專利名稱：天花單克隆抗體的制作方法
天花單克隆抗體
相關(guān)申請
本申請要求2006年8月23日提交的申請?zhí)枮?0/839,579的美國臨時申 請的優(yōu)先權(quán)，該申請的內(nèi)容在此全部納入作為參考。
背景技術(shù)：
天花是一種由痘病毒家族中成員-天花病毒所引起的嚴重的，高度傳染， 有時會致命的傳染性疾病。數(shù)千年來，天花暴發(fā)時有發(fā)生，但繼一個成功的 全球疫苗接種計劃之后，這種疾病于1977年被有效消除。該疾病消除后， 由于不再需要預(yù)防，公眾中常規(guī)天花的疫苗接種隨即停止。因此，當前人口 中很大一部分人尚未免疫接種天花。所以天花病毒的生物恐怖襲擊將極具破 壞性。重要的是，如果發(fā)生了這樣的襲擊，疫苗接種將過于緩慢，不能有效 遏止天花在目標人口中的迅速蔓延。因此，人類需要一種用于治療天花感染 的速效和有效成分。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明部分地基于一個意外發(fā)現(xiàn)，即與天花病毒密切相關(guān)的痘病毒家族 成員一牛痘病毒的B5R抗原的人源化單克隆抗體能有效地中和(抑制)天花 感染。
因此，本發(fā)明一方面涉及一種含有直接抗B5R抗原的抗原結(jié)合域的人源 化單克隆抗體。這種人源化單克隆抗體(hB5RmAb)被施予患牛痘病毒感染 的患者時，能放慢牛痘病毒感染進程。它可具有與EM-1000雜交瘤細胞株 (ATCC Deposit Designation PTA-7594)所產(chǎn)生的單克隆抗體相同的抗原表位 特異性。該人源化抗體可包括與SEQIDNO:l (如下所示)相同，最多有兩 個單氨基酸差異的第一重鏈互補決定區(qū)(CDR)序列，與SEQIDNO:2 (如 下所示)相同，最多有四個單氨基酸差異的第二重鏈CDR序列，與SEQID
5NO:3 (如下所示)相同，最多有四個單氨基酸差異的第三重鏈CDR序列； 以及與SEQIDNO:4 (如下所示)相同，最多有四個單氨基酸差異的第一輕 鏈CDR序列，與SEQIDNO:5 (如下所示)相同，最多有三個單氨基酸差異 的第二輕鏈CDR序列，與SEQIDNO:6 (如下所示)相同，最多有三個單氨 基酸差異的第三輕鏈CDR序列。該人源化抗體可由含上述重鏈和輕鏈CDR 序列的單個多肽組成。
本發(fā)明另 一方面涉及一種包含上述抗體的培養(yǎng)細胞。
本發(fā)明再一方面涉及一種編碼多肽的分離的核酸，該多肽包括含有上述 重鏈或輕鏈CDR序列的人源化重鏈可變區(qū)序列。
本發(fā)明又一方面涉及包含上述核酸之一 的培養(yǎng)細胞。
從以下詳細描述以及權(quán)利要求書中可以看到本發(fā)明的其它特點或優(yōu)點。 發(fā)明詳細描述
以下所述為來自供體(如大鼠或小鼠)抗牛痘病毒B5R抗原的單克隆 抗體的新型人源化單克隆抗體(hB5RmAb)，可用于檢測天花病毒并抑制其 感染宿主細胞的能力。將鼠類單克隆抗體(mAb)作為治療劑施予人體，能 產(chǎn)生具有潛在危險的免疫應(yīng)答。本發(fā)明的人源化單克隆抗體不會引發(fā)這種免 疫應(yīng)答，因此可用作治療劑或預(yù)防劑。
此處所用的術(shù)語"單克隆抗體"，指含有免疫球蛋白重鏈或輕鏈可變 區(qū)的任何多肽。該多肽包括如二價抗體，單價抗體，單鏈抗體(即含有重 鏈和輕鏈可變區(qū)的單個多肽)，F(xiàn)ab片段，雙鏈抗體，微型抗體，以及與氨 基酸序列形成的其融合體，所述氨基酸序列與任何免疫球蛋白不相關(guān)或序列 同源性低(即低于60%)。
術(shù)語"人源化單克隆抗體"指有至少一個可變區(qū)框架序列與人類框架 序列接近或相同的上述任一種多肽，例如一種從人免疫球蛋白噬菌體展示庫 分離出來的抗體。
由此處所述的被hB5RmAb識別的B5R蛋白(Genbank CAA46496)序 列顯示如下LLL (SEQIDNO:7)
可用本領(lǐng)域熟知的分析方法來測定B5R抗原的親代或人源化抗體的親和 性。例如，參見Azimzadeh et al., J. Immunol Methods, 141(2): 199-208 (1991) 和Ota et al., Hybridoma, 17(5):471-7 (1998)。 hB5RmAb可具有與EM-1000雜 交瘤(如下所示)產(chǎn)生的抗體相同的B5R抗原表位特異性。表位定位的方法 早已確立并易于實行，如Steinmann " a/., J Wra/. 78(17):9030-40 (2004)中所 示。
此處所述的hB5RmAb可具有如下第一、第二和第三重鏈互補決定區(qū) (H-CDRsl-3)，其來源于供體(如大鼠或小鼠)抗B5R抗原的單克隆抗
體:
H畫CDR 1 H畫CDR 2 H-CDR 3
NYHVH CSEQIDNO:l) LMWRDGDTSYNPTLKS (SEQ ID NO:2) GSEYYGLLGYVMGA (SEQ ID NO:3)
它們可具有如下第一、第二和第三輕鏈互補決定區(qū)(L-CDRsl-3): L-CDR 1KASKSISKSLA (SEQ ID NO:4)
L-CDR2 SGSTLQS (SEQIDNO:5) L-CDR 3QQHNEYPVT (SEQ ID NO:6)
如上述發(fā)明內(nèi)容部分所指出，此處所述hB5RmAb的每個CDR序列與如 上所列SEQ ID NOs: 1-6相比，可包括數(shù)個氨基酸差異
H-CDR 1與SEQ ID NO:l相比最多2個單個氨基酸的差異 與SEQ IDNO:2相比最； 與SEQ IDNO:3相比最； 與SEQ ID NO:4相比最； 與SEQ IDNO:5相比最；
H-CDR 2 H-CDR 3 L-CDR 1 L陽CDR 2
4個單個氨基酸S 4個單個氨基酸的差異 4個單個氨基酸的差異 3個單個氨基酸的差異L誦CDR 3與SEQ ID NO:6.相比最多3個單個氨基酸的差異 所述差異可包括氨基酸替換、刪除、插入和增加。當該差異為氨基酸替換 時，優(yōu)選保守性氨基酸替換。保守性氨基酸替換是指一個氨基酸被另一個具有 相似化學(xué)特性的氨基酸替換。表1說明20種基因編碼的氨基酸可根據(jù)其化學(xué) 性質(zhì)的分組。
表l:氨基酸根據(jù)化學(xué)性質(zhì)分組酸性中性脂肪族芳香族堿性
天門冬氨 酸，谷氨酸天冬酰胺，谷氨酰胺 半胱氨酸，蛋氨酸， 脯氨酸，絲氨酸，蘇 氨酸丙氨酸，甘氨酸，異 亮氨酸，亮氨酸，纈 氨酸組氨酸，苯丙氨 酸，色氨酸，酪 氨酸精氨酸， 賴氨酸
引入上述任何突變的技術(shù)都是本領(lǐng)域眾所周知的(例如，在易錯宿主細胞
中的定點突變，易錯PCR和序列復(fù)制)。包含上述任何突變類型的 hB5RmAb，其結(jié)合B5R的能力可通過一些常用技術(shù)非常有效地測得，例如， 通過ELISA或噬菌體展示技術(shù)。這些分析的高通量版本都是本領(lǐng)域所已知的， 可與誘變技術(shù)結(jié)合用來分離具有更高抗原親和力的hB5RmAb，而不需要進行 額外的努力。參見美國專利No. 6,916,474。
對于hB5RmAb的可變區(qū)，考慮到作為抗原結(jié)合區(qū)來源的供體抗體的類別 或類型，可以使用任何人受體可變區(qū)框架序列。該人受體可變區(qū)框架序列也 可以為共有序列，即在若干自然發(fā)生的序列基礎(chǔ)上產(chǎn)生的一種序列。優(yōu)選所 用的人受體框架與供體抗體具有相同或相似的種類或類型。優(yōu)選地，將人類 III組Y (gamma)種系框架用于復(fù)合重鏈，將人I組K (kappa)種系框架用于 復(fù)合輕鏈。hB5RmAb的重鏈和輕鏈可以各自包含來自供體可變區(qū)框架序列的 高達約15個殘基。在hB5RmAb框架區(qū)序列內(nèi)包含供體可變區(qū)框架殘基可以增 強抗體對其抗原的親和力。例如，在美國專利No. 5,998，586和No.6,056,957中 描述了選擇合適供體框架殘基的方法。
考慮到抗體可能需要的功能，特別是效應(yīng)子功能，此處所述的hB5RmAb 的恒定區(qū)域被選中。例如，該恒定區(qū)域可以是人IgA,IgE,IgG或IgM域。當 hB5RmA是為了治療用途并需要抗體效應(yīng)子功能時，尤其可使用IgG人恒定區(qū)域，特別是IgGl和IgG3同種型。修飾的人恒定區(qū)域還可用于一個或多個氨基 酸殘基被更改或刪除以改變某個特定效應(yīng)子功能的情況。
此處所述的hB5RmAb可含有附加的效應(yīng)子或報道分子(例如，融合多 肽)。此外，重鏈或輕鏈的恒定區(qū)的氨基酸序列可以用編碼功fe性的非免疫 球蛋白多肽的氨基酸序列來替代，如親和標記物，熒光蛋白，酶或毒素分 子。因此，抗體分子的剩余部分不必只包括免疫球蛋白的序列。
本發(fā)明的再一方面包括編碼形成hB5RmA的人源化重鏈和輕鏈的DNA 序列。含有該DNA序列的克隆和表達載體以及由該DNA序列轉(zhuǎn)化的宿主細 胞，以及在轉(zhuǎn)化的宿主細胞內(nèi)產(chǎn)生含有表達該的DNA序列的抗體分子的方 法，也都屬于本發(fā)明的再一方面。構(gòu)建載體的一般方法，轉(zhuǎn)染方法和培養(yǎng)方 法均為本領(lǐng)域所熟知，且不需要額外的努力易于實現(xiàn)。編碼抗-B5R供體氨 基酸序列的DNA序列可通過如國際專利申請WO 93/16184中所示的熟知方 法容易地獲得。例如，抗-B5R編碼序列可從合適的雜交瘤細胞株通過基因 克隆或cDNA克隆獲得。陽性克隆可用重鏈或輕鏈所需的適當探針進行篩 選。此外，可使用PCR克隆。
人類受體的氨基酸序列可通過任何一種標準方法獲得。例如，編碼人類 受體框架的DNA序列，如人i組輕鏈和人m組重鏈，都為本領(lǐng)域技術(shù)人員 所熟知且廣泛應(yīng)用。
標準分子生物學(xué)技術(shù)可用于制備所需的DNA序列。該序列可完全或部 分地用寡核苷酸合成技術(shù)合成，可適當采用定點突變和PCR技術(shù)。例如，可 采用Jones "a/.A^ww， 321, 522 (1986)中所述的寡核苷酸定向合成。還可釆 用Verhoeyen &a/.， 5Wewce, 239, 1534-1536 (1988)中所述的預(yù)先存在可變區(qū)的 寡核苷酸定點突變。此外，還可采用Queen " 尸rac. Ato/. Jcad. L/S4 86, 10029-10033 (1989)和WO 90/07861中所述的用T4 DNA聚合酶進行的缺 口寡核苷酸的酶填充技術(shù)。
核苷酸也可以從各種商業(yè)來源訂購，如Sigma-Genosys公司(sigma-
genosys.com/oligo.asp)， 米德蘭認證試齊U公司 (mcrc@oligos.com)， 大美 國基因公司(The Great American Gene Company, genco.com) ， ExpressGen公司(expressgen.com) ， Operon Technologies公司(力口禾U福尼亞州，阿拉米 達)以及許多其它公司。
任何合適的宿主細胞和載體系統(tǒng)可用于編碼hB5RmA重鏈或輕鏈的 DNA序列的表達。優(yōu)選地，采用真核宿主細胞(如，哺乳動物)表達系統(tǒng)， 尤其合適的哺乳動物宿主細胞包括CHO細胞和骨髓瘤或雜交瘤細胞株。
在一種實施方式中，hB5RmAb由雜交瘤細胞株EM-1000分泌。本申請 人已經(jīng)按照布達佩斯條約，向位于美國弗吉尼亞州20110-2209馬納薩斯的美 國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)，保藏了該EM-1000雜交瘤細胞株 (ATCC保藏編號PTA-7594)。保藏的該雜交瘤細胞株取自與本申請日前由 EMAB LLC, 3 Hunt Road, Lexington, MA 02421所保藏的相同的保藏物。保 藏的雜交瘤細胞會不加限制地在ATCC存放處保藏30年，或最新請求提出 后的5年，或本專利的有效期，以較長期限為準；如果在該期限內(nèi)保藏物失 活則將被替換。
上述hB5RmAb可包含在藥物組合物中，作為預(yù)防或治療用途。例如， 一種藥物組合物可包括有效量的hB5RmAb和藥學(xué)上可接受的載體。 一般 地，該有效量將產(chǎn)生一個循環(huán)的hB5RmAb濃度，其足以定量結(jié)合被感染主 體內(nèi)循環(huán)的天花或牛痘病毒或使感染進程放慢。盡管如此，正如本領(lǐng)域技術(shù) 人員所公認的，有效量將會發(fā)生變化，這取決于感染的嚴重性，干預(yù)的階 段，主體的一般健康狀況和年齡，以往的治療手段，給藥途徑，賦形劑使 用，以及和其它預(yù)防和治療手段共同使用的可能性。
本發(fā)明的范圍還包括一種通過給有需要的患者施予有效量的上述抗體， 用于治療主體天花感染的方法。接受治療的患者可被認為是具有或正處于與 天花感染有關(guān)的危險條件下。術(shù)語"治療"指給患者施予該組合物，目的是 為了治愈，緩和，減輕，補救或改善紊亂、紊亂的癥狀、疾病繼發(fā)的狀態(tài)、 或?qū)@種疾病的易感性。"有效量"指能在接受治療的患者上產(chǎn)生醫(yī)學(xué)上所 需結(jié)果的組合物的用量。
為了實踐本發(fā)明的方法，含hB5RmAb的組合物可通過腸外途徑系統(tǒng)給 藥。給藥時，優(yōu)選該治療組合物以無熱源，腸外可接受的水溶液的形式給 藥。制備該種腸外可接受的蛋白質(zhì)溶液，同時適當考慮pH，等滲性，穩(wěn)定性等，都屬于本領(lǐng)域的技能。可采用的腸外可接受的載體和溶劑是甘露醇， 水，林氏液和生理鹽溶液。
根據(jù)需要，hB5RmAb可連續(xù)給藥一段時間。連續(xù)注入組合物并在一段 時間維持其系統(tǒng)濃度的方法均為本領(lǐng)域已知的。例如，此處所述的組合物可 從滲透性小型泵或其它隨時間釋放的裝置中釋放或傳輸。初級滲透性小型泵 的釋放率可用處于釋放口的微孔性、快速反應(yīng)的凝膠調(diào)節(jié)。滲透性微型泵可 用于在較長時間(如，從一小時到一周)控制組合物的釋放。這種微型泵及 其它緩釋裝置可從商業(yè)上獲得，如DURECT公司(加利福尼亞，庫柏提諾 市)?；钚越M合物也可以栓劑的形式直腸給藥。
以下具體實施例僅為說明本發(fā)明，不以任何方式限制本發(fā)明揭示的其余
內(nèi)容。不需進一步說明，相信本領(lǐng)域技術(shù)人員可以基于本說明書，最大程度 地利用本發(fā)明。此處引用的所有出版物的全部內(nèi)容在此納入作為參考。
用抗-BR5單克隆抗體中和體內(nèi)牛痘病毒
抗牛痘病毒的病毒包膜蛋白B5R的鼠雜交瘤抗-BR5在DMEM中生長 (Schmelz et al., J Virol" 68(1):130-147 (1994);和Galmiche et al.， Virology, 254(1):71-80(1999))，該單克隆抗體在蛋白G瓊脂糖凝膠上進行純化。
6至8周齡的Balb/c小鼠(3只/組)用107噬斑經(jīng)鼻內(nèi)感染形成牛痘病 毒單位。五個小時后，經(jīng)intraperitonally注射10或30嗎抗-BR5單克隆抗體 或預(yù)-免疫鼠IgG (PI)。然后每隔一天監(jiān)測小鼠體重，持續(xù)12天。比較用 未配對單側(cè)"則試各個劑量的抗-BR5和PI動物的結(jié)果。
在對照動物中，第2天觀察到小鼠體重下降，第6天達到高峰，并在第 12天回升。在抗-BR5治療動物中，觀察到類似模式。但是，在第6天接受 30g抗-BR5的動物體重下降明顯較少(與PI情況相比pO.OOl)。
人源化抗-BR5單克隆抗體
抗-BR5輕鏈和重鏈可變區(qū)的cDNA經(jīng)PCR擴增，并亞克隆到pCRII (Invitragen公司)進行序列測定。通過若干獨立的克隆獲得核苷酸序列。選擇從獨立的克隆中得到的相同cDNA序列來表示抗-BR5抗體的輕鏈或重鏈 可變區(qū)。
將CDR移植應(yīng)用于大鼠抗-BR5抗體的人源化。為保留結(jié)合親和力和特 異性，在將CDR移lt到人類框架時，保留V區(qū)域構(gòu)型是很重要的。經(jīng)過氨 基酸序列比較，人類抗體IC4的框架區(qū)域被用作大鼠抗-BR5的人源化的框架 供體。
設(shè)計并合成四對引物(每對約80個堿基長度)以編碼人源化抗-BR5可 變區(qū)的蛋白質(zhì)序列，包括信號肽。每對引物約20個核苷酸重疊?；虻难b 配和擴增包括四個步驟(1)對4對互補寡核苷酸進行退火，并用Klenow 片段經(jīng)4個單獨反應(yīng)將其延伸；(2)由此產(chǎn)生的4個dsDNA片段經(jīng)兩兩混 合，變性，再退火，以兩個不同反應(yīng)延長(3)由此產(chǎn)生的兩個dsDNA片段 經(jīng)混合，變性，再退火和延伸，以形成最后的全長dsDNA;和(4)由此產(chǎn) 生的DNA用引物經(jīng)PCR擴增，以便在兩端引入効"I位點。然后PCR片段 經(jīng)^fefll消化，并插入到各自的J^al-消化的pVK和pVg4載體。
然后測試人源化抗-BR5的特異性，詳情如下所述。將編碼人源化抗-BR5重鏈和輕鏈的質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染至C0S-7細胞內(nèi)，然后收集并純化取自培養(yǎng)細 胞的用完的上清液。通過^Western blot分析，測試人源化抗-BR5與在COS - 7 細胞或大腸桿菌內(nèi)表達的B5R胞外域的相互作用能力。
為發(fā)展穩(wěn)定的可產(chǎn)生人源化抗-BR5的細胞株，用脂質(zhì)轉(zhuǎn)染胺試劑 (lipofectamine) 2000 (invigrogen)將編碼人源化抗-BR5重鏈和輕鏈的質(zhì) 粒共轉(zhuǎn)染至CHO/dhfr-細胞內(nèi)。轉(zhuǎn)染24小時后，用選擇培養(yǎng)基(20nM甲氨 蝶呤阿爾法MEM)將細胞置于到96孔組織培養(yǎng)板。用耐甲氨蝶呤的克隆測 試人源化IgG的產(chǎn)生。有限稀釋適用于鑒別高產(chǎn)單克隆細胞株。
其它實施方式
本說明書中披露的所有特征可以任意組合合并。說明書中披露的每一特 征可被另一種具有相同，相當或類似目的的特征所取代?；谏鲜雒枋觯绢I(lǐng)域技術(shù)人員可以很容易地確定本發(fā)明的本質(zhì)特征， 并且在不違背本發(fā)明精神和范圍的情況下，可做出本發(fā)明的各種變化和修 改，以使其適應(yīng)不同用途和條件。因此，本發(fā)明也涉及其它實施方式。
權(quán)利要求
1、一種人源化單克隆抗體，包含抗B5R抗原的抗原結(jié)合域，其中抗體與該B5R抗原結(jié)合。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1的單克隆抗體，其中將該抗體施予患牛痘病毒感染 的患者時，使感染進程放慢。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1的人源化單克隆抗體，其中該抗體包括與SEQ ID NO:l相同，最多有兩個單氨基酸差異的第一重鏈CDR序列，與SEQID NO:2相同，最多有四個單氨基酸差異的第二重鏈CDR序列，與SEQ ID NO:3相同，最多有四個單氨基酸差異的第三重鏈CDR序列；以及與SEQ ID NO:4相同，最多有四個單氨基酸差異的第一輕鏈CDR序列，與SEQ ID NO:5相同，最多有三個單氨基酸差異的第二輕鏈CDR序列，與SEQ ID NO:6相同，最多有三個單氨基酸差異的第三輕鏈CDR序列。
4、 根據(jù)權(quán)利要求3的人源化單克隆抗體，其中該抗體由單一的多肽組成。
5、 根據(jù)權(quán)利要求3的人源化單克隆抗體，其中第一重鏈CDR序列與 SEQIDNO:l相同，第二重鏈CDR序列與SEQ ID NO:2相同，第三重鏈 CDR序列與SEQ ID NO:3相同；以及第一輕鏈CDR序列與SEQ ID NO:4相 同，第二輕鏈CDR序列與SEQIDNO:5相同，第三輕鏈CDR序列與SEQ ID NO:6相同。
6、 根據(jù)權(quán)利要求5的人源化單克隆抗體，其中該抗體由單一的多肽組成。
7、 根據(jù)權(quán)利要求1的人源化單克隆抗體，其中該抗體具有與由ATCC保 藏編號PTA-7594的細胞株產(chǎn)生的單克隆抗體相同的抗原表位特異性。
8、 根據(jù)權(quán)利要求7的人源化單克隆抗體，其中該抗體由ATCC保藏編號 PTA-7594的細胞株產(chǎn)生。
9、 根據(jù)權(quán)利要求7的人源化單克隆抗體，其中該抗體由單一的多肽組成。
10、 一種分離的核酸，包括編碼一多肽的一核酸序列，該多肽包括一人源化免疫球蛋白重鏈可變區(qū)，所述人源化免疫球蛋白重鏈可變區(qū)含有與SEQ IDNO:l相同，最多有兩個單氨基酸差異的第一重鏈CDR序列，與SEQ ID NO:2相同，最多有四個單氨基酸差異的第二重鏈CDR序歹:i，與SEQ ID NO:3相同，最多有四個單氨基酸差異的第三重鏈CDR序列。
11、 根據(jù)權(quán)利要求10的核酸，其中第一重鏈CDR序列與SEQIDNO:l 相同，第二重鏈CDR序列與SEQ ID NO:2相同，第三重鏈CDR序列與SEQ ID NO:3相同。
12、 根據(jù)權(quán)利要求ll的核酸，其中該編碼的多肽包含SEQIDNO:7。
13、 一種分離的核酸，包括編碼一多肽的核酸序列，該多肽包括一人源 化免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)，所述人源化免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)含有與SEQ IDNO:4相同，最多有四個單氨基酸差異的第一輕鏈CDR序列，與SEQ ID NO:5相同，最多有三個單氨基酸差異的第二輕鏈CDR序列，以及與SEQ ID NO:6相同，最多有三個單氨基酸差異的第三輕鏈CDR序列。
14、 根據(jù)權(quán)利要求13的核酸，其中第一輕鏈CDR序列與SEQIDNO:4 相同，第二輕鏈CDR序列與SEQ ID NO:5相同，第三輕鏈CDR序列與SEQ ID NO:6相同。
15、 根據(jù)權(quán)利要求13的核酸，其中該多肽包含SEQIDNO:8。
16、 一種含有權(quán)利要求1的單克隆抗體的培養(yǎng)細胞。
17、 一種含有權(quán)利要求3的單克隆抗體的培養(yǎng)細胞。
18、 一種含有權(quán)利要求11的核酸的培養(yǎng)細胞。
19、 一種含有權(quán)利要求13的核酸的培養(yǎng)細胞。
20、 根據(jù)權(quán)利要求19的培養(yǎng)細胞，進一步包括一分離的核酸，該分離 的核酸含有編碼一多肽的核酸序列，該多肽包括一人源化免疫球蛋白重鏈可 變區(qū)，所述人源化免疫球蛋白重鏈可變區(qū)含有與SEQIDNO:l相同，最多有 兩個單氨基酸差異的第一重鏈CDR序列，與SEQIDNO:2相同，最多有四 個單氨基酸差異的第二重鏈CDR序列，與SEQIDNO:3相同，最多有四個 單氨基酸差異的第三重鏈CDR序列。
21、 一種治療患者天花感染的方法，該方法包括將有效量的權(quán)利要求1 的抗體施予有需要的患者。
全文摘要
本發(fā)明公開了抗牛痘病毒B5R表面抗原的人源化單克隆抗體。該抗體可有效治療天花感染。本發(fā)明還公開了編碼該抗體重鏈和輕鏈的核酸，以及表達它們的細胞。
文檔編號C12P21/08GK101553255SQ200780039448
公開日2009年10月7日 申請日期2007年8月22日 優(yōu)先權(quán)日2006年8月23日
發(fā)明者瑪麗-海倫妮·朱文, 讓-皮埃爾·基內(nèi) 申請人:奎爾斯根制藥有限責(zé)任公司