專(zhuān)利名稱(chēng)：：一種提高林可霉素產(chǎn)量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于生物
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體地說(shuō)，涉及一種提高林可霉素產(chǎn)量的方法。技術(shù)背景林可霉素(Lincomycin,簡(jiǎn)稱(chēng)LCM)又稱(chēng)潔霉素，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌有很好的作用，它沒(méi)有交叉耐藥性而且本身的毒性較低，所以被廣泛應(yīng)用于由革蘭氏陽(yáng)性菌引起的疾病，同時(shí)，對(duì)革蘭氏陰性菌亦有一定的抑制作用，林可酰胺類(lèi)抗生素已成為臨床應(yīng)用上主要的抗生素之一。因此，對(duì)林可霉素的研究成為了一個(gè)熱點(diǎn)。但國(guó)內(nèi)對(duì)其研究主要集中在菌種選育方面，而國(guó)外同行對(duì)其發(fā)酵過(guò)程的研究主要集中在林可霉素合成途徑的研究上，對(duì)工藝改進(jìn)方面的研究只有培養(yǎng)溫度對(duì)林可霉素產(chǎn)量的影響的報(bào)道，金屬離子對(duì)林可霉素產(chǎn)量的影響尚未見(jiàn)到報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本申請(qǐng)的發(fā)明人在研究提高林可霉素產(chǎn)量的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，向林肯鏈霉菌(5^e;towj;c"http://"co/"e"^;s)的發(fā)酵培養(yǎng)基中加入金屬離子，能提高林可霉素的產(chǎn)量。因此，本發(fā)明的目的在于，提供一種提高林可霉素產(chǎn)量的方法，該方法通過(guò)向林可霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基中加入金屬離子來(lái)實(shí)現(xiàn)。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例，加入的金屬離子為單獨(dú)加入。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例，加入的金屬離子為復(fù)合加入。使用本發(fā)明提供的方法，通過(guò)向林可霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基中加入金屬離子，無(wú)論是加入單獨(dú)的金屬離子(例如Mg^、Fe"和Z^+)，還是加入復(fù)合金屬離子(例如Mo"、Mg2+、Fe3lBZ^+組成的復(fù)合金屬離子)，均能顯著提高林可霉素的生物合成。具體實(shí)施方式以下結(jié)合具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。應(yīng)理解，以下實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而非用于限定本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，如《分子克隆實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)》(NewYork:ColdSpringHarborLaboratoryPress,1989)中所述的條件或生產(chǎn)廠(chǎng)商推薦的條件進(jìn)行。在本發(fā)明的下述實(shí)施例中，使用的林肯鏈霉菌(&r印rowyc^//wco/"em^)已于2008年04月25日提交位于武漢大學(xué)的中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏號(hào)為CCTCCM208064。除特別說(shuō)明外，以下實(shí)施例中所使用的％,%。均為重量比。在本發(fā)明的實(shí)施例中，發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為0.8%(NH4)2S04，0.8%NaN03，0.5%NaCl，0.02%K2HPO4，3%黃豆餅粉，0.2%玉米漿，0.8%CaCO3，5%葡萄糖，pH7.0。在本發(fā)明的實(shí)施例中，林可霉素的效價(jià)采用杯碟法進(jìn)行檢測(cè)，中國(guó)藥典2005版(二部)。實(shí)施例l、添加金屬離子對(duì)林可霉素產(chǎn)量的影響配制林可霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基，并向林可霉素發(fā)酵培養(yǎng)基中分別添加Na2Mo04、CoCl2、MnCl2、MgCl2、FeCl3、FeCl2、ZnCl2、CuCl2，使它們?cè)谙鄳?yīng)的培養(yǎng)基中的重量比濃度分別為0.001%0，0.005%。，0.01%。，0.02%0以及0.05%0，同時(shí)，以不添加金屬離子的林可霉素原始發(fā)酵培養(yǎng)基作為對(duì)照培養(yǎng)基，接入林肯鏈霉菌(5Yrepto/zy^"77'/7co7/7朋w'"發(fā)酵培養(yǎng)168小時(shí)后，取樣測(cè)定林可霉素的效價(jià)，結(jié)果如表l所示。表1、添加金屬離子對(duì)林可霉素產(chǎn)量的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>根據(jù)表l的結(jié)果，在培養(yǎng)基中添加上述金屬離子后，林可霉素的效價(jià)發(fā)生了不同程度的改變，其中，添加0.0010.005%。的MgCb，0.010.05%。的FeCl3或0.0010.005%。的ZnCl2后，林可霉素的效價(jià)獲得提高明顯。實(shí)施例2、復(fù)合添加金屬離子對(duì)林可霉素產(chǎn)量的影響2.1、金屬離子正交試驗(yàn)根據(jù)實(shí)施例1的結(jié)果，選擇Na2Mo04，MgCl2，F(xiàn)eCl3，ZnCl2進(jìn)行復(fù)合金屬離子添加實(shí)驗(yàn)，并分別以它們各自的最適添加濃度為中心點(diǎn)，按照實(shí)施例l的培養(yǎng)方法，作四因素三水平正交試驗(yàn)，考察各金屬離子的交互作用，同時(shí)，以不添加金屬離子的林可霉素原始發(fā)酵培養(yǎng)基作為對(duì)照培養(yǎng)基，培養(yǎng)并檢測(cè)最終培養(yǎng)物中的林可霉素的產(chǎn)量，結(jié)果如表2。表2、正交設(shè)計(jì)組合添加的水平試驗(yàn)表<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>根據(jù)表2的結(jié)果，復(fù)合添加金屬離子可以提高林可霉素的效價(jià)，且相比單一添加金屬離子，復(fù)合添加金屬離子的效果更佳，不同的金屬離子之間具有協(xié)同作用，其濃度范圍為Na2Mo040.0050.015%。，MgCI20.0010.005%。，F(xiàn)eCl30.010.03%o，ZnCl20.0010.005%。，即復(fù)合添加0.0050.015%oMo6+、0.0010.005%oMg2+、0.010.03%。Fe3+、0.0010.005o/ooZn2+。2.2、復(fù)合金屬離子的添加時(shí)間對(duì)林可霉素生物合成的影響配制林可霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基，接入林肯鏈霉菌(5^^to/^CM//"CO/we"^f)發(fā)酵培養(yǎng)，分別于0、12、36、60、84、108、132小時(shí)，向林可霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基中分別加入Na2Mo04、MgCl2、FeCl3禾QZnCl2，使培養(yǎng)基中的Na2Mo04、MgCl2、FeCl3、ZnCl2的重量比濃度分別達(dá)到0.01%。、0.005°/oo、0.03%。、0.005%。，同時(shí)，以不添加金屬離子的林可霉素原始發(fā)酵培養(yǎng)基作為對(duì)照培養(yǎng)基，培養(yǎng)并檢測(cè)最終培養(yǎng)物中的林可霉素的產(chǎn)量，結(jié)果如表3所示。表3、復(fù)合金屬離子的添加時(shí)間對(duì)林可霉素產(chǎn)量的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>根據(jù)表3的結(jié)果，在發(fā)酵前期向發(fā)酵培養(yǎng)基中添加Na2Mo04(0.01%。)，MgCl2(0.005%。)，F(xiàn)eCl3(0.03%。)，ZnCl2(0.005%。)可明顯提高林可霉素的生物合成，優(yōu)選的添加時(shí)間為036小時(shí)。綜上所述，使用本發(fā)明提供的方法，向林可霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基中加入金屬離子，無(wú)論是加入單獨(dú)的金屬離子(例如，單獨(dú)添加Mg2+、Fe"和Zn2+)，還是加入復(fù)合金屬離子(例如，由Mo"、Mg2+、Fe"和Zr^+組成的復(fù)合金屬離子)，發(fā)酵培養(yǎng)林可霉素，均能顯著提高林可霉素的生物合成。權(quán)利要求1.一種提高林可霉素產(chǎn)量的方法，其特征在于，該方法通過(guò)向林可霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基中加入金屬離子來(lái)實(shí)現(xiàn)。2、如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述林可霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為0.8%(NH4)2SO4，0.8%NaNO3，0.5%NaCl，0.02%K2HPO4，3%黃豆餅粉，0.2%玉米漿，0.8%CaCO3，5%葡萄糖，pH7.0。3、如權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于，所述金屬離子為Mg2、所述Mg^的濃度為0.0010.005%0。4、如權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于，所述金屬離子為Fe"，所述F^+的濃度為0.010.05%。。5、如權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于，所述金屬離子為Zn2、所述Zi^+的濃度為0.0010.005%0。6、如權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于，所述金屬離子為復(fù)合金屬離子。7、如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述復(fù)合金屬離子為Mo6+、Mg2+、Fe3+和Zn2+組成的復(fù)合金屬離子，其濃度分別為0.0050.015%oMo6+、0.0010.005%。Mg2+、0.010.03%oFe3+、0.0010.005%oZn2+。8、如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述復(fù)合金屬離子的加入時(shí)間為036小時(shí)。全文摘要本發(fā)明提供了一種提高林可霉素產(chǎn)量的方法，通過(guò)向林可霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基中加入金屬離子來(lái)實(shí)現(xiàn)。使用本發(fā)明提供的方法，向林可霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基中加入金屬離子，無(wú)論是加入單獨(dú)的金屬離子，例如，單獨(dú)添加Mg²⁺、Fe³⁺和Zn²⁺，還是加入復(fù)合金屬離子，例如，由Mo⁶⁺、Mg²⁺、Fe³⁺和Zn²⁺組成的復(fù)合金屬離子，發(fā)酵培養(yǎng)林可霉素，均能顯著提高林可霉素的生物合成。文檔編號(hào)C12P19/64GK101265491SQ200810037079公開(kāi)日2008年9月17日申請(qǐng)日期2008年5月7日優(yōu)先權(quán)日2008年5月7日發(fā)明者史婷婷,葉蕊芳,倩王申請(qǐng)人:華東理工大學(xué)