專(zhuān)利名稱(chēng)：診斷幽門(mén)螺桿菌感染的試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)用化學(xué)試劑，更具體地說(shuō)，涉及使用14C-UBT (UreaBreath Test,尿素呼氣試驗(yàn))來(lái)診斷幽門(mén)螺桿菌(Helicobacter pylori, Hp)感染的試劑背景技術(shù)用于檢測(cè)幽門(mén)螺桿菌(Hp)感染的14C-UBT試驗(yàn)以其無(wú)痛苦、無(wú)創(chuàng)傷、 準(zhǔn)確、快速、安全的特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于臨床。"C-UBT試驗(yàn)的敏感性和特異性 達(dá)90%以上，但是還存在約10%的錯(cuò)判率，主要發(fā)生在上消化道出血、近期 使用制酸劑、抗Hp藥物病人。如何提高這部份病人"C-UBT試驗(yàn)的準(zhǔn)確性率 是進(jìn)一步提高總體準(zhǔn)確性的關(guān)鍵。14C-UBT試驗(yàn)的錯(cuò)判分為假陽(yáng)性和假陰性。"C-UBT試驗(yàn)造成假陽(yáng)性的最 主要原因是在胃內(nèi)其它分泌尿素酶的細(xì)菌過(guò)生長(zhǎng)。 一般情況下，由于胃內(nèi)的高 酸環(huán)境，只有Hp能生存。若胃酸缺乏和胃腸瘀血，嚴(yán)重的萎縮性胃炎、長(zhǎng)期 使用制酸劑而停藥時(shí)間不夠長(zhǎng)、肝硬化等，可以發(fā)生其它分泌尿素酶的細(xì)菌過(guò) 生長(zhǎng)。"C-UBT試驗(yàn)造成假陰性的最主要原因是急性上消化道出血、檢査前使用 過(guò)Hp敏感藥物，如質(zhì)子泵抑制劑、鉍劑、抗生素。有文獻(xiàn)報(bào)道，上消化道出 血急性期可引起"C-UBT試驗(yàn)結(jié)果26.6%假陰性，而無(wú)并發(fā)癥的消化不良假陰 性?xún)H為3.3%;近期使用過(guò)質(zhì)子泵抑制劑可使"C-UBT試驗(yàn)假陰性率高達(dá)40%。 為此，現(xiàn)在推薦在出血停止一周、停藥1 2周才能進(jìn)行"C-UBT試驗(yàn)。然而,這種辦法在臨床上并不適用。因?yàn)樗嵯嚓P(guān)性疾病患者停用PPIs后癥狀會(huì)復(fù)發(fā)。 通過(guò)胃內(nèi)酸化再作"C-UBT可提高近期使用制酸劑病人的敏感性，酸化 試驗(yàn)是指在服用尿素["C]膠囊前30分鐘和服用膠襄時(shí)，飲下一定劑量的檸檬 酸水溶液，使胃內(nèi)的pH達(dá)到2左右。在該酸性環(huán)境下，Hp尿素酶會(huì)被強(qiáng)烈 激活，而其它細(xì)菌產(chǎn)生的尿素酶則失去活性，因?yàn)榍罢叩淖钸mpH為酸性，而 后者的最適pH為中性。這樣，胃內(nèi)經(jīng)酸化后， 一方面使被抑制的Hp尿素酶 活化，減少了 "C-UBT試驗(yàn)的假陰性率；另一方面使其它細(xì)菌過(guò)生長(zhǎng)產(chǎn)生的 尿素酶失去活性，減少了 "C-UBT試驗(yàn)假陽(yáng)性率，從而使"C-UBT試驗(yàn)的準(zhǔn) 確性進(jìn)一步提高。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提高"C-UBT試驗(yàn)的準(zhǔn)確性，降低"C-UBT試驗(yàn)的假陽(yáng) 性和假陰性。本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)發(fā)明目的的提供一種診斷幽門(mén)螺桿菌感染的試劑盒， 包括尿素["C]膠囊、C02集氣劑、閃爍液、吹氣用的導(dǎo)管，其特征在于，還包 括增敏劑。在本發(fā)明診斷幽門(mén)螺桿菌感染的試劑盒中，每劑所述增敏劑含擰檬酸l 5克。在本發(fā)明診斷幽門(mén)螺桿菌感染的試劑盒中，每劑所述增敏劑含蘋(píng)果酸l 5克。在本發(fā)明診斷幽門(mén)螺桿菌感染的試劑盒中，每劑增敏劑等量分裝為兩份。 在本發(fā)明診斷幽門(mén)螺桿菌感染的試劑盒中，所述增敏劑還包括甜味劑。 在本發(fā)明診斷幽門(mén)螺桿菌感染的試劑盒中，所述甜味劑是安賽蜜，每劑所 述增敏劑含安賽蜜0. 05 0. 5克。在本發(fā)明診斷幽門(mén)螺桿菌感染的試劑盒中，所述甜味劑是阿斯巴甜，每劑所述增敏劑含阿斯巴甜0. 05 0. 5克。本發(fā)明診斷幽門(mén)螺桿菌感染的試劑盒中包括增敏劑，能提高通過(guò)14C-UBT診斷幽門(mén)螺桿菌感染的準(zhǔn)確性，尤其提高消化道出血、近期使用制酸劑、抗Hp藥物病人進(jìn)行常規(guī)的"C-UBT診斷幽門(mén)螺桿菌感染的準(zhǔn)確性。此外，所述的增敏劑中包括甜味劑，改善了增敏劑的口感，方便病人服用。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1 一、材料和方法1、 實(shí)驗(yàn)對(duì)象十二指腸潰瘍(DU)并出血的住院病人28例。男23例， 女5例，年齡19 75歲，平均33歲。全部病例均為急診胃鏡診斷。F列病例 不納入研究年齡小于18歲，懷孕期及哺乳期婦女，殘胃，生命體征不穩(wěn)定。2、 實(shí)驗(yàn)方法病人住院后，接受常規(guī)H2受體阻滯劑或質(zhì)子泵抑制劑治療。 對(duì)急診胃鏡發(fā)現(xiàn)DU者進(jìn)行常規(guī)胃粘膜活檢，胃竇及胃體各取2塊，作Gemsa 染色鏡檢Hp，以此結(jié)果判斷14C-UBT的診斷價(jià)值。在胃鏡檢査當(dāng)天或次曰進(jìn) 行兩次"C-UBT。第次"C-UBT按常規(guī)步驟(在該實(shí)施例中簡(jiǎn)稱(chēng)為UBT-1)，具體步驟如下(1) 、受試者用約20ml涼飲用水送服劑量為0.75uCi的尿素["C]膠囊一 粒后，靜坐25分鐘。(2) 、開(kāi)啟C02集氣劑一瓶(內(nèi)含C02吸收劑和指示劑)，插入一潔凈的 有防倒流裝置的氣體導(dǎo)管，導(dǎo)管下端應(yīng)浸入集氣劑液內(nèi)，受試者通過(guò)導(dǎo)管吹氣， 力度適中以免液體濺出，嚴(yán)禁倒吸！當(dāng)C02集氣劑由紫紅色變?yōu)闊o(wú)色時(shí)吹氣(約1 3分鐘)，若超過(guò)3分鐘褪色不全，亦停止吹氣，此時(shí)C02集氣劑 飽和，但因唾液等進(jìn)入干擾非水滴定系統(tǒng)而影響變色，并不影響測(cè)試結(jié)果。(3) 、氣體樣品收集完畢，在瓶蓋上作好標(biāo)記編號(hào)(不可在瓶壁標(biāo)記)， 用潔凈吸管(甲醇沖洗)向樣品瓶?jī)?nèi)加入稀釋閃爍液4.5ml，加蓋密封，用潔 凈衛(wèi)生紙擦凈瓶壁和瓶底。若加入閃爍液后出現(xiàn)分層不溶現(xiàn)象，再加數(shù)滴甲醇 即可溶解。(4) 、溶解搖勻后于液閃儀上作樣品碳"C放射性(dpm)測(cè)定2分鐘。(5) 、陰性與陽(yáng)性判斷14C - UBT》lOOdpm/mmol C02時(shí)，判定受試 者為Hp陽(yáng)性；14C-UBT<100dpm/mmolCOJ、t，判斷受試者為Hp陰性。UBT-1結(jié)束后，病人禁食6小時(shí)。然后進(jìn)行改良的14C-UBT (在該實(shí)施例 中簡(jiǎn)稱(chēng)為UBT-2)，在進(jìn)行UBT-2前，將一劑增敏劑配成100ml的溶液。每劑 所述增敏劑含檸檬酸5克，含安賽蜜0. 5克。在服用尿素["C]膠囊前30分鐘， 飲下50ml所述溶液；在服用尿素["C]膠囊時(shí)，用剩下的50ml所述溶液吞服尿 素["C]膠囊。UBT-2的其他步驟與UBT-1的對(duì)應(yīng)步驟相同，此不贅述。二、結(jié)果28例DU并出血病人經(jīng)組織學(xué)檢査證實(shí)Hp陽(yáng)性23例(82.1%)。 23例 Hp陽(yáng)性病人的UBT-l "C02的呼出率為(147土29)dpm，在UBT-2中升高至 (361 ±40)dpm(t = -5.582，p=0.000)。UBT-l中有11例陽(yáng)性，陽(yáng)性率為47.8% (11/23)，假陰性率為52.2% (12/23)。 UBT-2中有11例轉(zhuǎn)為陽(yáng)性，陽(yáng)性率升 高至95.7% (22/23)，僅1例仍為陰性，假陰性率降至4.3% (1/23)。假陰性 率在酸化前后比較差異有顯著性(x、5.14，P〈0.05)。5例Hp陰性病人UBT-1 的"C02呼出率為(144 ±52) dpm，在UBT-2中降至(49 ± 15) dpm，但差 異無(wú)顯著性(t = 2.095， P = 0.104)。 2例UBT-1假陽(yáng)性病人的UBT-2結(jié)果為陰性。三、結(jié)論在該實(shí)驗(yàn)中，使用本發(fā)明的試劑盒作的改良的14C-UBT (UBT-2)， C02 呼出率顯著上升，原12例假陰性者有11例轉(zhuǎn)為陽(yáng)性，UBT敏感性升高至95.70/0 (22/23)，假陰性率降至4.3% (1/23)。這是因?yàn)楸景l(fā)明的試劑盒包括增敏劑， 該增敏劑能夠明顯激活Hp尿素酶的活性，大大降低"C-UBT檢測(cè)的假陰性率， 尤其降低胃出血病人的"C-UBT檢測(cè)的假陰性率，增加檢査的敏感性。實(shí)施例2一、材料與方法1、 實(shí)驗(yàn)對(duì)象消化科門(mén)診潰瘍型功能性消化不良病人58例，年齡23 45，平均年齡27歲，其中男性21例，女性37例。全部病例復(fù)合功能性胃腸 病羅馬II標(biāo)準(zhǔn)，并且全部病例作胃鏡檢査，胃粘膜組織病理檢査Hp陰性，常 規(guī)"C-UBT (在該實(shí)施例中簡(jiǎn)稱(chēng)為UBT-1)陰性。妊娠、哺乳期婦女不納入研究。2、 實(shí)驗(yàn)方法病人清晨空腹口服劑量為27.75 kBq的尿素["C]膠囊1粒， 于25min后收集呼氣標(biāo)本，液體閃爍計(jì)數(shù)儀測(cè)量呼氣"C放射性活性。14(:02 > lOOdpm/mmol C02時(shí)，判定受試者為Hp陽(yáng)性；"C02 < 100 dpm/mmol C02時(shí)， 判斷受試者為Hp陰性。UBT-1陰性的入選病人每日早晚各服用PPI-雷貝拉唑 10mg，療程7天。于服藥的第6天進(jìn)行第二次常規(guī)14C-UBT (在該實(shí)施例中 簡(jiǎn)稱(chēng)為UBT-2)。于第7天進(jìn)行第三次改良l4C-UBT (在該實(shí)施例中簡(jiǎn)稱(chēng)為 UBT-3)，改良的內(nèi)容是在UBT-3前30min，將增敏劑配置成100ml的溶液， 該溶液中檸檬酸的含量是0.1mol/L。在UBT-3的前30min以及UBT-3時(shí)，各飲50ml上述溶液。二、 結(jié)果"C-UBT陰性病人在服用雷貝拉唑1周后重復(fù)試驗(yàn)結(jié)果表明，C02呼出率 顯著性增加，從UBT-1的(24.0±10.8) dpm/mmolC02增加到UBT-2的(63.6 ± 16.8) dpm/mmol C02 (t=2.310， P<0.05)，并出現(xiàn)9例假陽(yáng)性診斷結(jié)果 (UBT〉100dpm/mmolCO2)，占16% (9/58).通過(guò)使用本發(fā)明的試劑盒進(jìn)行改 良的UBT-3之后，"C02呼出率為(21.0± 7.8) dpm/mmol C02，與UBT-1相 比，差異并無(wú)顯著性(t-1.251， p<0.05)。 9例假陽(yáng)性者又恢復(fù)真陰性。三、 結(jié)論包括雷貝拉唑在內(nèi)的各種PPI能強(qiáng)烈地、持久地抑制胃酸分泌，會(huì)造成胃 內(nèi)細(xì)菌過(guò)生長(zhǎng)。導(dǎo)致本研究58例Hp陰性、"C-UBT也陰性的功能性消化不 良病人在服用雷貝拉唑1周后作"C-UBT，出現(xiàn)9例假陽(yáng)性結(jié)果診斷(16%)。 在使用本發(fā)明的試劑盒進(jìn)行改良的"C-UBT (UBT-3)時(shí)，這9例假陽(yáng)性者又 恢復(fù)了真陰性。這是因?yàn)楸景l(fā)明的試劑盒包括增敏劑，該增敏劑能夠進(jìn)行胃內(nèi) 酸化，在胃內(nèi)產(chǎn)生利于Hp生長(zhǎng)的高酸環(huán)境，降低常規(guī)"C-UBT檢測(cè)的假陽(yáng)性 率，增加檢査的敏感性。實(shí)施例3 、材料與方法1、 實(shí)驗(yàn)對(duì)象消化科門(mén)診功能性消化不良患者23例，年齡19 35歲， "C均為陽(yáng)性，其中男性8例，女性15例。所有研究對(duì)象均簽署知情同意書(shū)。2、 實(shí)驗(yàn)方法病人清晨空腹口服劑量為27.75 kBq尿素["C]膠囊1粒， 于25min后收集呼氣標(biāo)本，液體閃爍計(jì)數(shù)儀測(cè)量呼氣"C放射性活性。14032呼出量》1.67Bq/mmol時(shí)，判定受試者為Hp陽(yáng)性；14C02呼出量<1.67 Bq/mmol 時(shí)，判斷受試者為Hp陰性。第一次常規(guī)"C-UBT(在該實(shí)施例中簡(jiǎn)稱(chēng)為UBT-l) 陽(yáng)性功能性消化不良患者在簽署知情同意書(shū)后繼續(xù)進(jìn)行以下試驗(yàn)晨起早餐前 15 30 min 口服奧美拉唑40mg/d，療程14d。于服藥后第13天進(jìn)行第二次常 規(guī)14C-UBT (在該實(shí)施例中簡(jiǎn)稱(chēng)為UBT-2)。在服藥第14天進(jìn)行第三次改良的 14C-UBT (在該實(shí)施例中簡(jiǎn)稱(chēng)為UBT-3)，改良的內(nèi)容是在UBT-3前30min， 將一劑增敏劑配置成100ml的溶液，該溶液中檸檬酸的含量是0.1mol/L。在 UBT-3的前30min以及UBT-3時(shí)，各飲50ml上述溶液。二、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果23例患者在這3次"C-UBTC02呼出量分為(5.57 ±3.90)、 ( 1.98 ± 1.42) 和(4.93 ±3.77) Bq/mmol?；颊叻脢W美拉唑2周后14C02呼出量明顯減少， 差異有顯著性(t = 5.867， P = 0.000)，假陰性10例，占43.5%。 UBT-3的C02 呼出量與UBT-1的相比，差異無(wú)顯著性(1=0.952， P=0.351 )，但明顯高于UBT-2 的(1 = -4.538， P = 0.000);假陰性2例，占8.7%，明顯低于UBT-2 (x2= 6.66， P<0.01)。三、 實(shí)驗(yàn)結(jié)論使用PPI后，胃內(nèi)PH值身高，抑制了HP尿素酶活性，導(dǎo)致以檢測(cè)尿素 酶活性為基礎(chǔ)的Hp檢驗(yàn)假陰性。而本發(fā)明的試劑盒中包含了增敏劑，采用增 敏劑的改良"C-UBT能有效地消除這種假陰性。實(shí)施例4一、材料與方法1、實(shí)驗(yàn)對(duì)象在廣東深圳市南山醫(yī)院適合作"C-UBT的職工志愿者挑選試驗(yàn)對(duì)象。首先在志愿者早上未進(jìn)食時(shí)(即空腹時(shí))進(jìn)行常規(guī)的14C-UBT (在 該實(shí)施例中簡(jiǎn)稱(chēng)為UBT-1 )，具體步驟與實(shí)施例1所述的常規(guī)14C-UBT步驟相 同。選取UBT-陽(yáng)性志愿者30名，陰性者30名。2、實(shí)驗(yàn)方法在進(jìn)行了UBT-1后，讓這60名志愿者每天早晚各口服洛 賽克20mg，連服14天。在服藥第13天進(jìn)行第2次常規(guī)14C-UBT (在該實(shí)施 例中簡(jiǎn)稱(chēng)為UBT-2)。 UBT-2的具體步驟與UBT-1的步驟相同，此不贅述。第14天進(jìn)行改良的第3次14C-UBT (在該實(shí)施例中簡(jiǎn)稱(chēng)為UBT-3)。在進(jìn) 行UBT-3之前，將增敏劑配成100ml的溶液，這100ml溶液中，含檸檬酸1 克，含安賽蜜0.05克。在服用尿素["C]膠囊前30分鐘，飲下50ml所述溶液； 在服用尿素["C]膠囊時(shí)，用剩下的50ml所述溶液吞服尿素["C]膠囊。改良的 "C-UBT試驗(yàn)的其他步驟與常規(guī)"C-UBT試驗(yàn)的步驟相同，此不贅述。二、結(jié)果與討論第1次常規(guī)"C-UBT陽(yáng)性者，第2次常規(guī)14C-UBT結(jié)果下降，第3次改 良"C-UBT結(jié)果回升。原理是洛賽克制酸后，Hp受抑制，影響了第2次常規(guī) 14C-UBT的準(zhǔn)確度；在進(jìn)行改良的第3次"C-UBT時(shí)，吞服了增敏劑進(jìn)行酸化， 激活了 Hp尿素酶，因?yàn)镠p尿素酵最適PH為酸性。第1次常規(guī)"C-UBT陰性者，第2次常規(guī)"C-UBT結(jié)果上升，第3次改 良"C-UBT結(jié)果問(wèn)降。原理是洛賽克制酸后，無(wú)Hp者胃酸缺乏，其它尿素酶 細(xì)菌過(guò)生長(zhǎng)，影響T第2次常規(guī)"C-UBT的準(zhǔn)確度；在進(jìn)行改良的第3次 "C-UBT時(shí)，吞服了增敏劑進(jìn)行酸化，抑制了非Hp尿素酶，因?yàn)榉荋p尿素 酶最適pH在中性。從以上實(shí)施例可以得到這個(gè)結(jié)論本發(fā)明診斷幽門(mén)螺桿菌的試劑盒能夠提 高"C-UBT試驗(yàn)的準(zhǔn)確性，降低"C-UBT試驗(yàn)的假陽(yáng)性和假陰性。在該實(shí)施例中，增敏劑中包含的是檸檬酸，但本發(fā)明不局限于此。例如， 本發(fā)明的增敏劑可以包括蘋(píng)果酸，或者檸檬酸與蘋(píng)果酸的組合。為了方便存儲(chǔ) 與運(yùn)輸，本發(fā)明診斷幽門(mén)螺桿菌的試劑盒中的增敏劑為粉狀，每劑增敏劑含擰檬酸或蘋(píng)果酸1 5克。為了方便使用，還可以將每劑增敏劑等量分裝成兩份。 為了改善受試人員的口感，還可以在增敏劑中添加甜味劑。例如，每劑增敏劑可包含0.05 0.5克的安賽蜜，但本發(fā)明不局限于使用安賽蜜，例如，每 劑增敏劑可以包含0. 05 0. 5克的阿斯巴甜。
權(quán)利要求
1. 一種診斷幽門(mén)螺桿菌感染的試劑盒，包括尿素[14C]膠囊、CO2集氣劑、閃爍液、吹氣用的導(dǎo)管，其特征在于，還包括增敏劑。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，每劑所述增敏劑含檸檬 酸1 5克。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，每劑所述增敏劑含蘋(píng)果 酸1 5克。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1至3中任意一項(xiàng)所述的試劑盒，其特征在于，每劑增 敏劑等量分裝為兩份。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1至3中任意一項(xiàng)所述的試劑盒，其特征在于，所述增 敏劑還包括甜味劑。
6、 根據(jù)權(quán)利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述甜味劑是安賽蜜， 每劑所述增敏劑含安賽蜜0. 05 0. 5克。
7、 根據(jù)權(quán)利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述甜味劑是阿斯巴甜， 每劑所述增敏劑含阿斯巴甜0. 05 0. 5克。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)用化學(xué)試劑，更具體地說(shuō)，涉及一種使用¹⁴C-UBT(UreaBreath Test，尿素呼氣試驗(yàn))來(lái)診斷幽門(mén)螺桿菌(Helicobacter pylori，Hp)感染的試劑盒，包括尿素[¹⁴C]膠囊、CO₂集氣劑、閃爍液、吹氣用的導(dǎo)管以及還包括增敏劑。本發(fā)明診斷幽門(mén)螺桿菌感染的試劑盒中包括增敏劑，能提高通過(guò)¹⁴C-UBT診斷幽門(mén)螺桿菌感染的準(zhǔn)確性，尤其提高消化道出血、近期使用制酸劑、抗Hp藥物病人進(jìn)行常規(guī)的¹⁴C-UBT診斷幽門(mén)螺桿菌感染的準(zhǔn)確性。此外，所述的增敏劑中包括甜味劑，改善了增敏劑的口感，方便病人服用。
文檔編號(hào)C12Q1/04GK101230381SQ20071007301
公開(kāi)日2008年7月30日 申請(qǐng)日期2007年1月23日 優(yōu)先權(quán)日2007年1月23日
發(fā)明者張厚德, 金桂花, 黃晉杰 申請(qǐng)人:張厚德