專利名稱：：彌漫性血管內凝血綜合征的病態(tài)鑒定方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及彌漫性血管內凝血綜合征(DisseminatedIntravascularCoagulation;以下稱作DIC)的病態(tài)鑒定(determination)方法。
背景技術：
：在彌漫性血管內凝血綜合征(DIC)中，在重度基礎疾病的存在下全身的微血管內形成微血栓。因此，微循環(huán)出現(xiàn)障礙，可見臟器功能不全或出血傾向。在DIC中發(fā)生以下三種障礙或反應。(1)發(fā)生微血栓形成所引起的微循環(huán)障礙，多個臟器因缺血而陷入功能不全。(2)微血栓形成所引起的消耗性凝血障礙，即組織因子在細胞表面大量表達，促進外源系凝血。另外，凝血因子或血小板被消耗，出現(xiàn)出血傾向。(3)過剩纖溶，即隨著凝血的促進纖溶系統(tǒng)也被活化，生成分解纖維蛋白的纖溶酶。當抑制纖溶酶的(X2纖溶酶抑制劑(a2PI)被消耗而減少至不足正常的60%時，纖維蛋白被纖溶酶過剩分解，出現(xiàn)出血傾向。DIC的本質在于凝血系統(tǒng)的病理性且持續(xù)性活化所引起的微血栓的形成，但纖溶系統(tǒng)也隨之被活化。然而，兩者的平衡在基礎疾病或每個病例中存在差異，可見凝固活化顯著而纖溶系統(tǒng)被抑制的情形或凝固.纖溶兩者活化顯著的情況等。前者分為凝固優(yōu)先型，后者分為纖溶優(yōu)先型。凝固優(yōu)先型DIC往往并發(fā)感染癥、特別是敗血癥，臨床癥狀易見臟器癥狀。而在纖溶優(yōu)先型DIC中纖溶的標記一FDP(纖維蛋白降解產(chǎn)物)或PIC(纖溶酶/纖溶酶抑制劑復合物)顯著增加，易見出血癥狀。基礎疾病為急性前骨髓性白血病。DIC若治療延誤則導致死亡，因此是希望早期診斷和早期治療的緊急性高的病態(tài)。目前DIC按照厚生省的DIC診斷基準進行診斷。在該診斷基準中，對l)是否存在臟器障礙、2)血小板數(shù)、3)FDP、4)纖維蛋白原、5)PT比(凝血酶原時間比)的值進行打分，來判定DIC。該診斷基準在DIC的確診方面優(yōu)異，但在DIC的早期診斷中存在難點，臨床上按照該診斷基準進行治療時DIC的病態(tài)往往已過度發(fā)展，為時已晚。另外，在臨床上往往特別難以鑒別血小板數(shù)下降是否是DIC所致。具體例子有伴有骨髓抑制的病態(tài)(藥物、病毒感染癥、各種導致造血障礙的血液疾病等)、肝硬化、肝功能不全、血栓性血小板減少性紫癜(thromboticthrombocytopenicpurpura;TTP)/溶血'1"生尿毒癥纟宗合4正(hemolyticuremicsyndrome;HUS)、大量胸7J0腹水等。在上述病態(tài)中不僅伴有血小板數(shù)的下降，有時還伴有FDP或D二聚物的上升，因此更難以鑒別DIC。DIC的治療方法是給予低分子肝素或抗凝血酶III制劑，以抑制血管內的血栓多發(fā)，同時阻止消耗性凝固障礙的發(fā)展。治療纖溶優(yōu)先型DIC時，給予具有抗凝血酶作用和抗纖溶作用的曱磺酸加貝酯。對于并發(fā)血小板數(shù)產(chǎn)生減少的血液疾病的DIC，用濃稠血小板來補充血小板是不可缺少的。對血中纖維蛋白原下降的DIC施行新鮮冷凍血漿(FFP)輸注。另一方面，TTP和DIC或HUS等一樣，顯示被稱作微血管病變性;容血性貧血(microangiopathichemolyticanemia;MAHA)的病態(tài)。因<壬何原因而在血管$形成大量的病理性微血栓時，微血管內產(chǎn)生大量變窄的部位，強行通過該變窄部位的紅細胞因機械破碎而引起溶血。認為這是MAHA的發(fā)病機理。減小血管內徑的孩i血栓的主要成分包含纖維蛋白時是DIC,而包含血小板時是TTP或HUS。TTP是一種全身性重度疾病，1924年由美國的Moschcowitz首次才艮道，患病時血小板的凝集塊(血小板血栓)堵塞在微動脈內，可見以下五種癥狀l)血小板減少癥(皮膚出現(xiàn)紫斑)；2)溶血性貧血(由紅細胞破裂引起)；3)腎功能障礙；4)發(fā)熱；5)動搖性精神神經(jīng)癥狀。鑒定止血因子一血漿中vWF的特異性剪切酶(VWF-deavingprotease;VWF-CP)、別名ADAMTS13為TTP的病因。眾所周知，與健康人相比TTP中的ADAMTS13量顯著下降(例如非專利文獻1、非專利文獻2或專利文獻1)。若ADAMTS13缺乏或下降，則自血管內皮細胞釋放的UL-vWFM(異常大的vWF多聚體)沒有被分解，利用微血管等中產(chǎn)生的高應力引起過剩的血'J、板凝集,由于血栓堵塞血管。方法，該方法的特征在于對ADAMTS13進行定量。上述血栓癥的例子有急性或慢性骨髓性白血病、急性前骨髓球性白血病、全身性紅斑狼瘡、肺栓塞、腦梗塞、肝中心靜脈阻塞癥、急性淋巴性白血病、血栓性微血管障礙、血栓性血小板減少性紫癜、溶血性尿毒癥綜合征或深部靜脈血栓癥。另外，專利文獻3中公開了DIC或全身性炎癥反應綜合征(systemicinflammatoryresponsesyndrome;SIRS)患者中的血小板血栓癥或臟器障礙的檢測方法，在該方法中分析ADAMTS13和/或其分解因子(例如彈性蛋白酶、纖溶酶或凝血酶)。另外，還存在ADAMTS13活性輕度下降或正常的非定型TTP。該情況下的病因也多種多樣，有先天性和后天性要因，關于前者有人報道了由具有補體調節(jié)作用的血漿因子一因子H(FactorH)或血管內皮細胞膜貫穿型蛋白質CD46等的基因異常引起的TTP。TTP是極罕見的疾病，通常是后天產(chǎn)生的，但如下所述，偶爾也有先天性因素引起的TTP。TTP的臨床癥狀包括缺血性腸炎所引起的腹瀉、腹痛、血便；痙攣或視力障礙等神經(jīng)癥狀；以及腎障礙等。檢查時可以發(fā)現(xiàn)血栓形成所引起的末梢血的破碎紅細胞、貧血、血小板減少；血清LDH(乳酸脫氫酶)、間接膽紅素升高；觸珠蛋白下降等溶血所伴有的變化。由于腎障礙，還可見血清肌酸酐升高。目前，先天性TTP的治療方法往往是每23周輸注新鮮冷凍血漿(FFP)來補充ADAMTS13,并維持血小板數(shù)，進行發(fā)病預防治療。禁忌血小板輸血。作為后天性TTP的治療方法，總體的約l/3的病例中ADAMTS13活性銳減，這些病例幾乎全部是抗ADAMTS13的自身抗體為陽性。因此，單獨給予FFP是不夠的，在后天性.特發(fā)性TTP的治療中血漿交換(plasmaexchang;PE)療法是第一選擇。此時往往結合使用類固醇或類固醇脈沖療法。當然，在實施PE前禁忌進行血小板輸血。PE的效果總括了以下四點1)補充ADAMTS13;2)除去同抑制劑；3)除去UL-vWFM;4)補充止血所必需的正常vWF。對于難治.反復的病例還應該考慮使用長春新堿或環(huán)磷酰胺等免疫抑制劑、脾摘等。在引入PE或FFP輸注療法以前TTP的死亡率高達80%以上，預后非常不好。但通過引入上述療法或結合使用抗血小板療法，預后改善顯著，現(xiàn)在存活率基本達到90%以上。但是，已知治療抵抗例或復發(fā)例多，認為這是今后應該解決的問題。當TTP的病態(tài)發(fā)展時治療困難，其預后也極其不好，因此必需早期診斷和早期治療。非專利文獻l:ZhengX等，JBiolChem,(美國)2001年，第276巻，41059-41063非專利文獻2:FurlanM等，Boold，(美國)1997年，第89巻，3097-3103專利文獻l:國際公開第00/50904號小冊子專利文獻2:國際公開第2005/062054號小冊子專利文獻3:國際公開第2006/049300號小冊子
發(fā)明內容發(fā)明所要解決的課題如上所述，目前在根據(jù)使用現(xiàn)有標記測定值的診斷基準和臨床所見診斷為DIC的患者中報道了許多對DIC實施治療卻很難見到改善的病例。其中，特別是在確認血小板減少的患者中，本來診斷為TTP而實施血漿交換等適當?shù)闹委煏r，認為預后改善的可能性高。在DIC中選擇血小板輸注作為治療方法，但為TTP時，雖然血小板銳減，但如上所述通過血小板輸注病態(tài)進一步惡化，因此禁忌血小板輸注。因此，雖然血小板減少是共有的癥狀，但通過明確區(qū)分兩疾病組的不同，作出適當?shù)脑\斷，并施行適當?shù)闹委煼椒ǎ@在醫(yī)療臨床中非常渴望。本發(fā)明人反復進行深入研究，結果發(fā)現(xiàn)在DIC患者中，在利用ADAMTS13量(濃度)和ADAMTS13酶活性中的一方或它們的組合進行的DIC患者組的分類以及通過使用ADAMTS13量(濃度)和/或ADAMTS13酶活性和vWF量(濃度)的組合診斷為DIC的患者組中，發(fā)現(xiàn)可能是后天性TTP患者的檢體組。發(fā)現(xiàn)這是鑒別僅憑臨床所見或現(xiàn)有標記無法區(qū)別的"應該診斷為TTP的DIC"和"與TTP無關的DIC"、對各種疾病施行特異性療法、改善預后的方法，從而完成了本發(fā)明。即，本發(fā)明的課題在于提供能夠從僅憑臨床所見或現(xiàn)有標記無法區(qū)別的DIC患者中進行TTP患者的鑒別診斷的方法和試劑盒。解決i果題的方法上述課題可以通過本發(fā)明的彌漫性血管內凝血綜合征的病態(tài)鑒定方法來解決，該方法的特征在于分析彌漫性血管內凝血綜合征(DIC)患者的血管性血友病因子(vonwillebrand，sfactor)剪切酶(ADAMTS13)的量(濃度)和/或酶活性。根據(jù)本發(fā)明的病態(tài)鑒定方法的優(yōu)選方案，進一步分析血管性血友病因子(vWF)的量(濃度)。根據(jù)本發(fā)明的病態(tài)鑒定方法的另一優(yōu)選方案，利用免疫學方法分析血管性血友病因子剪切酶。本發(fā)明還涉及用于鑒定彌漫性血管內凝血綜合征的病態(tài)的試劑盒，該試劑盒中含有與血管性血友病因子剪切酶進行特異性結合的抗體或其片段。本說明書中的用語"分析"包括"檢測"和"測定"，"檢測"是指判定是否存在分析對象物質(例如ADAMTS13或vWF)，"測定"是指定量或半定量地決定分析對象物質的量(濃度)或活性。發(fā)明效果DIC和TTP由于病態(tài)相似，故難以明確診斷。另外，無論是哪一種疾病，若沒有通過早期診斷來早期實施適當?shù)闹委?，則會導致死亡，因此鑒別"應該診斷為TTP的DIC"和"與TTP無關的DIC，，非常重要。才艮據(jù)本發(fā)明，可以在按照現(xiàn)有診斷基準診斷為DIC的患者中鑒別"應該診斷為TTP的DIC"和"與TTP無關的DIC",通過實施適當?shù)闹委熆梢蕴岣叽婊盥驶蚪档椭滤缆?。附圖簡述圖l是顯示有關ADAMTS13抗原量(Aag)的結果的圖。圖2是顯示有關DAMTS13酶活性(Aact)的結果的圖。圖3是顯示有關vWF抗原量(Vag)的結果的圖。圖4是顯示有關Vag/Aag的結果的圖。圖5是顯示有關Vag/Aact的結果的圖。實施發(fā)明的最佳方式本發(fā)明的鑒定方法在本發(fā)明方法中，通過分析DIC患者的ADAMTS13的量(濃度)和/或酶活性中的至少一方(優(yōu)選兩方)或者通過使用ADAMTS13的量(濃度)和/或酶活性中的至少一方(優(yōu)選兩方)和vWF的量(濃度)的組合，可以鑒定DIC的病態(tài)。本說明書中的"DIC的病態(tài)鑒定"包含作為對確定適當?shù)闹委煼结樆蛑委煼椒ㄓ杏玫男畔⒌腄IC患者的各種病態(tài)的鑒定，例如從診斷為DIC的患者中區(qū)分本來診斷為TTP而應該改變治療方法的患者，即鑒另'J"應該診斷為TTP的DIC"和"與TTP無關的DIC"。另外，"DIC的病態(tài)鑒定，，還包含才艮據(jù)上述病態(tài)鑒定進行各種判斷和預測，例如確定適當?shù)闹委煼结樆蛑委煼椒ā㈩A測預后、檢測等。在本發(fā)明方法中，例如以DIC患者的ADAMTS13量(濃度)和/或酶活性的差異為指標，可以鑒別診斷"疑似TTP的DIC"和"與TTP無關的DIC"。并且，即使在DIC患者組中，對于苦思焦慮地進行診斷的患者以ADAMTS13量(濃度)和/或酶活性和vWF量(濃度)的組合、例如vWF量相對于ADAMTS13量(濃度)和/或其活性的比例的不同為指標，例如可以將DIC患者組進一步分為三組，鑒別為"應該診斷為TTP的DIC，，和"與TTP無關的DIC",提出患者特異性治療方法?？梢栽O定ADAMTS13量(濃度)和ADAMTS13活性的閾值作為分類指標。在本說明書中，"血管性血友病因子剪切酶(vWF剪切酶)，，是指特異性切斷存在于血管性血友病因子(vWF)的A2結構域的酪氨酸(842)和曱硫氨酸(843)的金屬蛋白酶，也被稱作ADAMTS13。眾所周知，與健康人相比，TTP中的ADAMTS13量顯著下降[例如ZhengX等，JBiolChem,(美國)2001年,第276巻，41059-41063;FurlanM等，Boold,(美國)1997年，第89巻，3097-3103;WO00簡04]。另外，小野等[小野(T.ono)等，血栓止血學會，20(M年(10/1抄錄發(fā)行)]還報道了雖然基礎疾病多種多樣，但與健康人相比，在參照DIC分數(shù)進行診斷的DIC患者組中ADAMTS13量顯著下降；以及在診斷為TTP患者組的組的ADAMTS13量為5~45%，而DIC患者組的ADAMTS13量為1095%的寬范圍。近年來，有人報道了多種疾病中的有關ADAMTS13的研究結果，如上所述，以前人們認為TTP患者中ADAMTS13活性銳減，j旦有才艮道血管醫(yī)學，2005年，第6巻，65-72)。但是，還沒有報道稱在診斷為DIC的患者中可以單獨利用ADAMTS13來鑒別"應該診斷為TTP的DIC"和"與TTP無關的DIC"?？梢詰帽景l(fā)明方法的對象(受試者)為DIC患者。受檢試樣例如優(yōu)選血漿或血清形態(tài)的血液。此外，例如還可以使用細胞組織液、淋巴液、胸腺水、腹水、羊水、胃液、尿、胰液、骨髓液或唾液等各種體液。上述血漿優(yōu)選為枸櫞酸血漿或肝素血漿。本發(fā)明方法可如下進行從DIC和TTP患者中分別采取檢樣，測定各自的ADAMTS13濃度、ADAMTS13活性和/或vWF濃度，之后通過比較測定值來鑒定DIC的病態(tài)以及確定其適當?shù)闹委煼椒ā榱藚^(qū)別疑為TTP的DIC患者，優(yōu)選使用自TTP患者中采取的檢樣，預先確定各種判定用閾值，例如ADAMTS13濃度和ADAMTS13活性的判定用閾如后述實施例所示，例如可以進行以下分類1)ADAMTS13量(以下稱作Aag)例如為30%以下；2)ADAMTSB活性(以下稱作Aact)例如為15%以下；3)ADAMTS13量相對于ADAMTS13活性的比例(Aact/Aag)例如為2.0以上；首先，將符合上述三項中的兩項或三項的患者組分為"疑似TTP的DIC患者組，，(A組)，將除此以外的患者組分為"非疑似TTP的DIC患者組，，(B組)。對于上述患者組(A組和B組)，根據(jù)vWF量(以下稱作Vag)相對于ADAMTS13量(Aag)的比例(Vag/Aag)和vWF量相對于ADAMTS13活性(Aact)的比例(Vag/Aact)可以進一步分為第1組Vag/Aag例如為8以上且Vag/Aact例如為16以上、第2組Vag/Aag例如為8以下且Vag/Aact例如為16以上、第3組不符合第1組和第2組的組(即，Vag/Aact例如不足16)。如后述實施例所示，兩名診斷為TTP的患者被分入第1組。另外，如后述實施例所示，在第1組第3組中，第1組和第2組為"應該診斷為TTP的DIC患者組"，第3組為"與TTP無關的DIC患者組"。需要說明的是，上述Aag、Aact、Vag分別為相對于正常值的相對值，上述各比(Aact/Aag、Vag/Aag、Vag/Aact)為基于上述相對值的比。事先確定判定用閾值時，對于作為預測對象的受試者通過分析Aag禾口/或Aact或者分4斤Aag和/或Aact以及Vag(例長口分沖斤Vag/Aag禾口/或Vag/Aact),可以進行上述受試者的上述判定和/或預測。設想判定用閾值根據(jù)各種條件例如基礎疾病、性別、年齡等而變化，但該領域技術人員適當選擇對應于受試者的適當母集團，對由該集團得到的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理，可以確定正常值范圍或判定用閾值。在本發(fā)明方法中，對分析ADAMTS13濃度的方法沒有特別限定，只要可以定量或半定量地確定ADAMTS13量或者能夠判定是否存在ADAMTS13即可，其例子包括使用抗ADAMTS13抗體或其片段的免疫學方法(例如酶免疫測定法、膠乳凝聚免疫測定法、化學發(fā)光免疫測定法、熒光抗體法、放射免疫測定法、免疫沉淀法、免疫組織染色或免疫印跡法等)、生化學方法(例如酶學測定法)或測定mRNA量的分子生物學方法等。使用免疫學方法作為ADAMTS13的分析方法時，可以按照公知方法例如國際公開第2004/029242號小冊子中記載的方法制備抗ADAMTS13抗體，上述免疫學測定例如也可以按照國際公開第2004/029242號小冊子中記載的方法來實施。作為測定ADAMTS13濃度的方法，從靈敏度和簡便性的角度考慮優(yōu)選免疫學方法。這里的免疫學方法是指使用抗ADAMTS13抗體，例如采用ELISA法、膠乳法或免疫色語法分析ADAMTS13。免疫學方法包括各種方法，例如標記ADAMTS13的竟爭法、標記抗體的層合法、觀察包被抗體的珠粒的聚集的膠乳珠粒法或使用結合在金膠體等著色微粒上的抗體的方法等。當為使用抗ADAMTS13抗體的方法時，包含在本發(fā)明的優(yōu)選方案中。抗體可以是單克隆抗體也可以是多克隆抗體。另外，還可以使用抗體片段，例如Fab、Fab，、F(ab，)2或Fv。ADAMTS13的酶活性例如可以利用以下方法進行測定'使用SDS-瓊脂糖電泳法的方法[M.Furlan等，Boold,(美國)1997年，第89巻，第3097-3103頁]、使用作為vWF基質的vWF的A2結構域的重組抗原的ELISA法[WhitelockJL等，"f弋-大/L才7、、卜口^水一夕只7>卜、、、乇只f-;7"，(英國)，2004年，第2巻，485-491]或者使用在作為vWF剪切酶基質的vWF的A2結構域中的相當于Aspl596-Argl66S的73殘基的合成肽中導入熒光基團[2-(N-甲氨基)苯曱?；?，Nma]和消光基團(2,4-二硝基苯基，Dnp)的消光性熒光基質FRETS-VWF73的方法[KokameK等，"7'、卩r4、，卜工，-弋—大A才7'、、"T卜口^、一"，(英國)，2005年，第129巻，93-100]。還可以利用日本特愿2005-148793號說明書中記載的分析方法進行測定，該方法具體包括以下步驟(1)使可能含有ADAMTS13的受檢試樣與在不溶性載體上結合有vWF或其片段的固定化基質在溶液中接觸的步驟；(2)分離上述溶液和不溶性載體的步驟；以及(3)分析殘留在不溶性載體上的vWF或其片段和/或自不溶性載體上游離的溶液中的vWF片段的步驟。vWF濃度的測定方法例如有利用人血小板和利托菌素輔因子的凝集活性進行的活性測定方法[AllainJP等，"JLabClinMed."(美國)，1975年，第85巻，第318-328頁]或者使用抗vWF抗體的免疫測定法[BrownJE等，"ThrombRes.，，(美國)，1986年，第43巻，第303-311頁]等，從靈敏度和簡便性的角度考慮優(yōu)選免疫學方法。[2〗本發(fā)明的鑒定用試劑盒本發(fā)明的試劑盒至少含有抗ADAMTS13抗體或其片段，優(yōu)選含有兩種以上不同的抗ADAMTS13抗體。上述抗ADAMTS13抗體可以是單克隆抗體也可以是多克隆抗體。當含有兩種以上不同的抗ADAMTS13抗體時，還可以將其中任一種(第2抗體)制成標記抗體，或者還可以進一步在試劑盒中追加標記抗體，上述標記抗體是在抗第2抗體的抗體上結合有標記以代替標記化。實施例以下，通過實施例來具體說明本發(fā)明，但這些實施例并不限定本發(fā)明的范圍?！秾嵤├?:DIC患者和TTP患者的凝固纖溶標記值的測定》從23名DIC患者和2名TTP患者身上采取添加了3.8。/。枸櫞酸的血漿。使用市售試劑盒(LPIA系列；三菱化學^卜口7)，利用LPIA-NV7(三菱化學Y卜口y)測定除去血小板數(shù)的各測定標記。采取添加了3.2%枸櫞酸的血漿，使用KX-21O只>7夕義社)測定血小板數(shù)。各測定結果見表l。在表l中，PAI-1表示纖溶酶原活化因子抑制因子-1,D-D表示D二聚物，F(xiàn)bg表示纖維蛋白原，F(xiàn)DP-P表示血漿FDP,PLT表示血小板，TAT表示凝血酶/抗凝血酶III復合物。在診斷為DIC的患者中可見血小板數(shù)銳減的患者，但僅憑以往的凝固纖溶標記值無法與TTP患者進行區(qū)分。<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>《實施例2:DIC患者和TTP患者的ADAMTS13抗原量及其酶活性以及vWF抗原量的分析》從12名健康人、23名DIC患者、2名TTP患者身上采取添加了3.80/。枸櫞酸的血漿。需要說明的是，DIC表示按照上述DIC診斷基準診斷為DIC的患者，TTP表示根據(jù)臨床所見診斷為TTP的患者。使用市售試劑盒(ADAMTS-13ELISA試劑盒；三菱化學^T卜口》)測定ADAMTS13抗原量(Aag)。ADAMTS13酶活性(Aact)利用SDS-瓊脂糖電泳法[M.Furlan等,Boold，(美國)，1997年，第89巻，第3097-3103頁]進行測定。vWF抗原量(Vag)使用市售試劑盒(STALIAtest:口、7、〉工夕、、7夕'乂乂？4少夕只)進行測定。測定結果見表2。需要說明的是，Aag或Aact以12名健康人的平均值為100。/。時的百分率表示，Vag以相對于試劑盒中所含的STD(正常人)的百分率表示。<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>根據(jù)TTP患者的測定值，按照下述指標對DIC患者的測定值進行分類。1)ADAMTS13抗原量(Aag)為30。/o以下2)ADAMTS13酶活性(Aact)為15°/。以下3)ADAMTS13量相對于ADAMTS13活性的比例(Aact/Aag)為2.0以上首先，將符合上述三項中的兩項或三項的患者組分為"疑似TTP的DIC患者組，，(A組)，將除此以外的患者組分為"非疑似TTP的DIC患者組，，(B組)。將上述患者組(A組和B組)進一步分為以下3組第1組Vag/Aag為8以上且Vag/Aact為16以上；第2組Vag/Aag為8以下且Vag/Aact為16以上；第3組不符合第l組和第2組的組(即"Vag/Aact不足16")。比較各組和健康人時得到了圖1圖3的結果。由ADAMTS13抗原量(Aag)、ADAMTSU酶活性(Aact)、vWF抗原量(Vag)的結果確認在任一種標記中TTP和健康人群明顯確認到差別。另外，在ADAMTS13抗原量和ADAMTS13酶活性方面確認到TTP與第3組的差別，可以判別兩組。并且，在第2組中在ADAMTS13抗原量方面確認到與TTP的差別，在ADAMTS13酶活性方面沒有確認到與TTP的差別。而在vWF抗原量方面沒有確認到TTP與DIC組(第l組第3組)的差別。因此，根據(jù)Vag/Aag或Vag/Aact來比較TTP和分成3組的DIC組時，得到了圖4圖5的結果。使用vWF抗原量與ADAMTS13抗原量之比0/ag/Aag)和vWF抗原量與ADAMTS13活性之比(Vag/Aact)時，第l組和第2組的各值的中央值與TTP的該值相比顯示2倍以內的值，而第3組的中央值與TTP的該值相比顯示2倍以上的差，表示第3組是明顯不同于TTP的病態(tài)。產(chǎn)業(yè)實用性本發(fā)明可以用于DIC的適當?shù)闹委熡猛?。以上，按特定方案說明了本發(fā)明，但該領域技術人員自明的變形或改良也包含在本發(fā)明范圍內。權利要求1.彌漫性血管內凝血綜合征的病態(tài)的鑒定方法，其特征在于分析彌漫性血管內凝血綜合征患者的血管性血友病因子剪切酶的量和/或酶活性。2.權利要求l的方法，該方法進一步分析血管性血友病因子的量。3.權利要求1或2的方法，該方法通過免疫學方法實施血管性血友病因子剪切酶的分析。4.用于鑒定彌漫性血管內凝血綜合征的病態(tài)的試劑盒，該試劑盒中含有與血管性血友病因子剪切酶進行特異性結合的抗體或其片段。全文摘要公開了彌漫性血管內凝血綜合征(DIC)的病態(tài)的鑒定方法，該方法是分析DIC患者中的血管性血友病因子(vWF)剪切酶(ADAMTS13)的量和/或酶活性(還優(yōu)選vWF量)；以及用于鑒定DIC病態(tài)的試劑盒，該試劑盒中含有與ADAMTS13進行特異性結合的抗體或其片段。根據(jù)本發(fā)明，能夠從僅憑臨床所見或僅憑現(xiàn)有標記無法進行區(qū)別的DIC患者中進行血栓形成性血小板減少性紫癜(TTP)患者的鑒別診斷。文檔編號C12Q1/37GK101374956SQ20078000380公開日2009年2月25日申請日期2007年1月30日優(yōu)先權日2006年1月31日發(fā)明者伊神恒,古崎文雄,小野智子,渡邊真一郎申請人:株式會社三菱化學藥得論;財團法人化學及血清療法研究所