專利名稱：：漆酶介質(zhì)及使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及水解穩(wěn)定的漆酶介質(zhì)，以及涉及用于漂白材料的酶學(xué)方法。
背景技術(shù)：
：漆酶是含銅的酶，公知其在氧的存在下是良好的氧化劑。發(fā)現(xiàn)漆酶存在于微生物、真菌和高等生物中。漆酶可用于許多的應(yīng)用，包括紙漿和紡織品的漂白、處理紙漿廢水、脫墨、工業(yè)顏色移除、漂白洗衣粉、口腔護(hù)理牙齒增白劑、以及用作聚合作用及氧化反應(yīng)的催化劑或促進(jìn)劑。漆酶在許多工業(yè)中可以具有廣泛的應(yīng)用，包括洗滌劑工業(yè)、紙和紙漿工業(yè)、紡織工業(yè)和食品工業(yè)。在一種應(yīng)用中，在洗滌劑洗凈過(guò)程中，將酴氧化酶用作從衣物移除染色(諸如食物沾污)的助劑。多數(shù)漆酶在酸性pH范圍內(nèi)展現(xiàn)出pH最適條件，而在中性或堿性pH中是失活的。已知可通過(guò)多種真菌產(chǎn)生漆酶，包括曲霉屬(Aspergillus)、脈孢菌屬(Neurospora)、柄孢殼屬(Podospora)、葡萄孢屬(Botrytis)、側(cè)耳屬(Pleurotus)、層孔菌屬(Fornes)、射脈菌屬(Phlebia)、栓菌屬(Trametes)、多孔菌屬(Polyporus)、葡萄穗霉屬(Stachybotrys)、絲核菌屬(Rhizoctonia)、雙極蠕孢屬(Bipolaris)、彎孢審屬(Curvularia)、殼單孢屬(Amerosporium)和香茹屬(Lentinus)的物種。然而，在各種應(yīng)用中仍然需要具有不同表現(xiàn)特性的漆酶。對(duì)于許多應(yīng)用，可通過(guò)應(yīng)用介質(zhì)(也稱為增強(qiáng)劑)改進(jìn)漆酶的氧化效率。在本領(lǐng)域中將包括漆酶和介質(zhì)的系統(tǒng)稱為漆酶-介質(zhì)系統(tǒng)(LMS)。相同的化合物還可用于活化或啟始漆酶的作用。有若干種用于漆酶-介質(zhì)系統(tǒng)的已知介質(zhì)。它們包括HBT(l-羥基苯并三唑)、ABTS[2,2，-連氮基雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-亞磺酸)、NHA(N-羥基乙酰苯胺)、NEIAA(N-乙?；?N-苯基羥胺)、HBTO(3-羥基1，2，3-苯并三"秦40H)-酮)和VIO(紫尿酸)。此外，有若干種已發(fā)現(xiàn)可用作介質(zhì)的含有NH-OH或N-O的化合物。官能團(tuán)和取代基對(duì)介質(zhì)的效率具有很大的影響。甚至在同類化合物中，取代基可能改變漆酶對(duì)底物的特異性，由此極大地升高或降4氐介質(zhì)效率。此外，介質(zhì)能對(duì)一種具體應(yīng)用有效但不適于另一應(yīng)用。當(dāng)前介質(zhì)的另一缺點(diǎn)是它們?cè)谑褂闷陂g聚合的傾向。因此，有需要發(fā)現(xiàn)用于特定應(yīng)用的有效介質(zhì)。一種此類應(yīng)用是漂洗紡織品，其中該介質(zhì)不太昂貴或不太危險(xiǎn)也是重要的。下面給出了漆酶-介質(zhì)系統(tǒng)的其它應(yīng)用。因此，有需要鑒定活化漆酶和/或增強(qiáng)表現(xiàn)出漆酶活性的酶活性的其它介質(zhì)。發(fā)明概述本發(fā)明描述了新的漆酶介質(zhì)，包括2,6-二甲氧基苯酚的4-甲酰氨基和4-氰基衍生物，其表現(xiàn)出改進(jìn)的穩(wěn)定性和良好的漂白表現(xiàn)。在一個(gè)實(shí)施方案中，將新的漆酶與本發(fā)明的4-取代的2，6-二曱氧基苯酚衍生物聯(lián)用，以提供用于漂白粗斜紋布織物的改進(jìn)的方法。附圖簡(jiǎn)述圖1是在實(shí)施例1中使用的芽孢桿菌表達(dá)質(zhì)粒(p2JMagkl(Blnk2E-漆酶)的示意圖，用于表達(dá)與編碼BCE103的基因融合的密碼子優(yōu)化的漆酶D基因。圖2是顯示使用來(lái)自梭孢殼屬中的種(Thielaviasp.)的漆酶和50及500jiM濃度的多種介質(zhì)漂白可溶欷藍(lán)的結(jié)果的柱狀圖。圖3是顯示在pH5使用來(lái)自梭孢殼屬、毀絲霉屬(Myceliophthora)和下皮黑孔菌屬中的種(Cerrenasp.)的漆酶和多種介質(zhì)漂白可溶靛藍(lán)的結(jié)果的柱狀圖。圖4是顯示在pH7使用來(lái)自梭孢殼屬、毀絲霉屬和下皮黑孔菌屬中的種的漆酶以及多種介質(zhì)漂白可溶靛藍(lán)的結(jié)果的柱狀圖。圖5是顯示用單色下皮黑孔菌(C.unicolor)漆酶(20ppm)和不同濃度的3種介質(zhì)處理的粗斜紋布樣品(正面)總色差(E)的柱狀圖。圖6是顯示用單色下皮黑孔菌漆酶(20ppm)和不同濃度的3種介質(zhì)處理的粗斜紋布樣品(背面)總色差(E)的柱狀圖。圖7是作為使用來(lái)自單色下皮黑孔菌的漆酶D的漆酶/介質(zhì)聯(lián)合的函數(shù)顯示的漂白的粗斜紋布圓片(正面)總色差的柱狀圖。圖8是作為使用來(lái)自單色下皮黑孔菌的漆酶D的漆酶/介質(zhì)聯(lián)合的函數(shù)顯示的漂白的粗斜紋布圓片(背面)總色差的柱狀圖。圖9是于60。C和pH6作為介質(zhì)濃度和酶濃度的函數(shù)顯示的重組漆酶D和丁香酰胺介質(zhì)的總色差圖。圖10是于60。C和pH6作為介質(zhì)濃度和酶濃度的函數(shù)顯示的重組漆酶D和丁香腈介質(zhì)的總色差圖。發(fā)明詳述除非在本文中以其它方式定義，否則本文中所使用的技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)Singleton等，微生物學(xué)和分子生物學(xué)詞典(DICTIONARYOFMICROBIOLOGYANDMOLECULARBIOLOGY),第二版，JohnWiley和Sons,紐約(1994);以及Hale&Marham,生物學(xué)HARPERCOLLINS詞典(THEHARPERCOLLINSDICTIONARYOFBIOLOGY),Harper7Perennial,紐約(1991)給本領(lǐng)域技術(shù)人員提供了本發(fā)明所使用的許多術(shù)語(yǔ)的一般詞典。盡管可以應(yīng)用與本文所描述的那些類似或等效的任何方法及材料來(lái)實(shí)施或測(cè)試本發(fā)明，但本發(fā)明描述了優(yōu)選的方法和材料。數(shù)值范圍包括定義該范圍的數(shù)值。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明不限于所描述的具體方法、方案和試劑，因?yàn)檫@些可以變化。本文提供的標(biāo)題不是對(duì)本發(fā)明各方面或?qū)嵤┓桨傅南拗?，其可通過(guò)作為整體來(lái)參考本說(shuō)明書(shū)而獲得。因此，通過(guò)作為整體參考本i兌明書(shū)能更完整地定義下面定義的術(shù)語(yǔ)。本文所有引用的出版物均通過(guò)引用明確地并入本文，用于描述和/>開(kāi)可能與本發(fā)明關(guān)聯(lián)使用的組合物和方法。I.漆酶和漆酶相關(guān)酶在本發(fā)明上下文中，漆酶和漆酶相關(guān)酶包括由酶分類(EC1.10丄2)包含的任何漆酶。已知漆酶來(lái)自微生物和植物來(lái)源。微生物漆酶可以源自細(xì)菌或真菌(包括絲狀真菌和酵母)，并且合適的實(shí)例包括可從以下菌林衍生的漆酶曲霉屬(Aspergillus);脈孢菌屬(Neurospora)，例如津且糙脈孢菌(N.crassa);柄孢殼屬(Podospora);葡萄孢屬(Botrytis);金錢(qián)菌屬(Collybia);下皮黑孔菌屬；葡萄穗霉屬(Stachybotrys);革耳屬(Panus)，例如野生革耳(Panusrudis);梭孢殼屬(Theilava);層孔菌屬；香茹屬；側(cè)耳屬；栓菌屬，例如絨毛栓菌(T.villosa)和變色栓菌(T.versicolor);絲核菌屬，例如立枯絲核菌(R.solani);鬼傘屬(Coprinus),例如褶紋鬼傘(C.plicatilis)和灰蓋鬼傘(C.dnereus);小脆柄菇屬(Psatyrella);毀絲霉屬，例如嗜熱毀絲霉(M.thermonhila);柱頂孢屬(Schytalidium);射脈菌屬，例如射脈菌(P.radita)(WO92/01046);或革蓋菌屬(Coriolus)，例如，毛革蓋菌(C.hirsutus)(JP2-238885);棉皮孑L菌屬(Spongipellissp.);多孔菌屬(Polyporus);蟲(chóng)擬蠟菌(Ceriporiopsissubvermispora);粗皮靈芝(Ganodermatsunodae)和木霉屬(Trichoderma)。還可通過(guò)以下方法生產(chǎn)漆酶或漆酶相關(guān)酶所迷方法包括在允許漆酶表達(dá)的條件下在培養(yǎng)基中培養(yǎng)用重組DNA載體轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞，并從培養(yǎng)物中回收漆酶，其中所述重組DNA載體攜帶有編碼所述漆酶的DNA序列以及允許編碼漆酶的DNA序列表達(dá)的DNA序列。可將表達(dá)載體轉(zhuǎn)化至合適的宿主細(xì)胞，諸如真菌細(xì)胞，其優(yōu)選的實(shí)例是曲霉屬(Aspergillus)的物種，最優(yōu)選米曲霉(Aspergillusoryzae)和黑曲霉(Aspergillusniger);以及鐮孢菌屬(Fusarium)的物種，最優(yōu)選有毒鐮孢(Fusariumvenenatum)?？赏ㄟ^(guò)涉及原生質(zhì)體形成、以及轉(zhuǎn)化原生質(zhì)體并隨后用本身已知的方法再生細(xì)胞壁的方法轉(zhuǎn)化真菌細(xì)胞。曲霉屬作為宿主微生物的用途描述于EP238,023。鐮孢菌屬作為宿主微生物的用途描述于WO96/00787和WO97/08325。備選地，宿主生物可以是細(xì)菌，特別是芽孢桿菌屬(Bacillus)、假單胞菌屬(Pseudomonas)、鏈霉菌屬(Streptomyces)或大腸桿菌(E.coli)的菌林?？筛鶕?jù)常規(guī)方法進(jìn)行細(xì)菌細(xì)胞的轉(zhuǎn)化，例如，如描述于T.Maniatis等，分子克隆實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)(MolecularCloning:ALaboratoryManual)，ColdSpringHarbor,1982。合適DNA序列的篩選和載體的構(gòu)建也可通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行，參見(jiàn)前面引用的T.Maniatis等。用于培養(yǎng)經(jīng)轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞的培養(yǎng)基可以是適于生長(zhǎng)所討論的宿主細(xì)胞的任何常規(guī)培養(yǎng)基。可使所表達(dá)的酶方便地分泌至培養(yǎng)基中，并且可通過(guò)公知的方法從培養(yǎng)基回收，所述方法包括通過(guò)離心或過(guò)濾從培養(yǎng)基分離細(xì)胞，通過(guò)鹽諸如硫酸銨沉淀培養(yǎng)基的蛋白質(zhì)組分，隨后是層析過(guò)程，諸如離子交換層析、親和層析等。在一個(gè)實(shí)施方案中，表達(dá)宿主可以是具有在CHB1啟動(dòng)子和終止子控制之下的漆酶編碼區(qū)的里氏木霉(Trichodermareesei)。(例如，參見(jiàn)美國(guó)專利5，861，271號(hào))。表達(dá)載體可以是如在2005年10月7日提交的美國(guó)專利申請(qǐng)11/245,628號(hào)中公開(kāi)的pTrex3g(代理人案號(hào)GC886)。以這種方式，制備了以下新的基因和漆酶A.來(lái)自CBS154.29菌抹的下皮黑孔菌屬漆酶Dl基因(SEQIDNo.")，gattctaatacttctaggcgatcccacaggttttctcaacggtatgagacttcacactctttagctctgtacacattgtctgcttgccggagggatattaTATAGGGTGAcggatgttgacgaatagtttggtttcttcctcagtgccctCAGACCAAGCtgtgacggttcaaagacctaagacattgtacccttgcggatgagtaacactgtagcactccggacccgctggtatgtcatcaccatagattaccttctcctcaacacacgaggtattcctTGTAATTGATgatccgtgctagaatgccgcaccgttggggactcgtaccttcatattaaccgcagacatcgaaacattatagcatcaacaaattctgagcacattggcctgcagttggagctcccgcagctgggtcgtcccctcagggacgtttcgtggtattttaacattgattggcatat"cagaccgcctttatagtgtgagctttgcctaagaaagggtattcgggtCCGGACACGCtctggtgtgtgacagcccttaatacgtatgaaatagtgccacatccggagaccaggcatgcatttatgctcctgtaatatatgggcgcaccatgaagtccgagatgggacagtcggaagaacaaagaccaggcacttttgtttgcgtcacaacttccagcgccaacttccgcagtctgaagaagggaacataatagcagtggtactttctacgtggtgctacgatgttgttgacggtgtttggtaccatatacacgcgcctgattctacgatgctgagcctctacccagaccgtttccggttgatggtcacccctgaccttgtcgtaaggtcaatagctatgccaaacatatccttcgagccccgctcagctcctgtgggttttgttttaatcacaggcatttccagtcacgcctccttggtgctcagatgaactaggcgaccgcaccccagaatgacggtagtgcagggtcgtragcaatgtctcaccagaccgacaattggaggcagtgcagccaacctggattactcccaaatataaactgctattagcgcgtgtgtgggacaattagttcaaagacctgagacgtgcaagatgaccggcctcggaaccaagagattgtagcgtcaacacggagaccatagtctggagaacactttttgaactcggctatgctgcattgctccagacctgggacgtaagagccaacctcaatgtcacattgtgagctcattggatccgcttgggccataactcttttggtatcatacttcgttgtgatgacggtggtcattataatgttctcgccctccggcacaccttgatcaactggctgttattatcttctcttttggtttcgataatatgacgttgactctattaatcgatacaatgctaactcggtagaaatacaagaatgatccccgttgtatgtcttgttgtcaagcctttaacttaactaacctctctCACTaATCCTacgctcaagaAAGGTTGTGGtttccatcttcaaactaatctagcgatgagttggagcgggcctcgcattttccgggcccggccttgccatccaacaccccgaatcgagatacgggttgagtaaacgtggtagcaatgttctgtgtataatgacagcccttgacctccgtaaaagaggagggagatgttctctacaggttggaaattatctagtccaaactacgatggtattgctctctgaCTATTACATCattgggcccgtggcgtacaatgatcaccggcaaaactaactcgatgatc丁ctattattgttctatcgctagacggtcccgtctgtatgacgtcatctatctacgatcctagttccaaatattcagagagcagaccgttgttgatactaatgggttaggcccagcgttgaacctgctctaaatttcgtgcgtgtcatcgaattcaaatctttattctccttcaacccgaagtacaacaacacttctgtagaXatgaagcggcgcgctgttcggaaacgctgtttcgtacgttgtagagtaatcggtccccgTTTACTTCCAagctcgttatcatggcgtaaatgatatgcatataactttggactgatgaatgagacgcaatggttcctcccgtcttcgctgtacgtgacattctccacagtgcgagccagcctagactaccgatacacgtggctagtaaccctgagacaggtctgcacacatgtgagttatgaatatgggacagaccatt50ctccatttgt100gggatgcctt150ataagacgat200catttcatgg250gcttgctatc300tggccgacat350cgtccaaccg400tcagaaagta450cgtcccgtac500taccgacgat550atgatttatc600gcattggcac650ccttcgtaac700ttcgacgtcc750cactcagtac800acgatcctca850tttgttctgc300accgtgatta950cggcgctgcg1000ttttttttat1050gttcacagac1100cataacaaac1150ttcgctgttt1200accccaactt1250gtcgatggtg1300cgccggacag1350attacccctg1400acaattactg1450ctggacggaa1500agagcccaag1550acctgcgtcc1600catcgctatt1650'ttccaggtgg1700acacctggtt1750cggcctcttc1800ccttattaca1850acgggtagtt1900acctcctctg1950gcataccaca2000gcacaatttc2050acgatgctat2100gtcacaatcc2150gagctgatat2200attgccatat2250gagggcatca2300ctgagggt丁t2350aagcatggga2400aaggtcaagc2450gggcatataa2500agattcatca2550gtatctgagt2600cccttcctga2650gatactycta2700ctacgaacag2750actgggacca2800280910其編碼酶漆酶D1，所述漆酶D1具有以下翻譯的蛋白質(zhì)序列(SEQIDNo.14)。MGLNSAITSLTFPGTLITGQAFVTQCPIIANDPHKDLYDVPADAELAVISPLTVDSIQIFLRYKNASVEENLTFSNGLFSWELVIPPLAGTDEVTIRFVAWDELCPKYNAILALSVGSYKGDNFQLNVIDNSFLYDFDVDDGGTVITLAVEHNKRYRFRAGQRySFVLWPKTVGGPAQSINNASFTNPSVGGPHPFHLHTDNPGPWFLHGLSASQKVKPAAIGPVADIHDDLTDDRMLTPDQAGTFWYHDWYHVLAQTVLVS工SCDPNFANQPEDNYWIPLNEADLRPLVPALLQILSGGHNFWWRSACHIDWHLEAGKKGTAIIVNKDLAPDGPTSIHWHGFFSHliSTQYCDGVGAATPDSTIjTFSVDGHNMTRRMPNIGRNTVPAPVPGNAVAQNAQDLLPTGSDEYNFDDALA工VFAEGINVQRPTVLAGGQKGTAWADGPLRGAFWYDPINGLGRSQTGVIEVDGVNTRTTLDGKNAAIPGGADINHRIiGSYIGIiELGKILRDWSIGAQTAAANPTPQ50100150200250300350400450500526B.來(lái)自CBS155.075菌抹的下皮黑孔菌屬漆酶D2基因(SEQIDNo.15)，GATCTGGACGACACTTTTGCAACTCGGCTATGCTGCAATTCTCCAGATGGGGGACGTTGAAGCCAACCAAAATGTCATTGTGTGAGCCTATTGGCTCTCTTTGGGCCGACACTCTTTTCTTATCATAGTCCGTTGTGTACACGGTGGGTTCTCTGATTTTTCTCGCCCAGATGGTATATATCTCTGACATTTACATCGCTGGGCCCGTGGTGTACAACGTTCACCGGTCAAATTAACCGTATGATCTTACTTATTGTATGATCGCTAGCAGGTCCCGCCTGTATGACTTCATCTATCCACGATCCTAACGCCAAATACTTCAGAGAGCACACCGTTGTCGAGACGATGGTTTCATGGTTCTGCTATCTTACCGACATACACCAACCGTGCGAAAGTAAGGCCCGTCCCATCGACGATCGGATTTATCCGTTTGGCACGGTTCGTAACTCAGACGTCCCCGTCAGTACTGTATCCTCACAAGACCAAGAAACGTGATTACCGCGCTGCGTGATGAGACCCAATACTCTCGAGCTCTGTCAGCATTGTCAACTCGCCGGAGGAATATTAGTTAGGGTGACAAATGTTGACACATAGTTTCTCTTCTTCCAGAGTGCCCTATAACCAAGCTGGGACGGTTTACAGACCTATACCATTATATTGCTTGCGGATTAGTAACACATTGAAGTCTGAGATGGGATTGTCGGAAGCTAAAAGACCTTGCACTTTTCCTTGCGTCAAAGCTTCCAGCTCCAACTTCCATAGTCTGATCAAGGGAACCGCATAGCAGATATACTTTCTGGGTGGTGCCTTGATGTTGATGATAGTATCCAGGTACCATGTACACGCGCTC50100150200250300350400450500550600,6507007508008501116)cggcacactgtcaacgggttgttatcagcgtctctcctgctttcgatttcATGACTGTCActctattcaacgatatattcctaaccaaccagaaatacaagaatgcttctCGTTGAATGActtgtcgtgcAGCCTGGAAAttaactttcgtcttctagagccttcggtccagatttactttggagctcgtCTTCATGGCGATCATGATATGAGTATAACTgggc3actgatttttgagacgccgtggttccCATCGTCTTCcccgtacgtgGATTTCTCCAgagtgcgagcATACTAATTTAGGCCGTTCAttgaacataatttaattcgcgtgcgaccccTCGAAGTCGAatcttcgccgtccctattaccgacgacaatcaacactggaGTAGAAGAGCAGCGGACCTGtgttccatcgCgctGTTCCAtacgtacacctaacggccttccgccttattccaacgggtatatacctccttaagcataccgcagcacaatTTGACGATGCgaagtcacaacaagagctgatccattgccagctgagggcaacactgagggCAGAAGCATGCAGAAGGTCAtttattgtagCAGACCGGACcaaacggtatTGTTTCACCAAAdTTTACCTcggtgtcaacgacagaggtaccctgtgtaatactggatcccggaaagaatccaagaccgtCGTCCACTCGctatttcataggtggcgcagtggttgaaacTTCAGCATCAacaaattctggttacattggctggcagttgacactcccgcttctgggtcgtatcctcaggtccgtttcgtTATATTTTAAtattgattggtcaatcagactttctttataggatgagcttagcctaagaacactcctgatccgctgatgcgtcatctctatagataccgatctccgttgaacacgaccccttcctttgtcttgatgtcaagtgctatgccgccgctatcctgggggcccctacctgctccttaacgttttacatcaatcaattatatttcACAACGCCTCagcggtgctcccttgaactagaggaccgcaagccagaatgtccgtagtgcgacgtcgtgaggtatgtctccatagaccgacatttggaggcgctgcagccgtgctggatttgccccaaataggaactgctTCTACCTTGAtgagctggctcccattatctttccgtttggtggtcataattgaccgttgaGTAAGTTAATCAGCTCAATGaaacatcggtttcgatacaagctcaatccctgtggtatgtgtttttgtcacaggcttaaccagtctaacccttcactaatagaacgctcaggcaaggttgccctttccatacgcaaactaaggtagcgatGCATTGGAGCacccctcgcacaatccgggcCAGGCCTTGCAACCCAACACactgaatcgaataacgggttatttaaacg90035010001050110011501200125013001350140014501500155i)16001s501700175018001850130019502000205021002150220022502299其編碼漆酶D2,所述漆酶D2具有以下翻譯的蛋白質(zhì)序列(SEQIDNo.MGLNSAITSLitfpgtutgqafvtqcpiiandphkdlydvpadaelavispi/tvdsiqifuyknasveen:ltfsnglfswelvipplagtdevtirfvawdelcpkynailalsvgsyKGDNFQLNVIdnsflydfdvddggtvitlaVEHNKRYRFRagqrysfvlnPKTVGGPAQSinnasftnpsvggphpfhlhtdnpgpwflhGIiSASQKVKPaaigpvadihddltddrmltpdqagtfwyhdwyhvlaqtv:lvsiscdpnfanqpddnywiplneadlrplvpallqilsgghnfwwrsachidwhleagkkgtai工wkdiapdgptsih冊(cè)gffshlstgycdgvgaatpdstltpsvdghnmtrampn工grntvpapvpgnavGSDEYNFDDALAIVFAEGINvqrptvlagg50qkgtawadgp100lrgafwydp150INGU3RSQTG200vievdgvntr250ttldgknaai300pggadinhrl350GSYIGLELGK400ILRDWSIGA450QTAAANPTPQ500526本文的術(shù)語(yǔ)"％同一性"是指當(dāng)應(yīng)用序列比對(duì)程序進(jìn)行比對(duì)時(shí)，編碼本文描述的漆酶的核酸序列之間或漆酶氨基酸序列之間核苷酸或氨基酸序列同一性的水平。例如，如在本文所使用的那樣，通過(guò)算法確定80。/。序列同一性，并且因此給定序列的同源序列在所述給定序列的長(zhǎng)度上具有超過(guò)80%序列同一性。序列同一性的示例性水平包括^L不限于80、85、90、95、98%或更高的與給定序列的序列同一性，所述給定序列例如是如本文所描述的漆酶編碼序列?？梢杂糜诖_定兩個(gè)序列間同一性的示范性計(jì)算機(jī)程序包括但不限于，BLAST程序組，例如，BLASTN、BLASTX和TBLASTX、BLASTP和TBLASTN，公眾可在互聯(lián)網(wǎng)上于www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST獲得。也參見(jiàn)Altschul等，1990和Altschul等，1997。當(dāng)相對(duì)于GenBankDNA序列和其它公共數(shù)據(jù)庫(kù)中的核,列評(píng)估給定的核餅列時(shí)，一般應(yīng)用BLASTN程序進(jìn)行序列檢索。BLASTX程序優(yōu)選用于針對(duì)GenBank蛋白序列和其它公共數(shù)據(jù)庫(kù)中的氨基,列檢索已以所有讀碼框方式翻譯的核酸序列。BLASTN和BLASTX都應(yīng)用缺省參數(shù)運(yùn)行，所述缺省參數(shù)為ll.O的空缺口罰分，以及1.0的延伸缺口罰分，并且應(yīng)用BLOSUM-62矩陣(例如，參見(jiàn)Altschul等，1997)。為確定兩個(gè)或更多個(gè)序列間"％同一性"的所選序列的比對(duì)可以例如應(yīng)用MacVector版本6.5中的CLUSTAL-W程序進(jìn)行，用缺省參數(shù)操作，包括10.0的空缺口罰分，以及O.l的延伸缺口罰分，以及BLOSUM30相似性矩陣。II.介質(zhì)在一個(gè)實(shí)施方案中，酶氧化系統(tǒng)還包含一種或多種增強(qiáng)漆酶活性的化學(xué)介質(zhì)。在本文中將術(shù)語(yǔ)"化學(xué)介質(zhì)，，(或可在本文互換使用的"介質(zhì)")定義為這樣的化學(xué)化合物，即其作為氧化還原介質(zhì)起作用，以有效地在表現(xiàn)出氧化酶活性的酶和染料之間穿梭傳遞電子。在本領(lǐng)域中化學(xué)介質(zhì)也已知稱為增強(qiáng)劑和促進(jìn)劑?；瘜W(xué)介質(zhì)可以是酚化合物，例如，丁香酸甲酯和相關(guān)化合物，如WO95/01426和96/12845所描述的那樣?；瘜W(xué)介質(zhì)還可以是N-羥基化合物、N-肟化合物或N-氧化化合物，例如，N-羥基苯并三唑、紫尿酸或N-羥基乙酰苯胺?；瘜W(xué)介質(zhì)還可以是酚噍嗪/吩瘞溱化合物，例如吩瘞溱-10-丙酸13酯?；瘜W(xué)介質(zhì)還可以是2，2，-連氮基雙-(3-乙基苯并遙唑啉-6-亞磺酸)(ABTS)。其它化學(xué)介質(zhì)是本領(lǐng)域公知的。例如，已知WO95/01426中>^開(kāi)的化合物增強(qiáng)漆酶的活性。在具體的實(shí)施方案中，介質(zhì)可以是乙酰丁香酮、丁香酸甲酯、丁香酸乙酯、丁香酸丙酯、丁香酸丁酯、丁香酸己酯或丁香酸辛酯。介質(zhì)優(yōu)選為4-氰基-2，6-二甲氧基苯酚、4-甲酰氨基-2，6-二甲氧基苯酚，或其N-取代的衍生物，例如，諸如，4-(N-甲基曱酰氨基)-2，6-二曱氧基苯酚、4-N-(二羥乙基)甲酰氨基l-2，6-二甲氧基苯酚或4-(N，N-二甲基甲酰氨基)-2,6-二甲氧基苯酚。可通過(guò)下式描述在本發(fā)明中應(yīng)用的介質(zhì)式中，A是諸如-R、-D、-CH-CH-D、-CH=CH-CH=CH-D、-CH=N-D、-N-N-D或-N:CH麗D的基團(tuán)，其中D選自-CO-E、-S02-E、畫(huà)CN、畫(huà)NXY和-N+XYZ,其中E可以是-H、-OH、-R、-OR或-NXY，并且X和Y和Z可以是相同或不同的，并且選自-H、-OH、-OR和-R;R是C廣d6烷基，優(yōu)選d-Q烷基，所述烷基可以是飽和的或不飽和的、支鏈的或非支鏈的并且任選地被羧基、磺基或氨基取代；并且B和C可以是相同或不同的，并且選自CmH2m+1,l《m<5。在一個(gè)實(shí)施方案中，上述式中的A是-CN或-CO-E，其中E可以是-H、-OH、-R、-OR或-NXY，其中X和Y可以是相同或不同的，并且選自-H、-OH、-OR和-R;R是C廣d6烷基，優(yōu)選C廣Q烷基，所述烷基可以是飽和的或不飽和的、支鏈的或非支鏈的并且任選地被羧基、磺基或氨基取代；并且B和C可以是相同或不同的，并且選自CmH2m+!，1<HI<5。在上式中，可將A置于羥基的間位，而不是如所示的置于對(duì)位。在一個(gè)實(shí)施方案中，介質(zhì)是4-氰基-2，6-二甲氧基苯酚在一個(gè)實(shí)施方案中，介質(zhì)是OH4-甲酰氨基-2，6-二甲氧基苯酚。在一個(gè)實(shí)施方案中，介質(zhì)是OH4-(N-甲基甲酰氨基)-2，6-二甲氧基苯酚。在一個(gè)實(shí)施方案中，介質(zhì)是OH4-(N，N-二甲基甲酰氨基)-2，6-二曱氧基苯酚。在具體的實(shí)施方案中，介質(zhì)可以是乙酰丁香酮、丁香酸甲酯、丁香酸乙酯、丁香酸丙酯、丁香酸丁酯、丁香酸己酯或丁香酸辛酯。介質(zhì)優(yōu)選為4-氰基-2，6-二甲氧基苯酚、4-甲酰氨基-2，6-二甲氧基苯酚，或其N-取代的衍生物，諸如，4-(N-甲基甲酰氨基)-2，6-二曱氧基苯酚、4-[N-(二羥乙基)甲酰氨基-2,6-二甲氧基苯酚或4-(N，N-二甲基甲酰氨基)-2，6-二甲氧基笨15酚或其組合。本發(fā)明的介質(zhì)可以以每g粗斜紋布0.005-1000jimole的濃度存在，優(yōu)選每g粗斜紋布0.05-500nmole的濃度存在，更優(yōu)選每g粗斜紋布0.5-100,ole的濃度存在?？赏ㄟ^(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法制備介質(zhì)，諸如描述于WO97/11217、WO96/12845和US5752980中的那些方法。III.效用漆酶的工業(yè)應(yīng)用包括紙漿和紙的漂白以及紡織品漂白，例如漂白靛藍(lán)染色的粗斜紋布織物。還發(fā)現(xiàn)漆酶可用于染發(fā)(例如，參見(jiàn)WO95/33836和WO95/33837)。歐洲專利0504005號(hào)7>開(kāi)了漆酶可以用于染色羊毛。本文描述的漆酶可用于染色和漂白紡織品、纖維、紗等。還發(fā)現(xiàn)漆酶可用于廢水處理、紙漿的去木質(zhì)作用、高分子量聚合物的解聚、脫墨廢紙、芳香族化合物的聚合、化學(xué)基團(tuán)介導(dǎo)的聚合和交聯(lián)反應(yīng)(例如，涂料、涂層、生物材料)、以及染料的活化和偶聯(lián)有機(jī)物。漆酶可用在清潔組合物或其組分中，或用在洗滌劑中。如本文所述，漆酶能夠應(yīng)用氧作為電子受體氧化多種具有不同化學(xué)結(jié)構(gòu)的有色化合物。因此，本文展現(xiàn)的漆酶可用于這樣的應(yīng)用，即在這種應(yīng)用中期望更改與有色化合物相關(guān)的顏色，諸如在清洗中，例如，用于移除織物上的食物沾污。在某些情況下，可應(yīng)用介質(zhì)或增強(qiáng)劑以獲得期望的效果。本文展現(xiàn)的漆酶可用于紡織業(yè)領(lǐng)域。例如，本文所描述的漆酶可用于纖維或其它織物或制造物品的處理、加工、精加工、完善或生產(chǎn)。本文的酶例如可用于粗斜紋布處理(漂白污跡處理)；用于脫色靛藍(lán)廢物；用于織物染色；用于紡織品漂白處理；用于纖維改性；用于達(dá)到增強(qiáng)的纖維或織物特性，等等。本文描述的漆酶可用于皮革工業(yè)。例如，漆酶可用于動(dòng)物生皮的處理,包括但不限于生皮的脫毛、灰浸、軟化和/或鞣制。本文還公開(kāi)了用于從含有木素纖維素的材料中移除木素、漂白含有木素纖維素的材料(即，回收紙的酶脫墨)和/或處理產(chǎn)生自造紙或造纖維素的廢水的方法。該方法應(yīng)用從下皮黑孔菌屬中的種獲得的漆酶，同時(shí)加入或計(jì)量非芳族氧化還原劑及酚類和/或非酚類芳族氧化還原化合物，木素的酚單元和非酚單元被這些酚類和/或非酚類芳族化合物的作用直接氧化，或者化。本文描述的漆酶可用于紙漿和紙領(lǐng)域。例如，漆酶可用于從原材料諸如木頭、竹子和谷類作物稻秸制造紙漿和絨毛漿(fluffpulp);用于制造用于印刷和書(shū)寫(xiě)、包裝、衛(wèi)生和其它技術(shù)應(yīng)用的紙及板材；用于回收纖維素纖維以制造紙和板材；以及用于處理由紙漿或紙磨碎機(jī)或其它專用于制造紙、紙漿或絨毛漿的設(shè)備產(chǎn)生并處理的廢產(chǎn)品。本文展現(xiàn)的酶例如可用于木頭加工、用于紙漿漂白、用于木纖維改性、用于MDF生產(chǎn)的生物膠(木素活化)、用于增強(qiáng)紙?zhí)匦浴⒂糜谀瞥?、用于紙染色、用于膠粘(例如，用于顆粒或纖維板材的基于木素的膠粘)，等等。本文描述的漆酶可用于飼料領(lǐng)域。例如，本文展現(xiàn)的漆酶可單獨(dú)用作銅料添加劑或作為飼料添加劑的一部分，以增加任意種類動(dòng)物的飼料的營(yíng)養(yǎng)值，所述動(dòng)物諸如雞、牛、豬、魚(yú)和寵物；和/或用作加工助劑以加工植物材料和食物工業(yè)副產(chǎn)品，以生產(chǎn)適合作為飼料原材料的材料/產(chǎn)品。本文描述的漆酶可用于隱形眼鏡清潔領(lǐng)域。例如，漆酶可用于隱形眼鏡的清潔、儲(chǔ)存、消毒和/或防腐。本文描述的漆酶可用于淀粉領(lǐng)域。例如，漆酶可用于加工包括淀粉和/或谷物在內(nèi)的底物至右旋糖(dextrose)糖漿、果糖糖漿或任何其它糖漿、醇(飲料或燃料)或糖。此類淀粉加工可以包括諸如底物的液化、糖化、異構(gòu)化和去支鏈化的加工步驟。本文描述的漆酶可用于食品領(lǐng)域。例如，漆酶可用于制備、加工、或作為食物中的活性組分，所述食物諸如用于人類消費(fèi)的黃油、基于茶的飲料、烹飪產(chǎn)品、烘烤食品以及冷凍食品。漆酶例如可用作食品保存中的面17包改進(jìn)劑，用作除氧劑，等。本文描述的漆酶可用于個(gè)人護(hù)理領(lǐng)域。例如，漆酶可用于人類的個(gè)人產(chǎn)品的制備，諸如芳香劑，以及人類皮膚護(hù)理、頭發(fā)護(hù)理、口腔保健、個(gè)人清洗和除臭和/或止汗的產(chǎn)品。本文展現(xiàn)的酶可用于例如染發(fā)和/或漂白頭發(fā)、指曱染色和/或漂白、皮膚染色和/或漂白、表面改性(例如，作為偶聯(lián)劑)、作為抗微生物劑、用于除去氣味、牙齒潔白，等等。本文描述的漆酶可用于清洗領(lǐng)域。例如，漆酶可用于清洗、處理或護(hù)理洗衣物品，諸如衣物或織物；用于清洗家用石更表面；用于盤(pán)護(hù)理，包括機(jī)械洗盤(pán)應(yīng)用；以及用于皂?xiàng)l和皂液和/或合成的表面活性劑條和液。本文展現(xiàn)的酶例如可用于染料移除/脫色，和/或用于移除氣p未，和/或用于衛(wèi)生處理，等等。本文描述的漆酶可用于廢水處理領(lǐng)域。例如，漆酶可用于有色化合物的脫色；用于酚組分的脫毒；用于抗微生物活性(例如，在水回收中)；用于生物矯正，等等。本文描述的漆酶可用于生物材料領(lǐng)域。例如，漆酶可用作多種有機(jī)反應(yīng)的生物催化劑；和/或用于與生物聚合物連接；用于與包裝材料連接；用于與膠粘劑連接；用于表面改性(活化和偶聯(lián)劑)；用于伯醇的生產(chǎn)；用于與生物傳感器連接和/或有機(jī)合成，等等。本文描述的漆酶可用于抗微生物領(lǐng)域。例如，漆酶可用作清潔組合物中的抗微生物劑，或用于減少或消除多種食物(例如，肉)或飼料中的微生物載量。漆酶介質(zhì)可用作衛(wèi)生處理和抗微生物劑(例如，木材保護(hù)，洗滌劑)。該介質(zhì)可獨(dú)立于酶使用，或與酶組合使用。本文所使用的"清潔組合物，，和"清潔制劑"是指能用于從待清潔的物件諸如織物等中移除不期望的化合物的組合物。該術(shù)語(yǔ)包含任何選擇用于所期望的特定類型清潔組合物和產(chǎn)品形式(例如，液體、凝膠、顆?；驀婌F組合物)的任何材料/化合物，只要該組合物與漆酶和該組合物中使用的其它酶相容。通過(guò)考慮待清潔的表面、物件或織物，以及在使用期間對(duì)于清潔條件而言期望的組合物形式，能很容易地作出清潔組合物材料的具體選擇。該術(shù)語(yǔ)還涉及適于清潔和/或漂白任何物品和/或表面的任何組合物。預(yù)期該術(shù)語(yǔ)包括但不限于洗滌劑組合物(例如，液態(tài)和/或固態(tài)洗衣洗滌劑和細(xì)薄織物洗滌劑；硬表面清潔制劑，諸如用于玻璃、木頭、陶資和金屬拒臺(tái)面和窗戶；地毯清潔劑；爐灶凈洗劑；以及紡織品和洗衣預(yù)除污劑，以及盤(pán)洗滌劑)。實(shí)際上，除非另外說(shuō)明，本文的術(shù)語(yǔ)"清潔組合物"包括顆粒狀或粉末形式的通用或重型清潔劑，尤其是清潔洗滌劑；液體、凝膠或糊狀的通用清洗劑，尤其是所謂的重型液體(HDL)型；細(xì)薄織物液體洗滌劑；手洗盤(pán)劑或輕型洗盤(pán)劑，尤其是高泡類型的那些；機(jī)械洗盤(pán)劑，包括各種用于家用和公共使用的片狀、粒狀、液體或助清洗型；液體清潔和消毒劑、車或地毯洗潔劑、浴室清潔劑；洗發(fā)劑和染發(fā)液；沐浴凝膠和泡沫浴和金屬清洗劑；以及清潔輔助劑諸如漂白添加劑和"染色棒(stain-stick)"或預(yù)處理型。本文所使用的術(shù)語(yǔ)"洗滌劑組合物"和"洗滌劑制劑"是指預(yù)期用于洗滌介質(zhì)的混合物，用于清潔污染物品。在一些實(shí)施方案中，該術(shù)語(yǔ)在洗織物和/或服裝時(shí)使用(例如，"洗衣洗滌劑")。在備選的實(shí)施方案中，該術(shù)語(yǔ)是指其它洗滌劑，諸如用于清潔盤(pán)子、餐具等的那些(例如，"洗盤(pán)洗滌劑")。不期望將目前考慮的組合物限定至任何具體的洗滌劑制劑或組合物。實(shí)際上，除了漆酶外，預(yù)期該術(shù)語(yǔ)還包含含有表面活性劑、轉(zhuǎn)移酶、水解酶、助洗劑、漂白劑、漂白活化劑、上藍(lán)劑和熒光染料、結(jié)塊抑制劑、掩蔽劑、酶活化劑、抗氧化劑和增溶劑的洗滌劑。本文所使用的術(shù)語(yǔ)"硬表面清潔組合物，，是指用于清潔硬表面諸如地板、墻壁、瓷磚、不銹鋼容器(例如，發(fā)酵罐)、浴室和廚房設(shè)備等的洗滌劑組合物。以任一形式，包括但不限于固態(tài)、液體、乳劑等形式提供此類組合物。實(shí)施例實(shí)施例1.使用經(jīng)密碼子優(yōu)化的合成基因在芽孢桿菌屬中表達(dá)漆酶D基因?yàn)锽CE103融合物,DNA(SEQIDNO:71):GGATCCTGAAATCTTGCACCTTCCCTGGTACGTAATTGACACTGGCACGGTTCGTTACACTGACGTTCCTCACAATACTGGATCCTCATAATTAGCTGATCACCAGATTCGCTGACGCAGATTCCGTCTTACGGACATAACTTACTGTAGATTAAACGCAACATCGGACGCGTTACAAAAACAATCACCATACCTGGAAACTTACTTTCTTCCTTCAGTTAGGATCT'丄TTGTTGAATTAGTCTTCACGGTACAACTTCGAACAGATGAAGCTTACATTGTTCGCTGAAGGTGGGACGAATAAAGCTTGCTATCGGTCTGACGGCGTTCACTTATTACGATCTTACAGTTTCTTTCAAAATGTCCAATGATCAAGCTGCGATGGACTTAAGACCTTTATGGTACCATGAACACTTATCAACTTGCTGTGTTAGCATTTCATGACAGTTACTCTATCCAAATCAACCAGTAACACTACAACGCTTCTGTCTTAACGAAGCGCTGTACCACTAACGGTCTCCAGCACTTTACCAACTGGATAATTCCTCCCATAACTTCTTGACGCAATTTAACTATTCGCATATCGATTAATCAATCAATATGTCCAAACGGTTGCAGACAACGTCCAATGGTCAAAAAATGACCGTATAAAGGAACAGCATTGCTGATGTACATTCTGCGCGGAGCTTCGATGTAGATTACTTGCTCAAATGGATTAGAATCTCTGTTCTTGCGATCCATCGAAGTAGAATCTTCGCAAAGATAACTAACTCTTGACGTGAAGAACCTCTGACTTACGGGAGGTGCTGGTTCTCAATCTACAAATTCTTCTTACATTGGCTTGCTGTAGGGTTGTACGCTTCGTGATGTTTCGTAACAGGCATCTTGAACAGCTGCAGATACAACGCATTTACACATCCTGTACTTGCGGTGACAACTGCTTACACCGCATGGGCTGAAACTCTTTCCGTATCACTCATCGTAGTTTAGATGGTGGAAAACAGTTGTAGACGTTCTCAGAACATAACAAAACTTCACAATGGTGTAAAGGACAACGTTCTGGATTCGTGCAAAAACGCAAAACAGTTGTCCACTGGTTATATTAATCAAACAACGCTTTAGCGGTGCAGTCTTGAACTGGTGGACCACTTCTGCTGGTTTGTATCTATGATAACCCTGAGCTGGACTTCTAACCCAACCTTTCTCCAGGTAAACAAAG50TGGTGGAACA100TCCAATTAAA150ACTTCAATTC200TGGTCCTGCA250TTTACGATTT300CACTTATCCA350CGACCCAAAC400CAGTTATCAC450GGTGCAGCTA500AACTGGTCCT550AACGTTACAG600TTTTCAGTTG650CACACGTCCA700ACTCATTCGT750GCAATGCCAA800AGCTATTCTT850GTGGACCAGC900CCAGCACCTG950TAGACTTAAC100CATTCACAAA1050CAAAATGCTC1100GGGTAAAGTA1150ATCCTTTCCA1200TCAGATGAAT1250TGGTGCTGGA1300GTCCTTGGTT1350GCTATTGTTT1400ACCTCAAGCA1450GAGATACTTA15001507其編碼漆酶D基因，并由DNA2.0Inc.(1455AdamsDrive,MenloPark,CA94025)合成。用限制性酶BamHI和HindIII消化合成的質(zhì)粒DNA，并且從凝膠中分離1.5kb的DNA片段，并將其連接至用相同的兩個(gè)限制性酶消化的p2JMagkl031nk2載體(參見(jiàn)US20050202535Al)t，以產(chǎn)生表達(dá)質(zhì)粒p2JMagkl031nk2E-漆酶(圖1)。將該質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至枯草芽孢桿菌(B.subtilis)菌林中(degUHy32、oppA、DspoIIE、DaprE、DnprE、Depr、DispA、Dbpr、Dvpr、DwprA、Dmpr陽(yáng)ybfJ、DnprB、amyE::xylRPxylAcomK-ermC)(參見(jiàn)US20050202535A1)。在具有5mg/ml氯霉素的LB瓊脂板上選擇兩個(gè)轉(zhuǎn)化子，并且隨后選擇具有較高基因拷貝數(shù)的克隆，將克隆在具有25mg/ml氯霉素的LB瓊脂板上連續(xù)畫(huà)線，直到獲得快速的克隆生長(zhǎng)。將擴(kuò)增的轉(zhuǎn)化子接種至30ml含有0,5mM銅的MBD培養(yǎng)基(參見(jiàn)US20050202535A1)中。在37。C培養(yǎng)該培養(yǎng)物60小時(shí)。離心培養(yǎng)物肉湯并且將上清液用于ABTS測(cè)試。實(shí)施例2.用不同的漆酶漂白溶解的靛藍(lán)如下那樣在96孔微量滴定板中進(jìn)行通過(guò)漆酶/介質(zhì)組合來(lái)漂白溶解的欷藍(lán)測(cè)試法。通過(guò)在室溫于NMP(IOml)中攪拌靛藍(lán)(30mg)5小時(shí)制備欷藍(lán)的N-甲基吡咯烷酮(NMP)飽和溶液。將NMP溶液在水緩沖溶液中稀釋10倍，得到藍(lán)色溶液。例如，稀釋至pH5的50mM醋酸鈉緩沖液中，或pH7的50mM磷酸鈉緩沖液中。在使用前即刻充分振蕩溶液。在96-孔微量滴定板中進(jìn)行漂白溶解的靛藍(lán)底物的測(cè)試法，其中每孔接受在pH5的50mM醋酸鈉緩沖液中的可溶欷藍(lán)溶液(180^L)、漆酶(IOppm酶)和介質(zhì)溶液(來(lái)自甲醇中的20mM儲(chǔ)液)。用去離子水將每孔的總體積調(diào)節(jié)至200nL。一式兩份地運(yùn)行僅含有漆酶的對(duì)照。將板密封，并在加熱的攪拌器(Thermomixer，Eppendorf)上以800轉(zhuǎn)/分鐘在S0。C溫育2小時(shí)。在該時(shí)期之后，解封該板，并且將抗壞血酸溶液(20jtL10%水溶液)加入到每一孔中，以還原氧化形式的介質(zhì)。然后通過(guò)應(yīng)用微量滴定板讀數(shù)器確定每一孔在600nm處的吸光度從而評(píng)估靛藍(lán)漂白的程度。吸光度讀數(shù)越低，則靛藍(lán)漂白的程度越高。圖2顯示了來(lái)自梭孢殼屬中的種的漆酶(EcostoneLCCIO，ABenzymes,Darmstadt,德國(guó))的結(jié)果。使用的介質(zhì)是2，2，-連氮基-雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-亞磺酸)(ABTS)、丁香酸、4-甲酰氨基-2，6-二曱氧基苯酚(SA)、丁香酸甲酯(MS)、4-(N-甲基甲酰氨基)-2，6-二甲氧基苯酚(MSA)、10-(羧基丙基)國(guó)吩噻溱(PTP)和丁香醛。表1中列出了在600nm處相對(duì)于對(duì)照的吸光度改變，其中吸光度的最大改變對(duì)應(yīng)于最大程度的欷藍(lán)漂白。在500nM濃度的介質(zhì)時(shí)，對(duì)于靛藍(lán)漂白最有效的介質(zhì)是ABTS，隨后是N-曱基酰胺(MSA)和未取代的酰胺、4-曱酰氨基-2，6-二甲氧基苯酚(SA)。在50jiM的較低介質(zhì)濃度時(shí)，ABTS仍然是最有效的介質(zhì)，其余的21介質(zhì)或多或少是等價(jià)的。例外的介質(zhì)是丁香酸，其漂白可溶龍藍(lán)的效率不比對(duì)照條件高。表l.用來(lái)自梭孢殼屬中的種的漆酶和500及50fiM濃度的多種介質(zhì)漂白可溶靛藍(lán)后，在600nm處吸光度的改變(n-2)介質(zhì)500mM濃度50mM濃度厶A600標(biāo)準(zhǔn)差A(yù)A600標(biāo)準(zhǔn)差對(duì)照00.00800.010ABTS0.2350.0190.1740.032丁香酸0.0240.0170.0050.009SA0.1700.0180.0880.014丁香酸甲酯0.0620.0350.0900.012MSA0.1810.0130.1030.018PTP0.0440.0090.1320.020丁香醛0.1320.0120.0920.017實(shí)施例3.在兩種pH值下用不同漆酶進(jìn)行的可溶欷藍(lán)漂白測(cè)試法對(duì)源自毀絲霉屬中的種的漆酶(Denilite⑧U(丹麗來(lái)⑧II),Novozymes，Bagsvaerd，丹麥)、梭孢殼屬中的種的漆酶(EcostoneLCCIO，ABenzymes,Darmstadt,德國(guó))和下皮黑孔菌屬中的種的漆酶進(jìn)行評(píng)估，評(píng)估它們?cè)趦煞NpH值下與低分子量介質(zhì)聯(lián)合漂白溶解的靛藍(lán)的能力。如實(shí)施例1描述的那樣進(jìn)行在96孔孩i量滴定板中的溶解靛藍(lán)的漂白，在5和7的pH值下應(yīng)用3種不同的漆酶。所應(yīng)用的介質(zhì)是芥子酸、4-曱酰氨基-2，6-二甲氧基苯酚(SA)、4-乙酰丁香酸甲酯(AMS)、丁香酸曱酯(MS)和2，2，-連氮基雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-亞磺酸)(ABTS)。圖3和4顯示了應(yīng)用分別源自毀絲霉屬、梭孢殼屬和下皮黑孔菌屬中的種的三種漆酶在5和7的pH值下漂白可溶錠藍(lán)的結(jié)果。這些數(shù)據(jù)如表2和3所示。表2.于250jiM的介質(zhì)濃度，在pH5使用來(lái)自梭孢殼屬、毀絲霉屬和下皮黑孔菌屬中的種的漆酶漂白可溶欷藍(lán)后，相對(duì)于對(duì)照在600nm處吸光度的改變22<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>表3.于250nM的介質(zhì)濃度，在pH7使用來(lái)自梭孢殼屬、毀絲霉屬和下皮黑孔菌屬中的種的漆酶漂白可溶錠藍(lán)后，相對(duì)于對(duì)照在600nm處吸光度的改變<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>實(shí)施例4.用單色下皮黑孔菌漆酶漂白粗斜紋布樣品在501b實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)翻滾洗滌機(jī)中以每升1克的劑量用IndiAge⑧2XL預(yù)處理粗斜紋布腿部(denimlegs)(由來(lái)自ConeMill,型號(hào)1662P的硫底/欷藍(lán)染色的粗斜紋布制得)。浴比(liquorratio)是6比1(30升水中5kg底物)并且于pH4.5在55。C處理l小時(shí)。在纖維素酶處理后，進(jìn)行溫漂洗，隨后在翻滾干燥器中干燥該織物。應(yīng)用沖床從IndiAge2XL預(yù)處理的粗斜紋布腿部切得5/8英寸粗斜紋布圓片。用Minolta比色計(jì)CR-200預(yù)讀每一粗斜紋布圓片，以確定該織物圓片正面和背面的CIEL*a*bMi。將一片粗斜紋布圓片置于一式兩份的兩個(gè)12孔微量滴定板的每一孔中。每一孔接受單色下皮黑孔菌漆酶(20pL的1/20稀釋，約20ppm)、介質(zhì)(200、100、50或20jiL的在曱醇中的20mM儲(chǔ)液)和50mM,pH6的磷酸鉀緩沖液，總體積是2mL/孔。介質(zhì)是丁香酸曱酯(MS)、4-氰基-2，6-二甲氧基苯酚(SN)和3AS-三曱氧基苯酚(TMP)。密封板并在標(biāo)準(zhǔn)保溫箱中在150轉(zhuǎn)/分鐘在50。C溫育2小時(shí)。在這一時(shí)期后，從板中移出樣品，并且將其小心;故置于布氏漏斗中的濾紙上，并且用大量的水洗滌，隨后在高真空下過(guò)夜千燥殘留的水。然后用比色計(jì)再讀該樣品，以確定漂白后該圓片的正面和背面的CIE1^3*1)*值。根據(jù)下式從最初和最后的CIE1^3*1)*值的不同計(jì)算總色差(AE)AE=(AL2+Aa2+Ab2)1/2在圖5和6中繪制了作為介質(zhì)濃度函數(shù)的總色差(AE)。最有效的介質(zhì)是4-氰基-2，6-二甲氧基苯酚(SN)，隨后是丁香酸甲酯(MS)。對(duì)該兩種化合物都觀察到了劑量/反應(yīng)關(guān)系，其中較低濃度的介質(zhì)給出較少的漂白。在這些條件下，第三種介質(zhì)，即3，4，5-三曱氧基苯酚(TMP)不是有效的介質(zhì)。這些數(shù)據(jù)如表4所示。表4.用單色下皮黑孔菌漆酶(20ppm)和不同濃度的3種介質(zhì)處理的粗斜紋布樣品正面和背面L、a、b和總色差(E)的變化。介質(zhì)<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>粗斜紋布樣品背面1MS-丁香酸甲酯、SN=4-氰基-2，6-二甲氧基苯酚、TMP=3，4，5-三曱氧基苯酚2通過(guò)從最終讀數(shù)減去初始讀數(shù)確定L、a、和b的差異實(shí)施例5.用重組單色下皮黑孔菌漆酶D漂白粗斜紋布樣品在這一實(shí)施例中，應(yīng)用重組形式的衍生自單色下皮黑孔菌的漆酶D蛋白，如在實(shí)施例16描述的那樣進(jìn)行粗斜紋布樣品漂白測(cè)試法。將粗斜紋布圓片上樣至兩個(gè)重復(fù)的12孔板中。漆酶D儲(chǔ)液(每mL5.5ABTS單位)的劑量是每孔25或50nL。所應(yīng)用的介質(zhì)是丁香酸曱酯(MS)、4-氰基-2，6-二甲氧基苯酚(SN)、4-甲酰氨基-2，6-二甲氧基苯酚(SA)，并且以0.5或lmM的濃度使用。結(jié)果如圖7和8所示。表5列出了L、a、b值的變化和相應(yīng)的總色差(AE)。該結(jié)果表明在這些條件下，4-氰基-2，6-二曱氧基苯酚(SN)對(duì)于粗斜紋布樣品漂白是最有效的介質(zhì)。表5.作為使用來(lái)自單色下皮黑孔菌的漆酶D的漆酶/介質(zhì)組合的函數(shù)的經(jīng)漂白粗斜紋布圓片的總色差<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>'溶劑A:20mM甲酸銨，pH5.0;溶劑B:90%甲醇+10%溶劑A流速250pL/分鐘注射體積5pL;洗脫程序0至1分鐘70%溶劑A，第3至4分鐘30%溶劑A，在4.5分鐘回至70。/。A，維持在70%A直到總共8分鐘。質(zhì)鐠法條件如下在全掃描模式中的陽(yáng)性模式電噴射離子化(+veESI)，在0.5秒中從175Da掃描至240Da。噴射電壓為4200V、管狀屏極氣流速41mL/分鐘、輔助氣流速15mL/分鐘。管透鏡電壓為109V,并且毛細(xì)管溫度為270。C。該實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示于表6。表6.通過(guò)用于漂白粗斜紋布圓片的上清液中的初始濃度和終濃度確定的介質(zhì)穩(wěn)定性<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>，MS-丁香酸甲酯、SN-4-氰基-2，6-二甲氧基苯酚、SA=4-甲酰氨基-2，6-二甲氧基苯酚結(jié)果表明，在與漆酶和底物在50。C、2小時(shí)的標(biāo)準(zhǔn)溫育條件下接觸后，介質(zhì)的穩(wěn)定性有很大不同。在該實(shí)施例中，4-氰基-2，6-二甲氧基苯酚(SN)是最穩(wěn)定的化合物，其濃度基本上沒(méi)有改變(98.9%殘留)，其后是丁香酸甲酯(30.2%殘留)。最不穩(wěn)定的介質(zhì)化合物是4-甲酰氨基-2，6-二甲氧基苯酴(SA)，在實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)，其只剩下7.8%。實(shí)施例7.純化和比活性的確定在l4升發(fā)酵罐中應(yīng)用描述于共同待決申請(qǐng)US60/984，430(代理人案號(hào)GC993P，標(biāo)題為"用于改進(jìn)宿主細(xì)胞中異源蛋白質(zhì)產(chǎn)量的信號(hào)序列和共表達(dá)的伴侶分子，2007年11月1日提交)中的表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)漆酶D優(yōu)化的基因(參見(jiàn)共同待決的申請(qǐng)代理人案號(hào)GC942和60/875,518中的SEQIDNO:70)。在184小時(shí)收集發(fā)酵肉湯并通過(guò)超濾(UFC20070245)濃縮。將該濃縮物透析過(guò)濾至25mM醋酸鈉、pH4.0緩沖液中。然后將500mL透析過(guò)濾的UFC樣本上樣至用25mM醋酸鈉、pH4.0緩沖液平衡的含有PorosHS-20樹(shù)脂的離子交換柱(AppliedBiosystems，20X275mm柱)上。用10倍柱體積的25mM醋酸鈉、pH4.0緩沖液洗滌該柱。應(yīng)用在25mM醋酸鈉、pH4.0緩沖液中40mM至80mM的氯化鈉鹽梯度(12倍柱體積)從柱上洗脫漆酶D蛋白。收集含有漆酶活性的級(jí)分并用具有IOK膜的Amicon400mL攪拌式超濾裝置進(jìn)一步濃縮。通過(guò)SDS蛋白質(zhì)凝膠應(yīng)用BSA作為標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)量總蛋白為4mg/ml(^0。/。純度)。用水將該漆酶樣品稀釋10,000倍，并且在室溫儲(chǔ)存18小時(shí)，以及在4。C儲(chǔ)存超過(guò)24小時(shí)。測(cè)得ABTS活性為8570單位/ml。然后通過(guò)將8570單位/ml除以4mg/ml計(jì)算重組漆酶D的比活性，得到2140單位/mg蛋白，其比葡萄穗霹屬漆酶(16u/mg)的活性高100多倍，參見(jiàn)Mander等，Appl.Environ.Microbiol.(2006)72:5020-5026)。因此，通過(guò)高比活性的優(yōu)點(diǎn)，該酶導(dǎo)致了比其它漆酶(例如葡萄穗霉屬漆酶)更低的排放至環(huán)境的銅排放量。實(shí)施例8.粗斜紋布漂白的方法介質(zhì)4-羥基-2，6-二甲氧基苯甲酰胺(丁香酰胺，SA)購(gòu)自PunjabChemicals&CropProtectionLimited(Mumbai，印度)。4-羥基-3，5-二甲氧基芐腈(丁香腈，SN)獲自Stereochemical,Inc"(Newark,DE)或PunjabChemicals&CropProtectionLimited(Mumbai，印度)。酶在本實(shí)驗(yàn)中使用了源自單色下皮黑孔菌的漆酶(實(shí)施例7，8570U/ml，284mg蛋白/ml)。方法在pH、溫度、酶濃度和介質(zhì)濃度的不同條件下，在ATLASLP2Launder-O-meter中進(jìn)行酶溫育。在含有100ml液體的500ml不銹鋼反應(yīng)容器中進(jìn)行反應(yīng)。往每一容器中加入5塊(7x7cm)經(jīng)石洗的(stonewashed)粗斜紋布樣品(ACG粗斜紋布型80270)和6個(gè)6mm直徑的鋼球。關(guān)閉反應(yīng)容器，并^f吏其進(jìn)入預(yù)加熱至期望溫度的Launder-O-Meter中。使溫育進(jìn)行30分鐘，隨后用"流動(dòng)，，自來(lái)水洗涂樣本，在AEGIPX4離心機(jī)中旋轉(zhuǎn)干燥，并在程序棉(programcotton)下用ElnaPressElectronic烙鐵干燥，并進(jìn)行評(píng)估。砵且斜紋布的石洗在以下條件下在UnimacUF50洗滌器中使粗斜紋布退漿，所述粗斜紋布12塊腿部重約3kg:*以10:1的浴比、50。C，用0.5g/1(15g)Optisize160淀粉酶(Genencor)和0.5g/1(15g)非離子表面活性劑(例如，RucogenBFA(RudolfChemie)或UltravonGPN(Huntsman))退漿15分鐘。*以30:1浴比冷漂洗5分鐘兩次。退漿后，按以下條件在UnimacUF50洗滌器中石洗粗斜紋布*以10:1浴比冷漂洗5分鐘*以10:1浴比，在55。C，用1kg浮石、檸檬酸鹽緩沖液(30g二水檸檬酸三鈉和30g—水檸檬酸)和35gIndiAge2XL纖維素酶(Genencor)石洗60分鐘。*以30:1浴比冷漂洗5分鐘兩次。在MieleNovotronicT494C家用織物干燥器中干燥粗斜紋布。從該粗斜紋布腿部中切出7x7cm的樣品。粗斜紋布樣品的評(píng)估在具有D65光源的CIELab彩色空間中用Minolta比色計(jì)CR310測(cè)量5個(gè)粗斜紋布樣品的顏色。在漆酶處理前和處理后進(jìn)行測(cè)量，并且將5個(gè)樣品的結(jié)果取平均值。計(jì)算總色差(TCD)?？梢杂靡韵鹿接?jì)算總色差TCD=V(AL)2+(Aa)2+(Ab)2。粗斜紋布腿部的評(píng)估在具有D65光源的CIELab彩色空間中用Minolta比色計(jì)CR310評(píng)估粗斜紋布腿部。只在漆酶處理后進(jìn)行測(cè)量。對(duì)于每一粗斜紋布腿部，取得8次測(cè)量，并對(duì)12塊腿部(96次測(cè)量)的結(jié)果取平均值。實(shí)施例9.溫度對(duì)重組漆酶D漂白性能的影響(Unimac)經(jīng)石洗的粗斜紋布的漆酶漂白如實(shí)施例8所描述的那樣退漿并石洗粗斜紋布，所述粗斜紋布的12個(gè)腿部約為3kg。在石洗后，才艮據(jù)如下方法在UnimacUF50洗滌器中進(jìn)行漆酶處理。在10:1浴比下30分鐘*pH6(21g褲酸一鈉和5g己二酸，重組漆酶D)或pH4.8(8.6g磷酸一鈉和16.8g己二酸，NovoprimeBase268漆酶)*漆酶(重組漆酶D或NovoprimeBase268)*介質(zhì)(丁香酰胺(SA)和丁香腈(SN))在漆酶處理后，在30:1的浴比下在冷水中漂洗該粗斜紋布5分鐘，漂洗兩次。進(jìn)行了漆酶實(shí)驗(yàn)并且結(jié)果如表7和8所示表7<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>重組漆酶D在較低溫度下具有比當(dāng)前可商業(yè)獲得的漆酶更好的性能。該漆酶(在介質(zhì)的存在下)在低于60'C，優(yōu)選40。C至60。C的溫度間提供漂白效果。因此，該漆酶可以給織物處理器提供能量益處。實(shí)施例10.重組漆酶D酶和介質(zhì)濃度對(duì)漂白性能的影響(Launder-O-meter)在pH6(用氫氧化鈉4N溶液調(diào)節(jié)pH的50mM磷酸一鈉緩沖液)和于60'C的溫度運(yùn)行下表的實(shí)驗(yàn)，評(píng)估漆酶和介質(zhì)濃度的影響。用丁香酰胺(SA)和丁香腈(SN)介質(zhì)進(jìn)行該實(shí)驗(yàn)。往具有5個(gè)7x7cm樣品的燒杯中加入100ml緩沖液?？傊亓繛?2g(粗斜紋布:浴比-l:8)。如下表應(yīng)用漆酶和介質(zhì)濃度。表9<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>表IO<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>將下表所標(biāo)明的丁香酰胺或丁香腈介質(zhì)的量作為在98%甲醇中的275mMSA或SN儲(chǔ)液的稀釋物加入到每一燒杯中。如下表所標(biāo)明的那樣，將漆酶作為400單位/ml漆酶儲(chǔ)液的稀釋物加入到每一燒杯中。封閉燒杯并如實(shí)施例8所描述的那樣在60。C進(jìn)行處理。如在實(shí)施例8那樣評(píng)估樣品。表ll<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>TCD-總色差上表和圖9及10顯示需要酶和介質(zhì)兩者以得到漂白。其還顯示在達(dá)到某個(gè)漂白水平時(shí)，酶/介質(zhì)比例存在一些可變性。實(shí)施例11.重組漆酶D對(duì)漂白性能的劑量反應(yīng)影響(Unimac)經(jīng)石洗的粗斜紋布的漆酶漂白:如實(shí)施例8所描述的那樣退漿并石洗粗斜紋布，所述粗斜紋布的12個(gè)腿部約為3kg。石洗后，4艮據(jù)如下方法進(jìn)行漆酶處理在10:1浴比、pH6(21g磷酸一鈉和5g己二酸)、60。C、漆酶和介質(zhì)中30分鐘。在酶處理后，在30:1的浴比下在冷水中漂洗該粗斜紋布5分鐘，進(jìn)行兩次。進(jìn)行了以下實(shí)驗(yàn)丁香酰胺0.33mM:<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>結(jié)果如上表所示。這些結(jié)果顯示用重組漆酶D和酰胺介質(zhì)，漂白水平很快即進(jìn)入平臺(tái)。在0.05和0.25的酶濃度下，得到了相同的漂白結(jié)果。對(duì)于重組漆酶D和腈介質(zhì)，直至0.4g/1，漂白水平是升高的，在0.4g/l時(shí)顯然是最佳值。應(yīng)當(dāng)理解，本文描述的實(shí)施例和實(shí)施方案僅僅是用于闡述目的，根據(jù)它們的各種變形或改變對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是4艮容易想到的，并且包括在本申請(qǐng)的原理和范圍以及所附權(quán)利要求的范圍之內(nèi)的。本文引用的所有出版物、專利和專利申請(qǐng)均在此全文引入作為參考。權(quán)利要求1.用于在染色織物表面的色密度中提供漂白外觀的方法，該方法包括在水介質(zhì)中使染色織物與酚氧化酶系統(tǒng)和下式的增強(qiáng)劑接觸式中，A是諸如-CN或-CO-E的基團(tuán)，其中E可以是-H、-OH、-R、-OR或-NXY，其中X和Y可以是相同的或不同的，并且選自-H、-OH、-OR和-R；R是C1-C16烷基，優(yōu)選C1-C8烷基，所述烷基可以是飽和的或不飽和的、支鏈的或非支鏈的并且任選地被羧基、磺基或氨基取代；并且B和C可以是相同的或不同的，并且選自CmH2m+1，1≤m≤5。2.根據(jù)權(quán)利要求l的方法，其中用還原染料諸如靛藍(lán)或硫欷染色該織物。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的方法，其中該織物是纖維素織物或纖維素纖維的混合物或纖維素纖維和合成纖維的混合物。4.根據(jù)權(quán)利要求l-3任一項(xiàng)的方法，其中該織物是粗斜紋布、優(yōu)選地用欷藍(lán)或硫靛染色的粗斜紋布。5.根據(jù)權(quán)利要求l的方法，其中所述的酚氧化酶系統(tǒng)是過(guò)氧化物酶和過(guò)氧化氫源。6.根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其中該過(guò)氧化物酶是辣根過(guò)氧化物酶、大豆過(guò)氧化物酶或源自鬼傘屬(Coprinus),例如灰蓋鬼傘(C.cinereus)或長(zhǎng)根鬼傘(C.macrorhizus);或源自芽孢桿菌屬(Bacillus)，例如短小芽孢桿菌(B.pumilus);或源自粘球菌屬(Myxococcus)，例如變綠粘球菌(M.virescens)的過(guò)氧化物酶。7.根據(jù)權(quán)利要求5或6的方法，其中所述的過(guò)氧化氫源是過(guò)氧化氫或過(guò)氧化氫前體，例如過(guò)硼酸鹽或過(guò)碳酸鹽，或產(chǎn)生過(guò)氧化氫的酶系統(tǒng)，例如氧化酶及其底物，或過(guò)氧羧酸或其鹽。8.根據(jù)權(quán)利要求l-7任一項(xiàng)的方法，其中所述的水介質(zhì)含有11202或H202的前體，其濃度為對(duì)應(yīng)于0.001-25mMH202。9.根據(jù)權(quán)利要求l的方法，其中所述的酚氧化酶系統(tǒng)是與氧一起的漆酶或漆酶相關(guān)酶。10.根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中所述漆酶源自曲霉屬(Aspergillus);脈孢菌屬(Neurospora)，例如粗糙脈孢菌(N.crassa);柄孢殼屬(Podospora);葡萄孢屬(Botrytis);金錢(qián)菌屬(Collybia);下皮黑孔菌屬(Cerrena);葡萄穗霉屬(Stachybotrys);革耳屬(Panus)，例如野生革耳(Panusrudis);梭孢殼屬(Theilava);層孔菌屬(Fornes);香茹屬(Lentinus);側(cè)耳屬(Pleurotus);栓菌屬(Trametes),例如絨毛栓菌(T.villosa)和變色栓菌(T.versicolor);絲核菌屬(Rhizoctonia),例如立枯絲核菌(R.solani);鬼傘屬(Coprinus)，例如褶玟鬼傘(C.plicatilis)和灰蓋鬼傘(C.cinereus);小脆柄菇屬(Psatyrella);毀絲霉屬(Myceliophthora)，例如嗜熱毀絲霉(M.thermonhila);柱頂孢屬(Schytalidium);射脈菌屬(Phlebia)，例如射脈菌(P.radita);或革蓋菌屬(Coriohis)，例如，毛革蓋菌(C.hirsutus);棉皮孔菌屬中的種(Spongipellissp.);多孑L菌屬(Polyporus);蟲(chóng)擬蠟菌(Ceriporiopsissubvermispora);粗皮靈芝(Ganodermatsunodae)和木霉屬(Trichoderma)。11.根據(jù)權(quán)利要求1-10任一項(xiàng)的方法，其中所述織物是粗斜紋布，并且所述酚氧化酶的濃度對(duì)應(yīng)于每g粗斜紋布0.001-10000jig酶蛋白。12.根據(jù)權(quán)利要求l-ll任一項(xiàng)的方法，其中所述增強(qiáng)劑屬于由4-氰基-2，6-二甲氧基苯酚、4-甲酰氨基-2，6-二甲氧基苯酚、4-(N-甲基甲酰氨基)-2，6-二甲氧基苯酚和4-(N，N-二甲基甲酰氨基)-2，6-二甲氧基苯酚組成的組。13.根據(jù)權(quán)利要求1-12任一項(xiàng)的方法，其中所述織物是粗斜紋布，并且水介質(zhì)中的增強(qiáng)劑以每g粗斜紋布0.005至1000微摩爾的濃度存在。14.根據(jù)權(quán)利要求1-12任一項(xiàng)的方法，其中所述介質(zhì)是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>4-氰基-2，6-二甲氧基苯酚。15.根據(jù)權(quán)利要求1-12任一項(xiàng)的方法，其中所述介質(zhì)是:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>4-甲酰氨基-2，6-二甲氧基苯酚。15.<image>imageseeoriginaldocumentpage4</image>16.根據(jù)權(quán)利要求1-12任一項(xiàng)的方法，其中所述介質(zhì)是:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>4-(N-曱基甲酰氨基)-2，6-二甲氧基苯酚。17.根據(jù)權(quán)利要求1-12任一項(xiàng)的方法，其中所述介質(zhì)是:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>4_(N，N-二曱基甲酰氨基)-2，6-二甲氧基苯酚,全文摘要新的漆酶介質(zhì)，包括2，6-二甲氧基苯酚的甲酰氨基和氰基衍生物，其表現(xiàn)出改進(jìn)的水解穩(wěn)定性和良好的漂白性能?？蓪⑿碌钠崦概c本發(fā)明的2，6-二甲氧基苯酚衍生物組合使用以提供用于漂洗粗斜紋布織物的改進(jìn)的方法。文檔編號(hào)C12N9/42GK101563500SQ200780046905公開(kāi)日2009年10月21日申請(qǐng)日期2007年12月12日優(yōu)先權(quán)日2006年12月18日發(fā)明者J·C·麥考利夫,王華明申請(qǐng)人:丹尼斯科美國(guó)公司