專利名稱：PCR-mtDNA檢測鵪鶉源性成分的擴增引物及其檢測試劑盒和使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明主要涉及禽類源性成分的檢測，尤其涉及鵪鶉源性成分的檢測。
背景技術(shù)：
瘋牛病、禽流感、羊搔癢病在世界各地的蔓延和傳染給人類的事例，引起了各國政 府和消費者對肉食品、詞料安全性的高度關(guān)注。目前畜禽肉食品的動物源性成分的鑒別 檢測已涉及到肉食品的工業(yè)、進出口貿(mào)易、市場及餐飲業(yè)等領(lǐng)域。同時，國內(nèi)外肉食品 及飼料貿(mào)易市場中的檢驗檢疫工作對高新技術(shù)的需求也越來越迫切。因此，研究出一種 準確、快速、可靠的鑒別畜禽類動物源性成分的方法，就非常有必要。目前，為了確定食物及飼料的真實成分，已經(jīng)開發(fā)了很多對動物源性成分鑒別的方 法，有物理、化學、免疫學和分子生物學等方法。在分子生物學方法中，分子標記技術(shù)以其快速、準確、穩(wěn)定、高效等優(yōu)點顯示出巨 大的開發(fā)潛力和廣闊的應(yīng)用前景。目前在動植物源性成分鑒別檢測中應(yīng)用的分子標記主要包括核DNA 、 RNA、線粒體DNA (mtDNA)、和蛋白質(zhì)分子標記等。PCR分子標記 鑒別檢測技術(shù)，具有特異性高、針對性強、靈敏度高、簡便快速、對檢測樣品要求低(幾 乎所有的樣本都可以作為PCR的材料，它只要求樣本中有完整的靶序列核酸)，因此， 無論是經(jīng)過遠途運輸或低溫保存多年的陳舊樣本，都可以用于PCR擴增。哺乳動物和禽類mtDNA在遺傳上相對獨立，是雙鏈的超螺旋環(huán)狀分子，具有基因 組小(約16kb)、沒有重復(fù)序列、生物個體內(nèi)無組織特異性、每個細胞中含有大量線粒 體基因組(哺乳動物約1000 2300個拷貝)等特點。因此，用mtDNA分子標記鑒別畜 禽肉食品及飼料動物源性成分與核DNA分子標記相比，具有靈敏度高、精確度好、快 速、降解小(加工過程中mtDNA保持較完整)、穩(wěn)定易操作等優(yōu)勢?；趧游飉tDNA 的PCR分子標記技術(shù)的上述特點，因此在動物源性成分鑒別檢測中的應(yīng)用具有廣闊的—"j曰刖景。國外已對牛、綿羊、豬、雞的源性成分進行了研究報道，國內(nèi)對牛、綿羊、豬、雞、驢、馬、鹿屬進行了研究報道。在用分子生物學方法鑒定檢測動物源性成分的研究上， 國內(nèi)外尚未見到對鵪鶉源性成分鑒別檢測的研究報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于避免現(xiàn)有技術(shù)的不足之處而提供一種PCR-mtDNA技術(shù)檢測鵪鶇源性成分的擴增弓l物及其特異性弓l物的擴增條件。本發(fā)明的另一目的是提供一種PCR-mtDNA檢測鵪鶉源性成分的檢測試劑盒。 本發(fā)明的還有一個目的是提供一種PCR-mtDNA檢測鵪鶉源性成分的檢測試劑盒的使用方法。以解決準確、快速、可靠的用PCR-mtDNA技術(shù)鑒別鵪鶉源性成分。 本發(fā)明的目的可以通過采用以下技術(shù)方案來實現(xiàn) 一種用于檢測鵪鶉源性成分的特 異性PCR-mtDNA擴增引物，其主要特點是上下游長度均為18bp的核苷酸，序列如下 上游引物AF(18bp): 5， -TGAGCTCAATAGCCGCCA-3'; 下游引物AR(18bp): 5'-TGGCTTAATGGTTGGGTG-3'。所述的用于檢測鵪鶉源性成分的特異性PCR-mtDNA擴增引物，所述的特異性 PCR-mtDNA擴增引物的擴增條件為94。C預(yù)變性5min， 1個循環(huán)，然后進入PCR循環(huán) 94。C變性30sec， 57。C退火30sec, 72。C延伸20sec，設(shè)計35個循環(huán)，最后72。C延伸8min。所述的用于檢測鵪鶉源性成分的特異性PCR-mtDNA檢測試劑盒，包括有①10X PCR緩沖液，其中含Mg2+20 mmoL/L;②dNTP ，其中2. 5 mmoL/L ;③上游引物AF，其 中25pmoL/L;④下游引物AR，其中25pmoL/L;⑤Taq酶，其中2L)/ML;⑥滅菌超純水； ⑦DNA模板。所述的用于檢測鵪鵓源性成分的特異性PCR-mtDNA檢測試劑盒使用方法，包括有 如下步驟(1) 待檢物DNA的提??；(2) 試劑盒中各組分與待檢物DNA混合，按權(quán)利要求2的條件進行PCR擴增；(3) PCR產(chǎn)物經(jīng)1.5l瓊脂糖凝膠電泳檢測，含有鵪鶉源性成分的檢測物被引物AF+AR 擴增出DNA限制性片段，陽性即為檢測出含有鵪鶉源性成分。所述的用于鵪鶉源性成分檢測的PCR-mtDNA檢測的試劑盒使用方法，所述的待檢 物DNA的提取有如下步驟①稱取0.03g研碎的待檢測物樣品于高壓滅菌后的1.5ml離心管中，加入500pl 細胞裂解液消化；② 加入蛋白酶K10nl，濃度20mg/mi，慢速攪拌使之溶解并混勻，如需要可再次 加入蛋白酶K，置于5(TC水浴中消化過夜，適時混勻多次；③ 將細胞裂解液冷卻至室溫，加入等體積的Tris飽和酚，溫和地轉(zhuǎn)動離心管混勻 兩相，使水相與酚形成乳狀液；④4。C13000rpm/min離心10min，小心從離心機中取出離心管，禁止晃動，可見 有清晰的分層，上層為水相，提取的DNA便在這上層水相中，下層為酚相，一 般為黃色，中間可見有白色的絮狀物為蛋白質(zhì)。用大口的tip頭(用剪刀將lml Tip頭口剪成大于3mm的口，使孔徑變大，以免核酸通過吸頭時發(fā)生機械剪切) 小心吸出上層水相，移至另一干凈離心管中，盡量不要吸出兩相的交界面； 加入RNase (1%) 3 u 1 (1. 5 u 1 /ml)，輕輕混勻37。C水浴lh; 降至室溫后，再加入等體積酚氯仿異戊醇，其比例為25:24:1溫和的混勻 兩相，振蕩2min，形成均勻乳濁液； 重復(fù)步驟 ;⑧加入等體積的氯仿異戊醇，其比例為24:1，使兩相充分混勻繼續(xù)抽提； (9)重復(fù)步驟3); 在水相中加入1/10體積的3M NaAc混勻后，再加入兩倍體積的預(yù)冷的無水乙 醇，棄上清液；0用70%乙醇漂洗1次，13000rpm離心5min，棄上清液，將離心管倒置于滅菌的濾紙上10 15min使乙醇揮，，干燥10 15min; G加入30plTE緩沖液，室溫放置24h，然后4'C保存?zhèn)溆谩１景l(fā)明的有益效果是，近年來隨著數(shù)個國家高致病性禽流感的相繼發(fā)生，除雞以外 已波及到人、天鵝、貓等，因感染禽流感而致死的人數(shù)不斷增加，禽類食品和飼料的安 全性已關(guān)系到人類的安危。因此，研究出準確、快速、可靠的鑒別禽類動物源性成分的 方法和技術(shù)，對有效抵御禽流感及其它禽類疫病的傳播和蔓延，具有重要的現(xiàn)實意義。 本發(fā)明以滅菌超純水對鵪鶉DNA模板進行稀釋，使其濃度分別降低到12ng/ul、 1.2ng/ul 、 120pg/ul、 12pg/ul、 1.2pg/ul、 120fg/ul、 12fg/ul、 1.2fg/ul，然后進行PCR 擴增。由PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果可知，能檢測到的最低濃度為120pg/ul,即該引物的靈敏度 是120pg/ul。


-圖l為鵪鶉、含鵪鶉源性成分的飼料、鴣子、雞、鴨、鵝、鴕鳥、鷓鴣、牛、羊、; DNA; :2、鵪鵓；3、含鵪鵓源性成分的飼料；4、鵒；5、 雞；6、鴨；7、鵝；8、鴕鳥；9、鷓鴣；10、牛；11、羊；12、馬；13、驢 14、魚；15、空白對照；圖4鵪鶴特異性PCR靈敏度驗證結(jié)果檢測電泳圖。
具體實施例方式以下對所示之最佳實施例作進一步詳述實施例1:對鵪鵓、含鵪鵓源性成分的飼料、鵒、雞、鴨、鵝、鴕鳥、鷓鴣、牛、羊、馬、驢、魚動物的的檢測驗證實驗。其編號為l、 2kbMarker; DNA; :2、鵪鶉；3、含鵪享鳥源性成分的飼料；4、鵒；5、雞；6、鴨；7、鵝；8、鴕鳥；9、鷓鴣；10、牛；II、羊；12、馬；13、驢14、魚；15、空白對照。(1) 總DNA的提取采用酚氯仿抽提法，提取鵪鶉、含鵪鶉源性成分的詞料、鴿、雞、鴨、鵝、鴕鳥、鷓鴣、牛、羊、馬、驢、魚動物的基因組DNA，電泳檢測結(jié)果如圖1。提取基因組DNA 均經(jīng)紫外分光光度計測定其純度和濃度。測定OD260/OD280值均為1.8左右，說明DNA 純度較高符合PCR擴增要求。(2) PCR-mtDNA特異性引物的設(shè)計比較GenBank中公布的各種動物線粒體基因序列，依據(jù)其物種保守序列設(shè)計出鑒別 檢測鵪鶉源性成分的PCR特異性引物(只能擴增出鵪鶉DNA特異性片段，而擴增不出 其它動物DNA特異性片段)，引物如下上游引物AF(18bp): 5， -TGAGCTCAATAGCCGCCA-3'下游弓l物AR(18bp): 5'-TGGCTTAATGGTTGGGTG陽3'擴增序列長度為245 bp。(3) 鵪鶇PCR擴增利用設(shè)計的特異性引物AF和AR，以鵪鶉為模板進行PCR擴增。(3. 1) PCR反應(yīng)體系 滅菌超純水 18.5W; 10XPCR緩沖液(含Mg"20鵬oL/L) 2.5|4;70. 5W;上游引物AF (25pmoL/L) l.OW;下游引物AR (25pmoL/L) 1. 0ri;Taq酶(2UAC) 0. 5|4;滅菌超純水 18.5W; DNA模板 1.014。 反應(yīng)總體積為25. (3.2) PCR反應(yīng)條件擴增條件為94'C預(yù)變性5min， 1個循環(huán)，然后進入PCR循環(huán)94'C變性30sec, 57 。C退火30sec， 72。C延伸20sec，設(shè)計35個循環(huán)，最后72。C延伸8min。擴增產(chǎn)物電泳結(jié)果如圖2，可以看出，擴增出約245bp的DNA片段，與預(yù)期擴增的 片段長度相符。原理1) 模板DNA的變性模板DNA經(jīng)加熱至94。C5min后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴 增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)做準備；2) 模板DNA與引物的復(fù)性模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至57'C，引物 模板DNA單鏈的互補序列配對結(jié)合；3) 引物的延伸DNA模板-引物結(jié)合物在Taq DNA聚合酶的作用下，以dNTP為反 應(yīng)原料，耙序列DNA序列為模板，按堿基配對與半保留復(fù)制原理，合成一條新的與模板 DNA鏈互補的半保留復(fù)制鏈，重復(fù)循環(huán)變性-復(fù)性-延伸三個過程，就可獲得更多的"半 保留復(fù)制鏈"，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。(4) 引物的特異性驗證 利用所設(shè)計鑒別檢測鵪鶉源性成分的特異性引物AF和AR，分別以鵪鶉，含鵪鶉源性成分的飼料，鵒，雞，鴨，鵝，鴕鳥，鷓鴣，牛，羊，馬，驢、魚的DNA為模板進 行PCR擴增，驗證引物的特異性。PGR產(chǎn)物電泳結(jié)果見(圖3)，該引物能夠從鵪享鳥及 含有鵪鶉成分的詞料樣品的DNA中擴增出特異性的目的條帶，擴增產(chǎn)物大小為245bp， 而從其它動物組織的DNA中均沒有能夠擴增出目的條帶。(5) 擴增鵪鴉DNA產(chǎn)物測序序列將鵪鶉PCR擴增產(chǎn)物進行純化后送測序公司測序。測序結(jié)果經(jīng)與GENEBANK比對分析 表明:PCR特異性擴增產(chǎn)物的測序結(jié)果與鵪鶉的線粒體DNA的12sRNA基因區(qū)段完全一致， 同源性為100%。鵪鵓PCR產(chǎn)物測序序列結(jié)果tgagctcaat agccgccact aataagacag gtcaaggtat agcctatggg atggaagaaa 60 tgggctacat tttctaaaat agaacaaacg aaaaaggaca tgaaacctgg tccttggaag 120 gaggatttag cagtaaaatg ggatcacttt gcccacttta agatggccct gaggcacgta 180 cataccgccc gtcaccctct tcaaaagcta ctaataccga taaataacac ccaaccatta 240 agcca 245 (6)特異性PCR的靈敏度驗證以滅菌超純水對鵪鶉DNA模板進行稀釋，使其濃度分別降低到12ng/ul、 1. 2ng/ul 、 120pg/ul、 12pg/ul、 1.2pg/ul、 120fg/ul、 12fg/ul、 1.2fg/ul，然后進行PCR 擴增。由PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果圖(圖4)可知，能檢測到的最低線為120pg/ul，即該引物 的靈敏度是120pg/ul。實施例2:對含有鵪鶉源性成分的飼料的PCR檢測方法(一)提取DNA:采用酚氯仿抽提法(參照"分子克隆試驗指南(第二版).北京科學出版 社，1995:34 60")① 稱取0.03g研碎的待檢測物樣品于高壓滅菌后的1.5ml離心管中，加入500W 細胞裂解液消化；② 加入蛋白酶K(20mg/m1)1(^1，慢速攪拌使之溶解并混勻，如需要可再次加入蛋 白酶K，置于5(TC水浴中消化過夜，適時混勻多次；③ 將細胞裂解液冷卻至室溫，加入等體積的Tris飽和酚，溫和地轉(zhuǎn)動離心管混勻 兩相，使水相與酚形成乳狀液； 4°C13000rpm/min離心10min，小心從離心機中取出離心管，禁止晃動，可見 有清晰的分層，上層為水相，提取的DNA便在這上層水相中，下層為酚相，一 般為黃色，中間可見有白色的絮狀物為蛋白質(zhì)。用大口的tip頭(用剪刀將lml Tip頭口剪成大于3誦的口，使孔徑變大，以免核酸通過吸頭時發(fā)生機械剪切) 小心吸出上層水相，移至另一干凈離心管中，盡量不要吸出兩相的交界面；⑤加入RNase(l。/。)3u 1 (1.5ul/ml)，輕輕混勻37'C水浴lh; 降至室溫后，再加入等體積酚氯仿異戊醇(25:24:1)溫和的混勻兩相，振 蕩2min，形成均勻乳濁液；0重復(fù)步驟(D;⑧加入等體積的氯仿異戊醇(24:1)，使兩相充分混勻繼續(xù)抽提；9@重復(fù)步驟@;t9在水相中加入1/10體積的3MNaAc混勻后，再加入兩倍體積的預(yù)冷的無水乙醇， 棄上清液；0用70%乙醇漂洗1次，13000rpm離心5rain，棄上清液，將離心管倒置于滅菌的濾紙上10 15min使乙醇揮發(fā)，干燥10 15min; g加入3(M TE緩沖液，室溫放置24h，然后4'C保存?zhèn)溆谩?二) 引物合成將上游引物AF(18bp): 5， -TGAGCTCAATAGCCGCCA-3';下游引物AR(18bp): 5'-TGGCTTAATGGTTGGGTG-3'合成，每條引物各20D ，用時稀釋到25pmoI/L(三) PGR擴增PCR反應(yīng)試劑盒10XPCR緩沖液(含Mg2+20 mmoL/L)2. 5[4d麼(2. 5勵L/L)0. 5rtAF (25pmoL/L)l潛lAR (25pmoL/L)l潛lT叫酶(2U/ML)0. 514DNA模板加滅菌超純水至25W。將試劑盒中各組分與待檢物DNA混合。 PCR反應(yīng)條件94。C預(yù)變性5min， 1個循環(huán)，然后進入PCR循環(huán)94。C變性30sec， 57。C退 火30sec， 72。C延伸20sec，設(shè)計35個循環(huán)，最后72。C延伸8min。(四) 電泳檢測PCR產(chǎn)物經(jīng)1. 5%瓊脂糖凝膠電泳檢測。PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果見(圖3)(五) 檢測結(jié)果含有鵪鶉源性成分的檢測物會被引物AF+AR擴增出DNA特異性片段，即陽性。 實施例3:基因組DNA的提取試劑的制備(1)細胞裂解液的制備① 1M Tris-HCl 250mL:稱30. 285gTris，加水定容至250mL，加HC1調(diào)解pH至8. 0，高壓滅菌，4。C保存。② 0. 5mol/L EDTA:在lOOmL雙蒸水中加入37. 22g EDTA-Na2. 2H20，劇烈攪拌，用NaOH調(diào)節(jié)pH至8. 0 (約需4gNaOH)，定容至200 mL，分裝后高壓滅菌，4。C保存。 ③10% (m/v) SDS:將10g SDS溶于90mL雙蒸水中，加熱至68°C (助溶幾滴濃HC1, pH=7. 2)，加水定 容至100mL，分裝備用，室溫保存，無須滅菌。取lmol/L的Tris-HC1 (pH8. 0) 2mL、0. 5mol/L的EDTA (pH8. 0)40mL、 10% (m/v)的SDS 10mL，加滅菌雙蒸水定容至200mL。(2) 20mg/ml蛋白酶K的制備100mg蛋白酶K溶于5ml滅菌雙蒸水，-20 。C保存。(3) 氯仿異戊醇(24:1):將氯仿、異戊醇按24: l的體積混合，置棕色瓶中4'C保 存。(4) 苯酚氯仿異戊醇(25: 24: 1):按25:24:1的體積將苯酚、氯仿、異戊醇 混合，置棕色瓶中保存于4'C。(5) 3M NaAc的制備稱取40.8gNaAc.3H20，溶解，加水至100mL。高壓滅菌15rain ， 4。C保存。(6) 10mg/ml RNase A的制備稱取RNase A lOmg溶于10mmol/L Tris-HC1 (pH7. 5)、 15mmol/L NaCl中于IO(TC加熱煮沸15min滅活DNase，緩慢冷卻至室溫，分 裝成小份保存于一20'C。如為Sigma公司產(chǎn)品， 一般則不需加熱煮沸。序歹U 表〈110〉深圳出入境檢驗檢疫局動植物檢驗檢疫技術(shù)中心〈120〉 PCR-mtDNA檢測鵪鵓源性成分的擴增引物及其檢測試劑盒和使用方法 〈211〉 245bp 〈212〉腿 〈400〉tgagctcaat agccgccact aataagacag gtcaaggtat agcctatggg atggaagaaa 60 tgggctacat tttctaaaat agaacaaacg aaaaaggaca tgaaacctgg tccttggaag 120gaggatttag cagtaaaatg ggatcacttt gcccacttta agatggccct gaggcacgta 180cataccgccc gtcaccctct tcaaaagcta ctaataccga taaataacac ccaaccatta 240 agcca 24權(quán)利要求
1.一種用于檢測鵪鶉源性成分的特異性PCR-mtDNA擴增引物，其特征是上下游長度均為18bp的核苷酸，序列如下上游引物AF(18bp)5，-TGAGCTCAATAGCCGCCA-3′；下游引物AR(18bp)5′-TGGCTTAATGGTTGGGTG-3′。
2. 如權(quán)利要求1所述的用于檢測鵪鶉源性成分的特異性PCR-mtDNA擴增引物，其特 征是所述的特異性PCR擴增引物的擴增條件為94'C預(yù)變性5min， 1個循環(huán)，然后 進入PCR循環(huán)94。C變性30sec， 57。C退火30sec， 72。C延伸20sec,設(shè)計35個循 環(huán)，最后72"C延伸8min。
3. 如權(quán)利要求l所述的用于檢觀鵬鶉源性成分的特異性PCR-mtDNA檢湖IJ試劑盒，其特征是包括有①10XPCR緩沖液，其中含Mg2+20咖oL/L;②dNTP ，其中2. 5 mmoL/L ; ③上游引物AF，其中25praoL/L;④下游引物AR，其中25pmoL/L;⑤Taq酶，其 中21)/|^;⑥滅菌超純水；⑦DNA模板。
4. 如權(quán)利要求3所述的用于檢測鵪鶉源性成分的特異性PCR-mtDNA檢測試劑盒使用方 法，其特征是包括有如下步驟(1) 待檢物DNA的提??；(2) 試劑盒中各組分與待檢物DNA混合，按權(quán)利要求2的條件進行PCR擴增；(3) PCR產(chǎn)物經(jīng)1.5y。瓊脂糖凝膠電泳檢測，含有鵪鶉源性成分的檢測物被引物AF+AR 擴增出DNA特異性片段，陽性即為檢測出含有鵪鵓源性成分。
5. 如權(quán)利要求4所述的用于鵪鶉源性成分檢測的PCR-mtDNA檢測的試劑盒使用方法，其特征是所述的待檢物DNA的提取有如下步驟① 稱取0.03g研碎的待檢測物樣品于高壓滅菌后的1.5ml離心管中，加入50(^1細胞 裂解液消化； '② 加入蛋白酶K10W，濃度20mg/ml，慢速攪拌使之溶解并混勻，如需要可再次加 入蛋白酶K，置于5(TC水浴中消化過夜，適時混勻多次；③ 將細胞裂解液冷卻至室溫，加入等體積的Tris飽和酚，溫和地轉(zhuǎn)動離心管混勻兩 相，使水相與酚形成乳狀液；④ 4'C13000rpm/min離心10min，從離心機中取出離心管，禁止晃動，見有清晰分層， 上層為水相，提取的DNA便在這上層水相中，下層為酚相， 一般為黃色，中間有白色的絮狀物為蛋白質(zhì)；用大口的tip頭吸出上層水相，移至另一千凈離心管中，盡 量不要吸出兩相的交界面； 加入RNase3 u 1 ，濃度1. 5 u 1 /ml，混勻37。C水浴lh;(B)降至室溫后，再加入等體積酚氯仿異戊醇，其比例為25:24:1，溫和的混勻 兩相，振蕩2min，形成均勻乳濁液；ro重復(fù)步驟④；⑧加入等體積的氯仿異戊醇，其比例為24:1，使兩相充分混勻繼續(xù)抽提； Q)重復(fù)步驟④；③在水相中加入1/10體積的3M醋酸鈉混勻后,再加入兩倍體積的預(yù)冷的無水乙醇， 棄上清液；0用70%乙醇漂洗1次，13000rpm離心5min，棄上清液，將離心管倒置于滅菌的 濾紙上10 15min使乙醇揮發(fā)，干燥10 15min; (2加入30WTE緩沖液，室溫放置24h，然后4。C保存?zhèn)溆谩?br> 全文摘要
本發(fā)明主要涉及禽類源性成分的檢測，尤其涉及鵪鶉源性成分的檢測。一種用于檢測鵪鶉源性成分的特異性PCR-mtDNA擴增引物，其主要特點是上下游長度均為18bp的核苷酸，序列為上游引物AF(18bp)5，-TGAGCTCAATAGCCGCCA-3′；下游引物AR(18bp)5′-TGGCTTAATGGTTGGGTG-3′。本發(fā)明的優(yōu)點是，準確、快速、可靠的鑒別鵪鶉源性成分的方法和技術(shù)，對有效抵御禽流感及其它禽類疫病的傳播和蔓延，具有重要的現(xiàn)實意義。本發(fā)明以滅菌超純水對鵪鶉DNA模板進行稀釋，使其濃度分別降低到12ng/ul、1.2ng/ul、120pg/ul、12pg/ul、1.2pg/ul、120fg/ul、12fg/ul、1.2fg/ul，然后進行PCR擴增。由PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果可知，能檢測到的最低濃度為120pg/ul，即該引物的靈敏度是120pg/ul。
文檔編號C12Q1/68GK101260438SQ20081008240
公開日2008年9月10日 申請日期2008年3月3日 優(yōu)先權(quán)日2008年3月3日
發(fā)明者吳建平, 卉 宗, 張利平, 張慧霞, 李麗娟, 阮周曦, 虹 陶 申請人:深圳出入境檢驗檢疫局動植物檢驗檢疫技術(shù)中心