專利名稱：：一種堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌及其菌劑和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于農(nóng)用微生物領(lǐng)域，具體地說涉及一種堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌，以及利用該堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌生產(chǎn)的微生物菌劑及其制備方法和應(yīng)用。技術(shù)背景草莓白粉病是草莓生產(chǎn)中的主要病害。近年來，草莓白粉病的發(fā)生逐漸加重，特別是保護(hù)地草莓白粉病，發(fā)生嚴(yán)重時(shí)，病葉率在45%以上，病果率在50%以上，嚴(yán)重影響了草莓的產(chǎn)量、品質(zhì)和經(jīng)濟(jì)效益(楊聯(lián)偉.煙臺果樹,2005(3):1516)。因此，農(nóng)民稱草莓白粉病為"草莓的癌癥"。草莓白粉病由草莓白粉菌引起，草莓白粉菌為羽衣草單囊殼GS/Mera^ecfl^/^m》，屬子囊菌亞門白粉菌目白粉菌科單囊殼屬，草莓白粉菌屬于專性寄生菌(PeriesOS.Mycologia,1962,52:3803S6)。S前，防治草莓白粉病的主要方法是利用抗病品種和化學(xué)藥劑。但是，通常情況下抗病品種的品質(zhì)較差；化學(xué)藥劑防治又存在容易使病菌產(chǎn)生抗藥性，以及產(chǎn)生果實(shí)污染和環(huán)境污染問題，此外，對草莓白粉病防治效果較好的所有唑類藥劑都抑制草莓的生長。而生物農(nóng)藥由于選擇性強(qiáng)、效率高、成本低、不污染環(huán)境、對人畜無害等優(yōu)點(diǎn)越來越受到人們的關(guān)注(劉博等.河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007(2):20-23)，通過篩選和利用抗草莓白粉病的有益生物及其代謝產(chǎn)物，使生物防治成為控制草莓白粉病的有效途徑。目前，防治草莓白粉病的比較有效的微生物或微生物產(chǎn)物主要有不吸水鏈霧菌杭州變禾中(&re/tom3/ca5a/y/grascopwmvar/7a/7gz/70wem7'力(口十琪明等.中國生物防治，2001,17(2):封3)，天然化合物蛇床子素(迮?；莸?萊陽農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào),2005,22(3):189190和嚴(yán)清平等.農(nóng)藥，2005,44(3):136137)，蠟狀芽孢桿菌TS-02(陳沖等.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007,35(11):32983300)。人們對芽孢桿菌生防潛能的研究至少已有40年的歷史，田間應(yīng)用研究己經(jīng)證實(shí)芽孢桿菌生防菌劑在產(chǎn)品中的穩(wěn)定性，與化學(xué)農(nóng)藥的相容性和不同植物不同年份防效的一致性方面明顯優(yōu)于非芽孢桿菌和真菌生防菌(MonicaLE等.PestManagSci,2001,57(8):695706.)，枯草芽孢桿菌(Bac!7/wsw^/fc)是生物防治中報(bào)道較多的一種拮抗細(xì)菌，在植物病害的生物防治中發(fā)揮著尤為重要的作用(何禮遠(yuǎn).生物防治通報(bào).1985，1(3):2831?？捉ǖ?微生物學(xué)報(bào)，1992，32(6):445-449。魯素云.北京農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，1993)，它能夠產(chǎn)生廣譜的抗菌代謝物質(zhì)，是土壤和植物微生態(tài)的優(yōu)勢微生物種群，具有很強(qiáng)的抗逆能力和抗菌防病作用，許多優(yōu)良的天然分離株已成功地應(yīng)用于植物病害生物防治(CavaglieriL等，ResearchinMicrobiology,2005.156(5/6):748754)，但有關(guān)堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌在生物防治中的作用尚少見報(bào)道，朱天輝等(林業(yè)科學(xué)，2007，43(2):120123).譙天敏等，林業(yè)科技,2007,31(1):2831))等從松苗圃土壤中分離純化出的一株具有拮抗活性的堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌(及/rm^)。因此，篩選對病原菌具有抑制作用的芽孢桿菌是防治有關(guān)植物病害的最有效方法之一。經(jīng)過檢索，還沒有發(fā)現(xiàn)能用于防治草莓白粉病的堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的之一是針對防治草莓白粉病中存在的問題，提供一種可用于草莓白粉病生物防治的具有高效、廣譜殺菌活性的堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌菌株。本發(fā)明第二個(gè)目的是提供一種利用堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌菌株生產(chǎn)的微生物菌劑及其制備方法。本發(fā)明第三個(gè)目的是提供了本發(fā)明堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌菌株在防治草莓白粉病上的用途。本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)一種堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌SAB-1(5flc〃7/ws>7mSAB-1)，己于2007年7月6日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCCNo.2100。利用上述堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌SAB-1生產(chǎn)的微生物菌劑，其活性成分為堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌SAB-1菌體和它的胞外代謝產(chǎn)物。上述微生物菌劑可以為液態(tài)制劑。上述微生物菌劑的制備方法，具體包括如下步驟(1)菌種活化將低溫保存的SAB-1菌株接種LB平板培養(yǎng)基上，并在2832"下培養(yǎng)2024小時(shí)；然后挑取單菌落接種于LB斜面培養(yǎng)基上，并在2832。C下培養(yǎng)2024小時(shí)，再用無菌水洗滌培養(yǎng)基表面，其洗脫液作為接種液；(2)種子液的制備按照0.050.5%比例(體積百分比)向LB液體培養(yǎng)基中接入步驟(1)制備的接種液，在2834。C下震蕩培養(yǎng)1216小時(shí)，得種子液；(3)發(fā)酵培養(yǎng)將步驟(2)所得種子液按照110%比例(體積百分比)接入玉米粉豆餅份培養(yǎng)基中，再在2834。C、搖床轉(zhuǎn)速為170210rpm的條件下培養(yǎng)2225小時(shí)，得菌株SAB-1的液體制劑；其中所述的玉米粉豆餅份培養(yǎng)基的組分及其重量百分比為玉米粉2.5%~3,5%，豆餅粉2.5%~3.5%，NaCl0.4%~0.6%，CaC030.1%0.2%，KH2P040.01%0.03%和MgS04'7H200.02%~0.04%，其余為水。上述制備方法步驟(1)中所述的低溫是指通常保存菌種所用溫度，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)常識可知。上述制備方法步驟(1)或(2)中所述的LB平板培養(yǎng)基、LB斜面培養(yǎng)基或LB液體培養(yǎng)基的組成成份及其制備方法都是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的，可按照通常的方法制備。上述玉米粉豆餅粉培養(yǎng)基的制備方法，按照重量百分比稱取玉米粉、豆餅粉、NaCl、CaC03、KH2P04和MgS04，將它們混合后，再加水至所需體積即可。上述制備方法歩驟(3)中所述的溫度優(yōu)選為3032°C，搖床轉(zhuǎn)速優(yōu)選為210rpm，培養(yǎng)時(shí)間優(yōu)選為24小時(shí)。上述微生物菌劑，其堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌SAB-1的活菌數(shù)大于5xl09cfU/g。上述堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌SAB-1在防治植物病害上的應(yīng)用。上述堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌SAB-1在防治草莓白粉病上應(yīng)用。本發(fā)明菌劑的使用方法將上述所得微生物菌劑用水稀釋，然后將稀釋后的液體菌劑于草莓白粉病發(fā)病高峰前進(jìn)行葉面、花蕾和果實(shí)表面噴霧，也可同時(shí)噴灑于草莓地的地表，即可達(dá)到控制草莓白粉病的目的。SAB-1菌株的篩選分離過程SAB-1菌株是河北省農(nóng)林科學(xué)院植物保護(hù)研究所從新疆的棉花黃萎病田土壤中分離得到的。2003年河北省農(nóng)林科學(xué)院植物保護(hù)研究所從新疆農(nóng)場的棉花田間五點(diǎn)采集土樣，混勻后稱取10g放到250mL的滅菌三角瓶中，加入100mL無菌水，放到搖床上，170r/min振蕩30min，靜置2h，取上清液lmL加無菌水9mL，即成10mL10—M咅土壤微生物懸液，繼而將土壤懸液稀釋成l(T3、10—4、10—5、10—6倍稀釋液，各濃度取20(VL微生物懸液涂于PDA、改良PDA、LB和KB培養(yǎng)基平板上，每個(gè)濃度3次重復(fù)，在28。C恒溫分別培養(yǎng)ld、3d和5d，分別進(jìn)行微生物的分離和純化。并以草莓白粉病CS^^eraAecaa/7/zam:)為靶標(biāo)防治靶標(biāo)病害，在大棚草莓種植田中進(jìn)行微生物防病效果測定的篩選。結(jié)果從中篩選出一個(gè)對靶標(biāo)病害具有顯著防效的細(xì)菌菌株，編號為SAB-1。SAB-1菌株的特征(1)形態(tài)特征菌株SAB-1的細(xì)胞革蘭氏染色為陽性，菌體為桿狀，培養(yǎng)8h后產(chǎn)生芽孢，芽孢中生，橢圓形，孢囊不膨大，抗酸染色陰性，無伴孢晶體。在營養(yǎng)瓊脂平板上，培養(yǎng)初期菌落淡乳白色，膿狀，圓形，邊緣整齊，菌落隆起呈饅頭狀，表面濕潤；培養(yǎng)后期菌落淡乳白色，邊緣不整齊，表面較濕潤，有細(xì)小褶當(dāng)皮；在營養(yǎng)瓊脂斜面上劃線培養(yǎng)，呈直線形；在液體培養(yǎng)基中靜止培養(yǎng)，表面形成白色菌膜。(2)16SrDNA序列測定用于擴(kuò)增細(xì)菌16SrDNA的引物為F27:(5'AGAGTTTGATCATGGCTCAG3')與R1492(5'GGCTACCTTGTTACGACTT'3)。以SAB-1的基因組DNA為模板擴(kuò)增16SrDNA，并進(jìn)行測序，結(jié)果SAB-1的16SrDNA序列見序列表。將所得SAB-1的16SrDNA序列在Genbank中進(jìn)行同源性比較，同時(shí)根據(jù)其16SrDNA序列用DNAMANVersion4.0分析獲得了其進(jìn)化樹(圖1)。同源性比較結(jié)果表明菌株SAB-1與枯草芽孢桿菌(^^7/ws^/to'fc)和地衣芽孢桿菌(Bac/〃ws//c/zera/om^)的16SrDNA同源性均達(dá)到98%(圖2和圖3)，說明SAB-1菌株屬于芽孢桿菌屬(6a"'〃M)。(3)生理生化特征將SAB-1菌株進(jìn)行生理生化性狀檢測。結(jié)果(見表l)表明，SAB-l菌株的生理生化特征具有堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌生理生化特征，說明SAB-1菌株屬于一種堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌。細(xì)菌常規(guī)鑒定手冊(《一般細(xì)菌常用鑒定方法》等)顯示堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌可運(yùn)動，好氧，革蘭氏染色陽性，芽孢橢圓形或柱狀，胞囊不膨大，在pH5-7的培養(yǎng)基上能夠生長，在2。/。-10。/。NaCl培養(yǎng)基中均能生長；生長溫度為1045°C，最適生長溫度283rC。甲基紅反應(yīng)陰性，V-P反應(yīng)陰性。不能利用檸檬酸鹽。接觸酶反應(yīng)陽性，卵磷脂酶陰性。將以上SAB-1菌株的部分生理生化性狀檢測結(jié)果與枯草芽孢桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株相比較，根據(jù)《一般細(xì)菌常用鑒定方法》(中國科學(xué)院微生物細(xì)菌研究細(xì)菌分類組編，科學(xué)出版社，1978年)，《芽孢桿菌屬》)(蔡妙英，戰(zhàn)立克等譯，農(nóng)業(yè)出版社，198S年)和《微生物分類學(xué)》(張繼忠，上海復(fù)旦大學(xué)出版社，1995)的檢索表進(jìn)行檢索，確定菌株SAB-1生理生化件狀與堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌相應(yīng)性狀吻合。同時(shí)結(jié)合16SrDNA序列同源性分析結(jié)果，最終鑒定SAB-1菌株為堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌(Sac///^y/77mO。表l菌株SAB-1生理生化測定結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注"+"表示陽性結(jié)果，"-"表示陰性結(jié)果，"ND"表示未測定，"d"表示11%-89%菌株為陽性。本發(fā)明所具有的優(yōu)點(diǎn)和有益效果(1)本發(fā)明提供/一種能高效防治草莓白粉病等植物病害的堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌菌株，為防治草莓白粉病等植物病害提供/一種生物防治的新途徑；(2)本發(fā)明生防效果顯著，對草莓白粉病的防治效果達(dá)到90.31%93.42%;(3)本發(fā)明制備方法簡單、成本低、易于推廣應(yīng)用；(4)本發(fā)明無污染，無公害，低殘留，對環(huán)境友好，對提高農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量和產(chǎn)量具有重要作用，同時(shí)能提高我國農(nóng)產(chǎn)品的國際竟?fàn)幜ΑDl為根據(jù)16SrDNA序列用DNAMAN5.2.2分析獲得的進(jìn)化樹結(jié)果。圖2為堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌SAB-1菌株與枯草芽孢桿菌168菌株(Sfl"77/M168)的16SrDNA基因序列同源性比較結(jié)果。其中及168和及//c/zem/wTw^ATCC14580序列中"-"表示與SAB-1相應(yīng)的堿基相同，"g、a、c、t"表示與SAB-1相應(yīng)位點(diǎn)的堿基不同。圖3為堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌SAB-1菌株與地衣芽孢桿菌菌株(及//CAe"z/wm&ATCC14580)的16SrDNA基因序列同源性比較結(jié)果。其中及w磁s168和及fcfemybrw^ATCC14580序列中"-"表示與SAB-1相應(yīng)的堿基相同，"g、a、c、t"表示與SAB-1相應(yīng)位點(diǎn)的堿基不同。具體實(shí)施方式下面以具體實(shí)施例來進(jìn)一歩清楚地解釋本發(fā)明，但是不以任何方式構(gòu)成對本發(fā)明的限制。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無特別說明，均為常規(guī)方法；下述實(shí)施例中的百分含量，如無特別說明，均為重量百分含量。實(shí)施例1SAB-1微生物菌劑的制備，按照如下步驟進(jìn)行(1)菌種活化將保存于-4(TC的菌株SAB-1在LB平板培養(yǎng)基上進(jìn)行活化(3(TC)，挑取單菌落在LB斜面培養(yǎng)基上擴(kuò)繁(30°C)培養(yǎng)，得接種液；其中LB平板培養(yǎng)基及LB斜面培養(yǎng)基組分及配比為酵母浸膏0.5%，胰蛋白胨1%，NaCl.5%，瓊脂粉1%;蒸餾水97%，pH7.0-7.4;(2)種子液的制備在250mL三角瓶屮裝入LB培養(yǎng)液！OOmL，高壓濕熱滅菌，待溫度降到室溫后，每瓶中接入步驟(l)一接種環(huán)上述活化好的SAB-1菌株接種液，在搖床上進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速190rpm，并在3(TC下培養(yǎng)24小時(shí)，得種子液；其中LB液體培養(yǎng)基組分及配比為酵母浸膏0.5%，胰蛋白胨1%，NaCl0.5%,蒸餾水98%，pH7.0-7.4;(3)玉米粉豆餅粉培養(yǎng)基的制備按照3..0%玉米粉，3.0%豆餅粉，0.5%NaCl，0.1%CaCO3，0.02%KH2PO4和0.03%MgSO4'7H2O配制培養(yǎng)基，然后加水補(bǔ)齊100%，攪拌混合得玉米粉豆餅粉培養(yǎng)基；分裝于500mL三角瓶中，每瓶200mL;高壓濕熱滅菌30分鐘，再降溫到30。C備用；(4)發(fā)酵培養(yǎng)向歩驟(3)所得每瓶玉米粉豆餅粉培養(yǎng)基中接種步驟(2)所得種子液2mL;在28"C恒溫、轉(zhuǎn)速190rpm條件下進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)；(5)17h以后，每隔30分鐘從步驟(4)的三角瓶中取樣進(jìn)行鏡檢，對視野中的芽孢和總菌體數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)，并計(jì)算芽孢率；芽孢率達(dá)到90%即可停止發(fā)酵培養(yǎng)；即得堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌SAB-1液體制劑。實(shí)施例2本試驗(yàn)在河北省保定市滿城縣農(nóng)戶路新站的草莓大棚內(nèi)進(jìn)行，每小區(qū)兩行，四次重復(fù)，隨機(jī)區(qū)組排列。實(shí)驗(yàn)時(shí)整個(gè)棚內(nèi)草莓葉上白粉病中度發(fā)生。采用背負(fù)式手動噴霧器接種實(shí)施例1所制備的堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌SAB-1菌劑(用水進(jìn)行稀釋，含菌體108cfti/mL);另設(shè)對照藥劑(10°/。世高水分散粒劑，市購，瑞士先正達(dá)生產(chǎn)，1500倍水稀釋液噴霧處理)和空白對照(清水噴霧)；待空白對照充分發(fā)病后調(diào)査，草莓白粉病級別劃分標(biāo)準(zhǔn)和防效計(jì)算方法參照《中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)農(nóng)藥田間藥效試驗(yàn)準(zhǔn)則》(二)第119部分殺菌劑防治草莓白粉病(GB/T17980.119-2004)。并計(jì)算病情指數(shù)和防效。試驗(yàn)結(jié)果(見表2)表明，堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌SAB-1的菌劑處理后草莓白粉病的防治效果顯著高于空白對照和藥劑對照，其防效達(dá)到93.42%?？莶菅挎邨U菌菌株SAB-1對草莓白粉病表現(xiàn)了較好的防治效果。表2堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌SAB-1對草莓白粉病的作用效果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>實(shí)施例3本試驗(yàn)在河北省高碑店市昊龍綠色科技示范園314棚進(jìn)行，每小區(qū)兩行，四次重復(fù)，隨機(jī)區(qū)組排列。實(shí)驗(yàn)時(shí)整個(gè)棚內(nèi)草莓葉上白粉病中度發(fā)生。采用背負(fù)式手動噴霧器接種實(shí)施例1所制備的堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌SAB-1菌劑(用水進(jìn)行稀釋，含菌體108cfu/mL);另設(shè)對照藥劑(10°/。世高水分散粒劑，市購，瑞士先正達(dá)生產(chǎn)，1500倍水稀釋液噴霧處理)和空白對照(清水噴霧)；待空白對照充分發(fā)病后調(diào)查，草莓白粉病級別劃分標(biāo)準(zhǔn)和防效計(jì)算方法參照《中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)農(nóng)藥田間藥效試驗(yàn)準(zhǔn)則》(二)第119部分殺菌劑防治草莓白粉病(GB/T17980.119-2004)。并計(jì)算發(fā)病率和防效。試驗(yàn)結(jié)果(見表3)表明，堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌SAB-1的菌劑處理后草莓白粉病的防治效果顯著高于空白對照和藥劑對照，其防效達(dá)到90.31%?？莶菅挎邨U菌菌株SAB-1對草莓白粉病表現(xiàn)了較好的防治效果。表3堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌SAB-1對草莓白粉病的作用效果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>實(shí)施例4本試驗(yàn)在河北省高碑店市昊龍綠色科技示范園308棚進(jìn)行，每小區(qū)兩行，四次重復(fù)，隨機(jī)區(qū)組排列。實(shí)驗(yàn)時(shí)整個(gè)棚內(nèi)草莓果上白粉病中度發(fā)生。處理分為菌體懸浮液和去菌體胞外代謝產(chǎn)物。將實(shí)施例1所得的堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌SAB-1菌劑稀釋(含菌體10ScfLi/mL)，然后將SAB-1菌劑稀釋液分成兩份，一份用于直接噴霧(處理為培養(yǎng)液，含菌體與代謝產(chǎn)物)；一份在5000轉(zhuǎn)/分條件下離心20分鐘，上清液是堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌SAB-1的胞外代謝產(chǎn)物；沉淀用離心前等量的0.9。/。的生理鹽水懸浮，即為菌體懸浮液(含菌體108cfu/mL);用清水作為空白對照。結(jié)果(見表4)表明，堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌SAB-1的培養(yǎng)液(含菌體與代謝產(chǎn)物)、胞外代謝產(chǎn)物、菌體懸浮液處理的防治效果差異不顯著，但是都顯著高于空白對照和藥劑對照，說明堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌SAB-1胞外代謝產(chǎn)物和活菌體對草莓白粉病都有防治作用。因此堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌SAB-1防治草莓白粉病的有效活性成分包括堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌SAB-1的菌體及其代謝產(chǎn)物。表4堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌SAB-1菌體及胞外代謝物對草莓白粉病的防治效果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>序列表<110〉河北省農(nóng)林科學(xué)院植物保護(hù)研究所<120〉一種堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌及其菌劑和應(yīng)用<160〉1<17〇〉Patent工nversion3.3<210〉1<211>1016<212〉DNA<213〉Bacillusfirmus<4〇〇>1cc3cttctgtcaccttcggcggctggctcc3t333ggtt3cctcsccgsct:tcgggtgtt60acaaactctcgtggtgtgacgggcggtgtgtacaaggcccgggaacgtatLcaccgcggc120atgctgatccgcgattactagcgattccagcttcacgcagtcgagttgcagactgcgatc180cgasctgsgaacsgstttgtgggaLttggcttsscctcgcggtctcgctgccctttgttct240gtccattgtagcacgtgtgtagcccaggtcataaggggcatgatgatttgacgtcatccc300caccttcctccggtttgtcsccggcagtcaccttagagtgcccaactgsatgctggcaac360tasgstcsagggttgcgctcgttgcgggsctt33ccc33cstctcscgscscgsgctgac420gacaaccatgcaccacctgtcactctgcccccgaaggggaagccctatctctaggggtgt480cagaggatgtcaagacctggtaaggttcttcgcgttgcttcgwttaaaccacatgctcc540accgcttgtgcgggcccccgtcaattcctttgagtttcsgtcttgcgsccgtsctcccca600ggcggagtgcttaatgcgttagctgcagcactaaggggcggaaaccccctaacacttagc660actcatcgtttacggcgtggactaccagggtatctaatcctgttcgctccccacgctttc720gctcctcsgcgtc3gtt3c3gsccsgsgsgtcgccttcgcC3ctggtgttcctccaicdtc780tct3cgcstttcsccgctscscgtggaattccactctcctcttctgcsctcasgttcccc8403gtttcc3atgaccctccccggttgsgccgggggctttcscstcsgactt33g3accgcc90〇tgcgagccctttacgcccastasttccggacascgcttgccacctacgtattaccgcggc960tgctggcacgtagttagccgtgctttctggttaggtacgtcaaggtgccgccctat101權(quán)利要求1、一種堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌SAB-1(BacilliusfirmusSAB-1)，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCCNo.2100。2、利用權(quán)利要求1所述的堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌SAB-1生產(chǎn)的微生物菌劑，其特征在于其活性成分為堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌SAB-1菌體和它的胞外代謝產(chǎn)物。3、按照權(quán)利要求2所述的微生物菌劑，其特征在于其所述菌劑為液態(tài)制劑。4、權(quán)利要求2或3所述的微生物菌劑的制備方法，包括如下歩驟(1)菌種活化將低溫保存的SAB-1菌株接種LB平板培養(yǎng)基上，并在2832X:下培養(yǎng)2024小時(shí)；然后挑取單菌落接種于LB斜面培養(yǎng)基上，并在2832'C下培養(yǎng)2024小時(shí)，再用無菌水洗滌培養(yǎng)基表面，其洗脫液作為接種液；(2)種子液的制備按照0.050.5%比例(體積百分比)向LB液體培養(yǎng)基中接入步驟(1)制備的接種液，在2834。C下震蕩培養(yǎng)1216小時(shí)，得種子液;(3)發(fā)酵培養(yǎng)將步驟(2)所得種子液按照110%比例(體積百分比)接入玉米粉豆餅份培養(yǎng)基中，然后在2834"C、搖床轉(zhuǎn)速為170210rpm的條件下培養(yǎng)2225小時(shí)，所得即為菌株SAB-1的液體制劑；其中所述的玉米粉豆餅份培養(yǎng)基的組分及其重量百分比為玉米粉2.5%~3.5%，豆餅粉2.5%3.5%，NaCl0.4%~0.6%，CaC030.1%0.2%，KH2P040.01%~0.03%和MgS04'7H200.02%0.04%，其余為水。5、按照權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于其步驟(3)所述的溫度為3032°C。6、按照權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于其歩驟(3)所述的搖床轉(zhuǎn)速為210rpm。7、按照權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于其步驟(3)所述的培養(yǎng)時(shí)間為24小時(shí)。8、權(quán)利要求1所述的堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌菌株SAB-1在防治植物病害上的應(yīng)用。9、權(quán)利要求1所述的堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌菌株SAB-1在防治草莓白粉病上應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明公開了一種堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌SAB-1(BacilliusfirmusSAB-1)，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCCNo.2100；本發(fā)明還公開了利用堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌SAB-1制備的微生物菌劑，本發(fā)明SAB-1菌株可用于草莓白粉病的防治，具有高效、抑菌譜廣、使用簡單、成本低、無環(huán)境污染等特點(diǎn)。文檔編號C12N1/20GK101148649SQ20071012127公開日2008年3月26日申請日期2007年9月3日優(yōu)先權(quán)日2007年9月3日發(fā)明者李社增,郭慶港,平馬,鹿秀云申請人:河北省農(nóng)林科學(xué)院植物保護(hù)研究所