專利名稱：一種綠色木霉真菌及其在普洱茶生產(chǎn)中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種綠色木霉真菌及其在普洱茶生產(chǎn)中的應(yīng)用，屬生物技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
綠色木霉能產(chǎn)生纖維素酶、纖維二糖酶、淀粉酶、乳糖酶等。可用來產(chǎn)生檸檬酸，能合成核黃素并可用于甾體轉(zhuǎn)化，也是一類產(chǎn)生抗生素的真菌，該菌利用范圍較廣。
在普洱茶大生產(chǎn)過程中，該菌系能分泌酶類作用于基質(zhì)?？梢种破渌s菌的生成，并能與其他菌種配合發(fā)揮良好的作用，促進普洱茶“醇和”品質(zhì)的形成。
在普洱茶研究領(lǐng)域，由于長期缺乏學科的研究，尤其是從微生物的角度來進行普洱茶的研究。而如何通過對云南普洱茶加工中微生物的研究，并從普洱茶加工中篩選有益優(yōu)勢微生物菌株應(yīng)用到生產(chǎn)中來提升普洱茶的品質(zhì)尚未見公開的文獻報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是從微生物的角度對進行普洱茶進行研究，為生產(chǎn)企業(yè)提供高品質(zhì)普洱茶有益菌株來源。本發(fā)明的另一目的是通過控制有益菌種在普洱茶生產(chǎn)中的比例，為促進云南普洱茶品質(zhì)穩(wěn)定和提高發(fā)揮作用。
本發(fā)明的綠色木霉真菌，由生產(chǎn)菌株和輔料經(jīng)初篩、復(fù)篩、天然培養(yǎng)基培養(yǎng)、及木霉純化培養(yǎng)工序后得到，其特征在于生產(chǎn)菌株為綠色木霉(Trichoderma viride)PTri050102，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏單位地址北京市海淀區(qū)中關(guān)村北一條13號，保藏日期2007年3月1日，保藏號CGMCC No.1962。
本發(fā)明的綠色木霉(Trichoderma viride)PTri050102的形態(tài)學特征為該菌株在馬鈴薯—葡萄糖—瓊脂培養(yǎng)基上廣鋪，初為白色致密的基質(zhì)菌絲，而后出現(xiàn)棉絮狀氣生菌絲，產(chǎn)孢叢束區(qū)常現(xiàn)同心環(huán)紋的菌落。產(chǎn)孢區(qū)深藍綠色，菌落反面無色，老的培養(yǎng)基散發(fā)一股椰子氣味，菌絲透明，壁光滑，分枝復(fù)雜。分生孢子梗為菌絲的短側(cè)枝，其上對生或互生分枝，分枝上又可繼續(xù)分枝，形成二級、三級分枝，最終形成松柏似的分枝輪廓。分枝的末端形成小梗，小梗瓶形或錐形，分生孢子大多為球形，直徑2.5～4.5μm，孢壁具明顯的小疣狀突起，在顯微鏡下單個孢子呈淡綠色。
本發(fā)明經(jīng)公知的純化、天然培養(yǎng)基培養(yǎng)等傳統(tǒng)工序后得到。
本發(fā)明的有提高普洱茶品質(zhì)的作用，可應(yīng)用于普洱茶的生產(chǎn)工藝中。
本發(fā)明的優(yōu)點在于將綠色木霉真菌按重量比為0.1-0.8％的比例用于普洱茶的大生產(chǎn)過程中，其普洱茶中的茶多酚及茶褐素可控制在適當?shù)谋壤_到提高品質(zhì)的作用，并縮短了加工時間，對普洱茶品質(zhì)的穩(wěn)定和提高發(fā)揮重要作用。
具體實施例方式實施例1PTri050102菌種的純化從采集到的普洱茶樣中，通過公知的平板分離得到綠色木霉菌株。綠色木霉純化培養(yǎng)基為馬鈴薯200g、葡萄糖20g、瓊脂20g、蒸餾水1000ml、pH自然。馬鈴薯去皮，切成塊，煮熟半小時，然后用紗布過濾，在加瓊脂和糖，熔化后補足水至1000ml。121℃滅菌20min。
純化方法(1)將公知的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基熔化，冷卻至45℃，注入無菌培養(yǎng)皿中，每皿約15～20毫升，稍微搖轉(zhuǎn)，靜置，使成平板備用。
(2)取要分離的茶樣2g，在火焰旁加到裝有98ml無菌水的研缽中研碎，此時得到的是10-2的菌懸液。
(3)稀釋按十倍稀釋法把菌懸液稀釋至10-8，十倍法是指下一管的菌懸液要比上一管的稀十倍。
(4)接種事先準備好的平板9套，分別標號為10-6、10-7、10-8，每個稀釋度寫三套平皿，以便比較。在每個已標號的平皿中注入1ml相應(yīng)的菌懸液，用涂布棒涂均勻，放入25～28℃培養(yǎng)24小時觀察。
(5)培養(yǎng)2～5天后，挑取單個菌落，并移植于馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基的斜面上培養(yǎng)，待形成子實器官后檢查是否只有一種菌而且這種菌是否符合綠色木霉的特征。
(6)最后把選出的菌種接種到天然培養(yǎng)基上(葡萄糖30g、麩皮10g、玉米粉50g、蛋白胨10g、酵母膏1.0g、加蒸餾水至1000，pH自然。放到28℃恒溫箱中早晚搖動培養(yǎng)5～7天后，在無菌超作臺上用無菌濾紙過濾，無菌收獲濾紙上的菌絲和綠色木霉的孢子，放到28±2℃恒溫箱中干燥即可用于接種發(fā)酵試驗。
實施例2綠色木霉真菌的生產(chǎn)應(yīng)用將毛茶按傳統(tǒng)的方法進行濕熱，隨后在毛茶中加入按重量比為0.1-0.8％的PTri050102菌種讓其發(fā)酵，當堆溫升高到30℃時，PTri050102菌種開始進行代謝，并且隨著堆溫進一步的升高，分泌出大量的酶類。這些酶對茶葉中的內(nèi)含成分進行氧化、水解。在蛋白酶的作用下，將不易消化的大分子蛋白質(zhì)降解為蛋白胨、多肽及各種氨基酸。在糖化酶、纖維素酶的作用下使發(fā)酵基質(zhì)大分子不溶物質(zhì)轉(zhuǎn)化為可溶解于水的小分子物質(zhì)，經(jīng)過接種生產(chǎn)的普洱茶具有香氣獨特，滋味醇和回甘，湯色紅濃明亮，葉底棕褐油潤的品質(zhì)特征。
經(jīng)接種綠色木霉真菌后生產(chǎn)的普洱茶，其品質(zhì)有明顯的提高，普洱茶中的茶多酚含量為15～17％、茶褐素含量為10～12％。
權(quán)利要求
1.一種綠色木霉真菌，由生產(chǎn)菌株和輔料經(jīng)初篩、復(fù)篩、天然培養(yǎng)基培養(yǎng)、及木霉純化培養(yǎng)工序后得到，其特征在于生產(chǎn)菌株為綠色木霉(Trichoderma viride)PTri050102，保藏日期2007年3月1日，保藏號CGMCC No.1962。
2.權(quán)利要求1所述綠色木霉真菌的應(yīng)用，其特征在于該綠色木霉真菌在普洱茶的生產(chǎn)工藝中應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種綠色木霉真菌及其在普洱茶生產(chǎn)中的應(yīng)用，屬生物技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的綠色木霉真菌，由生產(chǎn)菌株和輔料經(jīng)傳統(tǒng)的初篩、復(fù)篩、天然培養(yǎng)基培養(yǎng)、及木霉純化培養(yǎng)工序后得到，生產(chǎn)菌株為綠色木霉(Trichoderma viride)PTri050102，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏單位地址北京市海淀區(qū)中關(guān)村北一條13號，保藏日期2007年3月1日，保藏號CGMCC No.1962。該綠色木霉真菌有提高普洱茶品質(zhì)的作用，可應(yīng)用于普洱茶的生產(chǎn)工藝中。本發(fā)明的優(yōu)點在于將綠色木霉真菌按重量比為0.1－0.8％的比例用于普洱茶的大生產(chǎn)過程中，其普洱茶中的茶多酚及茶褐素可控制在適當?shù)谋壤_到提高品質(zhì)的作用，并縮短了加工時間，對普洱茶品質(zhì)的穩(wěn)定和提高發(fā)揮重要作用。
文檔編號A23F3/06GK101028023SQ20071006578
公開日2007年9月5日 申請日期2007年4月6日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月6日
發(fā)明者周紅杰, 龔家順, 秘鳴, 安文杰, 張春花, 袁文俠, 單治國 申請人:云南農(nóng)業(yè)大學