專利名稱：：一種打破苜蓿種子硬實休眠的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)畜牧領(lǐng)域，涉及苜蓿種子生產(chǎn)方法，具體涉及一種打破苜蓿種子硬實休眠的方法。
背景技術(shù)：
：苜蓿(iW—^fcagoL.)，豆目，蝶形花科，苜蓿屬，廣泛分布于歐洲、亞洲、美洲和非洲，全世界共有60多種，我國有16種，分布頗廣，野生和栽培均有。苜蓿是世界上栽培最早、種植最廣的多年生牧草，經(jīng)"絲綢之路"傳入我國之后，栽培己有2000多年的歷史，其種植范圍西到新疆，北至黑龍江，南到江蘇長江中下游地區(qū)，甚至在世界屋脊青藏高原也有種植。苜蓿以"牧草之王"著稱，不僅產(chǎn)量高，而且草質(zhì)優(yōu)良，各種畜禽均喜食。隨著商品經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，近年來苜蓿產(chǎn)業(yè)化規(guī)模發(fā)展較快，苜蓿的種植面積正在擴(kuò)大。特別是在我國農(nóng)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整政策、退耕還林還草工程和奶業(yè)為首的畜牧業(yè)大發(fā)展的帶動下，各地牧草種子需求量也因此穩(wěn)步上升；但是，由于我國在牧草種子生產(chǎn)理論和關(guān)鍵技術(shù)研究上的投入較少，種子生產(chǎn)水平普遍較低，牧草種子產(chǎn)業(yè)技術(shù)基礎(chǔ)薄弱在國內(nèi)生產(chǎn)無法滿足市場需求。同時，由于國內(nèi)草種市場前景看好，國內(nèi)不少企業(yè)也已開始涉足草種業(yè)，紫花苜蓿等牧草種子生產(chǎn)很有可能成為未來幾年我國農(nóng)業(yè)領(lǐng)域內(nèi)新的經(jīng)濟(jì)增長點(diǎn)。但是，苜蓿種子具有硬實性休眠，新鮮苜蓿種子硬實性休眠約在10-30%之間，影響了苜蓿種子生產(chǎn)田建植的出苗率，特別是包衣苜蓿種子。目前我國對打破苜蓿種子硬實休眠的研究尚處于起步階段，采用微生物方法打破苜蓿種子硬實休眠的研究未見報道。經(jīng)對現(xiàn)有技術(shù)的文獻(xiàn)檢索發(fā)現(xiàn)，對打破蝶形花科牧草種子硬實的常用方法有陽光暴曬，熱水浸泡、物理碾磨、藥劑處理(濃硫酸或鉬酸銨浸種)等。但是，采用以上方法打破蝶形花科牧草種子硬實休眠，對于不同種、品種、不同成熟度和保存不同年限的種子，處理時間(陽光暴曬)、處理溫度和濃度(熱水浸泡、藥劑處理)以及處理壓力(物理碾磨)等差異均很大，不易掌控，同時化學(xué)方法對種子還有危害性；生產(chǎn)實踐中處理效果往往不盡人意;由于苜蓿種子較小，對于打破苜蓿種子的硬實休眠，目前還沒有理想的解決方法。
發(fā)明內(nèi)容針對上述
背景技術(shù)：
中打破苜蓿種子硬實休眠方法存在的不足和缺陷，本發(fā)明的目的在于，提供一種打破苜蓿種子硬實休眠的方法，該方法采用接種青霉、米曲霉或者綠色木霉，或者上述菌種的組合處理苜蓿種子，徹底解決了打破苜蓿種子硬實休眠方法的關(guān)鍵，能夠提高其種子的發(fā)芽率和出苗率；所使用的微生物霉菌，可制成苜蓿種子包衣劑或拌種菌劑，直接用于生產(chǎn)實踐中，減少了播種前的一些打破種子硬實的環(huán)節(jié)，節(jié)省了人力物力，而且生產(chǎn)成本低，效益大，使用方便，在我國退化草地的植被恢復(fù)，生態(tài)建設(shè)和草地畜牧業(yè)生產(chǎn)中有很好的市場前景。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的一種打破苜蓿種子硬實休眠的方法，其特征在于，包括下列步驟步驟一，羧甲基纖維素培養(yǎng)基配制取按以下原料按重量比配制培養(yǎng)基:羧甲基纖維素酵母膏:MgS(V7恥K跳:瓊脂蒸餾水=30:2:1:2:30:2000;將羧甲基纖維素、酵母膏、MgS(V7H20、KH2P(U衣次溶于蒸餾水中，邊加邊搖勻，12rC滅菌15分鐘，待培養(yǎng)基冷凝后，待用；步驟二，接種霉菌在上述羧甲基纖維素培養(yǎng)基上接種霉菌，所述的霉菌為綠色木霉Wc力oote27a37_z'r_z.ofe、青霉尸e//cj77iiffl7或者米曲霉Aspei^7JiAsar7zse其中之一，或者上述菌種的兩兩混合、或者上述菌種的三者混合；于25。C3(TC條件下培養(yǎng)27天，以霉菌生長充分為度。步驟三，處理苜蓿種子(a)、將苜蓿種子用70-75%酒精浸種510分鐘消毒，用無菌水洗滌23次；(b)待培養(yǎng)基上長滿微生物時，在其中撒入苜蓿種子，密度以每平方厘米2832粒，于25'C3(TC條件下保持2496小時即可。本發(fā)明帶來的技術(shù)效果是采用霉菌綠色木霉、青霉或者米曲霉中任何單一菌種，或三者中兩兩混合、或者三者混合的菌種處理苜蓿種子，都能有效地打破了苜蓿種子硬實休眠，提高發(fā)芽率1030%;上述3個霉菌的菌種或其混合菌易于獲得和培養(yǎng)，且成本低廉，制成苜蓿種子包衣劑或拌種菌劑，在苜蓿種子生產(chǎn)實踐中有較大市場前景。圖1是本發(fā)明的技術(shù)流程以下結(jié)合附圖和發(fā)明人給出的實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。具體實施方式依照本發(fā)明的技術(shù)方案，申請人提供以下實施例本發(fā)明的打破苜蓿種子硬實休眠的方法，具體步驟流程參見圖1。步驟一，羧甲基纖維素培養(yǎng)基配制取按以下原料按重量比配制培養(yǎng)基羧甲基纖維素酵母膏MgS(V7H20:KH2P04:瓊脂蒸餾水=30:2:1:2:30:2000;將羧甲基纖維素、酵母膏、MgS(V7H力、Kiy^依次溶于蒸餾水中，邊5加邊搖勻，12rc滅菌i5分鐘，待培養(yǎng)基冷凝后，待用；步驟二，接種霉菌在上述羧甲基纖維素培養(yǎng)基上接種霉菌，所述的霉菌為綠色木霉71rj'c/oc/er鵬pa'"'ote、青霉尸e/7j'"7力.風(fēng)米曲霉爿spe2^777i;5"orjzae其中之一，或者上述菌種的兩兩混合、或者上述菌種的三者混合；于25°C3(TC條件下培養(yǎng)27天，以霉菌生長充分為度。上述綠色木霉ric力oofejyi7akj'2^/e、青霉尸e/7^^'7h'"7z7或者米曲霉A9/^/^77m02rzse是本領(lǐng)域公知的霉菌，可以從土壤溶液中分離與純化培養(yǎng)。綠色木霉廣泛存在于各種有機(jī)物質(zhì)和土壤中，常以分生孢子的形式漂浮在空氣中，青霉(Pe/7/c/7//L/m)為分布很廣的半知菌綱中的一屬，青霉通常在柑桔及其他水果上，冷藏的干酪及被它們的孢子污染的其他食物上均可找到，其分生孢子在土壤內(nèi)，空氣中及腐爛的物質(zhì)上到處存在，從土壤或空氣中很易分離，是一類雜食性真菌，可生長在任何含有機(jī)物的基質(zhì)上。米曲霉通常用于釀造。經(jīng)申請人的研究小組證明，在有纖維素誘導(dǎo)的情況下，綠色木霉、青霉、米曲霉可以消化纖維素，其分泌的纖維素酶對苜蓿種子種皮有降解消化作用。步驟三，處理苜蓿種子(a)、將苜蓿種子用70-75%酒精浸種510分鐘消毒，用無菌水洗滌23次；(b)待培養(yǎng)基上長滿微生物時，在其中撒入苜蓿種子，密度以每平方厘米2832粒，于25'C30'C條件下保持2496小時即可。以下是發(fā)明人給出的具體實施例實施例一，采用青霉處理步驟1、按照比例配制羧甲基纖維素培養(yǎng)基羧甲基纖維素(g):酵母膏(g):MgS04*7H20(g):KH2P04(g):瓊脂(g):蒸餾水(ml)=30:2:1:2:30:2000。各成分依次溶于蒸餾水中，邊加邊搖勻，12rC滅菌15分鐘，待培養(yǎng)基冷凝后，待用。步驟2、在上述羧甲基纖維素培養(yǎng)基上接種青霉(&m'"7",)菌種(由西北農(nóng)林科技大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院微生物實驗室菌種保藏室提供)；對照組接無菌水；于25-C30'C培養(yǎng)25天，以生長充分為度。步驟3、當(dāng)年收獲的新鮮苜蓿種子(產(chǎn)自甘肅酒泉，品種為甘農(nóng)3號)，用70-75%酒精浸種510分鐘消毒，用無菌水洗滌23次；待培養(yǎng)基(對照組除外)上長滿微生物時，撒入苜蓿種子，同時也撒入對照組(未接種任何菌種)，密度為每平方厘米2832粒；于26-C保持72小時，然后隨機(jī)取出種子200粒，用無菌水洗滌l-3次，分4組重復(fù)，每組50粒；同時從對照組(未接種任何菌種，只將種子按照同樣密度撒在羧甲基纖維素培養(yǎng)基上，和接種菌的苜蓿種子采取同樣的保持和洗滌處理)隨機(jī)取出種子200粒，用無菌水洗滌l-3次，分4組重復(fù)，每組50粒，按照GB/T2930.4—2001牧草種子檢驗規(guī)程，同時進(jìn)行發(fā)芽對比試驗，結(jié)果如下表l。表1采用青霉處理打破苜蓿種子硬實休眠的發(fā)芽結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>從表1看出，采用青霉處理打破苜蓿種子硬實休眠，標(biāo)準(zhǔn)發(fā)芽率達(dá)到93%，比對照組(未接任何菌種)提高20%，差異達(dá)極顯著水平。實施例二，采用米曲霉處理步驟1、按照比例配制羧甲基纖維素培養(yǎng)基羧甲基纖維素(g):酵母膏(g):MgSOWH20(g):KH2P04(g):瓊脂(g):蒸餾水(ml)=30:2:1:2:30:2000。各成分依次溶于蒸餾水中，邊加邊搖勻，12rC滅菌15分鐘，待培養(yǎng)基冷凝后，待用。步驟2、接種米曲霉菌種(由西北農(nóng)林科技大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院微生物實驗室菌種保藏室提供)；對照組接無菌水；于25"C30'C培養(yǎng)37天，以生長充分為度。步驟3、當(dāng)年收獲的新鮮苜蓿種子(產(chǎn)自甘肅酒泉，品種為甘農(nóng)3號)，用70-75%酒精浸種510分鐘消毒，用無菌水洗滌23次；待培養(yǎng)基(對照組除外)上長滿微生物時，撒入苜蓿種子，同時也撒入對照組(未接種任何菌種)，密度為每平方厘米2832粒；于28t:保持24小時，然后隨機(jī)取出種子200粒，用無菌水洗滌l-3次，分4組重復(fù)，每組50粒，同時從對照組(未接種任何菌種，只將種子按照同樣密度撒在羧甲基纖維素培養(yǎng)基上，和接種菌的苜蓿種子采取同樣的保持和洗滌處理)隨機(jī)取出種子200粒，用無菌水洗滌l-3次，分4組重復(fù)，每組50粒，按照GB/T2930.4—2001牧草種子檢驗規(guī)程，同時進(jìn)行發(fā)芽對比試驗，結(jié)果如下表2。表2采用米曲霉處理打破苜蓿種子硬實休眠的發(fā)芽結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>從表2看出，采用米曲霉處理打破苜蓿種子硬實休眠，標(biāo)準(zhǔn)發(fā)芽率達(dá)到97%，比對照組(未接任何菌種)提高28%，差異達(dá)極顯著水平。實施例三，采用青霉+綠色木霉處理步驟1、按照比例配制羧基纖維素培養(yǎng)基羧甲基纖維素(g):酵母膏(g):MgS04'7H20(g):KH2P04(g):瓊脂(g):蒸餾水(ml)=30:2:1:2:30:2000。各成分依次溶于蒸餾水中，邊加邊搖勻，121'C滅菌15分鐘，待培養(yǎng)基冷凝后，待用。步驟2、接種青霉Pem'cz7/Zwm+綠色木霉7Hc/2ocfermflvzWofe(由西北農(nóng)林科技大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院微生物實驗室菌種保藏室提供)，按l:1比例；對照組接無菌水；于25'C3(TC培養(yǎng)27天，以生長充分為度。步驟3、當(dāng)年收獲的新鮮苜蓿種子(產(chǎn)自甘肅酒泉，品種為甘農(nóng)3號)，用70-75%酒精浸種510分鐘消毒，用無菌水洗滌23次；待培養(yǎng)基(對照組除外)上長滿微生物時，撒入苜蓿種子，同時也撒入對照組(未接種任何菌種)，密度為每平方厘米2832粒；于30'C保持24小時，然后隨機(jī)取出種子200粒，用無菌水洗滌l-3次，分4組重復(fù)，每組50粒，同時從對照組(未接種任何菌種，只將種子按照同樣密度撒在培養(yǎng)基上，和接種菌的苜蓿種子采取同樣的保持和洗滌處理)隨機(jī)取出種子200粒，用無菌水洗滌1-3次，分4組重復(fù)，每組50粒，按照GB/T2930.4—2001牧草種子檢驗規(guī)程，同時進(jìn)行發(fā)芽對比試驗，結(jié)果如下表3。表3采用青霉和綠色木霉處理打破苜蓿種子硬實休眠的發(fā)芽結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>從表3看出，采用青霉和綠色木霉組合處理，打破苜蓿種子硬實休眠，標(biāo)準(zhǔn)發(fā)芽率達(dá)到95%，比對照組(未接任何菌種)提高25%，差異達(dá)極顯著水平。以上為本發(fā)明的最佳實施例，本發(fā)明不限于上述實施例，依據(jù)本發(fā)明公開的內(nèi)容，本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)意識到在不脫離本發(fā)明技術(shù)方案所給出的技術(shù)特征和范圍的情況下，對技術(shù)特征所作的增加、或以本領(lǐng)域一些同樣內(nèi)容的替換，均應(yīng)屬本發(fā)明的保護(hù)范圍。權(quán)利要求1.一種打破苜蓿種子硬實休眠的方法，其特征在于，包括下列步驟步驟一，羧甲基纖維素培養(yǎng)基配制取按以下原料按重量比配制培養(yǎng)基羧甲基纖維素∶酵母膏∶MgSO4·7H2O∶KH2PO4∶瓊脂∶蒸餾水＝30∶2∶1∶2∶30∶2000；將羧甲基纖維素、酵母膏、MgSO4·7H2O、KH2PO4依次溶于蒸餾水中，邊加邊搖勻，121℃滅菌15分鐘，待培養(yǎng)基冷凝后，待用；步驟二，接種霉菌在上述羧甲基纖維素培養(yǎng)基上接種霉菌，所述的霉菌為綠色木霉Trichodermaviride、青霉Penicillium、米曲霉Aspergillusoryzae其中之一，或者上述菌種的兩兩混合、或者上述菌種的三者混合；于25℃～30℃條件下培養(yǎng)2～7天，以霉菌生長充分為度。步驟三，處理苜蓿種子(a)、將苜蓿種子用70-75％酒精浸種5～10分鐘消毒，用無菌水洗滌2～3次；(b)待培養(yǎng)基上長滿微生物時，在其中撒入苜蓿種子，密度以每平方厘米28～32粒，于25℃～30℃條件下保持24～96小時即可。全文摘要本發(fā)明公開了一種打破苜蓿種子硬實休眠的方法，該方法采用接種青霉、米曲霉或者綠色木霉，或者上述菌種的組合處理苜蓿種子，徹底解決了打破苜蓿種子硬實休眠方法的關(guān)鍵，能夠提高其種子的發(fā)芽率和出苗率；所使用的微生物霉菌，可制成苜蓿種子包衣劑或拌種菌劑，直接用于生產(chǎn)實踐中，減少了播種前的一些打破種子硬實的環(huán)節(jié)，節(jié)省了人力物力，而且生產(chǎn)成本低，效益大，使用方便，在我國退化草地的植被恢復(fù)，生態(tài)建設(shè)和草地畜牧業(yè)生產(chǎn)中有很好的市場前景。文檔編號C12R1/80GK101288359SQ200810017529公開日2008年10月22日申請日期2008年2月20日優(yōu)先權(quán)日2008年2月20日發(fā)明者吳春會,健崔,王佺珍,苗彥軍,邊巴卓瑪,韓建國申請人:西北農(nóng)林科技大學(xué)