專利名稱：一種耐酸、耐高溫酵母菌株的篩選方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及耐酸、耐高溫酵母菌株的篩選方法，尤其是采用固定 化細(xì)胞原理篩選耐酸、耐高溫酵母菌株的方法。
背景技術(shù)：
常規(guī)的篩選通常是將菌種用物理方法或化學(xué)誘變劑處理后在瓊脂 平板上培養(yǎng)，然后挑選生長(zhǎng)旺盛的菌落擴(kuò)培后進(jìn)行小型發(fā)酵實(shí)驗(yàn)來(lái)加以驗(yàn)證， 工作量大，周期長(zhǎng)。
通過(guò)對(duì)國(guó)內(nèi)外專利和文獻(xiàn)的檢索，還未見(jiàn)有此項(xiàng)技術(shù)的相關(guān)報(bào)道。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的是提供一種耐酸、耐高溫酵母菌株的篩選方法。
本發(fā)明包括下列步驟
a) 、聚乙烯醇復(fù)合凝膠的合成方法，將100份的水加熱到85。C 95X:，將 10 15份聚乙烯醇緩慢溶解到水中，邊加邊攪拌，待聚乙烯醇完全溶解后，加 入3 5份的丙三醇，攪拌均勻后，然后在不斷攪拌的同時(shí)加入己溶解好的0. 5 2份的硼砂，邊加邊攪拌，進(jìn)行凝膠化處理，交聯(lián)時(shí)間為2 15分鐘，優(yōu)選凝膠 化反應(yīng)時(shí)間為2 5分鐘；然后緩慢地加入0. 5 2份的順丁烯二酸酐，不斷攪 拌，直至凝膠溶液中無(wú)絮狀凝固物為止，然后與20mL、 5%的海藻酸鈉溶液混 合，攪拌均勻，所得透明、略帶乳白色的粘稠溶膠，即為聚乙烯醇復(fù)合凝膠；
b) 、混合將10mL10。/。的酵母菌懸浮液加入到90mL聚乙烯醇海藻酸鈉復(fù)合 凝膠溶液中，攪拌均勻后倒入培養(yǎng)皿中鋪成平板；
c) 、冷凍、切塊 在-2(TC下冷凍處理48h，成型后取出切成塊狀，外形 尺寸為12腿X10mmX12mm;
d) 、培養(yǎng) 在硫酸含量為2 10%、 12波美度的玉米糖液中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫 度為30°C 45°C;如此反復(fù)培養(yǎng)數(shù)批，則固定化載體內(nèi)的酵母細(xì)胞即為耐酸、 耐高溫酵母。
固定化酵母在玉米糖液培養(yǎng)基中的優(yōu)選培養(yǎng)溫度為32 34°C。 本發(fā)明利用細(xì)胞固定化原理，將細(xì)胞酵母固定化后在極端環(huán)境下經(jīng)過(guò)反復(fù) 使用，可篩選出如耐酸和耐高溫酵母菌株，使其更適合于粗放的工業(yè)生產(chǎn)。而 且操作簡(jiǎn)單、快速。所篩選的固定化酵母具有化學(xué)穩(wěn)定性好、耐酸、耐高溫特 點(diǎn)，具有抗雜菌能力強(qiáng)，發(fā)酵效率高等優(yōu)勢(shì)。
具體實(shí)施例方式
下面的實(shí)施例可以使本專業(yè)技術(shù)人員更全面地理解本發(fā)明，但不以任何方 式限制本發(fā)明。 實(shí)施例h
將100克的水加熱到85°C 95°C，將10 15克聚乙烯醇緩慢溶解到水中， 邊加邊攪拌，待聚乙烯醇完全溶解后，加入3 5克的丙三醇，攪拌均勻后，然 后在不斷攪拌的同時(shí)加入已溶解好的0.5 2克的硼砂，邊加邊攪拌，進(jìn)行凝膠 化處理，交聯(lián)時(shí)間為2 15分鐘，優(yōu)選凝膠化反應(yīng)時(shí)間為2 5分鐘；然后緩慢 地加入0.5 2克的順丁烯二酸酐，不斷攪拌，直至凝膠溶液中無(wú)絮狀凝固物為 止，然后與20mL、 5%的海藻酸鈉溶液混合，攪拌均勻，所得透明、略帶乳白 色的粘稠溶膠，即為聚乙烯醇復(fù)合凝膠；
然后將10mL10。/。的酵母菌懸浮液加入到90mL聚乙烯醇海藻酸鈉復(fù)合凝膠溶 液中，攪拌均勻后倒入培養(yǎng)皿中鋪成平板；然后在-2(TC下冷凍處理48h，成型 后取出切成塊狀，外形尺寸為12mmX10mmX12mm;然后在硫酸含量為2%、 12 波美度的玉米糖液中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為30°C 45°C;如此反復(fù)培養(yǎng)數(shù)批和靜止 后，則固定化載體內(nèi)的存活酵母細(xì)胞經(jīng)分離即為耐高溫酵母。 實(shí)施例2:
重復(fù)實(shí)施例l，有以下不同點(diǎn)將酵母載體置于玉米糖液中連續(xù)培養(yǎng)，溫度 為38°C 45°C。如此反復(fù)培養(yǎng)數(shù)批和靜止后，則固定化載體內(nèi)的存活酵母細(xì)胞 經(jīng)分離即為耐高溫酵母。 實(shí)施例3:
重復(fù)實(shí)施例l，有以下不同點(diǎn)將酵母載體置于硫酸含量為10%、 12波美度
(。Be')的玉米糖液中連續(xù)培養(yǎng)，溫度為38'C 45'C。如此反復(fù)培養(yǎng)數(shù)批和靜止 后，則固定化載體內(nèi)的存活酵母細(xì)胞再經(jīng)分離即為耐酸、耐高溫酵母。 實(shí)施例4:
重復(fù)實(shí)施例l，有以下不同點(diǎn)將酵母載體置于硫酸含量為5%、 12波美度 (。Be')的玉米糖液中連續(xù)培養(yǎng)，溫度為32 34°C。如此反復(fù)培養(yǎng)數(shù)批和靜止后， 則固定化載體內(nèi)的存活酵母細(xì)胞再經(jīng)分離即為耐酸、耐高溫酵母。
權(quán)利要求
1. 一種耐酸、耐高溫酵母菌株的篩選方法，其特征在于它包括下列步驟a)、聚乙烯醇復(fù)合凝膠的合成方法，將100份的水加熱到85℃～95℃，將10～15份聚乙烯醇緩慢溶解到水中，邊加邊攪拌，待聚乙烯醇完全溶解后，加入3～5份的丙三醇，攪拌均勻后，然后在不斷攪拌的同時(shí)加入已溶解好的0.5～2份的硼砂，邊加邊攪拌，進(jìn)行凝膠化處理，交聯(lián)時(shí)間為2～15分鐘，優(yōu)選凝膠化反應(yīng)時(shí)間為2～5分鐘；然后緩慢地加入0.5～2份的順丁烯二酸酐，不斷攪拌，直至凝膠溶液中無(wú)絮狀凝固物為止，然后與20mL、5％的海藻酸鈉溶液混合，攪拌均勻，所得透明、略帶乳白色的粘稠溶膠，即為聚乙烯醇復(fù)合凝膠；b)、混合 將10mL10％的酵母菌懸浮液加入到90mL聚乙烯醇海藻酸鈉復(fù)合凝膠溶液中，攪拌均勻后倒入培養(yǎng)皿中鋪成平板；c)、冷凍、切塊 在-20℃下冷凍處理48h，成型后取出切成塊狀，外形尺寸為12mm×10mm×12mm；d)、培養(yǎng) 在硫酸含量為2～10％、12波美度的玉米糖液中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為30℃～45℃；如此反復(fù)培養(yǎng)數(shù)批，則固定化載體內(nèi)的酵母細(xì)胞即為耐酸、耐高溫酵母。
2. 按照權(quán)利要求1所述的耐酸、耐高溫酵母菌株的篩選方法，其特征在于其中固定化酵母在玉米糖液培養(yǎng)基中的培養(yǎng)溫度為32℃ 34℃。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種耐酸、耐高溫酵母菌株的篩選方法。它包括下列步驟a)聚乙烯醇復(fù)合凝膠的合成方法；b)混合，將10mL10％的酵母菌懸浮液加入到90mL聚乙烯醇海藻酸鈉復(fù)合凝膠溶液中，攪拌均勻后倒入培養(yǎng)皿中鋪成平板；c)冷凍、切塊，在-20℃下冷凍處理48h，成型后取出切成塊狀，外形尺寸為12mm×10mm×12mm；d)培養(yǎng)，在硫酸含量為2～10％、12波美度的玉米糖液中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為30℃～45℃；如此反復(fù)培養(yǎng)數(shù)批，則固定化載體內(nèi)的酵母細(xì)胞即為耐酸、耐高溫酵母。本發(fā)明操作簡(jiǎn)單、快速。所篩選的固定化酵母具有化學(xué)穩(wěn)定性好、耐酸、耐高溫特點(diǎn)，具有抗雜菌能力強(qiáng)，發(fā)酵效率高等優(yōu)勢(shì)。
文檔編號(hào)C12N1/16GK101205522SQ200710109338
公開(kāi)日2008年6月25日 申請(qǐng)日期2007年5月23日 優(yōu)先權(quán)日2006年12月19日
發(fā)明者周劍平, 暉 楊, 王治業(yè), 魏甲乾 申請(qǐng)人:周劍平