專利名稱：高效防治香蕉枯萎病的枯草芽孢桿菌203及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物保護(hù)領(lǐng)域，尤其涉及一種防治香蕉枯萎病的內(nèi) 生生防菌株，具體地說涉及一種高效防治香蕉枯萎病的枯草芽孢桿 菌203及應(yīng)用。
背景技術(shù)：
香蕉枯萎病是由尖孢鐮刀菌古巴專化型(Fusarium oxysporum f. sp. cubense)侵染引起的一種毀滅性病害，是香蕉生產(chǎn)的毀滅性土 傳病害。病原菌從受傷的根莖侵入，通過維管束向假莖及葉部蔓延， 堵塞木質(zhì)部導(dǎo)管，直至植株枯萎死亡。香蕉枯萎病菌是土壤習(xí)居菌， 其厚垣孢子能夠在土壤中存活8 10年。得以恢復(fù)生產(chǎn)。香蕉枯萎 病在在珠江三角洲香蕉產(chǎn)區(qū)的多個(gè)縣市均有分布，近年有迅速發(fā)展 的趨勢。該病病園病株率一般約為10% 40%，嚴(yán)重的達(dá)90%以上， 以致蕉園丟荒。
目前對(duì)該病的防治尚無理想藥劑和抗病品種， 一些栽培管理措 施只能起到局部的控制作用，尋找一種經(jīng)濟(jì)、安全、有效的防治方 法是當(dāng)務(wù)之急，近年來，根際有益細(xì)菌的研究為香蕉枯萎病的生物 防治提供了新途徑，許多根際有益細(xì)菌也能夠誘導(dǎo)植物產(chǎn)生系統(tǒng)抗 性，使植物獲得廣譜抗病能力。根際有益細(xì)菌誘導(dǎo)植物產(chǎn)生的防護(hù) 作用安全而有效，在植物病害生物防治中具有重要的應(yīng)用價(jià)值。
從香蕉植株內(nèi)分離篩選獲得對(duì)香蕉枯萎病菌具有拮抗作用的生 防細(xì)菌菌株，對(duì)香蕉枯萎病的防治具有重要意義，但目前相關(guān)技術(shù)
仍舊很薄弱甚至空白。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的空白，提供一種高效防治香蕉枯
萎病的枯草芽孢桿菌203，是一種從香蕉植株內(nèi)分離篩選獲得對(duì)香蕉 枯萎病菌具有拮抗作用的生防細(xì)菌菌株，能夠有效抑制香蕉枯萎病 菌的生長，對(duì)香蕉枯萎病的防治具有重要意義。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供了所述高效防治香蕉枯萎病的枯草 芽孢桿菌203的制備方法。
本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供了所述高效防治香蕉枯萎病的枯草 芽孢桿菌203在防止香蕉病災(zāi)害方面的多種應(yīng)用。
本發(fā)明的技術(shù)方案是提供一種高效防治香蕉枯萎病的枯草芽孢 桿菌203，所述枯草芽孢桿菌203, ^gci'〃M犯6"Zs 203，保藏號(hào) 為CCTCCM207094。
本發(fā)明同時(shí)提供了所述高效防治香蕉枯萎病的枯草芽孢桿菌203 的制備方法，經(jīng)平板對(duì)峙篩選獲得。
本發(fā)明還提供了所述的高效防治香蕉枯萎病的枯草芽孢桿菌203 的應(yīng)用，其一是對(duì)香蕉枯萎病菌4號(hào)小種的平板拮抗作用。
其二是防止香蕉植株主根部及維管束褐化或腐爛方面的應(yīng)用。
其三是對(duì)番茄枯萎病菌、玉米彎孢葉斑病菌、膠孢炭疽病菌、棉 花枯萎病菌、棉花黃萎病菌或西瓜枯萎病菌的拮抗作用。
本發(fā)明的有益效果是 (1)枯草芽孢桿菌203為植物根際有益細(xì)菌，對(duì)香蕉枯萎病菌
抑制作用強(qiáng)，對(duì)多種病原真菌具有拮抗作用，具有拮抗細(xì)菌在植物病 害生物防治中所起到的非常重要的作用，例如種類和數(shù)量眾多，在 植物根際根內(nèi)、根際大量存在；對(duì)病原菌的作用方式多種多樣；繁 殖速度快等優(yōu)點(diǎn)，本發(fā)明通過大量實(shí)驗(yàn)證明枯草芽孢桿菌203菌株 能夠有效抑制香蕉枯萎病菌的生長，抑菌譜廣，對(duì)棉花枯萎病菌、棉 花黃萎病菌、西瓜枯萎病菌、番茄枯萎病菌、彎孢葉斑病菌、香蕉炭 疽病菌等多種病原真菌都有拮抗作用；環(huán)境安全性好，具有良好的開 發(fā)應(yīng)用前景，尤其是對(duì)香蕉枯萎病的防治具有重要意義。
(2)種菌株培養(yǎng)條件簡單、容易保存，易于工業(yè)化生產(chǎn)，具有 良好的開發(fā)應(yīng)用前景。


圖1枯草芽孢桿菌203對(duì)F0C4菌絲的抑制作用 圖2接種30天后香蕉苗維管束癥狀 圖3枯草芽孢桿菌203對(duì)多種病原菌菌絲的抑制作用
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例及附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述。 實(shí)施例1枯草芽孢桿菌203對(duì)香蕉枯萎病菌4號(hào)小種FOC4的平板 拮抗作用實(shí)驗(yàn)
枯草芽孢桿菌203經(jīng)平板對(duì)峙篩選獲得，所述篩選方法屬于本領(lǐng) 域常規(guī)試驗(yàn)方法。在馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基PDA平板中央接入直徑為 5mm的香蕉枯萎病菌4號(hào)小種FOC4菌絲塊，隨后在等距離FOC4 菌絲塊的三角上放入直徑為5mm的滅菌濾紙片，每片濾紙片上接入
枯草芽孢桿菌203培養(yǎng)液IOPL，以不接地衣芽孢菌202培養(yǎng)液的平 板為對(duì)照，三次重復(fù)，25 28。C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5 7天，測定抑菌圈 直徑，由附圖1可見枯草芽孢桿菌203顯著抑制香蕉枯萎病菌的生長。 實(shí)施例2枯草芽孢桿菌203防止香蕉植株主根部及維管束褐化或腐 爛實(shí)驗(yàn)
選擇株高15cm左右的巴西香蕉幼苗，進(jìn)行3種不同處理(1) 清水健株對(duì)照香蕉苗根部浸泡在無菌水中后直接移栽在營養(yǎng)缽中生 長；(2)將香蕉苗根部浸泡在枯草芽孢桿菌203培養(yǎng)液中30min后， 移栽至營養(yǎng)缽中，再將20mL的FOC4孢子懸浮液灌根接入營養(yǎng)缽?fù)?壤中；(3)發(fā)病對(duì)照香蕉苗根部灌根接種20mLFOC4的孢子懸浮 液，不接種枯草芽孢桿菌203培養(yǎng)液。以上處理，每處理組20株。 之后26。C培養(yǎng)，分別于接種后IO、 20天、30天調(diào)查發(fā)病率和病情指 數(shù)，三次重復(fù)。與對(duì)照相比，枯草芽孢桿菌203能有效地降低香蕉枯 萎病的發(fā)生程度，接種30天后效果最明顯，根部及維管束褐化、腐 爛程度明顯減輕，見附圖2，其中A:清水接種對(duì)照，無褐變、無腐 爛現(xiàn)象；B、 C:同時(shí)接種枯草芽孢桿菌203接種液和FOC4孢子懸浮 液，輕微褐變、無腐爛；F、 G、 H、 I:只接種F0C4孢子懸浮液，嚴(yán) 重褐變、腐爛。
實(shí)施例3枯草芽孢桿菌203對(duì)多種病原菌的拮抗作用
采用平板對(duì)峙法，測試枯草芽孢桿菌203對(duì)番茄枯萎病菌、玉米 彎孢葉斑病菌、膠孢炭疽病菌、棉花枯萎病菌、棉花黃萎病菌、小麥 赤霉病菌、西瓜枯萎病菌等7種病原菌的拮抗效果，在PDA平板中央
接入直徑為5mm的靶標(biāo)菌絲塊，隨后在等距離F0C4菌絲塊的三角上 放入直徑為5mm的滅菌濾紙片，每片濾紙片上接入枯草芽孢桿菌203 培養(yǎng)液IO叱，以不接地衣芽孢菌202培養(yǎng)液的平板為對(duì)照，28'C培 養(yǎng)箱中培養(yǎng)5 7天，測定抑菌圈直徑?？莶菅挎邨U菌203抑菌譜較 廣，對(duì)棉花枯萎病菌等多種病原真菌具有拮抗作用，見表l以及附圖 3。從附圖3圖A中可看到枯草芽孢桿菌203對(duì)番琉枯萎病菌的抑制 作用；B中可觀察到枯草芽孢桿菌203對(duì)炭疽病菌的抑制作用；C中 可觀察到枯草芽孢桿菌203對(duì)香蕉膠胞炭疽菌的抑制作用；D中可觀 察到枯草芽孢桿菌203對(duì)棉花枯萎病的抑制作用。
表1枯草芽孢桿菌203對(duì)幾種真菌的抑制作用
病原菌抑制半徑
棉花枯萎病++
棉花黃萎病+++
西瓜枯萎病++
番茄枯萎病++
彎孢葉斑病++
香蕉炭疽病+++
一無抑制作用
+:抑菌圈直徑l 4mm
++:抑菌圈直徑4 8mm
+++:抑菌圈直徑〉8mm
權(quán)利要求
1、一種高效防治香蕉枯萎病的枯草芽孢桿菌203，其特征在于所述枯草芽孢桿菌203，Bacillus subtils 203，保藏號(hào)為CCTCCM207094。
2、 權(quán)利要求1所述高效防治香蕉枯萎病的枯草芽孢桿菌203的 制備方法，其特征在于所述枯草芽孢桿菌203經(jīng)平板對(duì)峙篩選獲得。
3、 權(quán)利要求1所述的高效防治香蕉枯萎病的枯草芽孢桿菌203 的應(yīng)用，其特征在于對(duì)香蕉枯萎病菌4號(hào)小種的平板拮抗作用。
4、 權(quán)利要求1所述的高效防治香蕉枯萎病的枯草芽孢桿菌203 的應(yīng)用，其特征在于防止香蕉植株主根部及維管束褐化或腐爛方面的 應(yīng)用。
5、 權(quán)利要求1所述的高效防治香蕉枯萎病的枯草芽孢桿菌203 的應(yīng)用，其特征在于對(duì)番茄枯萎病菌、玉米彎孢葉斑病菌、膠孢炭疽 病菌、棉花枯萎病菌、棉花黃萎病菌或西瓜枯萎病菌的拮抗作用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種高效防治香蕉枯萎病的枯草芽孢桿菌203，所述枯草芽孢桿菌203，Bacillus subtils 203，保藏號(hào)為CCTCCM207094；同時(shí)公開了其制備方法以及應(yīng)用，所述枯草芽孢桿菌203菌株經(jīng)平板對(duì)峙、盆栽試驗(yàn)篩選獲得，能夠有效抑制香蕉枯萎病菌的生長，抑菌譜廣，對(duì)棉花枯萎病菌、棉花黃萎病菌、西瓜枯萎病菌、番茄枯萎病菌、彎孢葉斑病菌或香蕉炭疽病菌等多種病原真菌都有拮抗作用，環(huán)境安全性好，具有良好的開發(fā)應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)C12N1/20GK101186887SQ20071003205
公開日2008年5月28日 申請(qǐng)日期2007年12月4日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月4日
發(fā)明者孫正祥, 王振中, 紀(jì)春艷 申請(qǐng)人:華南農(nóng)業(yè)大學(xué)