專利名稱：：重組人源干擾素誘導(dǎo)蛋白4桿狀病毒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于生物
技術(shù)領(lǐng)域：
，更特別的，本發(fā)明涉及一種用于表達(dá)IFIT4蛋白的重組病毒，以及采用所述重組病毒表達(dá)IFIT4蛋白的方法。
背景技術(shù)：
：系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是一種涉及許多系統(tǒng)和臟器的全身結(jié)締組織炎癥性疾病，可累及皮膚、漿膜、關(guān)節(jié)、腎及中樞神經(jīng)系統(tǒng)等，并以自身免疫為特征，患者體內(nèi)存在多種自身抗體，不僅影響體液免疫，亦影響細(xì)胞免疫，補(bǔ)體系統(tǒng)亦有變化。近年來，由于實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)的發(fā)展，臨床診斷水平的提高，本病的發(fā)病數(shù)增多，僅次于兒童類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，居小兒全身性結(jié)締組織疾病中的第2位。近來多家實(shí)驗(yàn)室利用基因芯片對SLE和健康志愿者外周血白細(xì)胞基因表達(dá)譜進(jìn)行對比研究，最重要的發(fā)現(xiàn)就是一組IFN誘導(dǎo)基因在SLE中高表達(dá)。干擾素誘導(dǎo)蛋白4(IFIT4蛋白)是IFN的下游調(diào)控蛋白，有實(shí)驗(yàn)證明IFIT4在SLE病人及在活動(dòng)期SLE患者中高表達(dá)，其水平明顯高于健康人，表明IFIT4可能是SLE非常重要的新的易感基因。初步試驗(yàn)表明，在SLE病人中，IFIT4的mRNA水平與ANA、Anti-dsDNA、Anti-Sm抗體滴度呈正相關(guān)，ANA、Anti-dsDNA、Anti-Sm抗體滴度是目前臨床診斷的指標(biāo)，但是由于SLE的復(fù)雜性，以上的診斷指標(biāo)不能夠同時(shí)適用于一個(gè)個(gè)體，通常只能為臨床醫(yī)生對病人發(fā)病情況以輔助判斷。IFIT4與以上提到的診斷指標(biāo)有一定的相關(guān)度，可能成為一個(gè)新的指標(biāo)，從而用于更有效地診斷SLE。為了對IFIT4進(jìn)行研究以及研制出可檢測體內(nèi)IFIT4含量的抗體，需要大量地制備接近于天然IFIT4的蛋白。然而目前本領(lǐng)域還沒有任何利用基因工程手段表達(dá)該蛋白的報(bào)道。通常制備抗原所采用的系統(tǒng)是原核表達(dá)系統(tǒng)，原核蛋白表達(dá)系統(tǒng)具備外源基因的高通量表達(dá)、易于擴(kuò)大再生產(chǎn)、低成本、菌體繁殖迅速、無轉(zhuǎn)錄后修飾和表達(dá)蛋白可被標(biāo)記等優(yōu)點(diǎn)，然而原核系統(tǒng)表達(dá)出的蛋白往往缺乏較好的空間構(gòu)象和基本的糖基化修飾，與天然蛋白相差甚遠(yuǎn)，這導(dǎo)致在某些情況下用原核系統(tǒng)表達(dá)的蛋白免疫動(dòng)物所制備的單抗識別天然表位能力低，而不能用來開發(fā)診斷試劑盒。并且還發(fā)現(xiàn)，采用大腸桿菌(如BL21)原核系統(tǒng)表達(dá)IFIT4無法實(shí)現(xiàn)，IFIT4在表達(dá)過程中會(huì)被降解。因此，本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)一種可方便快捷地表達(dá)接近于天然IFIT4的重組IFIT4的方法。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種重組的IFIT4桿狀病毒，其感染昆蟲細(xì)胞后可表達(dá)出重組的IFIT4蛋白。本發(fā)明的另一目的在于提供可方便快捷地表達(dá)接近于天然干擾素誘導(dǎo)蛋白4的重組干擾素誘導(dǎo)蛋白4(IFIT4蛋白)的方法。在本發(fā)明的第一方面，提供一種重組的干擾素誘導(dǎo)蛋白4桿狀病毒，所述的桿狀病毒的基因組中含有一重組表達(dá)盒，所述的重組表達(dá)盒含有干擾素誘導(dǎo)蛋白4的編碼序列；并且，所述的桿狀病毒可感染昆蟲細(xì)胞，從而表達(dá)干擾素誘導(dǎo)蛋白4。在本發(fā)明的另一優(yōu)選例中，所述的重組表達(dá)盒從5'至3'依次含有以下元件多角蛋白啟動(dòng)子，干擾素誘導(dǎo)蛋白4的編碼序列，和SV40PolyA轉(zhuǎn)錄終止序列。在本發(fā)明的另一優(yōu)選例中，在多角蛋白啟動(dòng)子與干擾素誘導(dǎo)蛋白4的編碼序列之間還含有蛋白純化標(biāo)記。更優(yōu)選的，所述的純化標(biāo)記為6XHisTag。在本發(fā)明的另一優(yōu)選例中，所述的桿狀病毒的基因組含有BacmidDNA，所述BacmidDNA中含有所述重組表達(dá)盒，所述的重組表達(dá)盒從5'至3'依次具有以下元件多角蛋白啟動(dòng)子，干擾素誘導(dǎo)蛋白4的編碼序列，和SV40PolyA轉(zhuǎn)錄終止序列。更優(yōu)選的，在多角蛋白啟動(dòng)子與干擾素誘導(dǎo)蛋白4的編碼序列之間還含有蛋白純化標(biāo)記。更優(yōu)選的，所述的純化標(biāo)記為6XHisTag。在本發(fā)明的另一優(yōu)選例中，所述桿狀病毒通過以下步驟制備(A)將干擾素誘導(dǎo)蛋白4的編碼序列克隆入桿粒中，獲得重組的桿粒；(B)將(A)獲得的重組的桿粒轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞，培養(yǎng)轉(zhuǎn)染后的昆蟲細(xì)胞；和(C)收獲重組的干擾素誘導(dǎo)蛋白4桿狀病毒。在本發(fā)明的第二方面，提供一種制備所述的桿狀病毒的方法，所述方法包括以下步驟(A)將干擾素誘導(dǎo)蛋白4的編碼序列克隆入桿粒中，獲得重組的桿粒；(B)將(A)獲得的重組的桿粒轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞，培養(yǎng)轉(zhuǎn)染后的昆蟲細(xì)胞；和(C)收獲重組的干擾素誘導(dǎo)蛋白4桿狀病毒。在本發(fā)明的另一優(yōu)選例中，所述的桿粒為Bacmid桿粒。更優(yōu)選的，所述的Bacmid來源于大腸桿菌DH10Bac。在本發(fā)明的另一優(yōu)選例中，在步驟(A)中，干擾素誘導(dǎo)蛋白4的編碼序列及其兩端重組序列，在轉(zhuǎn)座酶的作用下重組入Bacmid桿粒中mini-attTn7位點(diǎn)。更優(yōu)選的，所述的轉(zhuǎn)座酶由大腸桿菌DH10Bac中攜帶的輔助質(zhì)粒(helper)所表達(dá)。在本發(fā)明的另一優(yōu)選例中，在步驟(A)中，所述重組的桿粒通過以下步驟獲得(a)將干擾素誘導(dǎo)蛋白4的編碼序列插入穿梭載體(優(yōu)選的為pFASTBac-HTb載體)的多克隆位點(diǎn)中，獲得插入了干擾素誘導(dǎo)蛋白4編碼序列的重組載體；(b)將(a)獲得的重組載體轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞DH10Bac，獲得轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞，所述轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞中含有重組桿粒，所述重組桿粒攜帶干擾素誘導(dǎo)蛋白4編碼序列；和(c)從所述轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞中提取重組桿粒。在本發(fā)明的另一優(yōu)選例中，所述的干擾素誘導(dǎo)蛋白4具有SEQIDNO:2中第29-516位所示的氨基酸序列。在本發(fā)明的另一優(yōu)選例中，所述的干擾素誘導(dǎo)蛋白4的編碼序列如SEQIDNO:1第85-1548位所示。在本發(fā)明的另一優(yōu)選例中，所述的干擾素誘導(dǎo)蛋白4的編碼序列的兩端還含有多克隆位點(diǎn)的編碼序列和/或蛋白純化標(biāo)記位點(diǎn)(如6XHistag)的編碼序列。在本發(fā)明的第三方面，提供所述的干擾素誘導(dǎo)蛋白4桿狀病毒的用途，用于制備干擾素誘導(dǎo)蛋白4。在本發(fā)明的第四方面，提供一種制備干擾素誘導(dǎo)蛋白4(IFIT4蛋白)的方法，包括以下步驟(1)將所述的干擾素誘導(dǎo)蛋白4桿狀病毒感染昆蟲細(xì)胞，培養(yǎng)感染后的昆蟲細(xì)胞，使之表達(dá)干擾素誘導(dǎo)蛋白4;和(2)分離獲得干擾素誘導(dǎo)蛋白4。在本發(fā)明的另一優(yōu)選例中，所述的干擾素誘導(dǎo)蛋白4是人源的干擾素誘導(dǎo)蛋白4。在本發(fā)明的另一優(yōu)選例中，在步驟(1)中，進(jìn)行感染時(shí)，干擾素誘導(dǎo)蛋白4桿狀病毒數(shù)量與昆蟲細(xì)胞數(shù)量的比例為(1-5)pfu:1cell(也即感染復(fù)數(shù)(MOI)=1-5)。在本發(fā)明的另一優(yōu)選例中，干擾素誘導(dǎo)蛋白4桿狀病毒數(shù)量與昆蟲細(xì)胞數(shù)量的比例為(3-4)pfu:1cell(也即感染復(fù)數(shù)(MOI)=3-4)。在本發(fā)明的另一優(yōu)選例中，在步驟(1)中，培養(yǎng)感染后的昆蟲細(xì)胞4土2天;優(yōu)選的，培養(yǎng)感染后的昆蟲細(xì)胞4土1天；更優(yōu)選的，培養(yǎng)感染后的昆蟲細(xì)胞4士0.5天；最優(yōu)選的，培養(yǎng)4天。在本發(fā)明的另一優(yōu)選例中，在步驟(1)中，感染后的昆蟲細(xì)胞的培養(yǎng)溫度為25-3(TC;優(yōu)選的，所述的培養(yǎng)溫度為26-28"。最優(yōu)選的，所述的培養(yǎng)溫度為27°C。本發(fā)明的其它方面由于本文的公開內(nèi)容，對本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯而易見的。圖1顯示了人源IFIT4的核酸序列在NCBI(hUp:〃www.ncbi.nlm.nih.gov/)網(wǎng)站上BLAST同源性最高序列比較結(jié)果。其中，Query表示pFASTBac-HTB-IFIT4編碼人源IFIT4基因的核酸序列；Sbjct表示人源IFIT4基因的核酸序列，ref|NM—001031683.1|。圖2顯示了人源IFIT4的氨基酸序列在NCBI(http:〃www.ncbi.nlm.nih.gov/)網(wǎng)站上BLAST同源性最高序列比較結(jié)果。Query表示pFASTBac-HTB-IFIT4編碼人源IFIT4基因的蛋白序列；Sbjct表示人源IFIT4基因的全蛋白序列，AAX43715。圖3顯示了獲得BAC-IFIT4桿狀病毒及IFIT4蛋白表達(dá)的流程示意圖。圖4顯示了目的基因IFIT4的PCR擴(kuò)增驗(yàn)證。其中，泳道l:DL2000marker;泳道2:陰性對照；泳道3:目的基因的擴(kuò)增條帶(其條帶大小1.5KB)。圖5顯示了目的基因IFIT4的雙酶切驗(yàn)證。其中，泳道l:DL2000marker;泳道2:質(zhì)粒的酶切后驗(yàn)證(其中上面的條帶為pFASTBac-HTB，下面的條帶為目的基因IFIT4)。圖6顯示了各陽性克隆中獲得的病毒桿粒的驗(yàn)證。其中，泳道l:克隆l;泳道2:克隆2;泳道3:克隆3;泳道4:克隆4。圖7顯示了各陽性克隆中獲得的病毒桿粒的PCR驗(yàn)證。其中，泳道l:MD104marker;泳道2:陰性對照；泳道3:克隆l;泳道4:克隆2;泳道5:克隆3;泳道6:克隆4;泳道7:空白對照。圖8顯示了在M0I-4時(shí)，分別在培養(yǎng)細(xì)胞后2、3、4、5天收取細(xì)胞，檢測IFIT4蛋白表達(dá)情況的結(jié)果。其中，泳道l:未感染昆蟲細(xì)胞，泳道2:感染24小時(shí)，泳道3:感染48小時(shí)，泳道4:感染72小時(shí)，泳道5:感染96小時(shí)，泳道6:感染120小時(shí)，泳道7:陽性對照。圖9顯示了當(dāng)M0I二4且表達(dá)時(shí)間為4天時(shí)，純化后的蛋白的SDS-PAGE結(jié)果(A)和Western印跡結(jié)果(B)。其中，泳道1:未感染細(xì)胞；泳道2:感染細(xì)胞；泳道3:蛋白低分子量marker;泳道4:純化后樣品l，泳道5:純化后樣品2。圖10顯示了顯微鏡觀察MOI二4(A)禾卩M0I二9(B)時(shí)，昆蟲細(xì)胞的狀態(tài)圖。具體實(shí)施例方式本發(fā)明人經(jīng)過廣泛而深入的研究，意外地發(fā)現(xiàn)采用桿狀病毒感染昆蟲細(xì)胞來表達(dá)干擾素誘導(dǎo)蛋白4(IFIT4蛋白)，可獲得具有比較好的糖基化修飾和空間構(gòu)型的蛋白(也即接近于天然的IFIT4蛋白)，且其能夠被IFIT4單克隆抗體很好的識別。本發(fā)明人的新發(fā)現(xiàn)解決了現(xiàn)有技術(shù)中難以表達(dá)IFIT4蛋白的技術(shù)難題。在此基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。本發(fā)明人在研究中發(fā)現(xiàn)，采用大腸桿菌(如BL21)原核系統(tǒng)表達(dá)IFIT4蛋白是無法實(shí)現(xiàn)的，IFIT4蛋白在表達(dá)過程中會(huì)被降解；采用真核表達(dá)系統(tǒng)成本高且表達(dá)困難；采用酵母表達(dá)系統(tǒng)可形成過多的糖基化位點(diǎn)，從而使得蛋白的構(gòu)象發(fā)生改變。而采用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)來表達(dá)IFIT4蛋白表達(dá)量高，表達(dá)穩(wěn)定，并且蛋白結(jié)構(gòu)接近天然蛋白。本發(fā)明還提供一種人源IFIT4桿狀病毒，所述的病毒可以穩(wěn)定傳代，零下7(TC可以長期保存并具有高的滴度。利用該病毒感染昆蟲細(xì)胞后4-5天可以得到高于4rag/L的IFIT4蛋白，可見IFIT4蛋白的表達(dá)量很高。干擾素誘導(dǎo)蛋白4干擾素誘導(dǎo)蛋白4(IFIT4蛋白)是一種IFN的下游調(diào)控蛋白。最新發(fā)現(xiàn)IFIT4在系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者及在活動(dòng)期SLE患者中高表達(dá)，其水平明顯高于健康人，因此其是與系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關(guān)的蛋白。作為本發(fā)明的優(yōu)選方式，所述的IFIT4蛋白是人源的IFIT4蛋白。作為本發(fā)明的優(yōu)選方式，所述的IFIT4蛋白的氨基酸序列可以與GenBank登錄號為AAX43715提供的序列或SEQIDNO:2中第29-516位所示的序列基本上相同。所述的IFIT4基因的核苷酸序列可以與GenBank登錄號為NM—001031683提供的序列或SEQIDNO:1中第85-1548位所示的序列基本上相同。干擾素誘導(dǎo)蛋白4桿狀病毒本發(fā)明提供了一種重組的IFIT4桿狀病毒(BAC-IFIT4)，其可用于感染昆蟲細(xì)胞而獲得重組IFIT4蛋白。所述的桿狀病毒的基因組中含有一重組表達(dá)盒，所述的重組表達(dá)盒含有IFIT4蛋白的編碼序列。作為本發(fā)明的優(yōu)選方式，所述的重組表達(dá)盒從5'至3'依次具有以下元件多角蛋白啟動(dòng)子、IFIT4蛋白的編碼序列、SV40PolyA轉(zhuǎn)錄終止序列。更優(yōu)選的，在多角蛋白啟動(dòng)子與干擾素誘導(dǎo)蛋白4的編碼序列之間還含有蛋白純化標(biāo)記。更優(yōu)選的，所述的純化標(biāo)記為6XHisTag。所述的多角蛋白啟動(dòng)子可以啟動(dòng)IFIT4蛋白的高效表達(dá)。優(yōu)選的，所述的IFIT4桿狀病毒是重組人源IFIT4蛋白桿狀病毒。作為本發(fā)明的優(yōu)選方式，所述桿狀病毒通過以下步驟制備(A)將IFIT4蛋白的編碼序列克隆入桿粒中，獲得重組的桿粒；(B)將(A)獲得的重組的桿粒轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞，培養(yǎng)轉(zhuǎn)染后的昆蟲細(xì)胞；和(C)收獲重組的IFIT4桿狀病毒。作為本發(fā)明的優(yōu)選方式，所述的桿粒是Bacmid桿粒。更優(yōu)選的，所述的Bacmid來源于大腸桿菌DH10Bac。作為本發(fā)明的優(yōu)選方式，所述的昆蟲細(xì)胞選自sf9昆蟲細(xì)胞，HighFive昆蟲細(xì)胞；最優(yōu)選的，所述昆蟲細(xì)胞是HighFive昆蟲細(xì)胞。作為本發(fā)明的優(yōu)選方式，將IFIT4蛋白的編碼序列及其兩端重組序列，在轉(zhuǎn)座酶的作用下重組入Bacmid桿粒的mini-attTn7位點(diǎn)。更優(yōu)選的，所述的轉(zhuǎn)座酶由大腸桿菌DH10Bac中攜帶的輔助質(zhì)粒(helper)所表達(dá)。作為本發(fā)明的優(yōu)選方式，在步驟(A)中，所述重組的桿粒通過以下步驟獲得(a)將干擾素誘導(dǎo)蛋白4的編碼序列插入穿梭載體(優(yōu)選pFASTBac-HTb載體)的多克隆位點(diǎn)中，獲得插入了IFIT4編碼序列的重組載體；(b)將(a)獲得的重組載體轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞DH10Bac，獲得轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞，所述轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞中含有重組桿粒，所述的重組桿粒攜帶IFIT4編碼序列；禾口(C)從所述轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞中提取重組桿粒。作為本發(fā)明的優(yōu)選方式，所述的IFIT4蛋白具有SEQIDNO:2中第29-516位所示的氨基酸序列。優(yōu)選的，所述的IFIT4蛋白的編碼序列如SEQIDNO:1第85-1548位所示。作為本發(fā)明的優(yōu)選方式，所述的IFIT4蛋白的編碼序列的兩端還含有多克隆位點(diǎn)的編碼序列和/或純化標(biāo)記位點(diǎn)(如Histag)的編碼序列。作為本發(fā)明的優(yōu)選方式，所述的人源IFIT4蛋白桿狀病毒是通過將目的基因人源IFIT4克隆進(jìn)入pFASTBac的多克隆位點(diǎn)內(nèi)，然后將pFASTBAC轉(zhuǎn)化DH10Bac基因工程菌，在轉(zhuǎn)座酶的作用下發(fā)生重組，獲得桿粒后轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞獲得的。將這種病毒感染昆蟲細(xì)胞后數(shù)小時(shí)，病毒即可進(jìn)入昆蟲細(xì)胞，開始復(fù)制病毒，并且轉(zhuǎn)錄病毒重組區(qū)域中蛋白翻譯區(qū)的核酸序列，在該段序列中含有人源IFIT4的核酸序列。感染約2-4天后表達(dá)具有病毒重組區(qū)域中蛋白翻譯區(qū)所對應(yīng)的氨基酸序列的蛋白，該段序列中含有人源IFIT4的氨基酸序列。作為本發(fā)明的優(yōu)選方式，所述的蛋白翻譯區(qū)的核酸序列是指編碼人源IFIT4融合蛋白的核酸序列，如SEQIDNO:1第85-1548位所示。更優(yōu)選的，所述的蛋白翻譯區(qū)核酸序列的末端還包含編碼純化標(biāo)簽(如Histag)以及酶切克隆位點(diǎn)的序列，從而便于后續(xù)的克隆以及純化，本領(lǐng)域人源均了解如何在待表達(dá)的外源基因的兩端設(shè)置純化標(biāo)記以及克隆位點(diǎn)。進(jìn)一步優(yōu)選的，所述的蛋白翻譯區(qū)核酸序列的N端還包含如SEQIDN0:1第1-84位所示的核苷酸序列。g卩，所述重組人源IFIT4蛋白桿狀病毒中的蛋白翻譯區(qū)核酸序列如SEQIDNO:1所示，共含有1548核苷酸(作為開放式閱讀框)。上述核苷酸序列可編碼如SEQIDNO:2所示氨基酸序列的蛋白，該蛋白的分子量約在59.6KD左右，其中SEQIDNO:2所示第29-516位為人源IFIT4基因的氨基酸序列，分子量約55.77KD。本發(fā)明的IFIT4桿狀病毒可以穩(wěn)定傳代，零下7(TC可以長期保存并保持高的滴度。此外，在所述的IFIT4桿狀病毒感染昆蟲細(xì)胞并表達(dá)IFIT4蛋白后，還可以通過例如密度梯度離心等方法從培養(yǎng)物中回收IFIT4重組桿狀病毒，用于下次感染。表達(dá)IFIT4蛋白的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明人提供了一種制備IFIT4蛋白的方法，該方法包括步驟(1)將所述的干擾素誘導(dǎo)蛋白4桿狀病毒感染昆蟲細(xì)胞，培養(yǎng)感染后的昆蟲細(xì)胞，使之表達(dá)干擾素誘導(dǎo)蛋白4;和(2)分離獲得干擾素誘導(dǎo)蛋白4。作為本發(fā)明的優(yōu)選方式，所述的昆蟲細(xì)胞選自sf9昆蟲細(xì)胞，HighFive昆蟲細(xì)胞；最優(yōu)選的，所述昆蟲細(xì)胞是HighFive昆蟲細(xì)胞。作為本發(fā)明的優(yōu)選方式，所述的IFIT4蛋白是人源IFIT4蛋白。更優(yōu)選的，所述的IFIT4蛋白具有SEQIDNO:2中第29-516位所示的氨基酸序列。所述的IFIT4蛋白的編碼序列如SEQIDNO:1第85-1548位所示。本發(fā)明人在實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)，在利用重組病毒感染昆蟲細(xì)胞的過程中，采用的重組病毒數(shù)量與昆蟲細(xì)胞數(shù)量與感染后昆蟲細(xì)胞的生長情況以及最終IFIT4蛋白的表達(dá)是密切相關(guān)的。當(dāng)重組病毒數(shù)量與昆蟲細(xì)胞數(shù)量之比大于6時(shí)，昆蟲細(xì)胞的生長狀態(tài)不佳，感染昆蟲細(xì)胞后適當(dāng)時(shí)間表達(dá)出的IFIT4蛋白顯著低于重組病毒數(shù)量與昆蟲細(xì)胞數(shù)量之比小于等于5時(shí)的情況，甚至在無法表達(dá)出IFIT4蛋白。因此，作為本發(fā)明的優(yōu)選方式，在前述步驟(3)中，進(jìn)行感染時(shí)，重組病毒數(shù)量與昆蟲細(xì)胞數(shù)量的比例為(1-5)pfu:lcell(也即感染復(fù)數(shù)(MOI)=1-5)。更優(yōu)選的，重組病毒數(shù)量與昆蟲細(xì)胞數(shù)量的比例為(3-4)pfu:1cell(也即感染復(fù)數(shù)(MOI)=3-4)。本發(fā)明人在實(shí)踐中還發(fā)現(xiàn)，在利用重組病毒感染昆蟲細(xì)胞的過程中，感染后的時(shí)間控制也是與最終蛋白的表達(dá)密切相關(guān)的。為了選擇合適的病毒感染時(shí)間，本發(fā)明人在M0I二4時(shí)，分別在培養(yǎng)細(xì)胞后2、3、4、5天收取細(xì)胞，檢測IFIT4蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)細(xì)胞后2-4天，蛋白的表達(dá)量逐漸增加，到第4天達(dá)到最大，第5天蛋白表達(dá)量又開始降低。因此，作為本發(fā)明的優(yōu)選方式，在前述步驟(3)中，培養(yǎng)感染后的昆蟲細(xì)胞2-6天后收獲IFIT4蛋白是合適的；優(yōu)選的，培養(yǎng)感染后的昆蟲細(xì)胞3-5天后收獲IFIT4蛋白；更優(yōu)選的，培養(yǎng)感染后的昆蟲細(xì)胞3.5-4.5天后收獲IFIT4蛋白；最優(yōu)選的，培養(yǎng)感染后的昆蟲細(xì)胞4天后收獲IFIT4蛋白。作為本發(fā)明的優(yōu)選方式，在步驟(3)中，感染后的昆蟲細(xì)胞的培養(yǎng)溫度為25-30°C。更優(yōu)選的，所述的培養(yǎng)溫度為26-28°C。最優(yōu)選的，所述的培養(yǎng)溫度為27。C。作為本發(fā)明的優(yōu)選方式，制備IFIT4蛋白的流程如圖3所示。作為本發(fā)明的實(shí)施方式，通過PCR將具有如SEQIDN0:1所示序列的IFIT4基因擴(kuò)增，用BaraHI和Xhol分別酶切PCR產(chǎn)物和pFASTBac-HTB，然后用T4DNA連接酶連接兩種酶切產(chǎn)物。鑒定陽性重組質(zhì)粒，測序后獲得重組質(zhì)粒pFASTBac-HTB-IFIT4。將pFASTBac-HTB-IFIT4轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH10BAC，通過藍(lán)白斑篩選和PCR驗(yàn)證篩選到陽性克隆通過擴(kuò)增于Cellfectin混合后感染昆蟲細(xì)胞，出現(xiàn)明顯感染后收集上清，并按照以上方法進(jìn)行病毒的傳代，從而得到感染效力較高的病毒。將前述獲得的病毒感染昆蟲細(xì)胞，27'C培養(yǎng)，4天后即可表達(dá)出人源IFIT4蛋白，此蛋白經(jīng)過SDS-PAGE和Western-Blot進(jìn)一部鑒定是正確的人源IFIT4蛋白。IFIT4蛋白的純化作為本發(fā)明的一種優(yōu)選方式，所述的重組IFIT4蛋白的氨基端(或羧基端)還可含有一個(gè)多肽片段，作為蛋白純化標(biāo)記(標(biāo)簽)。任何合適的標(biāo)簽都可以用于本發(fā)明。例如，所述的標(biāo)簽可以是FLAG，HA，HA1，c-Myc，6-His，AU1，EE，T7，4A6，e，B，gE以及Tyl(見表l)。這些標(biāo)簽可用于對重組IFIT4蛋白進(jìn)行純化。表l可使用的標(biāo)簽系統(tǒng)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>對上述可用的標(biāo)簽的描述可參見如下文獻(xiàn)Prickett等，^orec力/n'^/es，7(6):580-584(1989);Xie等，濕。c"Wogy，139(11):4563-4567(1998);Nagelkerke等，We"，Ao潛A，j^:2694-2698(1997);Tolbert禾口Laraeh，/yVewroc/e瓜，^:113—119(1998);Chen禾口Katz，5j.orec力yj力wes，25(1):22—24(1998);Tseng禾卩Verma，Ge"e'巡287-288(1996);Rudiger等，^z-orec力"j》"es，23(1):96-97(1997);Olah等，Woc力柳.，里94-102(1994);Wang等，C，169(1):53-58(1996);Grose，U.S.PatentNo.5,710,248;Bastin等，#。丄腸c力e瓜尸arss"o/柳，H:235-239(1996)Invitrogen，Sigma,SantaCruzBiotech。在本發(fā)明的優(yōu)選方式中，在IFIT4蛋白的氨基端設(shè)置有組氨酸標(biāo)簽(6XHistag),以便于蛋白的純化。例如，可以用HIStrapHP5ml進(jìn)行純化，l小時(shí)內(nèi)即可完成。本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)在于(1)首次發(fā)現(xiàn)采用桿狀病毒感染昆蟲細(xì)胞來表達(dá)IFIT4蛋白，可獲得具有比較好的糖基化修飾和空間構(gòu)型的蛋白，其接近于天然的IFIT4蛋白，且其能夠被IFIT4單克隆抗體很好的識別。(2)對于利用桿狀病毒感染昆蟲細(xì)胞來表達(dá)IFIT4蛋白的工藝進(jìn)行了優(yōu)化，找到了適合于表達(dá)IFIT4蛋白的重組桿狀病毒與昆蟲細(xì)胞的較佳比例和較佳時(shí)間，從而可穩(wěn)定且大量地表達(dá)IFIT4蛋白。(3)本發(fā)明人的新發(fā)現(xiàn)解決了現(xiàn)有技術(shù)中難以表達(dá)IFIT4蛋白的技術(shù)難題，為研究IFIT4作為SLE診斷標(biāo)記的可行性奠定基礎(chǔ)。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件如Sambrook等人，分子克隆實(shí)驗(yàn)室指南(NewYork:ColdSpringHarborLaboratoryPress,1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則百分比和份數(shù)按重量計(jì)算。除非另行定義，文中所使用的所有專業(yè)與科學(xué)用語與本領(lǐng)域熟練人員所熟悉的意義相同。此外，任何與所記載內(nèi)容相似或均等的方法及材料皆可應(yīng)用于本發(fā)明中。文中所述的較佳實(shí)施方法與材料僅作示范之用。實(shí)施例1pFASTBac-HTB-IFIT4質(zhì)粒的構(gòu)建1.目的基因的PCR擴(kuò)增根據(jù)GenBank登錄號為NM—001031683的人源IFIT4基因設(shè)計(jì)以下引物正向cgcggMe^gcgatgagtgaggtcaccaag(SEQIDNO:3)，下劃線部分為BamHI酶切位點(diǎn)；反向ccg^g^gcggttattgctctgag(SEQIDNO:4)，下劃線部分為Xhol酶切位點(diǎn)。采用前述引物，通過常規(guī)PCR方法從人基因組cDNA文庫擴(kuò)增人源的IFIT4基因，獲得包含BamHI和Xhol酶切位點(diǎn)的PCR產(chǎn)物。2.BamHI和Xhol酶切PCR產(chǎn)物和pFASTBac-HTB載體用限制性內(nèi)切酶BaraHI和Xhol分別酶切前述獲得的PCR產(chǎn)物和pFASTBac-HTB載體(購自Invitrogen公司)。37。C作用2小時(shí)后，酶切產(chǎn)物用DNAFragmentPurificationKit(購自申能博采公司)回收。3.T4DNA連接酶連接將PCR回收產(chǎn)物和pFASTBac-HTB載體回收產(chǎn)物按約1:8的比例混合，采用T4DNA連接酶(Takara公司)16。C連接過夜。將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化進(jìn)入大腸桿菌DH5a,37。C過夜培養(yǎng)，提取質(zhì)粒，用BamHI和Xhol酶切鑒定。對陽性質(zhì)粒測序。測序結(jié)果到http:〃www.ncbi.nlm.nih.gov/網(wǎng)站上進(jìn)行BLAST搜索，搜索結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該序列與人源IFIT4同源性非常高，核酸序列的比對結(jié)果見圖1(99%，僅在接近尾部的部分有一個(gè)堿基的差異)，蛋白序列的比對結(jié)果見圖2。故可以判斷該核酸序列為人源IFIT4蛋白的編碼序列。也即獲得pFASTBac-HTB-IFIT4質(zhì)粒。挑取陽性克隆菌擴(kuò)增后抽提質(zhì)粒，以前述SEQIDNO:3和SEQIDNO:4為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳鑒定，結(jié)果見圖4，其中泳道3的1.5kb處的條帶即為IFIT4條帶。用BamHI和Xhol酶切pFASTBac-HTB-IFIT4質(zhì)粒，酶切產(chǎn)物進(jìn)行電泳鑒定，結(jié)果見圖5，其中箭頭所指處即為IFIT4條帶(pFASTBac-HTB-IFIT4質(zhì)粒在BaraHI和Xhol的酶切作用下變?yōu)閮蓷l帶，分子量為1.5KD左右的為目的基因IFIT4，另外一條較大的帶為切下目的基因的空載體)。實(shí)施例2BAC-IFIT4桿狀病毒的獲得1.桿粒的獲得將前述制備的pFASTBac-HTB-IFIT4質(zhì)粒轉(zhuǎn)化進(jìn)入DH10Bac基因工程菌(購自Invitrogen公司)中，通過藍(lán)白斑篩選(選擇白斑)到陽性克隆，37。C過夜培養(yǎng)，PCR驗(yàn)證，得到陽性桿粒菌克隆。從陽性桿粒菌中抽提獲得重組的Bacraid桿粒，電泳驗(yàn)證，結(jié)果見圖6，其中箭頭所指處即為Bacraid條帶。以前述抽提的Bacmid桿粒為模板，以Bacmid特異性引物GTTTTCCCAGTCACGAC(SEQIDNO:5);禾口CAGGAAACAGCTATGAC(SEQIDNO:6)為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳驗(yàn)證，結(jié)果見圖7，其中箭頭所指處即為含有IFIT4的重組條帶。2.昆蟲細(xì)胞的培養(yǎng)將HighFive昆蟲細(xì)胞(購自Invitrogen公司)凍存管從液氮中取出，置于27。C無菌蒸餾水中，溶化后加入SFM昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)基(購自Invitrogen公司)，lOOOrpm，1min將凍存保護(hù)液DMSO洗除，27。C培養(yǎng)。3.桿狀病毒BAC-IFIT4的獲得將Bacmid桿粒、Cellfectin(購自Invitrogen公司)同SFM培養(yǎng)基混和，后采用常規(guī)方法轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞。3天后收集上清，并進(jìn)行病毒3次傳代，得到高滴度病毒。實(shí)施例3人源IFIT4蛋白的優(yōu)化表達(dá)和純化1.昆蟲細(xì)胞的培養(yǎng)將昆蟲細(xì)胞凍存管從液氮中取出，置于27"C無菌蒸餾水中，溶化后加入SFM昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)基，1000rpm，lmin將DMSO洗除，27"C培養(yǎng)。2.病毒的感染按照M0K-5進(jìn)行病毒感染，27'C培養(yǎng)3-5天。3.人源IFIT4蛋白的純化收集細(xì)胞，用裂解緩沖液(O.745KC1，0,605Tris，10ulPMSF，100mlH20)進(jìn)行裂解，適當(dāng)超聲后進(jìn)行高速離心以除去細(xì)胞碎片，在上清中加入PMSF(購自Invitrogen公司)防止降解。在室溫下將上述裂解液過HiTrapHisColumn5ml(購自Amersham公司)純化。4.人源IFIT4蛋白的鑒定A.SDS-PAGE電泳配制12%分離膠和5%的濃縮膠。細(xì)胞用上樣緩沖液沸水煮4分鐘。濃縮膠IOOV，分離膠200V。電泳lh40min。卡馬斯亮藍(lán)染色4小時(shí)。脫色液脫色，觀察結(jié)果。B.Western印跡檢測SDS-PAGE電泳結(jié)束時(shí)，電轉(zhuǎn)緩沖液淋洗電轉(zhuǎn)板。剪切4張濾紙和一張硝酸纖維素膜，并將他們浸泡在電轉(zhuǎn)液中，按照紙膜膠紙的順序從陽極到陰極擺放正確，200mA，lh30min橫流轉(zhuǎn)膜。加入IFIT4抗體(抗天然IFIT4抗原的抗體，購自R&D)和封閉液25。C孵育2h。再用TTBS洗膜，后用羊抗鼠二抗(購自Sigma)與封閉液孵育lh。加入底物顯色lmin，觀察結(jié)果。5.感染條件的優(yōu)化A.MOI的選擇為了找到合適的MOI值，本發(fā)明人分別按照M0I-4、M0I=2、M0I=9、M0I=7進(jìn)行病毒感染，27"C培養(yǎng)。觀察病毒感染的情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，當(dāng)M0I4或M0P2時(shí)，HighFive昆蟲細(xì)胞的狀態(tài)良好，在感染后2-4天內(nèi)，IFIT4蛋白表達(dá)量逐漸增加(SDS-PAGE電泳檢測，蛋白條帶的顯示在2-4天內(nèi)逐漸增強(qiáng))，且在第4天表達(dá)量達(dá)到最高。而當(dāng)M0I=9或M0I=7時(shí)，感染4天后昆蟲細(xì)胞的狀態(tài)不好，臺(tái)盼藍(lán)染色細(xì)胞死亡率達(dá)到80%,蛋白表達(dá)量比較低。當(dāng)M0P4以及M0I二9時(shí)，昆蟲細(xì)胞感染4天后，在顯微鏡(400倍)下的情況分別見圖10A和圖IOB，圖中可見當(dāng)M0I=4時(shí)昆蟲細(xì)胞的狀態(tài)明顯好于MOI二9時(shí)。B.感染時(shí)間的選擇為了選擇合適的病毒感染時(shí)間，本發(fā)明人在M0I=4時(shí)，分別在培養(yǎng)細(xì)胞后2、3、4、5天收取細(xì)胞，檢測IFIT4蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果如圖8所示，可見在培養(yǎng)細(xì)胞后2-4天，蛋白的表達(dá)量逐漸增加，到第4天達(dá)到最大(達(dá)到約4.lmg/L)，第5天蛋白表達(dá)量又開始降低。當(dāng)M0I=4且表達(dá)時(shí)間為4天時(shí)，純化后的蛋白的SDS-PAGE結(jié)果如圖9A所示(在60KD處有一個(gè)條帶，即為人源IFIT4蛋白)，Western印跡結(jié)果如圖9B所示(在60KD處有一個(gè)條帶，即為人源IFIT4蛋白)。綜上可見，當(dāng)M0I二1一5，并且病毒感染時(shí)間在3-5天(優(yōu)選4天)時(shí)，蛋白的表達(dá)最優(yōu)化。實(shí)施例4IFIT4蛋白的原核表達(dá)本發(fā)明人在具有如SEQIDNO:1第85-1548位所示序列的多核苷酸的兩端添加多克隆位點(diǎn)，克隆入pET28a載體(購自Novagen公司)的多克隆位點(diǎn)內(nèi)。將形成的重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化BL21表達(dá)型大腸桿菌，在0.5-5mMIPTG條件下誘導(dǎo)培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不管如何改進(jìn)培養(yǎng)條件，最終均無法獲得有活性的IFIT4蛋白。在本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨(dú)引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。序列表<110〉中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院<120〉重組人源干擾素誘導(dǎo)蛋白4桿狀病毒<130〉071837<160〉6〈170〉Patentlnversion3.3<210〉1<211〉1548<212〉DNA<213〉智人(Homosapiens)〈400〉1atgtcgtactaccatcaccatattttcagggcgccatggacttccacagctgaaatgccagatctagaagatagagtgtgatgtac犯cttgttggcctatgcttacggcaagctgaagaagtctagtcacttggggaaagctcagatttatgtagataaattgagtattctgaacttgag,gggcgaaggtgtgUttcctctggactggcaattgcactgatgttttgaagcaggcttgggcctgaaactgcagaagccttggaaaagtctccttg肌c犯tggctacctctatcacagaatacaggagaatctgatatgctatggactattcgaatccgatctcgctgagttcctcctgatgctgaaaagcaacaaagtctgaagacactgctgtactgacaaggaagagatcaaaatgcaccaaattattggtac犯gc鄧cca3atgttatgaataggcagtattttcctgtcggcgcagtcagctccagtcc〈210〉2<211〉520<212〉PRT<213〉智人(Homosapiens)tcaccatcacgattacgatatcccaacgaccgaaaacctg60tccgatgagtgaggtcaccaagaattccctggagaaaatc120tttcacctggaacttattcaaggaagacagtgtctcaagg180taaccagattgaatttttaaacactgagttcaaagctaca240cata犯acacctagatggtaacaacgaggcagccctggaa300gttaatccagcaagaacatgctgacc犯gcaigaaatcaga360ctacgcctgggtctactatcacttgggcagactctcagat420ggtg犯3C犯acctgc犯ga犯ttttc3犯tccatacsgt480ctgtg鄉(xiāng)aagggtggacacaactgaagtgtggaaga犯t540tgagaaggctctggaagaaaagcccaacaacccagaa/ttc600gatgtaccatctggataatcacccagagaaacagttctct660cattgagctgagtcctgataaccaatacgtcaaggttctc720gatgaataaagaagctgaaggagagcagtttgttgaag犯780ccaaacagatgtcctccgcagtgcagccaaattttacaga840agctattgaactgtttcaacgggtgttggaatccacacca900ccagattgggtgctgctacaaggcaaaagtaagacaaatg960agctagtggaaataaagagatgattgaagcactaaagcaa1020taaagctcttgagaagggactgaatcctctgaatgcatac1080ggagacggaatgttatcagacaccattcaataaggaagtc1140atcccatcagcgctactgcaaccttcagaaatataatggg1200gc犯catggtttagagggtttgtccat犯gcaaaaaatca1260agaccaaccacagaatgtatctgaaaatctgcttccacaa1320tcttcaaggattaattcataagcagaatggagatctgctg1380gaaggaactgggccgcctgctaagggatgccccttcaggc1440agcatctgagcttgaggatggtagtgaggaaatgggccag1500cagagagctcctctctaactcagagcaa1548<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>385390LysSerGluAspThrAlaValGin405SerLysLysSerThrAspLysGlu420VeilSerGluAsnLeuLeuProGin435440GinGlyLeulieHisLysGinAsn450455CysTyrGluLysGluLeuGlyArg465470lieGlySerliePheLeuSerAla485GluMetGlyGinGlyAlaValSer500AsnSerGluGinLeuThrAsnGly515520〈210〉3〈211〉30<212〉DNA〈213〉人工序列〈220〉<221>misc一feature<223〉引物<400>3cgcggatccgcgatgagtgaggtcaccaag30<210〉4<211〉25<212〉DNA<213>人工序列〈220〉<221>misc一feature<223〉引物<400〉4ccgctcgagcggttattgctctgag25<210>5<211>17<212>DNA<213>人工序列22395HisGlyLeu410GlulieLys425AsnAlaProGlyAspLeuLeuLeuArg475SerGluLeu490SerSerPro505GluGlyAspGinAsnTyr445LeuGin柳AspAlaGluAspArgGluLeuPro430TrpAlaProGlyLeu510Ser415GinTyrAlaSerSer495Leu400lieAsnLeuLysGly480GluSer〈221>misc一feature<223〉引物<400>5gttttcccagtcacgac17〈210〉6〈211〉17<212〉DNA<213〉人工序列<220><221〉misc_feature<223〉引物<400>6caggaaacagctatgac1權(quán)利要求1.一種重組的干擾素誘導(dǎo)蛋白4桿狀病毒，其特征在于，所述的桿狀病毒的基因組中含有一重組表達(dá)盒，所述的重組表達(dá)盒含有干擾素誘導(dǎo)蛋白4的編碼序列；并且，所述的桿狀病毒可感染昆蟲細(xì)胞，從而表達(dá)干擾素誘導(dǎo)蛋白4。2.如權(quán)利要求1所述的桿狀病毒，其特征在于，所述的重組表達(dá)盒從5'至3'依次含有以下元件多角蛋白啟動(dòng)子，干擾素誘導(dǎo)蛋白4的編碼序列，和SV40PolyA轉(zhuǎn)錄終止序列。3.—種制備權(quán)利要求l所述的桿狀病毒的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟(A)將干擾素誘導(dǎo)蛋白4的編碼序列克隆入桿粒中，獲得重組的桿粒；(B)將(A)獲得的重組的桿粒轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞，培養(yǎng)轉(zhuǎn)染后的昆蟲細(xì)胞；和(C)收獲重組的干擾素誘導(dǎo)蛋白4桿狀病毒。4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述的干擾素誘導(dǎo)蛋白4具有SEQIDNO:2中第29-516位所示的氨基酸序列。5.權(quán)利要求1所述的干擾素誘導(dǎo)蛋白4桿狀病毒的用途，其特征在于，用于制備干擾素誘導(dǎo)蛋白4。6.—種制備干擾素誘導(dǎo)蛋白4的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟(1)將權(quán)利要求l所述的干擾素誘導(dǎo)蛋白4桿狀病毒感染昆蟲細(xì)胞，培養(yǎng)感染后的昆蟲細(xì)胞，使之表達(dá)干擾素誘導(dǎo)蛋白4;和(2)分離獲得干擾素誘導(dǎo)蛋白4。7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，在步驟(1)中，進(jìn)行感染時(shí)，干擾素誘導(dǎo)蛋白4桿狀病毒數(shù)量與昆蟲細(xì)胞數(shù)量的比例為(1-5)pfu:1cell。8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，干擾素誘導(dǎo)蛋白4桿狀病毒數(shù)量與昆蟲細(xì)胞數(shù)量的比例為(3-4)pfu:1cell。9.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，在步驟(1)中，培養(yǎng)感染后的昆蟲細(xì)胞4土2天。10.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，在步驟(1)中，感染后的昆蟲細(xì)胞的培養(yǎng)溫度為25-30°C。全文摘要本發(fā)明公開了一種重組的干擾素誘導(dǎo)蛋白4桿狀病毒，所述的桿狀病毒的基因組中含有一重組表達(dá)盒，所述的重組表達(dá)盒含有干擾素誘導(dǎo)蛋白4的編碼序列；并且，所述的桿狀病毒可感染昆蟲細(xì)胞，從而表達(dá)干擾素誘導(dǎo)蛋白4。所述桿狀病毒可穩(wěn)定傳代且干擾素誘導(dǎo)蛋白4的表達(dá)量高。本發(fā)明還公開了一種制備干擾素誘導(dǎo)蛋白4的方法，采用所述方法可獲得具有良好糖基化修飾和空間構(gòu)型的干擾素誘導(dǎo)蛋白4。文檔編號C12P21/02GK101285055SQ20071003926公開日2008年10月15日申請日期2007年4月9日優(yōu)先權(quán)日2007年4月9日發(fā)明者兵孫,蔡興峰,袁建偉申請人:中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院