專利名稱：一種奶牛飼料酵母培養(yǎng)物添加劑及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及生物制品技術領域，尤其涉及用于奶牛飼料的生物添加劑及其制備方法。
背景技術：
牛奶被譽為“綠色食品、白色血液”。近年來，隨著中國經濟持續(xù)、穩(wěn)定的發(fā)展和人均生活水平的不斷提高，國家和各地方紛紛把奶業(yè)列入了突出發(fā)展的產業(yè)。近幾年來，國內乳品市場的規(guī)模大幅度增長，從2000年到2005年，奶類產量增長了211.7％，但與發(fā)達國家相比，我國奶業(yè)的整體發(fā)展水平還不高。據(jù)權威機構分析，我國城鎮(zhèn)居民人均消費每年也只有20公斤左右，是世界平均水平的1/5，而發(fā)達國家人均每年消費量則達到320公斤，是我國的16倍，差距極大。牛奶的產量和消費量直接體現(xiàn)了一個國家的國民經濟發(fā)展水平、農業(yè)結構優(yōu)化程度和國民的營養(yǎng)狀況。我國奶業(yè)目前的生產與消費水平，與我國整體的經濟發(fā)展水平是不相符的，根據(jù)我國的產業(yè)發(fā)展政策及經濟發(fā)展預測，未來的10年中，中國將成為世界上最大的牛奶消費市場。我國奶業(yè)的發(fā)展存在著極大潛力和市場空間。
乳脂肪是牛奶的主要成分之一，在牛奶中含量一般為3％-5％。由于乳脂率與乳蛋白率、干物質和熱能含量等均呈正相關，而且乳脂是左右乳制品風味的主要因子，所以通常把乳脂率視為乳質量的標志。在我國，除黑龍江、內蒙古等地乳脂率可達3.4％-3.6％，其它地區(qū)大多在3.0％-3.2％，而在日本目前平均含脂率已達3.8％。而從奶牛單產水平來看，目前我國奶牛年平均單產只有4000千克左右，約為美國奶牛年單產的一半水平。因此，我國奶牛產奶量及奶質與發(fā)達國家及地區(qū)存在著較大的差距。提高奶牛的產奶量和乳脂率已成為我國當前奶牛產業(yè)亟需要解決的問題。
目前在奶牛養(yǎng)殖中，主要通過下面幾種方式來提高奶質和奶牛單產一是通過育種手段來提高奶牛的種質質量；二是添加營養(yǎng)物質，改善日糧結構，提高飼養(yǎng)水平；三是通過添加適量優(yōu)質安全的飼料添加劑，調整奶牛的瘤胃內環(huán)境，以改善營養(yǎng)利用和能量轉換。因為奶牛生長所需的50％-80％的蛋白質和約80％的能量均由瘤胃內微生物菌群對飼料進行分解后所提供，因此調控瘤胃內環(huán)境或直接改變瘤胃微生物的組成是提高奶牛生產性能的重要途徑之一。國內外大量的研究表明，在相同的營養(yǎng)條件和飼養(yǎng)水平下，日糧中添加適量奶牛專用的酵母培養(yǎng)物，能有效地促進奶牛瘤胃中微生物總量的增加，尤其是可以有效促進瘤胃中纖維素分解菌和乳酸利用菌的濃度，以加快纖維消化速率和促進瘤胃中pH穩(wěn)定性，提高飼料的轉化及奶牛的采食量，改善揮發(fā)性脂肪酸比例，增加氨的利用，增加微生物蛋白質量，提高蛋白質品質，從而提高奶牛的產奶量及奶質。國外大量的應用試驗已證明，在奶牛日糧中添加酵母培養(yǎng)物，可提高奶牛的產奶量和乳脂率。同時酵母培養(yǎng)物中，含有豐富的氨基酸、維生素、酶及一些重要的輔助因子，可以有效提高家畜對飼料中粗蛋白、粗纖維、礦物元素、維生素等營養(yǎng)成分及能量的消化、吸收；而作為直接飼用活菌制劑，酵母培養(yǎng)物還能促進幼、病奶牛胃腸發(fā)育和功能的恢復提高，進而增強畜體免疫力和抗病力，減少環(huán)境應激和生理應激所帶來的不利影響，提高奶牛的生產性能。因此，酵母培養(yǎng)物在牛奶生產中具有重要的應用價值和意義。
近十年來，酵母培養(yǎng)物作為一種直接飼用的微生物類飼料添加劑，用以提高反芻動物生產性能，在國內得到較多的關注其中，有研究利用啤酒糟(啤酒酵母)飼喂奶牛，對奶牛產奶有較好的促進作用；中科院畜牧所研究了酵母培養(yǎng)物對瘤胃內微生物區(qū)系及日糧發(fā)酵的影響，對酵母培養(yǎng)物對反芻動物的作用機理進行了探討；東北農業(yè)大學，申請?zhí)枮?00510009950.1，名稱為“改善奶牛生產性能的酵母培養(yǎng)物及其培養(yǎng)方法”的發(fā)明專利申請，對以扣囊復膜孢酵母為菌種發(fā)酵所制得的產品，有特定的使用時期，主要應用于奶牛泌乳前期(0-140d)，同時其作用僅局限于提高產奶量而未涉及提高奶品質-乳脂率。在國外，如美國，酵母培養(yǎng)物已存在50多年，是一種被廣泛接受的飼料產品。據(jù)調查，50％的美國奶牛改良協(xié)會的頂級牛群和全美國35％以上的商品奶牛在其一種或幾種日糧中添加酵母培養(yǎng)物或酵母產品。而在歐盟、澳大利亞、韓國等許多國家在酵母培養(yǎng)的開發(fā)及應用上都開展了廣泛的研究，并均已形成了物化產品。目前，許多國外生產的奶牛用酵母培養(yǎng)物產品已進入我國市場，如韓國生產的賽克靈、YC-100，美國的益康“XP”等。這些產品在國內進行了應用效果試驗，在特定的日糧條件下，對提高奶產量及奶質均有較明顯的作用，但國外產品也同時存在下列問題一是價格比較昂貴，如益康“XP”的價格為每噸10000多元；二是不同酵母培養(yǎng)物的作用往往受不同日糧類型及組成的影響較大，而目前國內外的奶牛在日糧類型及飼養(yǎng)水平上還存在著很大的差異，因此盡快地選育出當?shù)氐慕湍妇N并輔以最佳的制備工藝，開發(fā)出能適應我國目前奶牛日糧條件和飼養(yǎng)水平的奶牛飼料酵母培養(yǎng)物添加劑，有著重要的現(xiàn)實意義。

發(fā)明內容
本發(fā)明目的是，針對國外奶牛飼料酵母培養(yǎng)物添加劑所存在的價格比較昂貴與其作用不適應我國目前奶牛日糧類型及組成等問題，提供一種能適應我國目前奶牛飼料類型及組成的，菌數(shù)含量高，原材料豐富，價格低廉，質量穩(wěn)定，能有效提高產奶量與乳脂率的奶牛專用飼料酵母培養(yǎng)物添加劑；本發(fā)明的另一目的是提供制備該添加劑的高效酵母菌株；本發(fā)明的再一目的是提供該添加劑的具體制備方法。
本發(fā)明目的通過以下技術方案來實現(xiàn)本發(fā)明釀酒酵母菌菌株的分離、篩選與保藏于2001年從杭州、金華及北京、沈陽、南京等不同地區(qū)采集堆積牛糞、豬糞、雞糞的土壤樣品，利用不同類菌種常規(guī)培養(yǎng)基從中定向分離出酵母菌、放線菌和芽孢桿菌共71株，并進行菌株純化，其中分離純化得到酵母菌共21株。將分離獲得的酵母菌株和實驗室保藏及引進的酵母菌株為對照，共53個分別在無菌操作下，取一環(huán)斜面菌種接入60ml PDA馬鈴薯液體培養(yǎng)基中，于28℃，轉速220轉/分的搖床中，培養(yǎng)24小時；將培養(yǎng)好的液體菌種，按1％的接種量接入滅菌冷卻后的固體發(fā)酵培養(yǎng)基(豆粕86％，麩皮7.45％，葡萄糖3.5％，尿素1.0％，K2HPO42.0％，生物素0.05％，)中，攪拌均勻，于28℃培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)64h，出料，于50℃烘干，粉碎后進行有效活菌數(shù)測定，根據(jù)計數(shù)結果從自選的21株酵母菌中初篩得到15株菌數(shù)高的菌株。將這15株菌株按上述同樣條件發(fā)酵烘干后，粉碎，過60目篩，作為待測樣品；分別將待測樣品按2.5％的添加量(每管200mg)與日糧精粗比為40∶60的日糧(精糧組成10％豆粕、10％菜粕和80％玉米；粗糧組成20％青貯玉米和80％羊草)混合均勻后，加入瘤胃管中，加樣時把樣品直接送入管底，不能碰壁，以免造成誤差；另取當天清晨瘺管羊的瘤胃液，與緩沖液(NH4HCO34.0g；NaHCO335.0g；加蒸餾水至1000ml)按1∶2混合均勻，按每管30ml混合液加入瘤胃管中，與待測樣品混勻后，排氣，于39℃水浴中，轉速為30rpm/min，進行反應，每個樣品重復3管，24h后管上的刻度讀數(shù)即為管內菌株的產氣量；根據(jù)產氣量結果進行數(shù)據(jù)分析，其中，釀酒酵母菌株WY238與對照組有顯著差異，產氣量明顯高于對照組，因此確定菌株WY238為酵母培養(yǎng)物發(fā)酵用菌種并申請菌種保藏，該菌株取樣分離自浙江金華。
保藏菌株的形態(tài)、培養(yǎng)、生理、生化等特征菌株WY238屬釀酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae Meyen exHansen)；在麥芽汁液體培養(yǎng)基中生長良好，細胞球形，卵形至橢圓形，大小為(4.8-7.2)×(4.8-9.6)um；在麥芽汁瓊脂斜面上培養(yǎng)時菌落奶酪狀，乳白色，表面平滑，邊緣整齊。
該菌株已于2007年4月20日，在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏編號CGMCC No.2013。
一種奶牛飼料酵母培養(yǎng)物添加劑，該添加劑可按以下方法制得(1)培養(yǎng)基的配制，其中a)斜面培養(yǎng)基的配制馬鈴薯葡萄糖固體培養(yǎng)基，備用；b)液體菌種培養(yǎng)基的配制馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基，備用；c)固體菌種培養(yǎng)基的配制豆粕80-93％，麩皮3-15％，葡萄糖2-5％，尿素0.5-1.5％，K2HPO41-3％，生物素0.01-0.10％，備用；(2)斜面菌種的培養(yǎng)將保藏號CGMCC No.2013的釀酒酵母菌株WY238接種于步驟(1)斜面培養(yǎng)基上于28℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時，取出直接應用或放入冰箱中冷藏備用；(3)液體菌種的制備在無菌操作下，取一環(huán)酵母菌株WY238斜面菌種接入60ml步驟(1)液體菌種培養(yǎng)基中，于28℃，轉速220轉/分的搖床中，培養(yǎng)24小時，取出直接應用或放入冰箱中冷藏，備用；(4)固體菌種放大培養(yǎng)將固體培養(yǎng)基與水按1∶1比例混勻，放入滅菌鍋中121℃，0.1Mpa，滅菌30分鐘，取出自然冷卻；按固體培養(yǎng)基重1％吸取液體菌種，接入同等量的無菌水中于室溫活化菌種1小時后接入固體培養(yǎng)基；拌勻后放入30℃培養(yǎng)間中，培養(yǎng)72小時后取出，放入45℃-50℃的烘房中烘干；(5)批量產品的制備固體培養(yǎng)基按步驟(4)同樣比例條件加水拌勻、滅菌至冷卻；按制備菌劑重量的1％稱取步驟(4)的固體菌種，放入無菌水中活化菌種一小時后接入固體培養(yǎng)基；放入培養(yǎng)間，關閉門窗，料厚1.5-2厘米，前期室溫控制在28℃-30℃，待料溫上升至40℃以上后，打開門窗、地上灑水或利用電風扇把料溫控制在40℃至50℃，培養(yǎng)72小時后放入45℃-50℃的烘房中烘干，粉碎，裝袋后制成奶牛飼料酵母培養(yǎng)物添加劑。
一種制備所述奶牛飼料酵母培養(yǎng)物添加劑的方法，按以下步驟進行(1)培養(yǎng)基的配制其中a)斜面培養(yǎng)基的配制馬鈴薯葡萄糖固體培養(yǎng)基，備用；b)液體菌種培養(yǎng)基的配制馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基，備用；c)固體菌種培養(yǎng)基的配制豆粕80-93％，麩皮3-15％，葡萄糖2-5％，尿素0.5-1.5％，K2HPO41-3％，生物素0.01-0.10％，備用；(2)斜面菌種的培養(yǎng)將保藏號CGMCC No.2013的釀酒酵母菌株WY238接種于步驟(1)斜面培養(yǎng)基上于28℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時，取出直接應用或放入冰箱中冷藏備用；(3)液體菌種的制備在無菌操作下，取一環(huán)酵母菌株WY238斜面菌種接入60ml步驟(1)液體菌種培養(yǎng)基中，于28℃，轉速220轉/分的搖床中，培養(yǎng)24小時，取出直接應用或放入冰箱中冷藏，備用；(4)固體菌種放大培養(yǎng)將固體培養(yǎng)基與水按1∶1比例混勻，放入滅菌鍋中121℃，0.1Mpa，滅菌30分鐘，取出自然冷卻；按固體培養(yǎng)基重1％吸取液體菌種，接入同等量的無菌水中于室溫活化菌種1小時后接入固體培養(yǎng)基；拌勻后放入30℃的培養(yǎng)間中，培養(yǎng)72小時后取出，放入45℃-50℃的烘房中烘干；(5)批量產品的制備固體培養(yǎng)基按步驟(4)同樣比例條件加水拌勻、滅菌至冷卻；按制備菌劑重量的1％稱取步驟(4)的固體菌種，放入無菌水中活化菌種一小時后接入固體培養(yǎng)基；放入培養(yǎng)間，關閉門窗，料厚1.5-2厘米，前期室溫控制在28℃-30℃，待料溫上升至40℃以上時，打開門窗、地上灑水或利用電風扇把料溫控制在40℃至50℃，培養(yǎng)72小時后放入45℃-50℃的烘房中烘干，粉碎，裝袋即成產品。
本發(fā)明的有益效果1、本發(fā)明采用了自行分離、篩選與保藏的釀酒酵母菌株WY238為培養(yǎng)菌種，并通過對該菌的習性研究與各因素的影響試驗，確定適合的C、N比，生長溫度、接種量和培養(yǎng)基的配方，輔以最適宜的制備工藝與方法，所制菌劑產品能較好適應我國目前奶牛飼料的類型及組成，取得好的飼料添加劑效果。
2、本發(fā)明產品所用原料豐富，價格低廉，一噸產品的價格在5000元上下，較進口產品如美國益康“XP”便宜一半左右；同時產品菌數(shù)含量較高，一般都在2-7×108個/克左右，而其它產品的菌數(shù)一般僅在幾千萬個左右，產品的質量也較穩(wěn)定。
3、奶牛飼料中添加本發(fā)明酵母培養(yǎng)物后取得了較理想的飼養(yǎng)效果，其中，能增加奶牛對干物質的采食量0.76％-1.95％(見表3)；可提高奶牛產奶量6.97％-8.20％(見表4)，并延緩了產奶量的下降趨勢；提高乳脂率3.78％-5.23％，降低乳糖率3.09-4.19％，對乳蛋白率、總固體、非脂乳固體的影響較小(見表5)。
具體實施例方式
本發(fā)明通過以下實施例對本發(fā)明作進一步的詳細說明。
實施例1(本發(fā)明產品的配方與制備方法1)葡萄糖分析純，國產；尿素46％，國產；K2HPO4分析純，國產；生物素VB，國產。
奶牛飼料酵母培養(yǎng)物添加劑按以下方法步驟制備(1)培養(yǎng)基的配制，其中固體培養(yǎng)基的配制馬鈴薯200g、葡萄糖2g、瓊脂2g、水1L，備用；液體培養(yǎng)基的配制馬鈴薯200g、葡萄糖2g、水1L，備用；固體菌種培養(yǎng)基的配制豆粕81％，麩皮15％，葡萄糖2.4％，尿素0.5％，K2HPO41.09％，生物素0.01％；(2)斜面菌種的培養(yǎng)將保藏號CGMCC No.2013的釀酒酵母菌株WY238接種于步驟(1)PDA斜面固體培養(yǎng)基上于28℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時，取出直接應用或放入冰箱中冷藏備用；(3)液體菌種的制備在無菌操作下，取一環(huán)酵母菌株WY238斜面菌種接入60ml步驟(1)PDA液體菌種培養(yǎng)基中，于28℃，轉速220轉/分的搖床中，培養(yǎng)24小時，取出直接應用或放入冰箱中冷藏，備用；(4)固體菌種放大培養(yǎng)將步驟(1)固體菌種放大培養(yǎng)基與水按1∶1比例混勻，放入滅菌鍋中121℃，0.1Mpa，滅菌30分鐘，取出自然冷卻；按固體培養(yǎng)基重1％吸取液體菌種，接入同等量的無菌水中于室溫中放置1個小時后接入固體培養(yǎng)基；拌勻后放入30℃的培養(yǎng)間中，培養(yǎng)72小時后取出，放入45℃-50℃的烘房中烘干；(5)批量產品的制備將步驟(1)固體菌種批量產品培養(yǎng)基以1∶1的比例加水攪拌均勻，在121℃，0.1Mpa，滅菌30分鐘，取出冷卻備用；按制備菌劑重量的1％稱取步驟(4)的固體菌種，放入無菌水中活化菌種一小時后接入固體培養(yǎng)基，拌勻；放入培養(yǎng)間，關閉門窗，料厚1.5-2厘米，前期室溫控制在28℃-30℃，待料溫上升至40℃以上時，打開門窗、地上灑水或利用電風扇把料溫控制在40℃至50℃，培養(yǎng)72小時后放入45℃-50℃的烘房中烘干，粉碎，裝袋即成產品。
實施例2(本發(fā)明產品的配方與制備方法2)本實施例固體菌種放大培養(yǎng)基與固體菌種批量產品培養(yǎng)基，均按豆粕86％，麩皮7.45％，葡萄糖3.5％，尿素1％，K2HPO42％，生物素0.05％的比例進行配比，其余制備方法均同于實施例1；實施例3(本發(fā)明產品的配方與制備方法3)批量產品制備時的固體菌種培養(yǎng)基，按豆粕88.5％，麩皮3％，葡萄糖4％，尿素1.4％，K2HPO43％，生物素0.10％的比例進行配比外，其余制備方法均同于實施例1；試驗例4(本發(fā)明產品與現(xiàn)有產品的應用效果對比試驗)選擇健康的荷斯坦泌乳牛33頭，按年齡、胎次、泌乳天數(shù)與日產奶量相近的進行隨機區(qū)組設計，分成試驗I組、試驗II組及CK，每組11頭，CK為對照組。預試期各組奶牛產奶量差異不顯著(p＞0.05)，詳見表1。
表1供試牛的基本情況

試驗在浙江東興實業(yè)有限公司伊康乳業(yè)分公司的奶牛場內進行，于2006年10月21日開始，預試期10天，11月1日進入正試期，2007年1月1日結束，試驗期60天。
三組營養(yǎng)水平完全相同(見表2)。正試期開始后，其它條件不變，試驗I組、試驗II組的日糧是在對照組日糧的基礎上分別添加實施例2的酵母培養(yǎng)物120g/頭·日和250g/頭·日，添加的酵母培養(yǎng)物與TMR混合后，每天一次性飼喂。對照組日糧中不添加任何抗生素或藥物添加劑。各組TMR配方完全相同，并且同一車攪拌完成。
表2試驗奶牛日糧配方及營養(yǎng)水平

試驗牛的飼養(yǎng)管理和生活環(huán)境完全相同，并有專人飼養(yǎng)、擠奶。牛只編號后在開放式固定槽位栓系飼養(yǎng)，固定料桶飼喂，自由飲水。每天分早、中、晚三次定量定位飼喂，三次機械擠奶，每次擠奶后由專人負責稱量記錄；每5天收集奶樣(每天三次奶的混合)測定乳脂率、乳糖率、乳蛋白率、總固體、非脂乳固體；TMR(Total Mixed Ration)喂量每次飼喂前由專人負責稱量上槽，以組為單位每天記錄每組牛的采食量，并取樣測定含水量以計算每頭牛每天的平均干物質采食量。
實驗結果表3添加YC對奶牛干物質采食量和日增重的影響

注在任意三個均數(shù)后用相同字母，表示三者差異不顯著(p＞0.05)，用不同字母表示三者差異顯著(p＜0.05)。
表4試驗前后及試驗各組產奶量的比較

注在任意三個均數(shù)后用相同字母，表示三者差異不顯著(p＞0.05)，用不同字母表示三者差異顯著(p＜0.05＝。
表5添加YC對試驗期乳成分的影響

注在任意三個均數(shù)后用相同字母，表示三者差異不顯著(p＞0.05)，用不同字母表示三者差異顯著(p＜0.05)。
小結3.1日糧中添加酵母培養(yǎng)物能顯著提高奶牛日增重，酵母培養(yǎng)物通過維持瘤胃pH穩(wěn)定，從而增加纖維消化菌、乳酸利用菌等有益微生物的數(shù)量，提高飼料纖維消化率，增加可用營養(yǎng)素，提高日增重。與對照組相比，試驗I組、試驗II組的日增重分別增加8.59％和15.04％，與對照組差異顯著。結果說明，添加酵母培養(yǎng)物能提高奶牛日增重，促進奶牛體重的恢復，添加量為250g/頭·日的試驗II組效果更好。
3.2從試驗結果可知，添加酵母培養(yǎng)物對奶牛產奶量有一定影響。試驗期奶牛處于產奶中后期，產奶量呈逐漸下降的趨勢，對照組產奶量的下降幅度為8.42％，而添加酵母培養(yǎng)物的試驗I組、試驗II組的下降幅度分別為2.02％和0.86％，與對照組有顯著差異，說明添加酵母培養(yǎng)物能延長奶牛的泌乳高峰期，延緩產奶量的下降，從而增加奶牛的產奶量；試驗期內試驗I組、試驗II組的產奶量分別比對照組提高6.97％和8.20％，差異顯著，而日喂250g/頭·日的試驗II組的效果更佳。
3.3添加酵母培養(yǎng)物對對提高奶牛的乳成分，特別是乳脂率有一定的促進作用。試驗I組、試驗II組的乳脂率分別比對照組提高3.78％和5.23％，這可能是因為使用YC后，牛瘤胃中幫助消化的有益細菌增加，纖維分解菌和乳酸利用菌的數(shù)量增加，改善了牛瘤胃內的代謝，促進了纖維素等消化，增加了乳脂的合成原料，從而增加牛乳乳脂率。對其它乳成分的影響不大。
權利要求
1.釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae Meyen ex Hansen)菌株WY238，其菌株保藏號為CGMCC No.2013。
2.一種奶牛飼料酵母培養(yǎng)物添加劑，該添加劑可用下述方法制得(1)培養(yǎng)基的配制，其中a)斜面培養(yǎng)基的配制馬鈴薯葡萄糖固體培養(yǎng)基，備用；b)液體菌種培養(yǎng)基的配制馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基，備用；c)固體菌種培養(yǎng)基的配制豆粕80-93％，麩皮3-15％，葡萄糖2-5％，尿素0.5-1.5％，K2HPO41-3％，生物素0.01-0.10％，備用；(2)斜面菌種的培養(yǎng)將保藏號CGMCC No.2013的釀酒酵母菌株WY238接種于步驟(1)斜面培養(yǎng)基上，于28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時，取出直接應用或放入冰箱中冷藏備用；(3)液體菌種的制備在無菌操作下，取一環(huán)釀酒酵母菌株WY238斜面菌種接入60ml步驟(1)液體菌種培養(yǎng)基中，于28℃，轉速220轉/分，搖床培養(yǎng)24小時，取出直接應用或放入冰箱中冷藏，備用；(4)固體菌種放大培養(yǎng)將固體培養(yǎng)基與水按1∶1比例混勻，放入滅菌鍋中121℃，0.1Mpa，滅菌30分鐘取出自然冷卻；按固體培養(yǎng)基重1％吸取液體菌種，活化1個小時后接入固體培養(yǎng)基；拌勻后放入30℃培養(yǎng)間，培養(yǎng)72小時后取出，放入45℃-50℃的烘房中烘干；(5)批量產品的制備固體培養(yǎng)基按步驟(4)同樣比例條件加水拌勻、滅菌至冷卻；按制備菌劑重量的1％稱取步驟(4)的固體放大菌種，活化一小時后接入固體培養(yǎng)基；放入培養(yǎng)間，關閉門窗，料厚1.5-2厘米，前期室溫控制在28℃-30℃，待料溫上升至40℃以上后，控制在40℃至50℃，培養(yǎng)72小時后放入45℃-50℃的烘房中烘干，粉碎，裝袋后制成奶牛飼料酵母培養(yǎng)物添加劑。
3.一種制備權利要求1所述添加劑的方法，其特征在于按以下步驟(1)培養(yǎng)基的配制其中a)斜面培養(yǎng)基的配制馬鈴薯葡萄糖固體培養(yǎng)基，備用；b)液體菌種培養(yǎng)基的配制馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基，備用；c)固體菌種培養(yǎng)基的配制豆粕80-93％，麩皮3-15％，葡萄糖2-5％，尿素0.5-1.5％，K2HPO41-3％，生物素0.01-0.10％，備用；(2)斜面菌種的培養(yǎng)將保藏號CGMCC No.2013的釀酒酵母菌株WY238接種于步驟(1)斜面培養(yǎng)基上，于28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時，取出直接應用或放入冰箱中冷藏備用；(3)液體菌種的制備在無菌操作下，取一環(huán)釀酒酵母菌株WY238斜面菌種接入60ml步驟(1)液體菌種培養(yǎng)基中，于28℃，轉速220轉/分，搖床培養(yǎng)24小時，取出直接應用或放入冰箱中冷藏，備用；(4)固體菌種放大培養(yǎng)將固體培養(yǎng)基與水按1∶1比例混勻，放入滅菌鍋中121℃，0.1Mpa，滅菌30分鐘，取出自然冷卻；按固體培養(yǎng)基重1％吸取液體菌種，接入同等量的無菌水中于室溫活化菌種1小時后接入固體培養(yǎng)基；拌勻后放入30℃的培養(yǎng)間，培養(yǎng)72小時后取出，放入45℃-50℃的烘房中烘干；(5)批量產品的制備固體培養(yǎng)基按步驟(4)同樣比例條件加水拌勻、滅菌至冷卻；按制備菌劑重量的1％稱取步驟(4)的固體放大菌種，放入無菌水中活化菌種一小時后接入固體培養(yǎng)基；放入培養(yǎng)間，關閉門窗，料厚1.5-2厘米，前期室溫控制在28℃-30℃，待料溫上升至40℃以上時，打開門窗、地上灑水或利用電風扇把料溫控制在40℃至50℃，培養(yǎng)72小時后放入45℃-50℃的烘房中烘干，粉碎，裝袋即成產品。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種奶牛飼料酵母培養(yǎng)物添加劑及其制備方法，屬于奶牛飼料生物添加劑及其制備技術領域。該添加劑可用以下方法制備以菌株保藏號CGMCC No.2013的釀酒酵母菌株WY238為菌種，經培養(yǎng)基的配制；斜面菌種與液體菌種的培養(yǎng)；固體菌種放大和批量產品的培養(yǎng)等步驟制備而成。本發(fā)明產品能較好適應我國目前奶牛飼料的類型及組成；所用原料豐富，價格低廉；產品菌數(shù)含量高，質量穩(wěn)定，能增加奶牛對干物質的采食量0.76％－1.95％，可提高奶牛產奶量6.97％－8.20％，并提高乳脂率3.78％－5.23％，取得較好的飼料添加劑效果?？稍谔砑觿┥a與奶牛飼養(yǎng)業(yè)推廣應用。
文檔編號A23L1/16GK101040691SQ200710068199
公開日2007年9月26日 申請日期2007年4月25日 優(yōu)先權日2007年4月25日
發(fā)明者湯江武, 姚曉紅, 吳逸飛, 吳新民 申請人:浙江省農業(yè)科學院