專利名稱：使用Shh使星形膠質(zhì)細(xì)胞去分化成為神經(jīng)干細(xì)胞的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
神經(jīng)干細(xì)胞(NSCs)是神經(jīng)系統(tǒng)的祖細(xì)胞的亞型，它具有分化為星形膠質(zhì)細(xì)胞、少突 膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元的能力。從中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)和外周神經(jīng)系統(tǒng)(PNS)開始，神經(jīng)干 細(xì)胞形成多細(xì)胞神經(jīng)球，它們在各自的背景條件下分化為膠質(zhì)系和神經(jīng)系細(xì)胞(Sally Temple等人，2001)。這些神經(jīng)干細(xì)胞被用于治療不治之癥，并且被研究其在細(xì)胞治療 方法中的潛在用途。由于神經(jīng)千細(xì)胞是幾乎不會產(chǎn)生倫理問題的成體干細(xì)胞，所以對其 進行了廣泛研究。近來進行的關(guān)于去分化的熱點研究強化了成體干細(xì)胞的重要性。成體 干細(xì)胞比胚胎干細(xì)胞更容易獲得，但是在其實際應(yīng)用上仍有許多困難。此外，使用他人 的成體干細(xì)胞時，免疫排斥反應(yīng)也是一個問題。因此，使用病人自身的細(xì)胞誘導(dǎo)去分化 可以解決當(dāng)前的問題。為了這個目的，必須誘導(dǎo)已經(jīng)分化了的細(xì)胞去分化?，F(xiàn)在，使用 例如細(xì)胞融合和核移植的方法來誘導(dǎo)去分化正在進行廣泛的研究。在使用不同方法的另 一個研究組中，Alexis J.報道了從皮膚中分離的細(xì)胞在神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)條件下培養(yǎng)時具 有神經(jīng)干細(xì)胞的特性(Lancet 2004)。此外，Toru K.成功地使少突膠質(zhì)細(xì)胞前體去分化 成為神經(jīng)干細(xì)胞(Genes & Development 2004)。這個研究組自2000年起已經(jīng)發(fā)表了關(guān)于 此問題的文章，并且在2004年的一篇文章中報道了各階段的基因表達與染色質(zhì)重塑和 組蛋白修飾有關(guān)。
背景技術(shù)：
在本發(fā)明中，提出了 一種解決前述介紹方法的問題的途徑，并且建立了 一種新的適 合的使用方法。在本發(fā)明中，使用Sonic Hedgehog (Shh), Shh是在發(fā)育中起重要作用 的hedgehog基因家族中一員，因為它起著對神經(jīng)干細(xì)胞有較高影響的形態(tài)發(fā)生素的作 用。Shh是信號通路的增量調(diào)節(jié)因子，這條通路從Glil開始，Bmi-1和N-myc作為隨 后的介質(zhì)。在發(fā)育中，Shh在卯泡上皮的末端表達。此外，已知Shh促進了神經(jīng)祖細(xì)胞 的增殖(Pleasantin Mill等人，2005)。
根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明者在此背景下進行了深入和徹底的研究，獲得的發(fā)現(xiàn)是用Shh 處理會誘導(dǎo)已分化的星形膠質(zhì)細(xì)胞去分化成為能夠自我更新和分化為星形膠質(zhì)細(xì)胞、神
經(jīng)元和少突膠質(zhì)細(xì)胞的神經(jīng)干細(xì)胞樣的細(xì)胞。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞去分化成為神經(jīng)干細(xì)胞的組合物，該組 合物包含Shh蛋白質(zhì)或含有編碼Shh蛋白質(zhì)的核苷酸序列的核酸材料。
本發(fā)明的另 一個目的是提供了 一種誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞去分化成為神經(jīng)干細(xì)胞的方 法，該方法包括用Shh蛋白質(zhì)或含有編碼Shh蛋白質(zhì)的核苷酸序列的核酸材料處理星 形膠質(zhì)細(xì)胞。
本發(fā)明的另 一個目的是提供使用此方法制備的神經(jīng)干細(xì)胞。
本發(fā)明的另一個目的是提供一種將去分化的神經(jīng)千細(xì)胞分化成為星形膠質(zhì)細(xì)胞、少 突膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元的方法。
附圖簡述
本發(fā)明的上述和其它目的、特征和其它優(yōu)點將從以下的詳述并參考附圖得到更清楚 地理解，其中


圖1顯示了通過用Shh蛋白質(zhì)處理將星形膠質(zhì)細(xì)胞去分化成為神經(jīng)干細(xì)胞，其中將 Shh加入到鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞(A、 B)和神經(jīng)干細(xì)胞(C)后形成了神經(jīng)球；
圖2顯示了當(dāng)通過免疫細(xì)胞化學(xué)分析時，神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)記物的表達；和 圖3顯示了神經(jīng)干細(xì)胞(A-C)和神經(jīng)干細(xì)胞樣的細(xì)胞(D-G)分別體外去分化成為星 形膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元。
實現(xiàn)本發(fā)明的最佳方式
本發(fā)明一方面涉及能夠誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞去分化成為神經(jīng)干細(xì)胞的組合物，該組合 物包含Shh蛋白質(zhì)或含有編碼Shh蛋白質(zhì)的核苷酸序列的核酸材料。
如本文所用的術(shù)語"神經(jīng)干細(xì)胞樣的細(xì)胞"表示從體細(xì)胞去分化的和能夠分化為星 形膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元的多能干細(xì)胞。在本發(fā)明中，神經(jīng)干細(xì)胞樣的細(xì)胞 還描述為神經(jīng)干細(xì)胞。
本發(fā)明最近公開了當(dāng)星形膠質(zhì)細(xì)胞中Shh過表達時，雖然已經(jīng)分化，它們可以去分
化成為多能神經(jīng)干細(xì)胞樣的細(xì)胞。
在本發(fā)明中，Shh以蛋白質(zhì)形式提供。
只要是來自于哺乳動物，例如人、馬、綿羊、豬、山羊、駱駝、羚羊和狗，任何
Shh均可用于本發(fā)明的組合物中。此外，本發(fā)明的用于去分化成為神經(jīng)細(xì)胞的Shh蛋白 質(zhì)可以是野生型的或其變異體。
術(shù)語"Shh蛋白質(zhì)變異體，，是指自然產(chǎn)生或人為制造的Shh蛋白質(zhì)，它們由于氨基酸 的缺失、插入、非保守置換或保守置換或由于其組合在MS吏序列上與野生型不同。變 異體是具有與天然蛋白質(zhì)相同生物活性的功能同等物，盡管其物理和/或化學(xué)性質(zhì)有改 變。優(yōu)選地，變異體增強了對物理和化學(xué)環(huán)境中的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性或生理活性。
本發(fā)明的組合物優(yōu)選是Shh蛋白質(zhì)。例如，用Shh蛋白質(zhì)處理用于誘導(dǎo)星形膠質(zhì) 細(xì)胞去分化成為神經(jīng)干細(xì)胞的培養(yǎng)基。
Shh蛋白質(zhì)使用的量足夠誘導(dǎo)去分化。Shh蛋白質(zhì)的有效量取決于本領(lǐng)域眾所周知 的因素，包括培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法。在本發(fā)明的一個應(yīng)用實例中，Shh蛋白質(zhì)用量為 500ng/ml。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，Shh是包含編碼Shh蛋白質(zhì)的核苷酸序列的核酸 材料的形式。
編碼Shh蛋白質(zhì)的核苷酸序列是野生型的或其變異體，其中自然產(chǎn)生的或人工合成 的變異體由于堿基的缺失、插入、非保守置換或保守置換或由于它們的組合在氨基酸序 列上與野生型不同。
編碼Shh蛋白質(zhì)的核苷酸序列既可以是包括DNA分子(基因組，cDNA)或RNA分 子的單鏈或雙鏈。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，含有編碼Shh蛋白質(zhì)的核苷酸序列的核酸材料是 允許Shh蛋白質(zhì)表達的載體。
如本文所用的術(shù)語"載體"是指含有DNA序列的DNA構(gòu)建體，該DNA序列被可操 作地連接到能夠影響所述DNA在適合的宿主細(xì)胞中表達的控制序列上。
如本文所用的術(shù)語"可操作地連接"是指核酸表達調(diào)控序列和編碼靶蛋白質(zhì)的第二 核酸序列間的功能性連接以能完成一般的功能。與重組載體的可操作地連接可使用本領(lǐng) 域眾所周知的基因重組技術(shù)制備，并且位點特異性DNA的斷裂和連接可使用本領(lǐng)域公
知的酶進行。
適合于本發(fā)明使用的載體包括信號序列或用于膜定向或分泌的《1導(dǎo)序列以及表達 調(diào)控元件，例如啟動子、操縱子、起始密碼子、終止密碼子、多聚腺普酸化信號和增強 子，并且可根據(jù)它們的目的構(gòu)建成多種形式。載體的啟動子可以是組成型或是誘導(dǎo)型的。 此外，表達載體包括可選擇標(biāo)記物，所述標(biāo)記物允許選擇含有該載體的宿主細(xì)胞，并且 可復(fù)制的表達載體包括一個復(fù)制起始點。此載體可以是自我復(fù)制的，或者可以被整合至 宿主細(xì)胞的DNA上。
在本發(fā)明中有用的載體可以是質(zhì)粒栽體、粘粒載體或病毒載體，優(yōu)選病毒栽體。病 毒載體的實例包括但是不限制于來源于逆轉(zhuǎn)錄病毒例如HIV(人免疫缺陷病毒)、MLV(鼠 白血病病毒)、ASLV(禽肉瘤/白血病病毒)、SNV(脾壞死病毒)、RSV(勞斯肉瘤病毒)、 MMTV(小鼠乳腺瘤病毒)等等、腺病毒、腺相關(guān)病毒和單純皰務(wù)病毒的載體。
含有編碼Shh蛋白質(zhì)的核苦酸序列的核酸材料可以以載體的形式作為棵露DNA被 引入細(xì)胞(Wolff等人,Science, 247: 1465-8， 1990; Wolff等人，J. Cell Sci. 103: 1249-59， 1992),或在脂質(zhì)體或陽離子聚合物的幫助下被引入細(xì)胞。為了在基因轉(zhuǎn)染中使用，脂 質(zhì)體是例如DOTMA和DOTAP的陽離子磷脂制成的磷脂膜。當(dāng)與負(fù)電荷核苷酸以一定 比例混合時，陽離子脂質(zhì)體形成核酸-脂質(zhì)體復(fù)合物。
在本發(fā)明的另 一個優(yōu)選實施方案中，含有編碼Shh蛋白質(zhì)的核苷酸序列的核酸材料 可以是表達其中的Shh蛋白質(zhì)的病毒。
如本文所用的術(shù)語"病毒"是指用攜帶編碼Shh蛋白質(zhì)的核苷酸序列的病毒載體轉(zhuǎn) 化或轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞來制備的Shh表達病毒。
根據(jù)本發(fā)明的Shh表達病毒的制備中所使用的病毒實例包括但是不限于逆轉(zhuǎn)錄病 毒、腺病毒、腺相關(guān)病毒和單純皰滲病毒。
本發(fā)明的另一方面涉及星形膠質(zhì)細(xì)胞去分化成為神經(jīng)干細(xì)胞的方法，包含用Shh 蛋白質(zhì)或含有編碼Shh蛋白質(zhì)的核苷酸序列的核酸材料處理。
更詳細(xì)地，該方法包含以下步驟(i)在培養(yǎng)基中培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞；(ii)用Shh蛋 白質(zhì)或含有編碼Shh蛋白質(zhì)的核苷酸序列的核酸材料處理培養(yǎng)基；和(iii)誘導(dǎo)星形膠質(zhì) 細(xì)胞去分化成為神經(jīng)干細(xì)胞。
任何用于培養(yǎng)神經(jīng)千細(xì)胞的常規(guī)培養(yǎng)基都可以被用作在步驟(i)中培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)
胞的培養(yǎng)基。通常，培養(yǎng)基含有碳源、氮源和微量元素組分。此外，所述培養(yǎng)基可包括 抗生素，例如青霉素、鏈霉素和慶大霉素。培養(yǎng)基優(yōu)選含有bFGF。
步驟(ii)中用于處理細(xì)胞的Shh蛋白質(zhì)或含有編碼Shh蛋白質(zhì)的核苷酸序列的核酸 材料如上所述。
本發(fā)明的另 一方面涉及如前所述方法制備的神經(jīng)干細(xì)胞。
已證實通過根據(jù)本發(fā)明的去分化制備的神經(jīng)干細(xì)胞可表達同樣水平的神經(jīng)千細(xì)胞 特異性標(biāo)記物Nestin、 CD133和Sox2，并且具有與一4殳神經(jīng)干細(xì)胞相同的分化能力。 通過根據(jù)本發(fā)明的去分化制備的神經(jīng)干細(xì)胞還顯示了自我更新能力。
本發(fā)明的另 一方面還涉及一種根據(jù)前述方法去分化得到的神經(jīng)干細(xì)胞分化成為星 形膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞和(或)神經(jīng)元的方法。
當(dāng)使用本發(fā)明的組合物和方法去分化的神經(jīng)干細(xì)胞被置于各自適合的分化條件下 時，分化成的星形膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元和少突膠質(zhì)細(xì)胞可通過檢測特異于各自細(xì)胞的標(biāo)記 物的表達來監(jiān)測。
可通過以下實施例獲得對本發(fā)明的更好的理解，這些實施例只是用于解釋說明而不 應(yīng)被解釋為限制本發(fā)明。
實施例1:實驗方法
1. 鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞和鼠神經(jīng)干細(xì)胞的培養(yǎng)
分離自E13.5胎腦的鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞在補充了 10%FBS(HyClone)、 1%青霉素/鏈霉 素和1°/丄-谷氨酰胺1。/。(Cambrex)的Dulbecco，s modified Eagle's培養(yǎng)基(DMEM(高糖， HyClone))中培養(yǎng)。在補充了 B27無血清(Gibco)、人重組堿性FGF和人重組EGF(R&D)、 含有胰島素(Sigma)、轉(zhuǎn)鐵蛋白(Sigma)、竭(Sigma)、孕酮(Sigma和青霉素/鏈霉素(Cambrex) 的Dulbecco，s modified Eagle's培養(yǎng)基/F12(DMEM/F12, Gibco)中培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞作為 對照。
2. 誘導(dǎo)去分化
去分化在與用于神經(jīng)千細(xì)胞相同的培養(yǎng)條件下被誘導(dǎo)。細(xì)胞培養(yǎng)使用兩種不同的方 法來進行。細(xì)胞以lxl()S個細(xì)胞/孔的密度接種于6孔板上并培養(yǎng)12小時，隨后用濃度 為500ng/ml的Shh(sonic hedgehog, R&D)處理。在培養(yǎng)條件變?yōu)檫m合于神經(jīng)干細(xì)胞前，
細(xì)胞在Shh存在下在培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞的條件下培養(yǎng)2、 4和6天。或者，即使培養(yǎng)條 件改變?nèi)岳^續(xù)用Shh處理。
3. 通過免疫細(xì)胞化學(xué)確定各自的標(biāo)記物
用4。/。多聚曱醛(EMS)在4"C固定1小時后，神經(jīng)球在20%蔗糖中振動培養(yǎng)過夜。 然后，神經(jīng)球使用OCT化合物超低溫冷藏于8孔小室載玻片(Nunc)且在染色前切成8 ~ 10pm厚度。用含有10。/。正常山羊血清(Jackson ImmunoResearch) + 0.1 %BSA (Sigma) + 0.3%TritonX-100 (Sigma)的PBS封閉后，切片用抗-nestin (Chemicon)、抗-CD133 (MACS) 和抗-Sox2 (Sigma)在4。C培養(yǎng)過夜，然后用抗-鼠-cy3 (Jackson ImmunoResearch)、抗-兔 ^1丁((分子探針)和抗-山羊《乂3 (Zymed)室溫培養(yǎng)，最后用DAPI(Sigma)核染色。蔡司聚 焦透鏡(Zeiss confocal lens) (Carl Zeiss)被用于染色后的檢查。分化的細(xì)胞以上述相同 方式染色。在這方面，抗-GFAP(Dako)、抗-S100p (Zymed)、抗-(3-微管蛋白III(Covance)、 抗-Map2a (Sigma)、抗-TH (Sigma)、抗-04 (R&D)和抗-CNPase (Chemicon)用作抗體。
4. 體外分化
用PLO (聚L-鳥氨酸)(Sigma)和層粘連蛋白或纖維連接蛋白(Sigma)包被后，細(xì)胞在 下面給出的分化條件下培養(yǎng)。
為了分化成為星形月交質(zhì)細(xì)胞，細(xì)胞培養(yǎng)在補充10%FBS(HyClone)的 DMEM(HyClone,高糖)中在人重組bFGF和EGF(R&D)或CNTF(重組大鼠睫狀神經(jīng)營 養(yǎng)因子)(Upstate)存在下進行5 ~ 7天。
通過在含有N2和B27無血清、補充人重組FGF的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞4天，然后 在無FGF培養(yǎng)基中培養(yǎng)8天誘導(dǎo)其分化為神經(jīng)元?；蛘撸?xì)胞在1 ~ 10pm RA(維甲酸， Sigma)作為分化誘導(dǎo)劑存在下培養(yǎng)7-14天。作為其它選擇，細(xì)胞在1 - 10mMVPA(丙 戊酸，Sigma)和1 ~ 10pm RA(維甲酸，Sigma)的共同存在下培養(yǎng)7-14天以誘導(dǎo)分化為 神經(jīng)元。
通過在補充了 B27無血清的N2培養(yǎng)基中在PDGF-AA(血小板衍生的生長因子-AA, R&D)、 T3(3，3,5-三碘-L-曱腺原氨酸，Sigma)、人重組堿性FGF和EGF(R&D)的存在下 培養(yǎng)20天誘導(dǎo)分化為少突膠質(zhì)細(xì)胞。
當(dāng)在前述分化條件下培養(yǎng)時，監(jiān)測細(xì)胞的形態(tài)學(xué)并進行使用特異于各自分化標(biāo)記物 的抗體的免疫細(xì)胞化學(xué)以檢測分化是否正確進行。
實施例2:結(jié)果
已分化的鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞用Shh處理，所述Shh起促進神經(jīng)祖細(xì)胞增殖作用。每 日添加數(shù)量為500ng/ml的Shh至培養(yǎng)基中以培養(yǎng)鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞后，該培養(yǎng)基被替換 為培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞的培養(yǎng)基。隨著培養(yǎng)的進行，觀察到細(xì)胞的形態(tài)學(xué)類似于神經(jīng)干細(xì)胞。 形成神經(jīng)球后，不再添加Shh。神經(jīng)球一旦形成就持續(xù)存在(圖1)。
鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞的去分化以同樣方式誘導(dǎo)。用Shh處理2、 4和6天后，培養(yǎng)條件 變?yōu)檫m合于神經(jīng)干細(xì)胞，且監(jiān)測細(xì)胞去分化。從用Shh處理后第6天起，當(dāng)培養(yǎng)條件變 為適合于神經(jīng)干細(xì)胞時，神經(jīng)球開始更好的形成。因此細(xì)胞持續(xù)去分化。
為了發(fā)現(xiàn)這些細(xì)胞是否具有與神經(jīng)千細(xì)胞相同的特征，使用各自的標(biāo)記物進行免疫 細(xì)胞化學(xué)。在這方面，主要大量表達于神經(jīng)干細(xì)胞中的標(biāo)記物nestin、 CD133和Sox2 也在染色后在神經(jīng)干細(xì)胞樣的細(xì)胞中被觀察到。此外，因此形成的神經(jīng)球的冰凍切片確 定了 nestin、 CD133和Sox2的表達(圖2)。
為了檢測神經(jīng)干細(xì)胞樣的細(xì)胞是否能夠像神經(jīng)干細(xì)胞一樣進行分化，以與上迷相同 的方式在數(shù)種條件下被誘導(dǎo)分化為星形膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元。當(dāng)使用針對 各自特異于它們分化標(biāo)記物的抗體分析時，發(fā)現(xiàn)神經(jīng)千細(xì)胞樣的細(xì)胞像神經(jīng)干細(xì)胞一樣 分化為數(shù)種細(xì)胞。分化為星形膠質(zhì)細(xì)胞的鑒別用GFAP和S100的表達來進行，分化為 神經(jīng)元的鑒別用P-孩i管蛋白III(Tujl)和Map2a的表達來進行，和分化為少突膠質(zhì)細(xì)胞 的鑒別用04和CNPOase的表達來進行。
總之,通過此研究獲得的數(shù)據(jù)說明Shh在鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞去分化成為神經(jīng)干細(xì)胞樣 的細(xì)胞中起著重要作用，并且這些去分化的神經(jīng)干細(xì)胞樣的細(xì)胞可以分化回星形膠質(zhì)細(xì) 胞、少突"交質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元。
工業(yè)應(yīng)用
如前描述，Shh在誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞去分化成為神經(jīng)干細(xì)胞中是有用的，并且去分 化的神經(jīng)干細(xì)胞可用于多種疾病的治療。
現(xiàn)有技術(shù)的文獻目錄
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權(quán)利要求
1. 一種誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞去分化成為神經(jīng)干細(xì)胞的組合物，包含Shh(sonichedgehog)蛋白質(zhì)或含有編碼Shh蛋白質(zhì)的核苷酸序列的核酸材料。
2. 如權(quán)利要求l所述的組合物，其特征在于，所述的含有編碼Shh蛋白質(zhì)的核苷酸 序列的核酸材料是允許Shh蛋白質(zhì)表達的載體。
3. 如權(quán)利要求l所述的組合物，其特征在于，所述的含有編碼Shh蛋白質(zhì)的核苷酸 序列的核酸材料是表達Shh蛋白質(zhì)的病毒。
4. 如權(quán)利要求l所述的組合物，其特征在于，所述的去分化的神經(jīng)干細(xì)胞具有分化 為星形膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元和少突膠質(zhì)細(xì)胞的能力。
5. —種通過用Shh蛋白質(zhì)或含有編碼Shh蛋白質(zhì)的核苷酸序列的核酸材料處理星形 膠質(zhì)細(xì)胞誘導(dǎo)星形月交質(zhì)細(xì)胞去分化成為神經(jīng)干細(xì)胞的方法。
6. 如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述的去分化的神經(jīng)干細(xì)胞具有分化為 星形膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元和少突膠質(zhì)細(xì)胞的能力。
7. 如權(quán)利要求5所述的方法，包含以下步驟(i) 在培養(yǎng)基中培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞；(ii) 用所述的Shh蛋白質(zhì)或所述的核酸材料處理所述的星形膠質(zhì)細(xì)胞；和(iii) 誘導(dǎo)所述的星形膠質(zhì)細(xì)胞分化為神經(jīng)干細(xì)胞。
8. 如權(quán)利要求7所述的培養(yǎng)基，其中步驟(i)的培養(yǎng)基中含有bFGF。
9. 一種使用權(quán)利要求5所述的方法制備的神經(jīng)干細(xì)胞。
10. —種使用權(quán)利要求5所述的方法制備的神經(jīng)干細(xì)胞分化成為星形膠質(zhì)細(xì)胞、神 經(jīng)元和少突"交質(zhì)細(xì)J包的方法。
全文摘要
本發(fā)明公開了使用Shh誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞去分化為神經(jīng)干細(xì)胞的組合物和方法。該去分化的神經(jīng)干細(xì)胞具有分化為星形膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元和少突膠質(zhì)細(xì)胞的能力。
文檔編號C12N15/10GK101389759SQ200680053480
公開日2009年3月18日 申請日期2006年4月12日 優(yōu)先權(quán)日2006年2月27日
發(fā)明者全恩暻, 劉承權(quán), 劉承駿, 孟薩克, 尹炳善, 文哉喜, 樸圭萬, 郭成植, 金淇東, 金甫那 申請人:銀怎株式會社