專利名稱：：新品種鯉魚(yú)的選育方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種魚(yú)類新品種的選育方法。技術(shù)背景鯉魚(yú)是我國(guó)乃至世界最大的水產(chǎn)養(yǎng)殖魚(yú)種，目前主要是采用群體選育、種內(nèi)雜交或雌核發(fā)育等手段進(jìn)行鯉魚(yú)的養(yǎng)殖和培育。群體選育是以表型選擇為主，在育種前由于不清楚選育對(duì)象的遺傳組成，所以易產(chǎn)生近親交配，導(dǎo)致鯉魚(yú)經(jīng)濟(jì)性狀和生產(chǎn)性能下降，從而出現(xiàn)經(jīng)濟(jì)性狀衰退的現(xiàn)象。鯉魚(yú)種內(nèi)雜交隨機(jī)性大，選育優(yōu)良品種的概率低，而且也容易發(fā)生近親交配，導(dǎo)致鯉魚(yú)經(jīng)濟(jì)性狀和生產(chǎn)性能下降。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是為解決目前鯉魚(yú)養(yǎng)殖和培育中群體選育方法存在易產(chǎn)生近親交配，導(dǎo)致經(jīng)濟(jì)性狀和生產(chǎn)性能下降；種內(nèi)雜交方法隨機(jī)性大，選育優(yōu)良品種的概率低，也容易發(fā)生近親交配的問(wèn)題，而提供的一種新品種鯉魚(yú)的選育方法。本發(fā)明新品種鯉魚(yú)按以下步驟選育一、根據(jù)新品種性狀的設(shè)計(jì)要求進(jìn)行表型性狀挑選，符合要求的鯉魚(yú)作為繁殖親本；二、檢測(cè)親本間的遺傳信息；三、根據(jù)遺傳信息進(jìn)行繁殖配組，繁殖親本至少分成2個(gè)繁殖群體，每個(gè)繁殖群體中任意一對(duì)雌雄個(gè)體間的遺傳距離應(yīng)大于家系三代間的遺傳距離；四、繁殖群體內(nèi)自由交配、培育子代鯉魚(yú)性成熟；五、以子代鯉魚(yú)為新一代繁殖親本，重復(fù)操作步驟一至四，直到子代鯉魚(yú)群體達(dá)到新品種性狀設(shè)計(jì)要求，即得到新品種鯉魚(yú)。本發(fā)明步驟一中表型性狀挑選公式為Xn=i±2S，公式中Xn為親本的表型性狀測(cè)定值，義為鯉魚(yú)群體表型性狀的平均值，S為鯉魚(yú)群體表型性狀的標(biāo)準(zhǔn)差。步驟二檢測(cè)親本間的遺傳信息a.提取繁殖親本DNA;b.繁殖親本DNA均用30對(duì)微衛(wèi)星引物分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增；c.利用圖譜分析軟件對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行數(shù)字化處理；d.數(shù)字化數(shù)據(jù)導(dǎo)入親緣分析軟件分析計(jì)算，獲得遺傳信息。本發(fā)明方法在選育鯉魚(yú)新品種的過(guò)程中始終利用分子標(biāo)記檢測(cè)親本與子代的遺傳組成，從而可避免近親交配，而且鯉魚(yú)新品種的性狀按所設(shè)定的方向發(fā)展，優(yōu)良新品種的出現(xiàn)概率高，其經(jīng)濟(jì)性狀和生產(chǎn)性能顯著提高。具體實(shí)施方式具體實(shí)施方式一本實(shí)施方式新品種鯉魚(yú)按以下步驟選育一、根據(jù)新品種性狀的設(shè)計(jì)要求進(jìn)行表型性狀挑選，符合要求的鯉魚(yú)作為繁殖親本；二、檢測(cè)親本間的遺傳信息；三、根據(jù)遺傳信息進(jìn)行繁殖配組，繁殖親本至少分成2個(gè)繁殖群體，每個(gè)繁殖群體中任意一對(duì)雌雄個(gè)體間的遺傳距離應(yīng)大于家系三代間的遺傳距離；四、繁殖群體內(nèi)自由交配、培育子代鯉魚(yú)性成熟；五、以子代鯉魚(yú)為新一代繁殖親本，重復(fù)操作步驟一至四，直到子代鯉魚(yú)群體達(dá)到新品種性狀設(shè)計(jì)要求，即得到新品種鯉魚(yú)。本實(shí)施方式可根據(jù)需求進(jìn)行設(shè)計(jì)，如選擇培育鱗被、生長(zhǎng)速度快、飼料轉(zhuǎn)化率高、肉質(zhì)好等性狀的鯉魚(yú)新品種。本實(shí)施方式還可以根據(jù)選育目標(biāo)對(duì)外觀與體型等不可量化的表型性狀進(jìn)行挑選。本實(shí)施方式步驟三中繁殖親本所分成的繁殖群體個(gè)數(shù)越多越好，可提供更多的選擇，并提高出現(xiàn)優(yōu)良新品種的數(shù)量及機(jī)會(huì)。本實(shí)施方式將經(jīng)濟(jì)性狀的優(yōu)勢(shì)基因型一代一代地富集起來(lái)，從而實(shí)現(xiàn)選育出經(jīng)濟(jì)性狀優(yōu)異、生產(chǎn)性能高、遺傳性狀穩(wěn)定的鯉魚(yú)新品種的目標(biāo)。具體實(shí)施方式二本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一的不同點(diǎn)是步驟一中表型性狀挑選公式為Xn^C士2S，公式中Xn為親本的表型性狀測(cè)定值，義為鯉魚(yú)群體表型性狀的平均值，S為鯉魚(yú)群體表型性狀的標(biāo)準(zhǔn)差。其它步驟及參數(shù)與實(shí)施方式一相同。由選擇強(qiáng)度可知1倍S則選擇強(qiáng)度最高，2倍S則選擇強(qiáng)度中等，3倍S則選擇強(qiáng)度最低，因此本實(shí)施方式將大于表型性狀平均值+二倍標(biāo)準(zhǔn)差和小于表型性狀平均值-二倍標(biāo)準(zhǔn)差的鯉魚(yú)個(gè)體舍去。具體實(shí)施方式三本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一的不同點(diǎn)是步驟二檢測(cè)親本間的遺傳信息a.提取繁殖親本DNA;b.繁殖親本DNA均用30對(duì)微衛(wèi)星引物分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增；c.利用圖譜分析軟件對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行數(shù)字化處理；d.數(shù)字化數(shù)據(jù)導(dǎo)入親緣分析軟件分析計(jì)算，獲得遺傳信息。其它步驟及參數(shù)與實(shí)施方式一相同。本實(shí)施方式中要對(duì)提取過(guò)DNA的繁殖親本進(jìn)行標(biāo)記，可采用電子標(biāo)記、常規(guī)標(biāo)記方法(剪取背鰭、系不同顏色的塑料管等其它物理標(biāo)記方法)或分池飼養(yǎng)。本實(shí)施方式也可以不使用全部30對(duì)微衛(wèi)星引物，而只選用其中部分的微衛(wèi)星引物(但必須多于25對(duì)微衛(wèi)星引物)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。具體實(shí)施方式四本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式三的不同點(diǎn)是步驟b中每對(duì)微衛(wèi)星引物的PCR反應(yīng)總體積為25pL由18piLPCR反應(yīng)緩沖液、50ng繁殖親本DNA、lpL微衛(wèi)星引物、lUTaq聚合酶和余量的無(wú)菌超純水制成；其中PCR反應(yīng)緩沖液每升由0.25mmo1pH值為8.3的Tris，Cl、1.25mmo1KC1、0.0375mmolMgCl2、0.25mLGelatin、2.5mLTween、2.5mLNP-40、0.02mmoldNTP和余量的去離子水組成。其它步驟及參數(shù)與實(shí)施方式三相同。具體實(shí)施方式五本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式三的不同點(diǎn)是步驟b中PCR反應(yīng)程序?yàn)?4。C預(yù)變性3min，94。C變性30sec，退火30s，72。C延伸30s,循環(huán)38次，最后72'C延伸5min。其它步驟及參數(shù)與實(shí)施方式三相同。具體實(shí)施方式六本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式三的不同點(diǎn)是步驟b中選用的30對(duì)微衛(wèi)星引物及其退火溫度如表1所示。其它步驟及參數(shù)與實(shí)施方式三相同。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>具體實(shí)施方式七本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式三的不同點(diǎn)是步驟d中使用的親緣分析軟件為POPGENEN軟件和PHYLIP軟件。其它步驟及參數(shù)與實(shí)施方式三相同。具體實(shí)施方式八本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式三的不同點(diǎn)是步驟CPCR擴(kuò)增產(chǎn)物先在電壓為200V的條件下凝膠電泳2h，然后GoldView染色，再以溴酚藍(lán)為凝膠上樣液凝膠電泳，之后用凝膠成像儀記錄電泳結(jié)果并用圖譜分析軟件進(jìn)行數(shù)字化處理。其它步驟及參數(shù)與實(shí)施方式三相同。本實(shí)施方式所用的凝膠為濃度為2%的瓊脂糖凝膠。具體實(shí)施方式九本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式三或八的不同點(diǎn)是步驟C中使用的圖譜分析軟件為Gel-pro4.5軟件。其它步驟及參數(shù)與實(shí)施方式三或八相同。具體實(shí)施方式十本實(shí)施方式新品種鯉魚(yú)按以下步驟選育步驟一、根據(jù)新品種生長(zhǎng)速度快、體重大的設(shè)計(jì)要求對(duì)國(guó)家換新良種場(chǎng)的400尾鏡鯉親魚(yú)進(jìn)行表型性狀挑選，挑選公式為Xn=5C±2S，公式中Xn為親本的體長(zhǎng)、體重表型性狀測(cè)定值，滅為鯉魚(yú)群體表型性狀的平均值，S為鯉魚(yú)群體表型性狀的標(biāo)準(zhǔn)差，將大于表型性狀平均值+二倍標(biāo)準(zhǔn)差和小于表型性狀平均值-二倍標(biāo)準(zhǔn)差的鯉魚(yú)個(gè)體舍去，復(fù)合要求的鯉魚(yú)作為繁殖親本。步驟二、檢測(cè)親本間的遺傳信息a.提取繁殖親本DNA對(duì)繁殖親本進(jìn)行常規(guī)物理標(biāo)記，標(biāo)記的同時(shí)一對(duì)一的剪取鰭條0.080.12克，放到有與繁殖親本標(biāo)記相同的離心管(可放入冰箱待用或直接用于提取DNA);向離心管中加入0.5mL裂解液(每升裂解液中含有濃度為0.5%(W/V)的十二垸基肌氨酸鈉5g、蛋白酶K200mg和濃度為0.5mol/L的EDTA200mL)后在5(TC條件下消化lh，消化液再放入68。C的環(huán)境中處理15min;之后用與消化液等體積的提取液(提取液由酚、氯仿和異戊醇組成，酚、氯仿與異戊醇的體積比為25:24:1)抽提2次；然后用無(wú)DNA的RNA酶消化其中含有的RNA,并用提取液(同上)抽提2次；再經(jīng)數(shù)次透析(每升透析液中含有50mmo1pH值為8.0Tris'Cl、10mmolEDTA、lOmmolNaCl)直到OD270<0.05;向透析液中加入透析液體積2倍的冰預(yù)冷的無(wú)水乙醇，經(jīng)沉淀后離心除上清液，再向沉淀中加入與沉淀等體積的冰預(yù)冷的質(zhì)量濃度為70%乙醇洗滌，并離心除去上清液在室溫條件下干燥，再用O.IXTE緩沖液溶解。(或者按現(xiàn)有其它標(biāo)準(zhǔn)方法提取可進(jìn)行PCR分析所用的DNA樣品，樣品應(yīng)置于4'C環(huán)境中保存?zhèn)溆?b.繁殖親本DNA均用30對(duì)微衛(wèi)星引物分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增每對(duì)微衛(wèi)星引物的PCR反應(yīng)總體積為25pL由18pLPCR反應(yīng)緩沖液、50ng繁殖親本DNA、lpL微衛(wèi)星引物、lUTaq聚合酶和余量的無(wú)菌超純水制成；其中PCR反應(yīng)緩沖液每升由0.25mmo1pH值為8.3的Tris*Cl、1.25mmolKC1、0.0375mmolMgCl2、0.25mLGelatin、2.5mLTween、2.5mLNP-40、0.02mmoldNTP(4種dNTP每種dNTP在PCR反應(yīng)緩沖液中的濃度各為0.25mmol/L)和余量的去離子水組成；PCR反應(yīng)程序?yàn)?4'C預(yù)變性3min，94'C變性30sec，退火30s，72。C延伸30s，循環(huán)38次，最后72'C延伸5min;其中選用的30對(duì)微衛(wèi)星引物及其退火溫度如表1所示。c.利用圖譜分析軟件對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行數(shù)字化處理PCR擴(kuò)增產(chǎn)物先在電壓為200V的條件下凝膠電泳2h，然后GoldView染色，再以溴酚藍(lán)為凝膠上樣液凝膠電泳，之后用凝膠成像儀記錄電泳結(jié)果并用圖譜分析軟件Gd-pro4.5進(jìn)行數(shù)字化處理。d.數(shù)字化數(shù)據(jù)導(dǎo)入親緣分析軟件分析計(jì)算使用的親緣分析軟件為POPGENEN軟件和PHYLIP軟件進(jìn)行親緣分析和計(jì)算，獲得繁殖親本的遺傳信息(可以根據(jù)遺傳信息剔除劣質(zhì)個(gè)體)。步驟三、根據(jù)遺傳信息進(jìn)行繁殖配組，繁殖親本分成8個(gè)繁殖群體，每個(gè)繁殖群體中任意一對(duì)雌雄個(gè)體間的遺傳距離應(yīng)大于家系三代間的遺傳距離。(本實(shí)施方式中每個(gè)雌性親本在群體中平均有近親雄魚(yú)2.5個(gè)，選擇無(wú)近親關(guān)系或遺傳距離大于三代家系間近親的遺傳距離即遺傳距離大于0.20的親本進(jìn)行配組，去除掉遺傳距離小于0.20且近親關(guān)系重的無(wú)法配組的個(gè)體。)步驟四、繁殖群體內(nèi)自由交配、培育子代鯉魚(yú)性成熟步驟五、以子代鯉魚(yú)作為新一代繁殖親本，重復(fù)操作步驟一至四，直到子代鯉魚(yú)群體成為生長(zhǎng)速度快、體重大的新品種鯉魚(yú)。本實(shí)施方式得到兩個(gè)新品種鯉魚(yú)。將國(guó)家換新良種場(chǎng)的另外400尾鏡鯉作為對(duì)照組、興國(guó)紅鯉作為空白組與本實(shí)施方式兩個(gè)新品種鯉魚(yú)進(jìn)行對(duì)比。在養(yǎng)殖條件相同的情況下，本實(shí)施方式兩個(gè)新品種鯉魚(yú)分別比對(duì)照組生長(zhǎng)速度平均快18.45%和8.56%，比空白組生長(zhǎng)速度平均快131.38%和112.07%;本實(shí)施方式兩個(gè)新品種鯉魚(yú)個(gè)體的體重分別比對(duì)照組的平均重15%和8%，比空白組平均重120%和110%。序列表<110>中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黑龍江水產(chǎn)研究所<120>新品種鯉魚(yú)的選育方法<160>60<210>1<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座Cca04設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(1)的上游引物<>1atcccttaccgccctgtgt19<210>2<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座Cca04設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(1)的下游引物<400>2agctgaaaaacgctgtcacg20<210>3<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ019設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(2)的上游引物<400>3actgctggctcaggaaca18<210>4<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ019設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(2)的下游引物<400>4agagcaaagatggtagctc19<210>5_<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ037設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(3)的上游引物<400>5cgtggaggcataagggat18<210>6，<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ037設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(3)的下游引物<400>6acgggagcgtac卿aat18<210>7<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ038設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(4)的上游引物<400>7cacagaacgcatcagtaa18<210>8<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ038設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(4)的下游引物<400>8tgtaaaccttcaacctcc18<210>9<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ041設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(5)的上游引物<400>9agaccaccgcagtaacaa18<210>10<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ041設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(5)的下游引物<400>10gactcactcagcaccaga18<210>11<211>17<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ044設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(6)的上游引物<400>11gtacagcgtgacagcat17<210>12<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ044設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(6)的下游引物<400>12aagttcatcggtgtcctc18<210>13<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ046設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(7)的上游引物<400>13aaccctgaactcacaaac18<210>14<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ046設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(7)的下游引物<400>14cacggaaactgagaagac18<210>15<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ049設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(8)的上游引物<400>15gatttgtgctcctcaacc18<210>16<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223〉根據(jù)基因座HLJ049設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(8)的下游引物<400>16ctgtcacttctccttcca18<210>17<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ055設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(9)的上游引物<400>17ggtacaacgggaeiccaca18<210>18<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ055設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(9)的下游引物<400>18tgattgacaggcagtggg18<210>19<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ058設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(10)的上游引物<400>19c卿tggcagacaggtaa18<210>20<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ058設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(10)的下游引物<400>20gagcaagtgagggaacag18<210>21<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ060設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(11)的上游引物<400>21'cgatcactggcaagatta18<210>22<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ060設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(11)的下游引物<400>22atggactacacctcaccc18<210>23<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ338設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(12)的上游引物<400>23ga卿atgggtgELgta卿19<210>24<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ338設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(12)的下游引物<400>24actaggatttggaagagc18<210>25<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ372設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(13)的上游引物<400>25tctacttctaccgccact18<210>26<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ372設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(13)的下游引物<400>26gactattcacctgcatctt19<210>27<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ379設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(14)的上游引物<400>27gggg卿cgaga站tgca18<210〉28<211>18<212〉DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ379設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(14)的下游引物<400>28agcaggtctgtgggcaag18<210>29<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ380設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(15)的上游引物<400>29aggcagacgaiaaggtaaa18<210>30<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ380設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(15)的下游引物<400>30ctcgcttctgtaggcatt18<210>31<211>18—<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ383設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(16)的上游引物<400>31ggctcctcctcatcctct18<210>32<211>18<212>D^A<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ383設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(16)的下游引物<400>32gcacttctgcacctttca18<210>33<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ392設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(17)的上游引物<400>33ggctacaaggcaacactg18<210>34<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223〉根據(jù)基因座HLJ392設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(17)的下游引物<400>34tgcggttaatgaggtctg18<210>35<211>19<212>DNA<213>人工序列<220〉<223>根據(jù)基因座HLJ393設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(18)的上游引物<400>35tgcggtcattactcattcg19<210>36<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ393設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(18)的下游引物<400>36cccagcacctgtttccac18<210>37<211>21<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ398設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(19)的上游引物<400>37cattacttgaactatcatcca21<210>38<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ398設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(19)的下游引物<400>38tgtgctgaggattattgg18<210>39<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ400設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(20)的上游引物<400>39aagaagcctcggtcctcc18<210>40<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ400設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(20)的下游引物<400>40aaagcccaaagcscatca18<210>41<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ805設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(21)的上游引物<400>41tctgctgaagggcgaaca18<210>42<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ805設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(21)的下游引物<400>42acgatcacgctgcgacta18<210>43<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ806設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(22)的上游引物<400>43ggtgtcaggctttagtcc18<210>44<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ806設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(22)的下游引物<400>44catctgagttttctccaagt20<210>45<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ809設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(23)的上游引物<400>45atcatcacagccaasgaagt20<210>46<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ809設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(23)的下游引物<400>46tacggacatagtgc卿caa20<210>47<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ817設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(24)的上游引物<400>47gacgatccagcagcaatg18<210>48<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ817設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(24)的下游引物<400>48ctcttcctaaagcctcaaa19<210>49<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ848設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(25)的上游引物<400>49g卿acacggctggatgg18<210>50<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ84S設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(25)的下游引物<400>50gtgggtgtttgaattgagat20<210>51<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ855設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(26)的上游引物<400>51cgaccgaactcagaacac18<210>52<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ855設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(26)的下游引物<400>52gagcaccgcattaacaga18<210>53<211>21<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ873設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(27)的上游引物<400>53agtgtcgtttatgcgtatctt21<210>54<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ873設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(27)的下游引物<400>54agctcgcctactcttctact20<210>55<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ878設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(28)的上游引物<400>55agtgg鄉(xiāng)acgtgacagt18<210>56<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ878設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(28)的下游引物<400>56aagc卿gcctgatttga18<210>57<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HU896設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(29)的上游引物<400>57atcaccagtacattcact18<210>58<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ896設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(29)的下游引物<400>58cgtttagcaaaggttagt18<210>59<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ900設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(30)的上游引物<400>59aaggacgacggaaggttt18<210>60<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ900設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(30)的下游引物<400>60acactgacgggtca卿g18權(quán)利要求1、新品種鯉魚(yú)的選育方法，其特征在于新品種鯉魚(yú)按以下步驟選育一、根據(jù)新品種性狀的設(shè)計(jì)要求進(jìn)行表型性狀挑選，符合要求的鯉魚(yú)作為繁殖親本；二、檢測(cè)親本間的遺傳信息；三、根據(jù)遺傳信息進(jìn)行繁殖配組，繁殖親本至少分成2個(gè)繁殖群體，每個(gè)繁殖群體中任意一對(duì)雌雄個(gè)體間的遺傳距離應(yīng)大于家系三代間的遺傳距離；四、繁殖群體內(nèi)自由交配、培育子代鯉魚(yú)性成熟；五、以子代鯉魚(yú)為新一代繁殖親本，重復(fù)操作步驟一至四，直到子代鯉魚(yú)群體達(dá)到新品種性狀設(shè)計(jì)要求，即得到新品種鯉魚(yú)。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的新品種鯉魚(yú)的選育方法，其特征在于步驟一中表型性狀挑選公式為Xn^C士2S，公式中Xn為親本的表型性狀測(cè)定值，5C為鯉魚(yú)群體表型性狀的平均值，S為鯉魚(yú)群體表型性狀的標(biāo)準(zhǔn)差。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的新品種鯉魚(yú)的選育方法，其特征在于步驟二檢測(cè)親本間的遺傳信息a.提取繁殖親本DNA;b.繁殖親本DNA均用30對(duì)微衛(wèi)星引物分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增；c.利用圖譜分析軟件對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行數(shù)字化處理；d.數(shù)字化數(shù)據(jù)導(dǎo)入親緣分析軟件分析計(jì)算，獲得遺傳信息。4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的新品種鯉魚(yú)的選育方法，其特征在于步驟b中每對(duì)微衛(wèi)星引物的PCR反應(yīng)總體積為25pL由18nLPCR反應(yīng)緩沖液、50ng繁殖親本DNA、1^L微衛(wèi)星引物、lUTaq聚合酶和余量的無(wú)菌超純水制成；其中PCR反應(yīng)緩沖液每升由0.25mmolpH值為8.3的Tris，Cl、1.25mmolKCl、0.0375mmolMgCl2、0.25rnLGelatin、2.5mLTween、2.5mLNP-40、0.02mmoldNTP和余量的去離子水組成。5、根據(jù)權(quán)利要求3所述的新品種鯉魚(yú)的選育方法，其特征在于步驟b中PCR反應(yīng)程序?yàn)?4。C預(yù)變性3min，94。C變性30sec，退火30s，72。C延伸30s，循環(huán)38次，最后72。C延伸5min。6、根據(jù)權(quán)利要求3所述的新品種鯉魚(yú)的選育方法，其特征在于步驟b中選用的30對(duì)微衛(wèi)星引物及其退火溫度分別為微衛(wèi)星引物(1)上游引物ATCCCTTACCGCCCTGTGT下游引物AGCTGAAAAACGCTGTCACG退火溫度為50°C，微衛(wèi)星引物(2)上游引物ACTGCTGGCTCAGGAACA下游引物AGAGCAAAGATGGTAGCTC退火溫度為53°C，微衛(wèi)星引物(3)上游引物CGTGGAGGCATAAGGGAT下游引物ACGGGAGCGTACAGAAAT退火溫度為53°C，微衛(wèi)星引物(4)上游引物CACAGAACGCATCAGTAA下游弓l物TGTAAACCTTCAACCTCC退火溫度為53°C，微衛(wèi)星引物(5)上游引物AGACCACCGCAGTAACAA下游引物GACTCACTCAGCACCAGA退火溫度為53°C，微衛(wèi)星引物(6)上游引物GTACAGCGTGACAGCAT下游引物AAGTTCATCGGTGTCCTC退火溫度為53°C，微衛(wèi)星引物(7)上游引物AACCCTGAACTCACAAAC下游引物CACGGAAACTGAGAAGAC退火溫度為53°C，微衛(wèi)星引物(8)上游引物GATTTGTGCTCCTCAACC下游弓l物CTGTCACTTCTCCTTCCA退火溫度為54°C，微衛(wèi)星引物(9)上游引物GGTACAACGGGAACCACA下游引物TGATTGACAGGCAGTGGG退火溫度為54°C，微衛(wèi)星引物(10)上游引物CAGATGGCAGACAGGTAA下游引物GAGCAAGTGAGGGAACAG退火溫度為53°C，微衛(wèi)星引物(11)上游引物CgATCACTGGCAAGATTA下游弓l物ATGGACTACACCTCACCC退火溫度為54°C，微衛(wèi)星引物(12)上游引物GAAGAATGGGTGAGTAAGA下游引物ACTAGGATTTGGAAGAGC退火溫度為51°C，微衛(wèi)星弓l物(13)上游弓l物TCTACTTCTACCGCCACT退火溫度為:微衛(wèi)星引物退火溫度為:微衛(wèi)星引物退火溫度為-微衛(wèi)星引物退火溫度為:微衛(wèi)星引物退火溫度為:微衛(wèi)星引物退火溫度為:微衛(wèi)星引物退火溫度為:微衛(wèi)星引物退火溫度為:微衛(wèi)星引物退火溫度為:微衛(wèi)星引物退火溫度為:微衛(wèi)星引物退火溫度為:下游引物:54°C，(14)上游引物:下游引物-54°C，(15)上游引物:下游引物:54°C，(16)上游引物:下游引物-5rc，(17)上游引物:下游引物:54°C，(18)上游引物:下游引物:54°C，(19)上游引物:下游引物:54°C，(20)上游引物:下游引物:51°C，(21)上游引物:下游引物:48°C，(22)上游引物:下游引物:48°C，(23)上游引物:下游引物:48°C，GACTATTCACCTGCATCTTGGGGAGACGAGAAGTGCAAGCAGGTCTGTGGGCAAGAGGCAGACGAAAGGTAAACTCGCTTCTGTAGGCATTGGCTCCTCCTCATCCTCTGCACTTCTGCACCTTTCAGGCTACAAGGCAACACTGTGCGGTTAATGAGGTCTGTGCGGTCATTACTCATTCGCCCAGCACCTGTTTCCACCATTACTTGAACTATCATCCATGTGCTGAGGATTATTGGAAGAAGCCTCGGTCCTCCAAAGCCCAAAGCACATCATCTGCTGAAGGGCGAACAACGATCACGCTGCGACTAGGTGTCAGGCTTTAGTCCCATCTGAGTTTTCTCCAAGTATCATCACAGCCAAAGAAGTTACGGACATAGTGCAGACAA微衛(wèi)星引物退火溫度為微衛(wèi)星引物退火溫度為微衛(wèi)星引物退火溫度為微衛(wèi)星引物退火溫度為微衛(wèi)星引物退火溫度為微衛(wèi)星引物退火溫度為微衛(wèi)星引物退火溫度為(24)上游引物:下游引物:48°C,(25)上游引物:下游引物::48°C,(26)上游引物:下游引物::48。C，(27)上游引物:下游引物::48°C，(28)上游引物:下游引物::54°C，(29)上游引物:下游引物-:53。C，(30)上游引物:下游引物::50°C。GACGATCCAGCAGCAATGCTCTTCCTAAAGCCTCAAAGAGAACACGGCTGGATGGGTGGGTGTTTGAATTGAGATCGACCGAACTCAGAACACGAGCACCGCATTAACAGAAGTGTCGTTTATGCGTATCTTAGCTCGCCTACTCTTCTACTAGTGGAGGACGTGACAGTAAGCAGAGCCTGATTTGAATCACCAGTACATTCACTCGTTTAGCAAAGGTTAGTAAGGACGACGGAAGGTTTACACTGACGGGTCAAGAG7、根據(jù)權(quán)利要求3所述的新品種鯉魚(yú)的選育方法，其特征在于步驟d中使用的親緣分析軟件為POPGENEN軟件和PHYLIP軟件。8、根據(jù)權(quán)利要求3所述的新品種鯉魚(yú)的選育方法，其特征在于步驟cPCR擴(kuò)增產(chǎn)物先在電壓為200V的條件下凝膠電泳2h，然后GoldView染色，再以溴酚藍(lán)為凝膠上樣液凝膠電泳，之后用凝膠成像儀記錄電泳結(jié)果并用圖譜分析軟件進(jìn)行數(shù)字化處理。9、根據(jù)權(quán)利要求3或8所述的新品種鯉魚(yú)的選育方法，其特征在于步驟c中使用的圖譜分析軟件為Gel-pro4.5軟件。全文摘要新品種鯉魚(yú)的選育方法，它涉及一種魚(yú)類新品種的選育方法。它解決了目前鯉魚(yú)養(yǎng)殖和培育中群體選育方法存在易產(chǎn)生近親交配，導(dǎo)致經(jīng)濟(jì)性狀和生產(chǎn)性能下降；種內(nèi)雜交方法隨機(jī)性大，選育優(yōu)良品種的概率低，也容易發(fā)生近親交配問(wèn)題。選育步驟一、表型性狀挑選；二、檢測(cè)親本間的遺傳信息；三、根據(jù)遺傳信息進(jìn)行繁殖配組；四、培育子代成熟；五、以子代鯉魚(yú)為新一代繁殖親本，重復(fù)操作步驟一至四，直到鯉魚(yú)達(dá)到新品種性狀設(shè)計(jì)要求。本發(fā)明方法在選育鯉魚(yú)新品種的過(guò)程中始終利用分子標(biāo)記檢測(cè)親本與子代的遺傳組成，從而可避免近親交配，而且鯉魚(yú)新品種的性狀按所設(shè)定的方向發(fā)展，優(yōu)良新品種的出現(xiàn)概率高，其經(jīng)濟(jì)性狀和生產(chǎn)性能顯著提高。文檔編號(hào)C12Q1/68GK101120666SQ20071014436公開(kāi)日2008年2月13日申請(qǐng)日期2007年9月26日優(yōu)先權(quán)日2007年9月26日發(fā)明者匡友誼,孫效文,曹頂臣,梁利群,魯翠云申請(qǐng)人:中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黑龍江水產(chǎn)研究所