專(zhuān)利名稱(chēng)：：草綠色鏈霉菌的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及微生物
技術(shù)領(lǐng)域：
，尤指一種抗植物病毒的微生物草綠色鏈霉菌。
背景技術(shù)：
：-植物病毒病是農(nóng)作物的主要病害，目前有1000多種植物病毒病已被世人所認(rèn)識(shí)，由于其種類(lèi)繁多、發(fā)生普遍、危害嚴(yán)重，早已成為研究者關(guān)注和研究的重要對(duì)象。盡管目前已經(jīng)發(fā)展了多種防治策略來(lái)控制植物病毒病，但是由于病毒在植物細(xì)胞中復(fù)制所需的物質(zhì)、能量和場(chǎng)所完全依賴(lài)寄主，且植物沒(méi)有完整的免疫系統(tǒng)，迄今為止，幾乎沒(méi)有化學(xué)藥劑能有效地將感病植株上的病毒完全除去，同時(shí)化學(xué)藥劑給生態(tài)環(huán)境、人畜生存質(zhì)量、非耙標(biāo)生物生存等帶來(lái)了一些負(fù)面影響，其使用受到越來(lái)越多的限制；此外，采用組織脫毒、抗病毒育種等傳統(tǒng)方法也無(wú)法從根本上減輕病毒病的危害；近20年發(fā)展起來(lái)的抗病毒轉(zhuǎn)基因植物，通過(guò)將病毒的外殼蛋白基因、復(fù)制酶基因、蛋白酶基因、移動(dòng)蛋白基因等導(dǎo)入植物體中，對(duì)植株產(chǎn)生不同程度的保護(hù)作用，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)方面應(yīng)用前景廣闊，但是，應(yīng)用病毒基因組來(lái)源的抗病毒轉(zhuǎn)基因植物存在一定的環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)。因此，開(kāi)發(fā)和利用來(lái)自植物和其它生物資源的活性物防治植物病毒病無(wú)疑是21世紀(jì)的一個(gè)熱點(diǎn)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種能產(chǎn)生植物病毒TMV活性物，具有工業(yè)化發(fā)酵生產(chǎn)形成新型、高效、無(wú)毒(低毒)農(nóng)藥潛力的微生物草綠色鏈霉菌。為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是一種鏈霉菌菌株，該菌為草綠色鏈霉菌(5Yre;to/z7yces力ei^grj'cc^arstrain)HNS2—2。是從我國(guó)神龍架?chē)?guó)家自然保護(hù)區(qū)采集的土壤樣品中分離得到?，F(xiàn)保存在國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局專(zhuān)利局指定的保藏單位保藏，保藏日期為2008年6月16日，保藏單位名稱(chēng)中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為CGMCCNO,2540。該草綠色鏈霉菌菌株HNS2-2具有下述性質(zhì)1.形態(tài)特征以插片法在高氏1號(hào)瓊脂培養(yǎng)基(GAU)上于28。C培養(yǎng)本菌株15天后，在光學(xué)顯微鏡下觀察菌絲的形態(tài)和孢子形態(tài)，參見(jiàn)圖1、圖2，氣生菌絲發(fā)育良好，孢子鏈直形，圓柱狀，基內(nèi)菌絲交織成網(wǎng)，有分枝、無(wú)橫膈、無(wú)斷裂現(xiàn)象。在電子顯微鏡下觀察，參見(jiàn)圖3、圖4，孢子鏈直，孢子圓柱狀、成熟時(shí)表面光滑。從圖1-圖4可知，菌株在高氏1號(hào)瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)15天的形態(tài)學(xué)特征與鏈霉菌屬放線菌的形態(tài)特征符合。2.在各種培養(yǎng)基上的特征本發(fā)明的菌株在大多數(shù)培養(yǎng)基上氣生菌絲發(fā)達(dá)、基內(nèi)菌絲豐富，氣生菌絲粉白、淡紫至淺灰色，基內(nèi)菌絲淺黃至褐色。在高氏l號(hào)瓊脂培養(yǎng)基上菌落突出、絨毛狀，氣絲淡紫灰色，基絲黃色、產(chǎn)生草綠色至墨綠色可溶性色素，而在無(wú)機(jī)鹽淀粉瓊脂培養(yǎng)基上氣絲微紅白色，基絲杏仁黃色、可溶性色素淺駝色；柴納斯瓊脂培養(yǎng)基上菌落表面瘤狀，產(chǎn)生褐色可溶性色素。具體見(jiàn)下表l。表1本發(fā)明菌株的培養(yǎng)特征<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>注"一"表示負(fù)反應(yīng)，""+++"表示反應(yīng)的強(qiáng)弱程度。由上表2可知，其生理生化特性符合鏈霉菌屬的特征[119、12°]。HNS2-2菌株能使明膠液化、淀粉水解、牛奶凝固和胨化，能產(chǎn)生硫化氫，并且能強(qiáng)烈分解淀粉，但不能分解纖維素，不能利用酪氨酸產(chǎn)生色素，不能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽。利用D-半乳糖、葡萄糖、果糖、蔗糖、木糖，不利用甘露醇、肌醇、麥芽糖、鼠李糖。進(jìn)一步采用分子生物學(xué)手段進(jìn)行分子上的鑒定，經(jīng)16SrDNA基因測(cè)序分析，得本發(fā)明菌株的16SrDNA部分序列如下gagtttgatcctggctcaggacgaacgctggcggcgtgcttaacacatgcaagtcgaacgatgaagcccttcggggtggattagtggcgaacgggtgagtaacacgtgggcaatctgcccttcactctgggacaagccctggaaacggggtctaataccggatacgactgcgggaggcatctcctgtggtggaaagctccggcggtgaaggatgagcccgcggcctatcagcttgttggtggggtaatggcccaccaaggcgacgacgggtagccggcctgagagggcgaccggccacactgggactgagacacggcccagactcctacgggaggcagcagtggggaatattgcacaatgggcgaaagcctgatgcagcgacgccgcgtgagggatgacggccttcgggttgtaaacctctttcagcagggaagaagcgaaagtgacggtacctgcagaagaagcgccggctaactacgtgccagcagccgcggtaatacgtagggcgcaagcgttgtccgg朋ttattgggcgtaaagagctcgtaggcggcttgtcacgtcggatgtgaaagcccgaggcttaacctcgggtctgcattcgatacgggctagct,gtgtggtaggggagatcggaattcctggtgtagcggtga犯tgcgcagatatcaggaggaacaccggtggcgaaggcggatctctaggccattactgacgctgaggagcgaaagcgtggggagcgaacaggattagataccctggtagtccacgccgtaaacgttgggaactaggtgttggcgacattccacgtcgtcggtgccgcagctaacgcattaagttccccgcctggggagtacggccgcaaggctaaaactcaaaggaattgacgggggcccgcacaagcggcggagcatgtggcttaattcgacgcaacgcgaagaaccttaccaaggcttgacatataccggaaagcattagagatagtgccccccttgtggtcggtatacaggtggtgcatggctgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttgggttaagtcccgcaacgagcgca將HNS2-2菌株的16SrDNA序列與GenBank中相關(guān)序列進(jìn)行BLAST相似性分析，以同源性高的14株菌株采用MEGA軟件以相近序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，結(jié)果見(jiàn)圖5。HNS2-2菌株的16SrDNA序列與GenBank中相關(guān)序列的BLAST比對(duì)結(jié)果表明，HNS2-2屬于鏈霉菌屬(Str印tomyces)，與穗狀產(chǎn)色鏈霉菌51rsceyz70c力2YMK^ev7asstrainNRRLB-5430(DQ026656.1)和多產(chǎn)色鏈霉菌6:po&cAro膨ge/7esstrainNRRLB-3032的序列同源性高達(dá)99%，與淡紫灰鏈霉菌S/we/wWaeDNAstrainIF014028(D85114.1)的序列同源性為98%，與草綠色鏈霉菌的模式菌株6:力erferj'cW,strainNRRLB-3299T的序列同源性為100%，在系統(tǒng)進(jìn)化發(fā)育樹(shù)上處于同一分支。通過(guò)對(duì)本發(fā)明所述的鏈霉菌進(jìn)行形態(tài)特征、培養(yǎng)特征、生理生化特性和16SrDNA序列的測(cè)定，表明菌株麗S2-2具有草綠色鏈霉菌的模式菌株61力er6aric^orstminNRRLB-3299T的典型特征即在培養(yǎng)基中產(chǎn)生草綠色擴(kuò)散性色素，孢子絲直形；兩者的序列同源性為100%，因此將其歸入草綠色鏈霉菌，在GenBank注冊(cè)，登錄序列號(hào)為EU035296。圖1是本發(fā)明的草綠色鏈霉菌菌株HNS2-2在高氏1號(hào)瓊脂培養(yǎng)基上的菌絲形態(tài)照片。圖2是本發(fā)明的草綠色鏈霉菌菌株HNS2-2在高氏1號(hào)瓊脂培養(yǎng)基上的孢子形態(tài)照片。圖3是本發(fā)明的草綠色鏈霉菌菌株HNS2-2在高氏1號(hào)瓊脂培養(yǎng)基上的孢子電鏡照片一。圖4是本發(fā)明的草綠色鏈霉菌菌株HNS2-2在高氏1號(hào)瓊脂培養(yǎng)基上的孢子電鏡照片二。圖5是本發(fā)明的草綠色鏈霉菌HNS2-2依據(jù)16SrDNA序列構(gòu)建的菌株與相關(guān)菌株的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。圖6是本發(fā)明的草綠色鏈霉菌菌株HNS2-2的發(fā)酵濾液對(duì)TMV在系統(tǒng)侵染寄主上的防效圖。其中a:對(duì)照b:經(jīng)保護(hù)作用處理C:經(jīng)治療作用處理d:經(jīng)抑制作用處理。圖7是酸堿對(duì)抑菌生物活性物穩(wěn)定性的影響。圖8是溫度對(duì)抑菌生物活性物穩(wěn)定性的影響。具體實(shí)施例方式以下具體說(shuō)明本發(fā)明菌株的分離篩選過(guò)程及應(yīng)用實(shí)例。本發(fā)明菌株采用稀釋平板分離法從神龍架土壤樣品中分離具有抗植物病原微生物的放線菌得到，分離篩選方法如下①菌株分離采用稀釋平板分離法，取土壤樣品10g加入無(wú)菌水90mL混合均勻制備樣品懸液，隨后進(jìn)行10倍梯度稀釋?zhuān)蝗∵m當(dāng)濃度稀釋液(一般為103、104、或105樣品稀釋液)涂布接種于高氏1號(hào)培養(yǎng)基中(高氏1號(hào)合成瓊脂:可溶性淀粉20g，M03lg，K2HP040.5g，MgS047H200.5g，NaCLO.5g，F(xiàn)eS040.Olg，瓊月旨20g，蒸餾水1000mL，pH7.27.4.)置28"C培養(yǎng)4d。挑取單個(gè)菌落斜面保藏，共分離保藏?cái)?shù)株放線菌。②放線菌菌株的初篩和復(fù)篩1)土壤放線菌發(fā)酵濾液的制備分別將放線菌單個(gè)菌落接種于高氏1號(hào)液體培養(yǎng)基中，置搖床28°C、220rpm培養(yǎng)4d，發(fā)酵液較粘稠，具有特殊香氣，且鏡檢無(wú)雜菌污染，則酸化過(guò)濾，濾液冰箱保存?zhèn)溆谩?)接種方法取TMV感染病葉加入適量0.01mol/LpH7.2磷酸緩沖液(7mL磷酸緩沖液/g病葉)，置滅菌研缽中研磨成勻漿，4層紗布過(guò)濾，噴灑400目石英砂，采用常規(guī)汁液摩擦接種，接種后5min-10min用清水輕輕沖洗葉片，試驗(yàn)在25°C-30°C無(wú)蟲(chóng)溫室內(nèi)進(jìn)行。3)以煙草花葉病毒TMV作為供試病原，系統(tǒng)侵染寄主普通煙草K326、枯斑寄主曼陀羅作為供試植物，各菌株發(fā)酵濾液作為抗病生物活性物，采用摩擦接種法接種系統(tǒng)侵染寄主普通煙草K326、枯斑寄主曼陀羅進(jìn)行初篩，從初篩結(jié)果中再進(jìn)行復(fù)篩，獲取本發(fā)明菌株HNS2-2。本發(fā)明菌株對(duì)TMV在枯斑寄主曼陀羅上的防效取長(zhǎng)勢(shì)一致、4-5片葉的枯斑寄主曼陀羅分別分為3組，進(jìn)行按以下體外抑制作用、保護(hù)作用和治療作用3種接種處理菌株HNS2-2發(fā)酵濾液5倍稀釋(20%)與TMV等體積混合lh后接種、接種前24h和接種后24h分別噴灑20%發(fā)酵濾液，采用常規(guī)方法機(jī)械摩擦接種，每處理5株(每株3片真葉)，重復(fù)2次，另設(shè)有對(duì)照，接種后5d調(diào)査病斑數(shù)，取平均值計(jì)算枯斑抑制率。結(jié)果表明20%發(fā)酵濾液與TMV制備液等體積混合lh后接種在曼陀羅上，平均枯斑數(shù)為4.38。沒(méi)有采用本發(fā)明菌株的發(fā)酵濾液的曼陀羅葉片平均枯斑數(shù)為56.55。因而，枯斑抑制率為92.62%。發(fā)酵濾液于接種前、后24h施用的平均枯斑數(shù)分別為9.16、18.65，枯斑抑制率分別為83.78%、67.26%。并且比較進(jìn)行不同處理5d后的枯斑寄主曼陀羅盆栽植株，枯斑數(shù)量有明顯差異，但對(duì)植株長(zhǎng)勢(shì)的影響無(wú)明顯區(qū)別。試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明此菌株的發(fā)酵濾液中含有對(duì)植物病毒TMV有生物活性作用的代謝產(chǎn)物，對(duì)病毒具有較強(qiáng)的體外抑制作用，同時(shí)對(duì)寄主有一定的保護(hù)作用和治療作用。本發(fā)明菌株對(duì)TMV在系統(tǒng)侵染寄主上的防效取長(zhǎng)勢(shì)一致普通煙K326，每處理30株，重復(fù)3次，進(jìn)行以下體外抑制作用、保護(hù)作用和治療作用3種接種處理菌株HNS2-2發(fā)酵濾液5倍稀釋(20%)與TMV等體積混合lh后接種、接種前24h和接種后24h分別噴灑5倍稀釋(20%)的發(fā)酵濾液，采用常規(guī)方法機(jī)械摩擦接種，發(fā)病后調(diào)査病情指數(shù)，取平均值計(jì)算防治效果。結(jié)果表明在普通煙草K326上，HNS2-2發(fā)酵濾液對(duì)TMV有明顯的抑制作用、對(duì)寄主具有保護(hù)作用和治療作用，病情指數(shù)分別為7.21、8.49、10.91，防治效果分別為61.88%、54.06%及42.37%。將普通煙草K326經(jīng)保護(hù)作用、治療作用、抑制作用3種處理30d后，從圖6可知，在普通煙K326上均有發(fā)病現(xiàn)象，但病情低于對(duì)照，對(duì)照組部分植株全株葉片花葉，葉片畸形并形成線形葉，病株矮化；而處理組只出現(xiàn)心葉脈明、輕微花葉或1/3-1/2葉片花葉，沒(méi)有植株矮化及葉片畸形現(xiàn)象。由上可知，本發(fā)明菌株的發(fā)酵濾液對(duì)TMV感染具有預(yù)防作用、抑制作用及治療作用，具有抗植物病毒TMV活性。進(jìn)一步對(duì)本發(fā)明菌株的生物活性物進(jìn)行化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定試驗(yàn)，即分別采用pHl-12(結(jié)果參見(jiàn)圖7)，40°C、60°C、80°C、100°C、120°C(結(jié)果參見(jiàn)圖8)以及40w日光燈光照和太陽(yáng)光光照(結(jié)果見(jiàn)表3)處理發(fā)酵濾液，以金黃色葡萄球菌為指示菌種，采用管碟法測(cè)定發(fā)酵濾液抑菌活性(管碟法的步驟為將已融化冷卻至45"C的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，按0.2%(V/V)接種量，接入供試細(xì)菌液體培養(yǎng)物，混合均勻后倒入已滅菌的培養(yǎng)皿中，待凝固后即在每個(gè)培養(yǎng)皿中放置牛津杯，牛津杯等距放置，設(shè)無(wú)菌水做空白對(duì)照，然后在每個(gè)牛津杯中接入200|iL已經(jīng)過(guò)膜過(guò)濾器處理過(guò)的發(fā)酵液，每個(gè)處理重復(fù)3次，取平均值。置于36。C的恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)24h后測(cè)量抑菌圈直徑。)。表3光對(duì)抑菌生物活性物穩(wěn)定性的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>結(jié)果表明本發(fā)明菌株的生物活性物分別在pH4-9、40°C-80。C、40w日光燈光照2-8小時(shí)條件下表現(xiàn)穩(wěn)定。在采用管碟法測(cè)定本發(fā)明菌株發(fā)酵濾液抑菌活性試驗(yàn)中還表明，其發(fā)酵濾液對(duì)金黃色葡萄球菌、枯草芽胞桿菌有明顯的抑制作用，并形成較大的抑菌圈；而對(duì)大腸桿菌及沙門(mén)氏桿菌的抑制圈小。其結(jié)果說(shuō)明本菌株活性成分對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌抑制作用效果好。對(duì)鐮刀菌、青霉有明顯的抑制作用，其抑制作用的強(qiáng)弱為赤霉菌〉鐮刀菌>青霉。序列表〈110〉湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)<120>草綠色鏈霉菌〈130〉PHW08443〈140>200810031605.1<141>2008-06-27<170>Patentlnversion3.1〈210〉1〈211〉1074<212>DNA〈213〉鏈霉菌屬(Str印tomyces)〈400>1gagtttgatcctggctcaggacgaacgctgatgaagcccttcggggtggattagtggcgattcactctgggacaagccctggaaacggggctcctgtggtggaaagctccggcggtgaagggggtaatggcccaccaaggcgacgacgggtgggactgagacacggcccagactcctacgggcgaaagcctgatgcagcgacgccgcgtgtttcagcagggaagaagcgaaagtgacggtgccagcagccgcggtaatacgt鄉(xiāng)gcgcagctcgtaggcggcttgtcacgtcggatgtggcggcgtgcttaacacatgcaagtcgaacg60acgggtgagtaacacgtgggcaatctgccc120tctaataccggatacgactgcgggaggcat180gatgagcccgcggcctatcagcttgttggt240tagccggcctgagagggcgaccggccacac300ggaggcagcagtggggaatattgcetcaeitg360agggatgacggccttcgggttgtaaacctc420acctgcagaagaagcgccggctaactacgt480eigcgttgtccggaattattgggcgtaaaga540aaagcccgaggcttaacctcgggtctgcat600tcgatacgggctagct卿gtgtggtagggg卿tcggaattcctggtgtagcggtgaaa,tgcgcagatatcaggagg犯ceiccggtggcgaaggcggatctctaggccattactgacgc720tgaggagcgaaagcgtggggagcgaacaggattagataccctggtagtccacgccgtaaa780cgttgggaactaggtgttggcgacattccacgtcgtcggtgccgcagctaacgcattaag840ttccccgcctggggagtacggccgcaaggctaaaeLctcaaaggaattgacgggggcccgc900acaagcggcggagcatgtggcttaattcgacgcaacgcgaagaaccttaccaaggcttga%0catataccggaaagcattagagatagtgccccccttgtggtcggtatacaggtggtgcat1020ggctgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttgggttaagtcccgcaacgagcgca107權(quán)利要求1、一種鏈霉菌菌株，其特征在于該菌為草綠色鏈霉菌(Streptomycesherbaricolorstrain)HNS2-2，已于2008年6月16日在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心進(jìn)行了保藏，保藏編號(hào)為CGMCCNO.2540。2、根據(jù)權(quán)利要求l所述的鏈霉菌菌株，其特征在于該菌株的形態(tài)特征及基于16SrDNA序列的系統(tǒng)進(jìn)化分析，將其歸入草綠色鏈霉菌，在GenBank注冊(cè)，登錄序列號(hào)為EU035296，該菌的16SrDNA部分序列如下gagtttgatcctggctcaggacgaacgctggcggcgtgcttaacacatgcaagtcgaacgatgaagcccttcggggtggattagtggcgaacgggtgagtaacacgtgggcaatctgcccttcactctgggacaagccctggaaacggggtctaataccggatacgactgcgggaggcatctcctgtggtggaaagctccggcggtgaaggatgagcccgcggcctatcagcttgttggtggggtaatggcccaccaaggcgacgacgggtagccggcctgagagggcgaccggccacactgggactgagacacggcccagactcctacgggaggcagcagtggggaatattgcacaatgggcgaaagcctgatgcagcgacgccgcgtgagggatgacggccttcgggttgtaaacctctttcagcagggaagaagcgaaagtgacggtacctgcagaagaagcgccggctaactacgtgccagcagccgcggtaatacgtagggcgcaagcgttgtccggaattattgggcgtaaagagctcgtaggcggcttgtcacgtcggatgtgaaagcccgaggcttaacctcgggtctgcattcgatacgggctagctagagtgtggtaggggagatcggaattcctggtgtagcggtgaaatgcgcagatatcaggaggaacaccggtggcgaaggcggatctctaggccattactgacgctgaggagcgaaagcgtggggagcgaacaggattagataccctggtagtccacgccgtaaacgttgggaactaggtgttggcgacattccacgtcgtcggtgccgcagctaacgcattaagttccccgcctggggagtacggccgcaaggctaaaactcaaaggaattgacgggggcccgcEicaagcggcggagcatgtggcttaattcgacgcaacgcgaagaaccttaccaaggcttgacatataccggaaagcattagagatagtgccccccttgtggtxggtatacaggtggtgcatggctgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttgggtt犯gtcccgcaacgagcgca3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的鏈霉菌菌株，其特征在于所述菌株具有抗植物病毒TMV活性。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的鏈霉菌菌株，其特征在于所述菌株的生物活性物在pH4-9條件下化學(xué)性質(zhì)表現(xiàn)穩(wěn)定。5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的鏈霉菌菌株，其特征在于所述菌株的生物活性物在4crc-8crc條件下化學(xué)性質(zhì)表現(xiàn)穩(wěn)定。6、根據(jù)權(quán)利要求1所述的鏈霉菌菌株，其特征在于所述菌株的生物活性物于40w日光燈光照2-8小時(shí)條件下化學(xué)性質(zhì)表現(xiàn)穩(wěn)定。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了一個(gè)鏈霉菌菌株，該菌為草綠色鏈霉菌(Streptomycesherbaricolorstrain)HNS2-2，已于2008年6月16日在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心進(jìn)行了保藏，保藏編號(hào)為CGMCCNO.2540。其16SrDNA已被GenBank收錄，登錄序列號(hào)為EU035296。該菌株從神龍架土壤樣品中的放線菌中分離篩選得到，其發(fā)酵濾液具有抗煙草花葉病毒(TMV)的作用，在盆栽植物試驗(yàn)中對(duì)TMV有明顯的抑制作用、對(duì)寄主具有保護(hù)作用和治療作用，病情指數(shù)分別為7.21、8.49、10.91，防治效果分別為61.88％、54.06％及42.37％，可應(yīng)用在各種植物的煙草花葉病毒病的防治上。文檔編號(hào)C12R1/465GK101392226SQ20081003160公開(kāi)日2009年3月25日申請(qǐng)日期2008年6月27日優(yōu)先權(quán)日2008年6月27日發(fā)明者陳力力,高必達(dá)申請(qǐng)人:湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)