專利名稱：抗咪唑乙煙酸大豆根瘤菌劑制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于 一種大豆根瘤菌劑的制備技術(shù)，主要涉及抗咪唑乙 煙酸大豆根瘤菌劑的制備方法。
背景技術(shù)：
農(nóng)田土壤中大豆根瘤菌侵染大豆根毛表皮細(xì)胞后刺激細(xì)胞加速 分裂而形成根瘤，在根瘤內(nèi)部根瘤菌可將空氣中的氮?dú)廪D(zhuǎn)化為大豆 可以利用的氨態(tài)氮素營(yíng)養(yǎng)，同時(shí)根瘤菌利用大豆提供的營(yíng)養(yǎng)維持生 存。咪唑乙煙酸是目前大豆田目前廣泛應(yīng)用的長(zhǎng)殘留性土壤兼莖葉 處理除草劑，由于咪唑乙煙酸在大豆生產(chǎn)中的長(zhǎng)期大量應(yīng)用造成對(duì) 大豆根圈環(huán)境的嚴(yán)重破壞，導(dǎo)致大豆根瘤菌侵染大豆根毛形成根瘤 能力降低、根瘤數(shù)量減少，使固氮活性和效率降低而造成大豆產(chǎn)量 和品質(zhì)下降。為了解決咪唑乙煙酸長(zhǎng)期大量應(yīng)用所造成的大豆根瘤 菌侵染大豆根毛形成根瘤能力的降低和固氮活性下降這一降低大豆 根瘤固氮效率、導(dǎo)致大豆產(chǎn)量降低的難點(diǎn)問(wèn)題，生產(chǎn)上常常采取降 低咪唑乙煙酸用量的方法，但結(jié)果卻導(dǎo)致對(duì)大豆田雜草防除能力的 降低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是針對(duì)上述已有技術(shù)存在的問(wèn)題，研究提供一 種抗咪唑乙煙酸大豆根瘤菌劑制備方法，利用本方法培育生產(chǎn)的抗 咪唑乙煙酸大豆根瘤菌劑接種大豆后，以解決大豆才艮瘤菌因受咪唑 乙煙酸的影響導(dǎo)致的根瘤數(shù)減少、固氮效率降低這一 大豆生產(chǎn)中制
約產(chǎn)量和品質(zhì)提高的難題。
本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的
① 、在蔗糖酵母膏培養(yǎng)基中加入咪唑乙煙酸，使蔗糖酵母膏培 養(yǎng)基中的咪唑乙煙酸濃度為100mg/L;將上述蔗糖酵母膏培養(yǎng)基在 每個(gè)搖瓶中裝入150ml，在120—125。C條件下滅菌30—40分鐘，冷 卻后挑取一環(huán)具有高效固氮活性的大豆根瘤菌加入搖瓶中，在28 — 30。C條件下培養(yǎng)5 — 7天，得培養(yǎng)基液備用；
② 、在蔗糖酵母膏培養(yǎng)基中加入咪唑乙煙酸，使蔗糖酵母膏培 養(yǎng)基中的咪唑乙煙酸濃度為200mg/L;將此咪唑乙煙酸濃度的蔗糖 酵母膏培養(yǎng)基在每個(gè)搖瓶中裝入150ml，在120—125。C條件下滅菌 30—40分鐘，冷卻后再將上述①中得到的培養(yǎng)基液挑取一環(huán)接種到 滅菌后含咪唑乙煙酸濃度為200mg/L的蔗糖酵母膏培養(yǎng)基中，在28 —3(TC條件下培養(yǎng)5 — 7天，得培養(yǎng)基液備用；
③ 、依此類推，重復(fù)②的作業(yè)過(guò)程，每次在蔗糖酵母膏培養(yǎng)基 中增加100mg/L的咪唑乙煙酸，直至蔗糖酵母膏培養(yǎng)基中咪唑乙煙 酸濃度為500mg/L;
@、把咪唑乙煙酸濃度為500mg/L的蔗糖酵母膏培養(yǎng)基中具有 抗性的大豆根瘤菌進(jìn)行純系分離后保存于斜面試管中；
⑤、把純系分離后的抗咪唑乙煙酸大豆根瘤菌在蔗糖酵母膏斜 面試管基中培養(yǎng)為一級(jí)菌種，再將該一級(jí)菌種在滅菌的蔗糖酵母膏 培養(yǎng)基搖瓶中擴(kuò)繁培養(yǎng)為二級(jí)菌種；對(duì)含有6%豆粉、8%麥麩、2%食 鹽、1%甘露醇、PH值為7.5 — 7.8的水溶液培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌冷卻后 接種二級(jí)菌種，在28 — 30。C條件下發(fā)酵培養(yǎng)48 — 72小時(shí)，過(guò)濾后 得到液態(tài)抗咪唑乙煙酸大豆根瘤菌劑，或者選擇固定載體添加抗咪 唑乙煙酸大豆根瘤菌液內(nèi)制成固態(tài)抗咪唑乙煙酸大豆根瘤菌劑產(chǎn)
口Po
本發(fā)明的工藝技術(shù)簡(jiǎn)單，制劑產(chǎn)品生產(chǎn)成本低廉，其制劑產(chǎn)品 性能質(zhì)量好，在長(zhǎng)期大量使用咪唑乙煙酸的大豆產(chǎn)區(qū)應(yīng)用抗咪唑乙 煙酸根瘤菌劑，使大豆形成大量的根瘤，并提高根瘤固氮活性和效 率，解決了咪唑乙煙酸對(duì)大豆根瘤固氮的傷害，從而提高大豆產(chǎn)量
和品質(zhì)。
具體實(shí)施例方式
下面詳細(xì)描述本發(fā)明的實(shí)施方式。
本發(fā)明利用目前已經(jīng)推廣應(yīng)用的具有高效固氮活性大豆根瘤 菌，在蔗糖酵母膏培養(yǎng)基中逐步提高咪唑乙煙酸濃度，在咪唑乙煙 酸高壓選擇條件下培育抗性大豆根瘤菌，經(jīng)純系分離后形成抗咪唑 乙煙酸大豆根瘤菌原原種，將原原種挑取到斜面試管中形成一級(jí)菌 種，再將一級(jí)菌種擴(kuò)繁形成二級(jí)菌種接種到發(fā)酵罐進(jìn)行菌劑生產(chǎn)。
詳細(xì)工藝過(guò)程如下 一種抗咪唑乙煙酸大豆根瘤菌劑制備方法
① 、在蔗糖酵母膏培養(yǎng)基中加入咪唑乙煙酸，使蔗糖酵母膏培 養(yǎng)基中的咪唑乙煙酸濃度為100mg/L;將上述蔗糖酵母膏培養(yǎng)基在 每個(gè)搖并瓦中裝入150ml，在120—125。C條件下滅菌30—40分鐘，冷 卻后挑取一環(huán)具有高效固氮活性的大豆根瘤菌加入搖瓶中，在28— 3(TC條件下培養(yǎng)5 — 7天，得培養(yǎng)基液備用；
② 、在蔗糖酵母膏培養(yǎng)基中加入咪唑乙煙酸，4吏蔗糖酵母膏培 養(yǎng)基中的。米唑乙煙酸濃度為200mg/L;將此咪唑乙煙酸濃度的蔗糖 酵母膏培養(yǎng)基在每個(gè)搖瓶中裝入150ml，在120—125。C條件下滅菌 30—40分鐘，冷卻后再將上述①中得到的培養(yǎng)基液挑取一環(huán)接種到 滅菌后含咪唑乙煙酸濃度為200mg/L的蔗糖酵母膏培養(yǎng)基中，在28 一30。C條件下培養(yǎng)5 — 7天，得培養(yǎng)基液備用； ③、依此類推，重復(fù)②的作業(yè)過(guò)程，每次在蔗糖酵母膏培養(yǎng)基
中增加100mg/L的咪唑乙煙酸，直至蔗糖酵母膏培養(yǎng)基中咪唑乙煙 酸濃度為500mg/L;
、把咪唑乙煙酸濃庋為500mg/L的蔗糖酵母膏培養(yǎng)基中具有 抗性的大豆才艮瘤菌進(jìn)行純系分離后保存于斜面試管中；
、把純系分離后的抗咪唑乙煙酸大豆根瘤菌在蔗糖酵母膏斜 面試管基中培養(yǎng)為一級(jí)菌種，再將該一級(jí)菌種在滅菌的蔗糖酵母膏 培養(yǎng)基搖瓶中擴(kuò)繁培養(yǎng)為二級(jí)菌種；對(duì)含有6%豆粉、8%麥麩、2%食 鹽、1%甘露醇、PH值為7.5 — 7.8的水溶液培養(yǎng)基進(jìn)^f亍滅菌冷卻后 接種二級(jí)菌種，在28 —30。C條件下發(fā)酵培養(yǎng)48_72小時(shí)，過(guò)濾后 得到液態(tài)抗咪唑乙煙酸大豆根瘤菌劑，或者選擇固定載體添加抗咪 唑乙煙酸大豆根瘤菌液內(nèi)制成固態(tài)抗咪唑乙煙酸大豆根瘤菌劑產(chǎn)
口口 o
本發(fā)明提出了制備抗咪唑乙煙酸大豆根瘤菌劑的方法，該方法 生產(chǎn)的抗咪唑乙煙酸大豆根瘤菌劑接種大豆后，通過(guò)多年、多點(diǎn)較 大種植面積種植科研實(shí)驗(yàn)證明，使用該方法提供的抗咪唑乙煙酸大
豆根瘤菌劑可使大豆根瘤數(shù)平均每抹增加14個(gè)，固氮酶活性提高 35.9%，大豆蛋白質(zhì)含量增加5. 2%,大豆平均增產(chǎn)15°/。以上，解決了 咪唑乙煙酸施用后導(dǎo)致大豆根瘤數(shù)減少、固氮效率降低這一 大豆生 產(chǎn)中制約大豆產(chǎn)量和品質(zhì)提高的難題，提高了大豆品質(zhì)和產(chǎn)量，增 產(chǎn)效果顯著。
權(quán)利要求
1、一種抗咪唑乙煙酸大豆根瘤菌劑制備方法，其特征是:①、在蔗糖酵母膏培養(yǎng)基中加入咪唑乙煙酸，使蔗糖酵母膏培養(yǎng)基中的咪唑乙煙酸濃度為100mg/L；將上述蔗糖酵母膏培養(yǎng)基在每個(gè)搖瓶中裝入150ml，在120—125℃條件下滅菌30—40分鐘，冷卻后挑取一環(huán)具有高效固氮活性的大豆根瘤菌加入搖瓶中，在28—30℃條件下培養(yǎng)5—7天，得培養(yǎng)基液備用；②、在蔗糖酵母膏培養(yǎng)基中加入咪唑乙煙酸，使蔗糖酵母膏培養(yǎng)基中的咪唑乙煙酸濃度為200mg/L；將此咪唑乙煙酸濃度的蔗糖酵母膏培養(yǎng)基在每個(gè)搖瓶中裝入150ml，在120—125℃條件下滅菌30—40分鐘，冷卻后再將上述①中得到的培養(yǎng)基液挑取一環(huán)接種到滅菌后含咪唑乙煙酸濃度為200mg/L的蔗糖酵母膏培養(yǎng)基中，在28—30℃條件下培養(yǎng)5—7天，得培養(yǎng)基液備用；③、依此類推，重復(fù)②的作業(yè)過(guò)程，每次在蔗糖酵母膏培養(yǎng)基中增加100mg/L的咪唑乙煙酸，直至蔗糖酵母膏培養(yǎng)基中咪唑乙煙酸濃度為500mg/L；④、把咪唑乙煙酸濃度為500mg/L的蔗糖酵母膏培養(yǎng)基中具有抗性的大豆根瘤菌進(jìn)行純系分離后保存于斜面試管中；⑤、把純系分離后的抗咪唑乙煙酸大豆根瘤菌在蔗糖酵母膏斜面試管基中培養(yǎng)為一級(jí)菌種，再將該一級(jí)菌種在滅菌的蔗糖酵母膏培養(yǎng)基搖瓶中擴(kuò)繁培養(yǎng)為二級(jí)菌種；對(duì)含有6％豆粉、8％麥麩、2％食鹽、1％甘露醇、PH值為7.5—7.8的水溶液培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌冷卻后接種二級(jí)菌種，在28—30℃條件下發(fā)酵培養(yǎng)48—72小時(shí)，過(guò)濾后得到液態(tài)抗咪唑乙煙酸大豆根瘤菌劑，或者選擇固定載體添加抗咪唑乙煙酸大豆根瘤菌液內(nèi)制成固態(tài)抗咪唑乙煙酸大豆根瘤菌劑產(chǎn)品。
全文摘要
抗咪唑乙煙酸大豆根瘤菌劑制備方法屬于菌劑制備技術(shù)；本方法利用具有高效固氮活性大豆根瘤菌，在蔗糖酵母膏培養(yǎng)基中逐步提高咪唑乙煙酸濃度，在咪唑乙煙酸高壓選擇條件下培育抗性大豆根瘤菌，經(jīng)純系分離后形成抗咪唑乙煙酸大豆根瘤菌原原種，將原原種挑取到斜面試管中形成一級(jí)菌種，再將一級(jí)菌種擴(kuò)繁形成二級(jí)菌種接種到發(fā)酵罐內(nèi)進(jìn)行菌劑生產(chǎn)；本方法工藝技術(shù)簡(jiǎn)單，生產(chǎn)成本低廉，其制劑產(chǎn)品性能質(zhì)量好，使用中解決了咪唑乙煙酸對(duì)大豆根瘤固氮的傷害，提高大豆產(chǎn)量和品質(zhì)。
文檔編號(hào)C12R1/41GK101381691SQ20081013736
公開日2009年3月11日 申請(qǐng)日期2008年10月22日 優(yōu)先權(quán)日2008年10月22日
發(fā)明者偉 丁, 茁 程 申請(qǐng)人:東北農(nóng)業(yè)大學(xué)