專利名稱：：具有增強(qiáng)耐酸性的乳酸菌的方法和應(yīng)用的制作方法具有增強(qiáng)耐酸性的乳酸菌的方法和應(yīng)用
背景技術(shù)：
：發(fā)明領(lǐng)域1908年，俄國生物學(xué)家EliMetchnikoff認(rèn)為某些保加利亞人和俄國人長壽的原因是其消費(fèi)了大量發(fā)酵奶制品。這些食物中的主要有機(jī)體是后來被鑒定為嗜酸乳桿菌(Z^cto^c^/z^acWop/H'/ws),—種產(chǎn)乳酸細(xì)菌。這種產(chǎn)乳酸細(xì)菌因其產(chǎn)生乳酸能力而得名。然而，產(chǎn)生乳酸僅僅是衍自這類細(xì)菌產(chǎn)生的許多益處中的一種。科學(xué)家們根據(jù)Metchnikoff和他人的工作發(fā)展了益生菌的概念，直接將活的產(chǎn)乳酸細(xì)菌和酵母喂養(yǎng)給動(dòng)物以改善它們的健康和性能。所觀察到的益處可能歸因于1)消化道附著位點(diǎn)的競爭；2)基本營養(yǎng)物質(zhì)的競爭；3)抗微生物物質(zhì)的產(chǎn)生；4)有益菌生長的促進(jìn)；5)免疫系統(tǒng)的刺激。一些致病菌會通過破壞小腸內(nèi)壁而降低動(dòng)物吸收營養(yǎng)物質(zhì)的能力。研究表明產(chǎn)乳酸細(xì)菌附著在小腸上并產(chǎn)生阻止致病有機(jī)體結(jié)合在腸壁的物質(zhì)。此外，有益菌的附著可能增加小腸的吸收表面積并增強(qiáng)酶活性以便使動(dòng)物吸收更多的營養(yǎng)。促生菌和致病菌二者的生長都需要某些營養(yǎng)物質(zhì)。產(chǎn)乳酸細(xì)菌能夠利用維生素、氨基酸或也能另外支持有害菌生長的其它營養(yǎng)物質(zhì)。大量研究關(guān)注于直接食用的微生物培養(yǎng)物產(chǎn)生抑制致病有機(jī)體的物質(zhì)的能力。乳酸、乙酸和甲酸會降低腸內(nèi)pH以產(chǎn)生不適于有害有機(jī)體的環(huán)境。產(chǎn)乳酸細(xì)菌還會分泌過氧化氫，從而使環(huán)境不利于需氧微生物。已經(jīng)鑒定出兩類抗微生物物質(zhì)低分子量抗微生物物質(zhì)，例如羅伊氏乳桿菌(丄.wten')產(chǎn)生的無蛋白菌質(zhì)(i^MfeW");和細(xì)菌素。細(xì)菌素是微生物產(chǎn)生的物質(zhì)，它通常抑制在遺傳上相似的細(xì)菌的生長。細(xì)菌素是多肽，而且它們的抑制特性會被蛋白酶破壞；而羅伊氏素是一種廣譜抗微菌物質(zhì)，它不是多肽而且它的抗微活性不受蛋白酶的影響。多種乳桿菌(丄acto^"7/w)屬菌株包括羅伊氏乳桿菌已經(jīng)被用于益生菌配方中。羅伊氏乳桿菌(Lacto^cz7/wwwfer/)是是動(dòng)物胃腸道天然生成習(xí)居菌中的一種，并且通常發(fā)現(xiàn)于健康動(dòng)物，包括人的腸內(nèi)。已知它具有抗微生物活性。參見美國專利US5,439,678、5,458,875、5,534,253、5,837,238、和5，849，289。當(dāng)路氏乳酸桿菌細(xì)胞在存在甘油厭氧條件下生長時(shí)，它們產(chǎn)生被稱為P-羥基-丙醛(3-HPA)的抗微生物物質(zhì)。研究已經(jīng)證明了產(chǎn)乳酸細(xì)菌具有抑制大腸桿菌(￡.Co/z')、鼠傷寒、沙門氏菌(Sa/附o"e〃a^p/n'附wn'w附)、金黃色葡萄球菌(5^a//zy/ococcwsawrews)禾口產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌(c/osnW/w附;^^7'"gera)的能力。在新生兒和幼畜中減少引起腹瀉的有機(jī)體尤其重要。乳桿菌菌株的遺傳修飾通常靶向于特定菌株性質(zhì)的改進(jìn)或增強(qiáng)，例如普通食物病原體拮抗化合物的產(chǎn)生、代謝膽固醇或耐酸性或耐受膽汁的能力、及增強(qiáng)免疫反應(yīng)的能力(Kullen,M.J.andT.R.Klaenhammer.1999.Geneticmodificationofintestinallactobacilliandbifidobacteria,p.65-83.InG.Tannock(ed,)，Probiotics:ACriticalReview,HorizonScientificPress,Wymondham,U.K.)。在理想條件下，這些經(jīng)修飾的菌株有利于宿主。然而在自然條件下，這些經(jīng)修飾的乳桿菌菌株的性能常受內(nèi)源質(zhì)粒的影響，尤其在操作是由質(zhì)粒介導(dǎo)的情況下。內(nèi)源質(zhì)粒和外源質(zhì)粒之間不相容是促使質(zhì)粒在宿主內(nèi)不穩(wěn)定的主要因素之一(Posno,M,R丄Leer,N.vanLuijk,M.J.f.vanGiezen，P.T.H.M.B.C.Lokman,andP.H.Pouwels.1991.IncompatibilityofLactobacillusvectorswithrepliconsderivedfromsmallcrypticLactobacillusplasmidsandsegregationalinstabilityoftheintroducedvectors.Appl.Environ.Microbiol.57，1822-1828)。大多數(shù)乳桿菌菌株，無論它們來源如何(植物、肉、青貯、酸性面團(tuán)或胃腸道)含有至少一個(gè)、通常多個(gè)內(nèi)源質(zhì)粒(Pouwels,P.H.andR.J.Leer.1993.Geneticsoflactobacilli:Plasmidsandgeneexpression.AntonievanLeeuwenhoek64，85-107)。這些質(zhì)?？赡懿粌H影響重組質(zhì)粒的穩(wěn)定性，而且還具有不期望的特性，例如，抗生素抗性(Posno等人，1991)，消除這些內(nèi)源質(zhì)粒是有利的，甚至必須的。許多抗生素和抗菌物質(zhì)已經(jīng)天然地存在于自然界達(dá)百萬年之久，人們已經(jīng)使用抗生素和抗菌劑來抑制細(xì)菌或其它微生物的生長并治療人類、其它動(dòng)物和組織培養(yǎng)物中的細(xì)菌或微生物感染。然而，抗生素或抗菌劑在給藥或施用時(shí)具有不期望的影響，即，會選擇出對那些對抗生素或抗菌劑有抗性的細(xì)菌或其它微生物。因此，治療方案可能會受負(fù)面影響，或者在某些情況下沒有效果。據(jù)最近的報(bào)道，羅伊氏乳桿菌ATCC55730能夠抗林肯霉素(lincomycin)而且還包含抗性基因/w"(Kastner，S.，Perrenten,V"Bleuler,H.,Hugenschmidt,G"Lacroix,C.&Meile,L.2006.Antibioticsusceptibilitypatternsandresistancegenesofstarterculturesandprobioticbacteriausedinfood.SystApplMicrobiol.29(2):145-155)。從該菌株的基因組搜索這個(gè)基因，它被鑒定為質(zhì)粒pLR585上的開放閱讀框Ir2105。這個(gè)質(zhì)粒還具有編碼多藥耐藥蛋白(Ir2089)和聚酮(polyketide)抗生素輸出者(Ir2096和Ir2097)的基因。質(zhì)粒上的這些基因與菌株已知的益生菌特性或耐酸性的重要性都沒有任何明顯的聯(lián)系和關(guān)聯(lián)。業(yè)內(nèi)，尤其益生菌工業(yè)上需要使用耐酸性良好的乳桿菌，以便使在各種配方中的這些培養(yǎng)物不僅穿過胃的酸性環(huán)境以足夠的量到達(dá)腸道，而且能夠在胃部生長和增殖，能夠貫穿胃腸道發(fā)揮其益生效果。當(dāng)使用耐酸性差的菌株時(shí)，需要消化較大數(shù)量的細(xì)菌，這會導(dǎo)致較高的成本。許多針對通過各種方法來保護(hù)酸性pH下的培養(yǎng)物的努力也會增加成本。因此，有利的是在工業(yè)上具有耐酸性良好的菌株，以及進(jìn)而改善現(xiàn)有菌株耐酸性的方法。改善乳酸菌耐酸性的方法的一個(gè)實(shí)施例在專利申請US20050158423中給出，其中使用攜帶有編碼小熱休克蛋白的質(zhì)粒的菌株，還給出了將這些質(zhì)粒轉(zhuǎn)入乳酸菌的方法。然而這與本發(fā)明是相反的，本發(fā)明是去除質(zhì)粒來增加菌株的耐酸性。本發(fā)明的其它目的和特征將在下面的內(nèi)容和隨附的權(quán)利要求中更充分地顯示。附圖簡單說明圖1顯示利用PCR技術(shù)對質(zhì)粒的檢測。序號表示1，羅伊氏乳桿菌DSM17938;2，羅伊氏乳桿菌DSM17686;3，羅伊氏乳桿菌ATCC55730;和4，羅伊氏乳桿菌DSM20016(陰性對照)。所分析的質(zhì)粒為a，pLR580;b，pLR581;c，pLR584;和d，PLR585。圖2顯示抗性基因/m^的檢測。1，DSM17938;2，DSM17686;3，ATCC55730;4，DSM20016圖3以柱形圖顯示ATCC55730(左)、DSM17686(中)和DSM17938(右)的耐酸性。柱子表示存活的細(xì)菌比例(四組重復(fù)的平均值)。誤差棒表示標(biāo)準(zhǔn)誤差，一個(gè)星號表示p值<0.05且三個(gè)星號表示p〈0細(xì)。
發(fā)明內(nèi)容通過消除兩個(gè)質(zhì)粒pLR581和pLR585獲得源自羅伊氏乳桿菌ATCC55730的菌株。該菌株比親株對四環(huán)素和林肯霉素更敏感。該雙消除菌株保藏在德國微生物菌種保藏中心(DSMZ)并且命名為羅伊氏乳桿菌DSM17938。羅伊氏乳桿菌DSM17938與羅伊氏乳桿菌ATCC55730具有相同的rep-PCR(重復(fù)序列PCR)圖、發(fā)酵模式、羅伊氏素產(chǎn)量、形態(tài)、生長率、粘液粘附性及膽汁耐受性。不過這種雙消除菌株能生長到更高的密度并在酸性條件下存活得更好。當(dāng)這種菌株是共培養(yǎng)的DSM17938時(shí)，同樣更具競爭性。因此本發(fā)明利用了這種新菌株的特性并提供經(jīng)修飾的特定的乳酸菌質(zhì)粒消除菌株，該菌株顯示出更好的耐酸性；修飾這些菌株的方法；及包含這些菌株的產(chǎn)品。本發(fā)明的其它目的和特征將在下面的內(nèi)容和隨附的權(quán)利要求中更充分地顯示。發(fā)明詳細(xì)說明和優(yōu)選實(shí)施例羅伊氏乳桿菌DSM17938(按照布達(dá)佩斯條約，于2006年3月6日保藏在德國微生物菌種保藏中心(DSMZ)(MascheroderWeglb，D-38124Braunschweig)通過消除兩個(gè)質(zhì)粒pLR581和pLR585從羅伊氏乳桿菌ATCC55730獲得。它與ATCC55730具有相同的rep-PCR圖、發(fā)酵模式、羅伊氏素產(chǎn)量、形態(tài)、生長率、粘液粘附性及膽汁耐受性，但比親株對四環(huán)素和林肯霉素更敏感。令人驚奇地，人們發(fā)現(xiàn)通過消除去除質(zhì)粒會提高羅伊氏乳桿菌DSM17938和DSM17686的耐酸性。這在共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中更具競爭性，這可以由其在酸性pH下存活更好來解釋。本發(fā)明的一個(gè)目的是從乳酸菌中去除質(zhì)粒而使其耐酸性更好并從而在腸中更好的存活，從而有益于人體健康。這在羅伊氏乳桿菌菌株DSM17686和新菌株羅伊氏乳桿菌菌株DSM17938中有所顯示。這在乳桿菌中似乎是一種普遍的但以前所未知的現(xiàn)象，即，一個(gè)不對與耐酸性相關(guān)的任何編碼的被去除質(zhì)粒會得到一個(gè)對酸更穩(wěn)定的新菌株。這種效果被應(yīng)用在本發(fā)明中以使乳桿菌耐酸性更強(qiáng)。本發(fā)明的其它目的和特征將在下面的內(nèi)容和隨附的權(quán)利要求中更充分地顯示。實(shí)施例1、自DSM17686中消除pLR585通過原生質(zhì)體形成和再生消除的質(zhì)粒基本上按照Vescovo等人(Vescovo,M"L"Cocconcelli,P.S.,andBottazzi，V.1984.Protoplastformation,regenerationandplasmidcuringinLactobacillusreuteri.FEMSMicrobiolLett23:333-334)的描述來實(shí)施。將羅伊氏乳桿菌DSM17686的過夜培養(yǎng)物在10mlMRS培養(yǎng)物(Oxoid，KS，USA)中稀釋至OD600=0.1并在37°。生長至00600=0.7-0.8。通過在3000xg離心10分鐘來收集細(xì)胞并在10ml超純水中洗滌。通過離心再次收集細(xì)胞并在2ml原生質(zhì)體緩沖液(0.2M磷酸鹽緩沖液、0.5M蔗糖、20mMMgCl2;pH7.0)中重懸。將這些細(xì)胞與等體積的存于原生質(zhì)體緩沖液中的10mgml"裂解酶混合并在37T:培養(yǎng)lh。通過在3000xg離心15分鐘來收集原生質(zhì)體并用20ml原生質(zhì)體緩沖液洗滌。通過離心再次收集原生質(zhì)體并在1ml原生質(zhì)體緩沖液中重懸，然后進(jìn)行顯微觀察。將原生質(zhì)體緩沖液中的稀釋物在含0.5M蔗糖的MRS瓊脂上涂板以用于再生。將超純水中的稀釋物在MRS瓊脂上涂板以估計(jì)殘余的完整細(xì)胞數(shù)目。在37X:下厭氧培養(yǎng)過夜，然后測定cfU(菌落形成單位)數(shù)，并在再次過夜培養(yǎng)后再進(jìn)行測定。將再生的菌落挑選至含和不含8嗎ml"林肯霉素的MRS瓊脂上。通過在含有林肯霉素的MRS瓊脂上不生長可用來鑒定質(zhì)粒消除的候選物。結(jié)果pLR585消除的鑒定經(jīng)由PCR來分析DSM17938質(zhì)粒(圖1)。pLR585和pLR581均消失，而其它兩個(gè)質(zhì)粒則仍然存在。因此，tetW-質(zhì)粒pLR581和lnuA-質(zhì)粒pLR585菌從DSM17938中消除。lnuA在DSM17938中的消失也通過PCR來檢測(圖2)。實(shí)施例2林肯霉素最小抑制濃度的鑒定細(xì)菌在37i:在MRS肉湯中生長16小時(shí)。將其稀釋至105cflimr1，然后將1^1的各細(xì)菌菌株點(diǎn)在含有林肯霉素和克林霉素(clindamycin)的MRS板上(濃度為0、0.125、0.25、0.5、1、2、4、8和16pgmr1)。液滴吸收后，將板在37"C厭氧氣氛下培養(yǎng)24小時(shí)。將MIC定義為沒有可見的細(xì)菌生長的最低抗生素濃度。四環(huán)素的MIC根據(jù)廠家說明由Etest(ABBiodisk)對生長在MRS瓊脂(Oxoid)板上的細(xì)菌進(jìn)行檢測。結(jié)果pLR585的消除使得MIC從>16降至0.25嗎ml"林肯霉素，接近陰性對照DSM20016的水平。己經(jīng)很低的林肯霉素的MIC值沒有改變。由E-test來檢測四環(huán)素的MIC，發(fā)現(xiàn)其對于DSM17938和DSM17686為12-16ngmr1，對于ATCC55730為>256pgmr1。<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>實(shí)施例3發(fā)酵模式、無蛋白菌質(zhì)(i^"feW)產(chǎn)量根據(jù)制造商的說明使用api50CHL(bio-M6rieux)來測定發(fā)酵模式。為檢測羅伊氏素產(chǎn)量，首先使細(xì)菌在MRS板上生長48小時(shí)(劃線接種)。然后用500mM甘油瓊脂(1%瓊脂)涂覆并在37'C培養(yǎng)30分鐘。通過添加5ml2，4-二硝基苯肼(0.1%，于2MHC1中)來檢測羅伊氏素。培養(yǎng)3分鐘，然后倒出溶液并添加5ml5MKOH。菌落周圍的紅色區(qū)域表示有羅伊氏素產(chǎn)生。結(jié)果采用API50CHL比較DSM17938與DSM17686和ATCC55730的發(fā)酵模式，沒有檢測到差異。所有菌株能夠發(fā)酵L-阿拉伯糖、核糖、半乳糖、葡萄糖、麥芽糖、乳糖、蜜二糖、蔗糖、蜜三糖和葡糖酸鹽而且對于其它的試驗(yàn)是陰性。三種菌株羅伊氏素的產(chǎn)量也具有相同的量級。實(shí)施例4生長和共培養(yǎng)通過將OD0.1的過夜培養(yǎng)物接種在預(yù)熱至37°C的試管中的MRS肉湯中來檢測生長。在37-C培育這些試管并在8小時(shí)內(nèi)取樣來測量OD600nm。各細(xì)菌重復(fù)分析三次。通過將等量的ATCC55730、DSM17686、DSM17938過夜培養(yǎng)物在預(yù)熱的MRS肉湯試管中混合來進(jìn)行細(xì)菌的共培養(yǎng)。將混合物在37t:培養(yǎng)過夜，然后復(fù)種至新的MRS試管中。重復(fù)此過程3次。在每次培樣的開始和結(jié)束后，通過以下步驟來分析樣品將不同的培養(yǎng)物稀釋物在MRS板上涂板，然后挑選菌落至三個(gè)MRS板上一個(gè)不含抗生素、一個(gè)含有8嗎ml"林肯霉素且一個(gè)含有64ngml"四環(huán)素。認(rèn)為僅在MRS上生長的菌落是DSM17938;認(rèn)為那些在含有林肯霉素的MRS上生長的菌落是DSM17686;且認(rèn)為那些在三個(gè)板上都生長的菌落是ATCC55730。結(jié)果比較菌株DSM17938和DSM17686與ATCC55730的生長。在代時(shí)上未檢測到差異，不過兩種消除菌株生長密度明顯高于ATCC55730。最終的OD為ATCC55730，4.78士0.13;DSM17686，5.89±0.28;和DSM17938，6.00±0.26。還將這三種菌株在MRS肉湯中共培養(yǎng)了約30代(3次復(fù)種)。結(jié)果清楚地顯示消除菌株在體外生長時(shí)有優(yōu)勢。各菌株一起等量接種，但是在實(shí)驗(yàn)最后混合物由56%DSM17938、38%DSM17686和僅6%ATCC55730組成。導(dǎo)致此結(jié)果的原因可能是消除菌株能生長至更高的OD或可能在穩(wěn)定期存活更好。兩種質(zhì)粒的丟失還會導(dǎo)致消耗降低(更少的DNA復(fù)制)并因而有更高競爭力。實(shí)施例5結(jié)合粘液使用來自豬小腸的粘液。將粘液材料和BSA在PBS中溶解并稀釋，通過將100pi的溶液在室溫下邊緩慢旋轉(zhuǎn)便培育3h來將其固定于微量滴定板孔(Greiner)中。最終的濃度是粘液材料為OD2800.1且BSA為100嗎mr1。用0.2ml補(bǔ)充有1%吐溫20的PBS封閉這些孔1h，然后用含0.05%吐溫20的PBS(PBST)洗滌。細(xì)菌在37°C下在MRS肉湯中生長16h，在PBST中洗滌一次并在相同的緩沖液中稀釋至OD6000.5。然后用PBST洗滌這些孔并用倒置顯微鏡檢測結(jié)合度。所有細(xì)菌重復(fù)分析三次。結(jié)果比較菌株DSM17938和DSM17686與ATCC55730的粘液結(jié)合能力。沒有檢測到結(jié)合差異。實(shí)施例6耐酸性為測定低pH下的存活，羅伊氏乳桿菌菌株ATCC55730、DSM17686和DSM17938在37"C下在MRS中生長過夜。將5細(xì)菌添加至10ml預(yù)熱的MRS中，在37。C培養(yǎng)至OD600達(dá)1.0。將800piODl.O培養(yǎng)物添加至8ml人造胃液(8.3gl"蛋白胨(Oxoid)、3.5gl—1葡萄糖、2.05gl"NaCl、0.6gl"KH2P04、0.11gl"CaCl2、0.37gl"KCl，用HC1調(diào)至pH為2.0)，該人造胃液是由Cotter等人改良的不含酶的改良物(Cotter,P.D.,Gahan,C.G.&Hill,C.2001.Aglutamatedecarboxylasesystemprotects丄&ten'amowocyfogewesingastricfluid.MolMicrobiol40:465-475)。在37。C培育試管并且在1、20、50和90分鐘后取樣。將樣品在PBS中稀釋并涂覆在MRS板上，將該板在37-C下厭氧培育24小時(shí)。此實(shí)驗(yàn)重復(fù)兩次并且每次分析兩個(gè)重復(fù)樣品。通過Student'st-檢驗(yàn)來統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)菌株間的差異。結(jié)果三種菌株生長至OD600l.O(中至后指數(shù)期)且隨后挑戰(zhàn)酸性pH。在pH2.0下培育50分鐘后，DSM17938和DSM17686都比ATCC55730存活得好，它們的存活率分別為41%、28%和20%(圖3)。.差異顯著，p值為0.00006(DSM17938比ATCC55730)和0.04(DSM17686比ATCC55730)。其原因還不知道。在酸性PH條件下存活更好可以解釋為什么消除菌株在共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中更具競爭性。實(shí)施例7膽汁耐受性細(xì)菌在37"C下在MRS肉湯中生長16h。將細(xì)菌懸液在PBS中稀釋至約10S-l(^cfUmr1。將10pl各稀釋物滴在含有不同濃度牛膽汁(0、0.5%、1%、2%、4%和6%;SigmaB3883)的MRS板上。各細(xì)菌分析重復(fù)兩次。將板在37。C厭氧氣氛下培育72h。計(jì)數(shù)菌落并通過比較膽汁板與不含膽汁的MRS板上的菌落數(shù)來估計(jì)膽汁耐受性。指數(shù)期的細(xì)菌(OD0.5)也用同樣的方法檢測。結(jié)果比較消除菌株DSM17938和DSM17686與ATCC55730的牛膽汁耐受性。穩(wěn)定期和指數(shù)生長期(OD6000.5)的細(xì)菌都做了檢測。它們在穩(wěn)定期膽汁耐受性良好，但在指數(shù)期時(shí)存活和生長的細(xì)菌大大減少。不過在菌株間未檢測到耐受性差異。雖然本發(fā)明是參考具體實(shí)施例來說明的，但是應(yīng)了解許多的改變、修改和實(shí)施例也是可行的，因此所有的這些改變、修改和實(shí)施例都認(rèn)為是在本發(fā)明的精神和范疇內(nèi)。權(quán)利要求1、一種羅伊氏乳桿菌(Lactobacillusreuteri)DSM17938的生物純培養(yǎng)物。2、一種包括羅伊氏乳桿菌DSM17938的生物純培養(yǎng)物的組合物。3、一種用于增加乳桿菌菌株耐酸性的方法，所述方法包括從所述乳桿菌菌株中去除質(zhì)粒。4、一種根據(jù)權(quán)要求3所述的用于增加乳桿菌菌株耐酸性的方法，其中，所述乳桿菌菌株為羅伊氏乳桿菌菌株。5、一種用于提供能夠在人胃中更好地增殖乳桿菌菌株的方法，所述方法包括從所述乳桿菌菌株中去除質(zhì)粒。6、根據(jù)權(quán)利要求5所述的增加乳桿菌菌株耐酸性的方法，其中，所述乳桿菌菌株為羅伊氏乳桿菌菌株。7、一種包括從乳桿菌菌株中去除質(zhì)粒的乳桿菌菌株的益生菌產(chǎn)P口口o8、根據(jù)權(quán)利要求7所述的益生菌產(chǎn)品，其中，全部質(zhì)粒已被去除。9、根據(jù)權(quán)利要求7所述的益生菌產(chǎn)品，\其中，所述菌株為羅伊氏乳桿菌菌株。10、根據(jù)權(quán)利要求9所述的益生菌產(chǎn)品，其中，所述菌株為羅伊氏乳桿菌DSM17938。全文摘要本發(fā)明提供了經(jīng)修飾的具有更好耐酸能力的消除特定質(zhì)粒的乳酸菌菌株、和修飾這些菌株的方法、以及包含這些菌株的產(chǎn)品。文檔編號C12N1/20GK101432006SQ200780015449公開日2009年5月13日申請日期2007年5月30日優(yōu)先權(quán)日2006年6月5日發(fā)明者埃蒙·康諾利申請人:生命大地女神有限公司