專利名稱：朱頂紅無菌苗再切割成苗方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種朱頂紅無菌苗再切割成苗方法，提高朱頂紅組培苗的繁殖 與生長速率，屬于農(nóng)業(yè)生物技術(shù)中的園林植物與觀賞園藝領(lǐng)域。
技術(shù)背景朱頂紅(///ff^o^T^^別名孤挺花、華胄蘭、百子蓮等，是石蒜科孤挺花 屬多年生草本植物，原產(chǎn)秘魯和巴西一帶，是世界各地廣泛應(yīng)用的觀賞球根花 卉。我國在1912~1949年期間，南京、上海等地已有朱頂紅的盆栽觀賞。但高 檔朱頂紅繁殖困難，我國朱頂紅種球一直依賴從荷蘭等國進(jìn)口。目前，通過組 織培養(yǎng)或鱗莖扦插繁殖是國際上朱頂紅快速繁殖的主要技術(shù)手段。朱頂紅的鱗莖、葉片和花葶都能經(jīng)過誘導(dǎo)能產(chǎn)生幼苗。多年來，學(xué)者們一 直在研究最佳的誘導(dǎo)培養(yǎng)基。雖然不同的品種需要不同的配方，但是他們的誘 導(dǎo)方式相似，添加的激素也相似，只是濃度不同而已。誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+BA(6-芐基氨基腺嘌呤)2 4mg/L+NAA(萘乙酸)0 lmg/L，活性炭(AC) 2g/L，蔗糖 30g/L， Ph5.8，瓊脂6 8g/L。生根培養(yǎng)基為不添加激素的MS培養(yǎng)基?，F(xiàn)有朱頂紅種苗的誘導(dǎo)培養(yǎng)方法周期較長、效率較低，且成本也比較高， 不能滿足工廠化、規(guī)?；a(chǎn)的要求。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種朱頂紅無菌苗再切割成苗 方法，能快速有效地大量生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)朱頂紅種苗，適合工廠化生產(chǎn)。為實現(xiàn)這樣的目的，本發(fā)明的技術(shù)方案中，利用朱頂紅組織培養(yǎng)產(chǎn)生的無菌 苗為外植體，通過重復(fù)切割小鱗莖、培養(yǎng)、繁殖，不斷獲得子代。在誘導(dǎo)成苗 和壯苗培養(yǎng)過程中，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值、蔗糖濃度，添加植物生長抑制劑以及 提高培養(yǎng)基中磷、鉀元素的含量等技術(shù)手段，促進(jìn)小鱗莖的誘導(dǎo)率和壯苗，提 高朱頂紅組培苗生長與繁殖速率。同時采用1/2MS培養(yǎng)基代替MS培養(yǎng)基以降低 成本。移苗則采用兩步移苗方式來提高幼苗成活率。
本發(fā)明的方法具體步驟為1、 無菌苗的獲得選擇優(yōu)良品種的朱頂紅鱗莖進(jìn)行組織培養(yǎng)。培養(yǎng)基為 l/2MS + BA2mg/L + NAAlmg/L, pH5.8，糖30g/L， AC 2g/L，瓊脂6 8g/L; 培養(yǎng)條件為溫度20 3(TC，光照16h光期/8h暗期。 一個月后即能獲得無菌 苗。2、 無菌苗的切割當(dāng)?shù)玫降臒o菌苗鱗莖直徑達(dá)到3 5rnrn時即可進(jìn)行切割， 對切割后的無菌苗繼續(xù)誘導(dǎo)培養(yǎng)。誘導(dǎo)培養(yǎng)基為1/2MS + BA 4mg/L + NAA lmg/L + KH2PO440 120mg/L+TIBA(三碘苯甲酸)0. 5mg/L ， pH 5. 8 7. 0，蔗 糖30 60g/L， AC 2g/L，瓊脂6 8g/L。培養(yǎng)條件為溫度20 30。C，光照 16h光期/8h暗期。 一般1個月左右能夠得到長lcm的無菌幼苗。3、 幼苗壯苗對長lcm的無菌幼苗進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，培養(yǎng)基為1/2MS + BA 4mg/L + NAAlmg/L + KH2PO460mg/L + TIBA0. 5mg/L， pH5.8 7.0，蔗糖30 60g/L ， AC 2g/L，瓊脂6 8g/L。培養(yǎng)條件為溫度20 30°C，光照16h光 期/8h暗期。4、 無菌苗的再切割當(dāng)?shù)玫降膲衙缗囵B(yǎng)后的無菌苗小鱗莖直徑達(dá)到3 5mm 時，即可將其中一部分無菌苗繼續(xù)切割，再對切割后的無菌苗進(jìn)行新的誘導(dǎo)培 養(yǎng)和壯苗培養(yǎng)；如此重復(fù)不斷獲得子代。將另一部分不再切割的無菌苗進(jìn)行移 苗。5、 移苗將經(jīng)壯苗培養(yǎng)且不再切割的無菌苗移植至蛭石中，保持水分充足，待幼苗葉片長至5 7cm時即可再次移苗到露地。移苗時，環(huán)境溫度在10度以 上， 一般為10 3(TC，并避免陽光直射。本發(fā)明利用朱頂紅組織培養(yǎng)產(chǎn)生的無菌苗為外植體，通過重復(fù)切割小鱗莖、 培養(yǎng)、繁殖，不斷獲得子代。這種技術(shù)不隨小鱗莖切割次數(shù)的增加而降低繁殖 能力，因此，每當(dāng)朱頂紅無菌苗小鱗莖長到一定大小后就能繼續(xù)切割，能夠不 受季節(jié)限制的不斷得到大量優(yōu)質(zhì)朱頂紅種苗。產(chǎn)生的朱頂紅小苗生根率可達(dá)到100%,因此不需要進(jìn)行生根培養(yǎng)。與直接利用帶菌的母球進(jìn)行組織培養(yǎng)相比， 本發(fā)明減少了消毒等復(fù)雜過程，縮短了誘導(dǎo)成苗的周期，簡化了生產(chǎn)的流程。 在誘導(dǎo)成苗和壯苗培養(yǎng)過程中，通過調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的酸堿度、蔗糖濃度，加入磷
酸二氫鉀和三碘苯甲酸等手段，促進(jìn)小鱗莖的誘導(dǎo)率和壯苗。采用1/2MS培養(yǎng) 基代替MS培養(yǎng)基可以有效降低生產(chǎn)成本。幼苗的壯苗過程也是一個很重要的步驟，它能迅速補充幼苗生長需要的營養(yǎng)元素，使之快速成苗并促進(jìn)小鱗莖長大。 強壯的小鱗莖不僅有利于下一次的切割，也有利于移苗后小苗的成活。朱頂紅 生命力比較強，可以直接將無菌苗移植至蛭石中，待幼苗長大后可再次移苗到 露地。用兩步移苗的方式進(jìn)行移苗，可提高幼苗的成活率。本發(fā)明能快速有效地大量生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)朱頂紅種苗，是一種新型實用的適合工 廠化生產(chǎn)的方法。
具體實施方式
以下通過具體的實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步描述。以下實施例不 構(gòu)成對本發(fā)明的限定。 實施例l1、 無菌苗的獲得選擇優(yōu)良朱頂紅品種蘋果花(Apple Blossom)鱗莖進(jìn) 行組織培養(yǎng)，先剝除外層的老鱗片和底部的老根，用清水洗干凈后切去頂部2/3 鱗片，將基部的鱗片和基盤8 16分切。分別用肥皂水和清水沖洗后消毒接種。培養(yǎng)基為1/2 MS + BA 2mg/L + NAA lmg/L， pH 5. 8，糖30g/L， AC2g/L， 瓊脂6g/L。培養(yǎng)條件為溫度25'C，光照16h光期/8h暗期。 一個月后產(chǎn)生 無菌苗。2、 無菌苗的切割當(dāng)無菌苗鱗莖直徑達(dá)到3 5mm時，用得到的無菌苗小 鱗莖為材料進(jìn)行切割，并對切割后的無菌苗繼續(xù)誘導(dǎo)培養(yǎng)，誘導(dǎo)培養(yǎng)基為1/2MS + BA4mg/L + NAAlmg/L + KH2PO450mg/L+三碘苯甲酸0.5mg/L ，調(diào)節(jié)pH值 至6.6，添加蔗糖45g/L， AC 2g/L，瓊脂6g/L。培養(yǎng)條件為溫度20 30。C， 光照16h光期/8h暗期；得到長lcm的無菌幼苗。3、 幼苗壯苗對長lcm的無菌幼苗進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，培養(yǎng)基為1/2MS + BA 4mg/L + NAAlmg/L + KH2PO460mg/L + TIBA0.5mg/L， pH 6.2，蔗糖60g/L ， AC2g/L，瓊脂8g/L;培養(yǎng)條件為溫度20 30。C，光照16h光期/8h暗期。4、 無菌苗的再切割當(dāng)?shù)玫降膲衙缗囵B(yǎng)后的無菌苗小鱗莖直徑達(dá)到3 5mm 時，將其中一部分無菌苗繼續(xù)切割，再對切割后的無菌苗進(jìn)行新的誘導(dǎo)培養(yǎng)和
壯苗培養(yǎng)。如此重復(fù)切割、培養(yǎng)、壯苗，可不斷獲得朱頂紅品種蘋果花的子代。 需要移苗時，可任意選擇經(jīng)壯苗培養(yǎng)后不再切割的無菌苗進(jìn)行移苗。5、移苗將一部分經(jīng)壯苗培養(yǎng)且不再切割的無菌苗移植至蛭石中，每天補充水分，保持水分充足，待幼苗葉片長至5 7cm時，再次將朱頂紅小苗從蛭石 中移植到露地。第一次移苗時在夏季，選擇在保護(hù)地栽培，適當(dāng)遮蔭，避免陽 光直射，使環(huán)境溫度在3(TC以下。 一周后去除遮蔭物，這些朱頂紅小苗就能正 常生長。 實施例21、 無菌苗的獲得選擇優(yōu)良朱頂紅品種維拉(Vera)鱗莖進(jìn)行組織培養(yǎng)， 培養(yǎng)基為1/2 MS + BA 2mg/L + NAA lmg/L， pH 5. 8，糖30g/L， AC2g/L，瓊脂6g/L。培養(yǎng)條件為溫度25'C，光照16h光期/8h暗期。 一個月后產(chǎn)生 無菌苗。2、 無菌苗的切割當(dāng)?shù)玫降臒o菌苗鱗莖直徑達(dá)到3 5mm時即進(jìn)行切割， 對切割后的無菌苗繼續(xù)誘導(dǎo)培養(yǎng)，誘導(dǎo)培養(yǎng)基為1/2MS + BA 4mg/L + NAA lmg/L + KH2PO4 60mg/L+三碘苯甲酸0.5mg/L ， pH6.8，蔗糖40g/L， AC2g/L， 瓊脂8g/L;培養(yǎng)條件為溫度20 30。C，光照16h光期/8h暗期；得到長lcm 的無菌幼苗；3、 幼苗壯苗對長lcm的無菌幼苗進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，培養(yǎng)基為1/2MS + BA 4mg/L + NAAlmg/L + KH2PO480mg/L + TIBA0.5mg/L， pH 6.0，蔗糖50g/L ， AC2g/L，瓊脂8g/L。培養(yǎng)條件為溫度20 3(TC，光照16h光期/8h暗期；4、 無菌苗的再切割當(dāng)?shù)玫降膲衙缗囵B(yǎng)后的無菌苗小鱗莖直徑達(dá)到3 5mm 時，將其中一部分無菌苗繼續(xù)切割，再對切割后的無菌苗進(jìn)行新的誘導(dǎo)培養(yǎng)和 壯苗培養(yǎng)；如此重復(fù)切割、培養(yǎng)、壯苗，可不斷獲得朱頂紅品種維拉的子代。 同時，選擇一部分經(jīng)壯苗培養(yǎng)后不再切割的無菌苗進(jìn)行移苗。5、 移苗將一部分經(jīng)壯苗培養(yǎng)且不再切割的無菌苗移植至蛭石中，每天補充水分，保持水分充足。待幼苗葉片長至5 7cm時再次移苗到露地。第一次移 苗時在冬季，選擇在保護(hù)地栽培，環(huán)境溫度保持在l(TC以上。 一周后這些朱頂 紅小苗就能正常生長。
權(quán)利要求
1、一種朱頂紅無菌苗再切割成苗方法，其特征在于包括如下步驟1)無菌苗的獲得選擇朱頂紅鱗莖進(jìn)行組織培養(yǎng)，培養(yǎng)基為1/2 MS+BA2mg/L+NAA1mg/L，pH5.8，糖30g/L，AC2g/L，瓊脂6～8g/L；培養(yǎng)條件為溫度20～30℃，光照16h光期/8h暗期；一個月后即獲得無菌苗；2)無菌苗的切割當(dāng)?shù)玫降臒o菌苗鱗莖直徑達(dá)到3～5mm時即進(jìn)行切割，對切割后的無菌苗繼續(xù)誘導(dǎo)培養(yǎng)，誘導(dǎo)培養(yǎng)基為1/2MS+BA 4mg/L+NAA1mg/L+KH2PO4 40～120mg/L+三碘苯甲酸0.5mg/L，pH5.8～7.0，蔗糖30～60g/L，AC 2g/L，瓊脂6～8g/L；培養(yǎng)條件為溫度20～30℃，光照16h光期/8h暗期；得到長1cm的無菌幼苗；3)幼苗壯苗對長1cm的無菌幼苗進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，培養(yǎng)基為1/2MS+BA 4mg/L+NAA 1mg/L+KH2PO4 60mg/L+TIBA 0.5mg/L，pH5.8～7.0，蔗糖30～60g/L，AC 2g/L，瓊脂6～8g/L；培養(yǎng)條件為溫度20～30℃，光照16h光期/8h暗期；4)無菌苗的再切割當(dāng)?shù)玫降膲衙缗囵B(yǎng)后的無菌苗小鱗莖直徑達(dá)到3～5mm時，將其中一部分無菌苗繼續(xù)切割，再對切割后的無菌苗進(jìn)行新的誘導(dǎo)培養(yǎng)和壯苗培養(yǎng)；如此重復(fù)不斷獲得子代；將另一部分不再切割的無菌苗進(jìn)行移苗；5)移苗將經(jīng)壯苗培養(yǎng)且不再切割的無菌苗移植至蛭石中，保持水分充足，待幼苗葉片長至5～7cm時再次移苗到露地；移苗時，環(huán)境溫度在10～30℃，并避免陽光直射。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種朱頂紅無菌苗再切割成苗方法，屬于園林植物與觀賞園藝領(lǐng)域。利用朱頂紅組織培養(yǎng)產(chǎn)生的無菌苗為外植體，通過重復(fù)切割小鱗莖、培養(yǎng)、繁殖，不斷獲得子代。在誘導(dǎo)成苗和壯苗培養(yǎng)過程中，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值、蔗糖濃度，添加植物生長抑制劑以及提高培養(yǎng)基中磷、鉀元素的含量等技術(shù)手段，促進(jìn)小鱗莖的誘導(dǎo)率和壯苗，提高朱頂紅組培苗生長與繁殖速率。同時采用1/2MS培養(yǎng)基代替MS培養(yǎng)基以降低成本。移苗則采用兩步移苗方式來提高幼苗成活率。
文檔編號C12N5/04GK101129131SQ20071004648
公開日2008年2月27日 申請日期2007年9月27日 優(yōu)先權(quán)日2007年9月27日
發(fā)明者史益敏, 露 葉, 邵素娟 申請人:上海交通大學(xué)