專利名稱：不含淀粉分解活性的脯氨酸特異蛋白酶的制作方法
專利說明不含淀粉分解活性的脯氨酸特異蛋白酶 本發(fā)明涉及用于生產(chǎn)脯氨酸特異蛋白酶制劑的工藝、由此獲得的脯氨酸特異蛋白酶制劑及其用途，所述制劑基本上不含污染性的淀粉分解副活性。
脯氨酸特異蛋白酶形成了新興的工業(yè)酶種類，其具有用于生產(chǎn)蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物以及在多種液體食品中預(yù)防渾濁的有利特性。例如，在WO02/45523中描述了通過脯氨酸特異蛋白酶從富含脯氨酸的蛋白質(zhì)底物中生產(chǎn)的基本脫苦味的水解產(chǎn)物。蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物常被用于嬰兒配方和臨床營養(yǎng)品中。這些產(chǎn)品的目的在于防止蛋白質(zhì)變應(yīng)原性的發(fā)生和確保提供的蛋白質(zhì)的有效代謝。針對具有非藥物需要的消費者(例如運動員或處于減肥飲食中的人群)的產(chǎn)品中的蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物必須被制作為提供良好的味覺特征。這類蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物中的大部分得自牛乳蛋白質(zhì)，幾乎完全來自于牛乳的乳清蛋白級分。乳清蛋白用于該目的的普及性不僅基于許多國家中乳清蛋白比酪蛋白更便宜的事實，而且因為與乳清蛋白相反，酪蛋白在酶水解后會有顯著的苦味。因為存在于牛乳中80％的蛋白質(zhì)是酪蛋白，所以可安全地假設(shè)這些酪蛋白起到了牛乳中乳清級分未滿足的營養(yǎng)作用。因此，制造人能夠消耗的酪蛋白水解產(chǎn)物具有可觀的營養(yǎng)相關(guān)性和由此的經(jīng)濟學相關(guān)性。
脯氨酸特異蛋白酶的另一種有用的應(yīng)用被描述于WO 02/046381中。在該應(yīng)用中描述了一種酶方法，通過該方法可以在啤酒、葡萄酒和果汁中預(yù)防渾濁形成。在這些飲料中形成的渾濁通常代表了富含脯氨酸(“渾濁活性”)的蛋白質(zhì)和植物多酚之間聚集物的膠體沉淀。在對啤酒、葡萄酒和果汁的生產(chǎn)中，蛋白質(zhì)和多酚均在最初的生產(chǎn)階段提取自分裂的植物和/或水果組織中。
在啤酒生產(chǎn)中，渾濁活性蛋白質(zhì)以及多酚的主要部分提取自發(fā)芽的大麥中。得到的蛋白質(zhì)-多酚沉淀物可最終導(dǎo)致瓶裝啤酒中所謂的“冷渾濁(chill haze)”，所述沉淀物在啤酒發(fā)酵和成熟期間產(chǎn)生。對啤酒中這種冷渾濁形成的預(yù)防是技術(shù)上困難和昂貴的過程，該過程常規(guī)上使用聚乙烯聚吡咯烷酮(PVPP)或水化硅膠來處理。而與常規(guī)方法相反，根據(jù)WO02/046381的酶冷渾濁預(yù)防途徑是相對便宜和簡單的。在啤酒生產(chǎn)中，脯氨酸特異蛋白酶在發(fā)酵步驟期間添加，從而最小化啤酒氧化的風險。長孵育時間(整個發(fā)酵階段期間)保證最低水平的脯氨酸特異蛋白酶足夠降解所有的渾濁活性蛋白質(zhì)。由于這些優(yōu)點并將啤酒的巨大生產(chǎn)體積考慮在內(nèi)，通過該酶方法可以獲得的成本節(jié)約是可觀的。
我們現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，在任意上述應(yīng)用中使用脯氨酸特異蛋白酶時，脯氨酸特異蛋白酶優(yōu)選地缺乏淀粉分解副活性是非常重要的。脯氨酸特異蛋白酶制劑中這些淀粉分解副活性的過高水平可能具有有害的副作用，因為相關(guān)的最終產(chǎn)物中存在多糖的分解。多糖級分的這種分解可導(dǎo)致例如固體終產(chǎn)物的軟化甚至液化，或飲料(如啤酒)的口感被損害。因此提供基本上不含污染性的淀粉分解副活性的脯氨酸特異蛋白酶制劑是本發(fā)明的一個目的。
術(shù)語“脯氨酸特異蛋白酶”表示能夠切割涉及脯氨酸殘基的肽鍵的任何內(nèi)切蛋白酶或外肽酶。也就是說，“脯氨酸特異蛋白酶”是在肽或蛋白質(zhì)中包含脯氨酸殘基的位置上切割肽或蛋白質(zhì)的酶。能夠切割這類肽鍵的內(nèi)切蛋白酶的例子是脯氨酰寡肽酶(EC 3.4.21.26；Fülop et al.，Cell 1998，94，161-170)以及屬于絲氨酸蛋白酶SC分支S28家族的內(nèi)切蛋白酶(Edens etal.，J Agric Food Chem 537950-7957，2005；Handbook of Proteolytic Enzymes；Barrett A.J.；Rawlings N.D.；Woessner J.F.，Eds.；Academic Press，London，UK，1998，369-415)。在能夠切割涉及脯氨酸殘基的肽鍵的外切蛋白酶中，二肽基肽酶IV(EC 3.4.14.4)和二肽基肽酶II(EC 3.4.14.2)值得一提。
術(shù)語“淀粉分解副活性”表示能夠水解多糖(例如淀粉、糊精、糖原等等)中1，4-α-D-糖苷鍵的任何酶活性。因此，術(shù)語“淀粉水解副活性”包括酶例如α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)、β-淀粉酶(EC 3.2.1.2)、葡萄糖淀粉酶(EC 3.2.1.3)、葡聚糖1，4-α-麥芽糖水解酶(EC 3.2.1.133)以及這些活性的混合物。
術(shù)語“基本不含淀粉水解副活性”表示淀粉水解副活性以低水平存在，使得在各個生產(chǎn)工藝中有效劑量的脯氨酸特異蛋白酶活性下，所述生產(chǎn)工藝中不發(fā)生與如上所述的負面作用相關(guān)的、可觀察到的多糖和寡糖的分解。這表示脯氨酸特異蛋白酶中可允許的污染性的淀粉分解副活性水平在生產(chǎn)工藝間有所不同，這取決于具體的工藝條件以及存在的多糖的水平和類型。
術(shù)語“基本不含淀粉分解副活性”也可以被表達為給定的淀粉分解副活性(按某單位計)除以給定的脯氨酸特異蛋白酶活性(按某單位計)的比例。該比例在生產(chǎn)工藝間可有所不同，其取決于生產(chǎn)工藝中使用的具體的脯氨酸特異蛋白酶，以及使用的具體的脯氨酸特異蛋白酶中存在的具體淀粉分解副活性。
根據(jù)本發(fā)明的分離方法的優(yōu)點是使用本發(fā)明的方法，脯氨酸特異蛋白酶的產(chǎn)率為至少65％，優(yōu)選地至少75％，而殘余淀粉分解活性(例如α-淀粉分解活性)一般為每PPU 5.0或更低FAU，例如每PPU 0.5或更低FAU，例如每PPU 0.05或更低FAU，例如每PPU 0.005或更低FAU，優(yōu)選地0.0005或更低FAU/PPU。淀粉葡萄糖苷酶活性一般為每PPU 1或更少AGI，例如每PPU 0.5或更少AGI，例如每PPU 0.1 AGI或每PPU 0.01或更少AGI。FAU和PPU的定義在本申請的材料&方法章節(jié)中明確。該章節(jié)中還提供了葡萄糖淀粉酶活性(“AGI”)的定義。
在脯氨酸特異蛋白酶具有高于5.5的pH最適度的事件中，典型地，在例如37℃時在pH6.5下進行PPU測量，而不是在4.6和37℃下進行測量。
本發(fā)明第一方面提供了生產(chǎn)基本不含淀粉分解副活性的脯氨酸特異蛋白酶的工藝，所述工藝包括一個或多個液相色譜分離步驟，優(yōu)選地包括單個色譜分離步驟。本領(lǐng)域已知許多不同的色譜分離方法，可對這些進行篩選，從而提供本發(fā)明的脯氨酸特異蛋白酶。合適的色譜分離方法包括離子交換色譜、親和色譜、尺寸排除色譜、疏水相互作用色譜及其它。對本發(fā)明而言，優(yōu)選地使用離子交換色譜和/或疏水相互作用色譜。
可以使用微生物如真菌、酵母和細菌，通過發(fā)酵工藝生產(chǎn)感興趣的脯氨酸特異蛋白酶，所述微生物生產(chǎn)并優(yōu)選地在發(fā)酵液中分泌感興趣的脯氨酸特異蛋白酶。在本領(lǐng)域中，這類發(fā)酵工藝是已知的，參見例如WO02/45524。在現(xiàn)有技術(shù)的工藝中，可以通過本領(lǐng)域也已知的技術(shù)從發(fā)酵液中回收脯氨酸特異蛋白酶。第一步，可以通過離心或過濾從發(fā)酵液中分離生產(chǎn)用微生物的細胞。
如果脯氨酸特異蛋白酶被微生物分泌在發(fā)酵液中，則可以通過例如超濾來濃縮無細胞的發(fā)酵液，并通過已知的穩(wěn)定劑如甘油或其它多元醇來穩(wěn)定由此獲得的脯氨酸特異蛋白酶制劑。
如果微生物不分泌脯氨酸特異蛋白酶而是將其保持在細胞內(nèi)，則生產(chǎn)用生物必須被裂解，以釋放相關(guān)的脯氨酸特異蛋白酶活性。在去除細胞碎片的另一個過濾或離心步驟后，可以如上所述針對分泌的脯氨酸特異蛋白酶濃縮并穩(wěn)定液體級分?？梢酝ㄟ^已知的沉淀和/或蒸發(fā)和/或(噴霧)干燥技術(shù)從任選被濃縮的脯氨酸特異蛋白酶溶液中獲得固體制劑。
根據(jù)本發(fā)明的工藝，無細胞發(fā)酵液或無細胞碎片的液體級分必須經(jīng)歷一個或多個色譜分離步驟，從而提供本基本不含淀粉水解副活性的本發(fā)明的脯氨酸特異蛋白酶制劑。優(yōu)選地，對未經(jīng)添加甘油或多元醇穩(wěn)定的制劑進行這類色譜分離步驟。選擇最合適的色譜分離方法很大程度上取決于例如脯氨酸特異蛋白酶和污染性的淀粉分解活性的分子特征。相關(guān)特征包括等電點、疏水性、分子表面電荷分布、分子量和若干種其它蛋白質(zhì)化學特性。在酶純化中使用這些特征的實踐背景可參見a.o.the Protein PurificationHandbook(由Amersham Pharmacia Biotech，nowadays GE Healthcare Bio-Sciences，Diegem，Belgium發(fā)布)。
然而，在下述情況下色譜分離步驟將更加復(fù)雜得多脯氨酸特異蛋白酶不被微生物分泌，或淀粉分解副活性顯示與脯氨酸特異蛋白酶的分子特征非常相似的分子特征。例如，相似的等電點代表了例如離子交換色譜中典型的困難，藉此生產(chǎn)用微生物分泌大量酶，其中之一為脯氨酸特異蛋白酶。在這些情況下，從污染性酶中純化想要的脯氨酸特異蛋白酶并非不重要，如果該純化必須以有成本效益的方式發(fā)生并以巨大的工業(yè)規(guī)模發(fā)生的話，則無疑不是不重要的。在廣泛研究大量色譜樹脂和洗脫方案后，我們能夠設(shè)計一種可工業(yè)應(yīng)用的、單柱分離方案，該方案能使得完全分離典型地具有非常相近的等電點的蛋白水解和多種淀粉水解活性。根據(jù)本發(fā)明用于來自A.niger的脯氨酸特異內(nèi)切蛋白酶的優(yōu)選的純化方法利用離子交換或疏水相互作用色譜。這些純化方法在本申請的實施例2中有所示例。
本發(fā)明第二方面提供了基本不含淀粉分解副活性的脯氨酸特異蛋白酶。這類脯氨酸特異蛋白酶可有利地用于其中多糖的分解是不想要或不期望的應(yīng)用中。因為一些淀粉分解活性是相對熱穩(wěn)定的，所以它們傾向于在常用的酶滅活方案或產(chǎn)品巴氏消毒方案中存活。因此，使用脯氨酸特異蛋白酶生產(chǎn)的蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物可含有痕量的殘余淀粉分解活性，如果該活性與多糖或寡糖組合配制則會引起嚴重的問題。因此，能夠通過本發(fā)明的方法獲得的脯氨酸特異蛋白酶優(yōu)選地用于所有的產(chǎn)品，其中得到的蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物與含淀粉或麥芽糖糊精的化合物組合。優(yōu)選地，該產(chǎn)品為固體(例如能量或蛋白質(zhì)棒)、粉末(例如要被摻入嬰兒配方中的粉末或制備搖混物(shake)形式的營養(yǎng)混合物的粉末)，或產(chǎn)品可以是液體(如液體嬰兒配方或能量飲品)。
另外，能夠通過本發(fā)明的方法獲得的脯氨酸特異蛋白酶可被有利地用于含大量活性酶的最終產(chǎn)品中。這類最終產(chǎn)品尤其被描述于WO2005/027953和我們的未決申請PCT/EP2007/000896中。這些最終產(chǎn)品與可含有小麥麩質(zhì)的產(chǎn)品一起被消耗，目的是最小化毒性麩質(zhì)表位的作用，這尤其適用于對麩質(zhì)不耐受的人群，如乳糜瀉患者(celiac patient)。
最后，能夠通過本發(fā)明的方法獲得的脯氨酸特異蛋白酶可以在所有來自植物的液體產(chǎn)品中用于預(yù)防渾濁。優(yōu)選地，該來自植物的液體產(chǎn)品為啤酒。在后一應(yīng)用中，使用能夠通過本發(fā)明的方法獲得的脯氨酸特異蛋白酶預(yù)防多糖和寡糖的過度降解，從而導(dǎo)致最終的啤酒的改進的口感。
材料和方法 脯氨酸特異性內(nèi)切蛋白分解活性 使用CBZ-Gly-Pro-pNA(Bachem，Bubendorf，Switzerland)作為底物于37℃下在檸檬酸/磷酸二鈉緩沖液pH4.6中測試來自A.niger的脯氨酸特異內(nèi)切蛋白水解活性。在405nm用分光光度計測量監(jiān)測反應(yīng)產(chǎn)物。405nm處吸光度的及時提高是酶活性的度量。脯氨酸蛋白酶單位(PPU)被定義為在指出的條件下和0.37mM Z-Gly-Pro-pNA的底物濃度下，每分鐘釋放1μmol對-硝基苯胺的酶量。
α-淀粉酶活性 使用的α-淀粉酶測量方法基于Megazyme(R-CAAR-4；MegazymeInternational Ireland Ltd.，Bray，愛爾蘭)提供的Ceralpha測試試劑盒。在該方法中，用“非還原的和末端封閉的對-硝基苯基麥芽庚糖苷(maltoheptaoside)”(BNPG7)加上過量水平的淀粉葡萄糖苷酶和α-葡萄糖苷酶來孵育樣品。用內(nèi)-作用的α-淀粉酶水解該寡糖后，過量的淀粉葡萄糖苷酶和α-葡萄糖苷酶存在于混合物中，導(dǎo)致與對-硝基苯基連接的底物的同時和定量的水解。在孵育中，90微升底物溶液與10微升樣品溶液反應(yīng)，所述樣品溶液每ml含0.001和0.01之間的FAU。孵育425秒(在pH5.2和37℃下)后，終止孵育反應(yīng)，并通過添加75微升堿性(20.5g/l)TRIS溶液顯色。405nm處的顏色增加與樣品中存在的淀粉分解酶活性成比例。對該方法而言，使用來自Aspergillus oryzae的含α淀粉酶的標準制劑來校準體系。該標準的活性被表達為FAU(真菌淀粉酶單位)。一個FAU被定義為每小時轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中一克可溶淀粉的酶量，所述產(chǎn)物在與碘反應(yīng)后在620nm處具有與對照顏色相等的吸光度，所述反應(yīng)在pH5.0和30℃下進行并具有15和25分鐘之間的反應(yīng)實踐。對照顏色被定義為由100ml 0.01N鹽酸中25.0g CoCl2.H2O和3.84重鉻酸鉀組成的CoCl2顏色標準的吸光度。因此，405nm處0.54的吸光度增加對應(yīng)于每ml0.005FAU的淀粉酶活性。該方法的測量范圍為每ml0.001到0.01FAU，這對應(yīng)于0.11和1.1之間的吸光度增加。
淀粉葡萄糖苷酶活性 為了對樣品中的淀粉分解外切活性家一定量，測量淀粉葡萄糖苷酶活性。使用由Megazyme International Ireland Ltd提供的淀粉葡萄糖苷酶測定試劑(R-AMGR3)。在37℃和pH4.50下使用對-硝基苯基-β-麥芽苷作為底物來測定淀粉葡萄糖苷酶活性。一個淀粉葡萄糖苷酶單位(AGI)被定義為在pH4.3和60℃下每分鐘從可溶淀粉生產(chǎn)1μmol葡萄糖的酶量。對-硝基苯基-β-麥芽苷的酶水解導(dǎo)致對-硝基苯酚和纖維二糖的釋放。通過試劑添加的過量的β-葡萄糖苷酶的存在確保了纖維二糖到葡萄糖的水解，防止纖維二糖對淀粉葡萄糖苷酶的競爭性抑制。在堿性條件下測定的對-硝基苯酚的定量釋放是酶活性的度量。在孵育中，90微升的底物溶液與10微升的樣品溶液反應(yīng)，所述樣品溶液每ml含1和6之間個AGI。孵育425秒后，通過添加75微升堿性(40.1g/l)TRIS溶液終止酶反應(yīng)。隨后在405nm波長處測量吸光度。對該方法而言，使用來自Aspergillus niger的淀粉葡萄糖苷酶標準制劑來校準體系。因此，405nm處0.4的吸光度增加對應(yīng)于每ml3 AGI的淀粉葡萄糖苷酶活性。該方法的測量范圍為每ml 1到6個AGI，這對應(yīng)于0.14和0.80之間的吸光度增加。
糖模式分析 將通過離子交換色譜純化的脯氨酸特異蛋白酶的樣品在脫氣的啤酒(Heineken Pilsener，Premium Quality)中稀釋10倍，并在37℃孵育過夜。在Biorad Aminex HPX42A，300x 7.8mm柱上，分析經(jīng)孵育的啤酒的糖模式，使用Biorad陽離子和陰離子交換器去除過量的鹽。使用麥芽糖、麥芽三糖和α-環(huán)糊精水解產(chǎn)物作為分子量參照。通過使用葡萄糖校準獲得定量信息。柱溫度為85℃，0.5ml/分鐘的MilliQ水流動。
實施例 實施例1 淀粉分解副活性對啤酒的多糖和糖組合物的作用 為了消除污染性的淀粉分解副活性的負面作用，向脫氣的儲藏啤酒中添加粗制的來自A.niger的脯氨酸特異內(nèi)切蛋白酶制劑(cf.WO02/046381)，并在37℃下孵育過夜。為了說明該情況，在該實驗中使用過量的蛋白水解酶(1.0PPU/1啤酒，而0.25PPU/1啤酒的劑量應(yīng)當多于足夠防止渾濁的量)。作為對照，也向啤酒中添加相同的緩沖液體積(但是不含任何酶活性)并孵育過夜。第二天早晨，根據(jù)材料和方法章節(jié)中詳述的步驟對兩種啤酒樣品進行糖分析。從獲得的結(jié)果(見表1)明顯看出作為酶與脯氨酸特異內(nèi)切蛋白酶粗制制劑孵育的結(jié)果，存在于儲藏啤酒中的多糖幾乎被完全降解，產(chǎn)生許多不同的寡糖以及葡萄糖。例如，參考啤酒樣品中不存在的葡萄糖在經(jīng)酶處理的啤酒中大量存在。如果這類轉(zhuǎn)化在啤酒生產(chǎn)的發(fā)酵階段發(fā)生，則酵母會快速地消耗所有的葡萄糖和麥芽糖，從而產(chǎn)生額外的乙醇。這類改變是可清楚地注意到的，因為它們改變了最終啤酒的口感以及乙醇百分比。該簡單的實驗證明了粗制的、脯氨酸特異的內(nèi)切蛋白酶制劑中存在不想要的淀粉分解活性。
表1 實施例2 從來自Aspergillus niger的脯氨酸特異內(nèi)切蛋白酶中色譜去除淀粉分解副活性 為了從WO 02/046381中詳述的來自A.niger的脯氨酸特異內(nèi)切蛋白酶制劑中去除淀粉分解副活性，篩選了大量的色譜樹脂。就該目的而言，選擇了陽離子交換器SP Sepharose 6FF和疏水相互作用(HIC)樹脂丁基Sepharose 6FF(Amersham Biosciences Europe)。兩種樹脂均使用由UNICORN 3.20控制的

Explorer 100和由UNICORN 3.21控制的

Purifier與FRAC-950級分收集器組合在Tricorn 5/100柱(CV＝2，2ml)中測試。洗脫后，使用材料和方法章節(jié)中指出的方法針對脯氨酸特異內(nèi)切蛋白酶活性測試產(chǎn)生的所有級分。
使用來自A.niger的脯氨酸特異內(nèi)切蛋白酶的滲濾物(diafiltrate)作為起始材料，在以下的條件下進行SP-Sepharose-6FF色譜，所述滲濾物具有10PPU/ml酶活性、pH4和約4mS/cm的電導(dǎo)率。
在使用的色譜條件下，蛋白酶與樹脂結(jié)合，而主要的污染性的淀粉分解活性顯示不結(jié)合。SP Sepharose色譜顯示了可接受的蛋白質(zhì)分解和淀粉分解活性分離，盡管發(fā)現(xiàn)蛋白酶和淀粉分解活性的等電點相差少于0.8個pH單位。
在以下的條件下進行HIC色譜。此處也使用來自A.niger的脯氨酸特異內(nèi)切蛋白酶的滲濾物作為起始材料，所述滲濾物具有10PPU/ml的活性和pH4。使用含2M Na2SO4(pH4.2，G＝121mS/cm)的20mM檸檬酸緩沖液將該滲濾物稀釋兩倍，隨后在上樣在柱上之前通過過濾(0.2μm)滅菌。
因為將酶上樣在柱上后有可觀的拖尾，所以需要長的洗滌步驟來獲得基線分離。最后，可以用緩沖液B從柱上洗脫脯氨酸特異的內(nèi)切蛋白酶。將含有脯氨酸特異蛋白分解活性的級分合并，并測量剩余的淀粉分解副活性后，獲得表2中概括的數(shù)據(jù)。盡管被稀釋，但是經(jīng)純化的材料顯示顯著更低的淀粉分解副活性，如果計算回原始蛋白分解活性也是如此(見括號中的數(shù)字)。
表2 實施例3 經(jīng)純化的來自A.niger的脯氨酸特異內(nèi)切蛋白酶不影響啤酒的麥芽糖糊精組成 為了測試經(jīng)色譜純化的脯氨酸特異內(nèi)切蛋白酶在啤酒中的性能，重復(fù)了實施例1中所述的實驗。然而在該情況下，使用更現(xiàn)實的酶劑量，即粗制的和經(jīng)純化的酶以0.25PPU/1啤酒的活性來提供。再次使用不含酶活性的緩沖液作為空白在37℃下過夜的另一孵育后，再次測量多種啤酒樣品中的糖模式。獲得的數(shù)據(jù)(表3)闡明了用經(jīng)純化的酶孵育的啤酒中的糖模式與參考啤酒中的糖模式相同。用粗制的酶孵育(但是此次在現(xiàn)實的濃度下)的啤酒的糖模式僅輕微地而不是顯著地與參考材料不同，因為其更高的DP2和DP3殘余含量。應(yīng)當注意在現(xiàn)實的啤酒應(yīng)用條件下，酶會存在于整個發(fā)酵和成熟過程中，從而即使小量的淀粉分解污染也會變得顯著。
表權(quán)利要求
1.用于生產(chǎn)脯氨酸特異蛋白酶制劑的工藝，所述制劑基本上不含污染性的淀粉分解副活性，所述方法包括使用液相色譜來純化粗制的脯氨酸特異蛋白酶制劑。
2.能夠通過權(quán)利要求1的工藝獲得的脯氨酸特異蛋白酶制劑，所述制劑基本上不含污染性的淀粉分解副活性。
3.脯氨酸特異蛋白酶制劑用于制備飲料的用途，所述制劑基本上不含污染性的淀粉分解副活性。
4.脯氨酸特異蛋白酶制劑用于制備蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物的用途，所述制劑基本上不含污染性的淀粉分解副活性。
5.脯氨酸特異蛋白酶制劑用于提高對毒性小麥麩質(zhì)表位的耐性的用途，所述制劑基本上不含污染性的淀粉分解副活性。
全文摘要
本發(fā)明涉及不含淀粉分解活性的脯氨酸特異蛋白酶制劑和用于獲得根據(jù)本發(fā)明的酶制劑的純化方法。
文檔編號C12C5/00GK101432424SQ200780015318
公開日2009年5月13日 申請日期2007年4月23日 優(yōu)先權(quán)日2006年4月25日
發(fā)明者路泊·埃登斯, 魯?shù)婪颉じダ涮K斯·威廉姆斯·柯納里斯·比克霍文·范, 邁克爾·丹尼斯·泰貝林 申請人:帝斯曼知識產(chǎn)權(quán)資產(chǎn)管理有限公司