專利名稱：鼠抗人酯多糖受體抗體輕鏈可變區(qū)基因及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬生物技術(shù)，主要涉及鼠免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)基因，尤其涉及到
鼠抗人酯多糖受體(國際命名CD14，抗體克隆名ZCH-7-2F9)單克隆抗體輕
鏈可變區(qū)基因及用途。
背景技術(shù)：
血液系統(tǒng)腫瘤如白血病、淋巴瘤是嚴(yán)重危害人類健康的頑癥，化學(xué)治療(化 療)仍然是當(dāng)前治療血液系統(tǒng)惡性腫瘤的主要方法，但常規(guī)化療對腫瘤細(xì)胞與 正常細(xì)胞之間的選擇性較差，因而毒副作用較大，且反復(fù)非根治性劑量的化療， 又容易誘生腫瘤細(xì)胞的耐藥，最終，許多患者因耐藥腫瘤復(fù)發(fā)或大劑量化療致 嚴(yán)重毒副作用如嚴(yán)重感染、出血、重要臟器功能衰竭等而告治療失敗。
與化療比較，單克隆抗體靶向治療具有良好的選擇性和特異性，它們只殺 傷表達(dá)靶分子的細(xì)胞，而不損傷無靶分子表達(dá)的血細(xì)胞成分和組織器官細(xì)胞， 從而可大大提高靶向治療的特異性，降低藥物的全身毒副作用。有效的耙向治 療取決于良好的先導(dǎo)分子，系列特異性表面分化抗原單抗作為先導(dǎo)分子，將藥 物或毒素特異地帶到腫瘤細(xì)胞膜上或細(xì)胞內(nèi)，或通過完整抗體激活補體(CDC) 或通過抗體介導(dǎo)細(xì)胞毒(ADCC)作用以達(dá)到殺滅白血病細(xì)胞的目的，有著無可 替代的優(yōu)勢。目前，大多數(shù)高親和力的單抗屬于鼠源性的，用鼠源性單抗進(jìn)行 臨床靶向治療可以發(fā)生嚴(yán)重的血清病或因產(chǎn)生人抗鼠免疫球蛋白(Ig)抗體 (HAMA)而消除藥物的抗腫瘤作用等問題，限制了它們在臨床上的有效應(yīng)用。為 了在臨床上能大量重復(fù)使用鼠源性單抗治療血液系統(tǒng)惡性腫瘤，就必須最大限 度地降低鼠源性單抗對人體的免疫原性?，F(xiàn)知，抗體的免疫原性主要位于抗體 恒定區(qū)(Fc)段，而識別抗原的部分(抗體的可變區(qū))則抗原性較弱。通過適 當(dāng)?shù)姆椒ㄈコ驣g的Fc段而保留可變區(qū)Fv段，可以大大降低鼠單抗的免疫 原性而保留其識別抗原的特異性。人鼠嵌合型鼠抗人B淋巴細(xì)胞表面抗原CD20 單抗是該技術(shù)的典型代表，其研制方法是采用人B淋巴細(xì)胞來免疫Balb/C純 種小白鼠，然后通過鼠-鼠雜交瘤技術(shù)研制出抗人CD20單抗雜交瘤細(xì)胞株。通 過對該雜交瘤細(xì)胞株編碼抗人CD20免疫球蛋白可變區(qū)肽鏈的信使核糖核苷酸 (mRNA)的擴增、克隆以及測序，并將編碼該抗體可變區(qū)基因與人免疫球蛋白恒定區(qū)基因進(jìn)行重組表達(dá)，制成嵌合型人鼠CD20抗體(可變區(qū)為鼠源性，恒定 區(qū)為人源性的基因工程抗體)，使該抗體保留識別CD20抗原的特性，從而特異 性地識別人B系淋巴細(xì)胞包括表達(dá)該抗原的所有淋巴瘤細(xì)胞、白血病細(xì)胞以及 正常細(xì)胞，而消除了由鼠源性恒定區(qū)對人體產(chǎn)生免疫反應(yīng)的缺點，從而起到有 效的治療作用。該抗體的臨床應(yīng)用已經(jīng)使B細(xì)胞系腫瘤的治療進(jìn)入了一個嶄新 的時代。要使一個鼠源性單抗能在臨床病人體內(nèi)反復(fù)使用的關(guān)鍵是鼠源性抗體 的人源化基因改造，而人源化基因抗體研制的關(guān)鍵是該鼠源性抗體可變區(qū)基因 的序列，因為抗體靶向作用的關(guān)鍵是該抗體的可變區(qū)，而編碼可變區(qū)基因序列 是決定每一個單抗各自靶向作用的關(guān)鍵。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個目的是提供ZCH-7-2F9 (CD14)鼠免疫球蛋白(單抗)輕鏈 可變區(qū)基因，具有SEQ ID NO 1的核苷酸序列，及以該核苷酸序列為模板，翻 譯成抗體輕鏈可變區(qū)蛋白或氨基酸序列SEQ ID NO 2。本發(fā)明提供的是鼠抗人 酯多糖受體(國際命名CD14，抗體克隆名ZCH-7-2F9)單克隆抗體輕鏈可變 區(qū)基因。
本發(fā)明的另一個目的是提供ZCH-7-2F9 (CD14)鼠免疫球蛋白輕鏈可變區(qū) 基因在制備治療急性單核細(xì)胞性白血病藥物中的應(yīng)用。
采用單抗靶向治療某種特定血液腫瘤的基本條件是抗體必須能識別某種 血液腫瘤細(xì)胞膜抗原。ZCH-7-2F9單抗具有良好的識別急性單核細(xì)胞白血病細(xì) 胞膜CD14抗原而不識別其他組織、細(xì)胞成分的特性，體外實驗表明，2F9免疫 毒素對2F9陽性的急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞具有良好的選擇性殺傷作用，而對 2F9陰性的細(xì)胞卻無作用，因此，該抗體具有潛在治療急性單核細(xì)胞性白血病 的應(yīng)用前景。
本發(fā)明提供的ZCH (Zhejiang Children' s Hospital) -7-2F9 (以下簡稱 2F9)是以末端脫氧核糖核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TdT)陽性小兒急性髓系-淋巴細(xì)胞系 雙克隆白血病復(fù)發(fā)時的白血病細(xì)胞作為免疫原，致敏Balb/C純種小白鼠，通 過鼠一鼠雜交瘤單抗技術(shù)研制成功的鼠抗人白細(xì)胞分化抗原酯多糖受體[國際 分化簇(CD)命名為CD14]的單抗"]，該抗體已在第6屆國際人類白細(xì)胞分化抗 原協(xié)作組會議(HLDA6)上進(jìn)行了全面鑒定并獲得了分化簇(CD)命名^。由于 同一 CD號的單抗，其鼠免疫球蛋白亞類、與細(xì)胞的反應(yīng)譜及某些生物學(xué)特性 有所不同，某個抗體有它的特殊性，如2F9抗體屬鼠免疫球蛋白Grc輕鏈(IgGlK 亞類)，而我國國內(nèi)中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液學(xué)研究所僅有的另一個CD14克隆
(HI222)，屬IgM亞類w。 2F9的反應(yīng)特性除與國際上其他CD14克隆類似外， 尚有識別未分化型急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞(AML—M5a)的能力"'31，后者大多 數(shù)CD14抗體無此功能，為2F9單抗用于M5a白血病的診斷和導(dǎo)向治療提供分
子基礎(chǔ)。
由于鼠抗人CD14抗體ZCH-7-2F9并非天然存在，而是需要刻意應(yīng)用特定 的抗原進(jìn)行免疫致敏動物，然后通過細(xì)胞融合、篩選、鑒定等一系列繁瑣而復(fù) 雜的技術(shù)過程研制而成，且到目前為止，國際上尚無其他克隆的鼠抗人CD14 單抗免疫球蛋白輕鏈基因有測序的文獻(xiàn)報道，而本發(fā)明完成了對該抗人CD14 抗體(ZCH-7-2F9)輕鏈可變區(qū)基因的克隆和測序?；谠摶蛐蛄兴兄频?人源化基因工程抗體將可能對臨床急性單核細(xì)胞性白血病耙向治療具有十分 重要的應(yīng)用價值。


圖1為高純度的2F9單克隆細(xì)胞株的篩選實線為CD14 — PE，影印為 2F9+GAM Ig-FITC。
圖2為PCR擴增VL2F9、 VH卿基因及重組質(zhì)粒pGEM -T Easy/VL、 pGEM -T Easy/VH的瓊脂糖電泳鑒定。
圖3抗人CD14抗原單抗ZCH-7-2F9的輕鏈可變區(qū)基因(VL2F9)序列(兩 個紅色箭頭之間的序列)。
圖4為完整2F9抗體與Genistein偶合制成的免疫毒素(2F9-Gen)對 2F9(CD14)陽性白血病細(xì)胞(急性單核細(xì)胞白血病，AML-M5)革巴向殺傷作用觀 察，并以2F9陰性的急性粒細(xì)胞白血病部分分化型(AML-M2)細(xì)胞作為陰性對 照。PBS為磷酸鹽緩沖液，Gen為游離三羥基異黃酮，純化2F9為純化的2F9 鼠免疫球蛋白IgGl。
具體實施例方式
本發(fā)明結(jié)合實施例，作進(jìn)一步的說明。
實施例一本發(fā)明l個基因的核苷酸序列及氨基酸序列
1、抗人CD14抗原單抗ZCH-7-2F9鼠免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)基因(VL2F9)的 核苷酸(SEQ ID NO 1)及氨基酸序列(SEQ ID NO 2)。 實施例二 本發(fā)明通過下列步驟獲得
1、 ZCH-7-2F9單抗的研制基本按Koller&Milstein報告的鼠-鼠雜交瘤 經(jīng)典方法進(jìn)行，以髓/淋混合型(雙克隆)急性白血病(HAL)復(fù)發(fā)時的白血病細(xì) 胞[已轉(zhuǎn)變?yōu)槟┒嗣撗鹾颂呛塑账徂D(zhuǎn)移酶(TdT)陽性的急性髄細(xì)胞性白血病
(AML)，其免疫表型為HLA-DR+， CD13+， CD33+， TdT+， CD19-， CD7-， CD41a-] 作為免疫原，將107白血病細(xì)胞給8周齡雌性Balb/C小鼠作腹腔注射，每周一 次，共4次，于第4次注射后第3天，脫臼殺死小鼠，無菌取脾細(xì)胞與處于對 數(shù)生長期的小鼠骨髓瘤細(xì)胞株NS-1細(xì)胞按6:1混合，以5(nn聚乙二醇(PEG，美 國Sigraa公司，分子量3350道爾頓)溶液作為融合媒介進(jìn)行細(xì)胞融合，于96 孔板(美國Falcon公司)中進(jìn)行選擇性培養(yǎng)。于融合后第9 20天，隔日用免 疫原細(xì)胞對培養(yǎng)上清進(jìn)行間接免疫熒光法(I I F)篩選。陽性孔細(xì)胞經(jīng)3次克 隆化并連續(xù)2次100%孔達(dá)到陽性，即建立了能持續(xù)分泌2F9單抗的雜交瘤細(xì) 胞株。經(jīng)8個多月的連續(xù)傳代培養(yǎng)和反復(fù)凍融，其分泌2F9單抗的能力穩(wěn)定。 以其腹水(熒光法效價l:3200)或培養(yǎng)上清(熒光法效價1:16)作為2F9單抗的 來源。
2、最佳克隆的篩選將凍存于液氮(-196。C)中的2F9細(xì)胞復(fù)蘇后進(jìn)行亞 克隆培養(yǎng)，獲得5孔單克隆細(xì)胞群，通過異硫氰酸熒光素標(biāo)記的羊抗鼠免疫球 蛋白(GAM Ig-FITC)間接標(biāo)記法比較各單克隆細(xì)胞群培養(yǎng)上清與進(jìn)口藻紅蛋 白標(biāo)記的CD14單抗(CD14-PE，克隆名LeuM3)在正常單核細(xì)胞上的平均熒 光強度，參見圖l和表l。根據(jù)兩者平均熒光強度的對比，從中篩選出2個最 佳亞單克隆細(xì)胞株93A10和94D6，選用93A10作進(jìn)一步的實驗。
表l. 2F9最佳亞克隆細(xì)胞株的篩選(單位平均熒光強度指數(shù))
亞克隆CD14-PE2F9+GAM Ig-FITC
518. 48一
94D6145. 8175. 16
93A10148. 16199. 54
93G7143. 3182. 26
94H12141.01127. 89
93H11138. 79U5.09
"—"陰性對照。
3. 2F9輕鏈基因(VL2F9)的擴增 3. 1 總RNA的抽提和處理 收集最佳克隆(93A10)的2F9雜交瘤細(xì)胞及鼠骨髓瘤細(xì)胞株NS—l細(xì)胞分別 約8X 106，以核糖核酸(RNA)抽提試劑盒(TRIZOL液)按說明書步驟抽提總RNA。 最后溶于25ul DEPC (diethyl-pyrocarbonate，焦碳酸二乙酯)水中，并加 入RNasin(核糖核苷酸酶抑制劑)至終濃度為l U/u 1 (單位/微升)。紫外 分光光度計測定A260、 A280及其比值，1 X瓊脂糖電泳觀察總RNA。進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄 -多聚酶鏈反應(yīng)(RT—PCR)前，各取2u 1 2F9及NS — 1總RNA，按照RQ1 (無RNA 酶的DNA酶試劑盒)說明的方法，消化總RNA中污染的基因組DNA。 3. 2總RNA的抽提
(1) 計數(shù)細(xì)胞，共8xl()6個活細(xì)胞;
(2) 常溫下10O0轉(zhuǎn)/分鐘(rpm)離心15分鐘，棄上清；
(3) 沉淀中加入無菌生理鹽水后在lOOOrpra條件下離心15分鐘，重復(fù)洗滌2
次；
(4) 向沉淀中加入8ml TRIZOL (1姐1/106細(xì)胞)，立即用5ml無菌針筒反復(fù)抽 打剪切數(shù)分鐘；
(5) 將上述TRIZ0L溶液按lml/管轉(zhuǎn)入1. 5ml印pendorf管中，室溫下靜置5 分鐘；
(6) 每管加入0.2ml氯仿，劇烈搖動15秒，室溫下靜置10分鐘；
(7) 4° C下12000g離心15分鐘，將水相轉(zhuǎn)入新的1. 5ml的印pendorf管 中，每管加入0.5ml異丙醇，立即搖勻，室溫下靜置10分鐘；
(8) 4。 C下，12000g離心IO分鐘;
(9) 棄上清，每管加入1.5ml 75%乙醇，混勻，4° C下，7500g離心5分鐘， 棄上清；
(10) 真空干燥機中晾干，每管加入25 u 1無RNA酶的DEPC水溶解沉淀，-80° C
冰箱保存。 3. 3總RNA濃度的測定
取出2u 1新抽提的總RNA，加入98 u 1 DEPC水混勻，紫外分光光度計 (GeneQ麵tn)測定260吸光值(A260)及280吸光值(A280), RNA實際 濃度用如下公式計算.-
<formula>formula see original document page 7</formula>
3. 4總RNA凝膠電泳:
取新抽提的總RNA 3" 1加入電泳上樣緩沖液5n 1， 1%瓊脂糖凝膠內(nèi)含 溴乙咬(EB)濃度0. 5pg/ml，經(jīng)100V直流電壓下電泳5分鐘，凝膠成像系統(tǒng)觀 測結(jié)果并攝像保存。
3.5總RNA的處理取總RNA 1 pl十無RNA酶的DNA酶(RNase-free Dnase) (1 U/iU) 10 Pl+ RNasin (40 U/nl) 1 " 1 +氯化鎂(25mM) 1 ul ，總量達(dá)13ul，經(jīng)37° Cxl小時，90° C x 5分鐘孵浴后立即置冰上待用。 3.6 RT—PCR
按照說明書，將RQ1無RNA酶的DNA酶處理過的總RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄(25pl體 系)，并用DNA純化試劑盒(QIAquick)純化mRNA/cDNA雜交雙鏈。取純化的cDNA 2. 1進(jìn)行PCR。
3.6.1 RT反應(yīng)體系取RQ1處理過的總RNA 13pl+寡聚脫氧胸苷
1.5 ul，總量達(dá)14.5uL，經(jīng)65° C預(yù)變性5分鐘，立即置冰上，
加入以下試劑DEPC水2.5 ul+ 5倍緩沖液5 ul十25mM dNTP (脫氧核 苷混合物)0.5 ul十RNA酶抑制劑1.5 "l+逆轉(zhuǎn)錄酶(200 U/VL) 1 ul 至總體積25 ul，經(jīng)37° C， 30分鐘孵浴以合成互補脫氧核糖核苷酸(cDNA)， 置95°C 5分鐘，然后移至4°C冰浴備用。
3.6.2 PCR體系
(1) 50u 1的PCR反應(yīng)體系:2. 5"l純化的2F9或NS—lcDNA， 10p頂ol的輕 鏈可變區(qū)上下游引物各l"l， 0. 5pl 25mM的dNTP， 5^1 10X高保真PCR緩沖液， 2)il 50mMXMgS04 (硫酸鎂)溶液，0. 2nl高保真Taq聚合酶(Platinum Taq High Fidelity);引物序列如下
輕鏈可變區(qū)5，引物序列GATATCCAGATGACACAGACT 輕鏈可變區(qū)3'引物序列GGATACAGTTGGTGCAGCATC
(2) 反應(yīng)條件94。C預(yù)變性2分鐘，94。C變性30秒，57。C退火30秒，72°C 延伸30秒，共30個循環(huán)；
(3) 最后一個循環(huán)完成后，加入lpl Taq DNA Polymerase (Taq DNA聚合 酶)72。C延伸7分鐘；
(4) 取5pl PCR產(chǎn)物進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳，同時加標(biāo)準(zhǔn)分子量標(biāo)志 物DL2000，鑒定PCR產(chǎn)物片斷大小，命名為VL沙9基因。結(jié)果可觀察到350堿 基對(bp)左右的VU9條帶，而以NS-l細(xì)胞cDNA擴增無陽性條帶出現(xiàn)。將前 述陽性條帶切膠回收純化得到VL鵬，濃度分別為13. 52ug/ml和17.84" g/ffll。
以作為該雜交瘤融合對象的NS—1細(xì)胞cDNA為模板的PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果未見 擴增條帶(圖2)。
4. VL2F9基因的擴增產(chǎn)物的克隆和鑒定將VL鵬基因片段通過連接酶分別 與克隆載體pGEM ~T Easy連接，獲得的連接產(chǎn)物pGEM ^T Easy/VL，通過轉(zhuǎn)化 DH5oc感受態(tài)細(xì)菌，得到數(shù)十個白色菌落和數(shù)個藍(lán)色菌落，分別挑取4個白色菌 落進(jìn)行質(zhì)粒擴增，抽提后進(jìn)行核酸限制性內(nèi)切酶EcoRI酶切處理，1%瓊脂糖 電泳結(jié)果均可見350bp左右的目的片段，參見圖2,其中M:低核糖核苷酸(DNA) 標(biāo)準(zhǔn)分子量標(biāo)志物；1: VL，基因；2: NS-1輕鏈可變區(qū)基因(VLVS—》；5 8: 重組質(zhì)粒pGEM -T Easy/VL的EcoRI酶切。
5. VL2F9基因序列測定和分析
對陽性重組質(zhì)粒純化后進(jìn)行測序(圖3) ， VL鵬基因符合小鼠Ig可變區(qū)框 架結(jié)構(gòu)。VW9基因全長321bp (見SEQ ID N0 2)，編碼107個氨基酸(見SEQ ID NO 4)，在NCBI上進(jìn)行檢索，發(fā)現(xiàn)此輕鏈可變區(qū)基因與小鼠IgK鏈的同 源性達(dá)97% ，氨基酸序列與小鼠Ig k鏈的同源性達(dá)95% ，歸屬于小鼠Ig的V k 基因。氨基酸序列分析結(jié)果顯示，輕鏈可變區(qū)含有明確的4個框架區(qū)(FR)和 3個抗原決定簇互補區(qū)(CDR)，在第23位和第88位為特征性半胱氨酸(Cys)。 VL，基因序列框架
1 26 FR1 27 32 CDR1 33 50 FR2 51 53 CDR2 54 88 FR3 89 97 CDR3 98 107 FR4
實施例三 為證實2F9抗體的潛在臨床治療應(yīng)用前景，我們將純化的2F9 鼠源性完整抗體與三羥基異黃酮(Genistein，簡稱Gen)偶合制成2F9抗體的免 疫毒素(2F9-Gen)，觀察其對2F9陽性(急性單核細(xì)胞性白血病，AML-M5) 和陰性(急性部分分化型粒細(xì)胞白血病AML-M2)細(xì)胞進(jìn)行耙向殺傷研究，結(jié)果發(fā) 現(xiàn)，2F9-Gen對AML-M5細(xì)胞具有很強的選擇性殺傷作用，經(jīng)37。C48小時孵浴 培養(yǎng)后，2F9-Gen組的細(xì)胞存活率僅5X，明顯高于對照組，且2F9-Gen對2F9 陰性的AML-M2卻無殺傷作用，說明2F9-Gen具有良好的導(dǎo)向殺傷AML-M5的作
用(圖4)，其中PBS為磷酸鹽緩沖液，Gen為游離三羥基異黃酮，純化2F9為 純化的2F9鼠免疫球蛋白IgGl。
無需進(jìn)一步詳細(xì)闡述，相信采用前面所公開的內(nèi)容，本領(lǐng)域技術(shù)人員可最 大限度地應(yīng)用本發(fā)明。因此，前面的實施方案應(yīng)理解為僅是舉例說明，而非以 任何方式限制本發(fā)明的范圍。
本發(fā)明涉及的序列 〈110〉浙江大學(xué)
<120〉鼠抗人酯多糖受體抗體輕鏈可變區(qū)基因及用途 〈160〉 4
<170〉 Patent In Version 2. 1
〈210〉 1 〈211〉 321 〈212〉腿 <213〉人工序列 <220〉 <221〉 <222〉
<223〉 93 a75 c71 g 82 t <400> 1
GATATCCAGA TGACACAGAC TACATCCTCC CTGTCTGCCT CTCTGGGAGA CAGAGTCACC ATCAGTTGCA GTGCAAGTCA GGGCATTAGC MTTATTTM ACTGGTATCA GCAGMACCA GATGGAACTG TTMACTCCT GATCTATTAC ACATCMGTT TACACTCAGG AGTCCCATCA AGGTTCAGTG GCAGTGGGTC TGGGACAGAT TATTTTCTCA CCATCAGCM CCTGGAACCT GMGATTTTG CCACTTACTT TTGTCAGCAG TATAGTMGC CTCCGTACAC GTTCGGAGGG GGGACCAAGT TGGMATAAA A
<210> 2 <211〉 127 <212>
〈213〉人工序列 〈220〉 〈221〉 <222> <223> 〈400〉 2
DIQMTQTTSS LSASLGDRVT ISCSASQGIS NYL賄QQKG PDTVKLLIYY TSSLHSGVPS 60 RFSGSGSGTD YFLTISNLEP EDFATYFCQQ YSKPPYTFGG GTKLEIK 107
<210> 3 <211> 21 〈212〉
60 120 180 240 300 321
〈213>人工序列
〈220〉
〈221〉
<222〉
<223>輕鏈可變區(qū)5'引物序列 〈400〉 3
GAT ATC CAG ATG ACA CAG ACT
〈210〉 4 〈211〉 21 〈212〉
<213〉人工序列
〈220〉
〈221〉
〈222〉
<223>輕鏈可變區(qū)3'引物序列 〈400〉 4
GGA TAC AGT TGG TGC AGC ATC 本發(fā)明涉及的部分參考文獻(xiàn)
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權(quán)利要求
1.鼠抗人酯多糖受體抗體輕鏈可變區(qū)基因，國際命名CD14，抗體克隆名ZCH-7-2F9，具有SEQ ID NO 1的核苷酸序列，及以該核苷酸序列為模板，翻譯成抗體輕鏈可變區(qū)蛋白或氨基酸序列SEQ ID NO2。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的鼠抗人酯多糖受體抗體輕鏈可變區(qū)基因在制備 治療急性單核細(xì)胞性白血病藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供鼠抗人酯多糖受體抗體輕鏈可變區(qū)基因，國際命名CD14，抗體克隆名ZCH-7-2F9，具有SEQ ID NO 1和以該核苷酸序列為模板，翻譯成抗體輕鏈可變區(qū)蛋白或氨基酸序列SEQ ID NO 2。本發(fā)明提供了抗人CD14抗體(ZCH-7-2F9)輕鏈可變區(qū)基因的克隆和測序?；谠摶蛐蛄兴兄频娜嗽椿蚬こ炭贵w將可能對臨床急性單核細(xì)胞性白血病靶向治療具有十分重要的應(yīng)用價值，可在制備治療急性單核細(xì)胞性白血病藥物中的應(yīng)用。
文檔編號C12N15/13GK101173284SQ20071006665
公開日2008年5月7日 申請日期2007年1月9日 優(yōu)先權(quán)日2007年1月9日
發(fā)明者寧鉑濤, 江 曹, 湯永民 申請人:浙江大學(xué)