專利名稱::一種防治甜瓜細(xì)菌性斑點(diǎn)病的菌株及其在田間防病中的應(yīng)用的制作方法一種防治甜瓜細(xì)菌性斑點(diǎn)病的菌林及其在田間防病中的應(yīng)用發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及生物防治領(lǐng)域,具體的說,本發(fā)明涉及一種防治甜瓜細(xì)菌性斑點(diǎn)病的菌4朱及其在田間防病中的應(yīng)用。
背景技術(shù):
:哈密瓜(俗稱甜瓜)是馳名中外的新疆特產(chǎn)之一,在我國甜瓜生產(chǎn)中占有重要地位,在國內(nèi)外都享有較高的聲譽(yù)。但近十余年來,甜瓜細(xì)菌性病害一直是制約新疆甜瓜生產(chǎn)發(fā)展的主要障礙,尤瓜類細(xì)菌性葉斑病(/^ei/c^7朋^STr/^gse/ac力i"j27s/751)禾口纟田菌'I"生果腐病(Jc/t/c^oraxa7e/7ae5"w々57.c/""http:///)成為新疆哈密瓜生產(chǎn)中的嚴(yán)重病害。該病害一般發(fā)病率在30-40%,嚴(yán)重者達(dá)80%,甚至造成全田絕收,特別在6、7月份多雨年份,??稍斐蓺缧該p失。1965年Webb等人首先發(fā)現(xiàn)于美國佛羅里達(dá)州的西瓜上[6]。1978年,Schaad等人首次鑒定了美國佐治亞州的西瓜苗凋萎病病原為類產(chǎn)堿假單胞西瓜亞種(j9e5^i/o^;zao3s/^ewo^/cs//^^/^subsp.citrulliSchaadetal.1978)。1992年,該病原菌即類產(chǎn)堿假單胞西瓜亞種被重新命名為燕麥?zhǔn)伤峋鞴蟻喎N(爿c/fl^raraxaze/^esubsp.citrulli)。1992年才艮才居該病菌的rRNA和DNA—DNA分子雜交結(jié)果,將其更名為JcA/oraraxsubsp.citrulli我國從1987年開始就不斷有報(bào)道國內(nèi)張榮意等人分離到的病菌某些生理生化性狀與標(biāo)準(zhǔn)菌林不一致,他認(rèn)為是不同地區(qū)間菌系的差異造成的;平文祥等人鑒定的病菌為芽孢桿菌,與其他參考文獻(xiàn)均不相同;該病近年來在全國迅速蔓延,2000年8月美國農(nóng)部馬里蘭州疫病雜草科研中心,植物病理專家Norman來新疆昌吉瓜田考察西瓜果腐病發(fā)生情況,西瓜上未釆集到BFB病菌,卻在甜瓜細(xì)菌病葉上采集到BFB病菌,已將此菌林命名為FB-440,并被其收集。2001年,北京的趙廷昌等在內(nèi)蒙古和新疆的哈密瓜上發(fā)現(xiàn)了細(xì)菌性果腐病。2002年新疆、內(nèi)蒙古大面積暴發(fā),張昕等人對哈密瓜細(xì)菌性斑點(diǎn)病病原進(jìn)行了鑒定,認(rèn)為侵染葉片的為丁香々支單月包菌黃瓜至丈病變種(/^ew^6waoas5yr/"^3eiac力r7/ffs/^),而4曼染果實(shí)的病菌為p藍(lán)酉臾菌(aKe刀aesi/6^a"7i7i/7/),^人為可負(fù)fe是細(xì)菌'l"生果腐病病害。目前對瓜類細(xì)菌性病害主要采取種植抗病品種、種子處理和農(nóng)業(yè)防病措施,并輔之以化學(xué)防治的綜防措施。如以廣泛發(fā)生的黃瓜細(xì)菌性角斑病為例,人們通常采用種子處理(所用藥劑一般為曱醛和次氯酸鈉等)、加強(qiáng)田管、清除田園以及生育期采用藥劑預(yù)防保護(hù)等,對于西瓜果腐病菌(Jci&rar^rsubsp.citrulli),1993年Hopkins等對其進(jìn)行了抗性品種選育,發(fā)現(xiàn)供試所有品種均發(fā)病,但感病程度有所不同,因此選用抗性較好的品種進(jìn)行田間栽培是抑制病害發(fā)生的有利手段。勘;Cwcyzza和,t纟erso"(1996)的試驗(yàn)證明種瓜經(jīng)過24-48h的發(fā)酵可將種子帶菌率由61。/。減少到r/。以下。之后用P/。HCL或J7。CaOCL2處理,然后再水洗干燥是消除種子細(xì)菌污染最有效方法,且這種方法不影響種子的發(fā)芽。除HCL和CaOCL2外,其它的種子處理藥劑還有農(nóng)用鏈霉素、科博、升汞、抗菌劑"402"、新植霉粟等。生育期常采用化學(xué)防治與農(nóng)業(yè)手段相結(jié)合的措施,所用殺菌劑主要有農(nóng)用鏈霉素、新植霉素、琥珀肥酸銅、DT、甲霜銅、絡(luò)同等銅制劑。此外據(jù)^^艮道加收米、科博對抑制病害的發(fā)生也有明顯作用。目前,通用的農(nóng)業(yè)防治措施均采取避免大水漫灌,降低田間濕度,增加通風(fēng)透光等手段,創(chuàng)造不利病害發(fā)生的環(huán)境以減輕危害。另據(jù)報(bào)道土壤緊密度對甜瓜根表微生物種群有較大影響,土壤越緊實(shí),熒光假單胞菌的數(shù)量就越高,而細(xì)菌總量并不隨土:t襄緊密度的改變而改變("e&,7byo"a/2"hVz^r5)這為運(yùn)用農(nóng)業(yè)措施防治哈密瓜細(xì)菌性病害開辟了新途徑。Z/w、i7oe;^e/f口n/w/7(1995)報(bào)道,培植促進(jìn)生長的根瘤菌,能向黃瓜引入抗細(xì)菌性角斑病的系統(tǒng)抗性,這方面的工作也可在哈密瓜上試驗(yàn)。Wi^arage,化orar等(1995)運(yùn)用PCR(polymeraseChainReaction)技術(shù)了能觀測定Acidovraxavenaesubsp.citrulli存在的特異性引物和基本實(shí)驗(yàn)?zāi)0濉?000年Walcott和itaitis采用免疫/f茲性分離法和PCR才支術(shù)才企測出西瓜種子中的Acidovraxavenaesubsp.citrulli,這為迅速而準(zhǔn)確地檢測種子是否帶菌、并及早防除侵染源,防止其在田間定植做出了貢獻(xiàn)。2004年,云、羅明等對哈密瓜內(nèi)生細(xì)菌進(jìn)行了分離,明確其種群、分布和數(shù)量動態(tài),從中篩選對瓜類細(xì)菌性葉斑病和細(xì)菌性果腐病菌具有拮抗活性的生防菌林,從而為進(jìn)一步利用內(nèi)生生防菌資源,及開展拮抗菌生防機(jī)制的分子生物學(xué)和遺傳改良等分子生物學(xué)研究奠定重要基礎(chǔ)。目前,在傳統(tǒng)的農(nóng)業(yè)病蟲害防治中,不少人對化學(xué)農(nóng)藥防治農(nóng)作物病蟲害已形成習(xí)慣,雖然起到了一定的防治效果,但其負(fù)面影響日趨嚴(yán)重。隨著主要作物的病蟲危害逐年加重,每年噴施的大量農(nóng)藥既加重了農(nóng)民負(fù)擔(dān),增產(chǎn)不增收,又嚴(yán)重破壞了人類賴以生存的生態(tài)環(huán)境,還造成了食物中農(nóng)藥殘留,危害人類健康。到目前為止,對植物真菌病害生物防治的研究已有許多相關(guān)報(bào)道,但對細(xì)菌性病害的生物防治研究較少,而且目前對甜瓜細(xì)菌性斑點(diǎn)病的生物防治國內(nèi)外研究報(bào)道甚少,因此,以功能微生物為核心的生物防治方法前景廣闊,已經(jīng)成為國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。世界各國提出開發(fā)和使用綠色農(nóng)藥,開展生物防治農(nóng)作物病蟲害,對其進(jìn)行系統(tǒng)而深入的研究,搞清該類病害的病原種類及發(fā)病規(guī)律并尋求安全有效的生物防治措施,對于甜瓜病害的控制,提高其產(chǎn)量和品質(zhì),確保新疆甜瓜生產(chǎn)的高產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。
發(fā)明內(nèi)容針對國內(nèi)外有關(guān)本領(lǐng)域的研究現(xiàn)狀,有關(guān)甜瓜細(xì)菌性斑點(diǎn)病拮抗菌的研究工作剛剛開展,有關(guān)甜瓜細(xì)菌性斑點(diǎn)病拮抗菌的研究報(bào)道甚少。本發(fā)明提供一種防治甜瓜細(xì)菌性斑點(diǎn)病的生防菌林-多粘類芽孢桿菌抹及其在田間防病中的應(yīng)用。所述的多粘類芽孢桿菌防病方法較傳統(tǒng)的化學(xué)防治具有效果好、成本低、使用安全、不污染環(huán)境等特點(diǎn)。針對甜瓜細(xì)菌性病害一直是制約甜瓜生產(chǎn)發(fā)展的主要障礙,為有效控制甜瓜的病害,提高其產(chǎn)量和品質(zhì),甜瓜生產(chǎn)的高產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。本發(fā)明提供的一林甜瓜細(xì)菌性斑點(diǎn)病拮抗菌菌抹,通過在新疆昌吉及吐魯番甜瓜地健康甜瓜植抹根際的土壤樣本分離、篩選和培養(yǎng),獲得一批具有拮抗作用的微生物菌林,從中篩選出一株編號為G-14的菌林,從而提供了一種甜瓜細(xì)菌性斑點(diǎn)病拮抗菌林,其具有穩(wěn)定而顯著的防病效果,經(jīng)微生物學(xué)分類與鑒定,屬于類芽孢桿菌屬的多粘類芽孢桿菌(/^e//^d7/^/7o////xa)。本發(fā)明在獲得的多粘類芽孢桿菌(/^e/7/^c///^po/j^rxa)的基礎(chǔ)上,提供了一種甜瓜細(xì)菌性斑點(diǎn)病的生物防治應(yīng)用方法。本發(fā)明提供了一種甜瓜細(xì)菌性斑點(diǎn)病的生防菌林,命名為G-14,其能夠產(chǎn)生穩(wěn)定而顯著的拮抗作用。該菌抹已于申請日前保藏于布達(dá)佩斯條約微生物國際保藏單位中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)。地址北京市朝陽區(qū)大屯路,中國科學(xué)院微生物研究所,郵編100101。保藏日期是2007年11月12日,保藏號是CGMCC.No2250。經(jīng)微生物學(xué)鑒定為多粘類芽孢桿菌(/^ew'^c///^;w/y/z/j^3)。該菌株生長于改良的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上菌落呈象牙白色、圓形、隆起、無褶皺,邊緣整齊。顯微觀測呈桿狀,中生芽孢,且芽孢橢圓形,孢嚢膨大,革蘭氏染色呈陰性,在7%NaCl中不能生長。其最適生長條件為25°C~28°C、pH6~7。依照第九版《伯杰氏系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)鑒定手冊》(《Aerge7,s他"〃a/5y^e鵬〃c勘"eWo—/c^7〉〉)和《常用細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊》對G-14菌抹進(jìn)行形態(tài)學(xué)測定,生理生化檢測確定G-14菌林為多粘類芽孢桿菌(尸ae/2/^3"7/^中的成員。16SrDNA同源分析、系統(tǒng)發(fā)育分析結(jié)果都表明G-14菌為類芽孢桿菌屬中的成員,屬多粘類芽孢桿菌(/^e/7/^c///^本發(fā)明的甜瓜細(xì)菌性斑點(diǎn)病的生防菌株,其菌學(xué)特性如表1所示。其菌學(xué)特性通過法國梅里埃公司生產(chǎn)的r/7KTW自動鑒定儀測定。其結(jié)果與多粘類芽孢桿菌(尸se/72'&c27/〃s;70/7^^3)相似性達(dá)99%。<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>上述微生物菌種為原始菌林,具有較好的遺傳穩(wěn)定性,通過自然變異或人工誘導(dǎo)變異的菌林也可用作本發(fā)明甜瓜細(xì)菌性斑點(diǎn)病的生物防治。作為上述變異菌林的研制方法,包括物理誘變,如紫外線輻射處理、鈷60輻照處理、離子注入處理、激光輻照等各種射線處理;化學(xué)誘變,如亞硝基胍(NTG)、硫酸二乙酯等化學(xué)誘變劑處理,用常規(guī)果膠酶產(chǎn)生菌分離篩選培養(yǎng)基及方法優(yōu)選出生產(chǎn)性能優(yōu)異的菌抹。另外,也可通過分子生物學(xué)技術(shù),從原始菌抹或誘導(dǎo)變異菌種中獲取抗病基因,以原菌核微生物,如大腸桿菌、枯草芽孢桿菌等、真核微生物,如酵母等,作為基因受體菌,構(gòu)建基因工程生產(chǎn)菌林,也可作為本發(fā)明的甜瓜細(xì)菌性斑點(diǎn)病的生防菌才朱。作為培養(yǎng)基的營養(yǎng)源,可廣泛使用通常用于培養(yǎng)的營養(yǎng)源。只要是可作為碳源同化的碳化合物或者是含有該^灰化合物的,微生物菌種可利用的、適合于發(fā)酵培養(yǎng)的碳源即可,例如,可使用葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、甘露醇、玉米粉、甘油、乙酸鈉、可溶性淀粉等。其用量依據(jù)培養(yǎng)基的成分選擇及培養(yǎng)條件的不同而有所差異。本發(fā)明中優(yōu)選甘露醇、玉米粉、葡萄糖為最優(yōu)碳源。通常,可選擇以下的條件進(jìn)行培養(yǎng)。即,培養(yǎng)溫度為2G37。C,最適培養(yǎng)溫度為25~28°C,培養(yǎng)時(shí)間約為24~48小時(shí),只要在本發(fā)明的抑菌活性達(dá)到最高時(shí)結(jié)束培養(yǎng)即可;培養(yǎng)基的pH可在5~9的生產(chǎn)范圍,特別是在67更適于本發(fā)明的抑菌物質(zhì)的產(chǎn)生。經(jīng)如上所述的培養(yǎng),主要在菌體外(培養(yǎng)液中)產(chǎn)生目的產(chǎn)物的抑菌物質(zhì)。通過本發(fā)明如上的闡述,得到后面實(shí)施例進(jìn)一步的驗(yàn)證,得知本發(fā)明多粘類芽孢桿菌的生物學(xué)特性及其防病效果。本發(fā)明菌株的最適抑菌pH為7左右,在pH6~7范圍內(nèi)可保持較高的抑菌活性;在2037。C范圍內(nèi)均有抑菌活性,其最適作用溫度在2530。C。通過實(shí)施本發(fā)明具體的技術(shù)指標(biāo),實(shí)現(xiàn)本
發(fā)明內(nèi)容,可以達(dá)到以下有益效果。通過試一驗(yàn)表明,本發(fā)明的多粘類芽孢桿菌O^e/^'/^c///^/w/j^/xa)CGMCC.No.2250菌株及在菌學(xué)上來說與其同等的菌抹及其變異菌林,可有效地用于甜瓜細(xì)菌性斑點(diǎn)病的防治,預(yù)防處理對P4、BFB、F159的防治效果分別為60.58°/。、98.23%、57.42%。綜合分析,預(yù)防處理優(yōu)于治療處理。再有,本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于,使用所述菌林進(jìn)行病害的防治安全可靠,不危害人類健康,不污染環(huán)境。圖1:所示為多粘類芽孢桿菌(/^e/2i^c///^,///Z7j^3)平板抑菌試驗(yàn)的圖。圖2:所示為溫度對多粘類芽孢桿菌(Ae/7//^c///^po///ff7")的生長的影響的圖表。圖3:所示為初始pH對多粘類芽孑包桿菌(尸ae/2i'6a"7/t;s/w/jwyxa)的生長和抑菌活性的影響的圖表。下面,舉實(shí)施例說明本發(fā)明,但是,本發(fā)明并不限于下述的實(shí)施例。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1:拮抗菌的初篩方法吸取病原菌稀釋發(fā)酵液lmL(血球計(jì)數(shù)并稀釋至lx1(^個(gè)/mL),不同梯度土壤稀釋液各lmL于滅菌空試管中混勻,然后吸取該混勻液O.1mL于平板中涂布,倒置培養(yǎng)(28。C,48h)觀察有無抑菌圈產(chǎn)生,記錄產(chǎn)圏大小,并挑取產(chǎn)圏單菌落采用平板劃線法進(jìn)行純化,在28。C下培養(yǎng),培養(yǎng)基上長出單菌落時(shí)即為純菌種,將獲得的單菌落接種于改良的斜面培養(yǎng)基上,28。C下培養(yǎng)48h后放入4。C冰箱中保存?zhèn)溆茫瑓⒁姼綀Dl。采用試管混菌平板涂布法,從86份不同的土樣中共計(jì)篩選到195抹產(chǎn)抑菌圈菌株。通過對195個(gè)菌林進(jìn)行初步拮抗作用測定,共得到63抹對細(xì)菌性斑點(diǎn)病有拮抗作用的菌抹,占到分離菌抹總數(shù)的32.4%。按抑菌圈直徑大小將拮抗菌分為強(qiáng)、中、弱三類。從中篩選出對斑點(diǎn)病菌有較強(qiáng)拮抗作用菌林6個(gè),中等作用的菌林29個(gè),其余皆為弱菌株,參見表2。表2拮抗菌對斑點(diǎn)病菌抑菌作用Table2Inhibitoryactivitiesofantagonisticbacteriatobacterialspotpathogen^抑菌作用抑菌直徑/mmSSI<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注(Note)"+++"強(qiáng)(Strong);"+十"中(Middle);"+"弱(Weak);"—"無(Nothing)實(shí)施例2:拮抗菌的復(fù)篩方法選取抑菌距離在10誦以上的菌林,進(jìn)行管碟法復(fù)篩。將病原菌菌懸液(1xl(T個(gè)/mL)吸取0.lmL涂布于平板上,并用滅菌打孔器在平板上打孔,然后將拮抗菌發(fā)酵液(28。C發(fā)酵培養(yǎng)48h)加于打好的孔中,然后放置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(28°C,48h)觀察抑菌圈大小,重復(fù)三次。采用管碟法從分離到的63抹拮抗菌中篩選出了高效而穩(wěn)定的G-14,其拮抗效果參見附圖2。實(shí)施例3:溫度對多粘類芽孢桿菌(戶ae/7/^d7/^;70///7")生長的影響接種G-14至液體基礎(chǔ)培養(yǎng)基,接種量與生長曲線試-瞼相同,分別于20°C,25°C,28°C,30°C,37。C搖床培養(yǎng),轉(zhuǎn)速180r/min,培養(yǎng)至穩(wěn)定期,用UV-2550分光光度計(jì)在600nm波長下測OD值,設(shè)不接菌培養(yǎng)液為對照,重復(fù)多次。通過上述實(shí)施例得知本發(fā)發(fā)明菌抹的最適生長和培養(yǎng)溫度在2037。C范圍內(nèi)均有抑菌活性,其最適作用溫度在2530。C。實(shí)施例4:pH對多粘類芽孢桿菌(尸ae/7/^3C27/〃s/^/jffi^jrs)生長和抑菌活性的影響H離子濃度(以pH表示)直接影響細(xì)菌的酶活性。在一定的pH值環(huán)境中生長最好,稱其為最適pH值。當(dāng)pH值高于或低于一定限度時(shí),就不能生長,這一從最高到最低的范圍,稱為它的pH值適應(yīng)范圍。某種細(xì)菌在其他環(huán)境條件固定時(shí),其生長的pH范圍也是固定的,故可作為一個(gè)鑒定指標(biāo)。用l。/。NaOH或iy。HCl,將基礎(chǔ)培養(yǎng)基初始pH值分別調(diào)節(jié)為3,5,6,7,8,9,11,并用PHS-25C型酸度計(jì)測定其最終pH值。G-14接種量與生長曲線試驗(yàn)相同,28。C搖床180r/min培養(yǎng)至穩(wěn)定期,用UV-2550分光光度計(jì)在6QOnm波長下測0D值,設(shè)不接菌培養(yǎng)液為對照,重復(fù)多次。同時(shí)取不同pH值培養(yǎng)基培養(yǎng)的拮抗菌做抑菌活性試驗(yàn),28。C溫箱中培養(yǎng)48小時(shí),用游標(biāo)卡尺測定拮抗菌抑菌圈直徑,研究初始pH值對拮抗菌抑菌活性的影響。作用pH與抑菌活性的關(guān)系,參見附圖3所示。通過上述實(shí)施例得知本發(fā)發(fā)明菌株的最適生長和抑菌pH為7,在pH6~7范圍內(nèi)可保持較高的抑菌活性。實(shí)施例5:盆栽防病試'驗(yàn)試—瞼溫室盆栽防病試^r試—險(xiǎn)-使用細(xì)菌性斑點(diǎn)病原菌P4、F159和BFB菌才朱,用SPA培養(yǎng)基搖床培養(yǎng),配制成lx1()S個(gè)/mL菌懸液備用。供試盆栽苗使用三葉期的甜瓜盆栽苗,采用人工噴霧接種法進(jìn)行接種。溫室盆栽采用以下兩個(gè)處理方法1.預(yù)防處理先在盆栽甜瓜葉片正面和背面上噴霧接種濃度為lx1()8個(gè)/mL左右的拮抗菌菌懸液或在28。C下180r/min搖床培養(yǎng)2d發(fā)酵液,24h后再噴灑斑點(diǎn)病病原菌菌懸液,然后套袋保濕48h,同時(shí)噴灑清水作為對照,以上每個(gè)處理各5盆,同時(shí)每個(gè)處理設(shè)對照5盆。2.治療處理先在盆栽甜瓜葉片上噴霧接種角斑病病原菌菌懸液;套袋保濕48h初見癥狀后再噴灑濃度為lx108個(gè)/mL左右的拮抗菌菌懸液或28。C下180r/min搖床培養(yǎng)M發(fā)酵液,然后套袋保濕48h,同時(shí)噴灑清水作為對照。以上每個(gè)處理各5盆,同時(shí)每個(gè)處理設(shè)對照5盆。甜瓜細(xì)菌性斑點(diǎn)病發(fā)病情況調(diào)查方法在斑點(diǎn)病發(fā)病穩(wěn)定期時(shí)進(jìn)行病害調(diào)查和統(tǒng)計(jì),纟姿下列甜瓜細(xì)菌性斑點(diǎn)病分級標(biāo)準(zhǔn)調(diào)查記錄,并計(jì)算病情指數(shù)。0級全葉無病;l級有很少小斑,占葉面積115以下;2級少數(shù)小斑,占葉面積的l/5-l/3;3級許多病斑,占葉面積l/3—2/3;4級:許多中等大小病斑,占葉面積2/3以上,細(xì)菌溢量中度;5級全葉發(fā)病,細(xì)菌溢量多,部分病斑干枯,形成穿孔。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>試驗(yàn)結(jié)果見表3。試驗(yàn)結(jié)果表明拮抗細(xì)菌G-14對甜瓜細(xì)菌性斑點(diǎn)病均有顯著的防效。預(yù)防處理對P4、BFB、F159的防治效果分別為60.58%、98.23%、57,42%。綜合分析,預(yù)防處理優(yōu)于治療處理。表3拮抗菌抹G-14的盆栽防病效果<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>實(shí)施例6:為了驗(yàn)證拮抗菌G-14對甜瓜細(xì)菌性斑點(diǎn)病的防病效果,在甜瓜種植季節(jié)采用噴霧接種法進(jìn)行了G-14的防病實(shí)驗(yàn),參見表4。所用品種為雜交皇后,其中該品種肉脆、味香,倍受消費(fèi)者青睞,但該品種抗病性差,易被細(xì)菌性病害浸染,故選該品種易于進(jìn)行效果評價(jià)。所用的拮抗菌G-14液體菌劑為含多粘類芽孢桿菌活菌數(shù)10MVmL。表4生防菌G-14液體菌劑田間防病試驗(yàn)設(shè)計(jì)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>病害調(diào)查采用大田定點(diǎn)法進(jìn)行,每點(diǎn)隨機(jī)定點(diǎn)調(diào)查20抹,三次重復(fù),一周調(diào)查一次,記載每林的發(fā)病情況,計(jì)算其發(fā)病率、病情指數(shù)和防效。發(fā)病葉數(shù)發(fā)病率=_接種總?cè)~數(shù)E發(fā)病級數(shù)x本級葉數(shù)病情指數(shù)=_x100%發(fā)病最重級數(shù)x小區(qū)抽樣總?cè)~數(shù)對照病情指數(shù)-拮抗菌病情指數(shù)防治效果(W=_xio0%對照病情指數(shù)試驗(yàn)結(jié)果見表5。試驗(yàn)結(jié)果表明拮抗細(xì)菌G-14對甜瓜細(xì)菌性斑點(diǎn)病均具有-定的防效。綜合分析,預(yù)防處理優(yōu)于治療處理。表5拮抗菌抹G-14田間防治效果菌株FT^發(fā)病率病指防效發(fā)病率病指防效發(fā)病率病指防效10056.0719.7760.0032.3150.8158.0635.4837.1910063.539.1093.2153.4418.6467.8539.2030.4510069.8910065.6889.8756.49G防理療理預(yù)處治處g權(quán)利要求1、一種多粘類芽孢桿菌(Paenibacilluspolymyxa)CGMCC.No.2250。2、如權(quán)利要求1所述的多粘類芽孢桿菌(Ae/i^d7/^;w/7/ff/xa)CGMCC.No.2250,其特征在于,該菌株的培養(yǎng)溫度為20~37°C,培養(yǎng)時(shí)間約為2448小時(shí),培養(yǎng)基的pH可在5-9的生產(chǎn)范圍內(nèi)適于抑菌物質(zhì)的產(chǎn)生。3、如權(quán)利要求1所述的多粘類芽孢桿菌(/^e/2/^c27/^/w/y/7//xs)CGMCC.No.2250,其特征在于,該菌林的最適培養(yǎng)溫度為25~28°C,培養(yǎng)基的pH可在6-7的生產(chǎn)范圍內(nèi)優(yōu)先適于抑菌物質(zhì)的產(chǎn)生。4、一種利用權(quán)利要求1所述的多粘類芽孢桿菌(/^e/7/^c///^CGMCC.No.2250在治療甜瓜細(xì)菌性斑點(diǎn)病中的應(yīng)用。5、一種利用權(quán)利要求1所述的多粘類芽孢桿菌(/^e/7/^c/〃MpW"y^3)CGMCC.No."50通過自然變異或人工誘導(dǎo)變異的菌林在治療甜瓜細(xì)菌性斑點(diǎn)病生物防治中的應(yīng)用。6、一種利用權(quán)利要求l、4、5中任一種菌種通過常規(guī)分子生物學(xué)技術(shù)獲得的抗病基因,以原菌核微生作為基因受體菌構(gòu)建基因工程生產(chǎn)菌抹在治療甜瓜細(xì)菌性斑點(diǎn)病生物防治中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明公開了一種多粘類芽孢桿菌(Paenibacilluspolymyxa)CGMCC.No.2250的生防菌株及其在治療甜瓜細(xì)菌性斑點(diǎn)病中的應(yīng)用。該發(fā)明提供的菌株及在菌學(xué)上來說與其同等的菌株及其變異菌株,可有效地用于甜瓜細(xì)菌性斑點(diǎn)病的防治,且預(yù)防處理優(yōu)于治療處理。通過使用所述菌株進(jìn)行病害的防治安全可靠,不危害人類健康,不污染環(huán)境,較傳統(tǒng)的化學(xué)防治具有效果好、成本低、使用安全、不污染環(huán)境等特點(diǎn),可廣泛應(yīng)用于工農(nóng)業(yè)的生物防治領(lǐng)域。文檔編號C12N1/20GK101215543SQ200810072810公開日2008年7月9日申請日期2008年1月18日優(yōu)先權(quán)日2008年1月18日發(fā)明者劉文玉,史應(yīng)武,愷婁,王杏琴申請人:新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院微生物應(yīng)用研究所