專利名稱：豬精液冷凍保存管及其豬精液冷凍保存方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種豬精液冷凍保存管及其豬精液冷凍保存方法。
背景技術(shù)：
在我國，豬是最主要的飼養(yǎng)家畜，豬肉產(chǎn)量約占全國肉類總量的
70%。隨著人民生活水平的提高，國內(nèi)外市場對商品豬的要求，已逐漸 從數(shù)量轉(zhuǎn)化到質(zhì)量(如肉質(zhì)等)。豬的育種方向也從主要著眼于生長 速度與瘦肉率的提高，轉(zhuǎn)變?yōu)楦纳曝i肉的品質(zhì)，提高肉的風(fēng)味。傳統(tǒng) 的選育方式世代間隔時(shí)間長，已不能適應(yīng)市場需求，而采用豬冷凍精 液技術(shù)，可充分利用優(yōu)良種畜，縮短良種選育世代間隔時(shí)間，快速建 立新的適合市場要求的種豬和商品豬雜交繁育體系。同時(shí)，近千年的 飼養(yǎng)史，己在我國形成了數(shù)百種各具特色的地方品種，這是一份非常 寶貴的財(cái)產(chǎn)，但近年國外豬種的引進(jìn)雜交，已使我國有相當(dāng)數(shù)量的地 方品種滅絕或面臨滅絕，而采用豬精液及胚胎冷凍保存技術(shù)可有效保 存我國地方豬種質(zhì)資源，具有不可估量的社會(huì)意義和效益。
雖然草食家畜精液超低溫(-196。C)冷凍保存技術(shù)已在現(xiàn)代化畜牧 生產(chǎn)、種質(zhì)資源保存中發(fā)揮著重要作用。但豬冷凍精液一直難以在生 產(chǎn)中大范圍推廣應(yīng)用，其原因有兩個(gè)， 一是豬精子細(xì)胞質(zhì)膜中膽固醇 與磷脂比率顯著低于草食動(dòng)物，在冷凍過程中精子膜的離子通透性增 強(qiáng)，脂類物質(zhì)流失，導(dǎo)致凍精活率低、受胎率低。二是豬一次配種的精 液量大(約為50毫升)，使用傳統(tǒng)的冷凍精液劑型如安瓿(約1 2 毫升)、顆粒(約0. 5毫升)、細(xì)管(約0. 25毫升)，每次配種均需 解凍相當(dāng)數(shù)量(約10 20支)的凍精，不僅操作煩瑣，而且受精效果 也大受影響。

發(fā)明內(nèi)容
針對以上問題，本發(fā)明的目的是提供一種能提高冷精活率的豬精 液冷凍保存管及其豬精液冷凍保存方法。
一種豬精液冷凍保存管，包括保存管，其特征在于保存管為雙 層管，雙層管的兩容器開口相反。本發(fā)明所述的雙層管是指在中央柱 形容器外還設(shè)有一圈環(huán)形容器的管。
一種豬精液冷凍保存方法，包括
a、 采精并用等溫的BTS (Beltsville thawing solution)稀釋 液稀釋一倍，
b、 在15。C條件下平衡2小時(shí)，然后1000轉(zhuǎn)離心10分鐘，
c、 離心后去除精清，精子沉淀用冷卻稀釋液稀釋，使精子密度 為2X109個(gè)/毫升。稀釋后的精液在5'C條件下平衡2小時(shí)，
d、 然后再用冷凍稀釋液1:1稀釋，使精子的最終密度為1X109 個(gè)/毫升，
其特征在于將以上步驟處理的冷凍稀釋后的精液裝入本發(fā)明的 豬精液冷凍保存管的環(huán)形容器中，然后將豬精液冷凍保存管插入液氮 上，熏蒸數(shù)分鐘后，直接投入液氮中長期保存。
本發(fā)明是通過利用兩容器開口相反的雙層管，即在中央柱形容器 外還設(shè)有一圈開口相反的環(huán)形容器的雙層管實(shí)現(xiàn)的。所以，在冷凍過 程中能增加精液與液氮的接觸面積，加快精液冷凍速率，降低冷凍對 精子的損傷，提高冷精活率；還具有成本低，操作便當(dāng)，功效高，保 證受胎率等優(yōu)點(diǎn)。


圖1是本發(fā)明的一種豬精液冷凍保存管結(jié)構(gòu)示意圖， 圖2是圖1的右視圖。
圖中管體l、環(huán)形容器2、柱形容器3。
具體實(shí)施方式
以下結(jié)合附圖和實(shí)施例進(jìn)行詳述
圖中的豬精液冷凍保存管為圓柱形雙層管，即雙層管為圓柱形管。 使用時(shí)，只要將提取的豬精液裝入雙層管形成的環(huán)形容器2中，并將
雙層管插入液氮中，就可以增加冷凍過程中精液與液氮的接觸面積， 加快精液冷凍速率，降低冷凍對精子的損傷，提高冷精活率。為了便 于制造，降低成本，雙層管用塑料材料制成。為了滿足豬一次人工授 精劑量，最大限度地簡化操作次數(shù)，提高功效，降低人工成本，確保 受胎率，雙層管的環(huán)形容器2的容積為5 15 ml。 本發(fā)明的方法實(shí)施例如下
1、豬精液預(yù)處理。選擇繁殖力高、體格健壯的金華種公豬，采用手握法采精。收集精子豐富部分，經(jīng)4層滅菌紗布過濾去除膠體后，
立即測精液量，并檢查精子活率，收集精子活率在75%以上的精液約 150毫升，用等溫的BTS (Beltsville thawing solution)稀釋液稀釋 一倍。在15"C條件下平衡2小時(shí)，然后1000轉(zhuǎn)離心10分鐘。
2、 精液冷卻處理。將預(yù)處理的豬精液離心后去除精清，精子沉淀 用冷卻稀釋液稀釋，使精子密度為2Xl(T個(gè)/毫升。稀釋后的精液在5 'C條件下平衡2小時(shí)。冷卻稀釋液的配方為100毫升稀釋液中含80 毫升11%的乳糖和20毫升卵黃。
3、 精液冷凍處理。將冷卻處理后的精液再用冷凍稀釋液1:1稀釋， 使精子的最終密度為1X109個(gè)/毫升。然后將精液裝入本發(fā)明的豬精液 冷凍保存管的環(huán)形容器(2)中，每管裝5 10毫升，置于液氮面上3 厘米，熏蒸20分鐘后，直接投入液氮中長期保存。
綜上所述，本發(fā)明方法的要點(diǎn)是將豬精液預(yù)處理和精液冷卻處 理后的冷凍稀釋后的精液裝入本發(fā)明的豬精液冷凍保存管的環(huán)形容器 中，然后將豬精液冷凍保存管插入液氮上，熏蒸數(shù)分鐘后，直接投入 液氮中長期保存。
為了檢測本發(fā)明效果，浙江省金華種豬場提取了依次按照本發(fā)明 實(shí)施例一的步驟處理保存的豬精液和傳統(tǒng)處理保存在麥管中的豬精液 各0.25毫升，置于52。C水浴鍋中20秒解凍，在顯微鏡下檢測精力活 力，其中本發(fā)明處理保存的豬精液解凍后精子活率為37. 1%，麥管處 理保存的豬精液解凍后活率為35.9%。
為了滿足豬一次人工授精劑量，每根豬精液冷凍保存管裝5 15 毫升冷凍稀釋后的豬精液。為提高處理保存效果，將裝有冷凍稀釋豬 精液的豬精液冷凍保存管插置于液氮面上3厘米，熏蒸20分鐘后，再
直接投入液氮中長期保存。
顯然，本發(fā)明中的BTS稀釋液配方為每升稀釋液含37克葡萄糖、 6克檸檬酸鈉、0.75克氯化鉀、1.25克碳酸氫鈉、1.25克乙二胺四醋 酸、100000單位青霉素和100毫克鏈霉素，冷卻稀釋液配方為100 毫升稀釋液含80毫升11%的乳糖和20毫升卵黃，冷凍稀釋液配方 為冷卻稀釋液中添加4%甘油和0.5%十二醇硫酸鈉。
權(quán)利要求
1、一種豬精液冷凍保存管，包括保存管，其特征在于保存管為雙層管，雙層管的兩容器開口相反。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬精液冷凍保存管，其特征在于用塑 料材料制成。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的豬精液冷凍保存管，其特征在于 雙層管為圓柱形管。
4、 根據(jù)權(quán)利要求3所述的豬精液冷凍保存管，其特征在于雙層管的環(huán)形容器(2)的容積為5 15 ml。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的豬精液冷凍保存管，其特征在于 雙層管的環(huán)形容器(2)的容積為5 15 ml。
6、 一種豬精液冷凍保存方法，包括a、 采精并用等溫的BTS (Beltsville thawing solution)稀釋 液稀釋一倍，b、 在15"C條件下平衡2小時(shí)，然后1000轉(zhuǎn)離心10分鐘，c、 離心后去除精清，精子沉淀用冷卻稀釋液稀釋，使精子密度為 2X109個(gè)/毫升。稀釋后的精液在5。C條件下平衡2小時(shí)，d、 然后再用冷凍稀釋液1:1稀釋，使精子的最終密度為1X109 個(gè)/毫升，其特征在于將以上步驟處理的冷凍稀釋后的精液裝入本發(fā)明的 豬精液冷凍保存管的環(huán)形容器(2)中，然后將豬精液冷凍保存管插入 液氮上，熏蒸數(shù)分鐘后，直接投入液氮中長期保存。
7、 根據(jù)權(quán)利要求6所述的豬精液冷凍保存的方法，其特征在于 每根豬精液冷凍保存管裝5 15毫升冷凍稀釋后的豬精液。
8、 根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的豬精液冷凍保存的方法，其特征在于將裝有冷凍稀釋豬精液的豬精液冷凍保存管插置于液氮面上3厘米，熏蒸20分鐘后，再直接投入液氮中長期保存。
9、 根據(jù)權(quán)利要求8所述的豬精液冷凍保存的方法，其特征在于 BTS稀釋液配方為每升稀釋液含37克葡萄糖、6克檸檬酸鈉、0.75克 氯化鉀、1.25克碳酸氫鈉、1.25克乙二胺四醋酸、100000單位青霉 素和100毫克鏈霉素，冷卻稀釋液配方為100毫升稀釋液含80毫升 11%的乳糖和20毫升卵黃，冷凍稀釋液配方為冷卻稀釋液中添加4 %甘油和0. 5%十二醇硫酸鈉。
10、 根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的豬精液冷凍保存的方法，其特征 在于BTS稀釋液配方為每升稀釋液含37克葡萄糖、6克檸檬酸鈉、 0.75克氯化鉀、1.25克碳酸氫鈉、1.25克乙二胺四醋酸、IOOOOO單 位青霉素和IOO毫克鏈霉素，冷卻稀釋液配方為IOO毫升稀釋液含 80毫升11%的乳糖和20毫升卵黃，冷凍稀釋液配方為冷卻稀釋 液中添加4%甘油和0. 5%十二醇硫酸鈉。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種豬精液冷凍保存管及其豬精液冷凍保存方法。一種豬精液冷凍保存管，包括保存管，其特征在于保存管為雙層管，雙層管的兩容器開口相反。豬精液冷凍保存方法的要點(diǎn)是將豬精液預(yù)處理和精液冷卻處理后的冷凍稀釋后的精液裝入本發(fā)明的豬精液冷凍保存管的環(huán)形容器中，然后將豬精液冷凍保存管插入液氮上，熏蒸數(shù)分鐘后，直接投入液氮中長期保存。具有在冷凍過程中能增加精液與液氮的接觸面積，加快精液冷凍速率，降低冷凍對精子的損傷，提高冷精活率；還具有成本低，操作便當(dāng)，功效高，保證受胎率等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號C12M1/00GK101200688SQ200710156398
公開日2008年6月18日 申請日期2007年10月30日 優(yōu)先權(quán)日2007年10月30日
發(fā)明者俞頌東 申請人:華堅(jiān)青;俞頌東