、C02R°、C(0)R。、芳基和雜環(huán)；s為0或1;、z、z、zR3、和&;各個113獨(dú)立地選自H、N(Rfl)2、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、C02Rfl、C(0)R。、芳烷基、芳基和雜環(huán)組成的組；R3'選自H、N(R°)2、烷基、環(huán)烷基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；并且各個R。獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、芳烷基、芳基和雜環(huán)。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，選擇通式I的R2、113和114以便得到下列化學(xué)基團(tuán)-N(R")-N=C(R")--N(R22)-N(R32)-C(=0)--N(R22)-N(R32)-C(R")(R")--N(R")-C(R31)(R")-C(R")OH--N(R22)-C(R31)(R31)-CH))--N-N-C(R41)(R41)--C(R21)=C=C(R")--C(R21)=C(R31)-C(=0)--C(R21)=C(R31)-C(R")(R")--C(R21)(R21)-C(R31)=C(R")--C(R21)(R21)-C(R31)(R31)-C(=0)--C(R21)(R21)-C(R31)(R31)-C(R")(R")--C(R21)(R21)-N(R32)-C(=0)--C(R21)(R")-N(R32)-C(R41)(R41)--N(R22)-C(=0)-C(R41)(R41)--N(R22)-C(=0)-N(R")--N(R22)-C(=0)-0--C(R21)(R21)-C(=0)-C(R")(R")--C(R21)(R21)-C(=0)-N(R42)--N(R22)-C(=NR34)-N(R")--C(=0)_N(R32)-N(R42).用于R2、113和r的特別優(yōu)選的化學(xué)基團(tuán)包括-N(R22)-N=C(R")--N(R22)-N(R32)-C(=0)--N(R22)-C(R31)(R31)-C(R41)(R")--N(R22)-C(R31)(R31)-C(=0)--C(R21)(R21)-C(=0)-C(R41)(R")--C(R21)(R21)-C(=0)-N(R42)--N(R22)-C(=NR34)-N(R")--C(=0)-N(R32)-N(R42)。在另一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，W或R'為可以任選被取代的芳基。特別優(yōu)選的芳基包括取代或未被取代的苯基和吡啶基。在額外或備選的實(shí)施方案中，優(yōu)選取代基R"和R"獨(dú)立地選自具有小的空間體積的基團(tuán)并且優(yōu)選自H和CH"且更優(yōu)選H。在另一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了具有通式II的p210腦魯"!5!theramutein的抑制劑其中環(huán)A為5-、6-或7-元環(huán)或7-至12-元稠合雙環(huán)；X〗選自N、N-R?；駽-R1;乂2選自N、N-R"或C-R1;虛線表示任選的雙鍵；W各自獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CN、CF3、N02、0R11、-(CH2)pC(0)(CH2)R"、-(CH2)PC(0)N(R12)(R3)、-(ch2),(0)0(ch2),r11、-(ch2)pn(r11)(ch2)。c(0)r11、-(ch2)pn(r12)(r13)、-n(r")S02R11、-oc(0)n(r12)(r13)、-S02n(r12)(r13)、卣素、芳基和雜環(huán)組成的組，并且另外或可選地，相鄰環(huán)原子上的兩個w基團(tuán)形成含有0-3個雜原子的5-或6-元稠合環(huán)；刀為0-6;各個r"獨(dú)立地選自h、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；各個f和r"獨(dú)立地選自h、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；或r"和r"可以與它們所連接的氮一起形成可以4壬選地含有一個額外雜原子的5-至7-元環(huán)；其中5-至7-元環(huán)可以任選被1至3個獨(dú)立選自烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、cn、cf3、n02、0r°、c02r°、c(0)r。、卣素、芳基和雜環(huán)的取代基取代；/7為0-4;《為0-4;R8選自h、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、c02r°、c(0)r。、芳烷基、芳基和雜環(huán)組成的組；R9選自-y-r>-z-r7;y選自化學(xué)鍵、0、n-r°;w選自烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；z為帶有1-4個碳原子并且任選地被卣素、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、co2rfl、c(o)r0、c(o)n(r。)2、cn、cf3、n(r。)2、n02和0r。中的一個或多個取代的烴鏈；it為h或選自芳基和雜環(huán)；且各個r。獨(dú)立地選自h、烷基、環(huán)烷基、芳烷基、芳基和雜環(huán)。在另一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了具有通式il的p210bcr—皿-"151theramutein的抑制劑:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage36</formula>其中環(huán)A為5-、6-或7-元環(huán)或7-至12-元稠合雙環(huán)；乂1選自N、N-R?；駽-R1;X'選自N、N-R。或C-R1;虛線表示任選的雙鍵；f各自獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CN、CF3、N02、OR11、-(CH2)pC(0)(CH2)。RU、-(CH2),C(0)N(R12)(R13)、-(CH2)PC(0)0(CH2)"、-咖PN(R11)C(0)R11、-(CH2)盧(R12)(R13)、-N(RU)S02R11、-OC(0)N(R12)(R13)、-S02N(R12)(R13)、卣素、芳基和雜環(huán)組成的組，并且另外或可選地，相鄰環(huán)原子上的兩個^基團(tuán)形成含有0-3個雜原子的5-或6-元稠合環(huán)；"為0-6;各個R"獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；各個R"和R"獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；或R"和R"可以與它們所連接的氮一起形成可以任選地含有一個額外雜原子的5-至7-元環(huán)；其中5-至7-元環(huán)可以任選被1至3個獨(dú)立選自烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CN、CF3、N02、0R。、C02R。、C(0)R。、卣素、芳基和雜環(huán)的取代基取代；p為0-4;《為0-4;R8選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、C02R°、C(0)R°、芳烷基、芳基和雜環(huán)組成的組；X'為N、CH或C-R5e;各個R"獨(dú)立地選自烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CN、CF3、N02、OR51、-(CH2),C(0)(CH2);R51、-(CH2),C(0)N(R52)(R53)、_(CH2)X(0)0(CH2),R51、-(CH2),N(R51)C(0)R51、-(CH2),N(R52)(R53)、-N(R51)S02R51、-OC(0)N(R52)(R53)、-S02N(R52)(R53)、卣素、芳基和雜環(huán)組成的組，并且另外或可選地，相鄰環(huán)原子上的兩個R"基團(tuán)形成含有0-3個雜原子的5-或6-元稠合環(huán)；R"選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；R"和R"獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；或R"和R"可以與它們所連接的氮一起形成可以任選地含有一個額外雜原子的5-至7-元環(huán)；其中5-至7-元環(huán)可以任選被1至3個獨(dú)立選自烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CN、CF3、N02、0R"、C02R°、C(0)R。、卣素、芳基和雜環(huán)的取代基取代；r為0-4;為0-4/z為0-4且各個R。獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、芳烷基、芳基和雜環(huán)在另一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了具有通式Hb的P2W13151theramutein的抑制劑:其中R"選自H和F;R8選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、C02R°、C(0)R°、芳烷基、芳基和雜環(huán)組成的組；乂3為N、CH或OR60;各個R"獨(dú)立地選自烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CN、CF3、N02、0R°、卣素、芳基和雜環(huán)組成的組；R"選自芳基和雜環(huán)；Q選自化學(xué)鍵或具有式-O-、-(CH丄-、-(CH丄C(0)(CH2)廠、—(CH2),—N(R62)—(CH2)廣、-(CH2),C(0)-N(R62)-(CH2)乂一、-(CH2);C(0)0(CH2)y—、—(CH2),N(R62)C(0)—(CH2)廣、—(CH2);OC(0)N(R62)-(CH2)廠和-O-(CH2)「C(0)N(R62)-(CH2)廣的基團(tuán);R"選自H、烷基、芳基和雜環(huán)；各個R"獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；力為0-4;/為0-4;且乂'為0-4。在通式IIb化合物的優(yōu)選實(shí)施方案中，R"選自鹵素、CF3和0H。在其他優(yōu)選的實(shí)施方式中，R8選自H和CH3。在通式IIb化合物的優(yōu)選實(shí)施方案中，X3為N。在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，Q選自—(CH丄-N(R62)—(CH2)y-、特別在優(yōu)選的實(shí)施方案中，Q為-N(R62)-。在另一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了具有通式IL的P210BeR—ABL—"151theramutein的抑制劑其中環(huán)A為5-、6-或7-元環(huán)或7-至12-元稠合雙環(huán)；X'選自N、N-R"或C-R1;乂2選自N、N-R"或C-R1;虛線表示任選的雙鍵；各個W獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CN、CF3、N02、OR11、-(CH2hC(0)(CH2)R"、-(CH2)PC(0)N(R12)(R13)、-(CH2)PC(0)0(CH2),1、-(CH2)PN(R11)C(0)R11、-(CH2)PN(R12)(R13)、-N(R")S(U11、-OC(O)N(R")(R13)、-S02N(R12)(R13)、卣素、芳基和雜環(huán)組成的組，并且另外或可選地，相鄰環(huán)原子上的兩個f基團(tuán)形成含有0-3個雜原子的5-或6-元稠合環(huán)；/7為0-6;各個R"獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；各個R"和R"獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；或R"和R"可以與它們所連接的氮一起形成可以任選地含有一個額外雜原子的5-至7-元環(huán)；其中5-至7-元環(huán)可以任選被1至3個獨(dú)立選自烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CN、CF3、N02、0R。、C02R。、C(0)R。、卣素、芳基和雜環(huán)的取代基取代；;為0-4;《為0-4;R8選自H和甲基；乂3為N或CH;R"選自芳基和雜環(huán)；Q選自化學(xué)鍵或具有式-0-、-線)「、一(CH2)X(0)(CH2h—、-(CH2)廠N(R62)-(CH2)廠、-(CH2),C(0)-N(R62)—(CH2)、—(CH2)X(0)0(CH2)廣、-(CH2)yN(R62)C(0)一(CH2)廠、—(CH2),OC(0)N(R62)-(CH2)廣和一O-(CH2)廣C(0)N(R62)-(CH2)廠的基團(tuán)；R"選自H、烷基、芳基和雜環(huán)；各個R"獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；/為0-4;/為0-4;且J為0-4。在另一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了具有通式IL的P210BC—T3151theramutein的抑制劑:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage40</formula>其中環(huán)A為5-、6-或7-元環(huán)或7-至12-元稠合雙環(huán)；X'選自N、N-R?；駽-R1;乂2選自N、N-RO或C-R1;虛線表示任選的雙鍵；各個R'獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CN、CF3、N02、OR11、-(CH2)PC(0)(C11、-(CH2)PC(0)N(R12)(R13)、—(CH2)PC(0)0(CH2),R11、-(CH2)PN(R11)C(0)R11、—(CH2)PN(R12)(R13)、-N(Ru)S02Ru、-OC(0)N(R12)(R13)、-S02N(R12)(R13)、卣素、芳基和雜環(huán)組成的組，并且另外或可選地，相鄰環(huán)原子上的兩個R'基團(tuán)形成含有0-3個雜原子的5-或6-元稠合環(huán)；"為0-6;各個RU獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；各個R"和R"獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；或R"和R"可以與它們所連接的氮一起形成可以任選地含有一個額外雜原子的5-至7-元環(huán)；其中5_至7_元環(huán)可以任選被1至3個獨(dú)立選自烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CN、CF3、N02、0R°、C02R°、C(0)R。、卣素、芳基和雜環(huán)的取代基取代；/為0-4;。為0-4;各個R。獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；f選自H和甲基；乂3為N或CH;Qi選自化學(xué)鍵或具有式-0-、-CH廣、-NH-、-C(O)-NH-、-C(O)O-、-NH-C(0)-、-OC(0)NH-和-O-C(0)NH-的基團(tuán);各個1T選自卣素、烷基、CN、N(R71)2、環(huán)-氨基、N02、OR"和CF"各個R"選自H、烷基、芳基、芳烷基和雜環(huán)；并且l為0-4。在另一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了具有通式IL的P21(T垂13151theranmtein的抑制劑:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage41</formula>環(huán)A為5-、6-或7-元環(huán)或7-至12-元稠合雙環(huán)；X'選自N、N-r或C-R1;義2選自N、N-R0或C-R1;虛線表示任選的雙鍵；各個f獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CN、CF3、N02、OR11、-(CH2),(0)(CH2)。R11、-(CH2)PC(0)N(R12)(R13)、-(CH2),(0)0(CH2)《R11、-(CH2)^(R11)C(0)R11、一(CH2),N(R12)(R13)、-N(RH)S(U11、-OC(0)N(R12)(R13)、-S02N(R12)(R13)、鹵素、芳基和雜環(huán)組成的組，并且另外或可選地，相鄰環(huán)原子上的兩個W基團(tuán)形成含有0-3個雜原子的5-或6-元稠合環(huán)；/為0-6;各個R"獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；各個R"和R"獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；或R"和R"可以與它們所連接的氮一起形成可以任選地含有一個額外雜原子的5-至7-元環(huán)；其中5-至7-元環(huán)可以任選被1至3個獨(dú)立選自烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CN、CF3、N02、0R°、C02R°、C(0)R。、卣素、芳基和雜環(huán)的取代基取代；p為0-4;q為0-4;各個R。獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；R8選自H和曱基；其中:乂3為N或CH;Q!選自化學(xué)鍵或具有式-0-、-CH廣、-NH-、-C(O)-NH-、-C(O)O-、-NH-C(0)-、-OC(0)NH-和-O-C(0)NH-的基團(tuán)；各個R7。選自卣素、烷基、CN、N(R71)2、環(huán)-氨基、N02、0R"和CF3;各個R"選自H和烷基。在另一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了具有通式IIf的p21『—ABL，itheramutein的抑制劑:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage42</formula>其中R"選自H和F;R8選自H和曱基；各個R7。選自鹵素、烷基、CN、N(R71)2、環(huán)-氨基、N02、0R"和CF3;各個R"選自H、烷基、芳基、芳烷基和雜環(huán)；并且i為o-4。通式II、IIa、IIb、II。、IId、IIs或IIf的典型化合物包括下列結(jié)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage43</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage44</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage45</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage46</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage47</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage48</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage49</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage50</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage51</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage52</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage53</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage54</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage55</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage56</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage57</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage58</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage59</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage60</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage61</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage62</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage63</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage64</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage65</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage66</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage67</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage68</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage69</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage70</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage71</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage72</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage73</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage74</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage75</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage76</column></row><table><formula>formulaseeoriginaldocumentpage77</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage78</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage79</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage80</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage81</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage82</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage83</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage84</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage85</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage86</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage87</formula>在另一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了具有通式in的P210BGR_ABL—t3151theramutein的抑制劑(III)其中環(huán)A為5-、6-或7-元環(huán)或7-至12-元稠合雙環(huán)；X!選自N、N-R?；駽-R1;乂2選自N、N-R?；駽-R1;虛線表示任選的雙鍵；各個W獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CN、CF3、N02、0R11、—(CH2)PC(0)(CH2),1、-(CH2),C(0)N(R12)(R13)、—(CH2)PC(0)0(CH2)。R11、—(CH2)PN(R11)C(0)R11、-(CH2)PN(R12)(R13)、-N(R")S02R11、-0C(0)N(R12)(R13)、-S02N(R12)(R13)、囟素、芳基和雜環(huán)組成的組，并且另外或可選地，相鄰環(huán)原子上的兩個W基團(tuán)形成含有0-3個雜原子的5-或6-元稠合環(huán)；刀為0-6;各個R"獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；各個R"和R"獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；或R"和R"可以與它們所連接的氮一起形成可以任選地含有一個額外雜原子的5-至7-元環(huán)；其中5-至7-元環(huán)可以任選被1至3個獨(dú)立選自烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CN、CF3、N02、0R°、C02Rfl、C(0)R°、卣素、芳基和雜環(huán)的取代基取代；/7為0-4;《為0-4;RlO選自一Y,—R,Y'選自化學(xué)鍵、0、NR°-和帶有1-4個碳原子并且任選地^:鹵素、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、C02R°、C(0)R°、C(0)N(R°)2、CN、CF3、N(R。)2、訪2和OR。中的一個或多個取代的烴鏈;R"選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CF3、芳基和雜環(huán)組成的組；且各個R。獨(dú)立地選自H、烷基，環(huán)烷基、芳烷基、芳基和雜環(huán)。在另一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了具有通式IIIa的Pf51ther諸utein的抑制劑:其中環(huán)A為5-、6-或7-元環(huán)或7-至12-元稠合雙環(huán)；Xl自N、N-RO或C-R1;乂2選自N、N-R。或C-R1;虛線表示任選的雙鍵；各個W獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CN、CF3、N02、OR11、-(CH2)PC(0)(CH2)。R11、-(CH2)PC(0)N(R12)(R13)、-(CH2),C(0)0(CH2)《R11、-(CH2)PN(R11)C(0)R11、-(CH2),N(R12)(R13)、-N(R"S()2R11、-OC(0)N(R12)(R13)、-S02N(R12)(R13)、鹵素、芳基和雜環(huán)組成的組，并且另外或可選地，相鄰環(huán)原子上的兩個R'基團(tuán)形成含有0-3個雜原子的5-或6-元稠合環(huán)；/為0-6;各個R"獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；各個R"和R"獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；或R"和R"可以與它們所連接的氮一起形成可以任選地含有一個額外雜原子的5-至7-元環(huán)；其中5-至7-元環(huán)可以任選被1至3個獨(dú)立選自烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CN、CF3、N02、0R。、C02R。、C(0)R。、鹵素、芳基和雜環(huán)的取代基取代；p為0-4;《為0-4;乂3為N、CH或C-R5fl;各個R"獨(dú)立地選自烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CN、CF3、N02、0R51、-(CH2)X(0)(CH2),R51、-(CH2)X(0)N(R52)(R53)、-(CH2),C(0)0線hR51、(CH2),N(R51)C(0)R51、-(CH2)rN(R52)(R53)、-N(R51)S02R51、-OC(0)N(R")(R53)、-S02N(R52)(R53)、卣素、芳基和雜環(huán)組成的組，并且另外或可選地，相鄰環(huán)原子上的兩個R"基團(tuán)形成含有0-3個雜原子的5-或6-元稠合環(huán)；R"選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；R"和R"獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；或R"和R"可以與它們所連接的氮一起形成可以任選地含有一個額外雜原子的5-至7-元環(huán)；其中5-至7-元環(huán)可以任選被1至3個獨(dú)立選自烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CN、CF3、N02、0R°、C02R°、C(0)R°、卣素、芳基和雜環(huán)的取代基取代；r為0-4;s為0-4;/z為0-4;且各個Rn各自獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、芳烷基、芳基和雜環(huán)。在另一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了具有通式IIIb的P210腦番"151theramutein的抑制劑:(R1)n-其中<formula>formulaseeoriginaldocumentpage90</formula>環(huán)A為5-、6-或7-元環(huán)或7-至12-元稠合雙環(huán)；X'選自N、N-R?；駽-R1;乂2選自N、N-R?；駽-R1;虛線表示任選的雙鍵；各個R獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CN、CF3、N02、OR11、-(CH2)PC(0)(CH工R11、-(CH2)PC(0)N(R12)(R13)、-(CH2)PC(0)0(CH2)。R11、-(CH2)PN(R11)C(0)R11、-(CH2)PN(R12)(R13)、-N(RU)S(U11、-OC(0)N(R12)(R13)、_S02N(R12)(R13)、卣素、芳基和雜環(huán)組成的組，并且另外或可選地，相鄰環(huán)原子上的兩個R'基團(tuán)形成含有0-3個雜原子的5-或6-元稠合環(huán)；/2為0-6;各個R"獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；各個R"和R"獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；或R"和R"可以與它們所連接的氮一起形成可以任選地含有一個額外雜原子的5-至7-元環(huán)；其中5-至7-元環(huán)可以任選被1至3個獨(dú)立選自烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CN、CF3、N02、0R°、C02R°、C(0)R。、卣素、芳基和雜環(huán)的取代基取代；p為0-4;《為0-4;乂3為N或CH;R"選自芳基和雜環(huán)；Q選自化學(xué)鍵或具有式-0-、-(CH丄-、-(CH2),C(0)(CH2))-、-(CH2)廠N(R62)—(CH2)廣、—(CH2),C(0)—N(R")-(CH2)乂—、一(CH2),C(0)0(CH2)廣、—(CH2),N(R62)C(0)-(CH2)廠、—(CH2)力C(0)N(R62)-(CH2)廠和-O-(CH2)廣C(0)N(R62)—(CH2)乂-的基團(tuán)；R"選自H、烷基、芳基和雜環(huán)；各個R。獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；力為0—4;/為0-4;且J為0-4。在另一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了具有通式IIL的P21(T番"151theranrntein的抑制劑:其中環(huán)A為5-、6-或7-元環(huán)或7-至12-元稠合雙環(huán)；X'選自N、N-R。或C-R1;乂2選自N、N-R?；駽-R1;虛線表示任選的雙鍵；各個W獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CN、CF3、N02、0R11、-(CH2),C(0)(CH^R11、-(CH丄C(0)N(R12)(R13)、-(CH2)PC(0)0(CH2)。R11、-(CH2),N(R11)C(0)R11、-(CH2),N(R12)(R13)、-N(R")S02R11、-0C(0)N(R12)(R13)、-S02N(R12)(R13)、卣素、芳基和雜環(huán)組成的組，并且另外或可選地，相鄰環(huán)原子上的兩個W基團(tuán)形成含有0-3個雜原子的5-或6-元稠合環(huán)；/7為0-6;各個R"獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；各個R"和R"獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；或R"和R"可以與它們所連接的氮一起形成可以任選地含有一個額外雜原子的5-至7-元環(huán)；其中5-至7-元環(huán)可以任選被1至3個獨(dú)立選自烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CN、CF3、N02、0R。、C02R。、C(0)R0、卣素、芳基和雜環(huán)的取代基取代；p為0-4;《為0—4;乂3為N或CH;各個R。獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；(^選自化學(xué)鍵或具有式-0-、-CH廣、-NH-、-C(O)-NH-、-C(O)O-、-NH-C(0)-、-0C(0)NH-和-0-C(0)NH-的基團(tuán);IT各自選自卣素、烷基、CN、NOT)"環(huán)-氨基、N02、0R"和CF3;R"各自選自H、烷基、芳基、芳烷基和雜環(huán)；且k為Q至4。在另一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了具有通式IIId的P21(T普t3151theramutein的抑制劑:其中環(huán)A為5-、6-或7-元環(huán)或7-至12-元稠合雙環(huán)；X'選自N、N-R?；駽-R1;義2選自N、N-R。或C-R1;虛線表示任選的雙鍵；各個W獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CN、CF3、N02、0R"、—(CH2),C(0)(CH2)R"、-(CH2)PC(0)N(R12)(R13)、—(CH2)PC(0)0(CH2)《R11、—(CH2)PN(R11)C(0)R11、-(CH2)PN(R12)(R13)、-N(R")S02R11、-0C(0)N(R12)(R13)、-S02N(R12)(R13)、卣素、芳基和雜環(huán)組成的組，并且另外或可選地，相鄰環(huán)原子上的兩個R'基團(tuán)形成含有0-3個雜原子的5-或6-元稠合環(huán)；/z為0-6;各個R"獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；各個R"和R"獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；或R"和R"可以與它們所連接的氮一起形成可以任選地含有一個額外雜原子的5-至7-元環(huán)；其中5-至7-元環(huán)可以任選被1至3個獨(dú)立選自烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CN、CF3、N02、0R。、C02R。、C(0)R。、閨素、芳基和雜環(huán)的取代基取代；/7為0-4;《為0-4;各個R。獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；R8選自H和甲基；乂3為N或CH;Q'選自化學(xué)鍵或具有式-0-、-CH2-、-NH-、-C(O)-NH-、-C(O)O-、-NH-C(0)-、-0C(0)NH-和-0-C(0)NH-的基團(tuán);R"各自選自面素、烷基、CN、N(R71)2、環(huán)-氨基、N02、OR"和CF"且R"各自選自H和烷基。在另一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了具有通式IIIs的p21『i"〗5Itheramutein的抑制劑其中R"選自H和F;R7。各自選自卣素、烷基、CN、N(R71)2、環(huán)-氨基、N02、0R"和CF3;R"各自選自H、烷基、芳基、芳烷基和雜環(huán)；且k為0至4。通式III、IIL、III"IIL、II乙或IIL的典型化合物包括下列結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage95</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage96</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage97</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage98</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage99</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage100</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage101</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage102</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage103</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage104</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage105</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage106</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage107</formula>在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了具有通式IV的P210theramutein的^p制劑BCR—肌-T3151其中環(huán)A為5-、6-或7-元環(huán)或7-至12-元稠合雙環(huán)；X'選自N、N-R?；駽-R1;X'選自N、N-R。或C-R1;虛線表示任選的雙鍵；f各自獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CN、CF3、N02、OR11、-(CH2)X(0)(CH么R11、-(CH2),(0)N(R12)(R13)、-(CH2),C(0)0(CH2)《R11、-(CH2)PN(R11)C(0)R11、-(CH2),N(R12)(R13)、-N(R")S02R11、-OC(0)N(R12)(R13)、-S02N(R12)(R13)、鹵素、芳基和雜環(huán)組成的組，并且另外或可選地，相鄰環(huán)原子上的兩個^基團(tuán)形成含有0-3個雜原子的5-或6-元稠合環(huán)；/z為0-6;各個R"獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；各個R"和R"獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；或1112和R"可以與它們所連接的氮一起形成可以任選地含有一個額外雜原子的5-至7-元環(huán)；/為0-4;《為0-4;R"選自H和Cw烷基；R"選自H、N02、CN、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；R"選自H、烷基、環(huán)烷基、-(C-0)R。、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；R"選自-Y"-R19;Y"選自化學(xué)鍵、0、NR。-和帶有1-4個碳原子并且任選被鹵素、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、C02R°、C(0)R°、C(0)N(R。)2、CN、CF3、N(R。)2、N(L和0R。中的一個或多個取代的烴鏈；R"選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CF3、芳基和雜環(huán)組成的組；且各個R。獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、芳烷基、芳基和雜環(huán)。通式IV的典型化合物包括下列結(jié)構(gòu):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage109</formula>在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了具有通式V的P210theramutein的4中制劑:其中環(huán)A為5-、6-或7-元環(huán)或7-至12-元稠合雙環(huán)；X'選自N、N-11°或C-R；X2選自N、N-R。或C-R1;虛線表示任選的雙鍵；f各自獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CN、CF3、N02、0R"、-(C化C(O)(C11、-(CH2)PC(0)N(R12)(R13)、-(CH2),C(0)0(CH2)R"、-(CH2)PN(R11)C(0)R11、-(CH2)PN(R12)(R13)、-N(RH)S02R11、-OC(0)N(R12)(R13)、-S02N(R12)(R13)、卣素、芳基和雜環(huán)組成的組，并且另外或可選地，相鄰環(huán)原子上的兩個R'基團(tuán)形成含有0-3個雜原子的5-或6-元稠合環(huán)；"為0-6;各個R"獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；各個R"和R"獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；或R"和R"可以與它們所連接的氮一起形成可以任選地含有一個額外雜原子的5-至7-元環(huán)；p為0-4;為0-4;R"選自H和Cw烷基；R"選自H、N02、CN、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；R"選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；R56選自-Y"-R";Y"選自化學(xué)鍵、0、NR。-和帶有1-4個碳原子并且任選被鹵素、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、C02RD、C(0)R°、C(0)N(RB)2、CN、CF3、N(R。)2、卯2和OR。中的一個或多個取代的烴鏈;R"選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CF3、芳基和雜環(huán)組成的組；且各個R。各自獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、芳烷基、芳基和雜環(huán)。在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了具有通式Va的P210B—T31"theramutein的抑制劑環(huán)A為5-、6-或7-元環(huán)或7-至12-元稠合雙環(huán)；Xi選自N、N-R?；駽-R1;乂2選自N、N-R?；駽-R1;虛線表示任選的雙鍵；f各自獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CN、CF3、N02、OR11、-(CH2),(0)(Ciy,R11、-(CH2)PC(0)N(R12)(R13)、—(CH2)PC(0)0(CH2)《R11、-(CH2)PN(R11)C(0)R11、-線)PN(R12)(R13)、-N(RH)S。2R11、—OC(0)N(R12)(R13)、-S02N(R12)(R13)、卣素、芳基和雜環(huán)組成的組，并且另外或可選地，相鄰環(huán)原子上的兩個R'基團(tuán)形成含有0-3個雜原子的5-或6-元稠合環(huán)；各個R"獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；各個R"和R"獨(dú)立地選自H、垸基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；或R"和R"可以與它們所連接的氮一起形成可以其中:/3為0-6;任選地含有一個額外雜原子的5-至7-元環(huán)；/為0-4;《為0-4;R"選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；乂3為N或C-R5°;各個R"獨(dú)立地選自烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CN、CF3、N02、OR51、-(CH2)X(0)(CH2)SR51、-(CH2),C(0)N(R52)(R53)、-(CH2)X(0)0(CH2),R51、-(CH2),N(R51)C(0)R51、-(CH2),N(R52)(R")、-N(R51)S02R51、-OC(0)N(R52)(R53)、-S02N(R")(R53)、卣素、芳基和雜環(huán)組成的組，并且另外或可選地，相鄰環(huán)原子上的兩個R"基團(tuán)形成含有0-3個雜原子的5-或6-元稠合環(huán)；R"選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；R"和R"各自獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；或R"和R"可以與它們所連接的氮一起形成可以任選地含有一個額外雜原子的5-至7-元環(huán)；r為0-4:s為0-4歷為0-4且各個R。獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、芳烷基、芳基和雜環(huán),通式V或Va的典型化合物包括下列結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage113</formula>在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了具有通式VI的P210theramutein的^卩制劑<formula>formulaseeoriginaldocumentpage113</formula>(VI)其中CN環(huán)A為5-、6-或7-元環(huán)或7-至12-元稠合雙環(huán)；X'選自N、N-R?；駽-R1;乂2選自N、N-R?；駽-R1;虛線表示任選的雙鍵；各個f獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CF3、N02、0R11、-(CH2)PC(0)(CH2)。R11、-(CH2)PC(0)N(R12)(R3)、-(CH2)PC(0)0線)。R11、—(CH2),N(R11)C(0)R11、-(CH2)PN(R12)(R13)、-N(R"S。2R11、-0C(0)N(R12)(R13)、-S02N(R12)(R13)、鹵素、芳基和雜環(huán)組成的組，并且另外或可選地，相鄰環(huán)原子上的兩個R'基團(tuán)形成含有0-3個雜原子的5-或6-元稠合環(huán)；/2為0—6;各個R"獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；各個R"和R"獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；或R"和R"可以與它們所連接的氮一起形成可以任選地含有一個額外雜原子的5-至7-元環(huán)；p為0-4;《為0-4;R"選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；R56選自-Y"-R19;Y"選自化學(xué)鍵、0、NRQ-和帶有1-4個碳原子并且任選被鹵素、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、C02R°、C(0)R。、C(0)N(R°)2、CN、CF3、N(R。)2、N02和OR。中的一個或多個取代的烴鏈；R"選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CF3、芳基和雜環(huán)組成的組；且各個R。獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、芳烷基、芳基和雜環(huán)。在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了具有通式VL的P210<formula>formulaseeoriginaldocumentpage114</formula>其中環(huán)A為5-、6-或7-元環(huán)或7-至12-元稠合雙環(huán)；X'選自N、N-R?；駽-R1;X2選自N、N-W或C-R1;虛線表示任選的雙鍵；各個W獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CN、CF3、N02、0R11、—(CH2),C(0)(CH》。R11、-(CH2),C(0)N(R12)(R13)、-(CH2)PC(0)0(CH2)。R11、-(CH2)PN(R11)C(0)R11、-(CH2),N(R12)(R13)、-N(R")S。2R11、-0C(0)N(R12)(R13)、-S02N(R12)(R13)、卣素、芳基和雜環(huán)組成的組，并且另外或可選地，相鄰環(huán)原子上的兩個R基團(tuán)形成含有0-3個雜原子的5-或6-元稠合環(huán)；n為0-6;各個RH獨(dú)立地選自h、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；各個r"和r"獨(dú)立地選自h、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；或f和r"可以與它們所連接的氮一起形成可以任選地含有一個額外雜原子的5-至7-元環(huán)；p為0-4;q為0-4;r"選自h、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；乂3為n或c-r5°;各個r"獨(dú)立地選自烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、cn、CF3、N02、or51、—(ch2),c(0)(ch2),r5〗、—(ch2)X(0)n(r52)(r53)、—(CH2),C(0)0(CH2),R51、一(CH2),N(R51)C(0)R51、一(CH2),N(R52)(R53)、-n(r51)S02r51、-oc(0)n(r52)(r53)、-S02n(r")(r53)、卣素、芳基和雜環(huán)組成的組，并且另外或可選地，相鄰環(huán)原子上的兩個r"基團(tuán)形成含有0-3個雜原子的5-或6-元稠合環(huán)；r"選自h、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；r"和r"各自獨(dú)立地選自h、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；或r"和r"可以與它們所連接的氮一起形成可以任選地含有一個額外雜原子的5-至7-元環(huán)；r為0-4;s為0-4m為0_4且各個r。各自獨(dú)立地選自h、烷基、環(huán)烷基、芳烷基、芳基和雜環(huán)通式VI或VL的典型化合物包括下列結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage116</formula>在另一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了具有通式VII的p21『—ABL—T315Itheramutein的抑制劑:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage117</formula>其中環(huán)A為5-、6-或7-元環(huán)或7-至12-元稠合雙環(huán)；X'選自N、N-r或C-R1;乂2選自N、N-R?；駽-R1;虛線表示任選的雙鍵；各個W獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CN、CF3、N02、0R11、-(CH2)pC(0)(CH》。R11、-(CH2),C(0)N(R12)(R13)、-(CH2)PC(0)0(CH2)9R"、-(CH2)PN(R11)C(0)R11、-(CH2)PN(R2)(R13)、-N(R")S02R11、-0C(0)N(R12)(R13)、-S02N(R12)(R13)、卣素、芳基和雜環(huán)組成的組，并且另外或可選地，相鄰環(huán)原子上的兩個^基團(tuán)形成含有0-3個雜原子的5-或6-元稠合環(huán)；/為0-6;各個R"獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；各個R"和R"獨(dú)立地選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；或R"和R"可以與它們所連接的氮一起形成可以任選地含有一個額外雜原子的5-至7-元環(huán)；;為0-4;《為0-4;環(huán)B選自帶有5或6個環(huán)原子的環(huán)烷基、和包括1至3個雜原子的含有5或6個環(huán)原子的雜環(huán)；各個R50獨(dú)立地選自烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、CN、CF3、N02、0R51、-(CH2),C(0)(CH2),R51、—(CH2)X(0)N(R52)(R53)、一(ch2)rc(0)0(ch2)jt、-(ch2),n(r")c(0)r51、-(ch2),n(r52)(r53)、-n(r51)S02r51、-oc(o)n(r")(r53)、-S02n(r52)(r53)、鹵素、芳基和雜環(huán)組成的組，并且另外或可選地，相鄰環(huán)原子上的兩個r"基團(tuán)形成含有0-3個雜原子的5-或6-元稠合環(huán)；r"選自h、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；r"和r"各自獨(dú)立地選自h、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基和雜環(huán)；或r"和r"可以與它們所連接的氮一起形成可以任選地含有一個額外雜原子的5-至7-元環(huán)；r為0—4:s為0-4m為0-4且各個R0獨(dú)立地選自h、烷基、環(huán)烷基、芳烷基、芳基和雜環(huán).通式VII的典型化合物包括下列結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage118</formula>F本文所用的每種表達(dá)方式的定義，例如烷基、m、n、R、R'等在任何結(jié)構(gòu)中出現(xiàn)一次以上時，與其在同一結(jié)構(gòu)中的其它處的定義無關(guān)。就對結(jié)構(gòu)I、Ia、Ib、II和IIa化合物的上述描述中的每一種而言，對術(shù)語卣素、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基、雜環(huán)基或雜環(huán)的每次敘述獨(dú)立地選自本節(jié)開始部分中提供的這些術(shù)語的定義。可以理解本文提供的化學(xué)結(jié)構(gòu)包括如下隱含條件，即取代按照取代原子和取代基的允許價鍵進(jìn)行并且取代產(chǎn)生穩(wěn)定的化合物，例如，該化合物不會通過諸如重排、環(huán)化、消除等自發(fā)進(jìn)行轉(zhuǎn)化。當(dāng)本發(fā)明的化合物中存在一個或多個手性中心時，本文所述的通式包括各異構(gòu)體及其混合物(例如外消旋物等)。當(dāng)本發(fā)明的化合物中存在一個或多個雙鍵時，本文所述的通式包括順式-和反式-異構(gòu)體。盡管本文描述了順式或反式(cisoftrans)構(gòu)型的化學(xué)結(jié)構(gòu)(諸如，例如結(jié)構(gòu)II、IIa、V、Va、VI和VU,兩種構(gòu)型的含義是每種通式均包括。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物可以以幾種互變異構(gòu)體形式存在。因此，本文所述的化學(xué)結(jié)構(gòu)包括所有可能的列舉的化合物的互變異構(gòu)形式。本發(fā)明的化合物一般由商購原料和公知化學(xué)技術(shù)制備。可以如下合成本發(fā)明的實(shí)施方案。藥物或合成化學(xué)領(lǐng)域技術(shù)人員易于熟知實(shí)施如下所述的合成手段所必不可少的操作步驟和技術(shù)。可以通過在Gineinah等的p.562(Arch.Pharm.Pharm.Med.Chem.2002,11，556-562)所述相似的條件下使合適的肼化合物諸如^和合適的醛，諸如》反應(yīng)制備通式n的化合物。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage120</formula>芳基例如，在質(zhì)子溶劑，諸如C廣。醇中將J與1.1當(dāng)量的5—起加熱1-24小時，隨后冷卻并且收集沉淀，可以得到C?；蛘?，可以通過蒸發(fā)溶劑并且通過使用硅膠、氧化鋁或C廣ds反相介質(zhì)的色譜法純化分離產(chǎn)物C。類似方法可以適用于"芳基"被如115中定義的其它基團(tuán)取代的情況?？梢酝ㄟ^使合適的肼化合物，諸如/和活化的羧酸，諸如f反應(yīng)制備通式in的化合物，其中LG為離去基團(tuán)，諸如卣素、i-氧基苯并三唑、五氟苯氧基、對-硝基苯氧基等；或化合物f還可以為不對稱羧酸酐，其中可以使用與Nair和Mehta的p.408(IndianJ.Chem.19675，403-408)中所述相似的條件。F32環(huán)A、f、32+LG義雜環(huán)—環(huán)Af、雜環(huán)H審"H&例如，在0°C-溶劑沸點(diǎn)的合適的溫度下，在有堿，諸如吡啶或另一種叔胺存在和任選在有催化劑，諸如4-^)V-二甲氨基吡啶存在下的惰性溶劑，諸如二氯甲烷、1，2-二氯乙烷或N，N-二甲基甲酰胺中用活性酯，諸如芳基-C(0)-0CA處理"可以得到尸，可以通過蒸發(fā)溶劑，隨后使用硅膠、氧化鋁或CrCw反相介質(zhì)的色譜法對其進(jìn)行分離。易于由相應(yīng)的羧酸和五氟苯酚，使用碳二亞胺，諸如二環(huán)己基碳二亞胺作為縮合試劑制備f的上述活性酯實(shí)例?？梢酝ㄟ^使合適的親核體，例如，肼衍生物和在與氮原子相鄰位置上帶有卣素取代基的雜芳族化合物反應(yīng)制備前體，諸如^和Z。例如，可以4吏用與Wu等(J.HeterocyclicChem.1990，27，1559-1563)、Breshears等(J.Am.Chem.Soc.1959，81，3789-3792)或Gineinah等(Arch.Pharm.Med.Chem.2002，11，556-562)所述類似的方法，由例如，2,4-二卣代嘧咬衍生物為原料制備化合物^和爛實(shí)例，所述原料中的許多為商購可得，或者易于由本領(lǐng)域技術(shù)人員制備。因此，用胺或其它親核體(Z),任選在有添加的堿存在下處理合適的2，4-二鹵代嘧啶衍生物"選擇性取代嘧啶環(huán)上的4-ig素取代基。隨后用第二種親核試劑，諸如肼或肼衍生物任選在溶劑，諸如d-C6醇和任選在有添加的堿存在下處理產(chǎn)物，取代嘧啶環(huán)上的2-鹵素取代基，從而得到為上述結(jié)構(gòu)^和贈實(shí)例的化合物?？梢酝ㄟ^諸如下列或其直接修飾的這類方法合成實(shí)施方案，其中112為-NR"且I^為-C(=R")?？梢砸院线m的環(huán)A衍生物/為原料進(jìn)行合成，所述的環(huán)A衍生物/帶有與必需的環(huán)氮相鄰的離去基團(tuán)(LG)。如上所述，上述結(jié)構(gòu)C與結(jié)構(gòu)C與親核體Z的反應(yīng)產(chǎn)物為這類合適的環(huán)A衍生物/的實(shí)例。合適的LG，基團(tuán)為卣素、烷硫基、烷基磺酰基、烷基磺酸酯或芳基磺酸酯。用胺R"NH2處理/對LG，進(jìn)行取代得到中間體/。該化學(xué)轉(zhuǎn)化的實(shí)例由Capps等在J.Agric.FoodChem.1993，41，2411-2415中報導(dǎo)，其中R"為H且LG，為CH3S0廣，并且R"為H且LG，為C1的實(shí)例報導(dǎo)在Marshall等的J.Chem.Soc.1951，1004-1015中。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage121</formula>通過同時或依次引入R3、R4和R5的元素，結(jié)構(gòu)f的中間體轉(zhuǎn)化成本發(fā)明的化合物。例如，用異氰酸酯Re-N-C-0各自處理結(jié)構(gòu)(的中間體而在單一步驟中得到結(jié)構(gòu)#的化合物，其為本發(fā)明的化合物，其中R2=-NR22-,R3=-C-0-，R4--NH-且R5=-化學(xué)鍵-R6。將結(jié)構(gòu)f的化合中，首先引入113與離去基團(tuán)(例如對-硝基苯氧基或氯)，隨后用例如胺RLNH2取代離去基團(tuán)以便引入W和R6。o環(huán)A義R6或者，一般在加熱條件和任選在有溶劑，諸如乙酸乙酯或二喁烷存在下用試劑，諸如，氨基氰(NH廠CN)處理結(jié)構(gòu)f的中間體而得到中間體#。氨基氰的備選物為硝基胍或脒基磺酸(NHfC(=NH)-S03H)。使用氨基氰進(jìn)行這類轉(zhuǎn)化的實(shí)例由Latham等在J.Org.Chem.1950，15，884中報導(dǎo)。使用硝基胍的實(shí)例由Davis在Proc.Natl.Acad.Sci.USA1925，11，72才艮導(dǎo)。脒基碌酸的應(yīng)用由Shearer等Bioorg.Med.Chem.Lett.1997，7,1763才艮導(dǎo)。NH按照將中間體J或琳化成由C或尸表示的實(shí)施方案類似的方式，將中間體vT分別轉(zhuǎn)化成由戶或(表示的化合物，它們?yōu)楸景l(fā)明進(jìn)一步的實(shí)施方案。NHOK+E_^環(huán)\雜芳基A22AQ在上述方案中，用酮S處理A或K以便取代B,其中R如上所述，而分別得到結(jié)構(gòu)r或^的化合物，它們?yōu)楸景l(fā)明進(jìn)一步的實(shí)施方案。K+8芳基用合適的還原劑諸如金屬(硼、鋁、硅等)氫化物試劑，優(yōu)選一種具有堿性的還原劑選擇性還原u的非-胍基碳-氮雙鍵而得到本發(fā)明的化合物v。可以如下制備本發(fā)明的實(shí)施方案，其中W-C0，R3=-NR32—，R4=N-且R5=ZR',其中Z為烴鏈且R'如上所述。當(dāng)R32=小時時，通過轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的?；然蜣D(zhuǎn)化成活性酯或類似的活化衍生物來活化環(huán)A-衍生的羧酸W，上述過程中的許多為本領(lǐng)域眾所周知。用肼處理活化的羧酸得到相應(yīng)的酰肼Y。用醛或酮處理Y(如果必要，在加熱條件和/或溫和酸催化下)而得到所需的終產(chǎn)物Z。1活化羧基基團(tuán)H搭或酮H(或烴鏈)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage123</formula>如果不是商購可得，那么可以通過用氰化物離子處理上述原料J，任選通過加熱或過渡金屬催化以便用氰基殘基取代離去基團(tuán)LG，，制備環(huán)A-衍生的羧酸W。氰基的堿性或酸性水解得到酸性的羧酸中間體W。當(dāng)R"不為H時，單取代的肼的被保護(hù)形式可以用于上述方案以便替代肼。因此，用R、HNH-PG,其中PG為氮保護(hù)基團(tuán)，諸如節(jié)氧羰基或叔-丁氧羰基處理來自W的活化羧酸，隨后脫保護(hù)并且如上所述用合適的醛或酮處理而得到Z，，其為本發(fā)明的另一個實(shí)施方案。有機(jī)合成領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見，上述反應(yīng)過程為列舉的方法中合乎邏輯的擴(kuò)展的一組廣泛方法的代表。因此，通過上述方法的顯而易見的變型可以制備本發(fā)明要求保護(hù)的引入額外的R2、R3、R4和R5變化形式的本發(fā)明進(jìn)一步的實(shí)施方案。作為本領(lǐng)域技術(shù)人員公認(rèn)的，有利的是在荻得終產(chǎn)物中使用臨時的保護(hù)基團(tuán)。本文所用的術(shù)語"保護(hù)基團(tuán)"指的是可能的反應(yīng)官能基團(tuán)的臨時變型，所述的反應(yīng)官能基團(tuán)可以防止不需要的化學(xué)轉(zhuǎn)化。這類保護(hù)基團(tuán)的實(shí)例包括羧酸的酯類、醇的甲硅烷基醚類以及醛和酮分別的縮醛類和酮縮醇類。已經(jīng)綜述了保護(hù)基團(tuán)化學(xué)的領(lǐng)域(Greene，T.W.;Wuts,P.G.M.ProtectiveGroupinOrganicSynthesis2nded.;Wiley:NewYork,1991)。本發(fā)明的一個實(shí)施方案涉及本領(lǐng)域技術(shù)人員選擇的任何內(nèi)源性存在的哺乳動物靶蛋白質(zhì)，其對于鑒定和/或優(yōu)化作為所述蛋白質(zhì)的抑制劑或活化劑的化合物是有意義的。通常已知所述選擇的蛋白質(zhì)涉及人類疾病的病因?qū)W或發(fā)病機(jī)致。在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明還涉及所述哺乳動物蛋白質(zhì)的突變形式。"突變蛋白"為具有作為在其相應(yīng)基因中出現(xiàn)的作為突變結(jié)果而改變的氨基酸序列的蛋白質(zhì)(Weigel等，1989)。這類突變可以導(dǎo)致編碼的蛋白質(zhì)特性中的一種或多種改變。例如，具有因一種或多種氨基酸改變產(chǎn)生的修飾的催化化學(xué)的酶變體為突變蛋白。本發(fā)明涉及隱含至少一種氨基酸殘基改變的蛋白質(zhì)(術(shù)語"氨基酸序列改變(aminoacidsequencechange)"或"氨基酸序列改變(aminoacidsequencealteration)"包括至少一種氨基酸殘基的改變、缺失或添加，或缺失、添加、改變的任意組合)，以使所得突變蛋白相對于所述蛋白質(zhì)的未-突變形式對治療劑的敏感性而言變得(作為突變的結(jié)果)對已知治療劑產(chǎn)生抗性。這種特定類型的突變蛋白在下文中稱作Mera/Z7i//^7/7，并且缺乏突變的相應(yīng)的蛋白質(zhì)在本文中稱作prof0f力era/z7i/fe//7。本文所用的"prototheramutein"指的是在細(xì)月包中內(nèi)源性出J見的蛋白質(zhì)，所述的細(xì)胞對賦予治療化合物相對無敏感性(即抗性)的突變敏感，否則，所述的治療化合物抑制或活化所述蛋白質(zhì)。因》匕，"theramutein"指的是在含有相對于蛋白質(zhì)的內(nèi)源性形式而言至少一種氨基酸序列改變的細(xì)胞中內(nèi)源性出現(xiàn)的蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)部分，其中在使至少一個人接觸已知抑制或活化WW力era邁"fe//的物質(zhì)后，所述的氨基酸序列改變得到或被鑒定或成為可鑒定，并且經(jīng)顯示或已經(jīng)顯示對指定疾病的發(fā)生或發(fā)展而言具有臨床意義。就確定上句中的目的而言，唯一的是物質(zhì)不需限于用于首次定義theramutein存在目的的化學(xué)活性劑。因此，#為定乂，theramutein是在其相應(yīng)的內(nèi)源性基因中隱含了突變的蛋白質(zhì)，其中所述的突變與患者對一般能夠活化或抑制未-突變蛋白的藥物發(fā)生臨床耐受性相關(guān)。就指定的theramutein而言，本文所用的術(shù)語"相應(yīng)的prototheranmtein"指的是通過突變產(chǎn)生所述的theramutein的prototheramutein。類4以地,f尤才旨定的prototheramutein而言，相應(yīng)的theramutein"指的是通過由所述prototheramutein突變產(chǎn)生的theramutein。因此，本領(lǐng)域4支術(shù)人員顯而易見，當(dāng)編碼theramutein的基因限于內(nèi)源性出現(xiàn)的基因時，theramutein的定義不包括由導(dǎo)致疾病的病原體，諸如病毒和細(xì)菌編碼的蛋白質(zhì)。本文所用的術(shù)語"內(nèi)源性基因"指的是自攝入以后已經(jīng)至少以其未突變形式存在于生物體的染色體中的基因。本文所用的術(shù)語"細(xì)胞"指的是活的真核細(xì)胞，無論是在生物體，還是維持在生物體外合適的實(shí)驗(yàn)室組織或器官培養(yǎng)條件下。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，靶蛋白質(zhì)(POI)可以是任何內(nèi)源性編碼的哺乳動物蛋白質(zhì)。在本發(fā)明的另一方面，POI是theramutein,其為一種對通常存在的所述蛋白質(zhì)的"野生型"形式而言進(jìn)行首次改變的蛋白質(zhì)(即，野生型蛋白是prototheramutein,theramutein由其產(chǎn)生)。在本發(fā)明另一方面，theramutein是本身已經(jīng)是突變蛋白的蛋白質(zhì)變體(即，突變蛋白是prototheramutein,theramutein由其產(chǎn)生)。在另一個實(shí)施方案中，theramutein與先前存在的theramutein相比可以得到進(jìn)一步突變。在這類情況中，可以將第一種theramutein(諸如p210BCR-ABL的T315I突變體(參見下文)視為"初級"theramutein,而隨后(已經(jīng)突變的)T315I變體的突變可以稱作二級theramutein、三級theramutein等。作為下文中典型的，本發(fā)明的突變蛋白為脫離"野生型"Bcr-Abl抑制劑抑制的Bcr-AM酪氨酸激酶的變體。這類Bcr-Abl突變蛋白相對于Bcr-Abl的更常見或"野生型"形式而言得到改變(也稱作突變蛋白)，以這類方式改變蛋白質(zhì)的特性。應(yīng)理解關(guān)注的蛋白質(zhì)(POI)是內(nèi)源性編碼的哺乳動物蛋白質(zhì)。也可以理解主要關(guān)注的突變蛋白為相對于其prototheramutein而言具有相同、增加或減少的比活性，并且不受或難以受到用于抑制prototheramutein的活性劑^p制的theramutein。同才羊，另——種主要關(guān)注的theramutein為具有相同、增加或減少的比活性(相對于其prototheramutein而言)并且不受或難以受到用于活化prototheramutein的活性劑活化的theramutein。其它變^匕形式對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言顯而易見。進(jìn)一步理解theramuteins可以包括天然存在或通常觀察到的蛋白質(zhì)變體，例如，由特定基因的不同等位基因表達(dá)的變體。在某些情況中，這類變體就其正常細(xì)胞功能而言可能并不顯著，其中功能差異僅在有差別抑制或活化變體細(xì)胞功能的活性劑存在下變得明顯。例如，特定酶的天然存在的變體可以具有基本上不同的活性譜，但調(diào)節(jié)一種變體的治療劑可能對調(diào)節(jié)另一種變體無效?？梢岳斫?，本發(fā)明一方面在于鑒定針對所選POI是活性的試劑，POI的細(xì)胞功能促進(jìn)指定疾病狀態(tài)使得預(yù)期所述POI的活化劑或抑制劑在治療所述疾病過程中是治療有效的。對于可以治療的疾病類型的任何種類或性質(zhì)及根據(jù)本文教導(dǎo)靶向調(diào)節(jié)的蛋白類型沒有限制，只要滿足本文陳述的所有其他限制(包括事實(shí)選擇用于靶向的任何所述蛋白質(zhì)必須是內(nèi)源性蛋白質(zhì))。顯然，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以使用非-內(nèi)源性存在的核酸例如cDNA以實(shí)施本文教導(dǎo)的方法，只要氨基酸序列對應(yīng)于內(nèi)源性存在的POI。還可以理解，本發(fā)明的一個方面在于鑒定針對在治療指定疾病過程前或治療指定疾病過程中產(chǎn)生或變得占優(yōu)勢(通過任何機(jī)制)的蛋白質(zhì)或theramutein具有活性的活性劑，另一個方面在于鑒定針對在未受侵害個體群體中常見的突變蛋白具有活性的活性劑，但其中所述的突變蛋白對已經(jīng)批準(zhǔn)的藥物的調(diào)節(jié)的敏感性較低，并且其中突變蛋白的活性譜變化在疾病狀態(tài)中變得重要(且由此首次鑒定為theramutein)，諸如，在所述的疾病狀態(tài)中，該突變蛋白得到超表達(dá)或參與信號傳導(dǎo)過禾呈，否則成為異常調(diào)節(jié)。例如，腫瘤性疾病可以因非theramutein或其prototheramutein的細(xì)胞成分的異常調(diào)節(jié)所致，并且仍然可^吏用prototheramutein抑制劑治療,而相同的治療對存在theramutein的情況有效性較低或無效。這可能是一種結(jié)果，其中觀察到特定腫瘤類型對抗癌藥的反應(yīng)在個體中改變，所述的個體表達(dá)抗癌藥定向于的酶的不同變體(Lynch等，2004)。在此處，變體在治療疾病的過程中可以不產(chǎn)生或變得占優(yōu)勢，但預(yù)先存在于健康群體中并且僅根據(jù)其對建立的治療的特定過程中改變的反應(yīng)性來檢測。本文所用的術(shù)語蛋白質(zhì)的"激動劑"和"活化劑"可以互換使用?；罨瘎?激動劑)限于結(jié)合和活化指定蛋白質(zhì)功能的物質(zhì)。除非另有說明，"活化劑"、"激動劑"和"蛋白質(zhì)的活化劑"在含義上相同。通過活化劑激活可以是部分或完全的。同樣，本文所用的術(shù)語蛋白質(zhì)的"拮抗劑"和"抑制劑，，可以互換使用。抑制劑(拮抗劑)限于結(jié)合和抑制指定蛋白質(zhì)的功能的物質(zhì)。描述物質(zhì)"抑制"蛋白質(zhì)指的含義是指該物質(zhì)在細(xì)胞中結(jié)合蛋白質(zhì)并且降低蛋白質(zhì)的活性，但實(shí)質(zhì)上不減少細(xì)胞中蛋白質(zhì)的量。類似地，描述物質(zhì)"活化"蛋白質(zhì)，諸如<formula>formulaseeoriginaldocumentpage128</formula>prototheramutein或theramuteiii是指該物質(zhì)增力口細(xì)月包中蛋白質(zhì)的限定的功能，但基本上不改變細(xì)胞中蛋白質(zhì)的水平。除非另有說明，"抑制劑"、"拮抗劑"和"蛋白質(zhì)的抑制劑"也為同義詞。抑制劑的抑制可以為部分或完全的。調(diào)節(jié)劑為活化劑或抑制劑。作為實(shí)例，"PKC的活化劑"應(yīng)解釋為指結(jié)合并且活化PKCM的物質(zhì)。類似地，"p210的抑制劑"為結(jié)合并且抑制p21(T，功能的物質(zhì)。描述物質(zhì)"抑制蛋白質(zhì)"要求該物質(zhì)結(jié)合所述蛋白質(zhì)以便發(fā)揮其抑制作用。類似地，描述物質(zhì)"活化蛋白質(zhì)X"是指該物質(zhì)結(jié)合并且活化蛋白質(zhì)X。術(shù)語"結(jié)合(bind(s))"、"結(jié)合(binding)"和"結(jié)合(bindsto"在描述兩種物質(zhì)之間相互作用方面(辦如酶-底物、蛋白質(zhì)-DNA、受體-配體等)具有其在生物化學(xué)領(lǐng)域中通常的含義。本文所用的術(shù)語"結(jié)合(bindsto)"在討論物質(zhì)與其相應(yīng)靶蛋白之間相關(guān)性的上下文中和"與…相互作用"為同義詞。本文所用的描述物質(zhì)對蛋白質(zhì)"起作用"、"影響，，蛋白質(zhì)、"發(fā)揮其對蛋白質(zhì)的作用"等以及所有這類相關(guān)術(shù)語含義一致(正如本領(lǐng)域技術(shù)人員充分了解的)，即所述物質(zhì)活化或抑制所述蛋白質(zhì)。首次定義了將內(nèi)源性蛋白質(zhì)的突變形式抑制或活化至大于相應(yīng)未-突變對應(yīng)蛋白(counterpartprotein)的程度的概念，并且在本文中稱作陽性"辨岸^^口"。一般來說，并且以使用抑制劑的情況作為實(shí)例，掙;^^^口指的是在本發(fā)明基于細(xì)胞的試驗(yàn)系統(tǒng)中抑制theramutein的可比的條件下，指定物質(zhì)與如下情況之一相比的能力之間的差異a)在可比的條件下相同物質(zhì)抑制prototheramutein的能力；或b)在可比的條件下第二種物質(zhì)(通常為prototheramutein的已知#卩制劑)4中制theramutein的能力；或c)在可比的條件下第二種物質(zhì)抑制prototheramutein的能力。進(jìn)行比較時，將結(jié)果稱作^源^掙并'^^口測定?；蛘撸?dāng)對兩種不同物質(zhì)(一般，但不總是)的作用之間進(jìn)行比較時，分別將其中之一用于對theramutein的測試，而另一種用于對prototheramutein的測試，將結(jié)果稱作^源^掙岸^缺口(SG)測定。因此，作為上述給出的(a)和(c)為異源性特異性缺口(SG)測定的實(shí)例(盡管在兩種情況中均使用相同的物質(zhì))，而(b)為特異性特異性缺口測定的實(shí)例。附圖3涉及的內(nèi)容為在理解和闡明這些概念中的信息。在情況涉及活化劑時應(yīng)用類似的結(jié)果。對本領(lǐng)域技術(shù)人員即刻顯而易見的是，本文所用的術(shù)語"可比的條件"包括測試兩種不同的化合物，例如在相同濃度下(諸如比較兩種緊密相關(guān)的化合物以便測定相對功效)，或通過將兩種在其相應(yīng)IC5。值下測試的不同化合物對相應(yīng)prototheramutein和theramutein的作用進(jìn)行比較。本領(lǐng)域技術(shù)人員易于認(rèn)可其它有用的變化形式和可比的條件。因此，在該方法應(yīng)用的一個實(shí)施方案中，對theramutein更為有效的物質(zhì)具有"陽性特異性缺口"。"零、無效或無"特異性缺口表示在物質(zhì)對theramutein的作用與其對prototheramutein的作用之間不存在顯著的可測定的差異(不過，這類化合物可能在其抑制或活化theramutein及其相應(yīng)prototheramutein的能力方面相當(dāng)有用)，并且"陰性特異性缺口"表示在指定濃度下的物質(zhì)對指定theramutein的有效性低于對theramutein的相應(yīng)prototheramutein開j式或另一種相當(dāng)形式(諸如可以隱含一種不同的突變)的有效性。對后者化合物類別的關(guān)注程度一般低于前者化合物的類別，但除外以下情況其中化合物如此有效，使得其對theramutein的相對較低作用從治療功效的前景來看并無實(shí)際的擔(dān)憂。本領(lǐng)域技術(shù)人員易于識別以適合于他或她需求的方式量化特異性缺口評價的各種手段。這種分析可以幫助本領(lǐng)域技術(shù)人員將各種化合物分成獨(dú)立的類，其在指導(dǎo)進(jìn)一步先導(dǎo)優(yōu)化或?qū)λ龌衔锏纳锉碚餮芯坑袔椭?。本發(fā)明還提供了用于鑒定表現(xiàn)出所需特異性缺口的化合物的方式。鑒定這類化合物并且使用體外基于細(xì)胞的試驗(yàn)系統(tǒng)測定其抑制或活化theramutein的能力，其中將物質(zhì)對該蛋白質(zhì)的突變內(nèi)源性形式的細(xì)胞功能的作用與相同藥物對該蛋白質(zhì)非-突變內(nèi)源性形式的細(xì)胞功能的作用進(jìn)行比較。因此，所述系統(tǒng)能夠發(fā)現(xiàn)這類化合物，所述化合物能夠結(jié)合theramutein并且對所述theramutein的細(xì)胞功能發(fā)揮的調(diào)節(jié)作用大于對其相應(yīng)prototheramutein的細(xì)胞功能發(fā)揮的調(diào)節(jié)作用。此外，該系統(tǒng)能夠發(fā)現(xiàn)這類化合物，所述化合物能夠結(jié)合theramutein并且對theramutein的細(xì)胞功能發(fā)揮的調(diào)節(jié)作用至少大于或大于上述已知化合物能夠?qū)ο鄳?yīng)prototheramutein的細(xì)胞功能發(fā)揮的調(diào)節(jié)作用。在本發(fā)明的一個具體的實(shí)施方案中，為以下結(jié)果篩選和鑒定化合物1)對theramutein的有效寸生至少、與/f、士臺藥4勿對prototheramutein^;有效'l"生相同；和/或2)對prototheramutein的有效性與對theramutein的有效性類似(伊展示出小或基本上為零的特異性缺口)。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，超表達(dá)所關(guān)注的theramutein的細(xì)胞用于鑒定為至少選擇的theramutein的抑制劑或活化劑(伊結(jié)合和抑制或結(jié)合和活化)的化學(xué)活性劑。這些化學(xué)活性劑還可以為prototheramutein乃至相同prototheramutein的其它theramuteins的抑制劑或活化劑。本文所用的術(shù)語"化學(xué)活性劑"和"化合物"可以互換使用，并且兩術(shù)語僅指具有至多，但不一定包括2000原子質(zhì)量單位(道爾頓)的分子量的物質(zhì)。這類物質(zhì)有時稱作"小分子"。除非另有說明，本文所用的術(shù)語物質(zhì)僅指化學(xué)活性劑/化合物，并且不指^:錄活'/i浙。本文所用的"^參活^浙"為包括蛋白質(zhì)、多肽類和核酸的分子并且具有等于或大于2000原子質(zhì)量單位(道爾頓)的分子。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，選擇theramutein并且用于本發(fā)明基于表型反應(yīng)的細(xì)胞測定系統(tǒng)，設(shè)計該系統(tǒng)是為了鑒定為theramutein的抑制劑或活化劑的活性劑。如果已知兩種或多種不同theramuteins來源于相同的prototheramutein,那么優(yōu)先選捧最具有抗性的可利用theramutein用于試驗(yàn)系統(tǒng)。一般來說，使用首先給予并且已^口氺卩制或活4bprototheramutein且4十對theramutein"出J見"的藥物測定theramutein與其未一突變對應(yīng)體(prototheramutein)相比較對指定化學(xué)活性劑的抗性程度。例如，通過分析IC5?；駻Cs。值測定這類抗性程度的方法為眾所周知的并且在本領(lǐng)域中是標(biāo)準(zhǔn)的，且在本文中未重復(fù)。然而，因果關(guān)系并非是必不可少的或應(yīng)在使用自身指定的治療劑治療患者與隨后theramutein的出現(xiàn)之間進(jìn)行推斷。而當(dāng)與theramutein有關(guān)時為實(shí)施本發(fā)明所需的是按照本文的教導(dǎo)適當(dāng)選擇正確的theramutein。因此，例如，在實(shí)驗(yàn)室中產(chǎn)生，但尚未在臨床相關(guān)性上得以證實(shí)的已知蛋白質(zhì)的隨機(jī)產(chǎn)生的定向位點(diǎn)突變體并非用于本發(fā)明范圍內(nèi)的合適的突變蛋白。當(dāng)然，也不會將這類突變蛋白劃分為theramuteins。例如，在獲得p21()b"—編突變體的潛在抑制劑的嘗試中，Huron等(2003)使用了重組c-abl制品并且篩選了一系列已知抑制c-src酪氨酸激酶活性的化合物。作者對他們的化合物進(jìn)行了c-abl激酶試驗(yàn)并且鑒定了在8nM時為對c-abl最有效的化合物。然而當(dāng)測試該化合物(PD166326)抗各種？2108"—Abltherarauteins時，它表現(xiàn)出對突變體中的某些，諸如p21()b"—abl—ewk的活性，但發(fā)現(xiàn)p210f13151theramutein保留了10倍以上的抗性(Huron等2003,表3)。此外，在每種情況中，化合物對p21()b"—Abltheramuteins的作用仍然^,/庶f它對野生型p21(T—w的作用。當(dāng)測試化合物對p21()b"—abl—13151突變體的活性時，它不能將活性抑制到任何可評估的程度(p.1270，左手欄，第二段；另外，參見附圖4)。因此披露的化合物能夠抑制對STI-571產(chǎn)生部分抗性的theramutein,但對Bcr-Abl的T315I突變體無活性，在當(dāng)時已知所述的theramutein為對STI—571表玉見出最大抗寸生的theramutein。因it匕，精石角和簡單而言，Huron的方法無法鑒定p21()b"舊3151theramutein的有效抑制劑。實(shí)際上，在披露本發(fā)明，包括本文首次描述的詳述方法以及本文提供的組合物前，世#J:/^無乂4任/^她i成功地鑒定一種化學(xué)活性劑，更不必說一種能夠鑒定將pn0f"15theramutein有效抑制至等于或高于STI-571能夠?qū)σ吧蚿210B"—w蛋白質(zhì)所抑制的程度的化學(xué)活性劑的方法(參見Shah等，Science,2004年8月；(THare等，Blood,2004;Tipping等，Leukemia,2004;Weisberg等，Leukemia,2004)。不能過分強(qiáng)調(diào)這類化合物可能非常有用，因?yàn)槟壳吧袩o用于發(fā)展成p210B"普"川theramutein-介導(dǎo)的曱磺酸伊馬替尼(imatinib)-抗性狀態(tài)的患者的備選方法。一旦患者發(fā)生這類抗性，則沒有可利用的其它有效備用手段，且死亡是肯定的。本文所述的方法提供了用于鑒定、從藥理學(xué)方式上表征和化學(xué)合成？2108""theramutein的有效抑制劑的第一個報導(dǎo)的方法。此外，本領(lǐng)域技術(shù)人員立即認(rèn)可了這種手段在任何高度藥物抗性theramuteln中的可應(yīng)用性和會推廣性。最后，本領(lǐng)域技術(shù)人員進(jìn)一步意識到在適當(dāng)條件下將本文定義的表型反應(yīng)與細(xì)胞內(nèi)特定POI存在和功能活性的增加連接起來允許人們對尋找治療有效化合物的任何指定內(nèi)源性靶蛋白質(zhì)使用該方法。在本發(fā)明中，使用展示出謹(jǐn)慎選擇的表型特征(如下所述)的測試關(guān)注的theramutein(TOI)的存在和功能活性相關(guān)。對theramutein而言，從定性上看，這一結(jié)果與表達(dá)prototheramutein的細(xì)J!包展示出的表型特征相同。表型特征(即細(xì)胞的非-基因型特征)為觀察到(測定的)、選擇和/或隨后用于如本文所述試驗(yàn)方法限定的特性。表型特征的表達(dá)是對細(xì)胞中蛋白質(zhì)的總體活性的反應(yīng)，并且為蛋白質(zhì)的絕對量及其比活性的結(jié)果。表型特征通常可作為蛋白質(zhì)活性水平升高的結(jié)果觀察到并且在表達(dá)少量蛋白質(zhì)或如果所述蛋白質(zhì)也是theramutein時，那么表型特征通常在表達(dá)少量的theramutein或其相應(yīng)的prototheramutein的細(xì)胞中并不明顯。此外，通常可以證實(shí)通過用蛋白質(zhì)的抑制劑或活化劑調(diào)節(jié)theramutein的比活性調(diào)節(jié)表型特征，不過，這并非是始終如一的情況，因?yàn)門OI的抑制劑或活化劑在本領(lǐng)域技術(shù)人員從事這類項(xiàng)目時可能并非始終可得。(然而，顯然指定prototheramutein的已知4中制劑或活4匕劑總是因theramutein本身性質(zhì)的內(nèi)在定義而存在。)因此，為了確定隨后用于為試驗(yàn)?zāi)康牡闹付y試細(xì)胞的表型特征的目的，本領(lǐng)域技術(shù)人員還可以使用能夠增加或減少表達(dá)編碼指定POI(例如在theramutein情況下的theragene)的基因的物質(zhì)，由此使得相應(yīng)theramutein的水平增加或減少。這4吏得本領(lǐng)域技術(shù)人員可以模擬某些類型的theramutein活化劑或抑制劑(諸如theramutein的自殺性抑制劑，為不可逆結(jié)合和共價修飾TOI而賦予其持久無活性的化學(xué)活性劑類型)，但實(shí)際上為了精確了解隨后用于建立有用的細(xì)胞試驗(yàn)系統(tǒng)的合適表型特征的目的而可以使用這類化合物。有助于這類目的的本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的實(shí)例包括利用反義DNA寡核苷酸、小干涉RNAs、其它基于RNA干涉的方法和含有誘導(dǎo)型啟動子系統(tǒng)的載體構(gòu)建體。在這種方式中，選擇的表型特征與測試細(xì)胞中theramutein的活性相關(guān)。對theramuteins值4尋注意的是，選擇的表型特征通常也由超表達(dá)prototheramutein的細(xì)胞.展示，且其中表型特征由已知的prototheramutein的抑制劑或活化劑調(diào)節(jié)。表型特征單純?yōu)榉羌?xì)胞基因型特征的細(xì)胞特征。除如本文披露的適當(dāng)確定的表型特征在按照本發(fā)明某些實(shí)施方案的教導(dǎo)產(chǎn)生有用的細(xì)胞試驗(yàn)系統(tǒng)目的中的具體需求外，對用于或適合于適當(dāng)和有效實(shí)施本發(fā)明的術(shù)語任意類型或性質(zhì)的表型特征沒有其它限制。實(shí)際上，本領(lǐng)域技術(shù)人員必須能夠選擇將建立用于他或她需求的適當(dāng)?shù)幕诩?xì)胞的試驗(yàn)的應(yīng)用最大化的細(xì)胞的任意特征。表型特征可以為定量或定性的并且可直接觀察或測定(辦如可用棵眼或用顯微鏡)，但最常見的是使用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的標(biāo)準(zhǔn)自動化實(shí)驗(yàn)室設(shè)備和試驗(yàn)操作步驟間接測定所述特征。術(shù)語"可觀察到"指的是可以測定特征，否則就是在適當(dāng)條件下可通過無論何種方式，包括使用任意類型的實(shí)驗(yàn)室可利用的儀器操作測。術(shù)語"可測定"與"測定的"的含義不同。特征對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是可以檢測的但不在任意指定的時間測定，這取決于本領(lǐng)域技術(shù)人員選擇如何設(shè)計試驗(yàn)系統(tǒng)。例如，在尋找P0I例如prototheramutein(或theramutein)活4b劑的過禾呈中,需要僅在添力口能夠活化POI的已知活化劑或測試物質(zhì)后檢測相關(guān)表型特征。這提供了使在試驗(yàn)中由測試細(xì)胞產(chǎn)生的信號強(qiáng)度最大化的能力。表型特征包括但不限于生長特征、轉(zhuǎn)化狀態(tài)、分化狀態(tài)、底物磷酸化狀態(tài)、催化活性、跨細(xì)胞膜的離子流(鈣、鈉、氯化物、鉀、氫離子等)、pH改變、第二信使分子或其它胞內(nèi)化學(xué)種類，諸如cAMP、磷酸肌醇類、環(huán)核苷酸的變動、基因表達(dá)的調(diào)節(jié)等?？蛇B續(xù)(辨如細(xì)胞生長率)，或在一定時間期限后(例如細(xì)胞培養(yǎng)物的最終密度)或瞬時(例如蛋白的調(diào)節(jié)導(dǎo)致蛋白底物磷酸化瞬時改變，或離子流的瞬時流量跨膜，或胞內(nèi)cAMP水平升高或降低)觀察到或測定細(xì)胞特征。在某些實(shí)施方案中，可以僅在有蛋白調(diào)節(jié)劑存在下檢測選擇的表型特征。對可以為測定而選擇的特征沒有指定的限制。本文所用的術(shù)語"細(xì)胞的特征"和"表型特征"以及單純的"特征"在用以指用物質(zhì)處理測試細(xì)胞后例如，表型特征可以為灶性形成，當(dāng)將在超表達(dá)選擇的蛋白質(zhì)的細(xì)胞在有該蛋白質(zhì)活化劑存在下培養(yǎng)，或胞內(nèi)代謝物或離子，諸如cAMP、*、鈉、氯化物、鉀、鋰、磷脂酰肌醇、cGMP、碳酸氫鹽等的水平瞬時增加或降低時，這種灶性形成變得可以觀察到。本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見，在細(xì)胞接觸測試物質(zhì)后，可以對細(xì)胞的亞細(xì)胞部分測定如此測定(檢測)的特征。然而，必須對完整細(xì)胞而非亞細(xì)胞部分用物質(zhì)進(jìn)4亍最初的處理，由此4吏該物質(zhì)接觸所述細(xì)胞。為細(xì)胞內(nèi)測定而選擇的特征不一定為蛋白質(zhì)(或theramutein或prototheramutein)本身內(nèi)在物理或化學(xué)特性(諸如僅是細(xì)胞內(nèi)部的蛋白質(zhì)的量(質(zhì)量))，而必須是因細(xì)胞內(nèi)部蛋白質(zhì)(或theramutein或月包特征的特征，正如上文詳細(xì)討論的。例如，如果theramutein為能夠進(jìn)行自磷酸化的蛋白激酶，所述的自磷酸化即該酶能夠通過從其自身上的ATP中轉(zhuǎn)移末端磷酸部分而催化自磷酸化的過程，那么可能不適合因?yàn)檫@類特征不會反映出TOI對其它細(xì)胞成分的活性。正如本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，自磷酸化不必然反映出細(xì)胞中蛋白激酶的活性，因?yàn)橐阎鞍准っ傅耐蛔凅w保留了足以進(jìn)行自磷酸化的酶活性，但失去了在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的能力。White等的經(jīng)典論文(1988)在這方面既具有教導(dǎo)性，又值得關(guān)注。術(shù)語"反應(yīng)性表型特征"指的是對指定蛋白質(zhì)(例如，包括prototheramutein或theramutein)的4印制劑或活4匕劑起反應(yīng)的細(xì)月包特征。將術(shù)語"已知的治療劑"定義為在世界范圍內(nèi)的國家中對人給藥用于治療疾病的任意活性劑。作為本文中與p21()B"^及其theramuteins相關(guān)的典型的有用的表型特征為細(xì)胞生長和增殖失調(diào)。注意相同或相似試驗(yàn)可以適用于許多不同所關(guān)注的蛋白質(zhì)。例如，生長、增殖和/或分化失調(diào)為因各種不同細(xì)胞蛋白質(zhì)超表達(dá)產(chǎn)生的常見表型特征。本發(fā)明的重要教導(dǎo)在于通過超表達(dá)選擇的蛋白質(zhì)而導(dǎo)致這類表型特征出現(xiàn)，所述的特征變得在合適的條件下與選擇的蛋白質(zhì)的存在、量和比活性相關(guān)，并且這種相關(guān)性能夠使得本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)需要鑒定所關(guān)注的蛋白質(zhì)(POI)的抑制劑或活化劑。因此，表型特征為對選擇的蛋白質(zhì)的水平和/或比活性改變的反應(yīng)。這種應(yīng)答表型特征，當(dāng)也證實(shí)對所述POI的已知調(diào)節(jié)劑有應(yīng)答時在本文中稱作"表型反應(yīng)"。在沒有已知調(diào)節(jié)劑的theramuteins的具體情況下，必須使用prototheramutein調(diào)節(jié)劑來建立與theramutein—起使用的表型反應(yīng)。所迷概念且識別細(xì)胞的這種高度有用的性質(zhì)代表本發(fā)明相比于現(xiàn)有技術(shù)的實(shí)質(zhì)性優(yōu)點(diǎn)之一，現(xiàn)有技術(shù)包括申請人本人在基于細(xì)胞測定的一般領(lǐng)域中的先前的工作(U.S.Pat.Nos.4，980，281;5,266,464;5，688，655;5，877，007)。就其鑒定POI抑制劑或活化劑能力而言，表型反應(yīng)的鑒定和選擇為有經(jīng)驗(yàn)的研究者提供了非常靈敏的細(xì)胞測定系統(tǒng)，因此與現(xiàn)有技術(shù)中公開的任何其他相關(guān)測定方法相比可以以高得多的確定度鑒定這些化學(xué)試劑。盡管并非始終必要，但是通常有利的是使用表達(dá)高水平POI的細(xì)胞并且選擇因POI超表達(dá)產(chǎn)生的表型特征。這是因?yàn)榕cPOI功能相關(guān)的表型特征一般比POI被超表達(dá)至更大程度時更加可區(qū)分(更易于測定)。此外，在POI的功能水平增加時，對POI調(diào)節(jié)劑的反應(yīng)觀察到的表型反應(yīng)通常得到擴(kuò)大。如果以另一種方式表達(dá)，那么在超表達(dá)蛋白質(zhì)(或theramutein)的細(xì)胞觀察到的選擇的表型反應(yīng)對蛋白質(zhì)(或theramutein)的調(diào)節(jié)劑凈爭另'J敏感。優(yōu)選蛋白質(zhì)在測試細(xì)胞中得到穩(wěn)定表達(dá)。穩(wěn)定表達(dá)導(dǎo)致細(xì)胞中的蛋白質(zhì)水平在試驗(yàn)過程中保持相對不會改變。例如，刺激或活化信號傳導(dǎo)途徑中的成分后為不應(yīng)期，在此過程中，信號傳導(dǎo)因所述成分的減量調(diào)節(jié)而受到抑制。就本發(fā)明的蛋白質(zhì)而言，這類減量調(diào)節(jié)通常通過人工超表達(dá)蛋白質(zhì)而足以克服。如果以另一種方式表達(dá)，那么充分質(zhì)抑制或活化，而非其水平改變所致，即使蛋白質(zhì)的減量調(diào)節(jié)隨之發(fā)生也是如此。由于這些原因，所以盡管優(yōu)選蛋白質(zhì)的穩(wěn)定表達(dá)，但是在轉(zhuǎn)染后可以使用蛋白質(zhì)的瞬時表達(dá)，條件是選擇的表型特征可測定并且試驗(yàn)系統(tǒng)的期限比其在這類系統(tǒng)中隨時間預(yù)計的瞬時表達(dá)的蛋白質(zhì)的水平進(jìn)行性下降短。由于這些原因，優(yōu)選穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞系(美國專利US4，980,281)。術(shù)語"細(xì)胞特異性"指在指定濃度下化合物調(diào)節(jié)測試細(xì)胞選擇的表型反應(yīng)的能力，而不影響對照細(xì)胞到同一程度(如果完全不影響)。術(shù)語"細(xì)胞特異性缺口"("CSG")指測量測試細(xì)胞中所選化合物調(diào)節(jié)對應(yīng)于指定靶蛋白質(zhì)的表型反應(yīng)的能力(不限于theramutein)相對于對照細(xì)胞中所述化合物調(diào)節(jié)同樣表型反應(yīng)的能力。為了將CGS技術(shù)應(yīng)用于非-theramutein內(nèi)源性耙蛋白質(zhì)，所選的表型反應(yīng)必須在之前已經(jīng)用靶蛋白質(zhì)的已知抑制劑或活化劑進(jìn)行定義。比較不同化合物的相對潛在治療值的方法，通過與對照細(xì)胞比較其相對交叉-反應(yīng)性，與對組內(nèi)任何指定化合物的靶蛋白質(zhì)的效力無關(guān)。相對對照細(xì)胞在其對測試細(xì)胞的活性中展現(xiàn)最大"特異性"的化合物通常是最想要的化合物，因?yàn)榕c在前述組中具有"窄"CSG的其他化合物相比，"寬"CSG幫助選擇可能合理地被認(rèn)為在患者中具有最小潛在副作用的化合物。當(dāng)比較基于細(xì)胞的試驗(yàn)整體產(chǎn)生的計量響應(yīng)曲線時，CSG測量的效果最明顯，然而下述的假設(shè)性例子也是有啟發(fā)的?？紤]假定化合物的下表和采用無細(xì)胞測試系統(tǒng)的相應(yīng)ICs。值。這個實(shí)施例使用蛋白激酶作為靶蛋白質(zhì)。當(dāng)處理嘗試對所選的化合物或化合物組進(jìn)行先導(dǎo)優(yōu)化以鑒定用于接下來臨床前(動物)和臨床研究的潛在優(yōu)化先導(dǎo)候選化合物的問題時，這是本領(lǐng)域技術(shù)人員每天面臨的那類情況。表1.無細(xì)胞純化蛋白激酶抑制測試<table>tableseeoriginaldocumentpage137</column></row><table>目前本領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)方法是鑒定這種化合物，其在無細(xì)胞測試系統(tǒng)中在抑制靶蛋白質(zhì)激酶的酶活性方面展現(xiàn)高度效力而對不同但密切相關(guān)的蛋白激酶不顯示顯著的抑制活性。顯示于上表1的無細(xì)胞測試系統(tǒng)的結(jié)果表明，化合物A是該系列化合物(A、B、C、D)中最有效力的且還顯示其在針對靶蛋白質(zhì)相對于其對非靶蛋白質(zhì)作用的IC5。之間差距最大。例如，如果對鑒定Abl激酶抑制劑感興趣，可以在所述測試中采用其他蛋白激酶例如EGF受體、c-kit、或c-Src作為"陰性"對照激酶。和c-Abl—樣，所有后面這些酶都是酪氨酸蛋白激酶。確實(shí)，目前在本領(lǐng)域中通常使用稱為"panel"的蛋白激酶(包括絲氨酸/蘇氨酸激酶、酪氨酸激酶和雙特異性激酶)來鑒定抑制盡可能少蛋白激酶的化合物(除靶蛋白質(zhì)本身外)。該方法的理由是在無細(xì)胞系統(tǒng)中越少的激酶被指定化合物抑制，該化合物對患者產(chǎn)生不利副作用的可能性越小。然而，幾乎沒有臨床證據(jù)確實(shí)支持這個觀點(diǎn)。此外，在一些情況下其他人認(rèn)為靶向超過一個激酶的化合物與那些只對單個靶蛋白質(zhì)高度特異性的化合物相比可能具有其他治療作用。在伊馬替尼的情況下，有一些證據(jù)證實(shí)這是對的，如本文先前討論的伊馬替尼與c-kit的交叉反應(yīng)在具有某些組織類型的小腸癌的患者中產(chǎn)生有益效果。雖然與c-kit的這種交叉反應(yīng)，然而伊馬替尼在本發(fā)明的測試系統(tǒng)中展示高度細(xì)胞特異性，這與在治療的頭三年內(nèi)其高度臨床功效和相對適中的副作用特點(diǎn)一致。然而，隨著指定化合物在本發(fā)明細(xì)胞系統(tǒng)中特異性的降低，與其他靶例如(在這個實(shí)施例中)其他蛋白激酶家族成員的交叉反應(yīng)在患者中導(dǎo)致不利的副作用。下面進(jìn)一步詳細(xì)討論。表2.通過利用基于衷型^:^的細(xì)胞測定系統(tǒng)并測量細(xì)胞掙^#^口fc5Y^應(yīng)用本發(fā)明方法的結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage138</column></row><table>技術(shù)人員從上表1顯示的無細(xì)胞測試結(jié)果得到的結(jié)論是化合物A是最有效力的化合物，顯示50%的抑制濃度(ICJ值是O.2納摩(0.2nM)。然而，如表2和圖14顯示的，相對于對照細(xì)胞這個化合物對測試細(xì)胞不顯示特異性，因?yàn)槠鋵φ占?xì)胞的IC5。也是1納摩。類似地，化合物B和D仍然十分有效力，兩者針對測試細(xì)胞均具有10nM的IC5。，而化合物D比B的特異性更高因?yàn)槠鋵φ占?xì)胞的ICs。更高(200nM)。化合物B和D的CSG測量馬上反映在這兩個化合物中化合物D是優(yōu)選化合物，所有其他考慮因素是相等的。然而，最重要的是在該實(shí)施例中就其40的CSG而言(表2，圖15)顯示化合物C是該組化合物中最好的化合物。這指相對于對照細(xì)胞化合物C對測試細(xì)胞顯示最大的特異性，且預(yù)期在患者中誘導(dǎo)不希望副作用的可能性最低，因?yàn)檫@個發(fā)現(xiàn)來源于活細(xì)胞系統(tǒng)中化合物的直接測試，大多數(shù)藥物的藥學(xué)作用的極限點(diǎn)。本實(shí)施例的重點(diǎn)是CSG測量允許本領(lǐng)域技術(shù)人員在無細(xì)胞系統(tǒng)中獨(dú)立于其效力對一些化合物的潛在治療價值進(jìn)行排序。因此，盡管化合物C是效力最低的化合物，其在抑制測試細(xì)胞能力中特異性最高，而在寬的濃度范圍內(nèi)讓對照細(xì)胞相對地未受影響。這反映在其40的CSG中，并證實(shí)化合物C(而不是化合物A)是在進(jìn)一步預(yù)臨床和臨床研發(fā)努力中給予最高優(yōu)先權(quán)的化合物。以這種方式使用本發(fā)明的方法提供排序和優(yōu)選考慮藥物發(fā)現(xiàn)和發(fā)展方法的能力，其是以前不可能的方式。盡管上述方法的重復(fù)應(yīng)用，本領(lǐng)域技術(shù)人員與醫(yī)藥化學(xué)家合作可以合成在本文描述的測試系統(tǒng)中評分為正的化合物類似物，在本發(fā)明的測試方法中測試所述化合物，根據(jù)其CSG值對所述化合物進(jìn)行排序，選擇用于進(jìn)一步研發(fā)的最佳化合物，并根據(jù)需要重復(fù)該方法盡可能多次以便完全產(chǎn)生并優(yōu)化相對于對照細(xì)胞對指定測試細(xì)胞展現(xiàn)高度特異性的化合物。一旦使用本文系統(tǒng)對指定化合物進(jìn)行了優(yōu)化，所述系統(tǒng)通常指對照細(xì)胞和測試細(xì)胞之間的CSG(如果使用上述的細(xì)胞IC5。比值的方法)至少是3到5倍，然后本領(lǐng)續(xù)完成先導(dǎo)優(yōu)化方法并測試性質(zhì)例如血漿半衰期、生物利用度和使用合適動物模型的相關(guān)參數(shù)。當(dāng)然，事實(shí)上認(rèn)為所述化合物對細(xì)胞環(huán)境中的靶蛋白質(zhì)具有需要效果的可能性為根據(jù)本文描述的方法優(yōu)化所述化合物的方法的結(jié)果，而不是用較老的無細(xì)胞方法的結(jié)果。對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說非常明顯的是，還可以將類似的方法用于指定靶蛋白質(zhì)的活化劑。對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說還明顯的是，存在確定CSG的其他方法。例如，使用上述給出的抑制劑的實(shí)施例，另一個確定CSG的有用方法是測定化合物導(dǎo)致對照細(xì)胞系50。/。生長抑制的最高濃度除以化合物抑制至少90%測試細(xì)胞系的最低濃度的比值。也可以利用本方法其他明顯的改變，包括計算化合物顯示指定百分比活性的濃度的對數(shù)，校正相對彼此的對照或測試細(xì)胞應(yīng)答等。為了確定CSG,不打算對計算或觀察的對照細(xì)胞應(yīng)答與測試細(xì)胞應(yīng)答之間的比較進(jìn)行限制。如果人們使用如上所述的對照細(xì)胞/測試細(xì)胞的IC5。比值的方法，那么通常認(rèn)為CSG值低于或等于1的化合物是好的臨床候選化合物，而CSG值大于約10的化合物是十分有希望并值得進(jìn)一步考慮。本實(shí)施例還強(qiáng)調(diào)在無細(xì)胞系統(tǒng)與本發(fā)明醫(yī)學(xué)上和生理學(xué)上更相關(guān)的基于細(xì)胞的系統(tǒng)中指定化合物的作用之間的差別。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，化合物識別用于鑒定和/或使與給患者施用化合物相關(guān)的副作用最小化。與無細(xì)胞方法相比，基于細(xì)胞的先導(dǎo)優(yōu)化方法允許潛在副作用的早期鑒定。例如，根據(jù)本文描述的本發(fā)明的方法，伊馬替尼顯示寬細(xì)胞特異性缺口。這與伊馬替尼在抗癌藥領(lǐng)域中的顯著優(yōu)勢相一致。然而，它不是沒有副作用。最近的證據(jù)證實(shí)在小部分患者中伊馬替尼與心臟毒性有關(guān)(Kerkela等人，2006)。該組隨著患者服用伊馬替尼更長的時間而增加。通過使用本發(fā)明的方法，附圖16顯示以不同濃度在野生型Ba/F3細(xì)胞系上進(jìn)行測試的伊馬替尼在明顯低于對照細(xì)胞系的表觀細(xì)月包毒性的ICs。的濃度(約10nM)時顯示輕微但是顯著的生長抑制作用，伊馬替尼在高得多的濃度下展示該細(xì)胞毒性。當(dāng)比較其他化合物對對照細(xì)胞系的作用與伊馬替尼對對照細(xì)胞系的作用時，所述結(jié)果變得更加明顯。在該方法的另一個實(shí)施中，認(rèn)為在無細(xì)胞系統(tǒng)中顯示有前景的活性但具有小的CSG值的化合物(如上所述)在患者中具有較高的潛在副作用，特別對較長的治療時期。其他人報導(dǎo)了對某些靶例如p210Bcr-Abr""突變具有低CSG值的化合物(Carter等人，2005)，且還有其他組甚至使這些化合物進(jìn)入臨床測試。然而，基于本發(fā)明的教導(dǎo)，可以預(yù)期所述化合物在患者中不利副作用的可能性增加。本發(fā)明優(yōu)選的藥物篩選方法包括下列步驟1)鑒定關(guān)注蛋白(POI)，例如需要新的抑制劑或活化劑的theramutein。通常，在確立或維持疾病狀態(tài)中涉及或懷疑涉及POI,可能由于不適當(dāng)?shù)谋磉_(dá)或突變誘導(dǎo)的比活性變化。例如，可以使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)對合適的theramutein進(jìn)行鑒定(參見，Gorre等，Science,2001;另外，參見PCT/US02/18729)。簡單的說，鑒定使用已知或可疑的prototheramutein的活化劑或抑制劑給予治療有效的治療過#呈且隨后已經(jīng)表現(xiàn)出與疾病復(fù)發(fā)一致的臨床征兆和癥狀的患者，并且獲得來源于這類患者的細(xì)胞或組織。使用標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)，諸如RT-PCR測定prototheramutein的序歹'J并且與已^口prototheramutein基因或cDNA序列的預(yù)先測定的核酸序列進(jìn)行比較。如果存在，那么鑒定突變并且再次使用標(biāo)準(zhǔn)方法與基于細(xì)胞或更常用的基于細(xì)胞的試驗(yàn)系統(tǒng)中prototheramutein的功能的功能抗性建立相關(guān)。一旦證實(shí)了i秀導(dǎo)抗性的突變，那么所述的一種或多種經(jīng)證實(shí)的突變體包括可以用于如本文所述的隨后方法限定的theramutein。2)提供表達(dá)所述POI并且展示出可觀察到(可測定的)與所述POI的表達(dá)相關(guān)的表型特征的測試細(xì)胞。對theramutein而言，表型特征通常是已經(jīng)預(yù)先證實(shí)所述的表型特征對theramutein，或更常見的是相應(yīng)的prototheramutein的抑制劑或活化劑有反應(yīng)。與所述POI的表達(dá)相關(guān)，并將已經(jīng)預(yù)先證實(shí)對所關(guān)注的POI(或所關(guān)注的prototheramutein(pTOI))的^p制劑或活化劑有反應(yīng)的這種4爭異性表型特征在本文中定義為"表型反應(yīng)(phenoresponse)"。本發(fā)明的一個實(shí)施方案在于所述表型反應(yīng)在鑒定能夠成為TOI抑制劑或活化劑的化合物的目的中的確定應(yīng)用。這一過程可以通過使用應(yīng)用過度產(chǎn)生指定的TOI并且已經(jīng)鑒定和表征了適當(dāng)?shù)谋硇头磻?yīng)的細(xì)胞系的高流通量篩選來進(jìn)行?；蛘撸梢允褂脩?yīng)用更一般性的細(xì)胞系表型特征(按照本文的教導(dǎo)并不定為表型反應(yīng))的高流通量初級篩選且然后按照本文的教導(dǎo)使用二次篩選，以便從并非所關(guān)注的theramutein的抑制劑或活化劑的假陽性化合物中區(qū)分確實(shí)為陽性的"命中"的化合物，即所關(guān)注的theramutein的抑制劑或活化劑。在一個實(shí)施方案中，選擇天然表達(dá)theramutein的細(xì)胞，以便反應(yīng)性表型特征在對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言顯而易見的適當(dāng)培養(yǎng)條件下存在。在其它實(shí)施方案中，theramutein在某些情況中在宿主細(xì)胞中得到超表達(dá)，否則，該宿主細(xì)胞完全不表達(dá)theramutein。這一過程通常包括構(gòu)建表達(dá)載體，可以將該表達(dá)載體導(dǎo)2001;小時ousey等，1988)。在一個實(shí)施方案中，超表達(dá)產(chǎn)生的theramutein水平至少約3倍于該蛋白質(zhì)通常存在于細(xì)胞中的量?；蛘?，該量至少約為通常存在于細(xì)胞中的量的10倍。在另一個實(shí)施方案中，該量至少約為通常存在于細(xì)胞中的量的20倍或更優(yōu)選至少約為50倍。3)只要對照細(xì)胞較低程度或完全不表達(dá)POI(例如，未修飾的宿主細(xì)胞或隱含不表達(dá)POI的表達(dá)載體的宿主細(xì)胞)。對關(guān)注的theramutein而言，對照細(xì)力包也可以是表達(dá)相應(yīng)于所關(guān)注的theramutein的prototheramutein的細(xì)胞。4)當(dāng)本文所述的某些突變蛋白也為酶時，它們通常保留了催化活性并且由此對照細(xì)胞通常展示出基本上與測試細(xì)胞相同的表型特征。不過，這種表型特征不需要如兩種細(xì)胞那樣進(jìn)行定量。例如，使prototheramutein再活化的突變蛋白就其在細(xì)胞中的底物中的一種或多種而言也可以增加、減少乃至影響其比活性。作為結(jié)果，它可以將選擇的表型特征展示出較大或較小的程度。因此，在某些情況中，需要調(diào)整prototheramutein和theramutein之一或它們兩者的表達(dá)，以便測試和對照細(xì)胞將表型特征展示至近似相同的程度。例如，均可以使用標(biāo)準(zhǔn)方法，通過由啟動子表達(dá)蛋白質(zhì)達(dá)到這一目的，其中可以通過調(diào)整存在的誘導(dǎo)物的量來調(diào)整啟動子的活性(例如，參見Sambrooketal.1989和2001)。本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見，適當(dāng)定義的表型反應(yīng)在表達(dá)prototherainutein與therarautein的細(xì)胞系中可以存在定#差異作為與其相應(yīng)的prototheramutein之間比活性差異(如果有的話)的結(jié)果。"i秀導(dǎo)Theramutein的突變可以增力p或減少所述theramutein相對于相應(yīng)的prototheramutein而言的比活性。當(dāng)將表達(dá)theramutein的細(xì)胞系與表達(dá)prototheramutein的細(xì)胞系進(jìn)行比較時，優(yōu)選選擇的表型反應(yīng)在兩種細(xì)胞類型中定性地相同。因此，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以選擇將表達(dá)性校準(zhǔn)或反之亦然。這類歸一化法在本領(lǐng)域中是標(biāo)準(zhǔn)的。例如，參見Bolstad等(2003)?；蛘撸绢I(lǐng)域技術(shù)人員還可以希望使用未修飾的宿主細(xì)胞或僅隱含了表達(dá)栽體作為用于某些實(shí)驗(yàn)操作步驟的對照細(xì)胞的宿主細(xì)胞(宿主細(xì)力包為導(dǎo)入了編碼theramutein的表達(dá)載體而產(chǎn)生測試細(xì)月包的細(xì)胞)。這可能就是研究人員僅對所關(guān)注的theramutein的特異性抑制劑或活化劑感興趣，而與所述化合物是否還對所關(guān)注的prototheramutein(pTOI)有效無關(guān)的情況[取代工作活性]。4)然后在合適的條件下將測試和對照細(xì)胞維持或使其增殖(不過不一定在同時)在生長培養(yǎng)基(乃至在完整動物體內(nèi))中，以便可以表達(dá)和檢測表型反應(yīng)?？梢杂胮rototheramutein的已知調(diào)節(jié)劑或用測試物質(zhì)處理表達(dá)prototheramutein的對照細(xì)胞，并且用測試化合物處理測試細(xì)胞以便確定它們是否如所述物質(zhì)以預(yù)計方式調(diào)節(jié)表型反應(yīng)的能力所測定的對theramutein具有活性?；蛘?，還可以根據(jù)本領(lǐng)域4支術(shù)人的對照細(xì)胞。然后檢測物質(zhì)對測試細(xì)胞的作用，并且任選地同時或在另一時間測試對對照細(xì)胞的作用，并且比較結(jié)果。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，根據(jù)以例如與prototheramutein的已知調(diào)節(jié)劑改變表達(dá)prototheramutein的對照細(xì)胞的表型反應(yīng)相同的方式調(diào)節(jié)測試細(xì)胞的表型反應(yīng)的能力快速鑒定對測試細(xì)胞具有活性的物質(zhì)。在另一個實(shí)施方案中，可以通過調(diào)節(jié)測試細(xì)胞中theramutein的活性而對未修飾(不表達(dá)prototheramutein和/或theramutein)的對照細(xì)胞幾乎或沒有作用的能力來鑒定活性物質(zhì)。例如，本領(lǐng)域技術(shù)人員易于理解該手段的許多變化形式可以用于鑒定為對theramutein更為有效或?qū)rototheramutein和一種或多種相應(yīng)的具體theramuteins等效的調(diào)節(jié)劑?？梢杂^察到和/或測定其它表型反應(yīng)，并且包括例如，檢測prototheramutein的底物和檢測通過theramutein活性調(diào)節(jié)的基因表達(dá)的改變。在最簡單的術(shù)語中，本領(lǐng)域技術(shù)人員預(yù)先建立的與theramutein的功能活性相關(guān)性的細(xì)胞的任意特征適用于這類方法。然而，在選擇指定特征的過程中，本領(lǐng)域技術(shù)人員必須首先按照作為本域技術(shù)人員還可以希望將使用表達(dá)theramutein的細(xì)胞的表型反應(yīng)與表達(dá)prototheramutein的細(xì)胞的表型反應(yīng)校準(zhǔn)?？梢酝ㄟ^本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的各種方法測定適合于檢測的特征。這類方法包括但不限于檢測適當(dāng)標(biāo)記的蛋白質(zhì)的熒光(FACS);用于檢測蛋白質(zhì)表達(dá)的免疫組織化學(xué)(IHC);竟?fàn)幏派湫耘潴w結(jié)合測定；固相基質(zhì)印跡技術(shù)，諸如細(xì)胞提取物的RNA印跡、DNA印跡和蛋白質(zhì)印跡；逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR);酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA);磷酸化測定；凝膠阻留測定；膜電位干擾等?？梢栽赹f吏用測試物質(zhì)處理后檢測完整細(xì)胞上的相關(guān)表型特征，或者在使用測試物質(zhì)處理完整細(xì)胞后檢測在細(xì)胞的亞細(xì)胞部分上的相關(guān)表型特征。物，就需要(但不一定)獨(dú)立地驗(yàn)證所鑒定的化合物通過直接結(jié)合機(jī)制對theramutein發(fā)揮其作用，即按照本發(fā)明的教導(dǎo)，這些化合物滿足作為theramutein的抑制劑或活化劑(作為理想的)的標(biāo)準(zhǔn)(讀者如上所述涉及的術(shù)語"活化劑"和"抑制劑"的定義)?？梢允褂帽绢I(lǐng)域技術(shù)人員公知的大量標(biāo)準(zhǔn)結(jié)合測定法達(dá)到這一目的，包括純化的蛋白質(zhì)樣品或使用用合適的prototheramutein或theramutein轉(zhuǎn)染的細(xì)胞與如通過聲科學(xué)法所述的合適的對照品進(jìn)行的完整細(xì)胞結(jié)合測定法。由于這類方法為本領(lǐng)域中充分確立的，所以不在此處重復(fù)它們。大量參考文獻(xiàn)文本綜合討論了這類^支術(shù)(例如，參見Foreman和Johansen，2002;EnnaS.J.等(1991)CurrentProtocolsinPharmacology,Wiley&Sons,Incorporated;Bonifacino，J.S.等(1999)CurrentProtocolsinCellBiology,Wiley&Sons,Incorporated).還參見Housey，G.M.1988,Chapter4及其中的參考文獻(xiàn)；另外，參見Horowitz等，1981。在本發(fā)明的一個具體的實(shí)施方案中，該方法用于鑒定為p210Bc—3151theramutein的抑制劑的物質(zhì)。使用標(biāo)準(zhǔn)方法在Ba/F3(鼠)細(xì)胞中各自表達(dá)prototheramutein和theramutein,并且觀察到的表型反應(yīng)為生長特征(謹(jǐn)慎確定的細(xì)胞培養(yǎng)物的末端細(xì)胞密度和在沒有白細(xì)胞介素-3(IL-3)存在下的生長)。還可以任選使用未修飾的宿主細(xì)胞或僅含有表達(dá)載體的宿主細(xì)胞或它們兩者。在另一個實(shí)施方案中，將測試細(xì)胞單獨(dú)與或不與涉及的已知抑制劑或活化劑一起使用。另一種有用的測定法為測定p21QB"—Abl—"151的直接底物的磷酸化狀態(tài)。一種這類底物為Crkl(Gorre等，5We/ce293:876-80(2001)),即一種介導(dǎo)Bcr-Abl與Ras之間的連接的銜接蛋白。CRKL的磷酸^f匕狀態(tài)為細(xì)胞中p21()b，的信號傳導(dǎo)活性的代表。另一種下游底物為p62D0K。對這些目的而言，任意這類底物均可滿足，當(dāng)然，條件是已經(jīng)證實(shí)所述底物的磷酸化在細(xì)胞內(nèi)部發(fā)生，并且不非簡單地如上所述為TOI或PTOI的自磷酸化活動。還可以監(jiān)測其它信號轉(zhuǎn)導(dǎo)級聯(lián)成分，包括src族激酶、STAT5、PI3激酶、raf激酶、RAS、MEK、ERK1和ERK2、JNK1、2和3、MLK1、2和3、MKK4、MKK7、AKT、mTOR、HSP90等。作為本文中的典型，已經(jīng)鑒定了T3151theramutein的抑制劑。此外，這些抑制劑還對野生型prototheramuteinp210B"_Abl—"具有不同程度的活性。按照本發(fā)明，對需要的哺乳動物給予治療有效量的調(diào)節(jié)P210B"-Ab1theramutein的功能活性的一種或多種化合物。本文所用的術(shù)語"給予"指的是通過可以實(shí)現(xiàn)尋找的結(jié)杲的任意方法將本發(fā)明的化合物遞送給哺乳動物。例如，可以通過口服、非腸道(靜樂:K內(nèi)或肌內(nèi))、局部、透皮或通過吸入給予它們。本文所用的術(shù)語"哺乳動物"用以包括，但不限于人、實(shí)驗(yàn)室動物、馴養(yǎng)寵物和農(nóng)場動物。"治療有效量，，指的是在對哺乳動物給藥時有效產(chǎn)生所需治療作用，諸如抑制激酶活性、抑制癌細(xì)胞生長和分裂等的化合物用量。本發(fā)明提供了治療哺乳動物疾病的方法，通過對該哺乳動物給予有效量的theramutein的調(diào)節(jié)劑來進(jìn)行。按照本發(fā)明治療的合適的疾病包括但不限于已經(jīng)對預(yù)先給予的藥物產(chǎn)生抗性的復(fù)發(fā)性胂瘤或其它增殖性病癥。該方法還用于克服個體中存在對因治療靶標(biāo)中的等位基因差異產(chǎn)生的藥物治療的敏感性方面的變化形式。例如，已經(jīng)廣泛證實(shí)了在CML中p21()B"—"'酪氨酸激酶信號傳導(dǎo)的作用，因?yàn)閜21()B"—w的theramuteins在CML的藥物抗性復(fù)發(fā)中具有作用。此外，不同的p210B"_Abl的突變蛋白表現(xiàn)出對p210B"—Abl的抑制劑的可變敏感性。盡管某些theramuteins在藥物療法過程中出現(xiàn)，但是其它可能預(yù)先存在于群體中。對后面這些實(shí)例并不/zH人為theramuteins，直到疾病狀悉隨之發(fā)生并且隨后用已知類型的治療劑治療時為止。僅在所述治療后，這類預(yù)先存在的theramuteins顯示出其自身在導(dǎo)致隱含theramutein的患者中的疾病發(fā)展的相對非-反應(yīng)性方面的臨床顯著性。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，給予theranmtein調(diào)節(jié)劑與一種或多種抗肺瘤劑?？梢允褂萌我夂线m的抗腫瘤劑，諸如化療劑、》文射或其組合?？鼓[瘤藥可以為烷化劑或抗代謝物。烷化劑的實(shí)例包4舌但不限于順鉑、環(huán)磷酰胺、美法侖和達(dá)卡巴溱?？勾x物的實(shí)例包4舌但不限于多柔比星、柔紅霉素和紫杉醇、吉西他濱和拓樸異構(gòu)酶抑制劑伊立替康(CPT-ll)、氨基喜樹堿、喜樹堿、DX-8951f、托泊替康(拓樸異構(gòu)酶I抑制劑)和依托泊苷(VP-16;拓樸異構(gòu)酶II抑制劑)和替尼泊苷(VM-26;拓樸異構(gòu)酶II抑制劑)。當(dāng)抗腫瘤藥為放射時，放射源可以在所治療患者的體外(外線束放療-EBRT)或體內(nèi)(近距離放射療法-BT)。所給予的抗腫瘤劑的劑量取決于許多因素，包括例如，活性劑的類型、所治療的腫瘤的類型和嚴(yán)重程度以及活性劑的給藥途徑。然而，應(yīng)強(qiáng)調(diào)本發(fā)明并不限于任何特定的劑量、給藥途徑或合并給予蛋白調(diào)節(jié)劑的化療劑或其它治療方案的組合?？梢詫⒛壳氨绢I(lǐng)域中公知或評價的抗腫瘤劑分成不同類型，包括例如，有絲分裂抑制劑；烷化劑；抗代謝物；嵌入抗生素；生長因子抑制劑；細(xì)胞周期抑制劑；酶；拓樸異構(gòu)酶抑制劑；抗存活劑；生物學(xué)反應(yīng)修飾劑；抗激素和抗血管發(fā)生劑，可以將所有這類活性劑與theramuteins的抑制劑或活化劑一起給藥?？梢詫heramutein的調(diào)節(jié)劑與中和涉及腫瘤生長的其它受體的抗體一起給藥。此外，可以將theramutein的調(diào)節(jié)劑與另外調(diào)節(jié)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的成分，優(yōu)選與在一種或多種其它信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中具有活性并且對這些途徑而言為常見的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的成分一起給藥。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，將theramutein調(diào)節(jié)劑與特異性結(jié)合表皮生長因子受體(EGFR)的受體拮抗劑聯(lián)用。特別優(yōu)選抗原結(jié)合蛋白，這些蛋白結(jié)合EGFR的胞外域并且阻斷結(jié)合其配體中的一種或多種和/或中和配體-誘導(dǎo)的EGFR活化。EGFR拮抗劑可以為結(jié)合EGFR或EGFR配體并且抑制和EGFR與其配體結(jié)合的抗體。EGFR的配體的實(shí)例包括例如，EGF、TGF-a、雙調(diào)蛋白、肝素-結(jié)合EGF(HB-EGF)和|3動物纖維素。i人為EGF和TGF-ot為導(dǎo)致EGFR-介導(dǎo)的刺激的主要內(nèi)源性配體，不過，已經(jīng)證實(shí)TGF-a在促進(jìn)血管發(fā)生中更為有效。應(yīng)理解EGFR拮抗劑可以在外部結(jié)合EGFR的胞外部分，可以抑制，也可以不抑制配體的結(jié)合，或在化學(xué)活性劑的情況下，在內(nèi)部結(jié)合酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域。結(jié)合EGFR的EGFR拮抗劑的實(shí)例包括但不限于生物制劑，諸如對EGFR具有特異性的抗體(及其功能等效物)；和化學(xué)活性劑(小分子)，諸如對EGFR的胞質(zhì)域直接起作用的合成激酶抑制劑。腫瘤發(fā)生中涉及的生長因子受體的其它實(shí)例為血管內(nèi)皮生長因子(VEGFR-l和VEGFR-2)、血小板衍生的生長因子(PDGFR)、神經(jīng)生長因子(NGFR)、成纖維細(xì)胞生長因子(FGFR)等的受體。在聯(lián)合療法中，在使用另一種活性劑開始治療之前、過程中或之后給予theramutein抑制劑及其任意的組合，即在使用抗腫瘤藥療法開始之前和過程中，在之前和之后，在過程中和之后或在之前、過程中和之后。例如，可以在開始放療前l(fā)-30天，優(yōu)選3-20天，更優(yōu)選5-12天給予theramutein抑制劑。在本發(fā)明的一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，在使用抗體療法前、與之同時或更優(yōu)選在其后給予化療。在本發(fā)明中，可以將任意合適的方法或途徑用于給予本發(fā)明的theramutein抑制劑，并且任選共同給予抗腫瘤劑和/或其它受體拮抗劑。按照本發(fā)明使用的抗腫瘤藥方案包括認(rèn)為最適合于治療患者腫瘤病情的任意方案。不同的惡性腫瘤可能需要使用特異性抗腫瘤抗體和特異性抗腫瘤劑，這需要基于患者與患者的不同來決定。給藥途徑包括例如，口服、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下或肌內(nèi)給藥。給予的拮抗劑劑量取決于許多因素，包括例如，拮抗劑的類型、所治療的腫瘤的類型和嚴(yán)重程度以及拮抗劑的給藥途徑。然而，應(yīng)強(qiáng)調(diào)本發(fā)明并不限于任何特定的方法和給藥途徑。合適的載體包括例如，水、鹽水、磷酸緩沖鹽水、葡萄糖、甘油、乙醇等中的一種或多種及其組合。載體可以進(jìn)一步包括少量輔助物質(zhì)，諸如濕潤劑或乳化劑、防腐劑或緩沖劑，它們可以增加作為活性組分的theramutein調(diào)節(jié)劑的貯存期限或有效性。作為本領(lǐng)域眾所周知的，可以將組合物配制成對哺乳動物給藥后^f吏活性組分快速、持續(xù)或延緩釋放的劑型。本發(fā)明的組合物可以為各種形式。它們包括例如，固體、半固體和液體劑型，諸如片劑、丸劑、粉劑、液體溶液、分散液或混懸液、脂質(zhì)體、栓劑、可注射和可輸注溶液。優(yōu)選的劑型取決于指定的給藥方式和治療應(yīng)用。可以按照制藥領(lǐng)域中眾所周知的方式制備本發(fā)明的這類組合物。在制備組合物的過程中，通常將活性組分與載體混合或用載體稀釋組合物和/或?qū)⒔M合物包封在載體內(nèi)，所述的載體用作稀釋劑，它可以為固體、半固體或液體物質(zhì)，它起活性組分的媒介物、賦形劑或介質(zhì)的作用。因此，組合物可以為片劑、錠劑、小藥囊、扁嚢劑、酏劑、混懸液、氣溶膠(作為固體或在液體介質(zhì)中)、含有例如達(dá)ioy。重量的活性化合物的軟膏劑、軟和硬明膠膠嚢、栓劑、注射溶液、混懸液、無菌包裝的粉末和作為局部貼劑。應(yīng)理解可以將本發(fā)明的方法和組合物對任意合適的哺乳動物給藥，諸如家兔、大鼠或小鼠。更優(yōu)選所述的哺乳動物為人。本發(fā)明的化合物還可以作為鹽存在。在本發(fā)明的上下文中，優(yōu)選給予藥物上可接受的鹽。藥物上可接受的鹽指的是本發(fā)明化合物的酸加成的鹽或堿加成的鹽，其中將所得抗衡離子理解為在本領(lǐng)域中一般對藥物應(yīng)用而言是可接受的。藥物上可接受的鹽可以為本發(fā)明化合物與無機(jī)酸或有機(jī)酸形成的鹽。優(yōu)選得到與無機(jī)酸形成的鹽，所述的無機(jī)酸諸如例如，鹽酸、氫溴酸、磷酸或硫酸，或優(yōu)選得到與有機(jī)羧酸或磺酸形成的鹽，所述的有機(jī)羧酸或磺酸諸如例如，乙酸、馬來酸、富馬酸、蘋果酸、擰檬酸、酒石酸、乳酸、苯甲酸或甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、曱苯磺酸或萘二磺酸。藥物上可接受的鹽還可以為本發(fā)明化合物的金屬或銨鹽。特別優(yōu)選得到例如，鈉、鉀、鎂或鉀的鹽，并且還特別優(yōu)選得到來源于氨或有機(jī)胺類的銨鹽，所述的有機(jī)胺類諸如例如，乙胺、二-或三乙胺、二-或三乙醇胺、二環(huán)己胺、二甲氨基乙醇、精氨酸、賴氨酸、乙二胺或卜苯乙胺(參見Berge等/.1977，"，1-19)。在本申請的上下文中，參照了各種公開文獻(xiàn)、參考文獻(xiàn)正文、教科書、技術(shù)手冊、專利和專利公開文獻(xiàn)。將這些公開文獻(xiàn)、專利、專利申請和其它對比文件教導(dǎo)的和披露的內(nèi)容完整地引入本申請作為參考，以便更完整地描述本發(fā)明涉及的本領(lǐng)域的狀態(tài)。應(yīng)理解和預(yù)計本領(lǐng)域技術(shù)人員可以實(shí)施本文^皮露的本發(fā)明的原理的變化形式并且認(rèn)為這類變型包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。下列實(shí)施例進(jìn)一步解釋本發(fā)明，但不應(yīng)視為以任何方式限定本發(fā)明的范圍。常用方法，諸如那些用于載體和質(zhì)粒構(gòu)建、將編碼多肽類的基因插入這類載體和質(zhì)粒、將質(zhì)粒導(dǎo)入宿主細(xì)胞以及基因和基因產(chǎn)物的表達(dá)及其測定的方法的詳細(xì)描述可以獲自大量公開文獻(xiàn)，包括Sambrook，J等，(1989)MolecularCloning:ALaboratoryManual,2nded.,ColdSpring小時arborLaboratoryPress;Coligan，J.等(1994)CurrentProtocolsinImmunology，Wiley&Sons,Incorporated;Enna，S.J.等(1991)CurrentProtocolsinPharmacology,Wiley&Sons,Bonifacino,J.S.等(1999)CurrentProtocolsinCellBiology,Wiley&Sons;和U.S.Patent4，980，281。將所有本文提及的參考文獻(xiàn)完整地引入。實(shí)施例可以理解和預(yù)期本領(lǐng)域的技術(shù)人員在此處公開的本發(fā)明原則下進(jìn)行變化，且意圖將這些改變包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。列舉本發(fā)明下述實(shí)施例以進(jìn)一步描述本發(fā)明而不應(yīng)理解為以任何方式限制本發(fā)明。實(shí)施例l:鑒定蛋白調(diào)節(jié)劑P210B"—Ab'，'為對甲磺酸伊馬替尼的抑制作用產(chǎn)生抗性的p210Bcr-Abl蛋白質(zhì)(p210Bc"bl)的theramutein(Gleevec，STI-571)。315位上的突變將蘇氨酸轉(zhuǎn)化成異亮氨酸殘基，并且為在抗性或復(fù)發(fā)性患者中觀察到的幾種突變之一。然而，這種特定的突變體為鑒定的最具抗性的這類theramutein。為用于超表達(dá)p21()B"—Abl—T3151theramutein改造的Ba/F3細(xì)胞系測定表型反應(yīng)。測定相對于未轉(zhuǎn)化的Ba/F3細(xì)胞和表達(dá)p210B"—Abl—wtprototheramutein的Ba/F3細(xì)胞而言的表型反應(yīng)。表型反應(yīng)為T315I突變體在類似的培養(yǎng)條件下生長至高于對照組的未轉(zhuǎn)化Ba/F3細(xì)^^系的細(xì)胞飽和密度并且在維持對照組未轉(zhuǎn)化的Ba/F3細(xì)胞系所需的白細(xì)胞介素3(IL-3)不存在下生長的能力。按照上述給出的教導(dǎo)定義和表征表型反應(yīng)。使用的檢測系統(tǒng)為高速細(xì)胞成像和計數(shù)系統(tǒng)，其中將3)il的細(xì)胞樣品體積順序通過5ial光學(xué)微量比色池注射、數(shù)字成像并且以電方式貯存、掃描且然后計數(shù)，所有操作均在基于微型計算機(jī)的控制系統(tǒng)中進(jìn)行。該系統(tǒng)具有對來自小至500nl的培養(yǎng)物的樣品進(jìn)行直接細(xì)胞計數(shù)的能力，并且提供來自含有少至12，500個細(xì)胞的培養(yǎng)樣品的具有統(tǒng)計學(xué)意義的總細(xì)胞計數(shù)。所有展示出細(xì)胞計數(shù)和存活率試驗(yàn)的圖均使用數(shù)據(jù)獲取和分析用的該系統(tǒng)。在進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)的同時，該系統(tǒng)還能夠通過區(qū)分計數(shù)、成像的細(xì)胞測定總體細(xì)胞存活率，所述的計數(shù)、成像的細(xì)胞從吸收錐蟲藍(lán)染料(計為"未存活"細(xì)胞)的細(xì)胞中排除錐蟲藍(lán)(計為"存活"細(xì)胞)。將錐蟲藍(lán)注入細(xì)胞樣品，此后即刻依次將樣品注入微量比色池以便同時進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)和成像。將系統(tǒng)整合入高流通量篩選裝置的工作流程以便提供靈敏和精確的細(xì)胞計數(shù)和細(xì)胞存活率試驗(yàn)系統(tǒng)，它更可靠并且較不易于發(fā)生基于代謝存活率的細(xì)胞試驗(yàn)，諸如XTT或AUmar藍(lán)的混雜效應(yīng)。最初，以一般在10-20nM范圍的濃度篩選約113，OOO種化合物，以便鑒定能夠通過任意方式影響超表達(dá)p210f"151theramutein的Ba/F3細(xì)胞(Ba/F3T315I細(xì)胞)生長的亞群?？傆嫾sll，760種化合物表現(xiàn)出大于50%的生長抑制作用，認(rèn)為這相當(dāng)于約4500種不同的化學(xué)類型。使用相同細(xì)胞系重新測試這些化合物產(chǎn)生了化合物反應(yīng)性數(shù)據(jù)庫，然后將其分類并且根據(jù)表現(xiàn)出最高總體生長抑制作用的那些化合物進(jìn)行等級排序。然后在使用Ba/F3T315I作為測試細(xì)胞和野生型Ba/F3作為對照細(xì)胞的確定的基于細(xì)月包的試驗(yàn)系統(tǒng)中按照本發(fā)明的方法從該等級排序的數(shù)據(jù)庫中重新篩選最高評分的130種化合物(基于在測試化合物的最低濃度下觀察到的最大程度的生長抑制作用)。所關(guān)注的化合物為那些與未轉(zhuǎn)化的野生型Ba/F3細(xì)胞相比區(qū)別抑制表達(dá)p210n"151theramutein的Ba/F3細(xì)胞生長的化合物。鑒定滿足所需標(biāo)準(zhǔn)的6種化合物并且還使用Ba/F3p210B"_Abl—"細(xì)胞系(Ba/F3P210細(xì)胞)進(jìn)一步詳細(xì)分析這些化合物中的某些。因缺乏可利用的來自化學(xué)供應(yīng)商的額外物質(zhì)而導(dǎo)致一種化合物不能用于進(jìn)一步測試。在使用上述細(xì)胞系的額外基于細(xì)胞的試驗(yàn)和使用分離自野生型P210Bcr-Abl和P210T315I突變體激酶結(jié)構(gòu)域的人重組產(chǎn)生的120Kd激酶結(jié)構(gòu)域片段的不含細(xì)胞的純化蛋白激酶試驗(yàn)中獨(dú)立地評價剩余的5種化合物。所有5種化合物均如自磷酸化活性抑制所測定的抑制p210B"iT3151120Kd活性。因此，在篩選的113,OOO種以上的化合物中的6種最高評分的化合物中，這6種中的至少5種直接抑制1)2108"，_73151突變體。一種化合物看起來在SDS聚丙烯酰胺凝膠上使重組蛋白質(zhì)帶鋪展開。這種情況在銀染色的凝膠上也是明顯的(數(shù)據(jù)未顯示)。可能的情況是這種化合物實(shí)際上可以為能夠共價交聯(lián)POI以便持久抑制其活性的"自殺"抑制劑，但這一結(jié)果需要進(jìn)一步研究。本文所述的教導(dǎo)和結(jié)果共同提供了結(jié)論性證據(jù)，即該系統(tǒng)能夠鑒定選擇的theramutein的抑制劑或活化劑，并且本領(lǐng)域沖支術(shù)人員立即意識到這類系統(tǒng)在僅進(jìn)行顯而易見的最小變型的情況下就易應(yīng)用于任意其它theramutein或其它蛋白。證實(shí)Ba/F3T315I細(xì)胞系與野生型未轉(zhuǎn)化Ba/F3細(xì)胞相比的生長抑制作用的基于細(xì)胞的試驗(yàn)結(jié)果的有代表性的實(shí)例如附圖l和2中所示。這些化合物在野生型Ba/F3未轉(zhuǎn)化細(xì)胞(不表達(dá)p21()B"—Abl-fft或p210B"—Abl—"^)的生長和存活率相對不受影響的濃度下抑制表達(dá)T3151theramutein的細(xì)胞生長并且降低其存活率，而表達(dá)prototheramutein和theramutein的細(xì)胞基本上得到抑制。在某些情況中，對表達(dá)T3151的細(xì)胞的抑制程度甚至大于對表達(dá)P210prototheramutein的細(xì)胞的抑制程度(例如，參見附圖3，右手側(cè)，化合物3對P210和T315I細(xì)胞的結(jié)果。概括地說，本文提供的方法提供了用于產(chǎn)生或鑒定任意指定theramutein的調(diào)節(jié)劑的可推廣方法形式的基本發(fā)展。結(jié)果結(jié)論性地證實(shí)了該方法在鑒定關(guān)鍵需求的化合物方面的能力，這些化合物用于克服在某些患者群體中一致性地成為致命性的并且目前不可治療的具體類型的獲得性藥物抗性。此外，對本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是，可具有臨床意義的可能的theramutein或其他疾病相關(guān)蛋白質(zhì)。值得注意的是，在100，OOO種以上化合物的初步篩選中，其中約10，OOO種化合物表現(xiàn)出一定程度的生長抑制作用，當(dāng)使用本文詳述的方法重新篩選最有效的生長抑制物質(zhì)時，鑒定了6種不同的化合物并且隨后測試的所有化合物在使用T315I突變體的不含細(xì)胞的純化蛋白激酶試驗(yàn)中均表現(xiàn)出了抑制活性(一種化合物不能用于進(jìn)一步測試)?；谶@類值得注意的結(jié)果，本領(lǐng)域技術(shù)人員立即明確基于上述部分和定，該才法T以才效她^^f蔞定任看f冷^^伊辦W4'活^浙。例如，本領(lǐng)域技術(shù)人員使用上述知識容易地設(shè)計分析系統(tǒng)來鑒定來源于其它prototheramuteins的theramuteins的4中制齊'J，已知所述的其它protothe，uteins顯示出賦予藥物抗性的突變，諸如c-kit基因產(chǎn)物或表皮生長因子(EGF)受體(EGFR)或血小板衍生的生長因子(PDGF)受體oc和P。在使用該方法時，就方法用于在其相應(yīng)的表型反應(yīng)是可檢測的任意哺乳動物細(xì)胞類型中表達(dá)的任意指定蛋白質(zhì)(包括theramutein和prototheramutein)的能力而言，4偉斷應(yīng)沒有限制。實(shí)施例2:基于表型反應(yīng)的蛋白質(zhì)調(diào)節(jié)劑優(yōu)化在該實(shí)施例中，對根據(jù)本發(fā)明教導(dǎo)先前已經(jīng)鑒定的化合物進(jìn)行針對所選耙蛋白質(zhì)的活性進(jìn)行優(yōu)化。然而，與本領(lǐng)域技術(shù)中通常采用的方法不同，本文的優(yōu)化過程也完全通過使用基于表型反應(yīng)的細(xì)月包測試系統(tǒng)進(jìn)行?？紤]到完全性以及為了證實(shí)該方法優(yōu)化(refine)的能力，采用重組產(chǎn)生的靶酶的無細(xì)胞測試系統(tǒng)也用于獨(dú)立證實(shí)在基于表型反應(yīng)的細(xì)胞測試系統(tǒng)中評分為正的所述化合物確實(shí)在無細(xì)胞測試系統(tǒng)模式(其為本領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)并使用重組產(chǎn)生的酶)中也評分為正。對最初被鑒定為T3151theramutein抑制劑的化合物C2進(jìn)行下述的新先導(dǎo)優(yōu)化程序。使用標(biāo)準(zhǔn)醫(yī)藥化學(xué)合成方法在化合物C2的基本骨架結(jié)構(gòu)中引入各種化學(xué)修飾。一旦合成，使用上述實(shí)施例1中基于表型反應(yīng)的細(xì)胞測試系統(tǒng)對各種類似物(化學(xué)變體)進(jìn)行測試?；诨衔顲2的最初結(jié)構(gòu)，分析了含溴、氯和羥基取代基的苯環(huán)對藥理學(xué)活性的貢獻(xiàn)。合成最初系列的類似物，其由未取代的苯環(huán)(C2-01),或在苯環(huán)上有各種取代基(例如定位在苯環(huán)周圍各種位置上的溴、氯和羥基等)組成。詳細(xì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)顯示于表3。表3:C2化合物的優(yōu)化<formula>formulaseeoriginaldocumentpage153</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage154</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage155</column></row><table>然后在基于表型反應(yīng)得細(xì)胞測試系統(tǒng)中測試這些化合物，如附圖17所示。還在標(biāo)準(zhǔn)的無細(xì)胞蛋白激酶自磷酸化測試中，以20nM的濃度對各個化合物進(jìn)行測試，如附圖18所示。附圖17和附圖18的比較顯示在基于表型反應(yīng)(細(xì)胞的)的測試系統(tǒng)中化合物活性和其在無細(xì)胞純化蛋白激酶自磷酸化測試中的對應(yīng)活性之間存在顯著的、本質(zhì)上完全定性相關(guān)。為了各種醫(yī)藥化學(xué)目的及在本發(fā)明范圍之外的理由，在上述的同一苯環(huán)上進(jìn)行其他化學(xué)修飾，但所述化學(xué)修飾與對p"(T—Abl—"151靶的效力增強(qiáng)有關(guān)同時限制與對照野生型Ba/F3非-轉(zhuǎn)化型細(xì)胞(不表達(dá)p210B"—AbH[或p210fT，)的交叉反應(yīng)，以及改進(jìn)選擇性、使患者中的潛在副作用最小化等。如附圖17和18以及表3所示，合成并測試的其它化合物包括C2-109、C2-112、C2-122、和C2-128。圖17和18的詳細(xì)比較再次顯示在細(xì)胞測試系統(tǒng)中評分為正的所有化合物在無細(xì)胞系統(tǒng)中也展現(xiàn)蛋白激酶抑制活性，而在基于表型反應(yīng)的細(xì)胞測試中本質(zhì)上是無活性的那些在無細(xì)胞系統(tǒng)中本質(zhì)上也是無活性的。最后這些結(jié)果證實(shí)在基于表型反應(yīng)的測試系統(tǒng)中顯示抑制活性的化合物與在無細(xì)胞蛋白激酶自磷酸化測試中獲得的結(jié)果性質(zhì)上完全一致。此外，當(dāng)在無細(xì)胞測試結(jié)果和基于表型反應(yīng)的測試結(jié)果之間在相對效力方面存在適中的差別時(參見實(shí)施例，化合物C2-122似乎在無細(xì)胞測試中比在基于表型反應(yīng)的細(xì)胞系統(tǒng)中更有效)，這種區(qū)別表明與經(jīng)典的無細(xì)胞測試系統(tǒng)相比，細(xì)胞測試系統(tǒng)預(yù)測指定化合物體內(nèi)功效的能力增強(qiáng)。使用經(jīng)典的無細(xì)胞篩選，人們可能認(rèn)為C2-122是一個重要的化合物，然而基于表型反應(yīng)的測試立刻將其排除因?yàn)槠湫ЯΡ葞讉€所測試的其它化合物的效力低。在本領(lǐng)域中，之前沒有報導(dǎo)過釆用不取決和依賴于無細(xì)胞放射性配體或其它結(jié)合測試的細(xì)胞系統(tǒng)的這類先導(dǎo)優(yōu)化方案。的方法，其代替了反復(fù)無細(xì)胞體外證實(shí)化合物命中其相應(yīng)靶的能力的必要。因此，優(yōu)化方法本質(zhì)上可以完全依賴于基于表型反應(yīng)的測試系統(tǒng)結(jié)果，消除了反復(fù)確認(rèn)無細(xì)胞測試結(jié)果的必要。而所述的確認(rèn)實(shí)驗(yàn)可以進(jìn)行(如果本領(lǐng)域技術(shù)人員選擇去做的話)，對于這個方法通常是沒有必要的，因?yàn)樯鲜鼋o出的結(jié)果明確證實(shí)。本領(lǐng)域技術(shù)人員充分意識到?jīng)]有任何類型或性質(zhì)的測試系統(tǒng)完全沒有假陽性結(jié)果，無論是放射性配體結(jié)合測試、ELISA、配體結(jié)合測試還是細(xì)胞測試。這個測試系統(tǒng)，盡管驚人的強(qiáng)大，但不是沒有假陽性結(jié)果的可能，本領(lǐng)域技術(shù)人員了解異常結(jié)果的獨(dú)立確認(rèn)僅是好的科學(xué)并在合適的時候應(yīng)當(dāng)考慮。實(shí)施例3:基于表型反應(yīng)的蛋白質(zhì)調(diào)節(jié)劑的表征對其不同程度的抑制或活化多個不同蛋白質(zhì)靶的能力而言本發(fā)明基于表型反應(yīng)的測試系統(tǒng)可用于識別指定化合物的生物活性。例如，在某些情況下，本領(lǐng)域技術(shù)人員可能對鑒定或優(yōu)化指定靶蛋白質(zhì)的調(diào)節(jié)劑感興趣，其中已知其它蛋白質(zhì)是不同但與靶POI高度相關(guān)。所述蛋白家族由兩個或多個成員組成，所述成員在DNA和氨基酸序列水平上具有高程度的同源性，然而所述家族成員在細(xì)胞內(nèi)可能具有不同的功能。通過本文描述的基于表型反應(yīng)系統(tǒng)的反復(fù)應(yīng)用，人們可以產(chǎn)生表達(dá)各個不同家族成員的單個測試細(xì)胞然后使用具有對應(yīng)定義的表型反應(yīng)的三個或四個或更多不同的測試細(xì)胞系來鑒定或優(yōu)化對一個特定家族成員有選擇性的化合物。在本發(fā)明另一個實(shí)施方案中，本領(lǐng)域的技術(shù)人員也可以在一個單測試細(xì)胞(或測試細(xì)胞系)中選擇表達(dá)兩個或三個或甚至四個不同蛋白質(zhì)靶并產(chǎn)生用于鑒定在指定蛋白家族的單個同功酶中沒有選擇性的化合物的基于表型反應(yīng)的測試系統(tǒng)。在某些治療情況中，在單個家族成員中沒有選擇性可能是優(yōu)選的。例如布洛芬是已經(jīng)建立的低成本安全和有效的非甾類抗炎藥物，其不顯著區(qū)分環(huán)氧合酶1型(COX-I)和COX-2家族成員。所述沒有區(qū)別在某些情況下是有益的且可能降低某些不希望副作用的可能性，所述不希望副作用對于過度選擇的化學(xué)試劑可能發(fā)生。對其抑制或活化某些相關(guān)蛋白靶的能力而言，識別指定化合物的生物作用，無論所述靶是或不是同一個蛋白家族的成員，從理解指定化合物的分子和細(xì)胞作用機(jī)理方面也具有重要的價值。例如，在伊馬替尼的情況下，不僅所述化合物抑制P210Bcr/AM蛋白(P210Bc—"野生型形式，其也與c-kit致癌蛋白交叉作用且也能抑制c-kit致癌蛋白。如上討論的，在本發(fā)明背景下，kit致癌蛋白的所述交叉反應(yīng)抑制是偶然發(fā)現(xiàn)的，因?yàn)槲改c道間質(zhì)瘤(GIST)(—類在小腸中產(chǎn)生的腫瘤)受kit活性的驅(qū)動并因此也對伊馬替尼治療有響應(yīng)(NEJMpaper)。因此，與相關(guān)蛋白的所述交叉反應(yīng)性不需要一直與藥物毒性相關(guān)。在一些情況下，所述交叉反應(yīng)性可以是治療有效的。在本文其它地方描述(參見實(shí)施例1)的細(xì)胞測定系統(tǒng)中測試對應(yīng)于上面指定的各種化學(xué)式的本發(fā)明有代表性的化合物，并且規(guī)定的活性類別如表I所示。規(guī)定的活性類別由下面的指定代表，其中給定細(xì)胞系的IC5。是指給定化合物在細(xì)胞試驗(yàn)系統(tǒng)中抑制該細(xì)胞系生長達(dá)50%時的濃度。給定細(xì)胞系上測試展現(xiàn)的IC5。值<300nM(小于300納摩爾)的化合物被指定為類"A"化合物。給定細(xì)胞系上測試展現(xiàn)的IC5。值〈lpM(小于1微摩爾)的化合物被指定為類"B"化合物。給定細(xì)胞系上測試展現(xiàn)的IC5。值〈10)aM(小于IO微摩爾)的化合物被指定為類"C"化合物。給定細(xì)胞系上測試展現(xiàn)的IC5。值^l()MM(大于或等于10微摩爾)的化合物被指定為類"D"化合物。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage158</column></row><table><formula>formulaseeoriginaldocumentpage159</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage160</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage161</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage162</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage163</column></row><table>l.反應(yīng)圖示:實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)回流化合物1(25g)和N,N-二曱基苯胺(24.2g)在P0Cl3(llOmL)中的混合物5小時。減壓下蒸發(fā)除去P0C13,并將殘余物小心倒入水-水(500g)中并攪拌l小時。然后過濾混合物并用水洗滌固體得到黃色固體狀的化合物2。2.反應(yīng)圖示實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)10。C下，在15分鐘內(nèi)向化合物2(1.04g)在15ml乙醇的溶液中逐滴加入1.08g(2eq)嗎啡。攪拌混合物0.5小時并在50。C下加熱15分鐘。冷卻并用水(50ml)稀釋后，過濾得到黃色固體粉末狀的化合物3。3.反應(yīng)圖示實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)向1.1g化合物3中加入8mlNH2NH2.H20?；亓骰旌衔?小時。冷卻后，過濾得到粗產(chǎn)物。通過柱色謙純化得到淡黃色固體狀的純化合物4。4.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage165</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)向化合物5(1.0g，1.0eq)和DMF(O.05g,計算量)在20mL二氯曱烷的溶液中逐滴加入(COClh(0.81g，1.1eq)。室溫下攪拌反應(yīng)混合物2小時然后濃縮得到1.2g化合物6的粗產(chǎn)物,在沒有進(jìn)一步純化下將其用于下一步。5.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage165</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)向化合物6的粗產(chǎn)物(1.2g，1.0eq)在20mL二氯曱烷的溶液中加入3-三氟曱基-苯胺(0.94g，1.0eq)和三乙胺(0.71g，1.2eq)。室溫下攪拌反應(yīng)混合物過夜，用1NNaOH溶液、INHC1溶液和鹽水洗涂。收集有機(jī)層，用Na2S04干燥，濃縮得到化合物7的粗產(chǎn)物。通過柱色鐠純化后，得到l.lg化合物7。6.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage165</formula>實(shí)-驗(yàn)細(xì)節(jié)向化合物7(0.3g,1.0eq)和3mL三氟乙酸的混合物中加入六亞甲基四胺(O.53g，4.0eq)。立刻密封反應(yīng)混合物并加熱到90°C20小時。冷卻后，用1NNaOH溶液調(diào)節(jié)反應(yīng)混合物到pH8，用二氯曱烷萃取并干燥有機(jī)相，濃縮得到棕色固體。通過制備型TLC純化得到黃色固體狀的化合物8。7.反應(yīng)圖示實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)室溫下攪拌化合物4(30mg，1.0eq)和化合物8(19mg,1.0eq)在5mL二氯甲烷中的混合物過夜。收集沉淀并用二氯曱烷充分洗潦，真空下干燥得到需要的化合物。實(shí)施例5:實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)向化合物1(1.0g，1.0eq)、化合物2(0.92g，1.0eq)、Na2C03(0.77g,1.5eq)在15mL二嚙烷的混合物中加入Pd(PPh3)4(0.56g，0.1eq)，在^下回流反應(yīng)混合物16小時。冷卻后，過濾混合物并蒸發(fā)過濾物至干，通過柱色鐠純化得到化合物3。2.反應(yīng)圖示實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)向化合物3(0.3g,1.0eq)和3mL三氟乙酸的混合物中加入六亞曱基四胺(O.62g，4.0eq)。立刻密封反應(yīng)混合物并加熱至90°C20小時。冷卻后，用1NNaOH溶液調(diào)節(jié)反應(yīng)混合物至pH8,用二氯甲烷萃取并干燥有機(jī)相，濃縮得到棕色固體。通過制備型TLC純化得到黃色固體狀的化合物4。1.反應(yīng)圖示:3.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage167</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)室溫下攪拌化合物4(30mg，1.0eq)和化合物5(19mg，1.0eq)在5mL二氯甲烷中的混合物過夜。收集沉淀并用二氯曱烷洗滌，真空下干燥得到所需的化合物。實(shí)施例6.<formula>formulaseeoriginaldocumentpage167</formula>1.反應(yīng)圖示:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage167</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)向化合物1(0.6g，1.0eq)在10mL甲醇的溶液中加入4mL1NNaOH溶液，室溫下攪拌混合物過夜。蒸發(fā)溶劑并用5%檸檬酸酸化殘余物至pH6，用二氯甲烷萃取。干燥有機(jī)層，濃縮得到化合物2.2.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage167</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)室溫下攪拌化合物2(0.4g，1.0eq)、三氟甲基苯胺(0.39g，1.0eq)、EDC(0.71g，1.5eq)、HOBt(33mg，0.1eq)在10mL二氯曱烷中的混合物過夜。用1NNaOH溶液、水洗滌混合物，用二氯甲烷萃取。用Na2S0,干燥有機(jī)層，濃縮至干，并通過柱色譜純化得到化合物3.3.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage168</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)用4mLINHC1處理化合物3(0.2g，1.0eq)在10mL二喁烷中的溶液，并將混合物加熱至60°C2小時。冷卻后，添加NaHC03將pH調(diào)節(jié)至8。用二氯曱烷萃取混合物，用水洗滌有機(jī)層，用Na2S04千燥并蒸發(fā)至干。通過柱色譜純化粗產(chǎn)物得到化合物4。4.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage168</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)室溫下攪拌化合物4(40rag,1.0eq)和化合物5(30mg,1.0eq)在5mL二氯甲烷中的混合物過夜。濃縮混合物至干并通過制備型HPLC純化得到所需的化合物.實(shí)施例7.<formula>formulaseeoriginaldocumentpage168</formula>1.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage168</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)室溫下攪拌化合物2(0.3g,l.Oeq)、2-氯-6-曱基-苯胺(0.26g，1.0eq)、EDC(0.53g,1.5eq)、HOBt(25mg,0.1eq)在10mL二氯曱烷中的混合物過夜。用1NNaOH溶液、水洗滌混合物，并用二氯甲烷萃取。用Na2S04干燥有機(jī)層，濃縮至干，通過柱色謙純化得到化合物3。2.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage168</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)用4mLINHC1處理化合物3(0.2g，1.0eq)在10mL買施例8.<formula>formulaseeoriginaldocumentpage169</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)向lg(5.5mmol)5-溴-2-氰基吡啶、0.97g(6.05mmol1.leq)3-(三氟曱基)苯胺在100ml曱苯的溶液中加入3eqt-BuONa、0.2eqBINAP和0.leqPd2(dba)3。然后加熱回流該溶、液過夜。通過LC/MS監(jiān)測反應(yīng)。減壓下除去易揮發(fā)物。通過快速色語純化粗產(chǎn)物得到化合物2。2.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage169</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)將250mg(0.95mmol)化合物2添加到20mL濃HCl中，然后加熱回流該溶液直到初始材料消失。在沒有純化的情況下，減壓濃縮混合物得到黃色固體狀的化合物3。3.反應(yīng)圖示二p惡烷中的溶液，并將混合物加熱至60°C2小時。冷卻后，通過添加NaHC03將pH調(diào)節(jié)至8。用二氯甲烷萃取混合物并用水洗滌有才幾層，用Na2SO,干燥并蒸發(fā)至干。通過柱色譜純化粗產(chǎn)物得到化合物4。3.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage169</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)室溫下攪拌化合物4(40mg,1.0eq)和化合物5(30mg，1.0eq)在5mL二氯甲烷中的混合物過夜。濃縮混合物至干并通過制備型HPLC純化得到所需的化合物。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage169</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage170</formula>驗(yàn)細(xì)節(jié)將50mg(0.18mmol)化合物3在3mL二氯甲烷中的溶液添加到0.5mL亞石克酰氯中。加熱混合物并攪拌3小時。最后減壓蒸發(fā)溶液。得到化合物4并在沒有純化下用于下一步。4.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage170</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在25。C下攪拌50mg化合物4和43mg(1.kq)肼在5mLDCM中的溶液3小時。濃縮反應(yīng)混合物并通過制備型HPLC純化殘余物得到所需的化合物.實(shí)施例9.實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)加熱回流化合物l(25g，0.145mol)和Se02(27.5g，0.247mol)在乙酸(1200mL)中的懸浮液l2小時。減壓濃縮反應(yīng)混合物至干。在水中溶解殘余物并通過添加K2C03使得pH=9。用EA(100mLx3)萃取所得混合物。用Na2S04干燥合并的EA。過濾掉^2304后，減壓下濃縮過濾物得到粗產(chǎn)物2，在沒有純化下將其用于下一步。2.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage170</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)回流上述制備的2在乙醇原曱酸三乙酯(10mL)中的1.反應(yīng)圖示:溶液4小時。除去溶劑后，通過柱分離殘余物得到油狀產(chǎn)物3,3.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage171</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在N2氣氛下，向化合物3(73mg，0.28mmol)和化合物4(50mg，0.28mmol)，及tBuONa(27mg，0.56mmol)和BINAP(70.4mg,1.12mol)在甲苯(15mL)的攪拌和脫氣的混合物中加入Pd2(dba)3(26mg,0.028mmol)并在80。C攪拌48小時。過濾掉固體后，濃縮過濾物得到粗產(chǎn)物5,在沒有純化下將其用于下一步。4.反應(yīng)圖示實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在-30。C和N2氣氛下，用BBr3(146mg，0.6mmol)處理化合物5(335mg，0.1mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液，然后室溫下攪拌4小時。將反應(yīng)物倒入冰-水中然后添加Na2C03。用二氯甲烷萃取(25mLx3)所得混合物，用Na2S04千燥合并的有機(jī)層。過濾掉Na2SO^后，濃縮過濾物得到粗產(chǎn)物6，在沒有純化下將其用于下一步。反應(yīng)圖示:.<formula>formulaseeoriginaldocumentpage171</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)回流下攪拌化合物6(27.74mg，0.1mmol)和化合物7(21mg，0.1mniol)在無水CH2C12(300mL)中的溶液6小時。減壓下除去溶劑。通過制備-TLC分離殘余物得到所需的化合物。實(shí)施例10.<formula>formulaseeoriginaldocumentpage172</formula>1.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage172</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在N2氣氛下，向化合物1(5g,25mmol)和化合物2(3.4g，27mmol)在DMF(50mL)和化20)3水溶液(20mL,2M)的攪拌和脫氣的混合物中加入Pd2(dbbf)3(26mg，0.028mmol)，并在100。C下攪拌18小時。冷卻到室溫并過濾掉固體后，用EAU00mL)萃取過濾物。濃縮有機(jī)層至千。通過柱純化殘余物得到粗產(chǎn)物3。2.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage172</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)加熱回流化合物3(2g，0.1mol)和Na2S204(5.2g,0.3mol)在甲醇(80mL)和H20(20mL)中的混合物3小時。減壓下濃縮反應(yīng)物至干。在水中溶解殘余物然后用EA(150mL)萃取。用鹽水洗滌有機(jī)層兩次并用化2304干燥。濾掉Na2S0,后，濃縮過濾物得到產(chǎn)物4。3.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage172</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在N2氣氛下，向化合物5(228mg，88mmol)和化合物4(150mg，88mmo1)，tBuONa(170mg，176mmol)和BINAP(210mg，176mmol)在甲苯(25mL)的攪拌和脫氣的混合物中加入Pd2(dba)3(79mg,0.88mmol)，并在80。C下攪拌48小時。過濾掉固體后，濃縮過濾物得到粗產(chǎn)物6。4.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage173</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在-30。C和N2氣氛下，用BBr3(600mg,10.6mmol)處理化合物6(140mg，4mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液，然后在室溫下攪拌4小時。將反應(yīng)物倒入冰-水中然后通過添加Na2C03使得pH-9。用二氯曱烷萃取(25mLx3)所得的混合物，用Na2S04干燥合并的有機(jī)層。過濾掉Na2S04后，濃縮過濾物至干。通過柱純化殘余物得到產(chǎn)物7。5.反應(yīng)圖示:,、hH，F(xiàn)-、'》一N、、"■"""^,p、，wV-/、^■《》實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)回流下攪拌化合物7(98mg，0.36mmol)和化合物8(64mg,0.3mmol)在無水CH2C12(300mL)中的溶液6小時。減壓下除去溶劑。通過制備-TLC分離殘余物得到所需的化合物。實(shí)施例11,〈')^5~N、.<—;>N:、、^、1.反應(yīng)圖示:、、。2、產(chǎn)即H):廠vr"A3r'.a實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在N2氣氛下，向化合物1(5.9g，"mmol)和化合物2(3.3g，27mmol)在DMF(50mL)和Na2C03水溶液(20mL,2M)的攪拌和脫氣的混合物中加入Pd2(dbbf)3(26mg，0.028mmol),并在10(TC下攪拌18小時。冷卻到室溫和過濾掉固體后，用EA(200mL)萃、、。2、產(chǎn)即H):廠vr"A3r'.a取過濾物。濃縮有機(jī)層得到粗產(chǎn)物3，在不純化下將其用于下一步。2.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage174</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在室溫和氫氣氛(20psi)下，攪拌3(6.5g，27.9mmol)和Pd(OH)2(10%，0.5g)在乙醇(200mL)中的混合物2小時。過濾掉催化劑，真空下除去過濾物得到無色油狀產(chǎn)物4。3.反應(yīng)圖示.々.，Brn'、丫/—/'…Ae:k,,、'、廣丄、c實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在N2氣氛下，向化合物4(406mg，20mmol)和化合物5(520mg，20mmol),及tBu0Na(170mg,176mmol)和BINAP(210mg,176mmol)在甲苯(25mL)的攪^半和脫氣的混合物中加入Pd2(dba)3(79mg，0.88mmol)，并在80。C下攪拌48小時。過濾掉固體后，濃縮過濾物得到粗產(chǎn)物6，在不純化下將其用于下一步。4.反應(yīng)圖示么產(chǎn)、liI入,丫、『i、人。Et-^lf丄f1Vz、-a人》AcK、、f、ir"v,,H實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在-30。C和N2氣氛下，用BBr3(600mg，10.6mmol)處理化合物6(383mg，10mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液，然后室溫下攪拌4小時。將反應(yīng)物倒入冰-水中，然后通過加入Na2C03使得pH9。用二氯甲烷萃取(25mLx3)所得混合物，并用Na2S04干燥合并的有機(jī)層。過濾掉Na2S04后，濃縮過濾物至干。通過柱純化殘余物得到產(chǎn)物7。5.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage175</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)加熱回流7(60mg,0.22mmol)和煙酰醛(33mg,0.15mmol)在二氯甲烷(10mL)中的混合物3小時。除去溶劑后，通過色鐠純化殘余物得到所需的化合物。實(shí)施例12.<formula>formulaseeoriginaldocumentpage175</formula>1.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage175</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)室溫下攪拌DMAP(9.3g，0.077mol)、化合物1(100.051mol)和Boc20(12g，0.051mol)在tBuOH(200mL)中的溶液過夜。減壓下除去溶劑并通過快速色語在硅膠上純化殘余物。(乙酸乙酯/石油醚=10:l)得到無色油狀的2。2.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage175</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在室溫和氫氣氛(50psi)下攪拌2(6.17g,27.9mmol)和Pd(0H)2(10%,1g)在乙醇(200mL)中的混合物4小時。過濾掉催化劑，真空下除去過濾物得到無色油狀的產(chǎn)物3。3.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage175</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在N2下加熱化合物3(2.65g,12mmol)、化合物4175(2.6g，10mmol)、tBuONa(1.34g，14mmol，)、Pd2(dba)3(46.5mg，50mmol，)和DCHPB(70mg，0.2mmol)在干燥甲苯(50mL)中的混合物至80-90°C24小時。過濾沉淀并在真空下除去過濾物，通過色譜在硅膠上純化殘余物(乙酸乙酯/石油醚=10:1)得到黃色油狀的5。4.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage176</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在0。C下，向5(0.9g,2.24mmol)在CHC13(50mL)的溶液中加入CF3C00H(40mL)。加成完成后，在室溫下攪拌所得的混合物過夜。減壓下除去溶劑至千。從乙醚中重結(jié)晶殘余物得到灰白色固體。在氨水(lQmL)中溶解該固體。通過添加1MHC1使得混合物的pH=7.G并沉淀。收集沉淀物并用冷水(5niL)洗滌，減壓下干燥得到黑色固體的6。5.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage176</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)加熱回流6(60mg,0.22mmo1)，煙酰醛(33mg，0.15mmol)在二氯曱烷(10mL)中的混合物3小時。除去溶劑后，通過色譜純化殘余物得到黃色固體狀的所需化合物。實(shí)施例13.<formula>formulaseeoriginaldocumentpage176</formula>1.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage177</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在N2氣氛下，向化合物1(6.7g，25mmo1)、化合物2(4.lg，27mmol)在DMF(50mL)和Na2C03水溶液(20mL，2M)的攪拌和脫氣的混合物中加入Pd2(dbbf)3(26mg，0.028mmol)，并在100。C下攪拌18小時。冷卻到室溫后并過濾掉固體，用EA(200mL)萃取過濾物。濃縮有機(jī)層得到粗產(chǎn)物3。2.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage177</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在室溫和氫氣氛(20psi)下，攪拌3(3.2g，lOmmol)和Pd(OH)2(10%，0.5g)在乙醇(200mL)中的混合物2小時。過濾掉催化劑，真空下除去過濾物得到無色油狀產(chǎn)物4。3.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage177</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在N2氣氛下，向化合物4(297mg，10mmol)和化合物5(259mg，lOmmol),及tBuONa(170mg，17.6mmol)和BINAP(210mg，17.6mmol)在曱苯(25mL)的攪拌和脫氣的混合物中加入Pd2(dba)3(79mg，0.88mmol)，并在80。C下攪拌48小時。過濾掉固體后，濃縮過濾物得到粗產(chǎn)物6，在沒有純化下將其用于下一步。4.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage177</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在-30。C和N2氣氛下，用BBr3(600mg，10.6mmol)處理化合物6(446mg,10mmol)在二氯曱烷(20mL)中的溶液，然買施例14.<formula>formulaseeoriginaldocumentpage178</formula>1.反應(yīng)圖示:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage178</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在&氣氛下，向化合物1(3g,0.02mol)和化合物2(3.4g,0.02mol)，及KOH(5.28g，0.1mol)和TBBA(6.44g,0.02mol)在無水THF(100mL)的攪拌和脫氣的混合物中加入Pd(PPh3)4(2.31g，2mmol),并回流下攪拌12小時。過濾掉固體后，濃縮過濾物至干。通過柱純化殘余物得到產(chǎn)物3,在不純化下將其用于下一步。2.反應(yīng)圖示后在室溫下攪拌4小時。將反應(yīng)物倒入冰-水中然后通過添加Na2C03使得pH=9。用二氯曱烷萃取(25mLx3)所得的混合物，用Na2S04干燥合并的有機(jī)層。過濾掉Na2S(^后，濃縮過濾物至干。通過柱純化殘余物得到產(chǎn)物7。5.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage178</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)加熱回流7(67mg,0.15mmo1),煙酰醛(33mg,0.15mmol)在二氯曱烷(10mL)中的混合物3小時。除去溶劑后，通過色譜純化殘余物得到黃色固體狀的所需化合物。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage179</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在N2氣氛下，向化合物3(334mg，1.7mmol)和化合物4(434mg，1.7mmo1),及t-BuONa(322mg，3.4mmol)和BINAP(420mg，0.67mol)在曱苯(60mL)的攪拌和脫氣的混合物中加入Pd2(dba)3(156mg,0.017mmol)，并在80。C下攪拌48小時。過濾掉固體后，濃縮過濾物至干。通過柱純化殘余物得到產(chǎn)物5。3.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage179</formula>V^V0**實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在-30。C和N2氣氛下，用BBr3(393mg，0.6mmol)處理化合物5(100mg，0.3mmol)在二氯甲烷(lOmL)中的溶液，然后室溫下攪拌4小時。將反應(yīng)物倒入冰-水中然后加入Na2C03。用二氯甲烷(25mLx3)萃取所得的混合物，用Na2S0,干燥合并的有機(jī)層。過濾掉Na2S04后，濃縮過濾物得到粗產(chǎn)物6。4.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage179</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)加熱回流6(39mg,0.13mmo1)、煙酰醛(29mg,0.13mmol)在二氯曱烷(10mL)中的混合物3小時。除去溶劑后，通過色譜純化殘余物得到黃色固體狀的所需化合物。實(shí)施例15.1.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage179</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage180</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)將多聚甲醛(1.8g,59.3mmo1)添加到化合物1(l.Og,5.9mmol)在乙酸(40mL)的溶液中，然后在l(TC下加入NaCNBH3(l.8g，28.8mmol)。在室溫下攪拌16小時，將溶液倒入冰/水(lOOmL)中，用濃NaOH調(diào)節(jié)PH至10。DCM(3x1OOmL)萃取該溶液。千燥合并的有機(jī)層(MgS0j，過濾并在真空下濃縮得到化合物2。2.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage180</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在latm氫氣下用Pd/C氫化0.84g(4.3nunol)化合物216小時。在沒有進(jìn)一步純化下，過濾反應(yīng)混合物并濃縮過濾物得到化合物3。3.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage180</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在150。C和微波下，使250mg(1.51腿o1)化合物3、0.2eqB服P、0.leqPd2(dba)3、3eqCs2C0>5-溴-2-二乙氧基甲基-吡，定(O.783g，3.Olmmol)在10mL1，4-二"惡烷的溶液反應(yīng)2小時。通過LC-Ms監(jiān)測反應(yīng)。濃縮混合物并通過制備型TLC純化殘余物得到化合物4。4.反應(yīng)圖示實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)向300mg(0.55mmol)化合物4在5mLDCM的溶液中加入4mLTFA。室溫下攪拌反應(yīng)混合物30分鐘。向混合物加入冰/水并通過NaHC03堿化到PH=10,用DCM(15ml^3)萃取。用水和鹽水洗滌合并的有機(jī)層，用MgS04干燥，過濾并濃縮得到化合物5.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage181</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在25。C下攪拌80mg(0.295mmol)化合物5和(5-氟-4-嗎啉基-4-基-嘧啶基-2-基)-肼(125mg，0.59mmol)在10mLDCM中的溶液15小時。濃縮反應(yīng)混合物并通過制備型HPLC純化殘余物得到化合物6。6.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage181</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在0。C下，向化合物6(40mg，0.086mmo1)在干燥DCM(5mL)的溶液中逐滴加入BBr(22mg,0.258mmo1)。室溫下攪拌反應(yīng)混合物3小時。用曱醇淬滅反應(yīng)，并濃縮混合物。通過制備型HPLC純化殘余物得到所需的化合物。實(shí)施例16.<formula>formulaseeoriginaldocumentpage181</formula>1.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage181</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在化氣氛下向攪拌的3-溴苯胺(0.86g)在30ml甲苯的溶液中加入0.leq的Pd(PPh3)4、5ml飽和Na2C03水溶液、和3-曱氧基苯基硼酸(0.75g)在10mlEtOH中的溶液。回流下劇烈攪拌混合物15小時并冷卻，加入10mlH20,并用CH2C12(20mlx3)萃取混合物。用Na2S04干燥合并的有機(jī)層并濃縮。通過柱色謙(PE/EA-10:1)純化殘余物得到純的化合物2。2.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage182</formula>反應(yīng)細(xì)節(jié)在150。C下，使化合物2(59,5mg)，5-溴-2-二乙氧基甲基-吡啶(116.7mg)、t-BuONa(86.4mg)、BINAP(36.7mg)和Pd2(dba)3(27.4mg)在二噍烷(2ml)中的混合物進(jìn)行微波處理2小時，過濾溶液并濃縮。通過制備型TLC純化殘余物得到化合物3。3.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage182</formula>反應(yīng)細(xì)節(jié)向化合物3(120mg)在5mlDCM的溶液中加入lmlBBr3，室溫下攪拌反應(yīng)過夜。然后向混合物中加入5mlH20,用EtOAc萃取并濃縮。通過制備型TLC純化粗產(chǎn)物得到化合物4。4.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage182</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)室溫下攪拌43.5mg化合物4和32mg肼在5mlDCM中的混合物過夜并濃縮。通過制備型TLC純化粗產(chǎn)物得到所需化合物。實(shí)施例17.<formula>formulaseeoriginaldocumentpage183</formula>1.反應(yīng)圖示:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage183</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在100。C下，使2.0g(16.2mmo1,l.Oeq)化合物l、0.05eqBINAP、0.05eqPd2(dba)3、1.2eqt—BuONa和l一澳一3—石宵基_苯(3.28g，16.2mmol,1.0eq)在20mL無水甲苯中的溶液反應(yīng)24小時。通過LC-MS監(jiān)測反應(yīng)。濃縮混合物并通過柱色^脊純化殘余物得到化合物2。2.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage183</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在latm氫氣下用Pd/C(0.25g)氫化2.5g化合物216小時。過濾反應(yīng)混合物，在沒有進(jìn)一步純化下濃縮過濾物得到化合物3。3.反應(yīng)圖示實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在IO(TC下，使500mg(2.33mmol)化合物3、5-溴—2-二乙氧基甲基p比咬(607mg，2.33mmol)、0.05eqxantphos、0.05eqPd2(dba)3和1.5eqt-BuONa在10mL甲苯中的溶液回流24小時。通過LC-MS監(jiān)測反應(yīng)。濃縮混合物并通過柱色譜純化殘余物得到化合物4。4.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage183</formula>實(shí)-驗(yàn)細(xì)節(jié)用lmLHCl(IN水溶液)和10mL二噍烷處理100mg化合物4。室溫下攪拌混合物4小時，用0.5NNaOH溶液調(diào)節(jié)至pH8-9。用DCM萃取后，用Na2S04干燥有機(jī)層并濃縮得到化合物5。5.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage184</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在25。C下攪拌50mg(0.16mmol)化合物5和(5-氟-4-嗎啉基-4-基嘧咬基-2-基)-肼(50mg，0.23mmol)在5mLDCM中的溶液15小時。濃縮反應(yīng)混合物并通過制備型HPLC純化殘余物得到化合物6。6.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage184</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在(TC下向化合物6(50mg,0.09mmol)在干燥DCM(5mL)的溶液中逐滴加入BBr3(20mg,0.25mmol)。室溫下攪拌反應(yīng)混合物3小時。用甲醇淬滅反應(yīng)，然后濃縮混合物。通過制備型HPLC純化殘余物得到所需的化合物.<formula>formulaseeoriginaldocumentpage184</formula>買施例18.1.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage184</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在13(TC下加熱10g(70.92mmo1)3-氟-硝基苯、leq咪唑和2eqK2C03在100mlDMS0中的溶液5小時。通過LC-MS監(jiān)測反應(yīng)。然后加入500mL水并過濾沉淀，在沒有進(jìn)一步純化下用水洗滌該<formula>formulaseeoriginaldocumentpage184</formula>固體并干燥得到化合物2.2.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage185</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在latm氫氣下用Pd/C氫化5g(31.^mol)化合物2半小時。在沒有進(jìn)一步純化下，過濾反應(yīng)混合物并濃縮過濾物得到化合物3。3.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage185</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在130。C下，回流500mg(3.14mmo1)化合物3、0.leqxantphose、0.leqPd2(dba)3和1.5eqt-BuONa在10mL甲苯中的溶液15小時。通過LC-Ms監(jiān)測反應(yīng)并用水洗滌，用EtOAc萃取。用鹽水洗滌合并的有機(jī)層并用MgS(h干燥。過濾并濃縮，通過制備型TLC純化殘余物得到化合物4。4.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage185</formula>n-VV、實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)向200mg化合物4在5mL1，4-二嚙烷的溶液中加入8mL4NHC1并在80。C下加熱2小時。通過2NNaOH堿化反應(yīng)混合物至ph=10并用DCM(15ml^3)萃取。用水和鹽水洗滌合并的有機(jī)層并用MgS04干燥，過濾并濃縮得到250mg粗產(chǎn)物。通過制備型TLC純化粗產(chǎn)物得到化合物5。5.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage185</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在25。C下攪拌80mg化合物5和leq化合物6在5mLDCM中的溶液15小時。濃縮反應(yīng)混合物并通過制備型HPLC純化殘余物得到所需的化合物。實(shí)施例19.1.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage186</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在13(TC下回流1.50g1-溴-3-曱基-5-硝基-苯和1.60g(1.2eq)派嚷—1—曱酸^又丁酉旨、0.leqxantphos、0.leqPd2(dba)3和1.5eqt-BuONa在20mL甲苯中的溶液4小時。通過LC-Ms監(jiān)測反應(yīng)，用水洗滌并用Et0Ac萃取。用鹽水洗滌合并的有機(jī)層并用Na2S04干燥。過濾并濃縮，通過柱色譜在硅膠上純化殘余物(采用10:1PA:EA作為洗脫劑)。合并適當(dāng)級分并減壓濃縮得到中間體1。2.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage186</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在latm氫氣下用Raney/Ni氫化1.6g中間體12小時,在沒有進(jìn)一步純化下，過濾反應(yīng)混合物并濃縮過濾物得到中間體2。3.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage186</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在130。C下回流1.20g中間體2、1.30g(1.20eq)5-<formula>formulaseeoriginaldocumentpage186</formula>溴-2-二乙氧基甲基-吡p定、0.leqxantphose、0.leqPd2(dba)3和1.5eqt-BuONa在20mL甲苯中的溶液4小時。通過LC-Ms監(jiān)測反應(yīng)，用水洗滌并用EtOAc萃取。用鹽水洗滌合并的有機(jī)層并用Na2S0^干燥。過濾并濃縮，用柱色諳在硅膠上純化殘余物(采用4:1PA:EA作為洗脫液)。合并適當(dāng)?shù)募壏植⒃跍p壓下濃縮得到中間體3。4.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage187</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在10mlDCM中溶解200mg中間體3。將130mgTFA逐滴加入到反應(yīng)混合物溶液并室溫下攪拌3小時。反應(yīng)混合物用NaHC03溶液堿化到中性，鹽水洗滌，用Na2S0,干燥，過濾并濃縮得到220mg粗產(chǎn)物。通過制備型TLC純化粗產(chǎn)物得到中間體4。5.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage187</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)室溫下攪拌50mg中間體4和1.Oeq(5-氟-4-嗎啉基-4-基嘧啶基-2-基)-肼在5mLDCM中的溶液3小時。用水和鹽水洗滌反應(yīng)混合物，濃縮得到殘余物并通過制備型HPLC純化得到所需化合物。實(shí)施例20.1.反應(yīng)圖示:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage188</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在0。C下將15ml1MBH3/THF逐滴加入到3g(13.95mmo1)4-溴-2-曱基-苯曱酸在20mlTHF的溶液中。4吏反應(yīng)溶液到達(dá)室溫持續(xù)1小時并通過逐滴加入50ml50%THF水溶液淬滅反應(yīng)。用化2(:03處理混合物并濃縮。用Et20萃取殘余物。干燥有機(jī)層得到化合物2。2.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage188</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)向2.4g(11.9mmol)化合物2在20mlDCM的溶液中加入5.lg(23.8mmo1)PCC在60mlDCM中的漿狀物。室溫下攪拌反應(yīng)溶液1小時，用300mlEt20稀釋并過濾。濃縮過濾物得到化合物3.3.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage188</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)將2.lg(14mmol)溶液加入到含有1.9g(9.55mmo1)化合物3的乙醇溶液中。加熱回流反應(yīng)溶液3小時，然后濃縮。用NaHC03洗滌固體并用乙酸乙酯萃取。干燥有機(jī)層得到化合物4。4.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage188</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage189</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)將0.7g化合物4、0.41g3-三氟甲基-苯胺0.Pd2(dba)3、0.21gbinap和0.02gt-BuONa添加到35ml甲苯中。加熱回流反應(yīng)溶液過夜，并濃縮。通過柱色譜純化粗產(chǎn)物(乙酸乙酯/己烷=1:1)得到化合物5。5.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage189</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)用4mLINHC1處理化合物5(0.2g,1.0eq)在10mL二p惡烷中的溶液，并加熱混合物至6(TC2小時。冷卻后，通過添加NaHC03調(diào)節(jié)pH至8。用二氯甲烷萃取混合物，用水洗滌有機(jī)層，用Na2S0,干燥并蒸發(fā)至干。通過柱色鐠純化粗產(chǎn)物得到化合物6。6.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage189</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在25。C下攪拌80mg化合物6和1eq化合物7在5mLDCM中的溶液15小時。濃縮反應(yīng)混合物并通過制備型HPLC純化殘余物得到所需的化合物。1.反應(yīng)圖示189買施例<formula>formulaseeoriginaldocumentpage189</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)向化合物1(0.5g,1.0eq)、3-三氟甲基苯基硼酸(0.63g,1.0eq)、Na2C03(0.46g，1.5eq)在15mL二"惡烷的混合物中加入Pd(PPh3)4(0.33g，0.1eq)，并在^下回流反應(yīng)混合物16小時。冷卻后，過濾混合物并蒸發(fā)過濾物至千，通過柱色譜純化得到化合物2。2.反應(yīng)圖示實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在&下回流化合物2(0.2g,l.Oeq)、Se02(0.19g，2.0eq)在10mL乙酸中的混合物48小時。通過蒸發(fā)除去溶劑并在水中溶解殘余物，用飽和的NaHC03溶液調(diào)節(jié)至pH6，用二氯曱烷萃取。收集有機(jī)層，干燥并蒸發(fā)至干。通過柱色譜純化粗產(chǎn)物得到化合物3。3.反應(yīng)圖示實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)室溫下攪拌化合物3(30mg，LGeq)和化合物4(19mg,1.0eq)在5mL二氯曱烷中的混合物過夜。濃縮混合物至干并通過制備型HPLC純化得到所需的化合物。實(shí)施例22.1.反應(yīng)圖示:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage191</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)室溫下攪拌化合物1(0.5g,1.0eq)、三氟曱基苯胺(0.58g，1,0eq)、EDC(1.05g，1.5eq)、和HOBt(50mg，0.1eq)在15mL二氯甲烷中的混合物過夜。用1NNaOH溶液、水洗滌混合物，用二氯甲烷萃取。用Na2S04干燥有機(jī)層，濃縮至干，通過柱色譜純化得到化合物2。2.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage191</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在^下回流化合物2(0.2g，l.Oeq)、Se02(0.16g，2.0eq)在10mL乙酸中的混合物48小時。通過蒸發(fā)除去溶劑并在水中溶解殘余物，用飽和NaHC03溶液調(diào)節(jié)至pH6并用二氯曱烷萃取。收集有機(jī)層，干燥并蒸發(fā)至干。通過柱色語純化粗產(chǎn)物得到化合物3。3.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage191</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)室溫下攪拌化合物3(40mg，1.0eq)和化合物4(30mg，1.0eq)在5mL二氯甲烷中的混合物過夜。收集沉淀并用二氯甲烷洗滌，真空下干燥得到所需的化合物.實(shí)施例23.<formula>formulaseeoriginaldocumentpage191</formula>1.反應(yīng)圖示f'、實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)回流化合物l(3.0g，1.0eq)和2mL98%H2S04在10mLEtOH中的溶液4小時，冷卻至室溫并蒸發(fā)至干，用水稀釋，用NaHC03調(diào)節(jié)至pH8，用二氯曱烷萃取。干燥有機(jī)層并濃縮得到化合物2。2.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage192</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在^下回流化合物2(1.7g，l.Oeq)、Se02(2.29g，2.Oeq)在80mL乙酸的混合物48小時。通過蒸發(fā)除去溶劑并在水中溶解殘余物，用飽和的NaHC03溶液調(diào)節(jié)至pH6，用二氯甲烷萃取。收集有機(jī)層，干燥并蒸發(fā)至干。通過柱色譜純化粗產(chǎn)物得到化合物3。3.反應(yīng)圖示實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)回流化合物3(1.1g，l.Oeq)，二乙氧基甲氧基-乙烷(2.3g,2.5eq)和TsOH.H20(0.12g，0.1eq)在20mL乙醇中的溶液5小時。蒸發(fā)溶劑并在EtOAc中溶解固體，用水洗滌。用Na2S04干燥有機(jī)層并蒸發(fā)得到化合物4。4.反應(yīng)圖示實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)向化合物4(0.6g，l.Qeq)在10mL甲醇的溶液中加入4mLINNaOH溶液，在室溫下攪拌混合物過夜。蒸發(fā)溶劑并用5%檸檬酸酸化殘余物至pH6,用二氯曱烷萃取。干燥有機(jī)層，濃縮得到化合物5。5.反應(yīng)圖示實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)室溫下攪拌化合物5(O.4g，1.0eq)、三氟甲基苯胺(0.29g,1.0eq)、EDC(0.51g，1.5eq)、H0Bt(25mg,0.1eq)在10mL二氯甲烷中的混合物過夜。用lNNaOH溶液、水洗滌混合物，用二氯曱烷萃取。用Na2S04干燥有機(jī)層，濃縮至干，通過柱色譜純化得到化合物6.6.反應(yīng)圖示f《、，'r'、￡,::、rA^THY-YCF3眼二'悉坑-.h、y^vcf;實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)用4mLINHC1處理化合物6(0.2g，1.0eq)在10mL二嗜烷中的溶液，并加熱混合物至60°C2小時。冷卻后，通過添加NaHC03調(diào)節(jié)pH至8。用二氯曱烷萃取混合物，用水洗滌有4幾層，用化2304干燥并蒸發(fā)至干。通過柱色語純化粗產(chǎn)物得到化合物7。7.反應(yīng)圖示實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)室溫下攪拌化合物7(30mg,1.0eq)和化合物8(19mg，1.0eq)在5mL二氯甲烷中的混合物過夜。收集沉淀并用二氯甲烷洗滌，真空下干燥得到所需的化合物。實(shí)施例24.1.反應(yīng)圖示:實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在N2下回流化合物1(2.0g，l.Oeq)、Se02(2.6g，2.0eq)在80mL乙酸中的混合物36小時。通過蒸發(fā)除去溶劑并在水中溶解殘余物，用飽和的NaHC03溶液調(diào)節(jié)至pH6,用二氯曱烷萃取。收集有機(jī)層，干燥并蒸發(fā)至干。通過柱色譜純化粗產(chǎn)物得到化合物2。2.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage194</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)回流化合物2(0.5g,l.Oeq)、二乙氧基甲氧基-乙烷(1.0g，2.5eq)和TsOH.H20(0.05g,0.1eq)在8mL乙醇中的溶液3小時。蒸發(fā)溶劑并在EtOAc中溶解該固體，用水洗滌。用Na2S04干燥有機(jī)層并蒸發(fā)得到化合物3。3.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage194</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在仏下向化合物3(0.6g，1.0eq)、3-三氟甲基-苯胺(0.37g，1.0eq)、t-BuONa(0.26g，1.2eq)在15raL曱苯的混合物中力口入Pd2(dba)3(42mg，0.02eq)和xantphos(28mg,0.02eq)。在N2下回流混合物16小時，冷卻，過濾。濃縮過濾物并通過柱色謙純化得到化合物4。4.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage194</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)用4mLINHCI處理化合物4(0.25g,1.0eq)在10mL二p惡烷中的溶液，并加熱混合物至60°C2小時。冷卻后，通過添加NaHC03調(diào)節(jié)pH至8。用二氯曱烷萃取混合物，用水洗滌有機(jī)層，用Na2S0,千燥并蒸發(fā)至干。通過柱色語純化粗產(chǎn)物得到化合物5.5.反應(yīng)圖示/一—、實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)室溫下攪拌化合物5(30mg，1.0eq)和化合物6(19mg，1.0eq)在5mL二氯曱烷中的混合物過夜。收集沉淀并用二氯曱烷洗滌，真空下干燥得到所需的化合物。實(shí)施例25.實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)0。C下，在30分鐘內(nèi)向化合物1(14g,O.lraol)在含水HBr(30mL)的溶液中加入NaN02(8.3g0.15mol)在H20(10mL)中的溶液。攪拌60分鐘后，在8Q。C下將反應(yīng)混合物添加到CuBr(14g，0.1mol)在含水HBr(16mL)的溶液中。完全加入后，在相同溫度下攪拌反應(yīng)混合物2小時。冷卻到室溫后，用EA(100mLx3)萃取反應(yīng)混合物。用鹽水洗滌合并的有機(jī)層并用Na2S04干燥。過濾掉Na2S04后，濃縮過濾物至干。通過柱純化殘余物得到產(chǎn)物2。2.反應(yīng)圖示實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在&氣氛下向化合物2(4.llg,0.02mol)和化合物3(4.74g，0.02mol)，及KOH(5.28g,0.1mol)和TBBA(6.44g，0.02mol)在無水THF(100mL)的攪拌和脫氣的混合物中加入Pd1.反應(yīng)圖示:(PPh丄(2.31g,2mmol)，在回流下攪拌12小時。過濾掉固體后，濃縮過濾物至干。通過柱純化殘余物得到產(chǎn)物4。3.反應(yīng)圖示:實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)用TFA(1mL)處理4(1g,3mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液，然后室溫下攪拌6小時。減壓下除去溶劑得到產(chǎn)物5，在沒有純化下將其用于下一步。4.反應(yīng)圖示,乂、、,人、,J0Et6EKX_JL、J'《1實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在&氣氛下向化合物5(619mg,2.4mmol)和化合物6(520mg,2.4mmol)，及tB慮a(460mg，4.8麵1)和BINAP(599mg，6.9mol)在甲苯(60mL)的攪拌和脫氣的混合物中加入PcUdba)3(221mg，0.024mmol)，在80。C下攪拌48小時。過濾掉固體后，濃縮過濾物至干。通過柱純化殘余物得到產(chǎn)物7。5.反應(yīng)圖示嶺v_一t實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在-30。C和N2氣氛下，用BBr3(146mg，0.6mmol)處理化合物7(396mg，0.1mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液，然后室溫下攪拌4小時。將反應(yīng)物倒入冰-水中然后加入Na2C03。用二氯甲烷萃取(25mLx3)所得的混合物，用Na2S(X干燥合并的有機(jī)層.過濾掉Na,S04后，濃縮過濾物得到粗產(chǎn)物8,在沒有純化下將其用于下一步。6.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage197</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在回流下攪拌化合物8(32.2mg,0.1mmol)和化合物9(21mg，0.1mmol)在無水CH2C12(300mL)中的溶液6小時。減壓下除去溶劑。通過制備-TLC分離殘余物得到所需的化合物。實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)用P0C13(500mL)處理5-氟-lH-嘧啶-2，4-二酮(113g，0.5mol)在N，N-二甲基苯胺(70mL)中的溶液，然后回流2小時。冷卻到室溫后，將反應(yīng)混合物倒入水-水腫。用乙酸乙酯(100mLx3)萃取所得的混合物。用飽和的NaHC03水溶液洗涂合并的有機(jī)層，然后用鹽水洗滌。減壓下除去溶劑得到化合物2。2.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage197</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在-10℃15分鐘內(nèi)向化合物2(20.8g，0.194mol)在乙醇(300mL)的溶液中逐滴加入嗎啉(21.6g，0.25mol)。室溫下攪拌該混合物0.5小時，然后加熱至50℃15分鐘。冷卻到室溫后并用水稀釋，沉淀固體。通過過濾收集固體并用水洗滌得到化合物3。3.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage197</formula>買施例1.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage197</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage198</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)回流加熱3(4.6g,17.5mmo1)和肼(8.75g，87.5mmol)在乙醇(40mL)中的溶液6小時。冷卻和沉淀后，通過過濾收集沉淀并用乙醇洗滌得到化合物4。4.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage198</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在-15。C和N2氣氛下，用BuMgCl(37.5mL,60mmol)處理化合物5(14g，50mmol)在無水THF(100mL)中的溶液。完全加成后，在該溫度下攪拌混合物1小時。在0°C下30分鐘內(nèi)將無水DMF(0.54g,75mmol)加入到反應(yīng)混合物，然后回溫至室溫1小時。通過添加2MHC1(80mL)淬滅反應(yīng)混合物。用乙酸乙酯(50mLx3)萃取所得的混合物。用Na2S04干燥合并的有機(jī)層。濃縮溶劑至干，通過柱分離殘余物得到化合物6。5.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage198</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在痕量的TsOH存在下加熱化合物6(4.5g,22.5mmol)在原曱酸三乙酯(15mL)中的溶液過夜。用乙酸乙酯(100mL)稀釋反應(yīng)混合物并用5。/。Na2C03水溶液洗滌。分離有機(jī)層并用Na2S04干燥。濃縮溶劑得到化合物7。6.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage198</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在&氣氛下向化合物7(1.3g，5mmol)和化合物8(0.97g，6mmol)，和tBuONa(0.7g，7mmol)和P(t-Bu)3(15mg)在甲苯(60mL)的攪拌和脫氣的混合物中加入Pd2(dba)3(23mgl)，并在回流下攪拌12小時。過濾掉固體后，濃縮過濾物至干。通過柱純化殘余物得到產(chǎn)物9。7.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage199</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在-30。C和N2氣氛下，用BBr3(146mg，0.6mmol)處理化合物9(200mg，0.58mmoi)在二氯曱烷(10mL)中的溶液，然后室溫下攪拌4小時。將反應(yīng)物倒入水-水中然后加入Na2C03。用二氯曱烷萃取(25mLx3)所得的混合物，用Na2S04干燥合并的有機(jī)層。過濾掉Na,S04后，濃縮過濾物得到粗產(chǎn)物10。8.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage199</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在回流下攪拌化合物10(48.7mg，0.2mmol)和化合物4(63mg，0.2mmol)在無水CH2Cl2(300mL)中的溶液6小時。減壓下除去溶劑。通過制備-TLC分離殘余物得到所需的化合物。實(shí)施例27<formula>formulaseeoriginaldocumentpage199</formula>1.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage199</formula>在乙醇(40mL)中的溶液6小時。冷卻和沉淀后，通過過濾收集沉淀并用乙醇洗滌得到化合物2。2.反應(yīng)圖示實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)回流攪拌化合物2(28mg,0.1mmol)和化合物3(37mg,0.1mmol)在無水CH2Ci2(300mL)中的溶液6小時。減壓下除去溶劑。通過制備-TLC分離殘余物得到所需的化合物。實(shí)施例28.實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在-20。C下用MeMgCl(15mL.0.038mol)處理1(2g，0.011mol)在無水THF(100mL)中的溶液，并在該溫度下攪拌2小時。通過加入飽和的冊工1水溶液淬滅反應(yīng)混合物。用乙酸乙酯(100mLx3)萃取所得的混合物。用鹽水洗滌合并的有機(jī)層。減壓下除去溶劑得到化合物2。2.反應(yīng)圖示實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在痕量的TsOH存在下加熱化合物2(2g，0.01mol)和乙二醇(3g,0.048mol)在苯胺(100mL)中的溶液3小時。用乙酸乙酯(100mL)稀釋反應(yīng)混合物并用5%Na2C03水溶液洗滌。分離有1.反應(yīng)圖示:機(jī)層并用化2304干燥。濃縮溶劑得到化合物3,3.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage201</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在N2氣氛下，向化合物3(0.4g，1.6mmol)和化合物4(0.3g,1.9mmol)，及tBuONa(0.22g，2mmol)和P(t-Bu)3(59mg)在曱苯(30mL)的攪拌和脫氣的混合物中加入Pd2(dba)3(29mgl)，并在回流下攪拌12小時。過濾掉固體后，濃縮過濾物至干。通過柱純化殘佘物得到產(chǎn)物5。4.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage201</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在-30。C和N2氣氛下用BBr3(146mg，0.6mmol)處理化合物5(100mg,0.3mmol)在二氯曱烷(lOmL)中的溶液，然后室溫下攪拌4小時。將反應(yīng)物倒入水-水中然后加入Na2C03。用二氯曱烷萃取(25mLx3)所得的混合物，用Na2SO,干燥合并的有機(jī)層。過濾掉Na2S04后，濃縮過濾物得到粗產(chǎn)物6。5.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage201</formula>實(shí)-驗(yàn)細(xì)節(jié)在回流下攪拌化合物6(64mg,0.2mmol)和化合物7(45mg,0.2mmo1)在無水(^2(:12(300mL)中的溶液6小時。減壓下除去溶劑。通過制備-TLC分離殘余物得到所需的化合物。實(shí)施例29.<formula>formulaseeoriginaldocumentpage201</formula>1.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage202</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在回流下將1(5.2g,22mmol)和2(2.44g，20mmol)在2MNa2C03水溶液(25mL)和甲苯(40mL)中的混合物與Pd(PPh3)4(0.57g,0.05mmol)攪拌過夜。用乙酸乙酯(lOOmLx3)萃取反應(yīng)混合物。用鹽水洗滌合并的有機(jī)層。減壓下除去溶劑至干。通過柱純化殘余物得到3。2.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage202</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在-60。C和N2氣氛下，用n-BuLi(1.5mL，3.75mmol)處理化合物3(0.78g,3.3mmol)和三異丙基硼酸酯(1mL，4mmol)在無水曱苯(50mL)中的溶液。完全加成后，在-10。C下攪拌該混合物1小時。通過添加2MHCl水溶液淬滅反應(yīng)混合物并用曱苯洗滌。通過添加Na2C03使得水層pH=8，然后用乙酸乙酯(50mLx3)萃取。用鹽水洗滌合并的有機(jī)層。減壓下除去溶劑至干。通過柱分離殘余物得到4。3.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage202</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在回流下將化合物4(2.8g，14mmol)和化合物5(7g，42mmol)在2M化2(:03水溶液(250mL)和甲苯(40mL)中的攪拌和脫氣的混合物與Pd(PPh3)4(0.57g，0.05mmol)攪拌過夜。用乙酸乙酯(100mLx3)萃取反應(yīng)混合物。用鹽水洗滌合并的有機(jī)層。減壓下除去溶劑至干。通過柱分離殘余物得到6。4.反應(yīng)圖示實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在回流下攪拌6(0.53g，L9mmo1)和肼(0.52g,8.8mmol)在乙醇(50mL)中的溶液6小時。冷卻和沉淀后，通過過濾收集沉淀并用乙醇洗滌得到化合物7。5.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage203</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在回流下攪拌化合物7(53mg,0.13mmol)和化合物8(79mg，0.13mmol)在無水CH2C12(300mL)中的溶液6小時。減壓下除去溶劑。通過制備-TLC純化殘余物得到所需的化合物。實(shí)施例30.<formula>formulaseeoriginaldocumentpage203</formula>1.反應(yīng)圖示2產(chǎn)w實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在回流下將l(3.lg,13mmol)和2(1g，12mmpl)在2MNa2C03水溶液(15mL)和甲苯(30mL)中的混合物與Pd(PPh3)4(0.4g，0.029mmol)攪拌過夜。用乙酸乙酯(100mLx3)萃取反應(yīng)混合物。用鹽水洗滌合并的有機(jī)層。減壓下除去溶劑至干。通過柱分離殘余物得到3。2.反應(yīng)圖示實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在-60。C和N2氣氛下，用n-BuLi(12mL,30mmol)處理化合物3(2.0g，10mmol)和三異丙基硼酸酯(7mL，30ramol)在無水曱苯(50mL)中的溶液。完全加成后，在-10。C下攪拌該混合物1小時。通過添加2mHCl水溶液淬滅反應(yīng)混合物，并用甲苯洗滌。通過添加Na2C03使得水層pH=8，然后用乙酸乙酯(50mLx3)萃取。用鹽水洗滌合并的有機(jī)層。減壓下除去溶劑至干。通過柱分離殘余物得到4。3.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage204</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在回流下將化合物4(0.5g，3mmol)和化合物5(1.5g,9mmol)在2MNa2C03水溶液(3.5mL)和曱苯(40mL)的攪拌和脫氣的混合物與Pd(PPh3)4(94mg,0.003mmol)攪拌過夜。用乙酸乙酯(100mLx3)萃取反應(yīng)混合物。用鹽水洗滌合并的有機(jī)層。減壓下除去溶劑至干。通過柱純化殘余物得到6。4.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage204</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在回流下攪拌6(0.24g,1mmol)和肼(0.3g，4.7mmol)在乙醇(50mL)中的溶液6小時。冷卻和沉淀后，通過過濾收集沉淀并用乙醇洗滌得到化合物7。5.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage204</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在回流下攪拌化合物7(70mg，0.29mmol)和化合物8(83mg，0.3mmol)在無水CH2C12(300mL)中的溶液6小時。減壓下除去溶劑。通過制備-TLC純化殘余物得到所需的化合物。實(shí)施例31.<formula>formulaseeoriginaldocumentpage205</formula>1.反應(yīng)圖示:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage205</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)向化合物2(0.83g，5mmol)在乙醇(100mL)的溶液中逐滴加入千胺(0.54g，5mmo1)。攪拌2小時后，用水稀釋反應(yīng)混合物。用乙酸乙酯(50mLx3)萃取所得的混合物。用Na2S04干燥合并的有機(jī)層。濃縮溶劑得到化合物3。2.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage205</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)加熱回流3(1.18g，5mmo1)和肼(5ml)在乙醇(40mL)中的溶液6小時。冷卻和沉淀后，通過過濾收集沉淀并用乙醇洗滌得到化合物4。3.反應(yīng)圖示(<formula>formulaseeoriginaldocumentpage205</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在回流下攪拌化合物4(48.7mg，2mmol)和化合物5(63mg，0.2mmo1)在無水CH2C12(300mL)中的溶液6小時。減壓下除去溶劑。通過制備-TLC分離殘余物得到所需的化合物實(shí)施例32.<formula>formulaseeoriginaldocumentpage206</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)向化合物l(O.83g，5mmol)在乙醇(100mL)的溶液中逐滴加入化合物2(0.35g,5mmo1)。攪拌2小時后，用水稀釋反應(yīng)混合物。用乙酸乙酯(50mLx3)洗滌所得的混合物。用Na2S04干燥合并的有機(jī)層。濃縮溶劑得到化合物3。2.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage206</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)加熱回流3(1.0g，5mmol)和肼(5mL)在乙醇(40mL)中的溶液6小時。冷卻和沉淀后，通過過濾收集沉淀并用乙醇洗滌得到化合物4。3.反應(yīng)圖示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage206</formula>實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)在回流下攪拌化合物4(480mg,2mmol)和化合物5(60mg,0.2mmo1)在無水CH2C12(300mL)中的溶液6小時。減壓下除去溶劑。通過制備-TLC分離殘余物得到所需的化合物。將所有涉及的任意公開文獻(xiàn)、專利或其它引用的參考文獻(xiàn)引入本文作為參考。參考文獻(xiàn)Adcock，I.M.,Lane，S.J."類固醇作用和炎癥抗性機(jī)制"-JournalofEndocrinology,Volume178(2003年9月)347-355頁Allen,P.B.,Wiedemann,L.M."ABL激酶結(jié)構(gòu)域的ATP結(jié)合位點(diǎn)中的活化突變"-TheJournalofBiologicalChemistry,Volume271(1996年8月9日)19585—19591頁Barthe，C.，Cony-Makhoul，P.，Melo,J.V.，Reiffers，J.,Mahon，F(xiàn)，X.RootsofClinicalResistancetoSTI-571CancerTherapy.Science,Volume293(September21，2001)Page2163aBranford,S.，Rudzki，Z.，Walsh,S.,Grigg，A.，Arthur,C.，Taylor,K.，Hermann,R.,Lynch,K.P.，Hughes,T.P."患有慢性髓細(xì)胞樣白血病或發(fā)生伊馬替尼(STI571)耐藥性的Ph-陽性急性成淋巴細(xì)胞性白血病的患者BCR/ABL腺苷三磷酸-結(jié)合區(qū)內(nèi)簇生的高頻率點(diǎn)突變"-Blood,Volume99(2002年5月1日)3472-3475Burbaum,JJ.，Ohlmeyer，M.H.,Reader,J.C.,Henderson,L,Dillard,U.，Li,G.，Randle，T.L.，Sigal,N.H.，Chelsky，D.，Baldwin,JJ."采用編碼的組合文庫的藥物發(fā)現(xiàn)的范例"-ProceedingsoftheNationalAcademyofScienceUSA,Volume92(June20，1995)Pages6027-6031Carter,T.A.，Wodicka,L.M.，Shah，N.P.，Velasco，A.M.，F(xiàn)abian，M.A.，Tretber,O.K.,Milanov,Z.V.，AUeridge，C.E.，Biggs,H.3rd,Edeen，P.T.，F(xiàn)loyd,M…Ford,J.M.，Grotzfeld，R.M.，Herrgard，S.，Insko,D.E.，Mehta，S.A.，Patel，H.K.，Pao，W..Sawyers,C丄，Varaius，H.，Zarrinkar，P.P.,Lockhart,DJ"."抑制ABL、KIT和EGF受體激酶的抗藥性突變"-ProceedingsoftheNationalAcademyofScienceUSA,Volume102(August2，2005)Pages11011—11016Corbin，A.S.，Buchdunger，E.，Pascal,F.，Druker，B.J."STI571抑制Abl激酶的特異性的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)分析"-TheJournalofBiologicalChemistry,Volume277(2002年8月30日)32214-32219頁Cunningham,B.C.，DeVos，A.M.,Mulkerrin,M.G.，Ultsch,M,Wells,J.A."選擇性配體激動劑和拮抗劑"-美國專利US5，506，107(1996年4月9日)Cunningham,B.C.,Wells,J.A.，Clark,R.G.，Olson,K.，F(xiàn)uh,G.G."用于抑制生長激素作用的方法"-美國專利US6，004，931(1999年12月21日)Daley,G.Q.，VanEtten，R.A.，Baltimore,D."費(fèi)城染色體的P210br°/abl基因誘導(dǎo)小鼠的慢性髓細(xì)胞性白血病"-Science,Volume247(1990年2月16日)824-830頁Druker,B.J.，M.D.,Talpaz，M.,M.D.，Resta，D.J.,R.N.，Peng,B.，Ph.D.,Buchdunger,E.，Ph.D.,Ford,J.M.,M.D.,Lydon,N.B.,Ph.D.,Kantarjian，H.,M.D.,Capdeville，R.，M.D.，Ohno-Jones，S.,B.S.，Sawyers,C.L.,M.D."慢性髓細(xì)胞樣白血病中BCR-ABL酪氨酸激酶的特異性抑制劑的功效和安全性"-TheNewEnglandJournalofMedicine,Volume344(2001年4月5日)1031-1037頁Druker,B.J.，Tamura，S.，Buchdunger，E.,Ohno，S.,Segal，G.M.,Fanning,S.，Zimmermann，J.，Lydon，N.B."Abl酪氨酸激酶的選擇性抑制劑對Bcr-Abl陽性細(xì)胞生長的作用"-NatureMedicine,Volume2(1996年5月)561-566頁Druker,B.J.,M.D.，Sawyers,C丄，M.D.,Kantarjian，H.,M.D.，Resta，D.J.,R.N.，Reese,S.F.，M.D.，F(xiàn)ord,J.M.，M.D.,Capdeville，R.,M.D.,Talpaz，M.，M.D."帶有費(fèi)城染色體的慢性髓細(xì)胞樣白血病和急性成淋巴細(xì)胞性白血病的白血病急性發(fā)作中BCR-ABL酪氨酸激酶的特異性抑制劑活性"-TheNewEnglandJournalofMedicine,Volume344(2001年4月5日)1038-1042頁Faderl，S.,M.D.,Talpaz,M.,M.D.,Estrov，Z.，M.D.,0，Brien,S.,M.D.，Kurzrock,R.，M.D.，Kantarjian,H.M.,M.D."慢性髓細(xì)胞樣白血病生物學(xué)"-TheNewEnglandJournalofMedicine,Volume341(1999年7月15曰)164-172頁Foreman,J.C.和Johansen，T.TextbookofReceptorPharmacology.CRCPress,2002;BocaRaton,Gambacorti-Passerini,C.,Barni，R.，LeCoutre,P.,Zucchetti,M.，Cabrita，G.，Cleris，L.,Rossi，F(xiàn).，Gianazza，E.，Brueggen，J.，Cozens,R.，Pioltelli，P.,Pogliani，E.,Cor訓(xùn)，G.，F(xiàn)ormelli,F.,D，I隱lci,M."人BCR-ABL+白血病細(xì)胞對Abl抑制劑STI571的體內(nèi)耐受性中的ocl酸性糖蛋白的作用"-JournaloftheNationalCancerInstitute,Volume92(2000年10月18日)1641-1650頁Goodnow，R.A.，Jr.，Guba，W.，Haap，W."用小分子文庫成功產(chǎn)生先導(dǎo)的文庫的i殳"H"原則"一CombinatorialChemistryandHighThroughputScreening,Volume6(November2003)Pages649-660.Gorre，M.E.，Mohammed，M.，Ellwood，K.，Ksu，N，，Paquette，R.，Rao，P.N.，Sawyers,C.L."BCR—ABL基因突變或擴(kuò)增導(dǎo)致的對STI-571癌癥療法的臨床耐受性"-Science,Volume293(2001年8月3日)876-880頁Hanke，J.H.，Gardner,J.P.，Dow，R丄，Changelian,P.S.，Brissette，W.H.，Weringer，E.J.，Pollok，B.A.,Co謹(jǐn)lly，P丄"新的、有效的及Src家族選擇性酪氨酸激酶抑制劑的發(fā)現(xiàn)。Lck-和FynT-依賴性T細(xì)胞活化的研究，，-JournalofBiologicalChemistry,Volume271(January1996)Pages695-701Hofmann，W.K.，Jones，L.C.，Lemp，N.A.，DeVos,S.，Gschaidmeier,小時.，Hoelzer,D.，Ottmann,0.G.,Koeffler，H.P."Ph+急性成淋巴細(xì)胞性白血病對酪氨酸激酶抑制劑STI571的耐受性具有唯一的BCR-ABL基因突變，，-Blood,Volume99(2002年3月1日)1860-1862頁Hou，Y.Y.,Tan，Y.S.，Sun,M.H.，Wei，Y.L,Xu,J.F.，Lu，S.H.，A-Ke-Su，S.J.，Zhou,Y.N.，Gao,F.，Zheng，A.H.，Zhang,T.M.，Hou，W.Z.，Wang,J.，Du,X.，Zhu，X.Z."人胃腸道間質(zhì)瘤中的C-kit基因突變"-WorldJournalofGastroenterology,Volume10(2004年5月1日)1310—1314頁HouseyGM."用于篩選蛋白質(zhì)抑制劑和活化劑的方法"-美國專利US4，980，281(1990年12月25日)HouseyGM,JohnsonMD,HsiaoWL,0'BrianCA,MurphyJP,KirschmeierP,WeinsteinIB."蛋白激酶C的超表達(dá)導(dǎo)致大鼠成纖維細(xì)胞中生長控制障礙"-Cell,Volume52(1988年2月12日)343-354頁Kerkela，R.，Grazette,L.，Yacobi，R.，Iliescu,C,Patten,R.，Beahm，C，Walters,B.，Shevtsov,S.，Pesant，S.，Clubb，F(xiàn).J.Rosenzweig,A.，Salomon,R.N"VanEtten，R丄，Alroy，J.，Durand，J.B.，F(xiàn)orce,T."癌癥治療劑曱磺酸伊馬替尼的心臟毒性"-NatureMedicine,Volume12(August2006)Pages908-916Knight，Z.A.，Shokat，K.M."選擇性激酶抑制劑的特征"-ChemistryandBiology,Volume12(June2005)Pages621-637LaRosee,P.,Corbin,A.S.,Stoffregen，E.P.,Deininger,M.W.，Druker，B.J."對臨床相關(guān)的對曱磺酸伊馬替尼(Gleevec，STI-571)產(chǎn)生耐受性的Bcr-Abl同種型的Bcr-Abl激酶抑制劑PD180970的活性"-CancerResearch,Volume62(2002年12頁15日)7149—7153頁LeCoutre，P.，Tassi，E.，Varella-Garcia,M.,Barni,R.，Mologni,L.，Cabrita，G.，Marchesi，E.，Supino,R.，Gambacorti-Passerini，C."通過基因擴(kuò)增謙導(dǎo)STI571人白血病細(xì)胞中Abelson抑制劑的耐受性，，-Blood，Volume95(20003月1日)1758-1766頁Leonard,G.D.，F(xiàn)ojo，T.,Bates,S.E."臨床實(shí)踐中ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的作用"-TheOncologist,Volume8(2003)411-424頁Loutfy，M.R.,Walmsley,S.L."HIV感染中抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法的補(bǔ)救作用"-ExpertOpinion,Volume3(2002年2月)81-90頁Lynch,T.J.,M.D.，Bell,D.W.,Ph.D.,Sordella，R.Ph.D.，Gurubhagavatula,S.，M.D.，Okimoto，R.A.，B.S.Brannigan,B.W.，B.A.，Harris,P丄，M.S.，Haserlat，S.M.B.A.,Supko,J.G.，Ph.D.，Haluska,F.G.,M.D.，Ph.D.Louis，D.N.，M.D.，Christiani，D.C.，M.D.，Settleman,J.Ph.D.,Haber，D.A.,M.D.,Ph.D."基于非-小-細(xì)胞肺癌對Gefitinib的反應(yīng)性的表皮生長因子受體中的活化突變"-TheNewEnglandJournalofMedicine,Volume350(2004年5月20日)2129-2139頁Mahon,F丄，Deininger,M.W.N.，Schultheis，B.，Chabrol,J.，Reiffers，J.，Goldman,J.M.,Melo，J.V."對酪氨酸激酶抑制劑STI571具有差別敏感性的BCR-ABL陽性細(xì)胞系的選擇和表征不同抗性才幾制"-Blood,Volume96(20008月1日)1070-1079頁Marx，J."為何新癌癥藥物在某些患者中作用充分"-Science,Volume304(2004年4月30日)658-659頁MeloJV，MyintH，GaltonDA，GoldmanJM."P190BCR-ABL慢性髓細(xì)胞樣白血病具有慢性髓單核細(xì)胞樣白血病的缺少的環(huán)節(jié)？"-Leukemia,Volume8(1994年1月)208-211頁Noble，M.E.M.，Endicott，J.A.，Johnson,L.N."蛋白激酶抑制劑根據(jù)結(jié)構(gòu)洞察藥物設(shè)計"-Science,Volume303Q0(M年3月19日)1800-1805頁(THareT，PollockR，StoffregenEP，KeatsJA，AbdullahOM,MosesonEM,RiveraVM,TangH，MetcalfCA3rd,BohacekRS，WangY,SundaratnoorthiR,ShakespeareWC,DalgarnoD,CiacksonT,SawyerTK，DeiningerMW,DrukerBJ."—種有效的基于ATP的致癌蛋白激酶抑制劑AP23464對野生型和突變體Bcr-Abl的抑制涉及CML"-Blood,Volume104(2004年10月15日)2532-2539頁P(yáng)aez，J.G.，Janne,P.A.,Lee，J.C.，Tracy,S.,Greulich,小時.,Gabriel,S.，Herman,P.，Kaye,F.J.，Lindeman,N.，Boggon,T.J.，Naoki，K.，Sasaki,H.，F(xiàn)ujii,Y.，Eck，M.J.，Sellers,W.R.，Johnson,B.E.，Meyerson，M."肺癌中的^尸7突變與對Gefitinib療法臨床反應(yīng)的相關(guān)性"-Sciencexpress(2004年4月29日)1-4頁RavandiF,CortesJ,AlbitarM,ArlinghausR,(JiangGuoJ，TalpazM,Kantarjia週."具有p185(BCR/ABL)表達(dá)的慢性髓細(xì)胞性白血病特征和臨床重要性"-BritishJournalofHaematology,Volume107(1999年12月)581—586頁Sambrook和Russel1,MolecularCloning:ALaboratoryManual.ColdSpringHarborLaboratoryPress,NewYork,2001,Volumes1-3Sawyers，C.L.M.D."慢性髓細(xì)胞樣白血病"-TheNewEnglandJournalofMedicine,Volume340(19994月29日)1330-1340頁Sawyers,C丄，Gorre，M.E.，Shah，N.P.，Nicoll，J."BCR-ABL酪氨酸激酶中與STI-571抗性相關(guān)的突變"-WOQ2/102976A2PublishedDecember27，2002(PCT/US02/18729FiledJ認(rèn)14，2002)Schindler，T.，Bor醒nn，W.,Pell冰na，P.，Miller,W.T.，Clarkson，B.，Kuriyan，J."Abelson酪氨酸'激酶的STI-571抑制的結(jié)構(gòu)才凡制"-Science,Volume289(2000年9月15曰)1938-1942頁Senechal，K.，Halpern,J.,Sawyers,C丄"CRKL銜接蛋白轉(zhuǎn)化成纖維細(xì)胞和通過BCR-ABL癌基因在轉(zhuǎn)化中的功能，，-TheJournalofBiologicalChemistry,Volume271(1996年9月20日)23255-23261頁TippingAJ，BaluchS，BarnesDJ，VeachDR，ClarksonBM,BornmannWG,MahonFX,GoldmanJM,MeloJV."雙向特異性Bcr-AM和Src-族激酶抑制劑在對曱磺酸伊馬替尼的細(xì)胞敏感性和耐受性中的功效"-Leukemia,Volume18(2004年8月)1352-1356頁VonBubnoff，N.，Schneller,F.,Peschel,C.，Duyster，J."與費(fèi)城-染色體-陽性白血病對STI571的臨床耐受性相關(guān)的BCR-ABL基因突變前瞻性研究"-TheLancet,Volume359(2002年2月9日)487-491頁VonBubnoffN，VeachDR,VanDerKuipH，AulitzkyWE，SangerJ，SeipelP,BornmannWG，PeschelC，ClarksonB,Duyster."Bcr-Abl陽性白血病的抗性的基于細(xì)胞的篩選鑒定了作為備選Abl激酶抑制劑的PD166326的突變模式"-Blood,Volume105(2005年2月15日)1652-1659頁Wakai，T.，Kanda,T.，Hirota，S.,Ohashi,A.，Shirai，Y.Hatakeyama，K."轉(zhuǎn)移型胃腸道間質(zhì)瘤中伊馬替尼療法的晚期耐受性與二次KIT突變相關(guān)"-BritishJournalofCancer,Volume90(2004年6月1日)2059-2061頁Warmuth，M.，Mathes，R.，Hallek,M."選擇酶抑制劑的方法"-U.S.Weigel，U.，Meyer,M.，Sebald，W."人白細(xì)胞介素2的突變蛋白復(fù)性產(chǎn)率、增殖活性和受體結(jié)合"-EuropeanJournalofBiochemistry,Volume180(1989年3月15日)295-300頁WeisbergE,CatleyL,KujawaJ,AtadjaP，RemiszewskiS，F(xiàn)uerstP，CavazzaC,AndersonK,GriffinJD."組蛋白脫乙?；敢种苿㎞VP-LAQ824在體外和體內(nèi)對髓細(xì)月包性白血病細(xì)胞具有顯著性活性，，-Leukemia,Volume18(2004年12月)1951-1963頁Weisberg，E.,Griffin,J.D."ABL酪氨酸激酶抑制劑STI571在BCR/ABL-轉(zhuǎn)化的造血細(xì)胞系中的耐受性的機(jī)制"-Blood，Volume95(2000年6月1曰)3498-3505頁WeisbergE，ManleyPW,BreitensteinW，BruggenJ，Cowan-JacobSW，RayA，HuntlyB，F(xiàn)abbroD，F(xiàn)endrichG，Hal1-MeyersE，KungAL，MestanJ，DaleyGQ,CallahanL，CatleyL,CavazzaC，AzamM,NeubergD，WrightRD,GillilandDG，GriffinJD."一種選擇性天然和突變Bcr-AM抑制劑AMN107的表征"—CancerCell,Volume7(2005年2月)129-141頁WhiteMF，LivingstonJM,Backer,LaurisV，DullTJ,UllrichA，KahnCR."酪氨酸960上的胰島素受體突變抑制信號傳遞，但不會影響其酪氨酸激酶活性"-Cell,Volume54(1988年8月26日)641-649頁.權(quán)利要求1.鑒定與第一化合物相比具有改進(jìn)細(xì)胞特異性的化合物的方法，所述第一化合物為蛋白質(zhì)的抑制劑并調(diào)節(jié)相應(yīng)的表型反應(yīng)，包括a)測量用所述第一化合物處理過的測試細(xì)胞的表型反應(yīng)的調(diào)節(jié)；b)測量用所述第一化合物處理過的對照細(xì)胞的表型反應(yīng)的調(diào)節(jié)c)測量用受試化合物處理過的測試細(xì)胞的表型反應(yīng)的調(diào)節(jié)；d)測量用受試化合物處理過的對照細(xì)胞的表型反應(yīng)的調(diào)節(jié)；e)確定第一化合物的細(xì)胞特異性缺口和受試化合物的細(xì)胞特異性缺口；和f)如果所述受試化合物的細(xì)胞特異性缺口大于所述第一化合物的細(xì)胞特異性缺口，則鑒定所述受試化合物具有改進(jìn)的細(xì)胞特異性。2.權(quán)利要求1的方法，其中細(xì)胞特異性缺口由所述對照細(xì)胞的ICs。除以所述測試細(xì)胞的ICs。來確定。3.鑒定與第一化合物相比具有改進(jìn)的細(xì)胞特異性的化合物的方法，所述第一化合物為蛋白質(zhì)的活化劑并調(diào)節(jié)相應(yīng)的表型反應(yīng)，包括a)測量用所述第一化合物處理過的測試細(xì)胞的表型反應(yīng)的調(diào)節(jié)；b)測量用所述第一化合物處理過的對照細(xì)胞的表型反應(yīng)的調(diào)節(jié)；c)測量用受試化合物處理過的測試細(xì)胞的表型反應(yīng)的調(diào)節(jié)；d)測量用受試化合物處理過的對照細(xì)胞的表型反應(yīng)的調(diào)節(jié)；e)確定第一化合物的細(xì)胞特異性缺口和受試化合物的細(xì)胞特異性缺口；和f)如果所述受試化合物的細(xì)胞特異性缺口大于所述第一化合物的細(xì)胞特異性缺口，則鑒定所述受試化合物具有改進(jìn)的細(xì)胞特異性。4.權(quán)利要求3的方法，其中所述細(xì)胞特異性缺口由所述測試細(xì)胞的IC5。除以所述對照細(xì)胞的ICs。來確定。5.改進(jìn)第一化合物優(yōu)化的方法，所述第一化合物為蛋白質(zhì)的抑制劑并調(diào)節(jié)相應(yīng)的表型反應(yīng)，包括a)測量所述第一化合物對測試細(xì)胞的表型反應(yīng)的IC5。；b)測量所述第一化合物對對照細(xì)胞的表型反應(yīng)的IC5。；c)測量具有與所述第一化合物相同骨架的受試化合物對所述測試細(xì)胞的表型反應(yīng)的I";d)測量所述受試化合物對所述對照細(xì)胞的表型反應(yīng)的IC50;和e)如果所述測試化合物的細(xì)胞特異性缺口大于所述第一化合物的細(xì)胞特異性缺口，則鑒定所述受試化合物為所述第一化合物的改進(jìn)。6.權(quán)利要求5的方法，其中蛋白質(zhì)是P21(r—Abl—"151或pl90B"_Abl，其在相應(yīng)的氨基酸位點(diǎn)包含相應(yīng)蘇氨酸到異亮氨酸的突變。7.改進(jìn)第一化合物優(yōu)化的方法，所述第一化合物為蛋白質(zhì)的活化劑并調(diào)節(jié)相應(yīng)的表型反應(yīng)，包括a)測量所述第一化合物對測試細(xì)胞的表型反應(yīng)的IC5。；b)測量所述第一化合物對對照細(xì)胞的表型反應(yīng)的IC5。；c)測量具有與所述第一化合物相同骨架的受試化合物對所述測試細(xì)胞的表型反應(yīng)的IC5。；d)測量所述受試化合物對所述對照細(xì)胞的表型反應(yīng)的IC50;和e)如果所述測試化合物的細(xì)胞特異性缺口大于所述第一化合物的細(xì)胞特異性缺口，則鑒定受試化合物為第一化合物的改進(jìn)。8.權(quán)利要求5-7中任一項(xiàng)的方法，其包括選擇步驟(e)的優(yōu)化化合物并重復(fù)步驟(a)-(d)。9.權(quán)利要求5_7中任一項(xiàng)的方法，其中所述蛋白質(zhì)為theramutein。10.權(quán)利要求5-7中任一項(xiàng)的方法，其中所述受試化合物的IC5。高于所述笫一化合物。11.權(quán)利要求5-7中任一項(xiàng)的方法，其中所述的受試化合物的IC5。低于所述第一化合物。12.確定一種物質(zhì)是否是蛋白質(zhì)的特異性抑制劑的方法，所述蛋白質(zhì)能引起可檢測的表型反應(yīng)，其包括a)溫育測試細(xì)胞，所述測試細(xì)胞表達(dá)所述蛋白質(zhì)并能用所述物質(zhì)引起與該細(xì)胞中所述蛋白質(zhì)的存在和功能活性相關(guān)的表型反應(yīng)；b)溫育對照細(xì)胞，所述對照細(xì)胞在更低水平表達(dá)或不表達(dá)所述蛋白質(zhì)并能以更低程度引起或完全不引起與細(xì)胞中所述蛋白質(zhì)的存在和功能活性相關(guān)的可檢測的表型反應(yīng)；物質(zhì)處理過的所述對照細(xì)胞的表型反應(yīng)；和d)如果所述物質(zhì)能調(diào)節(jié)所述測試細(xì)胞表型反應(yīng)的程度大于所述對照細(xì)胞，則確定所述物質(zhì)是所述蛋白質(zhì)的特異性抑制劑。13.確定一種物質(zhì)是否是蛋白質(zhì)的特異性活化劑的方法，所述蛋白質(zhì)能引起可檢測的表型反應(yīng)，其包括a)溫育測試細(xì)胞，所述測試細(xì)胞表達(dá)所述蛋白質(zhì)并能用所述物質(zhì)引起與該細(xì)胞中所述蛋白質(zhì)的存在和功能活性相關(guān)的表型反應(yīng)；b)溫育對照細(xì)胞，所述對照細(xì)胞在更低水平表達(dá)或不表達(dá)所述蛋白并能以更低程度引起或完全不引起與該細(xì)胞中所述蛋白質(zhì)的存在和功能活性相關(guān)的可檢測的表型反應(yīng)；物質(zhì)處理過的所述對照細(xì)胞的表型反應(yīng)；和d)如果所述物質(zhì)能調(diào)節(jié)所述測試細(xì)胞表型反應(yīng)的程度大于所述對照細(xì)胞，則確定所述物質(zhì)是所述蛋白質(zhì)的特異性活化劑。全文摘要本發(fā)明涉及鑒定、合成、優(yōu)化和識別為蛋白質(zhì)抑制劑或活化劑的化合物，所述蛋白質(zhì)為天然存在的內(nèi)源性蛋白質(zhì)及某些內(nèi)源性蛋白質(zhì)的變體形式，并涉及鑒定所述變體的新方法。通過命中鑒定的改進(jìn)、先導(dǎo)優(yōu)化、生物識別和毒性化合物的快速排除，使藥物發(fā)現(xiàn)和生產(chǎn)方法簡化，從而，所述方法加速了作為潛在治療有效藥物的化合物的鑒定和研發(fā)。由于效率的相應(yīng)增加，該實(shí)施導(dǎo)致藥物發(fā)現(xiàn)過程中的總成本降低。文檔編號C12Q1/50GK101370944SQ200680051498公開日2009年2月18日申請日期2006年11月24日優(yōu)先權(quán)日2005年11月23日發(fā)明者杰勒德·M·豪斯申請人:杰勒德·M·豪斯