專利名稱：：一種具有緩解體力疲勞、增強免疫功能的保健食品的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及到保健食品，尤其涉及到一種具有緩解體力疲勞、增強免疫功能的保健食品。
背景技術(shù)：
：隨著生活節(jié)奏的加快和工作壓力的加大，人們常常有筋疲力盡的感覺，尤其是上班一族還面臨著職業(yè)競爭的壓力，身體長期處在亞健康狀態(tài)，表現(xiàn)為患困、倦怠無力、視力模糊、頭脹頭疼、四肢發(fā)脹、驚悸失眠、胸悶胸脹。亞健康是一種介于健康與疾病之間的第三狀態(tài)，亞健康的疲勞綜合癥嚴重影響人們的工作，降低了生活質(zhì)量。如果這種狀況不能得到及時的糾正和改善，進而還會影響人體神經(jīng)體液調(diào)節(jié)、內(nèi)分泌調(diào)節(jié)和機體各系統(tǒng)正常生理功能，導(dǎo)致未老先衰，人體器官功能退化、老年疾病征象，更嚴重的導(dǎo)致植物神經(jīng)功能紊亂，一旦情緒波動引發(fā)心率失常引起猝死，這就是過勞死。現(xiàn)代社會的亞健康幾乎成為一種常態(tài)，其康復(fù)、恢復(fù)有賴于自身鍛煉，也可借助藥物和保健食品加快康復(fù)。藥品常常只針對某些特殊證候，而且常有不良反應(yīng)；保健食品可以通過全面調(diào)理、雙向調(diào)節(jié)、提高自身免疫力來達到緩解疲勞、恢復(fù)體力、消除疲勞綜合癥。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明采用發(fā)酵蟲草菌粉和蜂花粉為原料，將其制成供不同人群服用的劑型，可用于緩解體力疲勞、提高免疫力、抗衰老、心腦血管疾病的預(yù)防、調(diào)整腸胃功能、促進消化、增進食欲以及健身美容、降血脂、降血糖，尤其是對提高免疫力、緩解體力疲勞作用顯著。本發(fā)明的發(fā)酵蟲草菌粉是從天然的冬蟲夏草Cordycepssinensis(Berk.)Sacc中分離所得的蟲草菌-蝙蝠蛾擬青霉PaecilomyceshepialidchenCs-4菌株，經(jīng)純化人工發(fā)酵培養(yǎng)加工而成的。含腺嘌呤核苷、脲嘧啶核苷、甘露醇、麥角甾醇及天門冬氨酸、谷氨酸、蘇氨酸、甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸等19種氨基酸，富含鋅、鉀、硒、錳、磷等微量元素及維生素B,、維生素B2、維生素E多種成分，與天然的蟲草成分相似，其作用和功效相當(dāng)，但發(fā)酵蟲草菌粉的市場價每千克僅120元至140元，而天然蟲草價格每千克在80000元至150000元之間，兩者相差上千倍，但它們的作用和效果相似。特別是近年來天然蟲草價格昂貴導(dǎo)致濫采濫控，自然資源迅速下降，為保護生態(tài)平衡，保持生物多樣性及中藥保健食品產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展，以發(fā)酵蟲草菌粉替代天然蟲草菌具有顯著的社會經(jīng)濟意義。相對于申請?zhí)枮?9114824.X的專利，本發(fā)明與其有兩個顯著不同之處，一、組方不同申請?zhí)枮?9114824.乂的專利由蟲草粉和蜂花粉組成，而本發(fā)明是由蝙蝠蛾擬青霉菌株發(fā)酵粉即發(fā)酵蟲草菌粉和蜂花粉組成，正如上面所述，發(fā)酵蟲草菌粉與天然蟲草菌來源不同，價格相差近千倍，作用和效果相似；二、用途不同申請?zhí)枮?9114824.乂專利用于虛勞咳嗽、吐血咯血、肺結(jié)核，而本發(fā)明用于緩解體力疲勞、增強免疫功能。特別是本發(fā)明適用于工作和運動性體力疲勞。通常情況下，機體由于體力活動，氧消耗量過多導(dǎo)致線粒體呼吸爆發(fā)，組織缺血后再灌注導(dǎo)致氧化損傷，以及兒茶酚胺的大量分泌等原因使自由基生成增多和脂質(zhì)過氧化反應(yīng)增強，引發(fā)細胞代謝和功能紊亂，肌肉工作能力下降，最終導(dǎo)致工作和運動性疲勞。同時，長期高強度的工作和運動可因營養(yǎng)物質(zhì)的耗竭、機體神經(jīng)內(nèi)分泌功能的改變及自由基對免疫細胞膜的攻擊使淋巴細胞凋亡，最終導(dǎo)致機體免疫功能的下降，進一步促進工作和運動性疲勞的發(fā)生。本發(fā)明的保健食品具有強大的抗氧作用和免疫調(diào)節(jié)作用，對神經(jīng)細胞膜具有保護作用，能延緩中樞性工作疲勞和體力活動的運動性疲勞。有益效果本發(fā)明在于提供一種能迅速恢復(fù)體力、增強免疫功能的保健食品。本發(fā)明用蝙蝠蛾擬青霉菌株發(fā)酵粉替代天然的冬蟲夏草，有利于保護自然環(huán)境和保持生物多樣性，大大地降低了產(chǎn)品成本。本發(fā)明通過以下方案實施以發(fā)酵蟲草菌粉和花粉為原料藥，按發(fā)酵蟲草菌粉:蜂花粉為1:0.254比例投料。按照以下步驟制備取蜂花粉，低溫干燥，粉碎，過80—200目篩，滅菌、備用；另取發(fā)酵蟲草菌粉，與蜂花粉按等量遞增法混勻，制成膠囊劑，即得。取蜂花粉，低溫干燥，滅菌，與發(fā)酵蟲草菌粉混勻，加輔料，制粒，干燥，滅菌，制成片劑/顆粒劑。本發(fā)明具有緩解體力疲勞、增強免疫功能。本發(fā)明的保健食品無不良反應(yīng)，廣泛適合各種體力疲勞綜合癥、免疫功能較差的人群使用。發(fā)明人對本發(fā)明的保健食品進行了長期毒性研究。1.1樣品本發(fā)明的保健食品膠囊內(nèi)容物呈棕黃色粉末狀，臨用前用蒸餾水配至所需濃度。1.2動物選用中國科學(xué)院上海實驗動物中心提供的清潔級SD大鼠，體重6176g，合格證號中科支管第003號。1.3儀器日立7060C全自動生化分析儀，食衛(wèi)257號；Ts—12F生物組織自動脫水機，食衛(wèi)069號；BM-VI生物組織冷凍包埋機，食衛(wèi)070號；Finesse325石蠟切片機，食衛(wèi)078號；BX-51顯微鏡，食衛(wèi)221號。1.4方法動物按體重隨機分成4組，每組20只，雌雄各半。試驗設(shè)3個劑量組，分別為1.12，2.25，4.50g'kg—1，另設(shè)陰性對照組(蒸餾水)。動物進行單籠喂養(yǎng)，各組按0.01mLg"經(jīng)口灌胃，連續(xù)30d，自由進食飲水。實驗期間觀察動物形態(tài)，每周稱重，記錄飼料消耗量。喂養(yǎng)30d后，摘眼球采血作血常規(guī)及生化指標測定，取出肝、腎、脾、睪丸稱重，并對肝、腎、脾、胃、腸、睪丸、卵巢作病理學(xué)檢査。1.5觀察指標1.5.1動物的一般表現(xiàn)、體重、進食量、食物利用率。1.5.2血常規(guī)及生化指標紅細胞計數(shù)、白細胞計數(shù)、白細胞分類、血紅蛋白、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、尿素氮、肌酐、膽固醇、甘油三酯、血糖、總蛋白、白蛋白。1.5.3病理解剖臟器系數(shù)、大體觀察及病理組織檢查(肝、脾、腎、胃、腸、睪丸和卵巢)。1.6數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法實驗數(shù)據(jù)以SPSS軟件進行單因素方差分析。經(jīng)方差齊性檢驗，方差齊的實驗數(shù)據(jù)采用LSD法進行統(tǒng)計分析，方差不齊的實驗數(shù)據(jù)采用Tambane法進行統(tǒng)計分析。2結(jié)果2.1—般形態(tài)觀察本發(fā)明的保健食品3個劑量組喂養(yǎng)的大鼠毛質(zhì)白、有光澤，外觀形態(tài)與陰性對照組比較無區(qū)別，也無死亡現(xiàn)象。2.2動物體重增長與食物利用率本發(fā)明的保健食品各劑量組大鼠實驗結(jié)束時體重及其增重、進食量、食物利用率與陰性對照組大鼠比較差異均無顯著性(P〉0.05)。2.3血常規(guī)檢査本發(fā)明的保健食品3個劑量組喂養(yǎng)大鼠30d后，血紅蛋白含量、紅細胞、白細胞計數(shù)及白細胞分類均在正常值范圍內(nèi)。2.4血清生化檢驗本發(fā)明的保健食品3個劑量組大鼠的血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、尿素氮、肌酐、膽固醇、甘油三酯、血糖、總蛋白、白蛋白測定值均在正常值范圍內(nèi)(表l)。表l本發(fā)明的保健食品對大鼠血生化指標的影響(G士s，n=10))性別組別谷丙轉(zhuǎn)氨酶/u.L-1谷草轉(zhuǎn)氨酶/u丄'1尿素氮/mmol.L—1肌酐//rnimol'L—1血糖/mmol.L—1總蛋白/g丄-'白蛋白/g丄'1甘油三酯/mmol'L-1膽固醇維蒸餾水36.6±6.6101.3±12.63.91±0.4051.1土10.35.04士0.5863.0±2.633.4±1.31.90±0.181.41士0.29性1.1242.6±10.1104.6土10.33.90±0.7156.8±8.34.44±0.3764.2士3.633.4士1.92.20±0.221.86±0.422.2545.0±10.6117.5±16.93.82士0.5452.7±5.74甲55±0.5566.4士2.833.5士1.11.97±0.331.40±0.224.5049.7±15.5m.4士12.23.85±0.3655.4土7.764亂932.9±1.41.97±0.421.85±0.25雌蒸餾水32.6±9.3U5.6士15.84.99士0.7861.9±7.14.99±0.567U士3.837.5±1.72.66±0.531.71±0.51性1.1233-3士8.1119.5±41.65.12士0.6661.4±4.75.27±0.4270.2士2.635.5±1.82.3U0.351.69±0.412.2535.1士9.8跳6±11.84.67±1.4764.1土9.45.17±0.2769.7±4.136—6士1.92.3U0.451-45士0.324.5036.6士6.6108.3士13.45.41士1.0762.4±5.45.31土0.3768甲0±3.035.9±1.72.33士0.481.88士0.632.5本發(fā)明的保健食品對大鼠臟器系數(shù)的影響除雄性中劑量組脾系數(shù)高于對照組外，受試物其他各劑量組大鼠的臟器系數(shù)與陰性對照組比較，差異無顯著性(P>0.05)。2.6病理組織學(xué)檢査本發(fā)明的保健食品各劑量組動物大體檢查未發(fā)現(xiàn)明顯病變，因此僅選陰性對照組及高劑量組做組織病理學(xué)檢查。高劑量組動物肝、腎、胃、腸、脾、睪丸、卵巢組織學(xué)檢查未發(fā)現(xiàn)特異性病變。研究結(jié)果表明以1.12，2.25，4.50g*kg—1的本發(fā)明保健食品給予大鼠灌胃30d。實驗期間，大鼠毛質(zhì)白、有光澤，外觀形態(tài)與陰性對照組比較無區(qū)別，也無死亡現(xiàn)象。3個劑量組大鼠的體重、體重增重、進食量、食物利用率與對照組比較無顯著性差異；血紅蛋白含量、紅細胞、白細胞計數(shù)及白細胞分類均在正常值范圍內(nèi)；血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、尿素氮、肌酐、膽固醇、甘油三酯、血糖、總蛋白、白蛋白測定值也均在正常值范圍內(nèi)；除雄性中劑量組脾系數(shù)高于對照組外，受試物其他各劑量組大鼠的臟器系數(shù)與陰性對照組比較，差異無顯著性；對肝、腎、胃、腸、脾、睪丸、卵巢作病理組織學(xué)檢查未發(fā)現(xiàn)特異性病變。說明本發(fā)明的保健食品對大鼠未見明顯的長期毒性。發(fā)明人對本發(fā)明的保健食品增強免疫實驗一、對正常小鼠單核——巨噬細胞吞噬功能的影響昆明種小鼠70只，3，隨機分成7組，每組10只，空白對照組給相應(yīng)容量的蒸餾水，本發(fā)明的保健食品給藥組按原料量0.3、0.6、1.2、2.5、5、10g/kg灌胃給藥每天l次，連續(xù)15天，實驗于末次給藥后1小時開始。給每只小鼠尾靜脈注射以生理鹽水稀釋5倍的印度墨汁(每10g體重0.1ml)，注射后立即計時，每只小鼠分別于給予印度墨汁后的第2、12min時眼眶取血20]Lil并加入到2ml的Na2C03(0.1%)的溶液中，搖勻。用722型分光光度計在680nm波長處比色測光密度值(OD)，以Na2C03作空白對照，按如下公式計算吞噬指數(shù)K值。將小鼠處死，取其肝和脾并稱重，計算吞噬系數(shù)o;值。體重o;=K1/3x-(肝+脾)實驗結(jié)果表明本保健食品0.3、0.6、1.2、2.5、5g/kg連續(xù)灌胃十五天均能抑制正常小鼠單核一巨噬細胞的吞噬功能，ce值與空白對照組比較，差異顯著。K值以及本保健食品10g/kg劑量組有作用趨勢，但無統(tǒng)計意義。二、本發(fā)明的保健食品對環(huán)磷酰胺(cyc)致免疫低下小鼠體內(nèi)碳粒廓清功能影響昆明種小鼠50只，體重1822g，隨機分成5組，每組10只，空白對照組給相應(yīng)容量的蒸餾水，本保健食品給藥組按原料量2.5、5、10g/kg給藥，以及cyc模型組，灌胃給藥每天l次，連續(xù)7天，環(huán)磷酰胺和空白對照組給予等容積的蒸餾水。給藥第3、5天除正常對照組外，其余各級小鼠腹腔注射cyc20mg/kg，末次給藥后1小時開始實驗，于各鼠尾靜脈注射以生理鹽水稀釋5倍的印度墨汁0.1ml/10g，于注入墨汁后第2、12min經(jīng)小鼠眼睚后靜脈叢取血20/^1，立即加入到2ml0.1。/。Na2CO3中，混勻，于680nm處測定吸光度值，處死小鼠，取其肝和脾并稱重，計算吞噬指數(shù)K值和吞噬系數(shù)a值，公式同上述實驗。實驗結(jié)果表明cyc20mg/kg劑量組與空白對照組比較能顯著性地降低小鼠單核一巨噬細胞吞噬功能，表明免疫低下小鼠造模成功。本保健食品5、10g^g連續(xù)灌胃七天能明顯增強小鼠的免疫細胞吞噬功能，K、a值均顯著增高，與空白對照組比較，本保健食品5、10g/kg劑量組的K值有顯著增高；本保健食品10g/kg劑量組的a值有顯著增高。2.5g/kg劑量組有作用趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)意義。三、本保健食品對DNCB誘導(dǎo)的小鼠遲發(fā)性超敏反應(yīng)的影響昆明種小鼠40只，d，體重1822g，隨機分成4組，每組10只?？瞻讓φ战M給相應(yīng)容量的蒸餾水，本保健食品給藥組按原料量2.5、5、10g/kg給食。各鼠頸背部皮下注射7%DNCB丙酮溶液20W，各組第2天開始灌胃給藥，每天一次，連續(xù)五天。末次給藥1小時后，各鼠左耳廓前后兩面均勻涂抹同濃度DNCB丙酮溶液20jid進行抗原攻擊，以右耳作為對照。16h后，頸椎脫臼處死小鼠，剪下兩耳廓，以8mm打孔器取耳片并精密稱重(mg)，以兩耳片重量差作為衡量DNCB誘導(dǎo)的遲發(fā)性超敏反應(yīng)強度的指標o實驗結(jié)果顯示本保健食品5、10g/Kg連續(xù)灌胃五天能增強DNCB誘導(dǎo)的小鼠遲發(fā)性超敏反應(yīng)，與空白對照組比較有顯著性差異。(見表l)表1本發(fā)明的保健食品對DNCB誘導(dǎo)的小鼠遲發(fā)性超敏反應(yīng)的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>四、本保健食品對小鼠血清溶血素抗體生成的影響昆明種小鼠40只，3，體重1822g，隨機分成4組，每組10只，空白對照組給相應(yīng)容量的蒸餾水，本保健食品給藥組按原料量2.5、5、10g/kg給藥。先灌胃給樣品，每天一次，連續(xù)兩天，第三天對小鼠進行免疫；將綿羊紅細胞(SRBC)用生理鹽水洗滌3次后，配成20XSRBC溶液，每鼠腹腔注射0.2ml。然后繼續(xù)i.g.給樣品至免疫第5天，小鼠眼眶后靜脈叢取血，離心得血清，取1^1加入0.5ml生理鹽水中，再加入SRBC溶液、補體(1:10稀釋的豚鼠血清)和生理鹽水各0.5ml，于溫箱內(nèi)溫育1小時后，各反應(yīng)管均加2ml生理鹽水稀釋，3000rpm離心10分鐘，取上清液于540nm處測定OD值。實驗結(jié)果表明本保健食品5、10g/kg連續(xù)灌胃五天能增強SPBC所誘導(dǎo)的小鼠血清溶血素抗體的生成，與空白對照組比較有顯著性差異。(見表2)表2本發(fā)明的保健食品對小鼠血清溶血素抗體生成的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>保健食品2.5100.38±0.026保健食品5100.46±0.032*保健食b"b_^_^_0.53±0.025**與空白組比較**P<0.01***P<0.001具體實施例下面通過實施例進一步說明本發(fā)明。應(yīng)該理解的是，本發(fā)明實施例的實施例僅僅用于說明本發(fā)明，而不是對本發(fā)明的限制，在本發(fā)明的構(gòu)思前提下，其所有變體和/或變型都屬于本發(fā)明要求保護的范圍。除非另有說明，本發(fā)明中的百分數(shù)是重量百分數(shù)，另外，本發(fā)明說明書中的(w/w)是指重量比或者重量比濃度，(v/v)是指體積比或者體積比濃度，w/v是指重量與體積的比例。實施例1發(fā)酵蟲草菌粉300g蜂花粉200g取蜂花粉，8(TC以下干燥，粉碎，過80目篩，與發(fā)酵蟲草菌粉混勻，裝入空心膠囊，制成1000粒，包裝即得。實施例2發(fā)酵蟲草菌粉250g蜂花粉250g取蜂花粉，6(TC以下干燥，過篩，流通蒸汽105'C滅菌30分鐘，與發(fā)酵蟲草菌粉混勻，加淀粉漿，制粒，干燥，壓成1000片，包衣，即得。實施例3發(fā)酵蟲草菌粉300g蜂花粉150g取蜂花粉，8(TC以下干燥，粉碎，過150目篩，與發(fā)酵蟲草菌粉混勻，加入蔗糖粉550g，制粒，噴霧干燥，整粒，制成顆粒劑。權(quán)利要求1、一種具有緩解體力疲勞、增強免疫功能的保健食品，其特征在于它是由發(fā)酵蟲草菌粉和蜂花粉制成的，其重量百分比為發(fā)酵蟲草菌粉∶蜂花粉＝1∶0.25-4。2、如權(quán)利要求1所述的保健食品的制備方法，其特征在于取蜂花粉、低溫干燥，粉碎，過80200目篩，滅菌，與發(fā)酵蟲草菌粉混勻，制成膠囊劑，包裝即得。3、如權(quán)利要求1所述的保健食品的制備方法，其特征在于取蜂花粉，低溫干燥，過篩，與發(fā)酵蟲草菌粉混勻，加輔料，制粒，干燥，滅菌，制成片劑/顆粒劑。4、如權(quán)利要求2、3所述的保健食品的制備方法，其特征在于其中所述低溫干燥，溫度為8(TC以下；滅菌可用流通蒸汽滅菌、r射線輻射滅菌。全文摘要本發(fā)明公開了一種具有緩解體力疲勞、增強免疫功能的保健食品，它是由發(fā)酵蟲草菌粉和蜂花粉按1∶0.25～4重量份比例的原料制成，其制備方法是1.取蜂花粉，粉碎，過120～200目篩，與發(fā)酵蟲草菌粉混勻，制成膠囊劑；2.取蜂花粉，干燥，滅菌，與發(fā)酵蟲草菌粉混勻，加輔料，制成片劑/顆粒劑。本發(fā)明的保健食品可迅速緩解體力疲勞、增強免疫功能，無毒副作用，適合各類人群即時使用。文檔編號A23L1/29GK101214052SQ20071030606公開日2008年7月9日申請日期2007年12月29日優(yōu)先權(quán)日2007年12月29日發(fā)明者吳朝陽,徐發(fā)紅,胡生亮,艾樣開,陳科茂申請人:江西天施康中藥股份有限公司