專利名稱：：生物催化法制備4-氰基-3-羥基丁酸乙酯的兩種高光學(xué)活性對(duì)映體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及(±)_4-氰基-3-羥基丁酸乙酯的制備方法，更具體地說利用它們催化不對(duì)稱還原生產(chǎn)手性P-羥基丁酸酯的微生物轉(zhuǎn)化方法。
背景技術(shù)：
：光學(xué)活性手性仲醇是許多手性藥物和手性精細(xì)化學(xué)品合成的重要中間體，其合成方法通常包括酮的不對(duì)稱還原以及消旋體的不對(duì)稱拆分。通過對(duì)外消旋體的拆分制備光學(xué)活性手性仲醇可以采用天然或者人工合成的手性拆分試劑，也可以用生物酶法，但是手性拆分試劑的來源遠(yuǎn)不如生物酶法的種類眾多，所以最為常見的莫過于采用商品化的酯酶或者脂肪酶進(jìn)行水解拆分，但是，對(duì)于拆分來講，其最大產(chǎn)率也不會(huì)超過50%，工業(yè)化的時(shí)候通常還需考慮其另一對(duì)映體的處理，有時(shí)候丟棄另外--半也是無奈之舉。因此，更為經(jīng)濟(jì)的考慮是潛手性酮的不對(duì)稱還原，理論上能得到100%的轉(zhuǎn)化結(jié)果?；痉椒ㄓ谢瘜W(xué)法還原和生物催化還原，一般在無水無氧條件苛刻的情況下，使用手性配體和過渡金屬配合物作為催化劑，其產(chǎn)率往往很高。但廢棄的重金屬催化劑往往無法后處理，掩埋是唯一途徑，然而又會(huì)對(duì)環(huán)境不利，而且該類催化劑往往價(jià)格昂貴，其工業(yè)化成本較高。生物催化法制備光學(xué)活性手性仲醇以其獨(dú)特的優(yōu)勢正逐步受到關(guān)注。高選擇性是酶催化的最大特點(diǎn)，此外，生物催化法往往較為迅速，而且副產(chǎn)物較少，后處理簡單，省卻了諸多化學(xué)合成中的對(duì)敏感基團(tuán)的保護(hù)和脫保護(hù)步驟。利用整細(xì)胞進(jìn)行催化無需添加輔酶，也不需要進(jìn)行酶的純化，可以更進(jìn)一步的節(jié)省工業(yè)化生產(chǎn)成本。(R)-4-氰基-3-羥基丁酸乙酯((R)-ethyl4-cyano-3-hydroxybutyrate)是一個(gè)非常重要的手性化合物，它是合成HMG-CoA還原酶抑制劑Atorvastatin(Lipitor)的中間體，HMG-CoA還原酶抑制劑可以控制膽固醇的生物合成。它還是合成L-Camitine禾口(R)-4-amino-3-hydroxybutyricacid(GABOB)的中間體。L-Carnitine是運(yùn)送長鏈脂肪酸通過細(xì)胞膜進(jìn)入粒線體代謝，以產(chǎn)生能量的運(yùn)輸工具，它常做為營養(yǎng)補(bǔ)充品，供運(yùn)動(dòng)員用，而且常見于嬰幼兒的營養(yǎng)品中。(R)-4-amino-3-hydroxybutyricacid(GABOB)是gamma-aminobutyricacid的收縮劑，該類藥物可以用做控制一些臨床反應(yīng)如精神分裂癥，癲癇癥等。目前報(bào)道其合成路徑主要有以表氯醇或者(8)-3-羥基-Y-丁內(nèi)酯為起始原料，也有從4-氯-3-羥基丁酸乙酯經(jīng)過氰基化而得到，但直接采用酶法不對(duì)稱催化還原4-氰基-3-羰基丁酸乙酯，尚未見文獻(xiàn)報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供一種新的能有效催化不對(duì)稱還原反應(yīng)生產(chǎn)手性P—羥基丁酸酯的方法，利用生物催化法催化還原4一氰基乙酰乙酸乙酯，以獲得高產(chǎn)率，高光學(xué)純度的(±)-4-氰基-3-羥基丁酸乙酯。在本發(fā)明中，能有效催化不對(duì)稱還原反應(yīng)生成手性3—羥基丁酸酯的兩株菌株，其中一株經(jīng)過LB瓊脂培養(yǎng)基后，革蘭氏染色表明，該菌為革蘭氏陽性菌，菌的大小為23iimXlixm，短桿狀，兩端鈍圓，無鞭毛和莢膜，成單排列，芽孢橢圓位于菌體兩端，被DSMZ命名為Sac/〃M/MAm7MPhe-C3，保藏編號(hào)DSM-355。另一株在經(jīng)過LB瓊脂培養(yǎng)基后，革蘭氏染色表明為革蘭陰性桿菌，為較短粗的桿菌，大小0.5-1umx2um,短鏈狀排列，無芽孢，無鞭毛，有較厚的莢膜，有菌毛，被DSMZ命名為幻WwW/a戸畫畫'"ePhe-E4，保藏編號(hào)DSM陽2026。本發(fā)明利用上述兩種菌株A7WwW/ap"ewmom'aePhe-E4禾Q5ac/〃w/w腦7w戶/ze-C3可以用于生產(chǎn)高光學(xué)純的(±)-4-氰基-3-羥基丁酸乙酯，K/e/w/eZ/a/7"ew附cw/aePhe-E4用于生產(chǎn)S*勾型，5a"7/ws/wwz7ws/Vze-C3用于生產(chǎn)R構(gòu)型。具體包括以下步驟(1)將上述菌株進(jìn)行劃板、搖瓶培養(yǎng)、發(fā)酵罐培養(yǎng)，得到的菌液離心獲得濕菌體；(2)將(1)所得的濕菌體分散到磷酸鹽緩沖液中去；(3)將底物4一氰基乙酰乙酸乙酯加入(2)所述的體系中去反應(yīng)，然后從反應(yīng)體系中收集還原產(chǎn)物。其中，所述的4一氰基乙酰乙酸乙酯以4一氯乙酰乙酸乙酯為原料進(jìn)行合成的。步驟(1)中的劃板培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基為LB瓊脂培養(yǎng)基，其組成為蛋白胨1%;酵母浸膏0.5%;氯化鈉1.0%;瓊脂1.5%;其余為蒸餾水。pH為7.0。步驟(1)中搖瓶培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基為M9培養(yǎng)基，其組成為Na2HP04:6.78%。；KH2P04:3.0%。；NaCl:0.5%>;NH4C1:1.0%。；MgS04:0.24°;;CaCl2:0.01%。；其余為蒸餾水。pH為7.4。步驟(3)中所用到的細(xì)胞濃度為3-24gcdw/L。步驟(4)中反應(yīng)溫度為28"C，反應(yīng)時(shí)間為0.5—70小時(shí)，所用的緩沖液pH為7.0，底物濃度為5-30mM。反應(yīng)完畢的混合液先離心，水層用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層干燥，減壓蒸餾出去溶劑，得到(±)-4-氰基-3-羥基丁酸乙酯。以下具體描述各個(gè)步驟菌株的制備平板培養(yǎng)培養(yǎng)基配置蛋白胨1%，酵母浸膏0.5%，氯化鈉1.0%，瓊脂1.5%，pH7.0的LB瓊脂培養(yǎng)基，12TC下滅菌20分鐘，冷卻，倒人平板，分別接禾中A7e6s/e〃apwewmom'aePhe-E4禾口5ac/〃w51pw^m7ws尸/ze-C3，28。C培養(yǎng)4-6天。搖瓶培養(yǎng)培養(yǎng)基配置Na2HP046.78%。，KH2P043.0%。，NaCl0.5%0，NH4C11.00%。，MgS040.24%。，CaCl20.01%。，pH7.4的M9培養(yǎng)基，裝入三角瓶(裝液量500mL/1000mL)，121。C下滅菌20分鐘，冷卻，分裝到250mL搖瓶中，并加入2Q/^的葡萄糖，接種，接種量5-10%，28°C，搖瓶轉(zhuǎn)速220rpm。培養(yǎng)2-3天，離心，收集菌體，保存待用。底物制備將4—氯乙酰乙酸乙酯溶解在無水乙醇中，冰浴冷卻下，加入適量氰化鈉，加料完畢后室溫?cái)嚢柽^夜，將反應(yīng)液倒入水中并用乙酸乙酯萃取，有機(jī)相飽和食鹽水洗，干燥，濃縮即可得到4—氰乙酰乙酸乙酯。微生物催化將所得的菌體用磷酸鹽緩沖液洗滌后再重新分散到磷酸鹽緩沖液中去，加入4-氰基乙酰乙酸乙酯，并加入2Q/^的葡萄糖，底物濃度為5-30mM，菌體濃度為3-24gcdw/L，反應(yīng)溫度為28。C，反應(yīng)時(shí)間為0.5-70小時(shí)。有機(jī)溶劑萃取反應(yīng)液后，GC跟蹤反應(yīng)，當(dāng)反應(yīng)結(jié)束后，將溶液離心，上清液用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層飽和食鹽水洗后分層干燥，減壓出去溶劑，并用硅膠柱層析(石油醚乙酸乙酯/3:1)分離純化產(chǎn)物。底物4-氰基乙酰乙酸乙酯和產(chǎn)物(±)-4-氰基-3-羥基丁酸乙酯GC分析條件(1):轉(zhuǎn)化率的測定，使用天美公司的GC-7900氣相色譜儀，HP-5柱子(30mX0.25mmX0.25um),色譜條件為進(jìn)樣口250°C,檢測器280°C,升溫程序:10(TC下保留1分鐘,以10°C/min升溫至25(TC,保溫10分鐘。載氣N2流速40mL/min。(2):ee值的測定，使用天美公司的GC-7900氣相色譜儀，ChiralDEX-CB柱子(30mX0.25mmX0.25um),色譜條件為進(jìn)樣口250°C,檢測器280。C,.升溫程序:10(TC下保留2分鐘,以4°C/min升溫至25(TC,保溫10分鐘。載氣N2流速40m!7min。本發(fā)明的有益效果本發(fā)明采用兩株菌株生產(chǎn)(±)-4-氰基-3-羥基丁酸乙酯，底物轉(zhuǎn)化率可達(dá)98%以上，能得到高光學(xué)純度的手性產(chǎn)物，并且反應(yīng)專一性強(qiáng)，副產(chǎn)物少，后處理簡單，具有很好工業(yè)應(yīng)用開發(fā)前景。同時(shí)根據(jù)本發(fā)明公開的技術(shù)方案，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以很方便的將本發(fā)明中的兩株菌株的培養(yǎng)條件和生物轉(zhuǎn)化工藝應(yīng)用于其他含有13-羰基化合物的不對(duì)稱生物催化中。圖1:本發(fā)明實(shí)施例6中Ba"7/wpMm//wPhe-C3催化不同濃度的底物轉(zhuǎn)化進(jìn)程圖。圖2:本發(fā)明實(shí)施例7中7a&wW/apwewmom'aePhe-E4催化不同濃度的底物轉(zhuǎn)化進(jìn)程圖。具體實(shí)施方式下面提供具體的實(shí)施例來對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步進(jìn)行闡述，但實(shí)施例不限制6本發(fā)明的保護(hù)范圍。底物制備將4一氯乙酰乙酸乙酯溶解在無水乙醇中，冰浴冷卻下，加入適量氰化鈉，加料完畢后室溫?cái)嚢柽^夜，將反應(yīng)液倒入水中并用乙酸乙酯萃取，有機(jī)相飽和食鹽水洗，干燥，濃縮即可得到4一氰乙酰乙酸乙酯。實(shí)施例1:平板培養(yǎng)。培養(yǎng)基配置蛋白胨1%，酵母浸膏0.5%，氯化鈉1.0%，瓊脂1.5。％，pH7.0的LB瓊脂培養(yǎng)基(其余為水)，12rC下滅菌20分鐘，冷卻，倒平板，分別接種Sac/〃m;m願(yuàn)7mPhe-C3禾卩K/eZw'e〃aPhe-E4，28。C培養(yǎng)4-6天，即可轉(zhuǎn)入搖瓶培養(yǎng)。實(shí)施例2:搖瓶培養(yǎng)。培養(yǎng)基配置Na2HP046.78%o，KH2P043.00;,NaCl0.5%。，NH4C11.0%。，MgSO40.24%。，CaCl20.01%)，pH7.4的M9培養(yǎng)基(其余為水)，裝入三角瓶(裝液量500mL/1000mL)，121°C下滅菌20分鐘，冷卻，分裝到250mL搖瓶中，并加入2%的葡萄糖，分別接種上述Sac"/wpwm//^Phe-C3禾口K/eZw/e〃a/wewmom》ePhe-E4，接禾中量5-10%，28°C，搖瓶轉(zhuǎn)速220rpm。培養(yǎng)2-3天，離心，收集菌體，保存待用。實(shí)施例3:Sa"7/ws/wrn7wPhe-C3的發(fā)酵罐培養(yǎng)。發(fā)酵罐培養(yǎng)基與搖瓶培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基一致。待5a"7/wPhe-C3在搖瓶中生長到指數(shù)生長后期的時(shí)候，接種到5升的發(fā)酵罐中。發(fā)酵罐預(yù)先裝入了2升培養(yǎng)基(含2%的葡萄糖)。發(fā)酵條件轉(zhuǎn)速220rpm，溫度30°C，空氣流速1.5L/min。20小時(shí)的時(shí)候，以25g/h的速度向發(fā)酵罐中補(bǔ)充500/^的葡萄糖以維持體系的葡萄糖濃度，同時(shí)轉(zhuǎn)速提高到400rpm以提高通氣量。40小時(shí)的時(shí)候，達(dá)到其指數(shù)生長后期，fC下離心并保存到冰箱中待用。實(shí)施例4將按實(shí)施例3所述方法得到的Sa"7/wpM,7wPhe-C3菌株解凍，并用磷酸鹽緩沖液(pH7.0)洗滌，之后重新分散到磷酸鹽緩沖液中去，并加入5mM的底物4—氰基乙酰乙酸乙酯，分別添加0%，2%的葡萄糖，在28°C，220卬m下進(jìn)行轉(zhuǎn)化，用GC跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，測其轉(zhuǎn)化率，結(jié)果如表1:表1:添加不同葡萄糖濃度對(duì)^^7/^pwm7^Phe-C3的催化效率的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>由表1可以看出，添加適當(dāng)濃度的葡萄糖可以大大提高s/〃w;wm7^Phe-C3的催化效率。實(shí)施例5將按實(shí)施例2所得到的K/eZwW/a;"ewmom'"ePhe-E4菌株解凍，并用磷酸鹽緩沖液(pH7.0)洗滌，之后重新分散到磷酸鹽緩沖液中去，并加入5mM的底物4一氰乙酰乙酸乙酯，分別添加0%，2%的葡萄糖，在28°C，220rpm下進(jìn)行轉(zhuǎn)化，用GC跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，測其轉(zhuǎn)化率，結(jié)果如表2:表2:添加不同葡萄糖濃度對(duì)KlebsiellapneumoniaePhe-E4的催化效率的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>由表1可以看出，添加適當(dāng)濃度的葡萄糖對(duì)《/WwW/ap"ewwom'aePhe-E4的催化效率影響不大。實(shí)施例6按實(shí)施例3所述方法生產(chǎn)S""7/wpww//^Phe-C3菌株，濕菌體用磷酸鹽緩沖液(pH7.0)洗滌，之后重新分散到磷酸鹽緩沖液中去，細(xì)胞濃度調(diào)至6g/L，添加2%的葡萄糖，并加入5-30mM的底物4一氰乙酰乙酸乙酯，在28。C，220rpm下進(jìn)行轉(zhuǎn)化，用GC跟蹤，測得其實(shí)時(shí)的轉(zhuǎn)化率，得到結(jié)果如圖1，可以看出，底物濃度為20mM時(shí)，Sa"7/w/nm//^Phe-C3還能對(duì)其進(jìn)行有效的催化，但當(dāng)濃度達(dá)到30mM時(shí)，轉(zhuǎn)化效果則變得很差。實(shí)施例7按實(shí)施例2所述方法生產(chǎn)AT/eZ^/e〃ap"ewmo"/"ePhe-E4菌株，濕菌體用磷酸鹽緩沖液(pH7.0)洗滌，之后重新分散到磷酸鹽緩沖液中去，細(xì)胞濃度調(diào)至6g/L，添加2%的葡萄糖，并加入5-30mM的底物4一氰乙酰乙酸乙酯，在28T，220rpm下進(jìn)行轉(zhuǎn)化，用GC跟蹤，測得其實(shí)時(shí)的轉(zhuǎn)化率，得到結(jié)果如圖2，可以看出K/e^/e〃a;"eMWom'flePhe-E4可以有效催化最大底物濃度為10mM，更高的底物濃度將導(dǎo)致轉(zhuǎn)化率的下降。實(shí)施例8按實(shí)施例3所述方法生產(chǎn)5acz7/w，脂7^Phe-C3菌株，濕菌體用磷酸鹽緩沖液(pH7.0)洗滌，之后重新分散到磷酸鹽緩沖液中去，并調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度為3-24g/L，同時(shí)添加2%的葡萄糖，加入20mM的底物4一氰乙酰乙酸乙酯，在28。C，220rpm下進(jìn)行轉(zhuǎn)化，用GC跟蹤，測得其實(shí)時(shí)的轉(zhuǎn)化率和酶活,結(jié)果如表3:表3:不同菌體濃度對(duì)BacilluspumilusPhe_C3的轉(zhuǎn)化效果的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>細(xì)胞酶活的定義為28°C，pH7.0條件下，每分鐘催化轉(zhuǎn)化lumol底物所需的細(xì)胞量。由表3可以看出，Bac/〃w/ww〃msPhe-C3菌株的濃度為6g/L時(shí)具有最好的催化效果。實(shí)施例9按實(shí)施例2所述方法生產(chǎn)幻eZw/e〃a/wewwom'aePhe-E4菌株，濕菌體用磷酸鹽緩沖液(pH7.0)洗滌，之后重新分散到磷酸鹽緩沖液中去，并調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度為3-24g/L，加入10mM的底物4—氰乙酰乙酸乙酯，在28°C，220rpm下進(jìn)行轉(zhuǎn)化，用GC跟蹤，測得轉(zhuǎn)化率和酶活,結(jié)果如表4:對(duì)KlebsiellapheumoniaePhe-E4的轉(zhuǎn)化效果的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>由表4可以看出，A7e6w'e〃ap"ewmom'aePhe-E4菌株的f農(nóng)度為12g/L時(shí)具有最好的催化效果。實(shí)施例10按實(shí)施例3所述方法生產(chǎn)5ac/〃w;"m〃^Phe-C3菌株，濕菌體用磷酸鹽緩沖液(pH7.0)洗滌，之后重新分散到磷酸鹽緩沖液中去，并調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度為6g/L，同時(shí)添加2%的葡萄糖，加入20mM的底物4一氰乙酰乙酸乙酯，在28t:，220rpm下進(jìn)行轉(zhuǎn)化，反應(yīng)26小時(shí)后，GC跟蹤顯示原料已經(jīng)完全轉(zhuǎn)化，隨即進(jìn)行后處理。取出反應(yīng)液，離心，上清液用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層飽和食鹽水洗后分層干燥，減壓出去溶劑，并用柱層析(石油醚乙酸乙酯/3:1)分離純化產(chǎn)物，減壓蒸干溶劑，得到(R)-4-氰基-3-羥基丁酸乙酯。ee值96.3。/0'HNMR(500MHz,CDC13):S4,15(q,2H,J=7.1Hz),3.75(m,2H),3.13(m:1H),2.65(m,2H),1,25(t，3H,J=7.2Hz);13CNMR(75Hz,CDC13):5171.7,117.3,64.2,40.1,25.2,14.4.實(shí)施例11按實(shí)施例2所述方法生產(chǎn)/wewmom'flePhe-E4菌株，濕菌體用磷酸鹽緩沖液(pH7.0)洗滌，之后重新分散到磷酸鹽緩沖液中去，并調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度為12/L，加入10mM的底物4一氰乙酰乙酸乙酯，在28。C，220rpm下進(jìn)行轉(zhuǎn)化，反應(yīng)18小時(shí)后，GC跟蹤顯示原料已經(jīng)完全轉(zhuǎn)化，隨即進(jìn)行后處理。取出反應(yīng)液，離心，上清液用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層飽和食鹽水洗后分層干燥，減壓出去溶劑，并用柱層析(石油醚乙酸乙酯/3:1)分離純化產(chǎn)物，減壓蒸干溶劑，得到(S)-4-氰基-3-羥基丁酸乙酯。ee值94.7%利用上述兩株菌株的培養(yǎng)條件和生物轉(zhuǎn)化工藝，還可應(yīng)用于其他含有13-羰基化合物的不對(duì)稱生物催化中。權(quán)利要求1.一種生物催化法制備4-氰基-3-羥基丁酸乙酯的兩種高光學(xué)活性對(duì)映體的方法，其特征在于，所采用的微生物菌株為KlebsiellapneumoniaePhe-E4或BacilluspumilusPhe-C3；用KlebsiellapneumoniaePhe-E4菌株進(jìn)行生物催化所得到的產(chǎn)物為(S)-4-氰基-3-羥基丁酸乙酯，用BacilluspumilusPhe-C3進(jìn)行生物催化所得的產(chǎn)物為(R)-4-氰基-3-羥基丁酸乙酯。2.如權(quán)利要求1所述的制備4-氰基-3-羥基丁酸乙酯的兩種高光學(xué)活性對(duì)映體的方法，包括以下步驟(1)將權(quán)利要求1中所述的菌株幻e&zW/ap"eMwom'aePhe-E4或S""7/wpwm'/wPhe-C3進(jìn)行平板培養(yǎng)、搖瓶培養(yǎng)、發(fā)酵罐培養(yǎng)，得到的菌液離心獲得濕菌體；(2)將(1)所得的濕菌體分散到磷酸鹽緩沖液中去；(3)將4-氰基乙酰乙酸乙酯加入(2)所述的體系中去反應(yīng)，然后從反應(yīng)體系中收集還原產(chǎn)物。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(1)中的劃板培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基為LB瓊脂培養(yǎng)基，其組成為蛋白胨1%，酵母浸膏0.5%，氯化鈉1.0%,瓊脂1.5%，余量為蒸餾水；pH7.0。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(1)中搖瓶培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基為M9培養(yǎng)基，其組成為Na2HP046.78%。，KH2P043.0%0,NaC10.5%。，NH4C11.0%。，MgSO40.24%。，CaCl20.01%。，余量為蒸餾水；pH為7.4。5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(3)中所述的4-氰基乙酰乙酸乙酯是以4一氯乙酰乙酸乙酯為原料進(jìn)行合成。6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(3)中所用到的細(xì)胞濃度為3-24gcdw/L。7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(4)中反應(yīng)溫度為28°C，反應(yīng)時(shí)間為0.5—70小時(shí)，所用的緩沖液pH為7.0，底物濃度為5-30mM。全文摘要本發(fā)明提供了一種生物催化法制備4-氰基-3-羥基丁酸乙酯的兩種高光學(xué)活性對(duì)映體的方法，該方法采用的微生物菌株為KlebsiellapneumoniaePhe-E4或BacilluspumilusPhe-C3進(jìn)行催化，用KlebsiellapneumoniaePhe-E4菌株進(jìn)行生物催化所得到的產(chǎn)物為(S)-4-氰基-3-羥基丁酸乙酯，用BacilluspumilusPhe-C3進(jìn)行生物催化所得的產(chǎn)物為(R)-4-氰基-3-羥基丁酸乙酯。采用該方法得到的產(chǎn)物底物轉(zhuǎn)化率可達(dá)98％以上，能得到高光學(xué)純度的手性產(chǎn)物，并且反應(yīng)專一性強(qiáng)，副產(chǎn)物少，后處理簡單，具有很好工業(yè)應(yīng)用開發(fā)前景。文檔編號(hào)C12P41/00GK101260415SQ20081003634公開日2008年9月10日申請日期2008年4月21日優(yōu)先權(quán)日2008年4月21日發(fā)明者何春茂,常東亮,杰張申請人:中科院嘉興中心應(yīng)用化學(xué)分中心