專利名稱：一種減緩黑芥子酶失活的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物化學(xué)及食品工藝技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種酶制劑的保護方法，具體為一種適 用于防止和減緩黑芥子酶失活的方法。
背景技術(shù)：
黑芥子酶存在于十字花科植物中。在一定的條件下，黑芥子酶可以將硫代葡萄糖苷分解， 生成葡萄糖、硫酸鹽、異硫代氰酸鹽、乙腈、硫氰酸鹽等物質(zhì)。其中20多種異硫代氰酸鹽具 有抗癌生物活性，特別是蘿卜硫素的抗癌效果最好。人們食用十字花科蔬菜，因為加熱烹飪， 黑芥子酶會失活，蔬菜中硫代葡萄糖苷在腸胃中轉(zhuǎn)化成異硫代氰酸鹽的量很少。如果能夠在 飯前飯后食用黑芥子酶膠囊，將顯著促進這種轉(zhuǎn)化。另外，黑芥子酶作為酶制劑也需要活性 保持技術(shù)。
近年來，國際上關(guān)于黑芥子酶在實驗室中提取分離有一些報道，提取原料涉及很多種十 字花科植物。但是在如何防止提取后的黑芥子酶失活的問題上，國內(nèi)外基本沒有報道。黑芥 子酶很容易失活，使該酶難以作為酶制劑用于工業(yè)化生產(chǎn)。目前酶制劑工業(yè)的酶的保藏是干 粉或液體，常溫或低溫保藏。黑芥子酶在液體中即使4'C保藏，也很快失去活性。黑芥子酶 直接冷凍或脫水干燥后將沒有活性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種適合于防止和減緩黑芥子酶酶制劑的失活的方法。
可以用于常溫保存的方法
在4"C條件下，按新鮮酶液每毫升體積計，加入0.3 0.6克的糊精，充分混合后，真空 冷凍干燥，常溫或4'C保藏。
酶液(4t:)，在4'C條件下，在酶液中添加糊精，最終濃度為糊精占總量30%~60%，即重 量g/體積ml比，混合均勻后真空冷凍干燥，干燥的黑芥子酶可以于常溫保存。
凍干保藏的黑芥子酶常溫放置21天后，黑芥子酶的催化活力為原新鮮酶的45%以上。
酶液混合糊精時候，需要低溫操作，因為酶容易失活。添加糊精濃度過低時，酶沒有被 糊精充分包埋，真空干燥后產(chǎn)品，酶活力損失較大。酶活力隨糊精濃度的增大而提高，但是 糊精添加量超過60%后，酶活力提高的幅度逐漸降低。利用真空冷凍干燥技術(shù)在低壓低溫的環(huán) 境下，將黑芥子酶混合物中的水分去除。產(chǎn)品為粉狀。
用于冷凍保存的方法
即提供一種防止和減緩黑芥子酶制劑冷凍下保存失活的方法。
在4'C條件下，在新鮮的黑芥子酶液中直接加入甘油，按體積比計，甘油添加量為新鮮 酶液的20~40%，酶液與甘油充分混合后，-2(TC冷凍保藏。
即在4。C條件下，在生產(chǎn)的新鮮的黑芥子酶液中，按體積比計，直接加入20 40%甘油， 震蕩使粗酶與甘油充分混勻，于一2(TC冷凍保存。
20%~40%甘油有保護黑芥子酶活性的作用，并且防止酶低溫下受凍而失活。注意要充分震 蕩使粗酶與甘油混勻。
具體實施例方式
下面通過以西蘭花提取的黑芥子酶為實例，進一步說明本發(fā)明，其具體實施工藝流程如
下
實施例1:
西蘭花lkg ，加入1L蒸餾水，用組織搗碎機打碎，用板框或紗布過濾后，濾液加入
兩倍體積的95%乙醇，析出沉淀，以3000r/min~4000r/min， 15 min 20min離心，收集沉淀 為黑芥子粗酶液200ml。將酶液制冷到-4'C，在酶液中直接加糊精，使最后糊精在酶液中的 含量為60g,低溫下混合均勻，用保鮮膜封口，在保鮮膜上戳出透氣孔，真空冷凍干燥制成于 燥粉末，將干燥的黑芥子酶粉末制劑于常溫保存。凍干保藏的酶常溫放置21天后，黑芥子酶 的催化活力為原新鮮酶的45%以上。 實施例2:
西蘭花lkg ，加入1L蒸餾水，用組織搗碎機打碎，用板框或紗布過濾后，濾液加入兩 倍體積的95%乙醇'析出沉淀，以3000r/min 4000r/min, 15min 20min離心，收集沉淀為黑 芥子粗酶液200ml。將酶液制冷到-4°C，直接加入甘油40ml，震蕩使粗酶與甘油充分混勻，一 20。C冷凍保存。用glucoraphanin作底物進行酶解，HPLC檢測sulforaphane生成量，計算酶活。 冷凍保藏的黑芥子酶在一個月內(nèi)，活性保持50%以上。
實施例3:
西蘭花lkg ，加入1L蒸餾水，用組織搗碎機打碎，用板框或紗布過濾后，濾液加入 兩倍體積的95%乙醇，析出沉淀'以3000r/min~4000r/min， 15 min 20min離心，收集沉淀 為黑芥子粗酶液200ml。將酶液制冷到-4'C，在酶液中直接加糊精，使最后糊精在酶液中的 含量為120g，低溫下混合均勻，用保鮮膜封口，在保鮮膜上戳出透氣孔，真空冷凍干燥制成干 燥粉末，將千燥的黑芥子酶粉末制劑于常溫保存。凍干保藏的酶常溫放置21天后，黑芥子酶 的催化活力為原新鮮酶的45%以上。
實施例4:
西蘭花lkg ，加入1L蒸餾水，用組織搗碎機打碎，用板框或紗布過濾后，濾液加入兩 倍體積的95%乙醇，析出沉淀，以3000r/min 4000r/min, 15min 20min離心，收集沉淀為黑 芥子粗酶液200ml。將酶液制冷到-4'C,直接加入甘油80ml,震蕩使粗酶與甘油充分混勻，一 20。C冷凍保存。用glucoraphanin作底物進行酶解，HPLC檢測sulforaphane生成量，計算酶活。 冷凍保藏的黑芥子酶在一個月內(nèi)，活性保持50%以上。
實施例5:
西蘭花lkg ，加入1L蒸餾水，用組織搗碎機打碎，用板框或紗布過濾后，濾液加入 兩倍體積的95%乙醇，析出沉淀，以3000r/min~4000r/min, 15 min 20min離心，收集沉淀 為黑芥子粗酶液200ml。將酶液制冷到-4'C，在酶液中直接加糊精，使最后糊精在酶液中的 含量為90g,低溫下混合均勻，用保鮮膜封口，在保鮮膜上戳出透氣孔，真空冷凍干燥制成干 燥粉末，將干燥的黑芥子酶粉末制劑于常溫保存。凍干保藏的酶常溫放置21天后，黑芥子酶 的催化活力為原新鮮酶的45%以上。
實施例6:
西蘭花lkg ，加入1L蒸餾水，用組織搗碎機打碎，用板框或紗布過濾后，濾液加入 兩倍體積的95%乙醇，析出沉淀，以3000r/min~4000r/min， 15 min 20min離心，收集沉淀 為黑芥子粗酶液200ml。將酶液制冷到-4'C，直接加入甘油60ml，震蕩使粗酶與甘油充分混勻， 一20。C冷凍保存。
用glucoraphanin作底物進行酶解，HPLC檢測sulforaphane生成量，計算酶活。冷凍保藏 的黑芥子酶在一個月內(nèi)，活性保持50%以上。
權(quán)利要求
1.一種減緩黑芥子酶失活的方法，其特征在于在4℃條件下，按新鮮酶液每毫升體積計，加入0.3～0.6克的糊精，充分混合后，真空冷凍干燥，常溫或4℃保藏。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種減緩酶制劑黑芥子酶失活的方法。在4℃條件下，將糊精與新鮮黑芥子酶液混合，混合比例按重量體積比為3～6∶10，真空冷凍干燥后，常溫或4℃粉末保藏。保藏期間可以較好地減少黑芥子酶失去活性。
文檔編號C12N9/96GK101173265SQ200710156158
公開日2008年5月7日 申請日期2007年10月19日 優(yōu)先權(quán)日2007年10月19日
發(fā)明者王向陽 申請人:浙江工商大學(xué)