專利名稱：：改變水稻的脂肪酸組成的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及具有改變的油酸、棕櫚酸和/或亞油酸水平的米糠油(riceoil)、米糠(ricebran)和水稻種子。本發(fā)明還提供了遺傳修飾水稻植物的方法，由此從中產(chǎn)生的米糠油、米糠和水稻種子具有改變水平的油酸、棕櫚酸和/或亞油酸。
背景技術(shù)：
：植物油是人體膳食脂肪的重要來源，在發(fā)達(dá)國家占大約25%的熱量攝入(Brounetal.,1999)。目前世界植物油的產(chǎn)量為大約1億1千萬噸/年，其中86%用于人類消耗。幾乎所有這些油均得自油料種子作物如大豆、油菜、向日葵、棉籽和落花生，或者得自種植園樹木(plantationtree)如棕櫚樹、橄欖樹和椰子樹(Gunstone，2001;OilWorldAnnual,2004)。關(guān)于食用油的各個脂肪酸成分對于人體健康各個方面的影響的日益增長的科學(xué)了解和社會共識推動了具有改良的營養(yǎng)價值而同時保留各種食物應(yīng)用所需的功能性的修飾的植物油的開發(fā)。這些修飾需要關(guān)于植物脂肪酸合成的代謝途徑及編碼這些途徑的酶的基因的知識(Liuetal.,2002a;ThelenandOhlrogge，2002)。對于各種脂肪和油的營養(yǎng)作用、特別是脂肪和油的組成成分對于心血管疾病、癌癥和多種炎癥性疾病的影響給予了很大關(guān)注。飲食中高水平的膽固醇和飽和脂肪酸被認(rèn)為增加心臟病的風(fēng)險，這個結(jié)果已經(jīng)導(dǎo)致減少攝取膽固醇豐富的飽和動物脂肪而贊成攝取無膽固醇的不飽和植物油的營養(yǎng)學(xué)建議(Liuetal.，2002a)。雖然經(jīng)膳食攝取動物脂肪中存在的膽固醇可以明顯增加血液總膽固醇水平，但是也發(fā)現(xiàn)包含所述脂肪和油的脂肪酸自身對于血清膽固醇水平即可具有顯著作用。特別感興趣的是膳食脂肪酸對于血液中不希望的低密度脂蛋白(LDL)和希望的高密度脂蛋白(HDL)形式膽固醇的作用。通常，飽和脂肪酸、特別是在植物油中存在的主要飽和物豆蔻酸(14:0)和棕櫚酸(16:0)具有增加血清LDL-膽固醇水平及隨后增加心血管疾病風(fēng)險的不希望的性li質(zhì)(Zocketal.，1994;Huetal.,1997)。然而，已經(jīng)充分確定在植物油中存在的另一種主要飽和物，硬脂酸(18:0)不增加LDL-膽固醇水平且也許實際上可降低總膽固醇水平(BonanomeandGrundy，1988;Doughertyetal.，1995)。因此，通常認(rèn)為硬脂酸對于心血管疾病的風(fēng)險至少是中性的(Tholstrup，etal.，1994)。另一方面，不飽和脂肪酸如單不飽和油酸(18:1)和多不飽和亞油酸(18:2)以及ot-亞麻酸(ALA，18:3)對于降低LDL-膽固醇有益處(MensinkandKatan，1989;RocheandGibney，2000)，因此降低了心血管疾病的風(fēng)險。盡管在營養(yǎng)方面是需要的，但是高不飽和油在用于許多食品應(yīng)用中太不穩(wěn)定，特別是在暴露于長時間高溫和氧化條件下的商業(yè)性深度油炸應(yīng)用方面太不穩(wěn)定。在這種條件下，不飽和油中存在的許多碳雙鍵的氧化性斷裂導(dǎo)致短鏈醛、氫過氧化物和酮衍生物的產(chǎn)生，產(chǎn)生不合乎需要的味道且由于極性化合物水平增加而降低油炸性能(Changetal.，1978;Williamsetal.,1999)。油加工商和食品生產(chǎn)商傳統(tǒng)上依賴于氫化以降低油中不飽和脂肪酸的水平，從而增加其在油炸應(yīng)用中的氧化穩(wěn)定性且還提供了固體脂肪以用于人造黃油和起酥油中。氫化作用是一個化學(xué)過程，通過將碳雙鍵轉(zhuǎn)變?yōu)樘紗捂I而降低了油的不飽和程度。完全氫化作用產(chǎn)生完全飽和脂肪。然而，部分氫化過程導(dǎo)致飽和脂肪酸和單不飽和脂肪酸的水平均增加。在部分氫化過程中形成的一些單不飽和物是反式異構(gòu)體形式(如反油酸，油酸的反式異構(gòu)體)，而不是天然發(fā)生的順式異構(gòu)體(Sebedioetal.,1994;FernandezSanJuan,1995)。與順式不飽和脂肪酸相反，現(xiàn)在己知反式脂肪酸與棕櫚酸在增加血清LDL膽固醇水平(MensinkandKatan,1990;NoakesandClifton,1998)和降低血清HDL膽固醇(ZockandKatan，1992)方面具有同樣效力，并因此導(dǎo)致心血管疾病風(fēng)險增加(AscherioandWillett,1997)。由于對于反式脂肪酸的反營養(yǎng)作用的了解日益增多，現(xiàn)在越來越多地傾向于在食品業(yè)中不使用氫化油，而贊成使用既具有營養(yǎng)益處且無需氫化而可提供需要的功能性的脂肪和油，特別是富含油酸(在需要液態(tài)油的情況中)或者硬脂酸(在優(yōu)選固體或半固體脂肪的情況中)的那些脂肪和油。植物油幾乎完全由三酰甘油(TAG)分子組成，所述分子由被酯化為甘油主鏈的三個脂肪酸(酰基)鏈組成且沉積于稱作油質(zhì)體的特定油體結(jié)構(gòu)中(StymneandStobart,1987)。這些貯存脂質(zhì)作為幼苗發(fā)芽的能量來源，直至12其能進(jìn)行光合作用。常用的可食用植物油通常由5種主要脂肪酸組成-飽和棕櫚酸和硬脂酸、單不飽和油酸和多不飽和亞油酸以及a-亞麻酸。除了脂肪酸之外，植物油也含有一些重要的微量成分如維生素E、植物固醇、萜類和混合的類異戊二烯。對這些微量成分越來越感興趣，因為一些這樣的成分已經(jīng)示出對于皮膚健康、衰老、視力和血液膽固醇發(fā)揮有益作用或者防止乳腺癌或者心血管疾病(Theriaultetal.，1999;MoghadasianandFrohlich，1999)。狎柳微斷〃雨會成圖1示出了發(fā)育中的種子中脂肪酸合成的代謝途徑示意圖。脂肪酸合成的最初階段發(fā)生在細(xì)胞的質(zhì)體區(qū)室中，其中脂肪酸碳鏈的合成用C2分子開始并且通過逐步縮合過程延伸，從而從丙二?；?ACP貢獻(xiàn)額外的C2碳單位以延長?；湣＿@個程序的第一步包括用丙二?；?ACP縮合乙酰-CoA且通過P-酮酯酰合酶in(KASIII)催化。隨后的縮合循環(huán)由p-酮酯酰合酶I(KASI)催化，導(dǎo)致最終形成與酰基載體蛋白(ACP)連接的飽和C16?；?，棕櫚酰-ACP。質(zhì)體內(nèi)的最終延長由(3-酮酯酰合酶II(KASn)催化，形成飽和C18?；湥仓?ACP。當(dāng)去飽和發(fā)生時，第一個雙鍵通過質(zhì)體中的可溶酶即硬脂酰-ACPA9-去飽和酶被導(dǎo)入C18鏈的A9位置，產(chǎn)生單不飽和的C18:1油酰-ACP。因此合成的脂肪酸保留在質(zhì)體中以進(jìn)一步修飾并摻入質(zhì)體脂質(zhì)(plastidiclipid)中；或者通過?；?硫酯酶(acyl-thioesterases)從其ACP中釋放，產(chǎn)生游離脂肪酸，游離脂肪酸被輸出到細(xì)胞溶膠中以進(jìn)一步修飾并最終慘入TAG分子中。己經(jīng)發(fā)現(xiàn)高等植物具有至少兩種類型的?；蝓ッ钙鋵τ谟王?ACP(不飽和?；?ACP)具有底物特異性；以及F"W，其對于飽和?；?ACP具有偏愛性(Jonesetal..1995;Voelkeretal.，1996)。在離開質(zhì)體時，游離脂肪酸被酯化為輔酶A(CoA)，然后可用于轉(zhuǎn)移至三磷酸甘油(G-3-P)主鏈，形成溶血磷脂酸(LPA)、磷脂酸(PA)和磷脂酰膽堿(PC)。此外，在一些植物中，特別是蕓苔屬(Sra^/M)物種中，被酯化為CoA的油酸能被延長以形成二十碳烯酸(C20:1)和芥子酸(C22:1)。被酯化為PC的油酸可用于進(jìn)一步修飾，之后被摻入TAG中。在可食用油中，對PC的主要修飾是分別通過微粒體A12-去飽和酶(FaW)和A15-去飽和酶(Fad3)進(jìn)行相繼的油酸去飽和形成亞油酸和Ot-亞麻酸。觀存^^"激全激^^^^錄欲基因失活方法如轉(zhuǎn)錄后基因沉默方法(PTGS)己經(jīng)成功用于失活脂肪酸生物合成基因并且在油料種子作物中產(chǎn)生營養(yǎng)方面改良的植物油。例如，通過共抑制F^/2編碼的微粒體A12-去飽和酶產(chǎn)生了在其種子油中具有80n/。油酸的大豆品系(Kinney,1996)。這樣降低了A12-去飽和水平，導(dǎo)致大量油酸聚集。使用相似的方法，基于共抑制的FflW基因的沉默用于提高歐洲油菜(Smw/cawa;船)和芥菜(及中油酸水平(Stoutjesdijketal.,2000)。同樣，發(fā)現(xiàn)得自油菜籽的基因的突變體等位基因在棉籽中的轉(zhuǎn)基因表達(dá)能抑制內(nèi)源棉花F^/2基因的表達(dá)并導(dǎo)致在大約一半的原始轉(zhuǎn)基因棉花品系中油酸含量增力口(Chapmanetal.，2001)。另外，通過自身切割核酶終止的尸fl^基因在大豆中的轉(zhuǎn)基因表達(dá)能失活內(nèi)源基因，導(dǎo)致油酸水平增加(Buhretal.,2002)。RNAi-介導(dǎo)的基因沉默技術(shù)已經(jīng)用于開發(fā)具有營養(yǎng)改良的脂肪酸組成的油料種子。在棉籽中，靶向ghFad2-l(棉花i^W基因家族的種子特異性成員)的發(fā)夾RNA(hpRNA)基因沉默構(gòu)建體的轉(zhuǎn)基因表達(dá)導(dǎo)致油酸從占油中總脂肪酸的15%的正常水平增加至直至77%(Liuetal.，2002b)。這種增加的代價主要是亞油酸從60%的正常水平降低至低如4%。谷笏爐游霸嚴(yán)凝與在油料種子中進(jìn)行的脂肪酸生物合成和修飾的大量工作形成對照，在谷物中相對未進(jìn)行油修飾的研究。這可能是由于在谷粒中油的水平較低(大約1.5-6%重量)并且因此感覺到人類飲食中來自谷物的油的重要性較低的緣故。水稻(Oo;^M/z'vaL.)在發(fā)展中國家是最重要的谷物并且廣泛生長，特別是在亞洲占全世界產(chǎn)量的大約90%。世界上絕大多數(shù)水稻以"精白米"形式食用，其基本上是水稻谷粒的胚乳，通過對收獲的谷粒進(jìn)行研磨以除去外層糠皮和胚芽(胚和盾片)而產(chǎn)生。這樣做主要是因為"糙米"不好貯存，特別是在熱帶條件下不好保存。谷粒如水稻的油含量相對于油料種子非常低(4%)，在油料種子中油可以組成谷粒重量的60%(OhlroggeandJaworski,1997)。然而，脂質(zhì)可仍包含14直至37。/。干重的谷物胚(ChoudhuryandJuliano1980)。水稻谷粒中大多數(shù)脂質(zhì)含量在外層糠皮中發(fā)現(xiàn)(Resurreccionetal.，1979)，但是一些脂質(zhì)也存在于胚乳中，至少一些與淀粉相關(guān)(表1和2)。米糠油中的主要脂肪酸是棕櫚酸(16:0)(占TAG中總脂肪酸的大約20。/。)、油酸(18:1)(大約40。/。)和亞油酸(18:2)(大約34%)(Radcliffeetal,199"。在不同水稻栽培種中，例如天然的油酸水平范圍是37.9%-47.5%，亞油酸(18:2)是38.2%-30.4°/。(Tairaetal.，1988)。表1:各種植物油的選擇的脂肪酸的典型脂肪酸組成(總脂肪酸的wt%)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>雖然基因已經(jīng)示出高親和性催化游離棕櫚酸產(chǎn)生，所述棕櫚酸隨后在油料種子植物和雙子葉植物中被轉(zhuǎn)變?yōu)樽貦磅?CoA，但是沒有關(guān)于尸a^在水稻或其它谷物中作用的報道信息。表2:與淀粉相關(guān)植物脂質(zhì)的選擇的脂肪酸的脂肪酸組成(總脂肪酸的wt%)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>數(shù)據(jù)根據(jù)Morrison(1988)改編,一些脂肪酸去飽和酶已經(jīng)在水稻中鑒定，但不是F"W。Akagaietal.，(1995)公布了水稻染色體4上編碼發(fā)育中種子中硬脂酰-?；d體蛋白去飽和酶的基因的核苷酸序列。該基因產(chǎn)物參與從硬脂酰ACP產(chǎn)生油酰ACP。Kodamaetal.(1997)報道了水稻中Fa必的結(jié)構(gòu)、染色體位置和表達(dá)。通過使用大豆F"必表達(dá)技術(shù)，水稻種子油中亞麻酸(18:3)的比例增加了10倍(Anaieta1.，2003)。近年來，已經(jīng)報道了通過導(dǎo)入來自細(xì)菌的亞油酸異構(gòu)酶基因在水稻中產(chǎn)生綴合的亞油酸(Kohno-Muraseetal.，2006);據(jù)報道綴合的亞油酸具有抗癌活性。也已經(jīng)報道了使用固定的微生物酶，以相似的機(jī)理(vein)在體外修飾米糠油以摻入癸酸，這樣在一些疾病中可以改良膳食脂質(zhì)的利用(JenningsandAkoh，2000)。在玉米中，對和FA-6去飽和酶基因已經(jīng)被測序和染色體作圖(MikkilinenandRocheford，2003)。對于玉米谷粒中油酸/亞油酸比率，F(xiàn)ad2和Fad6克隆不能作圖至任何QTL。沒有關(guān)于在水稻、玉米或小麥中鑒定的其它i^W或F"W基因的公開報道。水稻在高溫下長期貯存削弱了谷粒品質(zhì)，這是由于米糠油的水解和氧化變質(zhì)所致。在收獲期間脫去外殼以產(chǎn)生糙米破壞了外層糠皮，使得油擴(kuò)散至外層。隨后內(nèi)源的和微生物脂肪酶催化三酰甘油水解為游離脂肪酸(FFA)，其隨后被氧化產(chǎn)生脫風(fēng)味(off-flavour)(Yasumatsuetal.,1966,Tsuzukietal,2004，Zhouetal，2002ChampagneandGrimm,1995)。己醛是在高溫下貯存的生的和煮熟的糙米的頂部空間中增加的主要成分(Boggsetal.，1964,Shibuyaetal.，1974,Tsugitaetal.，1983)。然而，己醛自身不是"脫"風(fēng)味的主要原因，變質(zhì)的稻米的討厭臭味和氣味可能是由于在貯存后增加的混合揮發(fā)物所致。這些揮發(fā)物包括烷醛、烯醛(alkenals)、芳族醛、酮、2-戊基呋喃、4-乙烯基苯酚等(Tsugitaetal.,1983)。然而，在貯存期間己醛水平示出與糙米中亞油酸(18:2)的氧化相關(guān)并因此是氧化變質(zhì)的良好指征(Shinetal.，1986)。己醛從亞油酸產(chǎn)生可以通過脂加氧酶(LOX)催化(StAngeloetal.,1980)。Suzukietal.(1999)鑒別了沒有Lox3的水稻變種并發(fā)現(xiàn)該突變谷粒在35'C貯存8周，在生的和煮熟的糙米谷粒的頂部空間蒸汽中均形成較少的己醛。他們還發(fā)現(xiàn)突變水稻形成較少的戊醛和戊醇。通過磨去水稻谷粒外層獲得的富有營養(yǎng)的外層米糠皮是極佳的食物源料，含有抗氧化化合物如生育三烯酚類和也是植物雌激素的Y-谷維素(RukminiandRaghuram,1991)。己經(jīng)發(fā)現(xiàn)米糠油中存在的生物活性化合物降16低人體膽固醇水平(Mostetal.，2005)。這些生物活性成分也已經(jīng)示出改善喂食高膽固醇飲食的大鼠的脂質(zhì)譜(Haeta1.，2005)。主要在米糠中發(fā)現(xiàn)的另一種重要成分是維生素A前體。然而，由于對稻米進(jìn)行研磨和食用精白米而喪失了這些營養(yǎng)和健康益處。仍需要這樣的谷物如水稻的產(chǎn)生具有對于健康有益的改良的油組成的谷粒的變種，同時在貯存時更加穩(wěn)定，使得在人膳食中可以更多地使用例如糙米。發(fā)明概述一方面，本發(fā)明提供了米糠油，其脂肪酸組成包含大于大約48%的油酸、小于大約17%的棕櫚酸、小于大約30%的亞油酸和/或其任何組合。在一個實施方案中，油酸與亞油酸的比率大于1.5:1，優(yōu)選大于2:1，更優(yōu)選大于3:1，還更優(yōu)選大于4:1。在另一個實施方案中，所述米糠油的脂肪酸組成包含大于大約48%的油酸、小于大約17%的棕櫚酸和小于大約30%的亞油酸。在再一個實施方案中，所述米糠油的脂肪酸組成包含大于大約40%的油酸，優(yōu)選大于大約50%的油酸，還更優(yōu)選大于大約60%的油酸。在一個實施方案中，所述米糠油的脂肪酸組成的范圍是48-80%的油酸、6-16%的棕櫚酸和10-25%的亞油酸。在又一個實施方案中，所述米糠油的脂肪酸組成包含小于大約16%的棕櫚酸，優(yōu)選小于大約15%的棕櫚酸，更優(yōu)選小于大約14%的棕櫚酸，更優(yōu)選小于大約13%的棕櫚酸，還更優(yōu)選小于大約12%的棕櫚酸。在另一個實施方案中，所述米糠油的脂肪酸組成包含小于大約25%的亞油酸，優(yōu)選小于大約20%的亞油酸，還更優(yōu)選小于大約15%的亞油酸。另一方面，本發(fā)明提供了米糠，其脂肪酸組成包含大于大約48%的油酸、小于大約17%的棕櫚酸、小于大約30%的亞油酸和/或其任何組合。在一個實施方案中，油酸與亞油酸的比率大于1.5:1，優(yōu)選大于2:1，更優(yōu)選大于3:1，還更優(yōu)選大于4:1。在另一個實施方案中，所述米糠的脂肪酸組成包含大于大約48%的油酸、小于大約17%的棕櫚酸和小于大約30%的亞油酸。在再一個實施方案中，所述米糠的脂肪酸組成包含大于大約40%的油酸，優(yōu)選大于大約50%的油酸，還更優(yōu)選大于大約60%的油酸。在一個實施方案中，所述米糠的脂肪酸組成處于48-80%的油酸、6-16%的棕櫚酸和10-25%的亞油酸的范圍。在又一個實施方案中，所述米糠的脂肪酸組成包含小于大約16%的棕櫚酸，優(yōu)選小于大約15%的棕櫚酸，更優(yōu)選小于大約14%的棕櫚酸，更優(yōu)選小于大約13%的棕櫚酸，還更優(yōu)選小于大約12%的棕櫚酸。在另一個實施方案中，所述米糠的脂肪酸組成包含小于大約25%的亞油酸，優(yōu)選小于大約20%的亞油酸，還更優(yōu)選小于大約15%的亞油酸。另一方面，本發(fā)明提供了水稻種子，其脂肪酸組成包含大于大約48%的油酸、小于大約17%的棕櫚酸、小于大約30%的亞油酸和/或其任何組合。在一個實施方案中，油酸與亞油酸的比率大于1.5:1，優(yōu)選大于2:1，更優(yōu)選大于3:1，還更優(yōu)選大于4:1。在另一個實施方案中，所述水稻種子的脂肪酸組成包含大于大約48%的油酸、小于大約17%的棕櫚酸和小于大約30%的亞油酸。在再一個實施方案中，所述水稻種子的脂肪酸組成(即種子內(nèi)的油)包含大于大約40°/。的油酸，優(yōu)選大于大約50%的油酸，還更優(yōu)選大于大約60%的油酸。在一個實施方案中，所述水稻種子的脂肪酸組成處于48-80%的油酸、6-16%的棕櫚酸和10-25%的亞油酸的范圍。在又一個實施方案中，所述水稻種子的脂肪酸組成包含小于大約16%的棕櫚酸，優(yōu)選小于大約15%的棕櫚酸，更優(yōu)選小于大約14%的棕櫚酸，更優(yōu)選小于大約13%的棕櫚酸，還更優(yōu)選小于大約12%的棕櫚酸。在另一個實施方案中，所述水稻種子的脂肪酸組成包含小于大約25%的亞油酸，優(yōu)選小于大約20%的亞油酸，還更優(yōu)選小于大約15%的亞油酸。在關(guān)于米糠或水稻種子的上述任何實施方案中，脂肪酸組成典型通過提取油并通過FAME/GC分析加以確定，如實施例1所述。各個脂肪酸的組成以占油中總脂肪酸的百分比(w/w)表示。另一方面，本發(fā)明提供了產(chǎn)生本發(fā)明的米糠油、米糠和/或水稻種子的水稻植物。另一方面，本發(fā)明提供了分離的多核苷酸，當(dāng)其存在于水稻植物的細(xì)胞中時，與沒有所述多核苷酸的細(xì)胞相比下調(diào)和/或多肽在所述細(xì)胞中的活性水平。18優(yōu)選地，所述多核苷酸與能指導(dǎo)所述多核苷酸在水稻植物細(xì)胞中表達(dá)的啟動子可操縱地連接。在一個實施方案中，所述多核苷酸下調(diào)從至少一個和/或基因表達(dá)的mRNA水平。合適的多核苷酸的例子包括但不限于選自如下的多核苷酸反義多核苷酸，有義多核苷酸，催化性多核苷酸，微小RNA(microRNA),編碼結(jié)合FaW或多肽的多肽的多核苷酸和雙鏈RNA。在一個實施方案中，所述多核苷酸是反義多核苷酸，其在生理條件下與包含SEQIDNO:5-8、11-14或者19-25所示任一或多個核苷酸序列的多核苷酸雜交。在再一個實施方案中，所述多核苷酸是催化性多核苷酸，其能切割包含SEQIDNO:5-8、11-14或者19-25所示任一或多個核苷酸序列的多核苷酸。在另一個實施方案中，所述多核苷酸是包含寡核苷酸的雙鏈RNA(dsRNA)分子，所述寡核苷酸包含SEQIDNO:5-8、11-14或者19-25所示任一或多個核苷酸序列的至少19個連續(xù)核苷酸，其中所述分子的雙鏈部分長度為至少19堿基對且包含所述寡核苷酸。優(yōu)選地，所述dsRNA從單啟動子表達(dá)，其中雙鏈部分的鏈通過單鏈部分連接。構(gòu)建載體以產(chǎn)生這種dsRNA分子的例子在實施例5中提供。在優(yōu)選的實施方案中，所述多核苷酸或其鏈在嚴(yán)格條件下能與包含SEQIDNO:5-8、11-14或者19-25所示任一或多個核苷酸序列的多核苷酸雜交。另一方面，本發(fā)明提供了一種鑒別多核苷酸的方法，所述多核苷酸存在于水稻植物細(xì)胞中時，與沒有所述多核苷酸的細(xì)胞相比下調(diào)所述細(xì)胞中i^d2和/或多肽的活性水平，所述方法包括i)確定候選多核苷酸下調(diào)細(xì)胞中和/或i^W多肽活性水平的能力，及ii)選擇下調(diào)細(xì)胞中和/或多肽活性水平的多核苷酸。步驟i)可依賴于例如分析細(xì)胞中和/或多肽的量或酶活性或者編碼F^^和/或i^W多肽的mRNA量?；蛘撸襟Ei)可包括分析細(xì)胞或者包含所述細(xì)胞的種子或植物的脂肪酸含量。優(yōu)選地，步驟i)包括在植物細(xì)19胞、更優(yōu)選在水稻細(xì)胞中導(dǎo)入候選多核苷酸或者包含與候選多核苷酸可操縱地連接的啟動子的嵌合DNA，還更優(yōu)選包括從所述植物細(xì)胞再生轉(zhuǎn)基因植物以及從轉(zhuǎn)基因植物產(chǎn)生種子的步驟。候選基因可以是一組候選基因之一，至少為2或3個。本發(fā)明因此提供了本發(fā)明的多核苷酸在篩選方法中的應(yīng)用。多核苷酸可以是但不限于是反義多核苷酸，有義多核苷酸，催化性多核苷酸，微小RNA，編碼結(jié)合F^O或7^W多肽的多肽的多核苷酸和雙鏈RNA。在一個實施方案中，所述反義多核苷酸在生理條件下與包含SEQIDNO:5-8、11-14或者19-25所示任一或多個核苷酸序列的多核苷酸雜交。在另一個實施方案中，所述催化性多核苷酸能切割包含SEQIDNO:5-8、11-14或者19-25所示任一或多個核苷酸序列的多核苷酸。在再一個實施方案中，所述雙鏈RNA(dsRNA)分子包含寡核苷酸，所述寡核苷酸包含SEQIDNO:5-8、11-14或者19-25所示任一或多個核苷酸序列的至少19個連續(xù)核苷酸，其中所述分子的雙鏈部分長度為至少19堿基對且包含所述寡核苷酸。本發(fā)明還提供了使用本發(fā)明的方法鑒別的分離的多核苷酸。另一方面，本發(fā)明提供包含或者編碼本發(fā)明多核苷酸的載體。優(yōu)選地，所述多核苷酸或者編碼所述多核苷酸的序列與啟動子可操縱地連接。優(yōu)選地，所述啟動子賦予所述多核苷酸相對于水稻植物的至少一種其它組織或器官而優(yōu)先在所述植物的胚、胚乳、糠皮和/或種子中表達(dá)。本發(fā)明還提供了包含本發(fā)明的載體和/或本發(fā)明的多核苷酸的細(xì)胞。在一個實施方案中，所述多核苷酸或載體被導(dǎo)入所述細(xì)胞或者所述細(xì)胞的袓細(xì)胞中。在再一個實施方案中，所述細(xì)胞是水稻細(xì)胞或者農(nóng)桿菌(^4gro6acte"',)細(xì)胞。優(yōu)選地，所述多核苷酸被整合進(jìn)所述細(xì)胞的基因組中。另一方面，本發(fā)明提供了包含本發(fā)明細(xì)胞的水稻植物。再一方面，本發(fā)明提供了產(chǎn)生本發(fā)明細(xì)胞的方法，所述方法包括將本發(fā)明的多核苷酸或者載體導(dǎo)入細(xì)胞中的步驟。優(yōu)選地，所述方法進(jìn)一步包括從所述細(xì)胞再生轉(zhuǎn)基因植物的步驟。本發(fā)明還提供了本發(fā)明的多核苷酸或載體在生產(chǎn)重組細(xì)胞中的應(yīng)用。再一方面，本發(fā)明提供了遺傳修飾的水稻植物，其中與相應(yīng)未修飾的植物相比，所述植物相中具有FaW和/或活性的多肽表達(dá)降低。優(yōu)選地，所述植物已經(jīng)被轉(zhuǎn)化為包含本發(fā)明的多核苷酸或者其包含所述多核苷酸的后代植物。再一方面，本發(fā)明提供了一種產(chǎn)生本發(fā)明米糠油、米糠和/或水稻種子的方法，所述方法包括將水稻植物暴露于F^/2或多肽的拮抗劑。另一方面，本發(fā)明提供了一種獲得遺傳修飾的水稻植物的方法，所述水稻植物可用于產(chǎn)生與未修飾的糙米種子相比貯存期延長的糙米種子，所述方法包括對所述植物進(jìn)行遺傳操作，由此與產(chǎn)生未修飾的糙米種子的相應(yīng)植物相比，F(xiàn)^^禾B/或FWS多肽的活性和/或產(chǎn)生水平在所述水稻種子中降低。優(yōu)選地，i^/2和/或多肽的活性和/或產(chǎn)生水平僅在所述植物種子中降低。在一個實施方案中，i^W2多肽的活性和/或產(chǎn)生水平降低。在再一個實施方案中，所述轉(zhuǎn)基因植物包含本發(fā)明的多核苷酸或載體。另一方面，本發(fā)明提供了使用本發(fā)明的方法產(chǎn)生的遺傳修飾的水稻植物或其后代。另一方面，本發(fā)明提供了一種選擇水稻植物的方法，該植物可用于產(chǎn)生本發(fā)明的米糠油、米糠和/或水稻種子，所述方法包括i)篩選誘變的水稻種子或者水稻植物群，及ii)選擇能產(chǎn)生本發(fā)明的米糠油、米糠和/或水稻種子的種子或植物。在一個實施方案中，步驟i)包括分析誘變的種子和/或植物的具有F""2或i^W活性的多肽。在另一個實施方案中，步驟i)包括分析誘變的種子和/或植物的Fad2或基因的序列和/或表達(dá)水平。在再一個實施方案中，步驟i)包括分析誘變的種子和/或植物的油、糠和/或種子的脂肪酸組成。另一方面，本發(fā)明提供了一種選擇水稻植物的方法，該植物可用于產(chǎn)生本發(fā)明的米糠油、米糠和/或水稻種子，所述方法包括i)分析得自候選水稻植物的米糠油、米糠和/或種子的脂肪酸含量，及21ii)選擇可用于產(chǎn)生本發(fā)明的米糠油、米糠和/或水稻種子的水稻植物。再一方面，本發(fā)明提供了一種選擇水稻植物的方法，該植物可用于產(chǎn)生本發(fā)明的米糠油、米糠和/或水稻種子，所述方法包括-i)分析候選植物樣品的具有或活性的多^:，及ii)基于所述多肽的序列、產(chǎn)生水平和/或活性選擇可用于產(chǎn)生本發(fā)明的米糠油、米糠和/或水稻種子的水稻植物。另一方面，本發(fā)明提供了一種選擇水稻植物的方法，該植物可用于產(chǎn)生本發(fā)明的米糠油、米糠和/或水稻種子，所述方法包括i)分析候選植物的或FW5基因的序列和/或表達(dá)水平，及ii)基于所述基因的序列和/或表達(dá)水平選擇可用于產(chǎn)生本發(fā)明的米糠油、米糠和/或水稻種子的水稻植物。再一方面，本發(fā)明提供了一種鑒別可用于產(chǎn)生本發(fā)明的米糠油、米糠和/或水稻種子的水稻植物的方法，所述方法包括檢測所述植物的核酸分子，其中所述核酸分子與植物中F"^2基因和/或F"W基因的至少一部分連接和/或包含所述部分。另一方面，本發(fā)明提供了一種鑒別可用于產(chǎn)生貯存期延長的糙米種子的水稻植物的方法，所述方法包括檢測植物的核酸分子，其中所述核酸分子與植物中Fad2基因和/或FatB基因的至少一部分連接和/或包含所述部分。在一個實施方案中，上述兩種方法包括i)使第二種核酸分子與得自所述植物的所述核酸分子雜交，ii)任選地使至少一種其它核酸分子與得自所述植物的所述核酸分子雜交，及iii)檢測所述雜交步驟的產(chǎn)物或者所述雜交步驟產(chǎn)物的不存在。在一個實施方案中，所述第二種核酸分子用作引物以逆轉(zhuǎn)錄或者復(fù)制所述核酸分子的至少一部分?？梢允褂萌魏渭夹g(shù)檢測核酸，所述技術(shù)例如但不限于限制片段長度多態(tài)性分析、擴(kuò)增片段長度多態(tài)性分析、微衛(wèi)星擴(kuò)增和/或核酸測序。在一個實施方案中，所述方法包括核酸擴(kuò)增。在另一個實施方案中，所述方法分析基因的表達(dá)水平。本發(fā)明還提供了一種獲得水稻植物或種子的方法，所述方法包括22i)使第一種親代水稻植物與第二種親代水稻植物雜交，所述第一種親代水稻植物包含賦予植物谷粒油中油酸比例增加的F""2等位基因，所述第二種親代水稻植物包含賦予植物谷粒油中棕櫚酸比例降低的等位基因，ii)從雜交后代中篩選存在這兩個等位基因的后代植物或谷粒，及iv)選擇包含這兩個等位基因且植物谷粒油中油酸比例增加以及棕櫚酸比例降低的后代植物或谷粒。另一方面，本發(fā)明提供了一種將F"d2等位基因?qū)胨局参镏械姆椒?，所述方法包括i)使第一種親代水稻植物與第二種親代水稻植物雜交，其中第二種植物包含所述等位基因，及ii)使步驟i)的雜交后代與和第一種親代植物相同基因型的植物回交足夠次數(shù)以產(chǎn)生具有第一種親代植物大部分基因型但是包含所述等位基因的植物，iii)選擇具有第一種植物的大部分基因型且包含所述等位基因的植物，其中所述等位基因賦予植物的油、糠和/或種子中油酸的比例增加。再一方面，本發(fā)明提供了一種將F"^等位基因?qū)胨局参镏械姆椒?，所述方法包括i)使第一種親代水稻植物與第二種親代水稻植物雜交，其中第二種植物包含所述等位基因，及ii)使步驟i)的雜交后代與和第一種親代植物相同基因型的植物回交足夠次數(shù)以產(chǎn)生具有第一種親代植物大部分基因型但是包含所述等位基因的植物，iii)選擇具有第一種植物的大部分基因型且包含所述等位基因的植物，其中所述等位基因賦予植物的油、糠和/或種子中棕櫚酸的比例降低。再者，本發(fā)明提供了一種增加水稻植物的油、糠和域種子中油酸比例的方法，所述方法包括對所述植物進(jìn)行遺傳操作，由此當(dāng)與野生型植物相比時Fad2多肽的產(chǎn)生減少，其中所述多肽具有A12去飽和酶活性。再一方面，本發(fā)明提供了一種降低水稻植物的油、糠和/或種子中棕櫚酸比例的方法，所述方法包括對所述植物進(jìn)行遺傳操作，由此當(dāng)與野生型植物相比時F^B多肽的產(chǎn)生減少，其中所述多肽具有(i^W)活性。本發(fā)明還提供了使用本發(fā)明的方法獲得的水稻植物或者其后代植物。另一方面，本發(fā)明提供了得自本發(fā)明植物的米糠油。另一方面，本發(fā)明提供了得自本發(fā)明植物的米糠。另一方面，本發(fā)明提供了得自本發(fā)明植物的水稻種子。再者，本發(fā)明提供了一種產(chǎn)生種子的方法，所述方法包括a)生長本發(fā)明的植物，及b)收獲種子。再一方面，本發(fā)明提供了包含本發(fā)明的米糠油、米糠和/或水稻種子的食品°另一方面，本發(fā)明提供了制備食品的方法，所述方法包括在本發(fā)明的米糠油中烹調(diào)可食用物質(zhì)。顯然，本發(fā)明一方面的優(yōu)選特征和特性可適用于本發(fā)明的許多其它方面。在本說明書中，單詞"包含"應(yīng)理解為意味著包含指定要素、整數(shù)或步驟、或一組要素、整數(shù)或步驟，但是不排除任何其它要素、整數(shù)或步驟、或一組要素、整數(shù)或步驟。本發(fā)明在后文通過非限制性實施例以及附圖加以描述。附圖簡述圖1:高等植物的質(zhì)體和細(xì)胞溶膠中主要的脂肪酸生物合成途徑。圖2:水稻蛋白的序列對比。ProteinFATB2=SEQIDNO:l，proteinFATB3=SEQIDNO:2，proteinFATBl=SEQIDNO:3，proteinFATB4=SEQIDN0:4。圖3:水稻F加5基因結(jié)構(gòu)。L0C—Os02g4=SEQIDN0:5，LOC-Osllg4=SEQIDNO:6，LOC-Os06gO=SEQIDN0:7，LOC-Os06g3=SEQIDN0:8。圖4:通過ClustalW對比F"f5基因序列。使用默認(rèn)參數(shù)，注意"基因"是不同長度的。圖5:相應(yīng)于LOC-Os6g05130的基因外顯子-內(nèi)含子結(jié)構(gòu)。上面一行相應(yīng)于mRNA編碼序列(SEQIDNO:9)的起始處，成對的第二行相應(yīng)于基因(SEQIDNO:10)。圖6:四個F"W同工型的編碼序列對比示出分別以小寫字母和大些字母交替表示的連續(xù)外顯子以及用于通過RT-PCR區(qū)分同工型的引物的位置(下劃線處)。起始密碼子(起始位置l)以粗體表示。AC108870=SEQIDNO:11，AP005291=SEQIDNO:12，AP000399=SEQIDNO:13，AP004236=SEQIDNO:14。圖7:通過ClustalW對比Fad2同工型的推導(dǎo)的多肽序列。注意F—1品系相應(yīng)于Os02g48560，F(xiàn)—2相應(yīng)于Os07g23410，F(xiàn)—3相應(yīng)于Os07g23430，O—4相應(yīng)于Os07g23390。使用ClustalW(Fast)程序默認(rèn)參數(shù)。ProteinF—1=SEQIDNO:15，ProteinF—3=SEQIDNO:16，ProteinF—2=SEQIDNO:17，ProteinF—4=SEQIDNO:18。圖8:i^W序列的對比示出同工型AP004047中5'UTR位置(小寫字母)和用于通過RT-PCR進(jìn)行擴(kuò)增的引物的位置(下劃線處)。終止密碼子的位置在方框中示出，終止密碼子下游的非翻譯區(qū)以小寫字母表示。AP005168=SEQIDNO:19，AP004047=SEQIDNO:20，Contig2654=SEQIDNO:21。圖9:水稻FaW基因結(jié)構(gòu)。圖10:水稻尺W2基因的蛋白質(zhì)編碼區(qū)的核苷酸序列對比。品系0一2相應(yīng)于Os07g23410，0—4相應(yīng)于Os07g233卯，0—1相應(yīng)于Os02g48560，0—3相應(yīng)于Os07g23410。使用ClustalW程序默認(rèn)參數(shù)。CdsFAD20—2=SEQIDNO:22，CdsFAD20—4=SEQIDNO:23，CdsFAD20—1=SEQIDNO:24，CdsFAD20一3=SEQIDNO:25。圖11:通過GC分析指定基因型谷粒的總油級分確定的棕櫚酸、油酸和亞油酸的相對百分比示意圖。圖12:在對指定基因型谷粒進(jìn)行的GC總脂質(zhì)分析中棕櫚酸與油酸的相對百分比示意圖。圖13:在對指定基因型谷粒進(jìn)行的GC總脂質(zhì)分析中亞油酸與油酸的相對百分比示意圖。圖14:散點圖示出指定基因型的水稻植物谷粒中亞油酸對油酸的百分比。注意這兩種脂肪酸量之間的關(guān)系(反應(yīng)在直線的斜率中)在分析的所有品系中基本相同，但是庫大小容量(poolsizecapacity)看起來不同(以不同品系沿著分析的空間位移表示)。圖15:不同基因型的亞油酸對棕櫚酸的百分比散點圖。注意FW5中受影響的品系與在i^W中受影響的品系的不同斜率。這提示這些成分之間的關(guān)系在不同基因型中是不同的，很可能反映了影響步驟中的不同。25圖16:不同基因型的油酸對棕櫚酸百分比散點圖。注意斜率的不同。圖17:對Fa6/2RNAi植物和FaWRNAi植物的油組成變異的主成分分析示意圖。結(jié)果示出主成分2是亞油酸對油酸，主成分2是棕櫚酸對亞油酸和油酸。圖18:Western印跡示出抗肽抗血清反應(yīng)。通過SDS-PAGE分析FflW-99抗總?cè)~蛋白提取物。在Tos-17品系中缺少大約20kDa的肽。圖中示出用免疫前血清的反應(yīng)。R是指FaWRNAi品系，T是指Tos-17品系，Wl和W2是野生型。序列表索引SEQIDNO:l-水稻FatB2蛋白SEQIDNO:2-水稻FatB3蛋白SEQIDNO:3-水稻FatBl蛋白SEQIDNO:4-水稻FatB4蛋白SEQIDNO:5-水稻FatB3基因SEQIDNO:6-水稻FatB2基因SEQIDNO:7-水稻FatBl基因SEQIDNO:8-水稻FatB4基因SEQIDNO:9-編碼水稻FatBl蛋白的cDNA.SEQIDNO:10-編碼水稻FatBl蛋白的基因(僅部分序列，見圖5-包括所有外顯子序列和一些側(cè)翼序列和內(nèi)含子序列)SEQIDNO:ll-編碼水稻FatB2蛋白的開放讀框SEQIDNO:12-編碼水稻FatB3蛋白的開放讀框SEQIDNO:13-編碼水稻FatBl蛋白的開放讀框SEQIDNO:14-編碼水稻FatB4蛋白的開放讀框SEQIDNO:15-水稻Fad2同工型1SEQIDNO:16-水稻Fad2同工型3SEQIDNO:17-水稻Fad2同工型2SEQIDNO:18-水稻Fad2同工型4SEQIDNO:19-水稻Fad2-3cDNASEQIDNO:20畫水稻Fad2-1cDNA.26SEQIDNO:21-水稻Fad2畫2cDNASEQIDNO:22-編碼水稻Fad2-2的開放讀框SEQIDNO:23-編碼水稻Fad2-4的開放讀框SEQIDNO:24-編碼水稻Fad2-1的開放讀框SEQIDNO:25-編碼水稻Fad2-3的開放讀框SEQIDNO:26-FatB共有序列SEQIDNO:27-33-Fad2共有序列SEQIDNO:34-55和60-63-寡核苷酸引物SEQIDNO:56-59-抗原性水稻FatB肽SEQIDNO:64-83-可用于RNAi的單鏈分子序列發(fā)明詳述一般技術(shù)除非特別指出，本文所用所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語均具有本領(lǐng)域技術(shù)人員通常了解的相同含義(例如在細(xì)胞培養(yǎng)、植物分子生物學(xué)、分子遺傳學(xué)、免疫學(xué)、免疫組織化學(xué)、蛋白質(zhì)化學(xué)和生物化學(xué)領(lǐng)域)。除非特別指出，本發(fā)明利用的重組蛋白、細(xì)胞培養(yǎng)和免疫學(xué)技術(shù)均是為本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的標(biāo)準(zhǔn)程序。這些技術(shù)在例如如下文獻(xiàn)中描述和解禾畢J.Perbal，APracticalGuidetoMolecularCloning,JohnWileyandSons(1984)，J.Sambrooketal.，MolecularCloning:ALaboratoryManual,ColdSpringHarbourLaboratoryPress(1989)，T.A.Brown(editor),EssentialMolecularBiology:APracticalApproach,Volumes1and2，IRLPress(1991)，D.M.GloverandB.D.Hames(editors),DNACloning:APracticalApproach,Volumes1-4，IRLPress(1995and1996)和F.M.Ausubeletal.(editors),CurrentProtocolsinMolecularBiology,GreenePub.AssociatesandWiley-Interscience(1988,包括迄今為止的所有更新)，EdHarlowandDavidLane(editors)Antibodies:ALaboratoryManual,ColdSpringHarbourLaboratory,(1988)，以及J.E.Coliganetal.(editors)CurrentProtocolsinImmunology,JohnWiley&Sons(包括迄今為止的所有更新)。選擇的定義如本文所用，術(shù)語"Fa^多肽"是指進(jìn)行將油酸轉(zhuǎn)變?yōu)閬営退岬娜ワ柡兔阜磻?yīng)的蛋白質(zhì)。因此，術(shù)語"F"&活性"是指將油酸轉(zhuǎn)變?yōu)閬営退帷＿@些脂肪酸可以是酯化形式，例如是磷脂的一部分。水稻F^/2多肽的例子包括包含圖7和SEQIDNO:15-18所示的一種氨基酸序列的蛋白質(zhì)以及其變體和/或突變體。這種變體和/或突變體與圖7和SEQIDNO:15-18所示任一多肽可是至少80%、更優(yōu)選至少90%、更優(yōu)選至少95%、還更優(yōu)選至少99%相同的。多核苷酸"或"&&基因"編碼F"W多肽。多核苷酸的例子包括包含圖8或圖10以及SEQIDNO:19-25所示的一種核苷酸序列的核酸以及其等位基因變體和/或突變體。尸"d2基因的例子包括包含圖8和SEQIDNO:19-21所示的一種核苷酸序列的核酸以及其等位基因變體和/或突變體。這種等位基因變體和/或突變體與圖8和/或圖10和/或SEQIDNO:19-25所示任一多核苷酸可是至少80%、優(yōu)選至少90%、更優(yōu)選至少95%、還更優(yōu)選至少99%相同的。如本文所用，術(shù)語"FaW多肽"是指水解棕櫚酰-ACP產(chǎn)生游離棕櫚酸的蛋白質(zhì)。因此，術(shù)語"F"W活性"是指水解棕櫚酰-ACP產(chǎn)生游離棕櫚酸。水稻多肽的例子包括包含圖2和SEQIDNO:l-4所示的一種氨基酸序列的蛋白質(zhì)以及其變體和/或突變體。這種變體和/或突變體與圖2和SEQIDNO:l-4所示任一多肽可是至少80。/。、優(yōu)選至少90%、更優(yōu)選至少95%、還更優(yōu)選至少99%相同的。"FW5多核苷酸"或"7^5基因"編碼多肽。多核苷酸的例子包括包含圖4和圖6以及SEQIDNO:5-8和11-14所示的一種核苷酸序列的核酸以及其等位基因變體和/或突變體。F"W基因的例子包括包含圖4和SEQIDNO:5-8所示的一種核苷酸序列的核酸以及其等位基因變體和/或突變體。這種等位基因變體和/或突變體與圖4和/或圖6和/或SEQIDNO:5-8及11-14所示任一多核苷酸可是至少80%、優(yōu)選至少90%、更優(yōu)選至少95%、還更優(yōu)選至少99%相同的。如本文所用，術(shù)語"水稻"是指稻屬的任何物種，包括其祖先，以及通過與其它物種雜交產(chǎn)生的后代。優(yōu)選所述植物是商業(yè)培育的稻屬物種例如稻(Oryzasativa)的株系或栽培種或者變種或者適于商業(yè)產(chǎn)生谷粒的品系。如本文所用，術(shù)語"米糠油"是指得自水稻植物的種子/谷?；蛘咂湟徊糠秩缈菲さ慕M合物，其包含至少60Q/。(w/w)脂質(zhì)。米糠油在室溫典型是液態(tài)。優(yōu)選地，所述脂質(zhì)包含長度為至少6個碳原子的脂肪酸。所述脂肪酸典型是酯化形式，例如三酰甘油、磷脂。本發(fā)明的米糠油包含油酸。本發(fā)明的米糠油也可以包含至少一些其它脂肪酸，例如棕櫚酸、亞油酸、豆蔻酸、硬脂酸和/或亞麻酸。所述脂肪酸可以是游離脂肪酸和/或三酰甘油(TAG)。在一個實施方案中，本發(fā)明的米糠油中至少50%、更優(yōu)選至少70%、更優(yōu)選至少80M的脂肪酸是TAG。本發(fā)明的米糠油可以形成水稻谷粒/種子或其部分如糊粉層或胚/盾片，其統(tǒng)稱作"米糠"。或者，本發(fā)明的米糠油已經(jīng)從水稻谷粒/種子或者米糠中提取。這種提取方法的例子在實施例1中提供。因此，在一個實施方案中，本發(fā)明的"米糠油"是"基本純化的"或者"純化的"米糠油，其已經(jīng)與一或多種其它脂質(zhì)、核酸、多肽或者與其天然狀態(tài)相關(guān)的其它污染分子分開。優(yōu)選所述基本純化的米糠油至少60%、更優(yōu)選至少75%、更優(yōu)選至少90%沒有預(yù)期天然相關(guān)的其它成分。在優(yōu)選的實施方案中，當(dāng)與完整種子/谷?；蛘呖分斜嚷氏啾葧r，提取時油酸與亞油酸、棕櫚酸與油酸和/或棕櫚酸與亞油酸的比率無明顯改變(例如不超過5%的變化)。在再一個實施方案中，米糠油未暴露于如氫化等方法，與完整種子/谷?；蛘呖分斜嚷氏啾葧r，所述方法可以改變油酸與亞油酸的比率、棕櫚酸與油酸的比率和/或棕櫚酸與亞油酸的比率。本發(fā)明的米糠油可進(jìn)一步包含非脂肪酸分子，例如但不限于，谷維素和固醇。米糠油可以通過本領(lǐng)域已知的任何方法從水稻種子或者糠中提取。這典型包括用非極性溶劑提取，所述溶劑例如是乙醚、石油醚、氯仿/甲醇或者丁醇混合物。谷粒中與淀粉相關(guān)的脂質(zhì)可以用水-飽和丁醇提取。米糠油可以通過本領(lǐng)域已知方法"脫膠"以除去多糖或者以其它方式處理以除去污染物或者改良純度、穩(wěn)定性或者色澤。油中的三酰甘油及其它酯可以被水解釋放游離脂肪酸或者如本領(lǐng)域所已知對油進(jìn)行氫化或者經(jīng)化學(xué)或酶處理。從水稻種子或者糠中提取后的米糠油典型包含稱作Y-谷維素的脂質(zhì)基團(tuán)。如本文所用，"包含Y-谷維素"是指所述油中存在至少0.in/。(w/w)Y-谷維素化合物。在提取后和從TAG取出之前的米糠油中Y-谷維素的水平典型為1.5-3.5。/。(w/w)。所述化合物典型是阿魏酸(4-羥基-3-甲氧基桂皮酸)的固醇酯及其它三萜酯的混合物。阿魏酸環(huán)阿屯酯(Cycloartenylferulate)、24-亞甲基環(huán)阿屯醇阿魏酸酯(24-methylenecycloartanylferulate)和菜油甾醇阿魏酸酯(campesterylferulate)是谷維素中的主要阿魏酸酉旨，阿魏酸(3-谷甾醇酯和阿魏酸豆甾醇酯水平較低。據(jù)認(rèn)為Y-谷維素的存在幫助米糠油的食用者對抗慢性疾病如心臟病和癌癥，因此Y-谷維素的存在是有益的。如本文所用，術(shù)語"米糠"是指內(nèi)部精白米谷粒與水稻種子/谷粒的外殼之間的層(糊粉層)以及谷粒的胚/盾片。米糠通過對糙米拋光產(chǎn)生精白米的主要副產(chǎn)物。如本文所用，術(shù)語"貯存期延長"是指通過本發(fā)明的方法產(chǎn)生的種子/谷粒在收獲時可以作為糙米貯存，與例如自野生型(未遺傳修飾的)水稻植物中收獲的糙米相比可貯存更長時間。如本文所述，一種測量糙米的"貯存期延長"的方法是在4(TC貯存至少8周后測量己醛產(chǎn)生情況(見實施例8)。術(shù)語"植物"包括完整植物、植物結(jié)構(gòu)(例如葉、莖)、根、花器官/結(jié)構(gòu)、種子(包括胚、胚乳和種皮)、植物組織(例如維管結(jié)構(gòu)、基本組織等)、細(xì)胞及其后代等。"轉(zhuǎn)基因植物"、"遺傳修飾的植物"或者其變化用語是指含有在相同物種、變種或栽培種的野生型植物中未發(fā)現(xiàn)的基因構(gòu)建體(轉(zhuǎn)基因)的植物。"轉(zhuǎn)基因"在本文具有生物
技術(shù)領(lǐng)域：
的正常含義，包括通過重組DNA或RNA技術(shù)產(chǎn)生或改變的并已經(jīng)導(dǎo)入植物細(xì)胞中的遺傳序列。轉(zhuǎn)基因可包括衍生自植物細(xì)胞的遺傳序列。典型地，轉(zhuǎn)基因通過人工操作例如通過轉(zhuǎn)化方法導(dǎo)入植物中，但是可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員公認(rèn)的任何方法。術(shù)語"種子"和"谷粒"在本文可互換應(yīng)用。"谷粒"通常是指成熟的、收獲的谷粒，但是根據(jù)情況也可以是指吸漲或發(fā)芽后的谷粒。成熟谷粒的含水量通常小于大約18-20%。如本文所用，術(shù)語"相應(yīng)未修飾的植物"是指野生型植物。如本文所用"野生型"是指未根據(jù)本發(fā)明進(jìn)行修飾的細(xì)胞、組織或植物。野生型細(xì)胞、組織或植物可以用作對照物以與如本文所述修飾的細(xì)胞、組織或植物對比外源核酸的表達(dá)水平或者性狀修飾的程度和性質(zhì)。適于作為參考標(biāo)準(zhǔn)的野生型水稻變種包括Nipponbare。"核酸分子"是指寡核苷酸、多核苷酸或其任何片段。其可以是源于基因組或合成的DNA或RNA，雙鏈或單鏈DNA或RNA，以及如本文限30定與碳水化合物、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)或者其它物質(zhì)組合以進(jìn)行特定活性的DNA或RNA。術(shù)語"核酸分子"和"多核苷酸"可互換應(yīng)用。多核苷酸的％相同性通過GAP(NeedlemanandWunsch，1970)分析(GCG程序)確定，gapcreationpenalty=5，gapextensionpenalty=0.3。除非特別指出，査詢序列的長度為至少45個核苷酸，所述GAP分析排列對比兩個序列的至少45個核苷酸的區(qū)域。優(yōu)選地，查詢序列的長度為至少150個核苷酸，GAP分析排列對比兩個序列至少150個核苷酸的區(qū)域。更優(yōu)選地，查詢序列的長度為至少300個核苷酸，GAP分析排列對比兩個序列至少300個核苷酸的區(qū)域。還更優(yōu)選地，GAP分析排列對比兩個序列的全長。"寡核苷酸"可以是RNA、DNA或者其衍生物。盡管術(shù)語多核苷酸與寡核苷酸具有重疊的含義，但是寡核苷酸典型是相對短的單鏈分子。這種寡核苷酸的最小大小是為在寡核苷酸與靶核酸分子上互補(bǔ)序列之間形成穩(wěn)定雜種所需的大小。優(yōu)選地，所述寡核苷酸的長度為至少15個核苷酸，更優(yōu)選至少18個核苷酸，更優(yōu)選至少19個核苷酸，更優(yōu)選至少20個核苷酸，還更優(yōu)選至少25個核苷酸。如本文所用，術(shù)語"核酸擴(kuò)增"是指使用DNA聚合酶增加核酸分子拷貝數(shù)的任何體外方法。核酸擴(kuò)增導(dǎo)致核苷酸摻入DNA分子或者引物中，從而形成與DNA模板互補(bǔ)的新DNA分子。新形成的DNA分子可以用作模板以合成另外的DNA分子。如本文所用，"可操縱地連接"是指兩或多個核酸(例如DNA)節(jié)段之間的功能關(guān)系。典型地，其是指轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)元件(啟動子)與轉(zhuǎn)錄序列的功能關(guān)系。例如，如果啟動子刺激或調(diào)節(jié)合適細(xì)胞中的編碼序列如本文所述多核苷酸的轉(zhuǎn)錄，則該啟動子與該編碼序列是可操縱地連接的。通常，與轉(zhuǎn)錄序列可操縱地連接的啟動子轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)元件與轉(zhuǎn)錄序列是物理連續(xù)的，即它們是順式作用的。然而，一些轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)元件如增強(qiáng)子不需要與轉(zhuǎn)錄由所述增強(qiáng)子增強(qiáng)的編碼序列物理連續(xù)或者位置緊密相鄰。如本文所用，采用術(shù)語"基因"的最廣泛的含義，包括脫氧核糖核苷酸序列，包含結(jié)構(gòu)基因的蛋白質(zhì)編碼區(qū)并且包括位于5，和3'末端距任一末端至少大約2kb且參與基因表達(dá)的編碼區(qū)鄰近的序列。位于編碼區(qū)5'且存在于mRNA上的序列稱作5'非翻譯序列。位于編碼區(qū)3'或下游且存在于mRNA上的序列稱作3'非翻譯序列。術(shù)語"基因"涵蓋了cDNA和基因的31基因組形式?；虻幕蚪M形式或克隆含有由稱作"內(nèi)含子"或者"間插區(qū)"或者"間插序列"的非編碼序列中斷的編碼區(qū)。內(nèi)含子是被轉(zhuǎn)錄為核RNA(hnRNA)的基因節(jié)段；內(nèi)含子可含有調(diào)節(jié)元件如增強(qiáng)子。內(nèi)含子從核或初級轉(zhuǎn)錄物中被除去或"剪接除去"，因此在信使RNA(mRNA)轉(zhuǎn)錄物中沒有內(nèi)含子。mRNA在翻譯期間起作用以指定初生多肽中氨基酸的序列或順序。術(shù)語"基因"包括編碼本發(fā)明所述全部或部分蛋白質(zhì)的合成的或者融合分子以及上述任一序列的互補(bǔ)核苷酸序列。如本文所用，術(shù)語"遺傳連鎖的"或者相似用語是指染色體上標(biāo)記基因座與第二個基因座足夠接近，其在50%以上的減數(shù)分裂中例如非隨機(jī)地一起遺傳。這個定義包括其中標(biāo)記基因座和第二個基因座形成相同基因的一部分的情況。另外，這個定義包括其中標(biāo)記基因座包含負(fù)責(zé)感興趣性狀的多態(tài)性的實施方案(換句話說，所述標(biāo)記基因座與表型直接"連鎖"或者"完全連鎖")。在另一個實施方案中，所述標(biāo)記基因座與第二個基因座是不同的，但在染色體上足夠接近，其在50%以上的減數(shù)分裂中一起遺傳。在每個世代遺傳連鎖基因座之間觀測到的重組百分比(厘摩(cM))小于50。在本發(fā)明的特殊實施方案中，遺傳連鎖基因座在染色體上可以相距45、35、25、15、10、5、4、3、2或lcM或更低。優(yōu)選地，所述標(biāo)記相距小于5cM，且最優(yōu)選大約0cM。"等位基因"是指細(xì)胞、個體植物或者群體內(nèi)的遺傳序列(如基因)的一種特殊形式，該特殊形式在序列上與相同基因的其它形式不同，在基因的序列中具有至少一個、通常具有一個以上的變異位點。在不同的等位基因之間不詞的這些變異位點的序列稱作"變異"、"多態(tài)性"或者"突變"。如本文所用，"多態(tài)性"是指不同物種、栽培種、株系或者植物個體的本發(fā)明基因座的等位基因之間核苷酸序列中的變化。"多態(tài)性位置"是基因序列中預(yù)先選擇的核苷酸位置。在一些情況中，遺傳多態(tài)性通過氨基酸序列變化而反映，因此多態(tài)性位置可以在多肽序列預(yù)定位置處氨基酸序列的多態(tài)性的位置。在其它情況中，多態(tài)性區(qū)域可以位于基因的非多肽編碼區(qū)中，例如在啟動子區(qū)域中，由此可以影響基因的表達(dá)水平。典型的多態(tài)性是缺失、插入或者取代。這些可以涉及單一核苷酸(單核苷酸多態(tài)性或SNP)或者兩或多個核苷酸。術(shù)語"多肽"和"蛋白質(zhì)"可互換應(yīng)用，是指可以或者不可以通過添加非氨基酸基團(tuán)修飾的單多肽鏈。應(yīng)理解這種多肽連可以與其它多肽或蛋白質(zhì)或者其它分子如輔因子結(jié)合。如本文所用，術(shù)語"蛋白質(zhì)"和"多肽"也可包括如本文所述本發(fā)明多肽的變體、突變體、修飾物、類似物和/或衍生物。多肽的。/。相同性通過GAP(NeedlemanandWunsch，1970)分析(GCG程序)確定，gapcreationpenalty=5，gapextensionpenalty=0.3。査i旬序歹U的長度為至少25個氨基酸，GAP分析排列對比兩個序列至少25個氨基酸的區(qū)域。更優(yōu)選地，查詢序列的長度為至少50個氨基酸，GAP分析排列對比兩個序列至少50個氨基酸的區(qū)域。更優(yōu)選地，查詢序列的長度為至少IOO個氨基酸，GAP分析排列對比兩個序列至少IOO個氨基酸的區(qū)域。還更優(yōu)選地，査詢序列的長度為至少250個氨基酸，GAP分析排列對比兩個序列至少250個氨基酸的區(qū)域。甚至優(yōu)選地，GAP分析排列對比兩個序列的全長。反義多核苷酸術(shù)語"反義多核苷酸"意味著DNA或RNA或者其組合，與編碼7^W或尸"d2多肽的特異mRNA分子的至少一部分互補(bǔ)且能干擾轉(zhuǎn)錄后事件如mRNA翻譯的分子。反義方法的應(yīng)用為本領(lǐng)域所熟知(見例如G.HartmannandS.Endres,ManualofAntisenseMethodology,Kluwer(1999))。反義技術(shù)在植物中的應(yīng)用參見Bourque，1995和Senior,1998所回顧。Bourque(1995)列出了作為一種基因失活方法反義序列怎樣用于植物系統(tǒng)中的大量實例。她還指出達(dá)到任何酶活性的100%抑制不是必需的，因為部分抑制更可能在該系統(tǒng)中產(chǎn)生可測量的改變。Senior(1998)指出反義方法目前是充分認(rèn)定的操縱基因表達(dá)的技術(shù)。本發(fā)明的反義多核苷酸在生理條件下與靶多核苷酸雜交。如本文所用，術(shù)語"在生理條件下雜交的反義多核苷酸"是指所述多核苷酸(全部或部分單鏈)至少能與編碼如圖2或7或者SEQIDNO:l-4或者15-18所示蛋白質(zhì)的mRNA在正常條件下在細(xì)胞、優(yōu)選水稻細(xì)胞中形成雙鏈多核苷酸。反義分子可包括相應(yīng)于結(jié)構(gòu)基因的序列或者實現(xiàn)控制基因表達(dá)或剪接事件的序列。例如，反義序列可相應(yīng)于本發(fā)明基因的靶向編碼區(qū)，或者5'-非翻譯區(qū)(UTR)或者3'-UTR或者這些區(qū)域組合。其可以與內(nèi)含子序列部分互補(bǔ)，內(nèi)含子序列可以在轉(zhuǎn)錄期間或之后被剪接除去，優(yōu)選僅互補(bǔ)于靶基33因的外顯子序列。就通常高多樣化的UTR而言，靶向這些區(qū)域提供了基因抑制的更高特異性。反義序列的長度應(yīng)為至少19個連續(xù)核苷酸，優(yōu)選至少50個核苷酸，更優(yōu)選至少100、200、500或1000個核苷酸?？梢允褂门c完整基因轉(zhuǎn)錄物互補(bǔ)的全長序列。所述長度最優(yōu)選為100-2000個核苷酸。反義序列與靶向轉(zhuǎn)錄物的相同性程度應(yīng)為至少90%，更優(yōu)選95-100%。反義RNA分子當(dāng)然可以包含不相關(guān)的序列，其可發(fā)揮穩(wěn)定所述分子的功能。催化性多核苷酸術(shù)語催化性多核苷酸/核酸是指DNA分子或者含有DNA的分子(在本領(lǐng)域也稱作"脫氧核酶")或者特異性識別獨特底物并催化該底物的化學(xué)修飾的RNA或含有RNA的分子(在本領(lǐng)域也稱作"核酶")。催化性核酸中的核酸堿基可以是堿基A、C、G、T(以及對于RNA的U)。典型地，催化性核酸含有特異性識別靶核酸以及核酸裂解酶活性的反義序列(在本文也稱作"催化結(jié)構(gòu)域")。特別適于本發(fā)明的核酶的類型是錘頭核酶(HaseloffandGerlach,1988;Perrimanetal，1992)和發(fā)夾核酶(Shippyetal,1999)。本發(fā)明的核酶及編碼所述核酶的DNA可以通過使用本領(lǐng)域熟知的方法化學(xué)合成。所述核酶也可以從與RNA聚合酶啟動子可操縱地連接的DNA分子制備(在轉(zhuǎn)錄時產(chǎn)生RNA分子)，所述啟動子例如是T7RNA聚合酶或者SP6RNA聚合酶的啟動子。因此，本發(fā)明還提供了編碼本發(fā)明的催化性多核苷酸的核酸分子，即DNA或cDNA。當(dāng)載體也含有與所述DNA分子可操縱地連接的RNA聚合酶啟動子時，所述核酶可以在體外與RNA聚合酶和核苷酸一起保溫而產(chǎn)生。在一個單獨的實施方案中，所述DNA可以插入表達(dá)盒或者轉(zhuǎn)錄盒中。在合成之后，RNA分子可以通過與具有穩(wěn)定核酶的能力并使其對于RNase具有抗性的DNA分子連接而修飾。如同本文所述反義多核苷酸一樣，本發(fā)明的催化性多核苷酸應(yīng)也能在"生理條件"下雜交靶核酸分子(例如編碼圖2或7或者SEQIDNO:l-4或15-18所示任何多肽的mRNA)，所述生理條件即在細(xì)胞內(nèi)的那些條件(尤其是在植物細(xì)胞如水稻細(xì)胞中的條件)。RNA干擾RNA干擾(RNAi)特別適用于特異性抑制特定蛋白質(zhì)的產(chǎn)生。盡管不希望受理論的限制，Waterhouseetal.(1998)已經(jīng)提供了dsRNA(雙鏈RNA)可用于降低蛋白質(zhì)產(chǎn)生的機(jī)制模型。這種技術(shù)依賴于dsRNA分子的存在，其含有與感興趣基因的mRNA、在本發(fā)明中編碼本發(fā)明多肽的mRNA或其一部分基本相同的序列。所述dsRNA可以方便地在重組載體或宿主細(xì)胞中從單啟動子產(chǎn)生，其中有義和反義序列的側(cè)翼是不相關(guān)的序列，這樣使得所述有義和反義序列能與形成環(huán)結(jié)構(gòu)的不相關(guān)序列雜交形成dsRNA分子。適用于本發(fā)明的dsRNA分子的設(shè)計和產(chǎn)生為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知，特別參見Waterhouseetal.(1998)，Smithetal.(2000)、WO99/32619、WO99/53050、WO99/49029和WO01/34815所述。在一個實例中，導(dǎo)入DNA，其指導(dǎo)與被失活的靶基因同源的至少部分雙鏈的RNA產(chǎn)物合成。因此所述DNA既包含有義序列也包含反義序列，但轉(zhuǎn)錄成RNA時可以雜交形成雙鏈RNA區(qū)。在優(yōu)選的實施方案中，所述有義和反義序列由間隔區(qū)分隔，所述間隔區(qū)包含當(dāng)轉(zhuǎn)錄成RNA時被剪接除去的內(nèi)含子。這種方式已經(jīng)示出獲得更高效率的基因沉默。雙鏈區(qū)可包含自任一或者兩個DNA區(qū)轉(zhuǎn)錄的一或兩個RNA分子。據(jù)認(rèn)為雙鏈分子的存在引發(fā)內(nèi)源植物系統(tǒng)的應(yīng)答，破壞雙鏈RNA以及來自靶植物基因的同源RNA轉(zhuǎn)錄物，有效地降低或者消除靶基因的活性。雜交的有義和反義序列的長度均應(yīng)為至少19個連續(xù)核苷酸，優(yōu)選至少30或50個核苷酸，更優(yōu)選至少100、200、500或者1000個核苷酸?？梢允褂孟鄳?yīng)于完整基因轉(zhuǎn)錄物的全長序列。所述長度最優(yōu)選為100-2000個核苷酸。所述有義和反義序列與靶向轉(zhuǎn)錄物的相同性程度應(yīng)至少為85%，優(yōu)選至少90%，更優(yōu)選為95-100%。RNA分子當(dāng)然可以包含不相關(guān)的序列，該序列可發(fā)揮穩(wěn)定該分子的功能。RNA分子可以在RNA聚合酶II或RNA聚合酶III啟動子控制下表達(dá)。后者的例子包括tRNA或snRNA啟動子。優(yōu)選的小干擾RNA(siRNA)分子包含與靶mRNA的大約19-21個連續(xù)核苷酸相同的核苷酸序列。優(yōu)選地，靶mRNA序列從二核苷酸AA開始，包含大約30-70%的GC-含量(優(yōu)選30-60%，更優(yōu)選40-60°/。，更優(yōu)選大約45%-55%)，且例如通過標(biāo)準(zhǔn)BLAST檢索確定，與除了其被導(dǎo)入的植物(優(yōu)選水稻)基因組中的靶序列之外的任何核苷酸序列均不具有高百分比相同本發(fā)明dsRNA分子的例子在實施例5中提供。進(jìn)一步的例子包括包含SEQIDNO:64-73(對于尸"W而言)和SEQIDNO:74-83(對于而言)所示序列的那些分子。微小RNA微小RNA調(diào)節(jié)是RNA沉默途徑的一個清楚限定的分支，使基因調(diào)控得以進(jìn)展，與常規(guī)RNAi/PTGS不同。微小RNA是小RNA的一個特殊類別，其在組構(gòu)為特征性反向重復(fù)中的基因樣元件中被編碼。當(dāng)轉(zhuǎn)錄時，微小RNA基因產(chǎn)生莖:環(huán)前體RNA，從中微小RNA隨后被加工。微小RNA的長度典型為大約21個核苷酸。釋放的miRNA被摻入含有發(fā)揮序列特異性基因阻抑作用的Argonaute蛋白的特定亞類的RISC-樣復(fù)合物中(見例如MillarandWaterhouse，2005;Pasquinellietal,2005;AlmeidaandAllshire,2005)。共抑制可以使用的另一種分子生物學(xué)方法是共抑制。共抑制的機(jī)制還未完全了解，但是認(rèn)為涉及轉(zhuǎn)錄后基因沉默(PTGS)，且與反義抑制的許多實例非常相似。所述方法包括將基因或其片段的額外拷貝以相對于啟動子有義方向?qū)胫参镏斜磉_(dá)。所述有義片段、其與靶基因區(qū)域的對應(yīng)以及其與靶基因的序列相同性程度如上文關(guān)于反義序列所述一樣。在一些情況中，基因序列的額外拷貝干擾靶植物基因的表達(dá)。參見WO97/20936和EP0465572中關(guān)于實施共抑制方法的內(nèi)容。核酸雜交在一個實施方案中，本發(fā)明的多核苷酸或其鏈在生理條件下與包含SEQIDNO:5-8、11-14或者19-25所示任一或多個核苷酸序列的多核苷酸雜交。在再一個實施方案中，本發(fā)明的多核苷酸或其鏈在嚴(yán)格條件下還與包含SEQIDNO:5-8、11-14或19-25所示任一或多個核苷酸序列的多核苷酸雜交。如本文所用，短語"嚴(yán)格條件"是指在此條件下多核苷酸、探針、引物和/或寡核苷酸與其靶序列雜交，但是與其它序列不雜交。嚴(yán)格條件是序36列依賴性的，且在不同情況中有所不同。較長的序列與較短的序列相比在較高溫度下特異性雜交。通常，針對特定序列在指定離子強(qiáng)度和pH條件下，選擇低于熱解鏈點(Tm)大約5t:的嚴(yán)格條件。所述Tm是這樣的溫度(在指定離子強(qiáng)度、pH和核酸濃度下)，即在此溫度下50%的與靶序列互補(bǔ)的探針與靶序列雜交達(dá)到平衡。由于靶序列通常是過量存在的，因此在Tm，50%的探針處于平衡狀態(tài)。典型地，嚴(yán)格條件是其中鹽濃度低于大約l.OM鈉離子，典型為大約0.01至l.OM鈉離子(或者其它鹽)，pH7.0-8.3,對于短探針、引物或者寡核苷酸(例如10nt-50nt)而言，溫度為至少大約3(TC，對于較長的探針、引物和寡核苷酸而言，溫度為至少大約6(TC。嚴(yán)格條件也可以通過加入去穩(wěn)定劑如甲酰胺而實現(xiàn)。嚴(yán)格條件為本領(lǐng)域技術(shù)人員所已知，可見于Ausubeletal.(如前),CurrentProtocolsInMolecularBiology,JohnWiley&Sons,N.Y.(1989)，6.3.1-6.3.6以及本發(fā)明的實施例所述。優(yōu)選地，所述條件是這樣的條件，即彼此至少大約65%、70%、75%、85%、90%、95%、98%或99%同源的序列典型地保持彼此雜交。嚴(yán)格雜交條件的一個非限制性例子是在高鹽緩沖液中在65°C雜交，隨后在50'C在0.2XSSC、0.0P/。BSA中洗滌一或多次，所述高鹽緩沖液包含6XSSC、50mMTris畫HCl(pH7.5)、lmMEDTA、0.02%PVP、0.02%Ficoll、0.02。/。BSA以及500mg/ml變性鮭精DNA。在另一個實施方案中，提供了可以與包含SEQIDNO:5-8、11-14或19-25所示核苷酸序列的核酸分子在中等嚴(yán)格條件下雜交的核酸序列。中等嚴(yán)格雜交條件的一個非限制性例子是在6XSSC、5XDenhardt's溶液、0.5%SDS和100mg/ml變性鮭精DNA中在55。C雜交，隨后在1XSSC、0.1%SDS中在37'C洗滌一或多次?？梢允褂玫钠渌械葒?yán)格條件為本領(lǐng)域所熟知，見例如Ausubdetal.(如前)禾口Kriegler，1990;GeneTransferAndExpression,ALaboratoryManual,StocktonPress,NY所述。在又一個實施方案中，本發(fā)明提供了可以與包含SEQIDNO:5-8、11-14或19-25所示核苷酸序列的核酸分子在低嚴(yán)格條件下雜交的核酸。低嚴(yán)格雜交條件的一個非限制性例子是在35%甲酰胺、5XSSC、50mMTris-HCl(pH7.5)、5mMEDTA、0.02%PVP、0.02%Ficoll、0.2%BSA、100mg/ml變性鮭精DNA、10%(wt/vol)硫酸葡聚糖中在4(TC雜交，隨后在2XSSC、25rnMTris-HCl(pH7.4)、5mMEDTA和0.1%SDS中在50"C洗滌一或多次?？梢允褂玫钠渌蛧?yán)格條件為本領(lǐng)域所熟知，見例如Ausubeletal.(如前)禾口Kriegler,1990，GeneTransferAndExpression,ALaboratoryManual,StocktonPress,NY以及本發(fā)明提供的實施例所。核酸構(gòu)建體，載體和宿主細(xì)胞本發(fā)明包括遺傳修飾的水稻植物的產(chǎn)生，其中與相應(yīng)的未修飾的植物相比，所述植物中具有和/或活性的多肽的表達(dá)降低。用于產(chǎn)生上述轉(zhuǎn)基因植物的核酸構(gòu)建體可以易于使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)產(chǎn)生。當(dāng)插入編碼mRNA的區(qū)域時，所述構(gòu)建體可包含內(nèi)含子序列。這些內(nèi)含子序列可有助于所述轉(zhuǎn)基因在植物中表達(dá)。術(shù)語"內(nèi)含子"以其通常的含義使用，是指被轉(zhuǎn)錄的但是不編碼蛋白質(zhì)且在翻譯之前從RNA中被剪接除去的遺傳節(jié)段。如果所述轉(zhuǎn)基因編碼翻譯產(chǎn)物,則內(nèi)含子可以摻入5'-UTR或者編碼區(qū)中，或者如果其不編碼翻譯產(chǎn)物則可以摻入轉(zhuǎn)錄區(qū)的任何地方。然而，在優(yōu)選的實施方案中，任何多肽編碼區(qū)均以單一開放讀框提供。本領(lǐng)域技術(shù)人員將意識到這種開放讀框可以通過逆轉(zhuǎn)錄編碼所述多肽的mRNA獲得。為了保證編碼感興趣mRNA的基因合適表達(dá)，所述核酸構(gòu)建體典型包含一或多個調(diào)節(jié)元件如啟動子、增強(qiáng)子以及轉(zhuǎn)錄終止序列或者聚腺苷酸化序列。這種元件為本領(lǐng)域所熟知?？梢蕴峁┌{(diào)節(jié)元件的轉(zhuǎn)錄起始區(qū)，以在植物中調(diào)節(jié)表達(dá)或者組成型表達(dá)。優(yōu)選地，表達(dá)至少在胚、胚乳、糠皮、發(fā)育中的種子和/或成熟種子(谷粒)的細(xì)胞中發(fā)生。在另一個實施方案中，調(diào)節(jié)元件可以是非特異于種子細(xì)胞的啟動子(如遍在蛋白啟動子或者CaMV35S或者增強(qiáng)的35S啟動子)?？捎糜诒景l(fā)明中的種子特異性啟動子的例子包括但不限于小麥低分子量麥谷蛋白啟動子(Colotetal，1987)、在小麥種子中表達(dá)ot-淀粉酶的啟動子(Stefanovetal.，1991)以及大麥醇溶蛋白啟動子(Brandtetal.,1985)。己經(jīng)描述了在植物細(xì)胞中具有活性的許多組成型啟動子。對于在植物中組成型表達(dá)合適的啟動子包括但不限于花椰菜花葉病毒(CaMV)35S啟動子、Figwort花葉病毒(FMV)35S啟動子、甘蔗桿狀病毒啟動子、鴨跖草黃斑駁病毒啟動子、來自核酮糖-l，5-二-磷酸羧化酶的小亞基的光誘導(dǎo)啟動子、水稻胞液磷酸丙糖異構(gòu)酶啟動子、擬南芥"ra6/A/w》)腺嘌呤磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶啟動子、水稻肌動蛋白1基因啟動子、甘露堿合酶和章魚堿合酶啟動子、Adh啟動子、蔗糖合酶啟動子、R基因復(fù)合物啟動子以及葉綠素OC/卩結(jié)合蛋白基因啟動子。這些啟動子已經(jīng)用于產(chǎn)生在植物中表達(dá)的DNA構(gòu)建體；見例如PCT出版物WO8402913所述。所有這些啟動子均已經(jīng)用于產(chǎn)生各種類型的植物可表達(dá)的重組DNA載體。啟動子可以通過如溫度、光或者應(yīng)激等因素調(diào)節(jié)。通常，調(diào)節(jié)元件提供在表達(dá)的遺傳序列的5'。所述構(gòu)建體也可以含有增強(qiáng)轉(zhuǎn)錄的其它元件，如nos3'或者ocs3'聚腺苷酸化區(qū)域或者轉(zhuǎn)錄終止子。5'非翻譯前導(dǎo)序列可以衍生自選擇的啟動子，所述啟動子表達(dá)本發(fā)明多核苷酸的異源基因序列，且如果需要則可以特異性修飾以增加mRNA的翻譯。見Kozieletal.(1996)關(guān)于轉(zhuǎn)基因的優(yōu)化表達(dá)的回顧。5'非翻譯區(qū)也可以得自植物病毒RNA(煙草花葉病毒、煙草蝕刻病毒、玉米矮花葉病毒、苜?；ㄈ~病毒等)，得自合適的真核基因、植物基因(小麥和玉米葉綠素a/b結(jié)合蛋白基因前導(dǎo)序列)，或者得自合成的基因序列。本發(fā)明不限于其中非翻譯區(qū)衍生自伴隨啟動子序列的5'非翻譯序列的構(gòu)建體。前導(dǎo)序列也可以衍生自不相關(guān)的啟動子或者編碼序列?？捎糜诒景l(fā)明的前導(dǎo)序列包含玉米Hsp70前導(dǎo)序列(U.S.5,362,865和U.S.5,859,347)以及TMVomega元件。轉(zhuǎn)錄的終止通過在嵌合載體中3'非翻譯序列與感興趣的多核苷酸可操縱地連接而完成。重組DNA分子的3'非翻譯區(qū)含有聚腺苷酸化信號，其在植物中起作用，導(dǎo)致在RNA的3'末端添加腺苷酸核苷酸。3'非翻譯區(qū)可以得自在植物細(xì)胞中表達(dá)的各種基因。通常使用的是胭脂堿合酶3'非翻譯區(qū)，來自豌豆小亞基Rubisco基因的3，非翻譯區(qū)，來自大豆7S種子貯存蛋白基因的3'非翻譯區(qū)。含有農(nóng)桿菌腫瘤誘導(dǎo)(Ti)質(zhì)?；虻木巯佘账嵝盘柕?'轉(zhuǎn)錄的非翻譯區(qū)也是合適的。典型地，所述核酸構(gòu)建體包含可選擇的標(biāo)記?？蛇x擇的標(biāo)記有助于已經(jīng)用外源核酸分子轉(zhuǎn)化的植物或細(xì)胞的鑒別與篩選?？蛇x擇的標(biāo)記基因可為水稻細(xì)胞提供抗生素或者除草劑抗性，或者使得可以利用底物如甘露糖。所述可選擇的標(biāo)記優(yōu)選賦予水稻細(xì)胞潮霉素抗性。優(yōu)選地，所述核酸構(gòu)建體被穩(wěn)定摻入植物基因組中。因此，所述核酸包含允許所述分子摻入基因組中的合適元件，或者所述構(gòu)建體置于可摻入植物細(xì)胞染色體中的合適載體中。本發(fā)明的一個實施方案包括重組載體，其包括至少一個本發(fā)明的多核苷酸分子，其插入能輸送該核酸分子至宿主細(xì)胞的任何載體中。這種載體含有異源核酸序列，即所述核酸序列非天然發(fā)現(xiàn)其與本發(fā)明的核酸分子相鄰、且優(yōu)選衍生自除了所述核酸分子衍生自其中的物種之外的物種。所述載體可以是原核或真核RNA或者DNA，典型是病毒或者質(zhì)粒。適于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染植物細(xì)胞或者適于建立轉(zhuǎn)基因植物的眾多載體已經(jīng)在例如Po匿elsetal.CloningVectors:ALaboratoryManual,1985,supp.1987;WeissbachandWeissbach,MethodsforPlantMolecularBiology,AcademicPress,1989禾口Gelvinetal，PlantMolecularBiologyManual,KluwerAcademicPublishers,1990中描述。典型地，植物表達(dá)載體包括例如在5，和3'調(diào)節(jié)序列轉(zhuǎn)錄控制下的一或多個克隆的植物基因以及顯性可選擇標(biāo)記。這種植物表達(dá)載體也可以含有啟動子調(diào)節(jié)區(qū)(例如控制可誘導(dǎo)或組成型表達(dá)、環(huán)境或發(fā)育調(diào)控的或者組織特異性表達(dá)的調(diào)節(jié)區(qū)域)、轉(zhuǎn)錄起始位點、核糖體結(jié)合位點、RNA加工信號、轉(zhuǎn)錄終止位點和/或聚腺苷酸化信號。本發(fā)明的另一個實施方案包括重組細(xì)胞，其包含用本發(fā)明的一或多種重組分子轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞。核酸分子轉(zhuǎn)化進(jìn)細(xì)胞中可以通過可以將核酸分子插入細(xì)胞中的任何方法實現(xiàn)。轉(zhuǎn)化技術(shù)包括但不限于轉(zhuǎn)染、電穿孔、顯微注射、脂染、吸附和原生質(zhì)體融合。重組細(xì)胞可以保持單細(xì)胞，或者可以生長為組織、器官或者多細(xì)胞生物體。本發(fā)明的轉(zhuǎn)化的核酸分子可以保持在染色體外，或者可以整合進(jìn)轉(zhuǎn)化的(即重組的)細(xì)胞的染色體內(nèi)的一或多個位點，由此保留其被表達(dá)的能力。優(yōu)選的宿主細(xì)胞是植物細(xì)胞，更優(yōu)選是谷物細(xì)胞，更優(yōu)選是水稻細(xì)胞。轉(zhuǎn)基因植物轉(zhuǎn)基因水稻(在本文也稱作遺傳修飾的水稻)可以使用本領(lǐng)域已知的技術(shù)產(chǎn)生，如A.Slateretal.，PlantBiotechnology-TheGeneticManipulationofPlants,OxfordUniversityPress(2003)以及P.ChristouandH.Klee,HandbookofPlantBiotechnology,JohnWileyandSons(2004)所述。在優(yōu)選的實施方案中，轉(zhuǎn)基因植物對于已經(jīng)導(dǎo)入的每個多核苷酸(轉(zhuǎn)基因)均是純合的，由此其后代對于希望的表型不分離。轉(zhuǎn)基因植物對于導(dǎo)入的轉(zhuǎn)基因也可以是雜合的，例如在已經(jīng)從雜種種子生長的F1后代中。這種40勢這樣的優(yōu)勢。已經(jīng)描述了直接將基因輸送至細(xì)胞中的四種普通方法(l)化學(xué)方法(Grahametal.,1973);(2)物理方法，如顯微注射(Capecchi,1980)、電穿孔法(見例如WO87/06614、US5,472,869、5,384,253、WO92/09696和WO93/21335)和基因槍(見例如US4，945，050和US5,141,131);(3)病毒載體(Clapp,1993;Luetal，1993;Eglitisetal.，1988);(4)受體介導(dǎo)機(jī)制(Curieletal.，1992;Wagneretal，1992)?？梢允褂玫募铀俜椒òɡ缥⒘＾Z擊等。將轉(zhuǎn)化核酸分子輸送至植物細(xì)胞的方法的一個例子是微粒轟擊法。這種方法已經(jīng)由Yangetal.，ParticleBombardmentTechnologyforGeneTransfer,OxfordPress,Oxford,England(1994)綜述。非生物學(xué)顆粒(微粒)可以用核酸包被，并且通過推力輸送至細(xì)胞中。所述顆粒的例子包括包含鎢、金、鉑等的那些顆粒。除了是可再生地轉(zhuǎn)化單子葉植物的有效方式之外，微粒轟擊的一個特別優(yōu)勢之處是既不需要分離原生質(zhì)體，也不需要對于農(nóng)桿菌感染的易感性。通過加速方法將DNA輸送至玉米(Zeamqys)細(xì)胞中的方法的一個舉例性實施方案是生物彈(biolistics)a-顆粒輸送系統(tǒng)，其可用于推動用DNA包被的顆粒透過屏如不銹鋼或者Nytex屏到達(dá)懸浮培養(yǎng)的玉米細(xì)胞覆蓋的濾膜表面上。適用于本發(fā)明中的顆粒輸送系統(tǒng)是可得自Bio-RadLaboratories的氦加速PDS-1000/He槍。對于轟擊而言，可以將懸浮液中的細(xì)胞集中于濾膜上。將含有被轟擊的細(xì)胞的濾膜置于微粒檔板(stoppingplate)下方合適距離。如果需要，也可以將一或多個屏置于槍與被轟擊的細(xì)胞之間?；蛘?，可以將不成熟的胚或者其它靶細(xì)胞排列在固體培養(yǎng)基上。被轟擊的細(xì)胞以合適距離位于微粒檔板之下。如果需要，在加速裝置和被轟擊的細(xì)胞之間也可以放置一或多個屏。通過使用本文所述的技術(shù)，可以獲得直至1000或更多個瞬時表達(dá)標(biāo)記基因的細(xì)胞轉(zhuǎn)化灶(foci)。在轟擊后48小時表達(dá)外源基因產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化灶中細(xì)胞的數(shù)目通常是1-10個，平均為1-3個。在轟擊轉(zhuǎn)化中，可以優(yōu)化轟擊前培養(yǎng)條件和轟擊參數(shù)以產(chǎn)生最大數(shù)目的穩(wěn)定轉(zhuǎn)化體。在這種技術(shù)中，轟擊的物理和生物學(xué)參數(shù)均是重要的。物理因素是參與操縱DNA/微粒沉淀的那些因素或者影響巨粒(macroprojectile)或微粒的飛行和速度的那些因素。生物學(xué)因素包括在轟擊之前和之后立即41參與細(xì)胞操縱的所有步驟，幫助減輕與轟擊相關(guān)的損傷的對耙細(xì)胞的滲透調(diào)節(jié)，以及轉(zhuǎn)化DNA的性質(zhì)，例如線性化DNA或者完整的超螺旋質(zhì)粒。確信轟擊前操作對于成功轉(zhuǎn)化不成熟的胚是非常重要的。在另一個實施方案中，質(zhì)體可以被穩(wěn)定轉(zhuǎn)化。關(guān)于在高等植物中質(zhì)體轉(zhuǎn)化的方法包括基因槍輸送含有可選擇標(biāo)記的DNA并且通過同源重組使得該DNA耙向于質(zhì)體基因組(U.S.5,451，513、U.S.5，545，818、U.S.5,877,402、U.S.5,932479和WO99/05265)。因此，預(yù)期希望可以在小規(guī)模研究中調(diào)整轟擊參數(shù)的各個方面以充分優(yōu)化條件。特別希望可以調(diào)整物理參數(shù)如缺口距離、飛行距離、組織距離以及氦壓。也可以通過更改影響受體細(xì)胞生理狀態(tài)、且因此可影響轉(zhuǎn)化和整合效率的條件使得損傷降低因素最小化。例如，可以調(diào)整受體細(xì)胞的滲透狀態(tài)、組織水合作用和傳代培養(yǎng)階段或者細(xì)胞周期以優(yōu)化轉(zhuǎn)化。本領(lǐng)域技術(shù)人員通過本發(fā)明的揭示將獲知其它常規(guī)調(diào)整方法。農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)移是將基因?qū)胫参锛?xì)胞的廣泛應(yīng)用的系統(tǒng)，因為可以將DNA導(dǎo)入完整的植物組織中，從而不需要從原生質(zhì)體中再生完整植物。使用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的植物整合載體將DNA導(dǎo)入植物細(xì)胞中為本領(lǐng)域所熟知(見例如US5，177，010、US5,104,310、US5，004,863、US5，159，135)。另外，T-DNA的整合是相對精確的方法，產(chǎn)生很少的重排。被轉(zhuǎn)移的DNA區(qū)域由邊界序列限定，且在植物基因組中通常插入間插DNA?，F(xiàn)代農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化載體能在大腸桿菌(E.coli)以及農(nóng)桿菌中復(fù)制，使得可以對其方便地進(jìn)行操縱(Kleeetal,In:PlantDNAInfectiousAgents,HohnandSchell，eds.,Springer-Verlag，NewYork,pp.179-203(1985)。此外，農(nóng)桿菌介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移的載體中的技術(shù)優(yōu)勢改善了載體中基因和限制位點的排列，促進(jìn)了能表達(dá)多種多肽編碼基因的載體的構(gòu)建。所述載體具有便利的多接頭區(qū)，兩側(cè)是啟動子和聚腺苷酸化位點以指導(dǎo)插入的多肽編碼基因的表達(dá)，所述載體適于本發(fā)明。另外，既含有armedTi基因也含有disarmedTi基因的農(nóng)桿菌可用于轉(zhuǎn)化。在農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化是有效的那些植物變種中，由于基因轉(zhuǎn)移的易做到和限定性質(zhì)，這是一種可選方法。使用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化方法形成的轉(zhuǎn)基因植物在一個染色體上典型含有一個遺傳基因座。這種轉(zhuǎn)基因植物可以被認(rèn)為對于添加的基因是半合子的。更優(yōu)選的是對于添加的結(jié)構(gòu)基因是純合的轉(zhuǎn)基因植物，即轉(zhuǎn)基因植物含有兩個添加的基因，一個基因位于一對染色體的每個染色體上的相同位置。純合轉(zhuǎn)基因植物可以通過有性交配(自花授粉)含有一個添加的基因的獨立分離的轉(zhuǎn)基因植物、使產(chǎn)生的一些種子萌發(fā)以及針對感興趣的基因分析所得植物而獲得。也應(yīng)理解兩個不同的轉(zhuǎn)基因植物也可以交配以產(chǎn)生含有兩個獨立分離外源基因的后代。合適后代的自花授粉可以產(chǎn)生對于這兩個外源基因均是純合的植物。也可以進(jìn)行與親代植物的回交以及與非轉(zhuǎn)基因植物的異型雜交，這是植物繁殖的方式。對于通常用于不同性狀和作物的其它培育方法的描述可見于Fehr,In:BreedingMethodsforCultivarDevelopment,WilcoxJ.ed.，AmericanSocietyofAgronomy,MadisonWis.(1987)。植物原生質(zhì)體的轉(zhuǎn)化可以使用基于磷酸鈣沉淀、聚乙二醇處理、電穿孔以及這些處理方法的組合而實現(xiàn)。這些系統(tǒng)應(yīng)用于不同植物變種依賴于從原生質(zhì)體再生特定的植物株的能力。從原生質(zhì)體再生谷物的舉例方法在(Fujimuraetal"1985;Toriyamaetal"1986;Abdullahetal.，1986)中描述。也可以使用其它的細(xì)胞轉(zhuǎn)化方法，這些方法包括但不限于通過將DNA直接轉(zhuǎn)移進(jìn)花粉中、通過將DNA直接注射進(jìn)植物的生殖器官中、或者通過將DNA直接注射進(jìn)不成熟胚的細(xì)胞中即隨后再水合粉狀胚而將DNA導(dǎo)入植物中。植物從單一植物原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化體或者從多個轉(zhuǎn)化的外植體的再生、發(fā)育和培育為本領(lǐng)域所熟知(Weissbachetal.，In:MethodsforPlantMolecularBiology,AcademicPress,SanDiego,Calif.,(1988)。這種再生和生長過程典型包括選擇轉(zhuǎn)化的細(xì)胞、培養(yǎng)那些個體化的細(xì)胞從胚發(fā)育的通常階段至生根的小植物階段等步驟。相似地再生轉(zhuǎn)基因胚和種子。隨后將所得轉(zhuǎn)基因的生根的苗種植于合適的植物生長基質(zhì)如土壤中。含有外來的、外源基因的植物的發(fā)育或再生為本領(lǐng)域所熟知。優(yōu)選地，使再生的植物自花授粉，提供純合的轉(zhuǎn)基因植物。此外，可以將得自所述再生植物的花粉與農(nóng)業(yè)重要品系的種子生長植物雜交。相反地，將這些重要品系的植物花粉用于對再生植物授粉。使用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法栽培本發(fā)明的含有希望的外源核酸的轉(zhuǎn)基因植物。通過導(dǎo)入外源核酸而將遺傳變異導(dǎo)入植物中以轉(zhuǎn)化谷類植物如水稻以及從原生質(zhì)體或者不成熟的植物胚再生植物的方法為本領(lǐng)域所熟知，見例如加拿大專利申請No.2,092,588、澳大利亞專利申請No.61781/94、澳大利亞專利No.667939、美國專利No.6,100，447、國際專利申請PCT/US97/10621、美國專利No.5,589,617、美國專利No.6，541，257所述，以及在專利說明書W099/14314中闡述的其它方法。優(yōu)選地，轉(zhuǎn)基因水稻植物通過根癌農(nóng)桿菌G4graZ7acfen'Mm^we/ac/ms)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化方法產(chǎn)生。水稻的農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化的例子在本文實施例5中提供。攜帶希望的核酸構(gòu)建體的載體可以被導(dǎo)入組織培養(yǎng)植物或外植體的可再生的水稻細(xì)胞或合適植物系統(tǒng)如原生質(zhì)體。可再生的水稻細(xì)胞優(yōu)選來自不成熟胚的盾片、成熟胚、衍生自其中的愈傷組織或者分生組織。為了證實轉(zhuǎn)基因細(xì)胞和植物中轉(zhuǎn)基因的存在，可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增或者Southern印跡分析。轉(zhuǎn)基因的表達(dá)產(chǎn)物可以根據(jù)產(chǎn)物的性質(zhì)以各種方式檢測，包括Western印跡和酶測定法。一種特別有用的在不同植物組織中量化蛋白質(zhì)表達(dá)和檢測復(fù)制的方法是使用報道基因如GUS。一旦獲得轉(zhuǎn)基因植物，則可以使其生長以產(chǎn)生具有希望表型的植物組織或者部分?？梢允斋@所述植物組織或者植物部分，和/或收集種子。所述種子可作為源頭，生長具有希望特性的組織或部分的另外的植物。標(biāo)記輔助選擇當(dāng)在傳統(tǒng)培育程序中與回歸親本回交時，標(biāo)記輔助選擇方法是選擇雜合植物的一種公認(rèn)方法。每個回交世代的植物群對于在回交群中以1:1比率正常存在的感興趣的基因而言是雜合的，所述分子標(biāo)記可用于區(qū)分基因的兩個等位基因。通過從例如幼苗中提取DNA并用特異性標(biāo)記檢測漸滲的希望性狀，初步選擇植物進(jìn)行進(jìn)一步回交，同時將精力和資源集中于少數(shù)植物上。為了進(jìn)一步加速回交程序，可以從不成熟的種子(開花后25天)中切除胚，并使其在無菌條件下在營養(yǎng)培養(yǎng)基中生長，而不是使全部種子成熟。在三葉階段組合應(yīng)用這種稱作"胚拯救"的方法與DNA提取方法，并且分析希望的基因型，可以快速選擇攜帶希望性狀的植物，該植物可以在溫室或田野中培育至成熟，隨后與回歸親本進(jìn)一步回交。在本發(fā)明方法中可以使用能檢測或F"詔基因的任何本領(lǐng)域已知的分子生物學(xué)技術(shù)。這種方法包括但不限于使用核酸擴(kuò)增、核酸測序、核44酸與合適標(biāo)記的探針雜交、單鏈構(gòu)象分析(SSCA)、變性梯度凝膠電泳(DGGE)、異源雙鏈體分析(HET)、化學(xué)切割分析(CCM)、催化性核酸切割或其組合(見例如Lemieux，2000;Langridgeetal.,2001)。本發(fā)明還包括使用分子標(biāo)記技術(shù)以檢測與(例如)賦予希望表型的或基因的等位基因連鎖的多態(tài)性。這種方法包括檢測或分析限制片段長度多態(tài)性(RFLP)、RAPD、擴(kuò)增片段長度多態(tài)性(AFLP)和微衛(wèi)星(簡單序列重復(fù)，SSR)多態(tài)性。緊密連鎖的標(biāo)記可以易于通過本領(lǐng)域熟知的方法獲得，如Langridgeetal.(2001)回顧的分離群體分組分析法。"聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)"是這樣的反應(yīng)，其中復(fù)制拷貝由靶多核苷酸組成，使用由"上游"和"下游"引物組成的"一對引物"或者"一組引物"以及聚合催化劑如DNA聚合酶，典型為熱穩(wěn)定的聚合酶。PCR方法為本領(lǐng)域所己知，見例如"PCR"(Ed.MJ.McPhersonandS.GMoller(2000)BIOSScientificPublishersLtd,Oxford)所教導(dǎo)?？梢詫δ孓D(zhuǎn)錄分離自植物細(xì)胞的mRNA獲得的cDNA進(jìn)行PCR。然而，如果PCR是針對分離自植物的基因組DNA進(jìn)行，則其通常較簡單。引物是寡核苷酸序列，其能以序列特異性方式與靶序列雜交并且在PCR期間被延伸。擴(kuò)增子或者PCR產(chǎn)物或者PCR片段或者擴(kuò)增產(chǎn)物是延伸產(chǎn)物，其包含所述引物以及新合成的靶序列的拷貝。多重PCR系統(tǒng)含有多組引物，導(dǎo)致同時產(chǎn)生一個以上的擴(kuò)增子。引物可以與靶序列完全匹配，或者其可以含有內(nèi)部錯配堿基，可以導(dǎo)致在特定靶序列中導(dǎo)入限制酶或者催化性核酸識別/切割位點。引物也可以含有另外的序列和/或含有修飾或標(biāo)記的核苷酸以便于捕獲或者檢測擴(kuò)增子。DNA熱變性、引物與其互補(bǔ)序列退火以及用聚合酶延伸退火的引物的重復(fù)循環(huán)導(dǎo)致靶序列指數(shù)式擴(kuò)增。術(shù)語耙或耙序列或者模板是指被擴(kuò)增的核酸序列。直接測序核苷酸序列的方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知，可見于例如Ausubeletal.(如前)禾卩Sambrooketal.(如前)所述?？梢酝ㄟ^任何合適的方法進(jìn)行測序，例如雙脫氧測序法、化學(xué)測序法或其變化方法。直接測序具有確定特定序列的任何堿基對中的變化的優(yōu)勢。基于雜交的檢測系統(tǒng)包括但不限于TaqMan測定和分子信標(biāo)。TaqMan測定(US5,962,233)使用等位基因特異性(ASO)探針，在其一端具有供體染料以及在另一端具有受體染料，由此所述染料對通過熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)而相互作用。靶序列通過被修飾為包括加入標(biāo)記的ASO探針的PCR擴(kuò)增。對PCR條件進(jìn)行調(diào)整，由此一個核苷酸的差異即影響探針的結(jié)合。由于Taq聚合酶的5，核酸酶活性，因此在PCR期間完全互補(bǔ)的探針被切割，而具有一個錯配堿基的探針不被切割。探針的切割使得供體染料與猝滅受體染料解離，明顯增加供體熒光。TaqMan測定的另一種選擇是分子信標(biāo)測定(US5,925,517)。在分子信標(biāo)測定中，ASO探針含有位于靶特異性物質(zhì)(species)側(cè)翼的互補(bǔ)序列，由此形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)。發(fā)夾的環(huán)與靶序列互補(bǔ)，而發(fā)夾的每個臂均含有供體或者受體染料。當(dāng)未與供體序列雜交時，所述發(fā)夾結(jié)構(gòu)使得供體和受體染料靠近在一起，從而熄滅供體熒光。然而當(dāng)與特定靶序列雜交時，所述供體和受體染料被分開，隨之熒光增加直至900倍。分子信標(biāo)可以與通過PCR擴(kuò)增靶序列聯(lián)合應(yīng)用，提供了實時檢測靶序列的存在的方法或者可以在擴(kuò)增后使用。TILLING本發(fā)明的植物可以使用稱作TILLING(靶向誘導(dǎo)基因組局部損傷(TargetingInducedLocalLesionsINGenomes))的方法產(chǎn)生。第一步，通過用化學(xué)誘變劑處理種子(或者花粉)而在植物群體中誘導(dǎo)導(dǎo)入的突變?nèi)缧碌膯螇A基對改變，然后使植物產(chǎn)生下一代，其中所述突變被穩(wěn)定遺傳。提取DNA，貯存該群體所有成員的種子以產(chǎn)生可以隨時重復(fù)存取的資源。對于TILLING測定，設(shè)計PCR引物以特異性擴(kuò)增感興趣的單一基因靶。如果靶是基因家族的成員或者多倍體基因組的一部分，則特異性尤為重要。其次，可以使用染料標(biāo)記的引物從多個個體的混合DNA中擴(kuò)增PCR產(chǎn)物。這些PCR產(chǎn)物被變性和再退火，使得錯配的堿基對形成。錯配或者異源雙鏈體是指天然發(fā)生的單核苷酸多態(tài)性(SNP)(即所述群體中的一些植物很可能具有相同多態(tài)性)以及誘導(dǎo)的SNP(即很少的個體植物可能展示突變)。在異源雙鏈體形成之后，使用內(nèi)切核酸酶如識別并切割錯配DNA的Ce/I是在TILLING群體中發(fā)現(xiàn)新SNP的關(guān)鍵。使用這種方法，可以篩選數(shù)千種植物以鑒別在基因組的任何基因或特定區(qū)域中具有單堿基改變以及小插入或缺失(1-30bp)的任何個體。被測定的基因組片段的大小可以是0.3-1.6kb。在8-倍混合中，每個測定具有1.4kb片段(扣除片段的末端，其中由于噪聲而使得難以進(jìn)行SNP檢測)和96個泳道，這種組合允許每一次測定可篩選直至百萬個基因組DNA的堿基對，由此TILLING是一種高通量技術(shù)。TILLING在SladeandKnauf(2005)和Henikoffetal.(2004)中進(jìn)一步描述。除了可以有效檢測突變之外，高通量TILLING技術(shù)對于天然多態(tài)性的檢測也是理想的。因此，通過與已知序列形成異源雙鏈體而查詢未知同源DNA示出多態(tài)性位點的數(shù)目和位置。核苷酸改變以及小插入和缺失均得以鑒別，包括至少一些重復(fù)數(shù)目多態(tài)性。這被稱作Ecotilling(Comaietal.2004)。每個SNP均由其在幾個核苷酸內(nèi)的大約位置記錄。因此，每個單元型可以基于其遷移率而存檔。使用用于錯配-切割測定的相同擴(kuò)增的DNA等份可以相對較小增加付出而獲得序列數(shù)據(jù)。通過其與所述多態(tài)性的接近性選擇用于單一反應(yīng)的左側(cè)或者右側(cè)測序引物。序列分析儀軟件進(jìn)行多重對比，揭示堿基改變，在每種情況中均證實了凝膠條帶。Ecotilling與目前用于大多數(shù)SNP揭示的完全測序方法相比可以更簡便地進(jìn)行?？梢院Y選含有陣列的生態(tài)型DNA的平板，而不用篩選來自誘變的植物的DNA庫。因為檢測是在接近堿基對分辨率的凝膠上并且背景模式在泳道間是一致的，因此可以匹配相同大小的條帶，由此在一個步驟中揭示SNP并確定其基因型。在這種方式中，最后的SNP測序簡便且有效，可以對用于篩選的相同PCR產(chǎn)物的等份進(jìn)行DNA測序。誘變程序本領(lǐng)域已知產(chǎn)生突變水稻植物品系的技術(shù)?？捎糜诋a(chǎn)生突變體水稻植物的誘變劑的例子包括放射誘變和化學(xué)誘變。突變體也可以通過如T-DNA插入和轉(zhuǎn)座子誘導(dǎo)的誘變產(chǎn)生。所述誘變程序可以對于水稻植物的任何親代細(xì)胞進(jìn)行，例如種子或者組織培養(yǎng)中的親代細(xì)胞?；瘜W(xué)誘變劑可通過化學(xué)性質(zhì)分類，例如垸化劑、交聯(lián)劑等?？捎玫幕瘜W(xué)誘變劑包括但不限于N-乙基-N-亞硝基脲(ENU)、N-甲基-N-亞硝基脲(MNU)、鹽酸甲基芐肼、苯丁酸氮芥、環(huán)磷酰胺、甲磺酸甲酯(MMS)、甲磺酸乙酯(EMS)、硫酸二乙酯、丙烯酰胺單體、三亞乙基三聚氰胺(TEM)、47苯丙氨酸氮芥、氮芥、長春花新堿、二甲基亞硝胺、N-甲基-N'-硝基-亞硝基胍(MNNG)、7,12-二甲基苯并蒽(DMBA)、環(huán)氧乙垸、六甲基磷酰胺，以及bisulfan。誘導(dǎo)突變的合適輻射的例子是通過Y射線輻射，如由銫137放射源提供。所述y射線輻射優(yōu)選以大約60-200Krad的劑量提供給植物細(xì)胞，最優(yōu)選大約60-90Krad的劑量。典型地，將植物暴露于誘變劑持續(xù)足夠時間以達(dá)到希望的遺傳修飾，而不足以完全破壞細(xì)胞的生存力及其再生為植物的能力。抗體特異性結(jié)合或F"d2多肽的單克隆或多克隆抗體可用于本發(fā)明的一些方法中。術(shù)語"特異性結(jié)合"是指抗體結(jié)合或多肽而不結(jié)合水稻的其它蛋白質(zhì)、尤其是水稻種子蛋白的能力。如本文所用，術(shù)語"表位"是指抗體結(jié)合的FaW或F^/2多肽的區(qū)域?？梢詫⒈砦唤o予動物以產(chǎn)生抗該表位的抗體，然而，在完整多肽的情況中，用于本文所述方法的抗體優(yōu)選特異性結(jié)合表位區(qū)。如果希望是多克隆抗體，則用如圖2或7或者SEQIDNO:l-4或者15-18所示那些免疫原性多肽免疫接種選擇的哺乳動物(例如小鼠、兔、山羊、馬等)。收集經(jīng)免疫動物的血清并根據(jù)已知程序處理。如果含有多克隆抗體的血清含有其它抗原的抗體，則該多克隆抗體可以通過免疫親和性層析純化。產(chǎn)生和處理多克隆抗血清的技術(shù)為本領(lǐng)域所已知。為了可以產(chǎn)生這種抗體，本發(fā)明還提供了使本發(fā)明的肽或其片段，其半抗原化至另一種在動物中用作免疫原的肽?？贡景l(fā)明多肽的單克隆抗體也可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員容易地產(chǎn)生。通過雜交瘤產(chǎn)生單克隆抗體的一般方法為本領(lǐng)域所熟知。無限增殖的抗體產(chǎn)生細(xì)胞系可以通過細(xì)胞融合產(chǎn)生，也可以通過其它技術(shù)如用致癌DNA直接轉(zhuǎn)化B淋巴細(xì)胞或者用Epstein-Barr病毒轉(zhuǎn)染而獲得。產(chǎn)生的單克隆抗體群可以針對各種性質(zhì)篩選，即針對同種型和表位親和性進(jìn)行篩選。另一種技術(shù)包括篩選噬菌體展示文庫，其中例如噬菌體在其用大量不同的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)包被的表面上表達(dá)scFv片段。這種技術(shù)為本領(lǐng)域所熟知。對于本發(fā)明而言，除非特別指定相反含義，術(shù)語"抗體"包括完整抗體的保留其靶抗原結(jié)合活性的片段。這種片段包括Fv、F(ab')和F(ab')2片段，以及單鏈抗體(scFv)。此外，所述抗體及其片段可以是人源化抗體，例如EP-A-239400所述。抗體可以結(jié)合固體支持物和/或在合適的容器中包裝于試劑盒中，試劑盒中還包括合適的試劑、對照物、說明書等。優(yōu)選地，所述抗體被可檢測地標(biāo)記。允許直接測量抗體結(jié)合的可檢測的標(biāo)記的例子包括放射性標(biāo)記、熒光團(tuán)、染料、磁珠、化學(xué)發(fā)光劑、膠體顆粒等。允許間接測量結(jié)合的標(biāo)記的例子包括酶，其中底物可提供給有色或熒光產(chǎn)物?？蓹z測的標(biāo)記的其它例子包括共價結(jié)合酶，其在加入合適底物之后能提供可檢測的產(chǎn)物信號。用于綴合物的合適的酶的例子包括辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶、蘋果酸脫氫酶等。在不可商購的情況中，這種抗體-酶綴合物易于通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的技術(shù)產(chǎn)生。可檢測的標(biāo)記的另一例子包括生物素，其高親和性結(jié)合抗生物素蛋白或者鏈霉抗生物素蛋白；熒光染料(例如藻膽蛋白、藻紅蛋白和別藻藍(lán)蛋白；熒光素和Texas紅)，其可與熒光激活細(xì)胞分選儀一起應(yīng)用；半抗原等。優(yōu)選地，所述可檢測的標(biāo)記允許在平板發(fā)光計中直接測量，例如生物素。這種標(biāo)記的抗體可用于本領(lǐng)域已知技術(shù)中以檢測本發(fā)明多肽。實施例實施例l:材料與方法^伊,欽連攻勸對于脂肪酸及其它分析，除非特別指出，則如下所述從水稻谷粒中提取總脂質(zhì)。在一些情況中，由一半谷粒組成的樣品用于提取，含有胚的另一半谷粒用于胚拯救。該技術(shù)也可以用于其他谷物。將一粒發(fā)育中的種子或者半粒種子在濾紙之間擠壓并置于試管中。加入2ml0.5M甲醇鈉，緊密密封該試管，然后在8(TC保溫10分鐘。在試管冷卻后，加入O.lml冰乙酸，隨后加入2ml蒸餾水和2ml石油精。將該混合物渦旋10秒鐘，在各相分離后，將上層石油層移至小試管中。向該試管中加入大約lg的碳酸氫鉀/硫酸鈉混合物并渦旋所得混合物。將樣品溶液移至自動取樣器小瓶中，在-2CTC于冷凍裝置中貯存直至進(jìn)行如Soutjesdicetal.(2002)所述GC分析。A就才量鄉(xiāng)W微顏(S/妙母r膽)這個方法是對BlighandDyer(1959)所述方法加以調(diào)整而得。將1.5ml的CHCyMeOH(l:2)加入于0.4ml緩沖液中的組織樣品中，劇烈渦旋樣品。再加入0.5ml的CHC13，再次渦旋該樣品。加入0.5ml的H20，再次渦旋該樣品。將該試管在3000rpm短暫離心以分離各相，白色沉淀物出現(xiàn)在分界處。將有機(jī)相(下層)移至新的試管中并在真空下濃縮。如果提取酸性脂質(zhì)，則加入0.5ml的1%HC104代替0.5ml的H20。上述程序的體積可以更改，只要保持CHCl3/MeOH/H20比率即可。劍吝微麼伊斷扁)以定量線定微齢量為了直接從谷粒制備FAME,精確稱重10-15粒種子并將其移至玻璃管中。向每個種子樣品中加入內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)10pl的lmg/ml17:0-甲酯。向每個試管中加入0.75ml的IN鹽酸甲醇(methanolic-HCl，Supelco)，蓋緊蓋子并在80°C回流至少2-3小時或者過夜。冷卻樣品，加入0.5mlNaCl(0.9%w/v)，隨后加入300nl己烷。再次蓋上試管蓋子并劇烈渦旋。將上層己烷相(200-250^U)小心移至Eppendorf管中。在氮氣下使樣品完全干燥。將干燥的FAME樣品溶解于20|il己烷中并移至小瓶中的圓錐形玻璃襯管中以進(jìn)行GC分析?？v氣鰣叛遂飾分橋如下所述通過堿性轉(zhuǎn)甲基作用制備脂肪酸甲酯。將一個種子樣品在濾紙盤之間擠壓。然后將移至濾紙盤中的脂質(zhì)中的脂肪酸在2mL的0.02M甲醇鈉中于80°C甲基化10分鐘，隨后冷卻30分鐘。然后加入O.lmL冰乙酸，隨后依次加入2mL蒸餾水和2mL己烷。在渦旋及相分離之后，將含有脂肪酸甲酯的上層己烷層移至微量小瓶中。通過如先前所述(Stoutjesdijketal.,2002)的氣液層析法分析脂肪酸甲酯。50如下所述對水稻(cv.Nipponbare)進(jìn)行轉(zhuǎn)化。i)愈傷組織誘導(dǎo)與培養(yǎng)去除成熟谷粒的外殼，然后將其浸泡在70%EtOH中30秒以除去外層蠟狀物。將清潔的谷粒用無菌H20洗滌3次并浸泡在25%漂白液(加入2滴Tween-20去污劑)中振蕩20分鐘以使其表面無菌。在無菌條件下，將該谷粒用70%EtOH短暫漂洗，用無菌H20徹底洗滌8-10次并鋪板于N6D培養(yǎng)基上。將平板用Micropore帶密封，在28。C全日照保溫。6-8周后產(chǎn)生愈傷組織，然后將其移至NB培養(yǎng)基中。將其用石蠟紙密封，置于28°C，每4周在新鮮NB平板上傳代培養(yǎng)。在5次以上傳代培養(yǎng)之后，愈傷組織不再用于轉(zhuǎn)化。ii)轉(zhuǎn)化從傳代培養(yǎng)平板中挑取看起來健壯的愈傷組織，將其移至新鮮NB平板上，密度為25-30個愈傷組織/平板。兩天后，建立含有使用的構(gòu)建體的農(nóng)桿菌菌株的新鮮培養(yǎng)物，在28。C保溫。培養(yǎng)基是補(bǔ)加了lOOpM乙酰丁香酮的NB培養(yǎng)基。將愈傷組織在細(xì)胞懸浮液中浸泡IO分鐘。在排出過量的懸浮液之后，將愈傷組織置于補(bǔ)加了100pM乙酰丁香酮的NB培養(yǎng)基上，在25'C在黑暗中保溫3天(共培養(yǎng))。在共培養(yǎng)步驟之后，將愈傷組織在試管中用含有150mg/mlTimetin的無菌水輕輕洗滌3次。將愈傷組織在濾紙上吸干水分，并且以合適間隔鋪板于NBCT平板上(如果使用卡那霉素可選擇的標(biāo)記基因或者合適的其它選擇劑，則該平板中含有100|iig/ml卡那霉素，150嗎/mlTimentin和200|ug/mlClaroforan)。該平板在黑暗中在26-28。C保溫3-4周。大約10天后觀測到抗性愈傷組織，將其移至NBCT+選擇平板中，于黑暗中進(jìn)一步保溫14-21天。將健壯的愈傷組織移至PRCT+選擇平板上，于黑暗中保溫8-12天，然后移至RCT+選擇平板上，并且在28'C全日照保溫30天。之后，將已經(jīng)發(fā)育的小植物移至組織培養(yǎng)罐中1/2MS培養(yǎng)基中，在日照下保溫10-14天以進(jìn)一步生長直至移至土壤中。iii)用于水稻組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基組成和成分N6大量元素(20X)(g/l):(NH4)2S04，9.3;KN03，56.6;KH2P04，8;MgS04.7H20，3.7;CaCl2.2H20，3.3。N6微量元素(1000X)(mg/100ml):MnS04.4H20，440;ZnS04.7H20，150;H3B03，160;KI，80。N6維生素(100X)(mg/100ml):甘氨酸，20,鹽酸硫胺素，10;維生素B6，5;煙酸，5。B5微量元素(100X)(mg/1000ml):MnSO4.4H20，1000;Na2Mo04.2H20，25;H3B03，300;ZnS04.7H20，200;CuS04.5H20，3.87;CoCl2.6H20，2.5;KI，75。來自Sigma細(xì)胞培養(yǎng)的B5維生素(IOOX)和Gamborg's維生素溶液(畫Ox)。FeEDTA(200X)(g/200ml):鐵-鈉鹽，1.47。2，4-D(lmg/ml):將lOOmg的2,4-二氯-苯氧乙酸溶解于lml無水乙醇中，加入3ml的lNKOH，用INHC1調(diào)節(jié)為pH6。BAP(lmg/ml):來自Sigma細(xì)胞培養(yǎng)的6-芐氨基嘌呤。NAA(lmg/ml):來自Sigma細(xì)胞培養(yǎng)的萘乙酸。ABA(2.5mg/ml):將250mg的脫落酸溶解于2ml的1MNaOH中，用無菌蒸餾水制成lOOml。終背景濃度為20mMNaOH。潮霉素(50mg/ml):潮霉素溶液來自Roche。Timetin(150mg/ml):將3100mg的Timetin溶解于20.66ml無菌水中。終濃度為150mg/ml。Claforan(200mg/ml)。將4gm的Claforan溶解于20ml無菌水中。MS鹽Murashige-Skoog最小有機(jī)培養(yǎng)基。N6D培養(yǎng)基(每升的量)N6大量元素(10X)100mlN6微量元素(1000X)lmlN6維生素(1000X)lmlMS鐵/EDTA5ml肌醇lOOmg酪蛋白氨基酸300mg脯氨酸2.9g2,4-D(lmg/ml)2ml蔗糖30g用lMKOH將pH調(diào)節(jié)為5.8，加入3gphytogel/升，高壓滅菌NB培養(yǎng)基(每升的量)52N6大量元素(20X)50mlB5微量元素(100X)10mlB5維生素(100X)10mlFeEDTA(200X)5ml2,4-D(lmg/ml)2ml蔗糖30g脯氨酸500mg谷氨酰胺500mg酪蛋白酶水解產(chǎn)物(CEH)300mgNBO:NB培養(yǎng)基，加上30g/l甘露醇和30g/l山梨醇，之后調(diào)節(jié)pH值。NBCT+選擇培養(yǎng)基(潮霉素-H30):NB培養(yǎng)基加上30mgA潮霉素、Timentin150mg/ml、Claforan200mg/l。NBCT+選擇培養(yǎng)基(潮霉素-H50):NB培養(yǎng)基加上選擇50mg/l潮霉素，200mg/lClaforan和Timentin150mg/ml。PRCT+選擇培養(yǎng)基:NB培養(yǎng)基，無2,4-D，在高壓滅菌后加入BAP，2mg/l;NAA，lmg/l;ABA，5mg/l;Claforan，勵g/l;Timetin;150mg/ml+選擇培養(yǎng)基。RCT+選擇培養(yǎng)基NB培養(yǎng)基，無2,4-D，在高壓滅菌后加入BAP，3mg/l;NAA，0.5mg/l;Timetin，150mg/ml;Claforan,lOOmg/1+選擇培養(yǎng)基。'/2MS培養(yǎng)基MS鹽于維生素混合物，2.21g;蔗糖，10g每升，加入2.5gphytogel/1，高壓滅菌后加入0.05mg/lNAA和Timentin150mg/ml。實施例2:從水稻中鑒別和分離FaW基因FatB基因編碼棕櫚酰-ACP硫酯酶，該酶具有從?；d體蛋白中優(yōu)先轉(zhuǎn)移長度為16個或更少個碳原子的脂肪酸至?；?CoA的活性，并因此防止脂肪酸碳鏈進(jìn)一步延長。使用Genbank登錄擬南芥基因座AtACPTE32和Iris基因座AF213480的序列，使用基于同源性的檢索方法鑒別了推定的水稻序列。使用的檢索程序為在NCBI(http:〃www.ncbi.nlm.nih.gov/、可獲得的Megablast。使用NCBI默認(rèn)參數(shù)，使用的數(shù)據(jù)庫對于水稻(Oo^^WzVa)而言是非冗余(nr)且高通量的基因序列(htgs)。然后翻譯通過Megablast程序從水稻中選擇的最相似的序列并檢查在所有F"^序列中發(fā)現(xiàn)的保守序列NQHVNN(SEQIDNO:26)的存在。確信在擬南芥中是必需的其他氨基酸殘基是半胱氨酸264，天冬酰胺227和組氨酸229(其均存在于保守序列NQHVNN中)包含提議的催化三聯(lián)體。中國水稻數(shù)據(jù)庫(網(wǎng)站地址http:〃rise.genomics.org.cn/rice/index2.isp)也有限程度地應(yīng)用，使用BLAST檢索的默認(rèn)參數(shù)及擬南芥序列和Iris序列。翻譯的序列在圖2中對比。關(guān)于所有F"W基因結(jié)構(gòu)的總述在圖3中示出。如下述，所述基因相應(yīng)于所討論的蛋白質(zhì)序列AC108870相應(yīng)于Osllg43820，AP005291相應(yīng)于Os02g43090，AP000399相應(yīng)于Os06g5130，AP004236相應(yīng)于Os06g39520。注意來自一個基因的多個轉(zhuǎn)錄物的可能性在圖中示出。圖4示出使用默認(rèn)參數(shù)的"基因"序列的CLUSTALW(fast)對比-注意所述"基因"的長度不同。所述基因包含6個外顯子。Os06g5130描述的基因的結(jié)構(gòu)詳細(xì)示于圖5。圖6示出cDNA的編碼序列的對比，標(biāo)示了用于選擇性PCR擴(kuò)增的不同引物。Os06g5130與Os06g39520(相應(yīng)于圖2中序列ap000399和ap004236)的翻譯的肽序列之間的序列相同性整體是74%，完整編碼序列在核苷酸水平的相同性是69%。在這兩種情況中，使用默認(rèn)參數(shù)的BESTFIT程序。從Os02g43090(—個轉(zhuǎn)錄物)、Os06g05130、Os06g39520和Os011g43820推導(dǎo)的多肽分別相應(yīng)于298、427、423和425個氨基酸。編碼的蛋白質(zhì)的活性通過與已知示出具有這種活性的多肽的高度序列相同性推測。另外，觀測到的基于這些序列的基因失活構(gòu)建體對于棕櫚酸水平的作用也與這種推測一致(見下文所述)?；蚣易宓谋磉_(dá)是復(fù)雜的，從這四個基因中推測具有至少7個轉(zhuǎn)錄物?；谶M(jìn)行的RT-PCR實驗以及從EST文庫中回收的克隆的相關(guān)數(shù)目，看起來來自O(shè)s06g5130的RNA在谷粒中相對豐富，而Osllg43820在該組織中中等水平表達(dá)，其它基因僅低水平表達(dá)。實施例3:從水稻中鑒別和分離/^/2基因由基因編碼的蛋白質(zhì)(脂肪酸去飽和酶2)在18:1脂肪酸中導(dǎo)入雙鍵-它們是A12去飽和酶。擬南芥基因座athdl2aaa的Genbank序列用于針對54水稻(Oo^as"riw)檢索nr和htgs數(shù)據(jù)庫，使用默認(rèn)設(shè)置Megablast。翻譯從水稻中檢索到的最相似的序列，并檢測如下序列的存在保守疏水性基序FSYVVHDLVIVAALLFALVMI(SEQIDNO:27)、AWPLYIAQGCVLTGVWVIA(SEQIDNO:28)、ISDVGVSAGLALFKLSSAFGF(SEQIDNO:29)、VVRVYGVPLLIVNAWLVLITYLQ(SEQIDNO:30)以及組氨酸水稻序列HECGHH(SEQIDNO:31)、HRRHHA(SEQIDNO:32)和HVAHH(SEQIDNO:33)。獲得的同工型的翻譯的氨基酸序列示于圖7。圖8提供了序列對比，示出在同工型AP004047中5'UTR的位置(小寫字母)以及用于RT-PCR擴(kuò)增的引物的位置(下劃線)。終止密碼子的位置以方框標(biāo)示，終止密碼子下游非翻譯區(qū)以小寫字母表示。當(dāng)編碼具有AP004047氨基酸序列的蛋白質(zhì)的核苷酸序列用于檢索水稻基因組時(使用默認(rèn)參數(shù)BLAST程序)，從水稻基因組中獲得高度相似的四個基因序列。這些基因的整體結(jié)構(gòu)示于圖9。如下述，所述基因相應(yīng)于蛋白質(zhì)序列。蛋白質(zhì)序列AP004047(在本文也稱作FAD2-1)相應(yīng)于基因Os02g48560，序列AP005168(在本文也稱作FAD2-2)相應(yīng)于Os07g23410，序列contig2654相應(yīng)于Os07g23430。另外，存在與這些序列具有感興趣程度的序列相同性但是又與這些序列明顯不同的一個序列，其也許是假基因。這個序列是Os07g233卯。與i^W基因不同，F(xiàn)^/2基因不含有任何內(nèi)含子。所有蛋白質(zhì)編碼序列的對比示于圖10。Os02g48560與Os07g23410的完整編碼區(qū)的序列相同性為79%。由Os02g48560編碼的多肽(即AP004047)的分子量在加工之前為44.35kDa，含有388個氨基酸。Os07g23410編碼的多肽的分子量為44.9kDa，含有390個氨基酸。利用默認(rèn)參數(shù)的BESTFIT程序確定這些推導(dǎo)的多肽具有77%的序列相同性。從Os07g23430中推導(dǎo)的多肽的分子量為41kDa(363個氨基酸)，從Os07g23390中推導(dǎo)的多肽的分子量為24kDa(223個氨基酸)。所有推導(dǎo)的多肽序列的對比示于圖7。相應(yīng)于Os02g48560的序列在谷粒中表達(dá)，這個觀測結(jié)果與這個基因在EST文庫中的克隆的相關(guān)頻率數(shù)據(jù)一致，其中同族序列從谷粒cDNA文庫中回收。相應(yīng)于在染色體7上編碼的兩個同工型(Os07g23430、23410)的序列從葉EST文庫中回收，但是至今沒有關(guān)于相應(yīng)于其它基因(Os07g23390)的序列的報道；我們推斷其也許根本就是低水平表達(dá)。總之，水稻Rk/2基因家族也是復(fù)雜的基因家族。從Os02g48560中推導(dǎo)的兩個轉(zhuǎn)錄物通過序列不可區(qū)分。從Os02g48560中推導(dǎo)的序列在谷粒中顯著表達(dá)。實施例4:FflW和/^/2基因在水稻中的表達(dá)為了確定如實施例2和3所述在水稻中鑒別的4個推定的基因和3個Fa^基因可以在發(fā)育中的水稻谷粒中表達(dá)，進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)。由于所述基因在序列上密切相關(guān)，因此需要設(shè)計特異于每個基因的引物，以特異性測定每個基因的轉(zhuǎn)錄物。從序列對比(圖6和8)中鑒別序列趨異的區(qū)域并且設(shè)計和檢測一些引物對。檢測推定的F"W基因表達(dá)的引物序列在表3和表4中示出。作為內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)以對比表達(dá)水平，對于編碼a-微管蛋白的水稻基因OsTubAl的表達(dá)，對RNA也進(jìn)行RT-PCR。已知這個基因在所有活躍分裂組織中表達(dá)且不受激素ABA的影響，因此適合用作葉和谷粒分析的組成型表達(dá)對照。使用QiagenRNeasy試劑盒根據(jù)廠商指導(dǎo)從開花后大約15天的水稻谷粒中制備RNA。然后使用DNAse處理(DNA-free試劑盒，Ambion)以從RNA制備物中除去污染的DNA。RT-PCR混合物含有5^1的5XQiagenOneStepRT-PCR緩沖液、的dNTP混合物(含有10mM每種dNTP)、15pmol每種引物和大約20pg的RNA，終體積為25^1。使用如下RT-PCR循環(huán)程序進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增30分鐘50。C(逆轉(zhuǎn)錄)，15分鐘95。C(初始PCR活化)，30次循環(huán)(l分鐘94°C，1分鐘57°C，1分鐘72°C)(PCR擴(kuò)增)，然后在72"C最后延伸10分鐘。表3:設(shè)計用于使用一步RT-PCR擴(kuò)增和區(qū)分推定的轉(zhuǎn)錄物的相對表達(dá)的引物<table>tableseeoriginaldocumentpage56</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage57</column></row><table>表4:設(shè)計用于使用一步RT-PCR擴(kuò)增和區(qū)分推定的轉(zhuǎn)錄物的相對表達(dá)的引物<table>tableseeoriginaldocumentpage57</column></row><table>RT-PCR實驗結(jié)果表明FW2-1基因序列(TIGR水稻數(shù)據(jù)庫標(biāo)識符LOC—Os02g48560)相對于編碼其它同工型的基因在谷粒和葉中均高水平表達(dá)。其它兩個基因(LOC—Os07g23410和LOC—Os07g23430)看起來在葉中低水平表達(dá)且主要在葉中表達(dá)。對編碼i^W同工型的基因進(jìn)行分析示出FaW-l(Genbank標(biāo)識符AP000399,TigrLOC—Os06g05130)和F^5-2(Genbank標(biāo)識符AC108870，TIGR標(biāo)識符Osllg43820)與其它兩個基因相比在谷粒中更高水平表達(dá)。Tos-17轉(zhuǎn)座插入突變體在編碼AP000399的基因中具有插入序列。參考基因mRNA轉(zhuǎn)錄物的相對豐度，F(xiàn)a^-1(Genbank標(biāo)識符AP000399，TIGRLOC—Os06g05130)和FatB-4(AP004236，TIGRLOC—Os06g39520)在葉組織中更高水平表達(dá)。當(dāng)與作為標(biāo)準(zhǔn)的微管蛋白基因轉(zhuǎn)錄物的豐度相對比時(其在小麥谷粒中具有中等豐度的mRNA且因此期望在水稻谷粒中是相似地豐度)，通過RT-PCR確定所有和F^/2mRNA低水平聚集。然而，這個結(jié)論基于這樣的假定，即每種檢測基因的弓I物與靶轉(zhuǎn)錄物以與微管蛋白弓I物/轉(zhuǎn)錄物相似效率地雜交。這個結(jié)論通過EST數(shù)據(jù)庫檢索確認(rèn)。當(dāng)FflW-l(TIGROs02g48560)序列用于檢索水稻EST序列時，轉(zhuǎn)錄物序列存在于圓錐花序、根和整個植物cDNA文庫中。相反，F(xiàn)ac^-2(TIGROs07g23410)和Facf2-3(TIGROs07g23430)序列僅存在于葉、莖干或者整個植物文庫中。Os07g23390的序列被認(rèn)為是假基因的i^W-樣基因，在任何EST文庫中均不存在。相似地，i^W-l(TIGROs06g05130)序列在葉和圓錐花序EST文庫中均存在，而F"tB-2序列(TIGROsllg43820)僅存在于圓錐花序或者整個植物EST文庫中，/^W-4(TIGROs06g39520)僅存在于葉文庫中。盡管通過RT-PCR判斷F加S-3(AP005291，Os02g430900)序列與其它序列相比在葉和谷粒中均相對低水平表達(dá)，但是其存在于圓錐花序和整個植物EST文庫中。這些檢索使用NCBI網(wǎng)站(http:〃www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/Blast.cgi)上的BLAST程序，使用EST數(shù)據(jù)庫和限制從水稻中檢索序列?；谶@些數(shù)據(jù)認(rèn)為F6W2-1和F^5-2是應(yīng)下調(diào)谷粒脂質(zhì)改變的基因。關(guān)于這方面，認(rèn)為FaW-3也是重要的。實施例5:基因沉默構(gòu)建體的構(gòu)建和水稻的轉(zhuǎn)化58微淑2教艦鏈細(xì)辦鄉(xiāng)產(chǎn)f設(shè)計在發(fā)育中的水稻谷粒中表達(dá)雙鏈RNA(發(fā)夾RNA)的構(gòu)建體以降低F^/2-l的表達(dá)。通過耙向三個F"W基因序列的共有區(qū)域，設(shè)計所述構(gòu)建體，由此其對于在水稻谷粒中鑒別的所有三個F^/2基因均有效，以潛在地使對于脂肪酸組成的作用最大化。為了改善沉默效率，所述構(gòu)建體在如Smithetal.(2000)所述的反向重復(fù)序列的有義與反義部分之間含有內(nèi)含子。使用如下寡核苷酸通過PCR從F"W-1基因的5'末端擴(kuò)增一個505堿基對的片段pFad2-F5'-AAAGGATCCTCTAGAGGGAGGAGCAGCAGAAGC-3'(SEQIDNO:52)和pFad2隱R5'-AAAACTAGTGAATTCTACACGTACGGGGTGTACCA-3'(SEQIDNO:53)。將此PCR產(chǎn)物連接進(jìn)pGEM-Teasy中，轉(zhuǎn)化進(jìn)大腸桿菌和鑒別含有該插入體的菌落。然后將來自稱作pGEM-T-Fad2的質(zhì)粒的含有505bpFa^片段的^oI/五coiI片段以有義方向連接進(jìn)含有內(nèi)含子Rint9的載體ZLRint9_BC3895(得自ZhongyiLi，CSIROPlantIndustry)中。然后將來自pGEM-T-Fad2的丑"mHIAS評I片段連接進(jìn)(以反義方向)所得質(zhì)粒中，由此形成含有發(fā)夾構(gòu)建體的內(nèi)含子。然后將含有具有發(fā)夾的1內(nèi)含子的BamHl/i:/7"I片段插入pBxl7casNOT載體(ZhongyiLi,個人通訊)的相同限制位點中，所述載體含有具有Nos終止子/聚腺苷酸化序列的Bxl7種子特異性啟動子，由此所述沉默基因在發(fā)育中的種子中以(啟動子)有義-內(nèi)含子-反義(終止子)順序表達(dá)。然后將含有Bxl7啟動子和FaW-l反向重復(fù)區(qū)的///"dllM^I片段插入二元載體pWBvec8(Wangetal，1998)的相同限制位點中，所述載體含有賦予潮霉素抗性的可選擇標(biāo)記基因。然后將這個載體導(dǎo)入農(nóng)桿菌中并用于水稻轉(zhuǎn)化，如實施例1所述。所述雙鏈RNA構(gòu)建體稱作dsRNA-Fad2-l。湖劍陋表達(dá)艦鏈麗辦鄉(xiāng)產(chǎn)生使用具有如下序列的引物通過PCR擴(kuò)增水稻棕櫚酰-ACP硫酯酶FW5-1基因(TigrLOC—Os06g05130)的665堿基對片段Rte-sl，5'-AGTCATGGCTGGTTCTCTTGCGGC-3'(SEQIDNO:54)和Rte-al，5'隱ACCATCACCTAAGAGACCAGCAGT-3'(SEQIDNO:55)。這個PCR片段用于產(chǎn)生反向重復(fù)構(gòu)建體，其具有有義方向的所述片段的一個拷貝和反義方向的另一個拷貝，由來自棉花微粒體Q)6-去飽和酶GhFad2-l基因(Liuetal.，1999)的5'UTR的內(nèi)含子序列分隔。隨后將反向重復(fù)構(gòu)建體插入pUbilcasNOT(ZhongyiLi基于Lietal.,1997所述序列)的Ubil啟動子與Nos終止子之間的&cl位點。然后將具有pUbil啟動子的水稻的反向重復(fù)部分插入二元載體pWBVec8的iVort位點中并如上文針對構(gòu)建體所述導(dǎo)入農(nóng)桿菌中。所述雙鏈RNA構(gòu)建體稱作dsRNA-FatB-1。在靴財柳分柝微麼資成使用相應(yīng)于啟動子區(qū)域內(nèi)位點的一種引物以及F^^序列末端的另一種引物通過PCR檢測獲得的具有dsRNA-Fad2-l的十個單獨的可繁殖的轉(zhuǎn)基因植物中dRNA基因的存在。發(fā)現(xiàn)這十個植物中的九個植物在PCR反應(yīng)中是陽性的，因此含有F^/2RNAi構(gòu)建體。相似地，對23個可繁殖的轉(zhuǎn)基因品系針對RNAi構(gòu)建體進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)其中20個品系是PCR陽性的。為了分析轉(zhuǎn)基因?qū)τ谥舅峤M成的作用，從轉(zhuǎn)化的水稻植物的谷粒和葉樣品中分離全部脂質(zhì)。對于在FWA1基因中含有Tosl7插入序列的水稻突變品系(TIGR基因座Os06g5130相應(yīng)于登錄號AP000399鑒別的蛋白質(zhì))也進(jìn)行如此操作以對比特異性失活該基因的效果。如實施例1所述，通過GC-FAME確定每種脂質(zhì)提取物的脂肪酸組成。數(shù)據(jù)示于表5-7，一些數(shù)據(jù)在圖11-13中示出。每種脂肪酸的比例以占谷粒的種子油中總脂肪酸的百分比表示，如實施例1所述通過HPLC確定。最驚人的結(jié)果是在i^d2dsRNA植物中谷粒的油酸和亞油酸組成中的改變程度。在一些品系中油酸的比例從36。/。增加至至少65。/。(w/w)，在最受影響的水稻品系(品系22A)中亞油酸的比例從37%降低至大約13%。令人驚奇地，F(xiàn)^^品系中棕櫚酸的比例也降低，例如品系22A中低于14%，相比之下對照組為18%。在F"WdsRNA品系中，谷粒中棕櫚酸的比例降低與亞油酸含量增加相關(guān)，而油酸與亞麻酸的比例基本不變。注意與這兩個轉(zhuǎn)基因品系中棕櫚酸比例的降低程度相似，但是FaW品系中亞油酸水平增加的程度遠(yuǎn)低于在品系中觀測到的降低程度。即具有FaW構(gòu)建體的亞油酸水平的變化程度較高。關(guān)于該途徑的催化步驟的感興趣的認(rèn)識是通過分析FatB的一個同工型FatB-l的Tos-17插入敲除而提供的。在Tos-17突變體中，棕櫚酸和60油酸的比例的改變程度與dsRNA品系相比是降低的。這些結(jié)果表明編碼i^W同工型的基因在其功能方面有所不同。當(dāng)將亞油酸與油酸的比例結(jié)果繪制成散點圖(圖14)時，顯然F^/2敲除品系中這兩種脂肪酸之間的關(guān)系與野生型水稻相同，但是亞油酸的比例顯著降低。相反，在^/5敲除品系中及在尸"WTos-17品系中程度較低，盡管亞油酸與油酸之間的關(guān)系相似，但是有一恒定變化。這意味著與野生型植物或者F"d2敲除植物相比，在F"必敲除植物中對于一定量的油酸而言存在更多的亞油酸。這個結(jié)果與這樣的想法一致，即F"W的敲除影響控制油酸和亞油酸的量的途徑而不影響由F"W控制的直接聯(lián)系油酸和亞油酸的步驟。將所有分析的水稻品系的亞油酸與棕櫚酸的比例的結(jié)果也繪制成圖。對于敲除品系觀測到正線性關(guān)系，而對于亞油酸與油酸觀測到相反的結(jié)果。然而對于FatB品系，觀測到不同的關(guān)系(圖15)。當(dāng)將Fa&dsRNA植物和F"WdsRNA植物繪制成散點圖時(圖16)也觀測到油酸與棕櫚酸之間的關(guān)系差別。這些結(jié)果證實棕櫚酸與亞油酸(和油酸)之間的關(guān)系對于所述途徑的兩個干擾(perturbations)是不同的。在不同途徑干擾下對各個脂肪酸比例進(jìn)行的主成分分析證實主成分1(表示導(dǎo)致最大變異的軸)由亞油酸對油酸的比例組成，而主成分2(其次重要的軸)由亞油酸和油酸對棕櫚酸的比例組成)。這個結(jié)果在圖17中例證。我們從這個實施例的結(jié)果中推斷使dsRNAi^W植物與dsRNAFa^植物或者Tos-17植物雜交以組合突變將進(jìn)一步增加油酸的比率以及進(jìn)一步降低棕櫚酸和亞油酸水平。表5:i^7W和突變體的水稻谷粒中脂肪酸組成的GC分析谷粒-突變體豆蔻酸(C14:0)棕櫚酸(C16:0)硬脂酸(C18:0)油酸(C18:1)亞油酸(C18:2)亞麻酸(C18:3)野生型(WH12)0.7018.831.6438.4136.421.29FatBTosl7插入突變體0.7215.132.3337.1538.611.87FatBds脂A轉(zhuǎn)化系0,5811.431.8134.9246.601.91Fad2dsRNA轉(zhuǎn)化系0.5814.262.1164.9412.621.23Tosl7對照0.8517.912.6033.2339.841.76FatBdsRNA對照1.0318.861.8434.0839.631.75Fad2dsRNA對照1.0217.472.3836.0337.421.5062表6:和突變體的水稻葉中脂肪酸組成的GC分析<table>tableseeoriginaldocumentpage63</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage64</column></row><table>實施例6抗體的產(chǎn)生和應(yīng)用通過合成存在于F"W的推導(dǎo)的序列中的15或16聚體肽產(chǎn)生抗體。用于產(chǎn)生抗F^5的抗體的肽是FaW-UlAc-CGMNKNTRRLSKMPDE(SEQIDNO:56)。該肽相應(yīng)于從氨基酸位置259翻譯的FatB序列(登錄號AP000399)并還在從AP005291,AC108870和AC004236翻譯的序列中發(fā)現(xiàn)。但是，這一序列在4個同工型中僅在序列TRRLSKMPDE(SEQIDNO:57)中相同。Ac-CGEKQWTLLDWKPKKPD(SEQIDNO:58)。這一序列在所有4個同工型的翻譯序列中發(fā)現(xiàn)。Ac-CGAQGEGNMGFFPAES(SEQIDNO:59)。這一序列僅在AP00399中發(fā)現(xiàn)并且在推導(dǎo)的多肽的最C端。在合成后，用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)使用交聯(lián)劑MBS(馬來酰亞胺苯甲酸-N-羥基琥珀酸酰胺酯)將這些肽與卵清蛋白或匙孔血藍(lán)蛋白(KLH)偶聯(lián)。透析并凍干交聯(lián)的肽并以大約lmg/ml的濃度用弗氏不完全佐劑以2周間隔注射進(jìn)兔中，共兩個月?？笷"W-99產(chǎn)生的抗血清檢測到i^W同工型之間的明顯差異，即在野生型水稻中存在的20kDa的多肽在相應(yīng)于TIGR標(biāo)識符Os06g5130的基因中有插入序列的Tos-17突變品系中不存在，該產(chǎn)物相應(yīng)于i^W-l，序列由登錄號AP000399表示(圖18)。盡管這與大約40kDa的預(yù)期大小不同，但是這種差異先前已經(jīng)在F"W同工型中注意到。不同大小的FW萬產(chǎn)物已經(jīng)在發(fā)育的和成熟的Cwp/zea種子中觀察到，顯示有5種不同的FaW同工型，在成熟種子中大小較長，在成熟種子中產(chǎn)物較短(Leonardetal"1997)。可以使用所述抗血清檢測轉(zhuǎn)基因和突變植物樣品中的F"W蛋白并證實基因失活程度。實施例7.水稻中的突變體的鑒別從提取自大量不同水稻登錄的水稻DNA中產(chǎn)生跨越F"d2-1(編碼序列相應(yīng)于NCBI數(shù)據(jù)庫中的APOO4047，TIGR基因座標(biāo)識符LOC—Os02g48560)的活性位點(如果起始ATG被用作TIGRLoc_Os2g48560中編號的起點，則基本上是位置330至1020)的PCR產(chǎn)物。根據(jù)所用引物，這些產(chǎn)物的大小高至800bp?？赡苄枰褂脙山M重疊引物對。一組可能的引物是組AGTGCCGGCGGCAGGATGACGG(SEQIDNO:60)(在圖10的序列對比中的位置5-20)GCCGACGATGTCGTCGAGCAC(SEQIDNO:61)(在圖10的序列對比中的位置379-398的反向互補(bǔ)序列)組BTGCCTTCTCCGACTACTCGG(SEQIDNO:62)(圖10中的位置360-379)CCTCGCGCCATGTCGCCTTGG(SEQIDNO:63)(圖10中的位置1099-1118的反向互補(bǔ)序列)。退火的產(chǎn)物然后在Rotorgene6000儀器(CorbettLifeScience)或相當(dāng)?shù)膬x器中解鏈，在所述儀器中異源雙鏈的解鏈中的差異可以通過染料LCGreen的熒光改變而靈敏地檢測。通過這一技術(shù)每天可以篩選幾百個、可能幾千個水稻品系。來自顯示改變的熱譜的樣品的PCR產(chǎn)物被測序并鑒別中的突變。然后失活F""2的選擇的突變體可以雜交進(jìn)良種水稻品系以產(chǎn)生具有降低的活性并因此具有高油酸的水稻品系。如果需要消除兩個或全部同工型，則這可以通過鑒別在不同同工型中具有所需突變的品系并通過標(biāo)記輔助育種將所述突變組合在良種水稻品系中而實現(xiàn)。至少F"W-7基因需要是無活性的以相當(dāng)大地增加油酸含量或降低亞油酸含量。一或多個額外基因的失活會進(jìn)一步增加油酸含量和降低亞油酸護(hù)理。在額外的尸"d2基因中具有突變的突變體可以使用用于額外Fad基因的特異引物如以相同方式鑒別。實施例8.穩(wěn)定性分析-貯存中己醛產(chǎn)生的檢測正在用FSA,Werribee進(jìn)行實驗以在野生型水稻中檢測貯存中的己醛產(chǎn)生。這涉及GC，使用取樣器檢測在高溫(40°C)貯存的谷粒的頂部空間中的揮發(fā)物。一旦優(yōu)化系統(tǒng)后(并且我們有足夠量的谷粒)，我們將進(jìn)行野生型和Fad2RNAi和RNAi水稻品系JT:存后揮發(fā)物特別是己醛的產(chǎn)生的比較和基因型的合適組合。這是水稻產(chǎn)業(yè)中谷粒貯存和糠貯存的重要質(zhì)量問題?？赡芫哂杏绊懝攘Ｙ|(zhì)量的作用的其它揮發(fā)物的產(chǎn)生和檢測也正在用FSA，Werribee和CSIRO昆蟲學(xué)進(jìn)行研究。頂部空間分析需要大約10g的糙米。糙米在4°C(對照)和35C貯存8周。從糙米釋放的氣體樣品可以通過在8(TC加熱或通過自然擴(kuò)散而在小瓶的頂部空間中獲得。頂部空間中的揮發(fā)成分然后可以通過直接注射進(jìn)GC或GC-MS儀器并分析氣相層析譜而分析(Suzukietal.，1999)。分析頂部空間中的揮發(fā)物的另一種方法是通過如Nielsenetal.(2004)所述用氮氣作為吹掃氣將揮發(fā)物捕獲在合適的基質(zhì)(例如250mgTenaxGR)上而進(jìn)行。然后加力'曰'ru口17j口'j"兀hTj，mvjl刀wi]re^入口'j力jrri叉rni不f氏近1丁金力U。在具有低亞油酸的水稻品系中水稻貯存會改善的預(yù)期是基于一些觀察。Suzukietal.(1999)提供了數(shù)據(jù)表明在貯存過程中游離亞油酸的量增力口，并且在35'C揮發(fā)性醛如戊醛、己醛和戊醇的量增加3倍。己醛和有氣味揮發(fā)性醛的相關(guān)性也己被其它作者注意到。另一方面，Zhouetal.(2002)發(fā)現(xiàn)貯存時總亞油酸的降低并將這與亞油酸分解為其它產(chǎn)物包括導(dǎo)致產(chǎn)生臭氣的揮發(fā)物相關(guān)聯(lián)。結(jié)果中的差異可能是由于提取和分析方法的差異所致。體外亞油酸產(chǎn)生己醛由Nielsenetal.(2004)證實。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解可以對特異實施方案中所示的本發(fā)明進(jìn)行各種改變和/或修改而不偏離廣泛描述的本發(fā)明的精神和范圍。本發(fā)明的實施方案因此被認(rèn)為是示例性的，不是限制性的。所有本文討論和或弓I用的出版物以其全文并入本文。本申請要求AU2006903810的優(yōu)先權(quán)，其全文并入本文。對本說明書中包括的文件、法令、材料、裝置等的任何討論僅為本發(fā)明提供上下文的目的。其不應(yīng)被看作承認(rèn)這些物質(zhì)的任何或全部在本發(fā)明優(yōu)先權(quán)日之前構(gòu)成現(xiàn)有技術(shù)部分或是與本發(fā)明相關(guān)領(lǐng)域的普遍知識。參考文獻(xiàn)Abdullahetal.(1986)Biotechnology4:1087.Akagietal.(1995)PlantPhysiol.108,845-846AlmeidaandAllshire(2005)TRENDSCellBiol15:251-258,67Anaietal.(2003)PlantCellRep.21,988-992.AscherioandWillett(1997)Am.J.Clin.Nutr.66:1006S-1010S.BlighandDyerCanadianJ.Biochem.(1959)37:911-917.Boggsetal.(1964)J.FoodSci.29:487-489.BonanomeandGrundy(1988).N.Engl.Med.318:1244-1248.Brandtetal.(1985)CarlsbergRes.Commun.50:333-345.Brounetal.，(1999)Annu.Rev.Nutr.19:197-216.Buhretal.(2002).PlantJ.30:155-163.Champagneetal.(1995)CerealChem72:255-258.Changetal.,(1978).J.Am.OilChem.Soc.55:718-727.Chapmanetal.，(2001).J.Am.OilChem.Soc.78:941-947.Choudryetal.(1980)Phytochemistry19:1063-1069.Clapp(1993)Clin.Perinatol.20:155-168.Colotetal.(1987)E纖OJ6:3559-3564.Comaietal.(2004)PlantJ37:778-786.CurieletaL(1992)Hum.Gen,Ther.3:147-154.Doughertyetal.(1995).Am.J.Clin.Nutr.61:1120-1128.Eglitisetal.(1988)Biotechniques6:608-614.FenandezSanJuan(1995).Alimentaria33:93-98.Fujimuraetal.(1985)PlantTissueCultureLetters2:74.Grahametal.(1973)Virology54:536-539.Gunstone(2001)Inform11:1287-1289.Ha(2005)Nutritionresearch25，597-606.HaseloffandGerlach(1988)Nature334:585-591.Henikoffetal.(2004)PlantPhysiol135:630-636.Huetal.(1997).N.Engl.J.Med.337:1491-1499.JenningsandAkoh(2000)JournalofAgriculturalandFoodChemistry,48:4439-4443.Jonesetal.(1995)PlantCell7:359-371.<formula>formulaseeoriginaldocumentpage0</formula>'漁陽薛i外，hVIOV(8661)1它isSu喻'￡019-6609:68VSIl1。S，。V'麵，d(:661)VpJ9u3B叢.It^-6K:6Tiu可d.(9661)'I它pJ^isoa0817-W'6￡sp勿Ooo。IBpp[腿s工'6，S-￡l7S:厶t^ns!ui3iQibo!3oio舊pireimniinop3v(￡861)FpBi!Sns工卞￡:50乙'13U3D'iddv'Josq工(9861)PBureXpoi"￡-U￡:6S'耶N'u!IOT'呵0661).I它Pdanspq丄'6I-60S:H'ui3ipo〖a'unC)'(6661)'lBPiinB!j叫工I乙畫ZI:17Su!J33mSu3onoqepp^(乙00乙)3§SoqqoP朋usisqx'S1/S-乙t7S:t^.瓜sqOpo。d'?？?VT(8861)PPm!b丄卞HI-6IHpooj."j§v.i"(6661)'ppppizns卞IZ扁"I:6'P八'sP!dn闊。ispire9畫yCisI￡AI_￡ZAI:6ZIX§oio!sXqdiirew(乙00乙)？^f!ps3&ri(ns0t6-8￡6:8乙'sum工，os'ui3ipo!g['(000乙)^>[f!ps3&n(ns'0￡￡一￡乙￡:乙17BopB§unHB3聲op!8bpv(1661)'卩i3aoubj^s'6l7-S廿:Isp勿〖(0861)，Pop3uyis'0乙￡-61￡:A0l7"tnBN(OOO乙)'PP觀uisSU-60I:Wop3Ssum丄(SOO。jn^1^PUB叩可s'6乙I—ZJI:H'ipsio舊'jo何(6661)'Fl3XddwsT外-0917:IS1。SP。。d.f(9861)，Pmqspus90U9pspoojjoXp卩os3S9tredBf3tpimxmof(t7綴).I它P"nqiqs'6n—6A:n's八3M'm3u3'pu3D'ip9io舊(8661)Jo!uss6d￡Z:96.網(wǎng)"丄.ss!叢.卿0661)Po!p叫3S.I09-￡6S:01uo卩pitTNjos3qio;3Lreqj9urysq工joiBuano〖'(1661).IB^兩unpraS":-SZ￡Z:U'iih3'f'uiy(000Z)"uq^)piresipo^j:0￡雖t9/09惠法助改Waterhouseetal.(1998)Proc.Natl.Acad.Sci.USA95:13959-13964.^Williamsetal.(1999)J.Am.Coll.Cardiol.33:1050-1055.Yasumatsuetal.(1966)Agric.Biol.Chem.30:483-486.Zhouetal.(2002)JournalofCerealScience35:65-78.Zocketal.(1994)ArteriosclerThromb.14:567-57權(quán)利要求1.米糠油，其脂肪酸組成包含大于大約48％的油酸，小于大約17％的棕櫚酸，小于大約30％的亞油酸和/或其任何組合。2.權(quán)利要求l的米糠油，其中油酸與亞油酸的比率大于1.5:1。3.權(quán)利要求1或2的米糠油，其脂肪酸組成包含大于大約48%的油酸，小于大約17%的棕櫚酸及小于大約30%的亞油酸。4.權(quán)利要求1-3任一項的米糠油，其脂肪酸組成包含大于大約60%的油酸。5.權(quán)利要求l-4任一項的米糠油，其脂肪酸組成包含小于大約12%的棕櫚酸。16.權(quán)利要求1-5任一項的米糠油，其脂肪酸組成包含小于大約15%的亞油酸。7.米糠，其脂肪酸組成包含大于大約48%的油酸，小于大約17%的棕櫚酸，小于大約30%的亞油酸和/或其任何組合。8.權(quán)利要求7的米糠，其中油酸與亞油酸的比率大于1.5:1。9.權(quán)利要求7或8的米糠，其脂肪酸組成包含大于大約48%的油酸，小于大約17%的棕櫚酸和小于大約30%的亞油酸。10.權(quán)利要求7-9任一項的米糠，其脂肪酸組成包含大于大約60%的油酸。11.權(quán)利要求7-10任一項的米糠，其脂肪酸組成包含小于大約12%的棕櫚酸。12.權(quán)利要求7-11任一項的米糠，其脂肪酸組成包含小于大約15%的亞油酸。13.水稻種子，其脂肪酸組成包含大于大約48%的油酸，小于大約17%的棕櫚酸，小于大約30%亞油酸和/或其任何組合。14.權(quán)利要求13的水稻種子，其中油酸與亞油酸的比率大于1.5:1。15.權(quán)利要求13或14的水稻種子，其脂肪酸組成包含大于大約48%的油酸，小于大約17%的棕櫚酸和小于大約30%的亞油酸。16.權(quán)利要求13-15任一項的水稻種子，其脂肪酸組成包含大于大約60%的油酸。17.權(quán)利要求13-16任一項的水稻種子，其脂肪酸組成包含小于大約12%的棕櫚酸。18.權(quán)利要求13-17任一項的水稻種子，其脂肪酸組成包含小于大約15%的亞油酸。19.水稻植物，其產(chǎn)生權(quán)利要求1-16任一項的米糠油。20.水稻植物，其產(chǎn)生權(quán)利要求7-12任一項的米糠。21.水稻植物，其產(chǎn)生權(quán)利要求13-18任一項的水稻種子。22.分離的多核苷酸，當(dāng)其存在于水稻植物的細(xì)胞中時，與不存在所述多核苷酸的細(xì)胞相比，其下調(diào)F"W和/或F"W多肽在所述細(xì)胞中的活性水平。23.權(quán)利要求22的多核苷酸，其與能指導(dǎo)所述多核苷酸在水稻植物細(xì)胞中表達(dá)的啟動子可操縱地連接。24.權(quán)利要求22或23的多核苷酸，其下調(diào)從至少一個和/或基因表達(dá)的mRNA水平。25.權(quán)利要求22-24任一項的多核苷酸，其中所述多核苷酸選自反義多核苷酸，有義多核苷酸，催化性多核苷酸，微小RNA，編碼結(jié)合Fad2或FaW多肽的多肽的多核苷酸和雙鏈RNA。26.權(quán)利要求25的多核苷酸，其是反義多核苷酸，在生理條件下與包含SEQIDNO:5-8、11-14或者19-25所示任一或多個核苷酸序列的多核苷酸雜交。27.權(quán)利要求25的多核苷酸，其是能切割包含SEQIDNO:5-8，11-14或者19-25所示任一或多個核苷酸序列的多核苷酸的催化性多核苷酸。28.權(quán)利要求27的多核苷酸，其是核酶。29.權(quán)利要求25的多核苷酸，其是雙鏈RNA(dsRNA)分子，包含含有SEQIDNO:5-8、11-14或者19-25所示任一或多個核苷酸序列的至少19個連續(xù)核苷酸的寡核苷酸，其中所述分子的雙鏈部分的長度為至少19個堿基對且包含所述寡核苷酸。30.權(quán)利要求29的dsRNA分子，其從單啟動子表達(dá)，其中所述雙鏈部分的鏈通過單鏈部分連接。31.—種鑒別多核苷酸的方法，所述多核苷酸當(dāng)存在于水稻植物的細(xì)胞中時，與不存在所述多核苷酸的細(xì)胞相比下調(diào)和/或FaW多肽在所述細(xì)胞中的活性水平，所述方法包括i)確定候選多核苷酸下調(diào)F""2和/或多肽在細(xì)胞中的活性水平的能力，及ii)選擇下調(diào)和/或i^W多肽在細(xì)胞中的活性水平的多核苷酸。32.權(quán)利要求31的方法，其中所述多核苷酸選自反義多核苷酸，有義多核苷酸，催化性多核苷酸，微小RNA，編碼結(jié)合KW2或F"W多肽的多肽的多核苷酸和雙鏈RNA。33.權(quán)利要求32的方法，其中所述多核苷酸是反義多核苷酸，其在生理條件下與包含SEQIDNO:5-8、11-14或者19-25所示任一或多個核苷酸序列的多核苷酸雜交。34.權(quán)利要求32的方法，其中所述多核苷酸是催化性多核苷酸，其能切割包含SEQIDNO:5-8、11-14或者19-25所示任一或多個核苷酸序列的多核苷酸。35.權(quán)利要求32的方法，其中所述多核苷酸是雙鏈(dsRNA)分子，其包含含有SEQIDNO:5-8、11-14或者19-25所示任一或多個核苷酸序列的至少19個連續(xù)核苷酸的寡核苷酸，其中所述分子的雙鏈部分的長度為至少19個堿基對且包含所述寡核苷酸。36.使用權(quán)利要求31-35任一項的方法鑒別的分離的多核苷酸。37.包含或編碼權(quán)利要求22-30或者36任一項的多核苷酸的載體。38.權(quán)利要求37的載體，其中所述多核苷酸或者編碼所述多核苷酸的序列與啟動子可操縱地連接。39.權(quán)利要求37或38的載體，其中所述啟動子賦予所述多核苷酸相對于在水稻植物的至少一種其它組織或器官而優(yōu)先在水稻植物的胚、胚乳、糠皮和/或種子中表達(dá)。40.包含權(quán)利要求37-39任一項的載體和/或權(quán)利要求22-30或36任一項的多核苷酸的細(xì)胞。41.權(quán)利要求40的細(xì)胞，其中所述多核苷酸或載體被導(dǎo)入所述細(xì)胞或所述細(xì)胞的祖細(xì)胞中。42.權(quán)利要求40或41的細(xì)胞，其是水稻細(xì)胞或者農(nóng)桿菌細(xì)胞。43.權(quán)利要求40-42任一項的細(xì)胞，其中所述多核苷酸被整合進(jìn)細(xì)胞的基因組中。44.包含權(quán)利要求40-43任一項的細(xì)胞的水稻植物。45.—種產(chǎn)生權(quán)利要求40-43任一項的細(xì)胞的方法，所述方法包括將權(quán)利要求22-30或36任一項的多核苷酸或者權(quán)利要求37-39任一項的載體導(dǎo)入細(xì)胞中的步驟。46.權(quán)利要求45的方法，其進(jìn)一步包括從所述細(xì)胞再生轉(zhuǎn)基因植物的步驟。47.權(quán)利要求22-30或36任一項的多核苷酸或者權(quán)利要求37-39任一項的載體在產(chǎn)生重組細(xì)胞中的應(yīng)用。48.—種經(jīng)遺傳修飾的水稻植物，其中相對于未修飾的植物，所述植物中具有和/或活性的多肽的表達(dá)降低。49.權(quán)利要求48的植物，所述植物已經(jīng)被轉(zhuǎn)化，由此包含權(quán)利要求22-30或36任一項的多核苷酸，或者包含所述多核苷酸的植物的后代。50.—種產(chǎn)生權(quán)利要求1-6任一項的米糠油、權(quán)利要求7-12任一項的米糠和/或權(quán)利要求13-18任一項的水稻種子的方法，所述方法包括將水稻植物暴露于或多肽的拮抗劑。51.—種獲得遺傳修飾的水稻植物的方法，所述植物可用于產(chǎn)生糙米種子，該種子當(dāng)與未修飾的糙米種子相比時具有增加的貯存期，所述方法包括對所述植物進(jìn)行遺傳操作，由此當(dāng)與產(chǎn)生未修飾的糙米種子的植物相比時在所述水稻種子中F""2和/或FaW多肽的活性和/或產(chǎn)生水平降低。52.權(quán)利要求51的方法，其中禾n/或多肽的活性和/或產(chǎn)生水平僅在植物種子中降低。53.權(quán)利要求51或52的方法，其中多肽的活性和/或產(chǎn)生水平降低。54.權(quán)利要求51-53任一項的方法，其中所述轉(zhuǎn)基因植物包含權(quán)利要求22-30或36任一項的多核苷酸或者權(quán)利要求37-39任一項的載體。55.使用權(quán)利要求51-54任一項的方法產(chǎn)生的遺傳修飾的水稻植物或者其后代。56.—種選擇可用于產(chǎn)生權(quán)利要求1-6任一項的米糠油、權(quán)利要求7-12任一項的米糠和/或權(quán)利要求13-18任一項的水稻種子的水稻植物的方法，所述方法包括i)篩選誘變的水稻種子或水稻植物群體，及ii)選擇能產(chǎn)生權(quán)利要求1-6任一項的米糠油、權(quán)利要求7-12任一項的米糠和/或權(quán)利要求13-18任一項的水稻種子的種子或植物。57.權(quán)利要求56的方法，其中步驟i)包括分析誘變的種子和/或植物的具有或活性的多肽。58.權(quán)利要求56或57的方法，其中步驟i)包括分析誘變的種子和/或植物的或基因的序列和/或表達(dá)水平。59.權(quán)利要求56-58任一項的方法，其中步驟i)包括分析誘變的種子和/或植物的米糠油、米糠和/或種子的脂肪酸組成。60.—種選擇可用于產(chǎn)生權(quán)利要求l-6任一項的米糠油、權(quán)利要求7-12任一項的米糠和/或權(quán)利要求13-18任一項的水稻種子的水稻植物的方法，所述方法包括i)分析得自候選水稻植物的米糠油、米糠和/或種子的脂肪酸含量，及ii)選擇可用于產(chǎn)生權(quán)利要求1-6任一項的米糠油、權(quán)利要求7-12任一項的米糠和/或權(quán)利要求13-18任一項的水稻種子的水稻植物。61.—種選擇可用于產(chǎn)生權(quán)利要求l-6任一項的米糠油、權(quán)利要求7-12任一項的米糠和/或權(quán)利要求13-18任一項的水稻種子的水稻植物的方法，所述方法包括i)分析候選植物樣品的具有或活性的多肽，及ii)基于所述多肽的序列、產(chǎn)生水平和/或活性選擇可用于產(chǎn)生權(quán)利要求1-6任一項的米糠油、權(quán)利要求7-12任一項的米糠和/或權(quán)利要求13-18任一項的水稻種子的水稻植物。62.—種選擇可用于產(chǎn)生權(quán)利要求1-6任一項的米糠油、權(quán)利要求7-12任一項的米糠和/或權(quán)利要求13-18任一項的水稻種子的水稻植物的方法，所述方法包括i)分析候選植物的F^/2或FW萬基因的序列和/或表達(dá)水平，及ii)基于所述基因的序列和/或表達(dá)水平選擇可用于產(chǎn)生權(quán)利要求1-6任一項的米糠油、權(quán)利要求7-12任一項的米糠和/或權(quán)利要求13-18任一項的水稻種子的水稻植物。63.—種鑒別可用于產(chǎn)生權(quán)利要求l-6任一項的米糠油、權(quán)利要求7-12任一項的米糠和/或權(quán)利要求13-18任一項的水稻種子的水稻植物的方法，所述方法包括檢測所述植物的核酸分子，其中所述核酸分子與所述植物中基因和/或基因的至少一部分連接和/或包含所述植物中F^/2基因和/或FaW基因的至少一部分。64.—種鑒別可用于產(chǎn)生貯存期增加的糙米種子的水稻植物的方法，所述方法包括檢測所述植物的核酸分子，其中所述核酸分子與所述植物中基因和/或FW5基因的至少一部分連接和/或包含所述植物中FaW基因和/或基因的至少一部分。65.權(quán)利要求63或64的方法，其包括v)使第二種核酸分子與得自所述植物的所述核酸分子雜交，vi)任選使至少一種其它核酸分子與得自所述植物的所述核酸分子雜交，及vii)檢測所述雜交步驟的產(chǎn)物或者所述雜交步驟產(chǎn)物的不存在。66.權(quán)利要求65的方法，其中所述第二種核酸分子用作引物以逆轉(zhuǎn)錄或者復(fù)制所述核酸分子的至少一部分。67.權(quán)利要求63-67任一項的方法，其中使用選自如下的技術(shù)檢測核酸:限制片段長度多態(tài)性分析、擴(kuò)增片段長度多態(tài)性分析、微衛(wèi)星擴(kuò)增和/或核酸測序。68.權(quán)利要求63-67任一項的方法，包括核酸擴(kuò)增。69.權(quán)利要求63-68任一項的方法，其中所述方法分析基因的表達(dá)水平。70.—種獲得水稻植物或種子的方法，所述方法包括i)使第一種親代水稻植物與第二種親代水稻植物雜交，所述第一種親代水稻植物包含賦予植物谷粒的油中的油酸比例增加的F^/2等位基因，所述第二種親代水稻植物包含賦予植物谷粒油中的棕櫚酸比例降低的等位基因，ii)從雜交中篩選存在這兩個等位基因的后代植物或谷粒，及viii)選擇包含這兩個等位基因且具有植物谷粒的油中的油酸比例增加和棕櫚酸比例降低的后代植物或谷粒。71.—種將F"6/2等位基因?qū)胨局参镏械姆椒?，所述方法包括i)使第一種親代水稻植物與第二種親代水稻植物雜交，其中所述第二種植物包含所述等位基因，及ii)使步驟i)雜交后代和與第一種親代植物相同基因型的植物回交足夠次數(shù)以產(chǎn)生具有第一種親代植物的大多數(shù)基因型但是也包含所述等位基因的植物，iii)選擇具有第一種植物的大多數(shù)基因型且包含所述等位基因的植物，其中所述等位基因賦予所述植物的油、糠和/或種子中油酸的比例增加。72.—種將i^W等位基因?qū)胨局参镏械姆椒?，所述方法包括i)使第一種親代水稻植物與第二種親代水稻植物雜交，其中所述第二種植物包含所述等位基因，及ii)使步驟i)的雜交的后代和與第一種親代植物相同基因型的植物回交足夠次數(shù)以產(chǎn)生具有第一種親代的大多數(shù)基因型但是也包含所述等位基因的植物，iii)選擇具有第一種植物的大多數(shù)基因型且包含所述等位基因的植物，其中所述等位基因賦予所述植物的油、糠和/或種子中棕櫚酸的比例降低。73.—種增加水稻植物的油、糠和/或種子中油酸比例的方法，所述方法包括對所述植物進(jìn)行遺傳操作，由此當(dāng)與野生型植物相比時i^W多肽的產(chǎn)生減少，其中所述多肽具有A12去飽和酶活性。74.—種降低水稻植物的油、糠和/或種子中棕櫚酸比例的方法，所述方法包括對所述植物進(jìn)行遺傳操作，由此當(dāng)與野生型植物相比時F"W多肽的產(chǎn)生減少，其中所述多肽具有FatB活性。75.使用權(quán)利要求56-74任一項的方法獲得的水稻植物或者其后代植物。76.得自權(quán)利要求44、48、49、55或75任一項的植物的米糠油。77.得自權(quán)利要求44、48、49、55或75任一項的植物的米糠。78.得自權(quán)利要求44、48、49、55或75任一項的植物的水稻種子。79.—種產(chǎn)生種子的方法，所述方法包括a)生長權(quán)利要求19-21、44、48、49、55或76任一項的植物，及b)收獲所述種子。80.包含權(quán)利要求1-6或76任一項的米糠油、權(quán)利要求7-12或77任一項的米糠和/或權(quán)利要求13-18或78任一項的水稻種子的食品。81.—種制備食物的方法，所述方法包括在權(quán)利要求1-6或76任一項的米糠油中烹飪可食用物質(zhì)。全文摘要本發(fā)明涉及油酸、棕櫚酸和/或亞油酸水平改變的米糠油、米糠和水稻種子。本發(fā)明還提供了遺傳修飾水稻植物的方法，由此該水稻植物產(chǎn)生的米糠油、米糠和水稻種子的油酸、棕櫚酸和/或亞油酸的水平改變。特別地，這個目的通過調(diào)節(jié)Fad2和/或FatB表達(dá)而實現(xiàn)。文檔編號C12N15/52GK101516181SQ200780033971公開日2009年8月26日申請日期2007年7月13日優(yōu)先權(quán)日2006年7月14日發(fā)明者E·懷特洛,R·C·德費特,S·P·辛格,S·拉赫曼,李忠誼,青柳申請人:聯(lián)邦科學(xué)技術(shù)研究組織