專利名稱：含有木脂素類化合物的o/w/o型乳液及含有該乳液的組合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及含有木脂素類化合物的o/w/o型乳液及含有該乳液的組合物，
詳細地說，涉及改善了木脂素類化合物的體內(nèi)吸收量的組合物。
背景技術：
對于木脂素類化合物，已報導有各種在生物體內(nèi)的作用，例如，在
USP4427694中公開了芝麻素可有效緩和酒精中毒、酒精及吸煙的戒斷癥狀，此 外，在日本特開平2 — 138120號公報中，公開了芝麻酚素(sesaminol)、表芝 麻酚素(印isesaminol)可有效治療 預防支氣管哮喘等的過敏癥。本申請人 也證實了木脂素類化合物的各種生理作用，到目前為止已證實了降低血液中膽 固醇的作用(日本專利3001589號)、A5—去飽和酶抑制作用(日本專利3070611 號)、改善肝功能的作用(日本專利3075358號)、降低膽固醇(日本專利3075360 號)、防止惡醉的作用(日本專利3124062號)、抑制膽固醇及膽汁酸代謝、降 低膽固醇的作用(日本專利3283274號)、抑制癌癥發(fā)病的作用(日本專利3183664 號)、抑制乳腺癌的作用(日本特開平05-043458號)、抑制過氧化脂質(zhì)生成的 作用(日本特開平05-051388號)、清除活性氧的作用(日本特開平06-227977 號)等的效果。
但是，木脂素類化合物幾乎不溶于水，而且在可用于醫(yī)藥或食用的有機溶 劑中也只有一定程度的溶解。所以，此種難溶性物質(zhì)具有在生物體內(nèi)難于被吸 收的問題。
作為提高脂溶性物質(zhì)的體內(nèi)吸收性的方法，有將脂溶性物質(zhì)的膠束進行微 細化(微粒子化)的方法的提案。這是利用了在消化道吸收性方面，脂溶性物 質(zhì)的粒徑越小越有利的性質(zhì)。具體地說，例如，在日本特開2004—196781號中， 公開了如下含有輔酶QIO (coenzymeQ10)的水溶性組合物，其通過使由輔酶QIO(coenzymeQ10)與特定的聚甘油、脂肪酸單酯等組成的組合物的平均粒徑為 llOnm以下，從而使生物體內(nèi)的吸收性得到顯著改善。另外，在日本特開平9一 157159號中，公開了如下含有類胡蘿卜素類的組合物，其是使在油脂中溶解有 類胡蘿卜素類的油相在含有聚甘油脂肪酸酯、卵磷脂及多元醇的水相中乳化的 組合物，其中，通過使上述油相的平均粒徑為100nm以下，從而改善難溶性物 質(zhì)類胡蘿卜素的體內(nèi)吸收性。
另外，為提高風味"呈味、抑制脂溶性物質(zhì)的劣化，有時采用雙重乳化 (0/W/Q;油包水包油型乳液)的手段。具體地說，例如，在日本特開平5 —130843 號中，公開了作為可改善配合蛋黃的以往的0/W乳液的問題(油膩)的組合物， 而在水相中配合蛋黃和糖類的油包水包油型乳化油脂組合物。此外，在日本特 開平7 — 313055號中，記載了對于易受氧化而發(fā)生劣化的DHA，通過在0/W/0型 乳液的內(nèi)油相中配合DHA，被乳化相的膜包覆從而可抑制DHA的品質(zhì)劣化，可得 到風味"呈味良好的產(chǎn)品。而且，在日本特開2004—97113號中，記載了利用脂 溶性維生素類的0/W/0型乳液，即使長時間保存，也可維持維生素類的活性。
專利文獻1 USP4427694
專利文獻2日本特開平2-138120號
專利文獻3日本專利3001589號
專利文獻4日本專利3070611號
專利文獻5日本專利3075358號
專利文獻6日本專利3075360號
專利文獻7日本專利3124062號
專利文獻8日本專利3283274號
專利文獻9日本專利3183664號(日本特開平04-159221號)
專利文獻IO日本特開平05-043458號
專利文獻ll日本特開平05-051388號
專利文獻12日本特開平06-227977號
專利文獻13日本特開2004-196781號
專利文獻14日本特開平9-157159號專利文獻15日本特開平5 — 130843號 專利文獻16日本特開平7 — 313055號 專利文獻17日本特開2004—97113號

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明者為提高木脂素類化合物的體內(nèi)吸收性進行了研究。而且，首先發(fā) 現(xiàn)口服給藥使溶解了木脂素類化合物的油相在水相中乳化后得到的水包油型乳 液時，與單純?nèi)芙庠谟椭邢啾?，最高血藥濃度到達時間(Tmax)顯著加快 (PCT/JP2006/306845)。此種體內(nèi)吸收速度的提高在如下情況中特別有效，即 期望木脂素類化合物的效果在攝取后迅速得到發(fā)揮時，例如，在期待防止惡醉 的效果、清除活性氧的效果時特別有效。
另一方面，根據(jù)本發(fā)明者的研究可知，上述手段雖在提高體內(nèi)吸收速度時 優(yōu)異，但并不提高體內(nèi)吸收量。即將木脂素類化合物作為水包油型乳液口服給 藥與單純?nèi)芙庠谟椭锌诜o藥，血藥濃度一時間曲線下面積(area under the blood concentration-time curve、 AUC)是同樣的(參照本申請說明書的[參 考例])。
因此，本發(fā)明特別著眼于木脂素類化合物的體內(nèi)吸收量，以使其比以往提 高作為課題。
本發(fā)明者為提高木脂素類化合物的體內(nèi)吸收量而進行銳意研究，結果令人 驚訝的是，發(fā)現(xiàn)使木脂素類化合物溶解在0/W/O型乳液的內(nèi)油相中口服給藥時， 可比以往提高體內(nèi)吸收量。以往，雙重乳化的目的是提高風味'呈味或抑制脂溶 性物質(zhì)的劣化，而對于可提高脂溶性物質(zhì)的體內(nèi)吸收，到目前為止還不為人所 知。
即本發(fā)明提供雙重乳化木脂素類化合物，更詳細地說是內(nèi)油相中溶解有一 種以上木脂素類化合物的0/W/0型乳液組合物、及通過該組合物提高木脂素類 化合物的體內(nèi)吸收量的方法。
本發(fā)明還提供如下0/W/0型乳液組合物及其制造方法，其在口服給藥時， 與將一種以上等量的木脂素類化合物溶解在與內(nèi)油相相同的油脂中并以相同條件口服給藥時相比，可使木脂素類化合物以更大的AUC (以優(yōu)選1. 13倍以上， 更優(yōu)選1.25倍以上，更優(yōu)選1.5倍以上，更優(yōu)選1.6倍以上的AUC)進行吸收。 用于確認某種0/W/0型乳液組合物(試驗制劑)的AUC是否比標準制劑大 的試驗，如果是本領域技術人員，均可采用試驗等適當設計。


圖1表示將本發(fā)明和比較例的組合物投藥后大鼠血液中芝麻素濃度及表芝
麻素濃度總和(芝麻素+表芝麻素濃度)的經(jīng)時變化。
圖2表示將本發(fā)明和比較例的組合物投藥后大鼠的體內(nèi)吸收量(AUC)。 圖3表示將本發(fā)明的乳液(平均粒徑^100nm)和比較例的組合物投藥后大
鼠血液中芝麻素濃度及表芝麻素濃度總和(芝麻素+表芝麻素濃度)的經(jīng)時變化。
具體實施例方式
此種組合物，可通過包括以下工序的方法制造
1) 將一種以上木脂素類化合物溶解在油脂中，得到木脂素類化合物溶解液 的工序；
2) 使所述木脂素類化合物溶解液在水相中乳化，形成0/W型乳液的工序；
及
3) 使所述0/W型乳液進一步在油相中乳化，得到0/W/0型乳液的工序。 木脂素類化合物
本發(fā)明中使用的木脂素類化合物，可例舉芝麻素、芝麻酚素(sesaminol)、 表芝麻素、表芝麻酚素(印isesaminol)、芝麻林酚(sesamolin)、 2— (3， 4 一亞
甲二氧基苯基)一6— (3—甲氧基一4一羥基苯基)一3， 7 — 二氧雜二環(huán)[3， 3， 0]辛烷、2， 6—雙一 (3—甲氧基一4一羥基苯基)一3， 7 — 二氧雜二環(huán)[3， 3， 0]辛烷、或2_ (3， 4一亞甲二氧基苯基)一6— (3—甲氧基一4一羥基苯氧基) 一3， 7 —二氧雜二環(huán)[3， 3， 0]辛烷等，這些可單獨或混合使用。上述木脂素類化合物，不受其形態(tài)、制造方法等的任何限制。例如，可使 用從芝麻油中通過公知方法[例如，在芝麻油中加入熱甲醇提取，除去甲醇后，
通過在殘渣中加入丙酮提取的方法(如日本特開平4一9331號公報中所記載)]提 取的木脂素類化合物(大量含有木脂素類化合物的提取物或純化物)，也可直接 使用市售的芝麻油(液狀)。但使用芝麻油時，因有時芝麻油特有的風味被評價 為感官上不受歡迎，所以優(yōu)選使用從芝麻油中提取的無味無臭且大量含有木脂 素類化合物的提取物或純化物。此外，使用芝麻油時，因木脂素類化合物的含 量低，且因欲配合優(yōu)選量的木脂素類化合物時，會使含有處方上的含木脂素類 化合物的水包油型乳液的組合物的攝取量過多，而產(chǎn)生不適合攝取的情況。因 此，從攝取量越少越好的觀點來看，優(yōu)選使用芝麻油中的大量含有木脂素類化 合物的提取物或經(jīng)分離純化的木脂素類化合物的純化物。且大量含有木脂素類 化合物的芝麻種子等中的提取物，因具有焦香的芝麻香味，所以，用于本發(fā)明 的動物用飲食物時，也可使其帶有芝麻的香味。
另外，也可通過合成獲得木脂素類化合物。其方法例如，除了芝麻素、表 芝麻素可用Beroza等的方法[J. Am. Chem. Soc. ， 78， 1242 (1956)]合成外， 松酯醇可用Freundenberg等的方法(Chem. Ber., 86， 1157(1953))， 丁香脂 素可用Freundenberg等的方法(Chem. Ber. ， 88， 16(1955))合成。
而且，木脂素類化合物也可以糖苷的形態(tài)使用，也可將其單獨或適當組合 作為組合物的成分。
0/W/0型乳液組合物
通過本發(fā)明，提供含有木脂素類化合物的0/W/0型乳液組合物。木脂素類 化合物至少要溶解在內(nèi)油相中。木脂素類化合物也可溶解在內(nèi)油相及外油相中。
本說明書中所述"內(nèi)油相"，除特殊情況外，指0/W/0型乳液組合物中最 內(nèi)側的油相。內(nèi)油相， 一般也可表示為"最內(nèi)油相"。本發(fā)明中"內(nèi)油相"的 具體實例，除芝麻油、溶解在芝麻油中的狀態(tài)的從芝麻油中提取的大量含有木 脂素類化合物的提取物(芝麻油濃縮物)以外，還可例舉使芝麻提取物、經(jīng)純 化的木脂素類化合物等的粉狀(固體狀)的木脂素類化合物溶解在油脂中制備 的產(chǎn)物。
8在此，使木脂素類化合物溶解的油脂，為可在食品或醫(yī)藥品中添加的油脂， 只要是可溶解木脂素類化合物的油脂，無特殊限制，均可使用，可1種單獨使
用或多種混合使用。具體地說，可例舉杏仁油、紅花油(Safflower)、杏桃仁 油(Apricot Kernel 0il)、鱷梨油、月見草油、小麥胚芽油、玉米油、葵花籽 油、紅花油、核桃油(walnut oil)、橄欖油、蓖麻油(Castor 0il)、石栗油、 葡萄籽油、可可油、椰子油、豆油、菜籽油、花生油、米糠油、芝麻油、棕櫚 仁油、棕櫚油、荷荷芭油、澳洲堅果油、乳木果油、芒果脂、燭果油、鯨油、 沙丁魚油、烏賊油等的天然油脂，人造奶油等的合成油脂，也可使用以上述橄 欖油等中含有的二酰基甘油為主要成分的油脂、以棕櫚仁油等中含有的中鏈脂 肪酸甘油三酸酯(MCT)為主要成分的油脂等，但其中，因大量含有飽和脂肪酸 的油脂難于被氧化，所以優(yōu)選。且不僅可使用常溫下為液狀的油脂，還可使用 與半固體狀或固體狀的豬油、牛油、加氫魚油、人造奶油、起酥油等混合的油 脂。木脂素類化合物及大量含有木脂素類化合物的提取物在油脂中溶解時，也 可根據(jù)需要進行加熱溶解等。
本說明書中的"水相"，除特殊情況外，指o/w/o型乳液組合物中的水相。 "水相"，只要是水系溶劑無特別限定，除水或水溶液以外，還可例舉以果汁 飲料、碳酸飲料、牛乳、豆乳、谷物飲料、咖啡、綠茶等的一般飲料及酒精飲 料為主的各種水性飲料。
且為提高內(nèi)油相的含有率，也可在水相中添加助溶劑。所涉及的助溶劑， 例如可例舉丙二醇、乙醇、單糖類及二糖類及糖醇(例如山梨糖醇、木糖醇及 甘露醇)。
本說明書中的"油相"，除特殊情況外，指0/W/0型乳液組合物中最外側 的油相。油相， 一般也表示為"最外油相"。本發(fā)明中的"油相"是可在食品 或醫(yī)藥品中添加的油脂，只要是可將乳化了內(nèi)油相的水相(0/W型乳液)乳化的 油脂，無特別限制，均可使用，可1種單獨使用或多種混合使用。具體地說， 可使用上述"內(nèi)油相"的說明中所述的各種油脂。
作為本發(fā)明的含有木脂素類化合物的0/W/0型乳液組合物的制造法，只要
木脂素類化合物可在內(nèi)油相中溶解，可使用公知的任何方法，但優(yōu)選基于兩階段乳化法的方法。在作為油相的油脂中，通過將預先用常法制備的內(nèi)相o/w型
乳液再乳化，可得到o/w/o型乳液組合物。以下，對通過此兩階段乳化法的0/W/0
型乳液組合物的制造法進行說明。
制備本發(fā)明的含有木脂素類化合物的o/w/o型乳液組合物時，首先進行第 一階段的乳化處理，制備o/w型乳液。
在進行第一階段的乳化處理時，首先，制備木脂素類化合物的溶解液(內(nèi) 油相)。如上所述，可直接使用芝麻油等的溶解液，也可通過將粉末狀的木脂素 類化合物在作為溶劑的油脂中添加混合，優(yōu)選在加溫下攪拌以充分溶解來進行 制備。木脂素類化合物與油脂之間的配合比，考慮到因木脂素類化合物的種類 及作為溶劑的油脂的不同而不同，可進行適當設定，但一般來說，木脂素類化
合物與油脂之間的配合比(重量比)，只要木脂素類化合物溶劑=1: 15 2000、 優(yōu)選l: 15 100的程度，木脂素類化合物即可充分溶解。
通過將此內(nèi)油相和水相混合進行均質(zhì)化并使其乳化，即得到油滴分散在水 中的0/W型乳液。
內(nèi)油相和水相之間的混合比率(重量比)可適當設定，例如，可為內(nèi)油相
水相=100: 2 200，也可為100: 5 50。
用于均質(zhì)化的物理方法無任何限制，例如，可例舉使用多孔質(zhì)膜的膜乳化 法，使用攪拌乳化機、高壓均質(zhì)機、超聲波乳化機、UltraMixer、膠體磨等裝 置的攪拌法。另外，根據(jù)本發(fā)明者的研究，在未形成均質(zhì)的乳液，即乳液中油 滴的分散穩(wěn)定性不良時，有時AUC也降低。為得到均質(zhì)的0/W型乳液，可在水 相及/或內(nèi)油相中添加表面活性劑。表面活性劑，可根據(jù)木脂素類化合物及油脂 的種類、量適當選擇，例如，可單獨或混合使用甘油脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯、 乙酸異丁酸蔗糖酯、失水山梨醇脂肪酸酯、丙二醇脂肪酸酯、硬脂酰乳酸鈣、 大豆皂苷、卵磷脂、小麥蛋白分解物、明膠、羧甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、 阿拉伯膠、黃原膠、阿拉伯半乳聚糖、糊精、酪蛋白、酪蛋白鈉等。發(fā)明者證 實了使用甘油脂肪酸酯、酶解大豆卵磷脂可得到0/W/0型乳液組合物，特別是 使用單月桂酸十甘油酯時，可得到均質(zhì)的0/W/0型乳液組合物。[參照實施例l]
10內(nèi)油相的油滴的平均粒徑，只要在口服給藥時，與將一種以上等量的木脂 素類化合物溶解在與內(nèi)油相相同的油脂中口服給藥時相比，可有效地使木脂素
類化合物以大的AUC進行吸收，無特別限定，但根據(jù)與本發(fā)明者的吸收速度有 關的研究，在具有100nm、 130nm、 250nm平均粒徑的任一乳液中，均可觀察到 良好的吸收。另外，在根據(jù)兩階段乳化法進行0/W/0型乳液組合物的制備時， 預先使最初的乳化系統(tǒng)充分穩(wěn)定非常重要。因此，最初的乳化系統(tǒng)中內(nèi)油相的 油滴的平均粒徑可為1000nm以下。而且，制備時，優(yōu)選使內(nèi)油相的油滴的平均 粒徑小于再乳化時使用的多孔質(zhì)膜的孔徑。并且已知，通常情況下隨粒徑減少 表面積增大，所以靜電穩(wěn)定性增加，分散穩(wěn)定性提高。因此，為得到均質(zhì)的乳 液，使作為分散相的油滴的粒徑減小(微細化)也很有效。具體地說，可使油 滴的平均粒徑為1000nm以下，優(yōu)選500nm以下，進一步優(yōu)選300nm以下。為300nm 以下時，即使在室溫下放置2天油相也不產(chǎn)生分離，顯示出良好的分散穩(wěn)定性。
第一階段的0/W型乳液，可通過混合內(nèi)油相和水相進行均質(zhì)化來制造，但 在制造含有上述油滴的平均粒徑為1000nm以下，優(yōu)選500nm以下，進一步優(yōu)選 300nm以下的經(jīng)微細化的油滴的乳液時，可通過如下手段來制造，使用具有均一 孔徑的多孔質(zhì)膜的膜乳化法或將油相和水相混合進行預備乳化后，進一步進行 乳化使油滴的平均粒徑為上述大小(本乳化)的方法。
膜乳化法，是指作為分散相(內(nèi)油相)的液體(a)和作為連續(xù)相(水相) 的液體(b)存在于多孔質(zhì)膜兩側，通過用氮氣等將液體(a)透過膜壓入液體 (b)內(nèi)的方法來制備的方法。多孔質(zhì)膜，只要具有均一孔徑[在此，"均一孔徑"， 是指多孔膜體的孔徑在相對累積細孔分布曲線中，細孔容積占全體的10%時的孔 徑(4)10)除以細孔容積占全體的90%時的孔徑(4)90)的值為1 1.5左右的范圍 內(nèi)時的孔徑。]，可為無機質(zhì)或有機質(zhì)的任一種，例如，可使用日本特公昭 62-25618號公報中公開的CaO-B203Si02-A1203系多孔質(zhì)玻璃、日本特開昭 61-40841號公報(美國專利第4， 657， 875號說明書)中公開的 CaO-B203-Si02-A1A-Na20系多孔質(zhì)玻璃及Ca0-B203-Si02-Al203-Na20-MgO系多孔質(zhì) 玻璃、日本特開2002-302414號公報中公開的微孔玻璃(SPG膜； CaO-Al203-B203-Si02系多孔質(zhì)玻璃膜)等。因膜乳化法可根據(jù)用途設計粒子的大小，所以，是可優(yōu)選用于本發(fā)明的制造法。且在膜乳化法中，將圓筒狀的多孔 質(zhì)玻璃膜作為多孔質(zhì)膜使用時，也可通過使液體(b)在圓筒的內(nèi)側循環(huán)，通過
用氮氣等從外側將液體(a)壓入的方法，制備0/W型乳液。
細孔的平均徑，可根據(jù)欲得到的0/W乳液粒子的平均粒徑適當選擇，但通 常為0. 1 10tim左右，優(yōu)選O. 1 5um左右，進一步優(yōu)選0. 1 0. 3 u m左右。 并且通常認為，生成的乳液的粒徑為膜的細孔徑X3. 25。
多孔質(zhì)膜的膜厚無特別限定，但通常為0.1 1.5mm左右。膜乳化法中，壓 入液體(a)時的壓力，可根據(jù)分散相(內(nèi)油相)的種類、連續(xù)相(水相)的種 類、表面活性劑的種類及濃度等適當設定，通常為20kPa 5MPa左右。
膜乳化，可優(yōu)選在加熱下進行。例如，在本發(fā)明中，準備孔徑為約0.1 0.2i:m的SPG膜，在其一側加熱水相成分的同時使其流動，同時將含有木脂素 類化合物的油相成分(內(nèi)油相)加熱到約80 90°C，對此加熱油相成分施加壓 力，同時通過壓入在約80 9(TC下加熱的SPG膜中，可得到粒徑約為0.3 0.8um的0/W (水包油型)乳液。此外，含有此木脂素類的乳液，是不發(fā)生乳 液粒子結晶化或粒子之間結合粒徑發(fā)生變化等的經(jīng)時變化的經(jīng)時穩(wěn)定性極優(yōu)異 的乳液。
在攪拌法中，只要是可高速攪拌的裝置，無特別限制，均可使用，具體地 說，可例舉與上述均質(zhì)化處理同樣的攪拌乳化機、高壓均質(zhì)機、超聲波乳化機、 UltraMixer、膠體磨等的裝置。攪拌可根據(jù)裝置的種類、形狀、攪拌的對象物 (油相和水相的混合物)的性質(zhì)、量適當設定，但通常為5000 30000rpm，優(yōu) 選6000 20000rpm， 10 30分鐘左右。
此外，在利用高壓均質(zhì)機的方法中，例如，可使用可用9.8MPa(100kgf/cm2) 以上的高壓進行均質(zhì)的均質(zhì)機[例如，微射流均質(zhì)機(Microfluidizer)(商品 名)Mizuho工業(yè)公司制，Gaulin均質(zhì)器(商品名)等]進行。使用這些裝置制 備0/W型乳液時的條件可適當選定，例如，用9.8 245MPa(100 2500kgf/cm2) 左右、優(yōu)選49 196MPa(500 2000kgf/cm2)左右的壓力，在室溫下或根據(jù)需要 加熱的同時制備。在制備本發(fā)明的含有木脂素類化合物的o/w/o型乳液組合物時，首先，在 第一階段的乳化處理之后接著進行第二階段的乳化處理，以制備o/w/o型乳液。
在第二階段的乳化處理中，通過混合第一階段中得到的o/w型乳液和油相 并進行均質(zhì)化來使其乳化，得到油中分散有o/w型乳液滴的o/w/o型乳液組合物。
0/W型乳液和油相之間的混合比率(重量比)可適當設定，例如，可為o/w
型乳液:油相=跳10 1000，還可為100: 25 500。
作為用于均質(zhì)化的物理方法，無任何限制，例如，除通過攪拌乳化機、高 壓均質(zhì)機、超聲波乳化機、UltraMixer、膠體磨等裝置等的攪拌法以外，還可 在作為連續(xù)相(外油相)的液體(c)中通過用膜乳化法乳化來制備0/W/0型乳 液。在此，在作為外油相的液體(c)中，除油脂以外，還可添加木脂素類化合 物、其他的添加劑等。在膜乳化法中，通過將預先制備的0/W型乳液透過如上 所述的多孔質(zhì)膜壓入到液體(c)內(nèi)，可得到乳液粒子的粒徑均勻的0/W/0型乳 液。此時，可使用如上所述具有均一孔徑的多孔質(zhì)膜，但作為膜使用多孔質(zhì)玻 璃膜時，因多孔質(zhì)玻璃膜本來是親水性的，所以，在制備0/W/0型乳液時，通 常通過進行各種表面處理，使其表面變?yōu)槭杷远褂谩?br> 細孔的平均徑，可根據(jù)欲得到的0/W/0型乳液粒子的平均粒徑適當選擇， 但通常為0. 15 30um左右，優(yōu)選O. 3 5um左右，進一步優(yōu)選0. 5 3 u m左 右。此外，通?？烧J為生成的乳液的粒徑為膜的細孔徑X3.25。 [其他添加劑等]
在本發(fā)明的0/W/0型乳液組合物中，除上述木脂素類化合物、油脂、水系 溶劑、表面活性劑以外，為防止氧化，還可混合維生素C、維生素E、 d—a — 生育酚、鞣花酸、異抗壞血酸、異抗壞血酸鈉、乙二胺四乙酸二鈉、二丁基羥 基甲苯、L一抗壞血酸鈉、pherol等的抗氧化劑。而且，根據(jù)需要，還可添加甜 味料、調(diào)味料、酸味料、pH調(diào)節(jié)劑等。
在本發(fā)明的0/W/0型乳液組合物中，通過在油相中使用高融點的油脂，可 得到保型性優(yōu)異的組合物，如在內(nèi)油相中使用高融點的油，即可得到內(nèi)油相的 味道■臭味等得到抑制的組合物。用途
通過本發(fā)明，提高生物體內(nèi)木脂素類化合物的吸收性。因此，本發(fā)明的0/W/0 型乳液組合物，可以如下形態(tài)使用，其為木脂素類吸收量的提高可產(chǎn)生期望結 果的各種食品組合物或口服用醫(yī)藥組合物的形態(tài)。本發(fā)明的食品組合物包括飲 料的形態(tài)。本發(fā)明的食品組合物可為營養(yǎng)功能食品、特定保健用食品、保健食 品、營養(yǎng)輔助食品、保健營養(yǎng)劑、軟膠囊等。
本發(fā)明的0/W/0型乳液組合物在食品組合物或口服用醫(yī)藥組合物中的配合
比率(重量比)，為使木脂素類化合物以目的濃度"量含有，可適當設定，例如，
為1 100重量%左右。此外，在本發(fā)明的食品組合物或口服醫(yī)藥組合物中，還
可使用允許的各種添加劑，例如，賦形劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑、包衣劑、 懸浮劑、乳化劑、穩(wěn)定劑、保存劑、緩沖劑。
本發(fā)明的醫(yī)藥組合物中，作為有效成分的木脂素類化合物的量、給藥期間、 間隔，可根據(jù)目的、癥狀、對象者的年齡、體重等適當設定。
本發(fā)明的食品組合物或口服醫(yī)藥組合物的給藥對象，為人或動物。動物指 農(nóng)場動物、寵物及實驗動物，具體地說，農(nóng)場動物指牛、馬、豬、山羊、綿羊 等的家畜，雞、鴨、鵪鶉、火雞、鴕鳥等的家禽，鯽魚、鯽的幼魚、真鯛、竹
莢魚、鯉魚、虹鱒、鰻魚等的魚類等需要產(chǎn)業(yè)化詞養(yǎng)的動物；寵物指狗、貓、 狨猴、小鳥、倉鼠、金魚等所謂的觀賞動物，稱為伴侶動物；實驗動物指大鼠、 豚鼠、比格犬、迷你豬、獼猴、食蟹猴等用于醫(yī)學、生物學、農(nóng)學、藥學等領 域研究的動物。 評價方法
將木脂素類化合物根據(jù)本發(fā)明口服給藥時，與將木脂素類化合物單純?nèi)芙?在油脂中以同樣的條件給藥相比，可看出AUC的提高。此種體內(nèi)吸收性的提高， 可通過經(jīng)時測定血液中的木脂素類化合物濃度來進行評價。
血液中的木脂素類化合物濃度，可通過如下方法求出，采集血液通過離心 分離操作得到血漿樣品，添加內(nèi)部標準(例如，funakoshi株式會社制的桉素)， 用固相提取用聚合物填充劑(例如，Waters Corporation制的Oasis HLB)進 行固相提取，將提取液減壓濃縮后用甲醇懸浮，過濾器過濾后用LC一MS/MS測
14定，從而進行木脂素類化合物的定量。
使用多個木脂素類化合物時，可將總的血藥濃度相對于時間繪圖，求出AUC 來進行評價。與AUC同時，還可求出Cmax及Tmax。
此外，本說明書中的平均粒徑，除特殊情況外，指中值粒徑(與篩子上分 布曲線的50%對應的粒徑。也稱中位徑或50%粒徑。)，可用光散射式粒度分布測 定法測定。也可用動態(tài)光散射式粒度分布測定法測定。
實施例
以下舉出實施例及比較例，具體說明本發(fā)明，但本發(fā)明不限于以下實施例。 實施例1
0/W/0型乳液組合物的制造
將O. 1362g芝麻素(竹本油脂制；芝麻素表芝麻素=51. 1: 48.2)懸浮于 100mL加熱到8(TC的橄欖油中，通過20分鐘攪拌使芝麻素均勻溶解。其后，將 12mL溶解有芝麻素的橄欖油(分散相)在20mL溶解有1. Owty。表面活性劑的純 水(連續(xù)相)中，使用親水性Shirasu多孔質(zhì)玻璃(SPG)膜(SPG TECHNO株式 會社制，細孔徑0.2nm)，通過膜乳化法連續(xù)乳化，得到含有芝麻素的水溶性乳 化組合物(0/W乳液)。此時，擠出壓力為0.6MPa。進而將15mL所得到的含有 芝麻素的水溶性乳化組合物(分散相)在15mL溶解有1. Owty。聚蓖麻酸六甘油酯 [SunSoft No. 818SK;太陽化學(株)制]的橄欖油(連續(xù)相)中，使用疏水性 SPG膜(SPG TECHNO公司制，細孔徑1.3um)，通過膜乳化法連續(xù)乳化，得到 30mL含有芝麻素的油溶性乳化組合物。此時，擠出壓力為0.4MPa。且此處使用 的SPG(Shirasu Porous Glass),是用Shirasu火山灰制造的多孔質(zhì)玻璃，由 交織著細孔的獨特的多孔結構構成。其細孔徑均勻，且具有可控制其細孔徑的 特征。此外，用于乳化分散相的表面活性劑的種類，為單月桂酸十甘油酯 (SunSoft Q-12S)、單肉豆蔻酸十甘油酯(SunSoft Q-14S)、單油酸五甘油酯 (SunSoft A-171E)、酶解大豆卵磷脂(Sunlecithin A-1)的4種，均可從太 陽化學株式會社獲得。
將如此得到的含有芝麻素的油溶性乳化組合物的均質(zhì)性用顯微鏡確認的結果，使用任何表面活性劑時，也均可確認出0/W/0型乳液的形成。特別是作為
表面活性劑使用單月桂酸十甘油酯時，可得到粒徑小、均勻性高的o/w/o型乳 液。
實施例2
0/W/0型乳液的芝麻素體內(nèi)吸收性試驗
實施例1中制造的0/W/0型乳液中，使用以單月桂酸十甘油酯為表面活性 劑制造的含有芝麻素的o/w/o型乳液，進行芝麻素的體內(nèi)吸收性試驗(試驗試樣)。
作為比較例，使用將0. lg芝麻素(竹本油脂制)懸浮于99. 9g加熱到80 °。的橄欖油中，攪拌20分鐘，使芝麻素均勻溶解的溶解液(比較試樣)。
從曰本Charles River公司購入SD (IGS)系雄性大鼠(9周齡)，在1星 期試驗環(huán)境中馴化后，將顯示發(fā)育順利的動物用于試驗。將斷食一夜的大鼠分 成2組，每組由6只組成，將試驗試樣的含有微細化木脂素類的水溶液或比較 試樣的芝麻素的橄欖溶解油脂，按9mg/10ml/kg的用量使用探針(sonde) 口服 給藥。給藥開始后，在l、 3、 5、 7、 9小時后及24小時后從尾靜脈用肝素采血 管采血，通過離心分離操作(8， 000rpm、 10min)得到血漿樣品。添加內(nèi)部標 準，用Oasis HLB固相提取，減壓濃縮提取液后，用甲醇懸浮，過濾器過濾， 用LC一MS/MS測定，從而對芝麻素及作為其異構體的表芝麻素進行定量。芝麻 素及表芝麻素量，根據(jù)常法，通過芝麻素及表芝麻素的峰面積與作為內(nèi)部標準 使用的桉素(funakoshi株式會社)的峰面積的比來確定。LC一MS/MS分析條件 如下所示。 (HPLC)
色譜柱Develosil C30-UG-5 (5um、 2.0 O X 50 mm、野村化學公司制)
流動相A;蒸餾水、B;甲醇、D; 100 mM醋酸銨水溶液
流速 0.25 mL/min
梯度為B液55。/c)、 D液10。/。2分鐘，而后3分鐘8液55% 60%、0液10%、 2分鐘B液60% 85%、 D液10%的線性梯度 (MS/MS)
16測定模式選擇反應監(jiān)控
檢測芝麻素(保留時間約5.0分鐘)；母離子m/z二372 ([M+NH4]+)、生成 離子m/z=233
:表芝麻素(保留時間約5.4分鐘)；母離子m/z二372 ([M+NH4] + )、生 成離子m/z=233
:桉素(保留時間約2.6分鐘)；母離子m/z二369([M+NH4]+)、生成離 子m/z=298
離子化法ESI法
圖1表示血液中的芝麻素濃度及表芝麻素濃度的總和(芝麻素+表芝麻素 濃度)的經(jīng)時變化。血液中的芝麻素+表芝麻素濃度的最大值(Cmax)，比較試 樣攝取組為20 ng/mL，試驗試樣攝取組為35 ng/mL。達到最大值(Cmax)所需 時間(Tmax)，試驗試樣攝取組、比較試樣攝取組均為約5小時。而且，如從圖 1求出體內(nèi)吸收量(AUC)，試驗試樣攝取組相對于比較試樣攝取組升高約1. 6倍。
以上表明，試驗試樣(本發(fā)明的組合物)攝取組中，芝麻素的吸收性提高， 可高效攝取芝麻素。 [參照例吸收性試驗一l]
試樣
將lg芝麻素(竹本油脂制；芝麻素表芝麻素=51. 1: 48.2)懸浮于50g 加熱到8(TC的橄欖油中，攪拌20分鐘，使芝麻素均勻溶解。將此溶液冷卻到約 70°C，攪拌注入到將25g酶解卵磷脂(SunlecithinVA—l;太陽化學株式會社 制；有效成分33.3%;原料大豆)在加溫到7(TC的lOOOmL水中混合溶解后的 水溶液中，用DistroMix (日本ATEC株式會社制)6000rpm、乳化處理15分鐘。 進而將此乳化液在50 60'C下保溫，用高速攪拌乳化機(M Technique株式會 社制clair mix double motion),以轉子部20000rpm、篩網(wǎng)部12500rpm處理 40分鐘，得到含有芝麻素的水溶性乳化組合物(含有芝麻素的水包油型乳液)
(試樣1)。且所得到的含有芝麻素的水包油型乳液的平均粒徑通過堀場制作所 株式會社制的動態(tài)光散射式粒度分布測定裝置LB—550測定，其結果為97. 8nm。
作為比較例，使用將50mg芝麻素(竹本油脂制；芝麻素表芝麻素=51.1:48.2)懸浮于50mL加熱到8(TC的橄欖油中，攪拌20分鐘，使芝麻素均勻溶解 的溶解液(比較試樣)。
芝麻素體內(nèi)吸收性試驗
從日本Charles River公司購入SD (IGS)系雄性大鼠(9周齡)，在1星 期試驗環(huán)境中馴化后，將顯示發(fā)育順利的動物用于試驗。將斷食一夜的大鼠分 成2組，每組由4只組成，將試樣1的含有芝麻素的水包油型乳液或比較試樣 的芝麻素的橄欖溶解油脂按10mg/10mL/kg的用量使用探針(sonde) 口服給藥。 給藥開始后，在l、 3、 5、 7、 9小時后及25小時后從尾靜脈用肝素采血管采血， 通過離心分離操作(8000rpm、 10min)得到血漿樣品。添加內(nèi)部標準用Oasis HLB 固相提取，減壓濃縮提取液后用甲醇懸浮，過濾器過濾后用LC一MS/MS測定， 從而對芝麻素及其異構體表芝麻素進行定量。芝麻素及表芝麻素量，根據(jù)常法， 通過芝麻素及表芝麻素的峰面積與作為內(nèi)部標準使用的桉素(funakoshi株式會 社)的峰面積的比來確定。LC一MS/MS分析條件如下所示 (HPLC)
色譜柱Develosil C30-UG-5 (5um、 2.0OX50mm、野村化學公司制)
流動相A;蒸餾水、B;甲醇、D; 100mM醋酸銨水溶液
流速 0. 25mL/min
梯度為B液55%、 D液10%2分鐘，而后3分鐘B液55% 60%、 D液10%、 2分鐘B液60% 85%、 D液10%的線性梯度 (MS/MS) 測定模式選擇反應監(jiān)控
檢測芝麻素(保留時間約5.2分鐘)；母離子m/z^372 ([M+NH4] + )、生成 離子m/z=233
:表芝麻素(保留時間約5.6分鐘)；母離子m/z二372 ([M+NH4] + )、生 成離子m/z=233
:桉素(保留時間約2.8分鐘)；母離子m/z^404([M+NH4]+)、生成離 子m/z=249
離子化法ESI法圖3表示血液中的芝麻素濃度及表芝麻素濃度的總和(芝麻素+表芝麻素
濃度)的經(jīng)時變化。血液中的芝麻素+表芝麻素濃度的最大值(Cmax)，試樣1 攝取組中為48ng/mL，比較試樣攝取組為20ng/mL。且達到最大值(Cmax)所需 時間(Tmax)，試樣l攝取組為約l小時，比較試樣攝取組為約9小時。進而從 圖3中求出體內(nèi)吸收量(AUC)時，吸收量無差異。 實施例3 處方例 (制劑例l)膠囊劑
明膠 60.0%
甘油 30.0%
對羥基苯甲酸甲酯 0. 15%
對羥基苯甲酸丙酯 0.51%
水 適量
除將1.362g芝麻素(竹本油脂制；芝麻素表芝麻素=51. 1: 48.2)懸浮 于100mL加熱到8(TC的橄欖油中以外，其他均根據(jù)實施例1中記載的試樣制備 方法，得到30mL含有1°/。芝麻素的油溶性乳化組合物(0/W/0乳液)。根據(jù)常法 將其填充在由上述成分組成的軟膠囊劑的囊皮中，得到1粒250mg的軟膠囊。 如此得到的軟膠囊中，每粒含有2.5mg芝麻素。 (制劑例2)沙拉醬
蛋黃 10個
鹽 16 g
芥末 25 g
胡椒 3 g
醋 150 cc
將上述成分充分攪拌后，將1000cc含有0. 1%芝麻素的油溶性乳化組合物 (0/W/0乳液)及500cc食用食物油在水相中攪拌滴下，進一步使用攪拌機均質(zhì) 化，得到含有芝麻素的沙拉醬。 (制劑例3)黃油
19含有1%芝麻素的油溶性乳化組合物(0/W/0乳液) 5 g
黃油脂肪 95 g
醋酸生育酚 1. 2 g
在利用黃油制造工序中的攪拌操作(churning)除去酪乳后的95g黃油脂 肪中，加入5g含有1%芝麻素的油溶性乳化組合物(0/W/0乳液)，再加入1. 2g 醋酸生育酚，進行壓煉操作(Working),得到組織均勻的含有本發(fā)明組合物的黃油。
(制劑例4)人造奶油
植物油脂(大豆油的硬化油、棉籽油的混合物) 72重量％
含有 1%芝麻素的油溶性乳化組合物(0/W/0乳液) 10重量％
甘油脂肪酸酯 0. 2重量％
脫脂奶粉 0. 5重量%
水 17重量％
食鹽 0. 8重量％
在融化后的植物油脂中，添加含有1%芝麻素的油溶性乳化組合物(0/W/0 乳液)和甘油脂肪酸酯并攪拌后，緩緩加入水中溶解有脫脂奶粉和食鹽的溶液， 在50 6(TC下加溫，同時攪拌混合。進行急冷可塑化，從而得到含有本發(fā)明組 合物的人造奶油。
權利要求
1. O/W/O型乳液組合物，其中，內(nèi)油相中溶解有一種以上木脂素類化合物。
2. 權利要求l中所述的0/W/0型乳液組合物，其中，木脂素類化合物是芝 麻素及/或表芝麻素。
3. 權利要求l或2中所述的0/W/0型乳液組合物，其中，在內(nèi)油相、水相及/或外油相的至少一個中，含有乳化上有效量的表面活性劑。
4. 權利要求1 3中任一項所述的0/W/0型乳液組合物，其中，內(nèi)油相的 平均粒徑為1000nm以下(優(yōu)選500nm以下，進一步優(yōu)選300nm以下)。
5. 食品組合物或口服用醫(yī)藥組合物，其中，含有權利要求1 4中任一項 所述的水包油型乳液。
6. 0/W/0型乳液組合物，其是使含有一種以上木脂素類化合物的內(nèi)油相在 水相中乳化后的0/W型乳液組合物進一步在外油相中乳化的0/W/0型乳液組合 物。
7. 0/W/0型乳液組合物，其是在內(nèi)油相中溶解有一種以上臨床上有效量的 木脂素類化合物且可含有在乳化上有效量的表面活性劑的0/W/0型乳液組合物， 在口服給藥時，與將一種以上等量的木脂素類化合物溶解在與內(nèi)油相相同的油 脂中后進行口服給藥時相比，可使木脂素類化合物以更大的血藥濃度一時間曲 線下面積(AUC)進行吸收。
8.含有木脂素類化合物的組合物的制造方法，其包括以下工序-1) 將一種以上木脂素類化合物溶解在油脂中，得到木脂素類化合物溶解液 的工序；2) 使所述木脂素類化合物溶解液在水相中乳化，形成0/W型乳液的工序；及3) 使所述0/W型乳液進一步在油相中乳化，得到0/W/0型乳液的工序。
9. 權利要求9中所述的制造方法，其中，木脂素類化合物是芝麻素及/或 表芝麻素。
10. 提高木脂素類化合物的體內(nèi)吸收量的方法，其包括以下工序1) 使一種以上木脂素類化合物溶解在油脂中，得到木脂素類化合物溶解液的工序；2) 使所述木脂素類化合物溶解液在水相中乳化，形成0/W型乳液的工序；及3) 使所述0/W型乳液進一步在油相中乳化，得到0/W/0型乳液的工序。
11.權利要求10中所述的制造方法，其中，木脂素類化合物是芝麻素及/或表芝麻素。
全文摘要
本發(fā)明公開了以下內(nèi)容在油相中溶解有一種以上木脂素類化合物的O/W/O型乳液組合物、及該種組合物可通過包括以下工序的制造方法制造1)將一種以上木脂素類化合物溶解在油脂中，得到木脂素類化合物溶解液的工序；2)使上述木脂素類化合物溶解液在水相中乳化，形成O/W型乳液的工序；及3)使上述O/W型乳液進一步在油相中乳化，得到O/W/O型乳液的工序。該組合物是含有提高了木脂素類化合物的體內(nèi)吸收量的木脂素類化合物的組合物。
文檔編號A23D7/00GK101511356SQ200780033650
公開日2009年8月19日 申請日期2007年10月2日 優(yōu)先權日2006年10月4日
發(fā)明者中原光一, 冨森菜美乃, 小野佳子, 西?？『?申請人:三得利株式會社