專利名稱：Hla-b基因分型用微陣列芯片的制備及其用法的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種臨床檢測用途的基因檢測試劑盒，尤其是涉及采用DNA微陣列芯片技術和雙溫度雜交方法，該試劑盒能夠高通量、高效率、高特異性對HLA-B基因進行分型。

背景技術：
HLA(Human leukocyte antigen，人類白細胞抗原)是人類主要組織相容性系統(tǒng)。組織相容性是指不同個體間進行組織或器官移植時，供者和受者雙方接受的程度。供受者組織不相容引起的反應，被證實是一種免疫反應，它是由細胞表面同種異型抗原誘導的，這個代表個體特異性的抗原稱移植抗原或組織相容性抗原，其中起主要作用的抗原稱主要組織相容性系統(tǒng)(MHS)，HLA(人類白細胞抗原)就是人類的主要組織相容性系統(tǒng)。HLA基因復合體位于人類第6號染色體6p21.3區(qū)域，具有高度單核苷酸多態(tài)性(SNPs)。HLA存在多個基因座位，其中HLA-B座位是影響移植排斥反應的主要座位之一。SNPs是決定組織相容性的本質(zhì)因素，個體之間的SNPs差異程度決定著相容性程度。HLA-B基因座位的SNPs主要集中在第二外顯子長度約300bp的片段上。根據(jù)SNPs的差異特點，可以進行基因分型，將HLA-B基因座位分成不同的型別和亞型，型別和亞型相同者，SNPs差異較小，相容性好，反之亦然。HLA基因分型技術廣泛應用于造血干細胞移植、器官移植、疾病關聯(lián)研究。
HLA-B基因分型方法是從90年代開始發(fā)展起來的，目前主要包括PCR-SSP(PCR-序列特異性引物法)、PCR-SSOP(PCR-序列特異性寡核苷酸探針法)、SBT(測序法)、FCM(流式法)方法。這些方法目前被西方國家的少數(shù)企業(yè)壟斷，我國處于空白狀態(tài)，完全依賴進口。同時，這些方法也存在一些技術問題，比如引物過多造成檢測錯誤、探針雜交單一溫度造成特異性降低、檢測通量過小等等。
DNA微陣列法是近幾年發(fā)展起來的新型基因分型法，相比其它分型方法，具有高通量、集約化、低成本、高準確性等特點，是融微電子學、生物學、物理學、化學、計算機科學為一體的高度交叉的新技術，具有重大的基礎研究價值，又具有明顯的產(chǎn)業(yè)化前景。由于用該技術可以將極其大量的探針同時固定于支持物上，所以一次可以對大量的生物分子進行檢測分析，從而解決了傳統(tǒng)核酸印跡雜交技術復雜、自動化程度低、檢測目的分子數(shù)量少、低通量等不足。而且，通過設計不同的探針陣列、使用特定的分析方法可使該技術具有多種不同的應用價值，如基因表達譜測定、突變檢測、多態(tài)性分析、基因組文庫作圖及雜交測序(Sequencing by hybridization，SBH)等，為“后基因組計劃”時期基因功能研究及現(xiàn)代醫(yī)學科學、醫(yī)學診斷學的發(fā)展提供了強有力的工具。


發(fā)明內(nèi)容
鑒于現(xiàn)有HLA-B基因分型方法的不足，本發(fā)明將DNA微陣列技術應用于HLA-B基因分型，開發(fā)了一種新型的基因分型試劑盒。
本發(fā)明所采用的技術方案是針對HLA-B基因座位的第二、三外顯子，設計二套特異性寡核苷酸探針(附表1)，采用自動點樣機器人，將二套探針印制在兩張玻片的特定區(qū)域，每張玻片印制16個微陣列矩陣，這樣就制成高密度DNA微陣列，二張芯片可以檢測16個樣本，再配以其它必要的組份，包括PCR引物(表2)組成完整的試劑盒。實際檢測時，取16份人基因組DNA溶液，采用CY3標記引物和不對稱PCR方法，擴增出人基因組HLA-B基因的第二、三外顯子單鏈CY3標記片段。取DNA微陣列玻片一對，在第一張玻片的16個雜交區(qū)域，分別加入16種PCR產(chǎn)物2ul和雜交液8ul；在第二張玻片的對應區(qū)域，加入同樣的成分。將一對玻片放在自動雜交洗滌儀的兩個雜交槽內(nèi)，分別將第一、二張玻片的雜交溫度設定為52℃和45℃，雜交時間30分鐘，自動洗滌吹干。取出玻片，放入GenePix 4100A掃描儀進行掃描，使用分析軟件對掃描圖像信號進行圖像數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換處理，并分析產(chǎn)生樣本基因型別結(jié)果。
本試劑盒采用高密度DNA微陣列技術，可以大大提高檢測通量，每二張玻片可以制備用于檢測16個樣本的DNA微陣列，一般是現(xiàn)有檢測技術的10倍以上；同時，由于采用了雙片雙溫度雜交的特殊方法，避免了現(xiàn)有產(chǎn)品因為雜交溫度不適造成的探針雜交結(jié)果假陽性和假陰性問題，大大提高了產(chǎn)品的特異性。
本發(fā)明針對HLA-B第2、3外顯子基因序列的多態(tài)性，設計63種分型用寡核苷酸探針，探針分為兩組，見表1，第一組45種探針，雜交溫度為52℃；第二組18種探針，雜交溫度45℃。
表1HLA-B基因分型寡核苷酸探針


表2引物序列

本發(fā)明用下列實施例進行解釋，目的只是為了解釋而不是以任何方式限制本發(fā)明。
以下結(jié)合


本發(fā)明的具體實施。


圖1為HLA-B基因分型DNA微陣列雜交區(qū)和探針微陣列示意圖 1、2芯片外觀 3雜交區(qū)及探針矩陣 實施例一 方法1HLA-B基因分型DNA微陣列PCR引物和寡核苷酸探針的設計和合成 為了采用特異性PCR擴增HLA-B基因座位的第2、3外顯子，分別在第1內(nèi)含子末端至第2外顯子的始端位置，以及第2內(nèi)含子末段至第3外顯子始段設計特異性5’端引物Pb1、Pb2，以及在第2外顯子末端和第3外顯子末端位置設計3’端引物Pb3、Pb4。合成、CY3標記、純化。引物序列見表2。
針對HLA-B基因第2、3外顯子基因序列的多態(tài)性，設計63種分型探針，序列見表1，合成、修飾、純化。
方法2HLA-B基因分型DNA微陣列的制備 采用基因芯片自動點樣儀，將63種分型探針和兩種對照探針點制到玻片的特定區(qū)域，制成DNA微陣列。
(1)點樣探針溶液將探針稀釋到5×SSC、0.05％SDS溶液中，終濃度為30uM； (2)點樣矩陣(如圖1)將探針分成二組，第一組45種分型探針，2種對照探針。第一組探針點制在第一張玻片上，分成16個雜交區(qū)，雜交區(qū)按照2列8行排列。在每個雜交區(qū)內(nèi)，探針的排列方式是每種探針重復2點，每行5種探針，10點，共10行，第10行只有2種對照探針，4點。
第二組18種分型探針，2種對照探針。排列方式同上，共4行。
實施例二采用HLA-B基因分型用DNA微陣列檢測臨床樣本HLA-B基因型別 取16份已知基因型別的DNA樣本，采用CY3標記的PCR引物，上下游引物1∶30(分子數(shù)比)不對稱PCR方法，PCR循環(huán)參數(shù)為94℃5’；94℃30”，58℃30”，72℃30”，40循環(huán)；72℃5’。
取一對微陣列玻片，分別取16種PCR產(chǎn)物各2ul加到第一片的16孔和第二片的16孔，再在各孔加入雜交液(5XSSC)8ul，玻片放到自動雜交洗滌儀的2個槽內(nèi)，設定雜交溫度第一片的52℃，第二片45℃。雜交時間40分鐘。雜交后自動洗滌和風干。
采用GnenPix4100A掃描儀，掃描雜交信號，得到雜交結(jié)果掃描圖，并將圖像轉(zhuǎn)換成數(shù)據(jù)。
采用分析軟件，將以上數(shù)據(jù)自動分析轉(zhuǎn)換成為各個樣本的基因型別，檢測結(jié)果與樣本原基因型別完全相符。見表3。
實施例說明了本發(fā)明產(chǎn)品在檢測通量方面的優(yōu)勢(一次檢測16個樣本)和檢測準確性方面的可靠性(檢測結(jié)果與原樣本結(jié)果完全相符)。
表3本次檢測結(jié)果與樣本原有基因型別的比較

序列表
<110>中山大學達安基因股份有限公司
<120>HLA-B基因分型用微陣列芯片試劑盒
<140>
<141>
<160>67
<210>1
<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>1
CCT TCA TGT TCC GTG TC
<210>2
<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>2
CTT GTA CTT CTG TGT CT
<210>3
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>3
CCG GGA CAT GGC GGT G
<210>4
<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>4
GCG GCT CCT TCC TCG GA
<210>5
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>5
GCC CAC GGT GAT GAA G
<210>6
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>6
CGG GGC GCC ATC CTC GGA
<210>7
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>7
CGC CCG GGG CTC CGT CCT
<210>8
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>8
TTC TCT ATC CAC GGC GCC
<210>9
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>9
GTG TCT CCC GGT CCC AA
<210>10
<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>10
GTG CCT GGG CCT TGT AG
<210>11
<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>11
GTG CCT TGG CCT TGC AG
<210>12
<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>12
CGG GAC ACG GAG GTG T
<210>13
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>13
GGC GGT GTC GAA ATA C
<210>14
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>14
CTC TCG GTC AGT CTG T
<210>15
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>15
ACG AAC TGC GTG TCG T
<210>16
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>16
CTG GGT GCC GTC CAC
<210>17
<211>15
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>17
TGG TCT TGA AGA TCT GT
<210>18
<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>18
CCC AAT ATT CCG GCC C
<210>19
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>19
CTG CTC CAC CCA CGG C
<210>20
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>20
CGG GAC ATA GCG GTG T
<210>21
<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>21
TTG CGC TGG GAG ATC TG
<210>22
<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>22
CAG CCA TAC ATA TTC TG
<210>23
<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>23
GCC ATA CAT CAC CTG GA
<210>24
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>24
AGC CAT ACA TCG TCT G
<210>25
<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>25
CGC CCG TCG GGC CCC AG
<210>26
<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>26
TCC AGG TAG GCT CTG TC
<160>24
<210>27
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>27
AAC TGG TTA TAC CCG C
<210>28
<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>28
CCA CGC ACG TGC CCT CC
<210>29
<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>29
CAC GCA CAG GCC CTC CA
<210>30
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>30
CTC CAG GTG TCT GCG G
<210>31
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>31
CGC TCC AGC TTG TCC T
<210>32
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>32
CGC TCC AGC GTG TCC T
<210>33
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>33
ATG TAA TCT TTG CCG T
<210>34
<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>34
GCG TCC TGG TGG TAC CC
<210>35
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>35
TCG TAG GCT AAC TGG T
<210>36
<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>36
GCG GAG CGC GGT GCG CA
<210>37
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>37
CAT CCT CTG CCA AGT G
<210>38
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>38
TCC TCT GGA TGG TGT G
<210>39
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>39
GTA CAT GCT CTG GAG G
<210>40
<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>40
TTG GTC TTG GAG ATC TG
<210>41
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>41
CCC ACT GCA ATG AAG C
<210>42
<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>42
TTG GTC TTG CAG ATC TG
<210>43
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>43
GTC ATA CCC GCG GAG G
<210>44
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>44
GAA GCG CGA TCC GCA GGT
<210>45
<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>45
AGG CGT ACT GGT TAT GC
<210>46
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>46
GTA GGC GGA CTG GTC A
<210>47
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>47
AGC CGT ACA TCC TCT G
<210>48
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>48
GTG TCC GCC GCG GTC C
<210>49
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>49
TGC GGA GCG ACT CCA CG
<210>50
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>50
TGA GCC GCG GTG TCC G
<210>51
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>51
TAG GCT CTC CAC TGC T
<210>52
<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>52
GTT GGT CTT GTA GAT CT
<210>53
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>53
GCC CGT CCA CGC ACA G
<210>54
<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>54
CGC AGG TTC CGC AGG CT
<210>55
<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>55
CTG TGT GTT CCG GTC CC
<210>56
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>56
GCC CAC TGC GAT GAA G
<210>57
<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>57
ACT CCA CGC ACT CGC CC
<210>58
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>58
CTG GAG GGT GTG AGA C
<210>59
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>59
TGC GCT GGG TGA TCT G
<210>60
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>60
CTC TCG GTA AGT CTG T
<210>61
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>61
GTA GTA GCG GAG CAG GGT
<210>62
<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>62
GCT CCA GCG TCT CCT TC
<210>63
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作芯片雜交反應探針。
<400>63
GAA CTG GGT GTC GTC C
<210>64
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作PCR引物。
<400>64
CGG AGG AGC GAG GGG ACC GCT
<210>65
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作PCR引物。
<400>65
CTC CTC GCT CTG GTT GTA GT
<210>66
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作PCR引物。
<400>66
ATG GCC GGG GCC AGG GTC TC
<210>67
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)特定核苷酸序列設計，以用作PCR引物。
<400>67
TCG GCC ATC CCC GGC GAC CT
權(quán)利要求
1、一種基因分型檢測試劑盒，采用DNA微陣列芯片以及雙溫度雜交，對HLA-B基因進行檢測和分型，其特征在于所說的試劑盒將兩組寡核苷酸探針，點制在兩張玻片上，制成一對高密度DNA微陣列玻片，配以4種引物以及其它組分。
2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的DNA微陣列芯片，其特征還在于兩張DNA微陣列玻片的兩個雜交區(qū)，采用兩種不同的雜交溫度。
3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的DNA微陣列芯片，其特征還在于DNA微陣列在每張玻片上的矩陣都為2列8行。
4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的基因分型檢測試劑盒，其特征還在于所使用擴增HLA-B第二、三外顯子的4種引物，分別為
Pb1 CGGAGGAGCGAGGGGACCGC
Pb2 CTCCTCGCTCTGGTTGTAGT
Pb3 ATGGCCGGGGCCAGGGTCTC
Pb4 TCGGCCATCCCCGGCGACCT。
5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的基因分型檢測試劑盒，其特征還在于所使用的63種寡核苷酸探針分別為
B1-1 CCTTCATGTTCCGTGTC
B2-1 CTTGTACTTCTGTGTCT
B3-1 CCGGGACATGGCGGTG
B4-1 GCGGCTCCTTCCTCGGA
B5-1 GCCCACGGTGATGAAG
B6-1 CGGGGCGCCATCCTCGGA
B7-1 CGCCCGGGGCTCCGTCCT
B8-1 TTCTCTATCCACGGCGCC
B9-1 GTGTCTCCCGGTCCCAA
B10-1 GTGCCTGGGCCTTGTAG
B11-1 GTGCCTTGGCCTTGCAG
B12-1 CGGGACACGGAGGTGT
B13-1 GGCGGTGTCGAAATAC
B14-1 CTCTCGGTCAGTCTGT
B15-1 ACGAACTGCGTGTCGT
B16-1 CTGGGTGCCGTCCAC
B17-1 TGGTCTTGAAGATCTGT
B18-1 CCCAATATTCCGGCCC
B19-1 CTGCTCCACCCACGGC
B20-1 CGGGACATAGCGGTGT
B21-1 TTGCGCTGGGAGATCTG
B22-1 CAGCCATACATATTCTG
B23-1 GCCATACATCACCTGGA
B24-1 AGCCATACATCGTCTG
B25-1 CGCCCGTCGGGCCCCAG
B26-1 TCCAGGTAGGCTCTGTC
B27-1 AACTGGTTATACCCGC
B28-1 CCACGCACGTGCCCTCC
B29-1 CACGCACAGGCCCTCCA
B30-1 CTCCAGGTGTCTGCGG
B31-1 CGCTCCAGCTTGTCCT
B32-1 CGCTCCAGCGTGTCCT
B33-1 ATGTAATCTTTGCCGT
B34-1 GCGTCCTGGTGGTACCC
B35-1 TCGTAGGCTAACTGGT
B36-1 GCGGAGCGCGGTGCGCA
B37-1 CATCCTCTGCCAAGTG
B38-1 TCCTCTGGATGGTGTG
B39-1 GTACATGCTCTGGAGG
B40-1 TTGGTCTTGGAGATCTG
B41-1 CCCACTGCAATGAAGC
B42-1 TTGGTCTTGCAGATCTG
B43-1 GTCATACCCGCGGAGG
B44-1 GAAGCGCGATCCGCAGGT
B45-1 AGGCGTACTGGTTATGC
B1-2 GTAGGCGGACTGGTCA
B2-2 AGCCGTACATCCTCTG
B3-2 GTGTCCGCCGCGGTCC
B4-2 TGCGGAGCGACTCCACG
B5-2 TGAGCCGCGGTGTCCG
B6-2 TAGGCTCTCCACTGCT
B7-2 GTTGGTCTTGTAGATCT
B8-2 GCCCGTCCACGCACAG
B9-2 CGCAGGTTCCGCAGGCT
B10-2 CTGTGTGTTCCGGTCCC
B11-2 GCCCACTGCGATGAAG
B12-2 ACTCCACGCACTCGCCC
B13-2 CTGGAGGGTGTGAGAC
B14-2 TGCGCTGGGTGATCTG
B15-2 CTCTCGGTAAGTCTGT
B16-2 GTAGTAGCGGAGCAGGGT
B17-2 GCTCCAGCGTCTCCTTC
B18-2 GAACTGGGTGTCGTCC 。
6、根據(jù)權(quán)利要求1所述的基因分型檢測試劑盒，其特征還在于用于臨床移植配型和造血干細胞庫建立HLA-B基因分型檢測。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種臨床檢測用途的基因檢測試劑盒，尤其是涉及HLA-B基因分型用微陣列芯片的制備及其用法。采用DNA微陣列芯片技術和雙溫度雜交方法，該試劑盒能夠高通量、高效率、高特異性對HLA-B基因進行分型。
文檔編號C12Q1/68GK101353692SQ20071002930
公開日2009年1月28日 申請日期2007年7月24日 優(yōu)先權(quán)日2007年7月24日
發(fā)明者胡守旺, 帆 張, 順 胥, 敏 王, 明 李, 鋼 程, 何蘊韶 申請人:中山大學達安基因股份有限公司