專利名稱：改良羅氏快速培養(yǎng)基及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種改良羅氏快速培養(yǎng)基，還涉及一種培養(yǎng)基的制 備方法。
技術(shù)背景目前我國普遍使用一種被稱之為"羅氏培養(yǎng)基"的固體結(jié)核菌 培養(yǎng)基來對結(jié)核菌進(jìn)行體外人工分離培養(yǎng)，這些記載在福州部隊總醫(yī)院編、朱忠勇、陳之航主編、上?？茖W(xué)技術(shù)出版社1978年4月 出版的《臨床醫(yī)學(xué)檢驗》第454頁上。由于現(xiàn)有的固體結(jié)核菌培養(yǎng) 基均是靠各醫(yī)院去配制而無現(xiàn)成產(chǎn)品可購，這就需要院方單獨(dú)為此 添置一套相應(yīng)的生產(chǎn)設(shè)備，既加大了醫(yī)院的設(shè)備開支，又相應(yīng)增加 了配制工作量。經(jīng)檢索中國專利，專利申請?zhí)?8 1 10068其技術(shù) 方案是由基礎(chǔ)物質(zhì)、能量物質(zhì)、植物生長刺激物質(zhì)混合配制而成， 基礎(chǔ)物質(zhì)中有磷酸二氫鉀、硫酸鎂(MgS0 。
7HZo )、構(gòu)榜酸鎂、 檸檬酸鐵按、天門冬酞胺、中性甘油、馬鈴薯粉、新鮮雞蛋液、2 % 孔雀綠水溶液、水、動物血清，能量物質(zhì)中有輔酶A 、三磷酸腺昔、 細(xì)胞色素丙，植物生長刺激物質(zhì)中有Q—蔡乙酸，每1000克結(jié)核 菌快速培養(yǎng)基中各組分的含量為磷酸二氫鉀1.36 1.4克、新鮮 雞蛋液560 600克、硫酸鎂0. 136 0. 14克2 %孔雀綠水溶液 11 13克構(gòu)榜酸鎂0.3 0.4克水300 340克檸檬酸鐵錢 0.028 0.03克動物血清56 60克天門冬酞胺2.06 2. 1克輔 酶A0.4 0.8克中性甘油6 8克三磷酸腺昔0.04 0. 08克馬鈴薯粉17 17. 5克細(xì)胞色素丙0. 045 0. 075克。 一蔡乙酸0. 05 0. 1毫克。其步驟是A、制糊將17 17. 5克的馬鈴薯粉加150 170克水后，置于沸水浴中加熱，時加攪拌，使成均勻糊狀，自然降 至室溫后備用；B、混合調(diào)配將1.36 1.4克的磷酸二氫鉀、 0. 136 0. 14克的硫酸鎂、0.3 0.4克的構(gòu)棟酸鎂、0. 028 0. 03克 的檸檬酸鐵錢、2.06 2. 1克的天門冬酞胺、6 8克的中性甘油加 150 170克水后，置于沸水浴中加熱溶解，待冷至50 。C以下時， 加入560 600克的新鮮雞蛋液、56 60克的動物血清、0. 4 0. 8 克的輔酶A、 0.04 0.08克的三磷酸腺昔、0.045 0.075克細(xì)胞 色素丙、0.05 0. 1毫克的Q —蔡乙酸，充分?jǐn)嚢杈鶆蚝?，再加?167 187.5克的馬鈴薯粉及11 一 13克的2 %孔雀綠水溶液， 并經(jīng)充分?jǐn)噭蚝蟮?000克混合物；C 、分裝及密封；將混合物分 裝于大試管中，每管分裝5克，置成長斜面后，熔封；D 、滅菌； 采用血清凝固器對大試管進(jìn)行滅菌，滅菌條件為頭日，85 °C ， 30分鐘；次日，80°C ， 30分鐘；第三是，80 。C ， 30分鐘。 由以上所述可知，固體結(jié)核菌培養(yǎng)基的現(xiàn)有配制過程較為復(fù)雜和麻 煩，故醫(yī)院只能根據(jù)近期內(nèi)固體結(jié)核菌培養(yǎng)基的大致用量予先配制 一些備用，但是，全國幾千家醫(yī)院各自分散配制的固體結(jié)核菌培養(yǎng) 基，均存在著質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不一致、成品率不高、不易長期貯存及貯存 期稍長因水份散失、藥物分解而使檢測結(jié)果不準(zhǔn)的缺陷。臨床檢測是發(fā)現(xiàn)現(xiàn)有的結(jié)核菌培養(yǎng)基存在以下缺陷1 、由于現(xiàn)有的固體結(jié) 核培養(yǎng)基保藏在大試管中，管口用橡皮塞塞緊，故該培養(yǎng)基被密封的程度較差，其內(nèi)的水份易散失，以至該培養(yǎng)基的貯藏期很短(僅3個月)，這樣便不能通過工業(yè)化生產(chǎn)手其培養(yǎng)基中需有多種營養(yǎng)物 質(zhì)，而如上所述可知，現(xiàn)有的固體結(jié)核菌培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)的種類 少，另外其內(nèi)也沒有能加快結(jié)核菌新陳代謝活動以提高結(jié)核菌生長 繁殖速度的能量物質(zhì)和植物生長刺激物質(zhì)，這樣使得結(jié)核菌在現(xiàn)有 的固體結(jié)核菌培養(yǎng)基中不能進(jìn)行很好地生長繁殖，分裂周期長達(dá)12 16小時，要4 6周方能看到菌落。3 、有些液體培養(yǎng)基配方 復(fù)雜，方法繁瑣，羅氏培養(yǎng)基需35天。因此，使用現(xiàn)有的結(jié)核菌 培養(yǎng)基來對結(jié)核菌進(jìn)行體外人工分離培養(yǎng)時，其檢測速度相當(dāng)慢， 陽性檢出率低，不利于結(jié)核病的早期診斷和治療。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種簡單，實現(xiàn)快速培養(yǎng)結(jié)核桿菌培養(yǎng) 基，解決了臨床早期診斷及有效地治療的問題。本發(fā)明的另一目的是提供了一種方法易行，操作方便的一種改 良羅氏快速培養(yǎng)基的制備方法。為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)措施一種改良羅氏快速培養(yǎng)基，它由下述重量配比的原料制成的培 養(yǎng)基磷酸二氫鉀(無水)0.96g，天門冬素(天門冬酰胺)0.27g， 枸櫞酸0.21g，硫酸鎂(MgS04、 7H20) 0.084g，純甘油(中性) 4. 2ml， 2. 4 — 二氯苯氧乙酸鈉0. lg， 6 —糠氨基嘌呤 0. lg，蒸餾水120 ml，馬鈴薯粉0. 6g，新鮮雞蛋3-4個，10g/L的孔 雀綠溶液8 ml。一種改良羅氏快速培養(yǎng)基的制備方法，該方法包括下列步驟A、 將"磷酸二氫鉀(無水)0.96g，天門冬素(天門冬酰胺) 0. 27g,枸櫞酸鎂0. 21g，硫酸鎂(MgS04、 7H20)0. 084g，純甘油(中 性4. 2ml， 2. 4 — 二氯苯氧乙酸鈉0. lg， 6 —糠氨基嘌呤 0. lg和蒸餾水120ml，"的各成份混合，置沸水中加熱溶解；B、 加入馬鈴薯粉，邊加邊攪拌，注意勿結(jié)成塊，并繼續(xù)在沸水 浴中加熱半小時，時加攪拌；C、 待冷至65'C時加入全蛋液200ml及10g/L孔雀綠溶液8ml，充 分混勻。D、 分裝無菌試管，每管約5 6ml，塞上塞；E、 置血清凝固器內(nèi)制成斜面，經(jīng)90。C1小時或高壓(103. 43kpa)，滅菌20分鐘后，再作無菌試驗后備用。一種改良羅氏快速培養(yǎng)基，所述的本培養(yǎng)基ra為6. 0左右；一種改良羅氏快速培養(yǎng)基的使用方法，該方法包括下列步驟把前處理好的標(biāo)本直接接種2 3滴，蓋滿斜面，經(jīng)37。C培養(yǎng)，每天觀查生長情況。約二 三天就可見到針尖樣細(xì)小菌落，六 七天就可見到成形菌落，七 十四天就可見到豐滿的菌落。即可做菌型鑒定和藥敏試驗。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點和效果，配方合理，方 法易行，操作方便，檢測快速、準(zhǔn)確可靠，價格低廉，通過臨床實 驗證明，尤其適用于基層醫(yī)院，具有良好的社會和經(jīng)濟(jì)效益。
具體實施方式
一種改良羅氏快速培養(yǎng)基，它由下述重量配比的原料制成的培養(yǎng)基磷酸二氫鉀(無水)0.96g，天門冬素(天門冬酰胺)0.27g， 枸櫞酸鎂0.21g，硫酸鎂(MgS04、 7H20) 0.084g，純甘油(中性) 4.2ml，2.4—二氯苯氧乙酸鈉0. lg，6—糠氨基嘌呤0. lg，蒸餾水 120 ml，馬鈴薯粉0. 6g，新鮮雞3-4個，10g/L的孔雀綠溶液8 ml; 一種改良羅氏快速培養(yǎng)基的制備方法，該方法包括下列步驟A、 將"磷酸二氫鉀(無水)0.96g，天門冬素(天門冬酰胺) 0.27g，枸櫞酸鎂0. 21g，硫酸鎂(MgS04、 7H20) 0. 084g，純甘油(中性)4. 2ml， 2. 4—二氯苯氧乙酸鈉O. lg， 6—糠氨基嘌吟 0. lg和蒸餾水120ml"的各成分混合，置沸水中加熱溶解；B、 加入馬鈴薯粉，邊加邊攪拌，注意勿結(jié)成塊，并繼續(xù)在沸水 浴中加熱半小時，時加攪拌；C、 待冷至65。C時加入全蛋液200ml及10g/L孔雀綠溶液8ml，充 分混勻。D、 分裝無菌試管，每管約5 6ml，塞上塞；E、 置血清凝固器內(nèi)制成斜面，經(jīng)9(TC1小時或高壓(103. 43kpa)，滅菌20分鐘后，再作無菌試驗后備用。一種改良羅氏快速培養(yǎng)基，所述的本培養(yǎng)基PH為6. 0左右；一種改良羅氏快速培養(yǎng)基的使用方法，該方法包括下列步驟把前處理好的標(biāo)本直接接種2 3滴，蓋滿斜面，經(jīng)37"C培養(yǎng)，每天觀査生長情況。約二 三天就可見到針尖樣細(xì)小菌落，六 七天就可見 到成形菌落，七 十四天就可見到豐滿的菌落。即可做菌型鑒定和 藥敏試驗。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點和效果，配方合理，方 法易行，操作方便，檢測快速、準(zhǔn)確可靠，價格低廉，通過臨床實 驗證明，尤其適用于基層醫(yī)院，具有良好的社會和經(jīng)濟(jì)效益。
權(quán)利要求
1. 一種改良羅氏快速培養(yǎng)基，其特征在于它由下述重量配比的原料制成的培養(yǎng)基磷酸二氫鉀(無水)0.96g，天門冬素(天門冬酰胺)0.27g，枸櫞酸鎂0.21g，硫酸鎂(MgSO4、7H2O)0.084g，純甘油(中性)4.2ml，2.4-二氯苯氧乙酸鈉0.1g，6-糠氨基嘌呤0.1g，蒸餾水120ml，馬鈴薯粉0.6g，新鮮雞蛋3-4個，10g/L的孔雀綠溶液8ml。
2 、一種實現(xiàn)權(quán)利要求1所述的一種改良羅氏快速培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于該方法包括下列步驟A、 將"磷酸二氫鉀(無水)0.96g,天門冬素(天門冬酰胺) 0. 27g，枸櫞酸鎂0. 21g，硫酸鎂(MgS04、 7H20) 0. 084g，純甘油(中 性4. 2ml， 2. 4 — 二氯苯氧乙酸鈉0. lg， 6 —糠氨基嘌呤 0.1g和蒸餾水120 ml"的各成份混合，置沸水中加熱溶解；B、 加入馬鈴薯粉，邊加邊攪拌，注意勿結(jié)成塊，并繼續(xù)在沸水 浴中加熱半小時，時加攪拌；C、 待冷至65r時加入全蛋液200ml及10g/L孔雀綠溶液8ml，充分混勻；D、 分裝無菌試管，每管約5 6ml，塞上塞；E、 置血清凝固器內(nèi)制成斜面，經(jīng)9(TC1小時或高壓(103. 43kpa)， 滅菌20分鐘后，再作無菌試驗后備用。
3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種改良羅氏快速培養(yǎng)基，其特征在于所述的本培養(yǎng)基ra為6. 0左右。
4、 一種實現(xiàn)權(quán)利要求1所述的一種改良羅氏快速培養(yǎng)基的方法，其特征在于該方法包括下列步驟把前處理好的標(biāo)本直接接種2 3滴，蓋滿斜面，經(jīng)37'C培養(yǎng)，每天觀査生長情況。約二 三天就可見到針尖樣細(xì)小菌落，六 七天就可見到成形菌落，七 十四天 就可見到豐滿的菌落。即可做菌型鑒定和藥敏試驗。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種改良羅氏快速培養(yǎng)基及其制備方法一、由下述原料制成的培養(yǎng)基基礎(chǔ)液(磷酸二氫鉀，天門冬素，枸櫞酸鎂，硫酸鎂，純甘油，2.4-二氯苯氧乙酸鈉，6-糠氨基嘌呤和蒸餾水)、馬鈴薯粉、新鮮雞蛋和孔雀綠溶液。二、培養(yǎng)基的制備方法，該方法包括下列步驟A、將“基礎(chǔ)液”的各成份混合，置沸水中加熱溶解；B、加入馬鈴薯粉，邊加邊攪拌，注意勿結(jié)成塊，并繼續(xù)在沸水浴中加熱半小時，時加攪拌；C、待冷至65℃時加入全蛋液及孔雀綠溶液，充分混勻；D、用無菌試管分裝，塞上塞；E、置血清凝固器內(nèi)制成斜面，經(jīng)90℃1小時或高壓20分鐘，滅菌，再作無菌試驗后備用。
文檔編號C12Q1/04GK101280337SQ20081009981
公開日2008年10月8日 申請日期2008年5月25日 優(yōu)先權(quán)日2008年5月25日
發(fā)明者劉照云 申請人:深圳市伯勞特生物制品有限公司