專利名稱：：一種磷脂酰月桂醇的酶法制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：一種磷脂酰月桂醇的酶法制備方法，屬于磷脂的酶法改性
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：磷脂主要包括磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酰絲氨酸及磷脂酰丙醇和一系列磷脂衍生物等。近來(lái)研究發(fā)現(xiàn)磷脂酰月桂醇具有重要的生物學(xué)功能及在醫(yī)藥工業(yè)上得到愈來(lái)愈廣泛的應(yīng)用，而磷脂酰月桂醇在自然界中幾乎不存在，因而利用酶法來(lái)制備磷脂酰月桂醇具有重要意義。通過(guò)文獻(xiàn)檢索，國(guó)內(nèi)外未發(fā)現(xiàn)由大豆混合磷脂為原料采用無(wú)水體系經(jīng)處理的花生磷脂酶D酶法制備磷脂酰月桂醇的方法報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種磷脂酰月桂醇的酶法制備方法，由大豆混合磷脂為原料采用無(wú)水體系經(jīng)處理的花生磷脂酶D酶法制備磷脂酰月桂醇的方法。本發(fā)明的技術(shù)方案一種磷脂酰月桂醇的酶法制備方法，大豆混合磷脂溶于無(wú)水的有機(jī)溶劑中，加入月桂醇，在經(jīng)處理的花生磷脂酶D催化下進(jìn)行堿基交換反應(yīng)，混合磷脂轉(zhuǎn)化為磷脂酰月桂醇，反應(yīng)物通過(guò)水洗有機(jī)相，經(jīng)脫水脫溶后，用丙酮充分洗滌，分離出丙酮不溶物，干燥得產(chǎn)品，經(jīng)過(guò)HPLC測(cè)定，產(chǎn)品磷脂酰月桂醇的含量大于65%，而且產(chǎn)品中不含有溶血磷脂和磷脂酸?；ㄉ字窪的預(yù)處理花生磷脂酶D在使用前進(jìn)行預(yù)處理，其方法為取2.72g磷酸二氫鉀溶于lOOmL去離子水中，加入少量磷酸氫二鈉，調(diào)節(jié)pH至5.6，配制得磷酸緩沖液；取lg花生磷脂酶D溶于80mL磷酸緩沖液中，得到pH5.6的花生磷脂酶D酶液，加入49克氯化鉀并溶解，完全冷凍后于真空度70Pa，溫度-40。C條件下凍干48小時(shí)，得到經(jīng)處理的花生磷脂酶D。使用氯化鉀和調(diào)節(jié)pH來(lái)進(jìn)一步激活花生磷脂酶D。酶促反應(yīng)的工藝條件為有機(jī)溶劑大豆混合磷脂月桂醇經(jīng)處理的花生磷脂酶D的v/w/w/w比為5-20:0.5-2:1-10:0.025-0.25，反應(yīng)溫度20。C-50。C，反應(yīng)時(shí)間為24-48小時(shí)。所用有機(jī)溶劑為乙醚，氯仿或正己烷等。所用的大豆混合磷脂原料來(lái)自于油廠油脂加工的副產(chǎn)品，并經(jīng)進(jìn)一步加工所得到的醇溶性混合磷脂，且大豆磷脂磷脂酰膽堿含量控制為75%,大豆磷脂磷脂酰乙醇胺16%。采用經(jīng)處理的花生磷脂酶D在無(wú)水的有機(jī)溶劑中與月桂醇進(jìn)行酶促堿基交換反應(yīng)，反應(yīng)完成后，水洗有機(jī)相，經(jīng)脫水脫溶丙酮洗滌得到本產(chǎn)品。本發(fā)明的有益效果本發(fā)明以大豆混合磷脂為原料，采用無(wú)水體系經(jīng)處理的花生磷脂酶D酶法制備不含溶血磷脂和磷脂酸的磷脂酰月桂醇的方法，為制備不含溶血磷脂和磷脂酸的磷脂酰月桂醇提供了一種可行的方法，使用本方法可以方便的制備在醫(yī)藥工業(yè)，脂質(zhì)體工業(yè)具有廣泛用途的磷脂酰月桂醇。由于本方法中沒(méi)有水的存在，因而產(chǎn)品中不含有溶血磷脂和磷脂酸等磷脂酰月桂醇產(chǎn)品中不希望含有的成分。表l:本方法所得產(chǎn)品指標(biāo)<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>具體實(shí)施例方式實(shí)施例l:將50克混合磷脂加入1000毫升乙醚中于20。C溶解，加入100克月桂醇攪拌恒溫半小時(shí)，加入5克經(jīng)處理的花生磷脂酶D，于20'C攪拌反應(yīng)48小時(shí)，用3000毫升去離子水分三次洗滌有機(jī)相，在有機(jī)相中加入10克無(wú)水硫酸鈉進(jìn)行干燥，經(jīng)干燥后的有機(jī)相真空脫溶后，用500毫升丙酮充分洗滌，分離出丙酮不溶物，并干燥得磷脂酰月桂醇含量為68.4%的不含溶血磷脂和磷脂酸的產(chǎn)品。實(shí)施例2:將50克混合磷脂加入1000毫升氯仿中于3(TC溶解，加入100克月桂醇攪拌恒溫半小時(shí)，加入5克經(jīng)處理的花生磷脂酶D，于30'C攪拌反應(yīng)48小時(shí)，用3000毫升去離子水分三次洗滌有機(jī)相，在有機(jī)相中加入10克無(wú)水硫酸鈉進(jìn)行干燥，經(jīng)干燥后的有機(jī)相真空脫溶后，用500毫升丙酮充分洗滌，分離出丙酮不溶物，并干燥得磷脂酰月桂醇含量為66.5%的不含溶血磷脂和磷脂酸的產(chǎn)品。實(shí)施例3:將50克混合磷脂加入1000毫升正己垸中于5(TC溶解，加入100克月桂醇攪拌恒溫半小時(shí)，加入5克經(jīng)處理的花生磷脂酶D，于50'C攪拌反應(yīng)24小時(shí),用3000毫升去離子水分三次洗滌有機(jī)相，在有機(jī)相中加入10克無(wú)水硫酸鈉進(jìn)行干燥，經(jīng)干燥后的有機(jī)相真空脫溶后，用500毫升丙酮充分洗滌，分離出丙酮不溶物，并千燥得磷脂酰月桂醇含量為65.2%的不含溶血磷脂和磷脂酸的產(chǎn)p權(quán)利要求1、一種磷脂酰月桂醇的酶法制備方法，其特征是大豆混合磷脂溶于無(wú)水的有機(jī)溶劑中，加入月桂醇，在經(jīng)處理的花生磷脂酶D催化下進(jìn)行堿基交換反應(yīng)，混合磷脂轉(zhuǎn)化為磷脂酰月桂醇，反應(yīng)物通過(guò)水洗有機(jī)相，經(jīng)脫水脫溶后，用丙酮充分洗滌，分離出丙酮不溶物，干燥得產(chǎn)品，經(jīng)過(guò)HPLC測(cè)定，產(chǎn)品磷脂酰月桂醇的含量大于65％，而且產(chǎn)品中不含有溶血磷脂和磷脂酸；酶促反應(yīng)的工藝條件為有機(jī)溶劑∶混合磷脂∶月桂醇∶經(jīng)處理的花生磷脂酶D的v/w/w/w比為5-20∶0.5-2∶1-10∶0.025-0.25，反應(yīng)溫度20℃-50℃，反應(yīng)時(shí)間為24-48小時(shí)。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征是所用有機(jī)溶劑為乙醚，氯仿或正己烷。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征是花生磷脂酶D在使用前進(jìn)行了預(yù)處理，取2.72g磷酸二氫鉀溶于lOOmL去離子水中，加入少量磷酸氫二鈉，調(diào)節(jié)pH至5.6，配制得磷酸緩沖液；取lg花生磷脂酶D溶于80mL磷酸緩沖液中，得到pH5.6的花生磷脂酶D酶液，加入49克氯化鉀并溶解，完全冷凍后于真空度70Pa，溫度-4(TC條件下凍干48小時(shí)，得到經(jīng)處理的花生磷脂酶D。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征是經(jīng)處理的花生磷脂酶D的酶促反應(yīng)是在無(wú)水的環(huán)境中進(jìn)行的。全文摘要一種磷脂酰月桂醇的酶法制備方法，屬于磷脂的酶法改性
技術(shù)領(lǐng)域：
。本發(fā)明以大豆混合磷脂溶于無(wú)水的有機(jī)溶劑中，加入月桂醇，在經(jīng)處理的花生磷脂酶D催化下進(jìn)行堿基交換反應(yīng)，混合磷脂轉(zhuǎn)化為磷脂酰月桂醇。反應(yīng)物通過(guò)水洗有機(jī)相，經(jīng)脫水脫溶后，用丙酮充分洗滌，分離出丙酮不溶物，干燥得產(chǎn)品。經(jīng)過(guò)HPLC測(cè)定，產(chǎn)品磷脂酰月桂醇的含量大于65％。由于本方法中沒(méi)有水的存在，因而產(chǎn)品中不含有溶血磷脂和磷脂酸等磷脂酰月桂醇產(chǎn)品中不希望含有的成分，使用本方法可以方便的制備在醫(yī)藥工業(yè)，脂質(zhì)體工業(yè)具有廣泛用途的磷脂酰月桂醇。文檔編號(hào)C12P9/00GK101302547SQ20081012317公開(kāi)日2008年11月12日申請(qǐng)日期2008年6月10日優(yōu)先權(quán)日2008年6月10日發(fā)明者史蘇佳,張永剛,棟曹申請(qǐng)人:江南大學(xué)