專(zhuān)利名稱(chēng)：：改善海水養(yǎng)殖水體環(huán)境的復(fù)合芽孢桿菌制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及水產(chǎn)養(yǎng)殖水質(zhì)改善領(lǐng)域，尤其涉及一種改善海水養(yǎng)殖水體環(huán)境的復(fù)合芽孢桿菌制劑及其制備方法。技術(shù)背景近幾十年來(lái)，高密度、工廠(chǎng)化的水產(chǎn)養(yǎng)殖方式在我國(guó)得到了蓬勃發(fā)展，這在很大程度上滿(mǎn)足了人們對(duì)水產(chǎn)品的需求，解決了自然漁業(yè)資源相對(duì)短缺的矛盾。但養(yǎng)殖殘餌、魚(yú)蝦糞便排泄物、生物殘?bào)w、肥料等在池底積累起來(lái)，這些污染物是池塘水質(zhì)惡化的源頭和各種病菌、病毒系列的溫床，也導(dǎo)致了養(yǎng)殖水體理化環(huán)境和生態(tài)環(huán)境的惡化。許多化學(xué)藥物作為魚(yú)藥、詞料添加劑、水質(zhì)改良劑等大量使用，由此帶來(lái)的病原生物耐藥性問(wèn)題、動(dòng)物體內(nèi)菌群失調(diào)以及藥物殘留等問(wèn)題越來(lái)越嚴(yán)重，這不僅影響了養(yǎng)殖業(yè)者的經(jīng)濟(jì)效益，也帶來(lái)了水環(huán)境污染和水產(chǎn)品質(zhì)量的問(wèn)題，嚴(yán)重阻礙了水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的健康與可持續(xù)發(fā)展。利用有益微生物對(duì)養(yǎng)殖水環(huán)境進(jìn)行微生物調(diào)控，凈化水質(zhì)，越來(lái)越受到人們的重視。芽孢桿菌、乳酸菌、酵母、光合細(xì)菌、硝化細(xì)菌等單一菌群微生態(tài)制劑在飼用添加、水質(zhì)改良等方面逐步得到應(yīng)用。其中，頗為人們所關(guān)注的是芽孢桿菌，芽孢桿菌除了具有一般微生態(tài)制劑的優(yōu)點(diǎn)外，還具有穩(wěn)定性好、抗性強(qiáng)、復(fù)活率高的優(yōu)勢(shì)。在養(yǎng)殖水體中使用芽孢桿菌能迅速降解進(jìn)入養(yǎng)殖池的有機(jī)物，包括魚(yú)的排泄物、殘余飼料、浮游藻類(lèi)尸體和池底淤泥，使之生成硝酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽等無(wú)機(jī)鹽類(lèi)，有效降低水中COD、BOD的含量，使水體中的氨氮(NI^-N)與亞硝酸氮(NC^-N)、硫化物濃度降低，從而有效地改良水質(zhì)，避免有機(jī)物在養(yǎng)殖池的沉積，維持良好的養(yǎng)殖水域生態(tài)環(huán)境。同時(shí)，芽孢桿菌隨飼料進(jìn)入水產(chǎn)動(dòng)物消化道后，維護(hù)腸道的微生態(tài)平衡，不僅能直接抑制動(dòng)物腸道內(nèi)有害菌的生長(zhǎng)繁殖，還可以提高動(dòng)物機(jī)體特異性和非特異性免疫機(jī)能。但是，由于菌種本身的理化特性的差異，不同微生態(tài)制劑產(chǎn)品質(zhì)量和應(yīng)用效果的也有所不同。單菌株的水質(zhì)改良制劑往往因?yàn)樗w環(huán)境、水產(chǎn)動(dòng)物種類(lèi)、添加方式的變化，效果不是很明顯。因此，為了增強(qiáng)菌株的穩(wěn)定，提高水質(zhì)改良效果，開(kāi)發(fā)復(fù)合菌株的芽孢桿菌制劑是十分必要的。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種改善海水養(yǎng)殖水體環(huán)境的復(fù)合芽孢桿菌制劑及其制備方法。改善海水養(yǎng)殖水體環(huán)境的復(fù)合芽孢桿菌制劑是由枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌和納豆芽孢桿菌按照1:1:28:511細(xì)菌數(shù)比例復(fù)合而成。改進(jìn)海水養(yǎng)殖水體環(huán)境的復(fù)合芽孢桿菌制劑包括如下步驟1)取牛肉膏粉、氯化鈉、豆粕粉、麩皮和水以5:1:1:2:12的重量比例混合均勻，得到培養(yǎng)基固型物；2)取沸石粉、膨潤(rùn)土、麥飯石粉、米糠、玉米芯粉或花生粕中的一種或多種為輔料填充物；3)將地衣芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌按照l(shuí):1:28:511的細(xì)菌數(shù)比例均勻混合，得到混合菌液；4)將培養(yǎng)基固型物和混合菌液按照1:815的體積比例均勻混合，放置于發(fā)酵罐內(nèi)，3035"C發(fā)酵57天，得到混合發(fā)酵菌液；5)將輔料填充物和混合發(fā)酵菌液按照l(shuí):46的體積比例均勻混合，4050°C下烘干。本發(fā)明從控制水體污染角度出發(fā)，綜合利用芽孢桿菌的理化特性知識(shí)及水產(chǎn)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)技術(shù)，將枯草地衣芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌和芽孢桿菌合理配比，研制出一種能夠改善海水養(yǎng)殖水體環(huán)境的復(fù)合芽孢桿菌制劑。應(yīng)用本發(fā)明的芽孢桿菌制劑，能夠迅速降解進(jìn)入養(yǎng)殖水體的有機(jī)物，包括魚(yú)的排泄物、殘余詞料、浮游藻類(lèi)尸體，明顯的降低養(yǎng)殖水體氨氮、亞硝酸鹽、COD的含量，從而有效地改良水質(zhì)，避免有機(jī)物在養(yǎng)殖池的沉積，維持良好的養(yǎng)殖水域生態(tài)環(huán)境。同時(shí)還能夠提高海水養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)補(bǔ)體C3和C4的量，增強(qiáng)魚(yú)類(lèi)免疫應(yīng)答水平，從而提高養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)的抗病力。經(jīng)多項(xiàng)試驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)室分析，本發(fā)明高效、安全、無(wú)公害。具體實(shí)施方式實(shí)施例11)取牛肉膏粉、氯化鈉、豆粕粉、麩皮和水以5:1:1:2:12的重量比例混合均勻，得到培養(yǎng)基固型物；2)將地衣芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌按照l(shuí):1:2:5的細(xì)菌數(shù)比例均勻混合，得到混合菌液3)將培養(yǎng)基固型物和混合菌液按照l(shuí):8的體積比例均勻混合，放置于發(fā)酵罐內(nèi)，3(TC發(fā)酵5天，得到混合發(fā)酵菌液；4)將沸石粉和混合發(fā)酵菌液按照l(shuí):4的體積比例均勻混合，40°C下烘干。上述地衣芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌均購(gòu)自中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心。具體為地衣芽孢桿菌CICC20085、蠟狀芽孢桿菌CICC20454、納豆芽孢桿菌CICC20443、枯草芽孢桿菌CICC10090.實(shí)施例21)取牛肉膏粉、氯化鈉、豆粕粉、麩皮和水以5:1:1:2:12的重量比例混合均勻，得到培養(yǎng)基固型物；2)將地衣芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌按照l(shuí):1:4:7的細(xì)菌數(shù)比例均勻混合，得到混合菌液3)將培養(yǎng)基固型物和混合菌液按照1:10的體積比例均勻混合，放置于發(fā)酵罐內(nèi)，31'C發(fā)酵6天，得到混合發(fā)酵菌液；4)將膨潤(rùn)土和混合發(fā)酵菌液按照1:5的體積比例均勻混合，45°C下烘干。實(shí)施例31)取牛肉膏粉、氯化鈉、豆粕粉、麩皮和水以5:1:1:2:12的重量比例混合均勻，得到培養(yǎng)基固型物；2)將地衣芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌以1:1:6:9的細(xì)菌數(shù)比例混合均勻，發(fā)酵得一種改善養(yǎng)殖水體環(huán)境的復(fù)合芽孢桿菌制劑；3)將培養(yǎng)基固型物和混合菌液按照1:12的體積比例均勻混合，放置于發(fā)酵罐內(nèi)，33'C發(fā)酵7天，得到混合發(fā)酵菌液；4)將麥飯石粉和混合發(fā)酵菌液按照1:6的體積比例均勻混合，46°C下烘干。實(shí)施例4:1)取牛肉膏粉、氯化鈉、豆粕粉、麩皮和水以5:1:1:2:12的重量比例混合均勻，得到培養(yǎng)基固型物；2)將地衣芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌以1:1:8:11的細(xì)菌數(shù)比例混合均勻，發(fā)酵得一種改善養(yǎng)殖水體環(huán)境的復(fù)合芽孢桿菌制劑；3)將培養(yǎng)基固型物和混合菌液按照1:15的體積比例均勻混合，放置于發(fā)酵罐內(nèi)，35'C發(fā)酵7天，得到混合發(fā)酵菌液；4)將麥飯石粉和混合發(fā)酵菌液按照1:5的體積比例均勻混合，50°C下烘干。本發(fā)明的改善海水養(yǎng)殖水體環(huán)境的復(fù)合芽孢桿菌制劑，外觀(guān)為粉末狀。使用時(shí)，將該粉末狀制劑均勻地撒入養(yǎng)殖水體中，用量為150-200g每畝(水深1.5米)。應(yīng)用實(shí)施例1經(jīng)課題組在浙江寧波、臺(tái)州、溫州等地10余個(gè)海水魚(yú)養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行的對(duì)比試驗(yàn)表明在美國(guó)紅魚(yú)養(yǎng)殖水池內(nèi)，每畝(水體深1.5米)投入150g復(fù)合芽孢桿菌制劑，連續(xù)投放21天，對(duì)水體氨氮(NH3-N)、亞硝酸鹽(N02.-N)、COD的影響見(jiàn)表l、2、3。_表1復(fù)合芽孢桿菌制劑對(duì)水體中NH3-N的影響(mg/L)_<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>表2復(fù)合芽孢桿菌制劑對(duì)水體中NO2—-N的影響(mg/L)投放天數(shù)對(duì)照組復(fù)合芽孢桿菌組00.204±0.0480.287±0.0670.415±0.0670.327士0.059140.749±0皿0.498±0.073211.257±0.1010.576±0.065表3復(fù)合芽孢桿菌制劑對(duì)水體中COD的影響(mg/L)投放天數(shù)對(duì)照組復(fù)合芽孢桿菌組012.73±0.9411.82±0.86715.91士1.0813.02±1.061419.17±1.1514,29±1.022122.58±1.5412.16±1.33在養(yǎng)殖水體中投入每畝150g復(fù)合芽孢桿菌制劑后，水體中的NH3-N的含量與對(duì)照組相比顯著降低(戶(hù)<0.05)，NC^-N的含量與對(duì)照組相比顯著降低(尸<0.05)，COD與對(duì)照組相比顯著降低(尸<0.05)。應(yīng)用實(shí)施例2在黑鯢魚(yú)養(yǎng)殖水池內(nèi)，每畝(水體深1.5米)投入200g復(fù)合芽孢桿菌制劑，連續(xù)投放3周，對(duì)水體氨氮(NH3-N)、亞硝酸鹽(NC^-N)、COD的影響見(jiàn)表4、5、6，及對(duì)黑鯢魚(yú)補(bǔ)體C3和C4的影響見(jiàn)表7。表4復(fù)合芽孢桿菌制劑對(duì)水體中NH3-N的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>表5復(fù)合芽孢桿菌制劑對(duì)水體中NO2—-N的影響投放天數(shù)對(duì)照組復(fù)合芽孢桿菌組<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>表6復(fù)合芽孢桿菌制劑對(duì)水體中COD的影響投放天數(shù)對(duì)照組復(fù)合芽孢桿菌組0<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>表7投放兩周后對(duì)黑鯢魚(yú)血清中補(bǔ)體C3和C4的影響(mg/L)_^_^_對(duì)照組81.92±5.1734.54±2.07復(fù)合芽孢桿菌組_99.18±6.54_43.89±1.89_~在養(yǎng)殖水體中投入每畝200g復(fù)合芽孢桿菌制劑后，水體中的NH3-N的含量與對(duì)照組相比顯著降低(戶(hù)<0.05)，NC^-N的含量與對(duì)照組相比顯著降低(戶(hù)<0.05)，COD與對(duì)照組相比顯著降低(戶(hù)<0.05)。補(bǔ)體系統(tǒng)是水產(chǎn)動(dòng)物，特別是魚(yú)類(lèi)重要的免疫指標(biāo)，在抵抗微生物感染的過(guò)程中起到重要作用。投放復(fù)合芽孢桿菌制劑后，黑鯢魚(yú)血清中補(bǔ)體C3和C4的量與對(duì)照組相比顯著提高(尸<0.05)。權(quán)利要求1、一種改善海水養(yǎng)殖水體環(huán)境的復(fù)合芽孢桿菌制劑，其特征在于由枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌和納豆芽孢桿菌按照1∶1∶2～8∶5～11細(xì)菌數(shù)比例復(fù)合而成。2、一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的改進(jìn)海水養(yǎng)殖水體環(huán)境的復(fù)合芽孢桿菌制劑，其特征在于包括如下步驟1)取牛肉膏粉、氯化鈉、豆粕粉、麩皮和水以5:1:1:2:12的重量比例混合均勻，得到培養(yǎng)基固型物；2)取沸石粉、膨潤(rùn)土、麥飯石粉、米糠、玉米芯粉或花生粕中的一種或多種為輔料填充物；3)將地衣芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌按照l(shuí):1:28:511的細(xì)菌數(shù)比例均勻混合，得到混合菌液；4)將培養(yǎng)基固型物和混合菌液按照1:815的體積比例均勻混合，放置于發(fā)酵罐內(nèi)，3035'C發(fā)酵57天，得到混合發(fā)酵菌液；5)將輔料填充物和混合發(fā)酵菌液按照l(shuí):46的體積比例均勻混合，4050°C下烘干。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了改善海水養(yǎng)殖水體環(huán)境的復(fù)合芽孢桿菌制劑及其制備方法。它是由枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌和納豆芽孢桿菌按照一定比例混合而成，常溫下，其活性微生物處于休眠狀態(tài)，穩(wěn)定容易保存。該復(fù)合芽孢桿菌制劑投放到海水養(yǎng)殖水體中，休眠菌能迅速恢復(fù)正常，快速降解水體中殘余的餌料、糞便、肥料和生物殘?bào)w這些有機(jī)污染物，降低養(yǎng)殖水體氨氮、亞硝酸鹽、COD的含量，并迅速繁殖成為水體中的優(yōu)勢(shì)菌，進(jìn)而抑制腐敗菌的增殖，修復(fù)養(yǎng)殖水體環(huán)境，凈化水質(zhì)。本發(fā)明安全、無(wú)公害、無(wú)殘留，能夠顯著地改善養(yǎng)殖水體環(huán)境，同時(shí)還能提高水產(chǎn)動(dòng)物免疫力。文檔編號(hào)C12R1/07GK101323843SQ20081012019公開(kāi)日2008年12月17日申請(qǐng)日期2008年7月25日優(yōu)先權(quán)日2008年7月25日發(fā)明者吳天星,潘曉東申請(qǐng)人:浙江大學(xué)