專利名稱：：具有新代謝特性的微白黃鏈霉菌及其在生物降解中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于生物工程
技術(shù)領(lǐng)域：
，涉及一株具有新代謝特性的微白黃鏈霉菌及其在硝基苯好氧生物降解和吡啶甲酸好氧生物降解中的應(yīng)用。技術(shù)背景硝基苯廣泛用于醫(yī)藥、染料、塑料、炸藥等的生產(chǎn)中，硝基苯的廣泛應(yīng)用導(dǎo)致硝基苯污染環(huán)境。硝基苯廢水可通過好氧生物法進行處理。目前，好氧降解硝基苯的微生物資源有細(xì)菌和真菌，細(xì)菌有假單胞菌、叢毛單胞菌，芽胞桿菌，棒狀桿菌，葡萄球菌，鏈球菌。硝基苯在工業(yè)中最重要的用途是生產(chǎn)偶氮染料，偶氮染料廢水具有鹽度高、成分復(fù)雜等特點。高鹽度是指廢水中的總?cè)芙庑怨腆w物(氯化鈉)至少為3.5%(W/V);成分復(fù)雜是指廢水中除含有硝基苯外，主要的有機污染物還有苯胺和苯酚。在高鹽度條件或者多種有機物質(zhì)共存時，上述的硝基苯降解菌不能生長，因此不能實現(xiàn)硝基苯的降解。目前所報道的硝基苯降解菌在好氧條件下通過兩種途徑降解硝基苯氧化途徑或部分還原途徑，其中部分還原途徑更為廣泛。在Spain等分離的155株菌中，154株通過部分還原途徑降解硝基苯，1株通過氧化途徑降解硝基苯。這是由于硝基的吸電子效應(yīng)導(dǎo)致苯環(huán)上電子云密度下降，從而阻礙了氧化酶的親電進攻;同時，硝基電負(fù)性增強、易于被還原。正是由于硝基苯的自身結(jié)構(gòu)導(dǎo)致目前所分離的菌株幾乎都是通過部分還原途徑降解硝基苯的。然而在硝基苯的部分還原降解中，吡啶甲酸作為副產(chǎn)物生成，吡啶甲酸具有生物毒性，不能被硝基苯降解菌利用，吡啶甲酸的生成阻礙了硝基苯的好氧降解。吡啶甲酸為一種N雜環(huán)化和物，主要用于醫(yī)藥、農(nóng)藥、染料等的生產(chǎn)中，吡啶甲酸的應(yīng)用導(dǎo)致吡啶甲酸污染環(huán)境。目前，好氧降解吡啶甲酸的微生物資源有^Wkz"^"禾口分支桿菌。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的就是針對實際硝基苯工業(yè)廢水鹽度高、成分復(fù)雜等特點以及在硝基苯降解過程中出現(xiàn)不能降解的副產(chǎn)物吡啶甲酸這一問題，通過科學(xué)方法馴化、篩選出硝基苯高效降解菌，用以處理鹽度高、成分復(fù)雜的硝基苯廢水，并解決硝基苯降解過程中的瓶頸。同時，也為吡啶甲酸的好氧生物降解提供高效、實用的微生物資源。本發(fā)明的技術(shù)解決方案是，本發(fā)明提供的微白黃鏈霉菌于2006年7月18日保藏于"中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心"，其保藏號CGMCCNo.1759，分類命名為5^e;tow少c^Wq/7ams。地址北京市海淀區(qū)中關(guān)村北一條13號，郵編100080。所述的微白黃鏈霉菌，其篩選步驟如下從大連染料廠曝氣池中取50ml活性污泥，加入0.2%的焦磷酸鈉作為解絮凝劑，在振蕩器上振蕩5-10min打碎活性污泥絮體后，取5ml活性污泥，加入含95ml無機鹽培養(yǎng)基的搖瓶中，再加入硝基苯作為唯一碳、氮、能源，其中硝基苯的濃度為200mg/L，進行搖床培養(yǎng)，溫度3(TC,轉(zhuǎn)速180r/min;當(dāng)菌液變得混濁，進行轉(zhuǎn)接，得到以硝基苯為唯一碳、氮、能源的穩(wěn)定菌液；將穩(wěn)定菌液稀釋，在以硝基苯為唯一碳、氮、能源的固體培養(yǎng)基上進行涂布，將該固體培養(yǎng)基放入光照培養(yǎng)箱中，30°C、培養(yǎng)4-5天，挑單菌落；分離出一株以硝基苯為唯一碳、氮、能源的的微白黃鏈霉菌。所述的微白黃鏈霉菌，其特征在于，該菌株生長適宜pH值為6.0-9.0，適宜生長溫度為20-4(TC;菌株孢子絲短、直、柔曲至螺旋形，孢子長圓形。所述的微白黃鏈霉菌在硝基苯好氧生物降解中的應(yīng)用，其特征在于，微白黃鏈霉菌固定化細(xì)胞、細(xì)胞液體培養(yǎng)物均通過部分還原途徑降解硝基苯，并礦化降解過程中的副產(chǎn)物吡啶甲酸，實現(xiàn)硝基苯的徹底降解，因此能夠作為生物強化制劑對硝基苯廢水進行處理。所述的微白黃鏈霉菌在硝基苯好氧生物降解中的應(yīng)用，其特征在于微白黃鏈霉菌固定化細(xì)胞、細(xì)胞液體培養(yǎng)物均在NaCl質(zhì)量濃度0-50mg/L的條件下，有效降解硝基苯，因此能夠作為生物強化制劑對高鹽度的硝基苯廢水進行處理。所述的微白黃鏈霉菌在硝基苯好氧生物降解中的應(yīng)用，其特征在于，微白黃鏈霉菌固定化細(xì)胞、細(xì)胞液體培養(yǎng)物均在苯胺和硝基苯共存，苯胺質(zhì)量濃度0-50mg/L的條件下，有效降解硝基苯，因此能夠作為生物強化制劑對成分復(fù)雜的硝基苯廢水進行處理。所述的微白黃鏈霉菌在硝基苯好氧生物降解中的應(yīng)用，其特征在于，微白黃鏈霉菌固定化細(xì)胞、細(xì)胞液體培養(yǎng)物均在苯酚和硝基苯共存，苯酚質(zhì)量濃度0-200mg/L的條件下，有效降解硝基苯，因此能夠作為生物強化制劑對成分復(fù)雜的硝基苯廢水進行處理。所述的微白黃鏈霉菌在吡啶甲酸好氧生物降解中的應(yīng)用，其特征在于，微白黃鏈霉菌固定化細(xì)胞、細(xì)胞液體培養(yǎng)物均破壞吡啶甲酸的N雜環(huán)，吡啶甲酸開環(huán)礦化，因此能夠作為生物強化制劑對吡啶甲酸廢水進行處理。所述的微白黃鏈霉菌生理生化特征見表1和2<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>葡萄糖天冬素培養(yǎng)基蓮子白淺芥黃無甘油天冬素培養(yǎng)基玳瑁黃榴萼黃無無機鹽淀粉培養(yǎng)基淺芥黃淺松煙無酵母粉麥芽粉培養(yǎng)基塵灰筍皮棕丁香棕燕麥粉培養(yǎng)基塵灰筍皮棕丁香棕高氏一號培養(yǎng)基酪黃蚌肉白芥黃無桑塔氏培養(yǎng)基蓮子白枯綠鮫青色表2微白黃鏈霉菌的生理生化特性試驗項目結(jié)果試驗項目結(jié)果碳源利用碳源利用(續(xù))D-半乳糖+山梨醇-菊糖-甘油+木糖+阿拉伯糖+纖維二糖+甘露糖+甘露醇+麥芽糖+棉子糖-海藻糖+果糖+淀粉水解+蔗糖-明膠液化-山梨糖-牛奶胨化+乳糖+老氨酸酶-蜜二糖+硝酸鹽還原+松三糖-產(chǎn)生硫化氫-核糖+注+:陽性；-:陰性所述的微白黃鏈霉菌既可在富營養(yǎng)培養(yǎng)基LB中生長，也可在葡萄糖、蔗糖、淀粉等小分子有機物為唯一碳源的無機鹽培養(yǎng)基中生長。所述的微白黃鏈霉菌，可以用新鮮培養(yǎng)的生長期菌種或是制成的固定化細(xì)胞對硝基苯廢水以及吡啶甲酸廢水進行生物降解。本發(fā)明所達到的有益效果是本發(fā)明提供的微白黃鏈霉菌通過部分還原途徑降解硝基苯，并礦化降解過程中的副產(chǎn)物吡啶甲酸，從而實現(xiàn)硝基苯的徹底降解，解決了硝基苯部分還原降解中的瓶頸；微白黃鏈霉菌在硝基苯為唯一碳、氮、能源且硝基苯初始濃度《400mg/L的條件下徹底降解硝基苯；微白黃鏈霉菌在NaCl質(zhì)量濃度0-50mg/L，硝基苯為唯一碳、氮、能源且硝基苯初始濃度《400mg/L的條件下有效降解硝基苯；微白黃鏈霉菌在硝基苯和苯胺共存，苯胺濃度為0-50mg/L，硝基苯初始濃度《400mg/L的條件下，有效降解硝基苯；微白黃鏈霉菌在硝基苯和苯酚共存，苯酚濃度為0-200mg/L，硝基苯初始濃度《400mg/L的條件下，有效降解硝基苯；微白黃鏈霉菌在吡啶甲酸為唯一碳、氮、能源且吡啶甲酸初始濃度《3000mg/L的條件下徹底降解吡啶甲酸；本發(fā)明提供的微白黃鏈霉菌可作為生物菌制劑，投加到現(xiàn)有的硝基苯廢水以及吡啶甲酸廢水處理系統(tǒng)中，增強原處理系統(tǒng)的處理能力；本發(fā)明提供的微白黃鏈霉菌在硝基苯廢水以及吡啶甲酸廢水的處理中有著廣闊的應(yīng)用潛力。圖1是本發(fā)明提供的微白黃鏈霉菌在以硝基苯為唯一碳、氮、能源且硝基苯初始濃度為400mg/L的液體培養(yǎng)中生長與硝基苯降解曲線圖，圖中左側(cè)縱坐標(biāo)表示硝基苯的回收率，單位為％,右側(cè)縱坐標(biāo)表示菌體干重，單位為mg/L;圖中一翻一代表回收率，代表菌體生長量。圖2是本發(fā)明提供的微白黃鏈霉菌在以吡啶甲酸為唯一碳、氮、能源且吡啶甲酸初始濃度為3000mg/L的液體培養(yǎng)中生長與吡啶甲酸降解曲線圖，圖中左側(cè)縱坐標(biāo)表示吡啶甲酸的回收率，單位為％，右側(cè)縱坐標(biāo)表示菌體的生長量，單位為OD660;圖中—畫一代表回收率，一口一代表菌體生長量。圖3是本發(fā)明提供的微白黃鏈霉菌在不同氯化鈉質(zhì)量濃下，硝基苯為唯一碳、氮、能源且硝基苯初始濃度為400mg/L時，硝基苯的降解曲線圖，圖中縱坐標(biāo)表示硝基苯的回收率，單位為％;圖中—B一代表氯化鈉質(zhì)量濃度20mg/L，一o—代表氯化鈉質(zhì)量濃度30mg/L，一o—代表氯化鈉質(zhì)量濃度50mg/L，一*一代表氯化鈉質(zhì)量濃度70mg/L。圖4是本發(fā)明提供的微白黃鏈霉菌在苯胺和硝基苯共存，且硝基苯初始濃度為400mg/L時，硝基苯的降解曲線圖，圖中縱坐標(biāo)表示硝基苯的回收率，單位為％;圖中—■—代表苯胺濃度25mg/L，一口一代表苯胺濃度50mg/L，一o一代表苯胺濃度75mg/L，—*一代表苯胺濃度100mg/L。圖5是本發(fā)明提供的微白黃鏈霉菌在苯酚和硝基苯共存，且硝基苯初始濃度為400mg/L時，硝基苯的降解曲線圖，圖中縱坐標(biāo)表示硝基苯的回收率，單位為％;圖中—國一代表苯酚濃度50mg/L，一口一代表苯酚濃度100mg/L，一o一代表苯酚濃度150mg/L，一代表苯酚濃度200mg/L。圖1到5中橫坐標(biāo)h均表示時間，單位為小時。具體實施方式下面結(jié)合附圖對本發(fā)明作進一步說明。實施例1本發(fā)明提供的微白黃鏈霉菌，其篩選步驟如下從大連染料廠的曝氣池中采集好氧活性污泥樣品，作為菌源進行馴化、培養(yǎng)。將50ml活性污泥，加入0.2%的焦磷酸鈉作為解絮凝劑，在振蕩器上振蕩5-10min打碎活性污泥絮體后，取5ml活性污泥，加入含95ml無機鹽培養(yǎng)基的搖瓶中，再加入硝基苯作為唯一碳、氮、能源，其中硝基苯的濃度為200mg/L，進行搖床培養(yǎng)，溫度3(TC、轉(zhuǎn)速180r/min。無機鹽培養(yǎng)基成分Na2HP0442H20，7g/L;KH2P04，lg/L;CaCl2.2H20，10mg/L;FeCl3，2mg/L;MgS04.7H20，20mg/L。當(dāng)菌液變得混濁，硝基苯檢測不到，進行下一次轉(zhuǎn)接；經(jīng)過不斷地馴化培養(yǎng)，最終得到以硝基苯為唯一碳、氮、能源的穩(wěn)定菌液。將穩(wěn)定菌液稀釋，在以硝基苯為唯一碳、氮、能源的固體培養(yǎng)基上進行涂布。固體培養(yǎng)基成分Na2HP04-12H20，7g/L;KH2P04，lg/L;CaCl2.2H20，lOmg/L;FeCl3，2mg/L;MgS(V7H20，20mg/L;硝基苯，200mg/L，瓊脂2%。將該固體培養(yǎng)基放入光照培養(yǎng)箱中，30°C、培養(yǎng)4-5天，挑單菌落；分離篩選出一株以硝基苯為唯一碳、氮、能源的微白黃鏈霉菌；并將該菌株于2006年7月18日保藏于"中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心"，其保藏號CGMCCNO.1759。該微白黃鏈霉菌的適宜PH值為7.0，適合生長溫度在30°C。本發(fā)明提供的微白黃鏈霉菌的16SrDNA擴增通過擴增該菌株的16SrDNA，得到了長度為1433bp的16SrDNADl/D2序列。PCR引物采用16SrDNA的通用引物27f(5'-GAGTTTGATC(AC)TGGCTCAG-3，)和1492r(5,-TACGG(CT)TACCTTGTTACGACTT-3，)。用PCR儀(GeneAmp，PCRSystem9700)進行擴增反應(yīng)。反應(yīng)體系總體積為25^超純水16.2pl，10xBuffer2.5pl，dNTP2(il，F(xiàn)8弓l物lpl，R22引物lial，ExTaq酶0.3|il，總DNA作一定稀釋后取2ial于反應(yīng)體系中。94t:預(yù)變性5min,經(jīng)過30個循環(huán)，其中，98。C變性20s，55i:退火40s，72。C延伸1.5min，30個循環(huán)后再在72'C延伸7min，1%瓊脂糖凝膠電泳，EB染色后紫外檢測。通過Blast程序進行同源性比較，表明該菌株與a/6/^/7m;ws的同源性高達99%。制備微白黃鏈霉菌的細(xì)胞液體培養(yǎng)物挑取以硝基苯為唯一碳、氮、能源的固體培養(yǎng)基上的微白黃鏈霉菌單菌落，裝有滅菌的以硝基苯為唯一碳、氮、能源的液體培養(yǎng)基中,其中硝基苯的濃度為100mg/l，于30。C、pH7.0、180r/min，進行好氧培養(yǎng)60-72小時，取培養(yǎng)好的菌液1ml接種在100ml含硝基苯(200mg/l)的無機鹽培養(yǎng)基中，30°C、pH7.0、180r/min，進行好氧培養(yǎng)72小時，得到微白黃鏈霉菌的細(xì)胞液體培養(yǎng)物。制備微白黃鏈霉菌的固定化細(xì)胞[1]采用表面吸附固定化技術(shù)；[2]選用大連蘭大生物環(huán)境技術(shù)有限公司提供的專利產(chǎn)品，DW-22型大孔網(wǎng)狀載體作為固定化材料，表3給出了載體的性能；表3DW-22型大孔網(wǎng)狀載體性能比表面積生物負(fù)載量負(fù)載微生物后型號(m2/m3)濕堆積密度(g/cm3)(g微生物/L水)DW-221.6~2.2xl0518~400.9~1.1[3]在250ml錐形瓶中加入100ml無機鹽培養(yǎng)基，再加入硝基苯作為唯一碳、氮、能源，其中硝基苯的濃度為200mg/l;[4]將DW-22型載體直接加入上述[3]的錐形瓶中，12rC下滅菌20min;其中，載體投加量為24%(體積比)，載體投加量為加入的載體體積和培養(yǎng)液體積之比；[5]接種lml微白黃鏈霉菌的細(xì)胞液體培養(yǎng)物，于3(TC、pH7.0、160r/min，進行好氧培養(yǎng)；[6]當(dāng)硝基苯完全降解時，大孔網(wǎng)狀載體上附著了大量的微白黃鏈霉菌細(xì)胞，微白黃鏈霉菌被固定在大孔網(wǎng)狀載體上；[7]用無菌的生理鹽水沖洗已附著了微白黃鏈霉菌細(xì)胞的大孔網(wǎng)狀載體，共沖洗3遍，將該大孔網(wǎng)狀載體浸泡在生理鹽水中，4'C儲存，備用。實施例2本發(fā)明中，微白黃鏈霉菌對硝基苯好氧降解研究的應(yīng)用，其步驟如下[1]在250ml錐形瓶中加入100ml無機鹽培養(yǎng)基，再加入400mg/L的硝基苯作為唯一碳、氮、能源，121'C下滅菌；[2]將實施例1制備的微白黃鏈霉菌細(xì)胞液體培養(yǎng)物加入上述[l]的培養(yǎng)基中，30°C、180r/min，好氧培養(yǎng)，圖1為微白黃鏈霉菌的生長與硝基苯降解情況。實施例3本發(fā)明中，微白黃鏈霉菌對吡啶甲酸好氧降解研究的應(yīng)用，其步驟如下[1]在250ml錐形瓶中加入100ml無機鹽培養(yǎng)基，加入3000mg/L的吡啶甲酸作為唯一碳、氮、能源，12rc下滅菌；[2]將實施例1制備的微白黃鏈霉菌細(xì)胞液體培養(yǎng)物加入上述[l]的培養(yǎng)基中，30°C、180r/min，好氧培養(yǎng)，圖2為微白黃鏈霉菌的生長與吡啶甲酸降解情況。實施例4本發(fā)明中，微白黃鏈霉菌在高鹽度下對硝基苯好氧降解研究的應(yīng)用，其步驟如下[1]分別配制氯化鈉質(zhì)量濃度為2%，3%,5%和7°/。的無機鹽培養(yǎng)基，加入400mg/L的硝基苯作為唯一碳、氮、能源，12rC下滅菌；[2]將實施例1制備的微白黃鏈霉菌細(xì)胞液體培養(yǎng)物加入上述[l]的培養(yǎng)基中，30°C、180r/min，好氧培養(yǎng),圖3為微白黃鏈霉菌在不同鹽度下的生長與硝基苯降解情況。實施例5本發(fā)明中，微白黃鏈霉菌在苯胺和硝基苯共存時，對硝基苯好氧降解研究的應(yīng)用，其步驟如下[1]在100ml的無機鹽培養(yǎng)基，加入400mg/L的硝基苯，再分別加入不同濃度的苯胺，苯胺濃度在25-100mg/L之間變化，12rC下滅菌；[2]將實施例1制備的微白黃鏈霉菌細(xì)胞液體培養(yǎng)物加入上述[l]的培養(yǎng)基中，3(TC、180r/min，好氧培養(yǎng)144h，圖4為微白黃鏈霉菌在苯胺和硝基苯共存時的生長與硝基苯降解情況。實施例6本發(fā)明中，微白黃鏈霉菌在苯酚和硝基苯共存時，對硝基苯好氧降解研究的應(yīng)用，其步驟如下[1]在100ml的無機鹽培養(yǎng)基，加入400mg/L的硝基苯，再分別加入不同濃度的苯酚，苯酚濃度在50-250mg/L之間變化，12rC下滅菌；[2]將實施例1制備的微白黃鏈霉菌細(xì)胞液體培養(yǎng)物加入上述[l]的培養(yǎng)基中，30°C、180r/min，好氧培養(yǎng)144h,圖5為微白黃鏈霉菌在苯酚和硝基苯共存時的生長與硝基苯降解情況。實施例7本發(fā)明中，微白黃鏈霉菌固定化細(xì)胞對硝基苯好氧降解研究的應(yīng)用，其步驟如下[1]配置實施例4所述的不同鹽度的液體培養(yǎng)基；[2]配置實施例5所述的含有不同濃度苯胺的液體培養(yǎng)基；[3]配置實施例6所述的含有不同濃度苯酚的液體培養(yǎng)基；[4]將實施例1所述的微白黃鏈霉菌固定化細(xì)胞分別投加到上述[l]、[2]、[3]的培養(yǎng)基中，30°C、160r/min，好氧培養(yǎng)；表4列出了微白黃鏈霉菌固定化細(xì)胞在不同鹽度下對硝基苯的降解，表5列出了微白黃鏈霉菌固定化細(xì)胞在苯酚或苯胺和硝基苯共存時對硝基苯的降解；在鹽度為5%的條件下微白黃鏈霉菌固定化細(xì)胞216h對硝基苯的降解率為69.43%，而微白黃鏈霉菌細(xì)胞液體培養(yǎng)物在216h對硝基苯的降解率僅為33.16%;在苯酚濃度為200mg/L時，微白黃鏈霉菌固定化細(xì)胞"4h對硝基苯的降解率為92.67%，而微白黃鏈霉菌細(xì)胞液體培養(yǎng)物在144h對硝基苯的降解率僅為45.23%;當(dāng)苯胺濃度為50mg/L時，微白黃鏈霉菌固定化細(xì)胞144h對硝基苯的降解率為63.28%%，而微白黃鏈霉菌細(xì)胞液體培養(yǎng)物在144h對硝基苯的降解率為12.31%;結(jié)果表明與細(xì)胞液體培養(yǎng)物相比，固定化細(xì)胞的耐鹽性和耐毒性均有所提高。表4微白黃鏈霉菌固定化細(xì)胞在不同鹽度下對硝基苯的降解<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>表5微白黃鏈霉菌固定化細(xì)胞在苯酚或苯胺存在時對硝基苯的降解<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>實施例8本發(fā)明中，微白黃鏈霉菌固定化細(xì)胞對吡啶甲酸好氧降解研究的應(yīng)用，其步驟如下[1]在250ml錐形瓶中加入100ml無機鹽培養(yǎng)基，加入3000mg/L的吡啶甲酸作為唯一碳、氮、能源，121'C下滅菌；[2]將實施例1制備的微白黃鏈霉菌固定化細(xì)胞加入上述[l]的培養(yǎng)基中，30°C、160r/min，好氧培養(yǎng)，固定化細(xì)胞完全降解吡啶甲酸的時間為47h?！?10〉大連理工大學(xué)環(huán)境與生命學(xué)院〈120〉具有新代謝特性的微白黃鏈霉菌及其在生物降解中的應(yīng)用〈160〉序列總數(shù)1〈211〉1433bp〈212〉DNA〈213〉微白黃鏈霉菌(iS^e;towycasa/6/cfo/7avi^少〈220〉〈221〉gene〈120〉微白黃鏈霉菌16SrDNA序列61218243036gtgaatgcggcgtgcttaccatgcaagtcgaacgatgaaccgctttcgggcggggattagtggcgaacgggtgagtaacacgtgggcaatctgccctgcactctgggacaagccctggaaacggggtctaataccggatatgactgtccatcgcatggtggatggtgtaaagctccggcggtgcaggatgagcccgcggcctatcagcttgttggtgaggtagtggctcaccaaggcgacgacgggtagccggcctgagagggcgaccggccacactgggactgagacacggcccagactcctacgggaggcagcagtggggaatattgcacaatgggcgaaagcctgatgcagcgacgccgcgtgagggatgacggccttcgggttgtaaacctctttcagcagggaagaagcgaaagt421gacggtacctgcagaagaagcgccggctaactacgtgccagcagccgcggtaatacgtag481ggcgcaagcgttgtccggaattattgggcgtaaagagctcgtaggcggcttgtcacgtcg541gttgtgaaagcccggggcttaaccccgggtctgcagtcgatacgggcaggctagagttcg601gtaggggagatcggaattcctggtgtagcggtgaaatgcgcagatatcaggaggaacacc661ggtggcgaaggcggatctctgggccgatactgacgctgaggagcgaaagcgtggggagcg721aacaggattagataccctggtagtccacgccgtaaacggtcggcactaggtgtgggcaac781attccacgttgtccgtgccgcagctaacgcattaagtgccccgcctggggagtacggccg841caaggctaaaactcaaaggaattgacgggggcccgcacaagcggcggagcatgtggctta901attcgacgcaacgcgaagaaccttaccaaggcttgacatacaccggaaacgtctggagac961aggcgcccccttgtggtcggtgtacaggtggtgcatggctgtcgtcagctcgtgtcgtga1021gatgttgggttaagtcccgcaacgagcgcaacccttgtcccgtgttgccagcaggccctt1081gtggtgctggggactcacgggagaccgccggggtcaactcggaggaaggtggggacgacg1141tcaagtcatcatgccccttatgtcttgggctgcacacgtgctacaatggccggtacaatg1201agctgcgataccgcgaggtggagcgaatctcaaaaagccggtctcagttcggattggggt1261ctgcaactcgaccccatgaagtcggagtcgctagtaatcgcagatcagcattgctgcggt1321gaatacgttcccgggccttgtacacaccgcccgtcacgtcacgaaagtcggtaacacccg1381aagccggtggcccaaccccttgtgggagggagcttcgaaggtgactgcatcca權(quán)利要求1、具有新代謝特性的微白黃鏈霉菌及其在生物降解中的應(yīng)用，其特征在于，微白黃鏈霉菌于2006年7月18日保藏于“中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心”，保藏號CGMCCNo.1759，分類命名為Streptomycesalbidoflavus。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有新代謝特性的微白黃鏈霉菌及其在生物降解中的應(yīng)用，其特征在于，從大連染料廠曝氣池中取50ml活性污泥，加入0.2%的焦磷酸鈉作為解絮凝劑，在振蕩器上振蕩5-10min打碎活性污泥絮體后，取5ml活性污泥，，加入含95ml無機鹽培養(yǎng)基的搖瓶中，再加入硝基苯作為唯一碳、氮、能源，其中硝基苯的濃度為200mg/L，進行搖床培養(yǎng)，溫度30°C，轉(zhuǎn)速180r/min;當(dāng)菌液變得混濁，進行轉(zhuǎn)接，得到以硝基苯為唯一碳、氮、能源的穩(wěn)定菌液；將穩(wěn)定菌液稀釋，在以硝基苯為唯一碳、氮、能源的固體培養(yǎng)基上進行涂布，將該固體培養(yǎng)基放入光照培養(yǎng)箱中，30°C、培養(yǎng)4-5天，挑單菌落；分離篩選出一株以硝基苯為唯一碳、氮、能源的的微白黃鏈霉菌。3、權(quán)利要求1所述具有新代謝特性的微白黃鏈霉菌及其在生物降解中的應(yīng)用，其特征在于，當(dāng)硝基苯為唯一碳、氮、能源時，微白黃鏈霉菌對硝基苯的最大耐受濃度達400mg/L;TOC總?cè)コ蔬_99.12%;微白黃鏈霉菌能夠作為生物強化制劑對硝基苯濃度《400mg/L的廢水進行降解。4、權(quán)利要求1所述的具有新代謝特性的微白黃鏈霉菌及其在生物降解中的應(yīng)用，其特征在于，當(dāng)硝基苯為唯一碳、氮、能源且氯化鈉濃度為0-50mg/L，微白黃鏈霉菌能夠有效降解硝基苯；微白黃鏈霉菌能夠作為生物強化制劑對鹽度《50mg/L、硝基苯濃度《400mg/L的廢水進行降解。5、權(quán)利要求1所述的具有新代謝特性的微白黃鏈霉菌及其在生物降解中的應(yīng)用，其特征在于，當(dāng)硝基苯和苯胺共存，苯胺濃度為0-50mg/L，微白黃鏈霉菌能有效降解硝基苯；微白黃鏈霉菌能夠作為生物強化制劑對苯胺和硝基苯共存，苯胺濃度《50mg/L、硝基苯濃度《400mg/L的廢水進行降解。6、權(quán)利要求1所述的具有新代謝特性的微白黃鏈霉菌及其在生物降解中的應(yīng)用，其特征在于，當(dāng)硝基苯和苯酚共存，苯酚濃度為0-200mg/L，微白黃鏈霉菌有效降解硝基苯；微白黃鏈霉菌能夠作為生物強化制劑對苯酚和硝基苯共存，苯酚濃度《200mg/L、硝基苯濃度《400mg/L的廢水進行降解。7、權(quán)利要求1所述的具有新代謝特性的微白黃鏈霉菌及其在生物降解中的應(yīng)用，其特征在于，當(dāng)吡啶甲酸為唯一碳、氮、能源，微白黃鏈霉菌對吡啶甲酸的最大耐受濃度達3000mg/L;TOC總?cè)コ蔬_98.37%;微白黃鏈霉菌能夠作為生物強化制劑對吡啶甲酸濃度《3000mg/L的廢水進行降解。全文摘要具有新代謝特性的微白黃鏈霉菌及其在生物降解中的應(yīng)用屬于生物工程
技術(shù)領(lǐng)域：
。本發(fā)明分離篩選出一株具有新代謝特性的微白黃鏈霉菌。本發(fā)明的優(yōu)點是微白黃鏈霉菌通過部分還原途徑降解硝基苯，并礦化降解過程中的副產(chǎn)物吡啶甲酸，從而實現(xiàn)硝基苯的徹底降解，解決了硝基苯部分還原降解中的瓶頸；微白黃鏈霉菌能夠在高鹽度以及多種有機物質(zhì)共存的條件下有效降解硝基苯；微白黃鏈霉菌能夠以吡啶甲酸為唯一碳、氮、能源進行生長，吡啶甲酸最終被礦化為無害的二氧化碳和水；微白黃鏈霉菌能夠作為生物強化制劑應(yīng)用于鹽度高、成分復(fù)雜的硝基苯廢水和吡啶甲酸廢水的生物治理中。文檔編號C12N1/20GK101250491SQ20071015781公開日2008年8月27日申請日期2007年10月24日優(yōu)先權(quán)日2007年10月24日發(fā)明者紅呂,周集體,張勁松,曲嬡嬡,競王,靜王,鄭春莉,金若菲,項學(xué)敏申請人:大連理工大學(xué)