專利名稱：冬蟲夏草人工繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種無性繁殖方法，特別涉及一種冬蟲夏草人工繁 殖方法。
背景技術(shù)：
自然界生長的冬蟲夏草的生長過程，實際上是蝙蝠蛾幼蟲在進 食過程中被作為真菌的被毛孢感染，被毛孢利用蝙蝠蛾幼蟲作營養(yǎng)基生長，直 至幼蟲體內(nèi)蛋白質(zhì)被消耗殆盡，在幼蟲的頭部形成菌體的集合，稱為子座，頂 端產(chǎn)生孢子，成熟后再崩發(fā)，再感染，周而復(fù)始，完成被毛孢有性繁殖的全部 過程。嚴格意義上，冬蟲夏草既不是蟲也不是草，是昆蟲幼蟲與真菌被毛孢的 結(jié)合體。
完全模仿自然界冬蟲夏草的有性繁殖規(guī)律來培養(yǎng)被毛孢，目前在技術(shù)上還 有相當大的困難，并受生產(chǎn)成本的制約。目前生產(chǎn)領(lǐng)域只有發(fā)酵的菌絲體作為 冬蟲夏草替代品。而發(fā)酵的菌絲體無論在生長形態(tài)、細胞組織、活性組分含量 還是藥用價值方面與天然冬蟲夏草都有很大的差別
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服上述已有技術(shù)的不足，而提供一種冬蟲 夏草人工繁殖方法，所要解決的技術(shù)問題是利用真菌被毛孢單孢分裂繁殖規(guī) 律，采用無性繁殖方法培養(yǎng)獲取作為天然冬蟲夏草替代品的被毛孢有性特征的 菌體組織。
為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用了以下技術(shù)方案
一種冬蟲夏草人工繁殖方法，其特征在于在蒸汽滅菌后的玻璃瓶內(nèi)用手術(shù)
刀將菌體組織切碎；接種在玻璃瓶內(nèi)的培養(yǎng)基表面；在玻璃瓶口蓋上透氣瓶蓋；將蓋有透氣瓶蓋的玻璃瓶放置在養(yǎng)殖區(qū)，直至成熟；
其中，培養(yǎng)基及手術(shù)刀具的滅菌溫度110 121°C，滅菌時間25 30分鐘； 養(yǎng)殖區(qū)空氣凈化度30萬級，室內(nèi)溫度10 18。C，室內(nèi)濕度RH 40% 55%;
其中，所述的培養(yǎng)基為每100kg培養(yǎng)基中含有蠶蛹7 9kg，去殼去皮扇 貝肉3 5kg，新鮮牛肉1.5 2.5kg，新鮮牛骨4 6kg，花生米0.4 0.6kg，鮮 牛奶4 6kg，大豆蛋白胨0.8 1.2kg，瓊脂1.0 1.4kg，磷酸二氫鉀40 60g， 硫酸鎂15 25g，'余量為水。
環(huán)境濕度的控制是本發(fā)明的一項關(guān)鍵技術(shù)，濕度高于朋55%容易滋生霉菌， 低于RH40。/。則導(dǎo)致培養(yǎng)基水分過度揮發(fā)。
本發(fā)明無性繁殖方法所培養(yǎng)的被毛孢，與自然條件生長的冬蟲夏草以及發(fā) 酵法制得菌體相比較(1)、肉眼觀察干品比對用發(fā)酵技術(shù)獲得的菌體是灰白 色狀態(tài)組織，比重較輕。用本發(fā)明方法獲得的菌體為圓形，堅硬，表面凸起不 平，黃棕色，比重較大，與天然蟲草子座的組織細胞形態(tài)基本相同。(2)、經(jīng)中
國中醫(yī)研究院中藥研究所檢驗，有效成分含量本發(fā)明菌體〉天然蟲草〉發(fā)酵
菌絲。經(jīng)中國科學院微生物研究所檢測，本發(fā)明中國被毛孢菌體組織性狀穩(wěn)定，
具備有性繁殖特征。(3)、轉(zhuǎn)種觀察將生長到4 5個月左右的被毛孢菌體連
瓶倒置于裝有培養(yǎng)基的玻璃瓶上，瓶口與瓶口連接處作無菌處理連接封閉。一
個月后，五倍放大鏡觀察，培養(yǎng)基表面分布極少圓點白色的細胞組織，2 3個 月培養(yǎng)基表面布滿白色半透明①2 3mm圓形，中間凹陷并伴生短絨毛狀、有豎 立肉芽狀態(tài)細胞組織，隨后生長速度加快。有極少部分會生出1 2枝與天然蟲 草子座形態(tài)相同假性子座，但長勢較弱，高約20 30腿，粗約02ram，生長時間 短，極易倒狀，倒狀后與菌體組織生長在一起，無痕跡，取后曬干后極脆，長 至12 13個月后，由白色、半透明狀變成黃色、淺棕色，成熟。與無性繁殖的 菌體形態(tài)無明顯差別。觀察表明，無性繁殖被毛孢仍具有性繁殖記憶特征。
具體實施方式
下面結(jié)合實施例進一步說明本發(fā)明。
首先從天然冬蟲夏草中分離出菌體組織，或者取利用本方法繁殖的菌體組 織。在滅菌后的玻璃瓶內(nèi)用手術(shù)刀將菌體組織切碎，越細越好。將細碎的菌體 組織接種在玻璃瓶內(nèi)的培養(yǎng)基表面，在玻璃瓶口蓋上透氣瓶蓋；將蓋有透氣瓶 蓋的玻璃瓶放置在養(yǎng)殖區(qū)，直至成熟。
其中，培養(yǎng)基及手術(shù)刀具的滅菌溫度110 121°C，滅菌時間25 30分鐘。 培養(yǎng)基滅菌后自然冷卻12小時以上，置放區(qū)溫度18°C以下。
養(yǎng)殖區(qū)空氣凈化度30萬級，室內(nèi)溫度10 18。C，室內(nèi)濕度RH 40% 550/0; 接種量為每瓶20mn^左右。接種瓶為50ml和100ml PDA培養(yǎng)基兩種裝
生長期分為三個階段。第一階段約為30天，五倍放大鏡觀察，在PDA培 養(yǎng)基表面與菌種的接觸面縫隙生成乳白色、半透明細胞組織，細胞組織表面伴 生有白色短絨毛，局部生長直立、分枝、肉芽狀組織。
第二階段約為120天的快速生長期，細胞組織分裂造成擠壓向上隆起，有 肉芽狀組織分裂最快，隆起表面呈高低不平，細胞組織仍是白色、半透明，厚 度約10 15mm，個別增厚至25mm以上。顯微鏡觀察，在頂部表面有囊殼小空腔， 腔內(nèi)有產(chǎn)孢細胞形成。切片觀察，細胞組織呈微黃色、半透明。有較濃藥香味， 內(nèi)部有小孔洞，洞壁有白色短絨毛，導(dǎo)管細胞周圍孔洞排列。
第三階段為成熟采集期，菌體表面細胞組織由白色半透明逐漸變黃、黃棕 色，培養(yǎng)基剩余不多，并開裂、干縮，沒有可利用價值。原菌種碎屑變成黑棕 色，木質(zhì)化，無再生跡象，并與新生成的細胞組織在一起。采集后菌體有粘連 部分培養(yǎng)基，用0.2MPa壓縮空氣吹掉，集中干燥，真空包裝，即成初級產(chǎn)品。
權(quán)利要求
1、一種冬蟲夏草人工繁殖方法，其特征在于在蒸汽滅菌后的玻璃瓶內(nèi)用手術(shù)刀將菌體組織切碎；接種在玻璃瓶內(nèi)的培養(yǎng)基表面；在玻璃瓶口蓋上透氣瓶蓋；將蓋有透氣瓶蓋的玻璃瓶放置在養(yǎng)殖區(qū)，直至成熟；其中，培養(yǎng)基及手術(shù)刀具的滅菌溫度110～121℃，滅菌時間25～30分鐘；養(yǎng)殖區(qū)空氣凈化度30萬級，室內(nèi)溫度10～18℃，室內(nèi)濕度RH 40％～55％；其中，所述的培養(yǎng)基為每100kg培養(yǎng)基中含有蠶蛹7～9kg，去殼去皮扇貝肉3～5kg，新鮮牛肉1.5～2.5kg，新鮮牛骨4～6kg，花生米0.4～0.6kg，鮮牛奶4～6kg，大豆蛋白胨0.8～1.2kg，瓊脂1.0～1.4kg，磷酸二氫鉀40～60g，硫酸鎂15～25g，余量為水。
全文摘要
本發(fā)明是一種冬蟲夏草人工繁殖方法，在蒸汽滅菌后的玻璃瓶內(nèi)用手術(shù)刀將菌體組織切碎；接種在玻璃瓶內(nèi)的培養(yǎng)基表面；在玻璃瓶口蓋上透氣瓶蓋；將蓋有透氣瓶蓋的玻璃瓶放置在養(yǎng)殖區(qū)，直至成熟。利用真菌被毛孢單孢分裂繁殖規(guī)律，采用無性繁殖方法成功培養(yǎng)獲取了作為天然冬蟲夏草替代品的被毛孢有性特征的優(yōu)質(zhì)菌體組織。
文檔編號C12N1/14GK101338277SQ20071001681
公開日2009年1月7日 申請日期2007年7月5日 優(yōu)先權(quán)日2007年7月5日
發(fā)明者姜善清 申請人:姜善清