專利名稱：：利用紅曲霉菌生物轉(zhuǎn)化獲得姜黃素新的化合物群的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于中藥的微生物轉(zhuǎn)化
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種利用紅曲霉菌對(duì)天然活性物質(zhì)姜黃素進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，獲得新的組合型化合物群。
背景技術(shù)：
：中藥化學(xué)成份是發(fā)揮藥效作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，也是對(duì)中藥進(jìn)一步深入研究的前提，是國(guó)內(nèi)外中藥現(xiàn)代化的研究熱點(diǎn)。雖然我國(guó)是天然藥物生產(chǎn)和應(yīng)用大國(guó)，現(xiàn)有中藥上萬(wàn)種，但隨著藥物篩選技術(shù)的發(fā)展，特別是高通量篩選技術(shù)的出現(xiàn)，從現(xiàn)有資源中發(fā)現(xiàn)結(jié)構(gòu)新穎并有藥用價(jià)值的先導(dǎo)化合物己越來(lái)越難。天然活性藥物常常因?yàn)楹康?、資源有限、結(jié)構(gòu)復(fù)雜、化學(xué)方法不能合成等缺點(diǎn)而難以開發(fā)成新藥。生物轉(zhuǎn)化技術(shù)是開發(fā)中藥新藥的有效途徑。中藥經(jīng)過(guò)生物體系轉(zhuǎn)化可分解形成新的成分；微生物豐富多樣的次生代謝產(chǎn)物也可能是功效良好的藥物；并可能和某些中藥成分發(fā)生反應(yīng)形成新的化合物。因此應(yīng)用生物轉(zhuǎn)化方法合成有活性的天然產(chǎn)物或?qū)ふ姨烊划a(chǎn)物有活性的衍生物已成為開發(fā)新藥的一種有效途徑。姜黃素類化合物(curcuminoids)為姜黃屬植物的主要化學(xué)成分。姜黃素具有降血脂、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗腫瘤等作用。研究發(fā)現(xiàn)姜黃醇提物，即姜黃素(curcumin)，能使高脂膳食小鼠和大鼠血清和肝臟膽固醇、甘油三酯明顯降低，是一個(gè)很好的調(diào)脂藥物。但姜黃素類化合物口服吸收率低、水溶性小、生物半衰期短、穩(wěn)定性差，制約了姜黃素在臨床的廣泛應(yīng)用。因此，國(guó)內(nèi)外專家積極探索姜黃素的構(gòu)效關(guān)系并嘗試對(duì)姜黃素進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造，以期增加姜黃素的藥效。目前對(duì)姜黃素的結(jié)構(gòu)改造研究均僅限于化學(xué)改造，由于化學(xué)改造需要很高的立體選擇性、區(qū)域選擇性和基團(tuán)選擇性，反應(yīng)體系復(fù)雜，難度大，迄今并未見經(jīng)結(jié)構(gòu)修飾的姜黃素衍生物開發(fā)而成的商品面市。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的上述問(wèn)題，設(shè)計(jì)提供一種微生物改造姜黃素的方法。所述的利用紅曲霉菌生物轉(zhuǎn)化獲得姜黃素新的化合物群的方法，其特征在于包括以下工藝歩驟(1)將紅曲霉菌株(M;wwwent)接種于斜面培養(yǎng)基上，26-32。C培養(yǎng)2-6天；(2)取麥芽-葡萄糖液體培養(yǎng)基加入到上述斜面培養(yǎng)物中，制備孢子懸液，孢子懸液以培養(yǎng)基重量7%_13%的接種量轉(zhuǎn)種至麥芽-葡萄糖液體培養(yǎng)基中，在溫度26-3(TC下振蕩培養(yǎng)2-6天；(3)將歩驟(2)所得菌液調(diào)節(jié)pH至2-5，按培養(yǎng)基重量7%-13%的接種量，接種到含姜黃素重量為0.5%_1.5%的固體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度28-32'C下培養(yǎng)18-30小時(shí)；(4)經(jīng)步驟(3)的固體培養(yǎng)物轉(zhuǎn)至26-3(TC下繼續(xù)培養(yǎng)6-18小時(shí)；(5)經(jīng)步驟(4)的固體培養(yǎng)物轉(zhuǎn)至28-32t:下繼續(xù)培養(yǎng)5-9天；(6)經(jīng)步驟(5)的固體培養(yǎng)物在56—64。C溫度下烘干至恒重，粉碎、過(guò)篩，采用氯仿、.乙酸乙酯或無(wú)水乙醇為溶劑，在80—9(TC溫度下回流提取3—5小時(shí)，提取液濃縮至干，得到姜黃素新的化合物群。所述的利用紅曲霉菌生物轉(zhuǎn)化獲得姜黃素新的化合物群的方法，其特征在于步驟(1)中培養(yǎng)溫度為28-3CTC，培養(yǎng)時(shí)間為3-5天。所述的利用紅曲霉菌生物轉(zhuǎn)化獲得姜黃素新的化合物群的方法，其特征在于步驟(2)中孢子懸液接種量為8%-12%，培養(yǎng)溫度為29-30°C，培養(yǎng)吋間為3-5天。所述的利用紅曲霉菌生物轉(zhuǎn)化獲得姜黃素新的化合物群的方法，其特征在于步驟(3)中用冰醋酸調(diào)pH值為3-4，接種量為8%-12%，發(fā)酵溫度為29-31。C，發(fā)酵時(shí)間為22-26小時(shí)。所述的利用紅曲霉菌生物轉(zhuǎn)化獲得姜黃素新的化合物群的方法，其特征在于步驟(4)培養(yǎng)溫度為27-29°C，培養(yǎng)時(shí)間為8-16小時(shí)。所述的利用紅曲霉菌生物轉(zhuǎn)化獲得姜黃素新的化合物群的方法，其特征在于步驟(5)培養(yǎng)溫度為29-3rC，培養(yǎng)時(shí)間為6-8天。所述的利用紅曲霉菌生物轉(zhuǎn)化獲得姜黃素新的化合物群的方法，其特征在于步驟(6)烘干溫度為58—62。C，回流溫度為83—87。C，回流時(shí)間為3-4小時(shí)。所述的利用紅曲霉菌生物轉(zhuǎn)化獲得姜黃素新的化合物群的方法，其特征在于所述的固體發(fā)酵培養(yǎng)基按如下原料和方法制得早秈米加1—1.5倍重量的沸水，在i2rc高溫滅菌。所述的利用紅曲霉菌生物轉(zhuǎn)化獲得姜黃素新的化合物群的方法，其特征在于所述的斜面培養(yǎng)基組分重量百分比為可溶性淀粉3%、麥芽糖3%、蛋白胨2%、(NH4)2S040.50/0、瓊脂2%，并使pH值調(diào)節(jié)至5.0-5.5。所述的利用紅曲霉菌生物轉(zhuǎn)化獲得姜黃素新的化合物群的方法，其特征在于所述的麥芽-葡萄糖液體培養(yǎng)基組分重量百分比為葡萄糖1%，酵母膏0.3%，蛋白胨0.5%，麥芽膏0.3%，并使pH值調(diào)節(jié)至6.5。上述的利用紅曲霉菌生物轉(zhuǎn)化獲得姜黃素新的化合物群的方法，通過(guò)紅曲霉體系的酶對(duì)姜黃素進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，相對(duì)于化學(xué)合成，此方法反應(yīng)條件溫和、污染小、成本低、副產(chǎn)物少等優(yōu)點(diǎn)，能完成一些用化學(xué)方法難以進(jìn)行的反應(yīng)。而且微生物具有與動(dòng)物和人相類似的代謝途徑、能產(chǎn)生相同或類似的代謝產(chǎn)物，所以微生物轉(zhuǎn)化姜黃素得到的衍生物更接近天然產(chǎn)品。圖1為姜黃素轉(zhuǎn)化產(chǎn)物在不同波長(zhǎng)下的色譜圖；圖2為姜黃素及6個(gè)代謝產(chǎn)物的全波長(zhǎng)(190-800mri)掃描圖。具體實(shí)施例方式本發(fā)明中涉及的紅曲霉菌在浙江民間紅曲坊購(gòu)得，商品名為紅曲。紅曲經(jīng)分離培養(yǎng)得到本發(fā)明紅曲霉菌(Mjwm^went)。配制斜面培養(yǎng)基可溶性淀粉3%、麥芽糖3%、蛋白胨2%、(NH4)2S0A5%、瓊脂2%，余量為蒸餾水，并使pH值調(diào)節(jié)至5.0-5.5。分裝試管，121°C滅菌20分鐘后取出試管擺斜面，冷卻后貯存?zhèn)溆?。配制液體培養(yǎng)基葡萄糖1%，酵母膏0.3%，蛋白胨0.5%，麥芽膏0.3%，余量為蒸餾水，并使pH值調(diào)節(jié)至6.5，121°C滅菌20分鐘冷卻后貯存?zhèn)溆谩Ｅ渲乒腆w發(fā)酵培養(yǎng)基早秈米加1一1.5倍重量的沸水，在i2rc高溫滅菌。一紅曲霉菌生物轉(zhuǎn)化的具體方法(1)將紅曲霉菌株接種于斜面培養(yǎng)基上，26-32。C培養(yǎng)6天，如在28-30'C條件下，培養(yǎng)4天，也能達(dá)到同樣效果；(2)取麥芽-葡萄糖液體培養(yǎng)基加入到上述斜面培養(yǎng)物中，制備孢子懸液，孢子懸液以培養(yǎng)基重量7%的接種量轉(zhuǎn)種至麥芽葡萄糖液體培養(yǎng)基中，在溫度2r下振蕩培養(yǎng)5天，如以10%的接種量接種，在溫度28。C溫度下，培養(yǎng)4天，或在3(TC溫度下，培養(yǎng)4天，也能達(dá)到同樣效果；(3)將步驟(2)所得菌液調(diào)節(jié)pH至3.8，按培養(yǎng)基重量7%的接種量，接種到含姜黃素重量為0.5%的固體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度28。C下培養(yǎng)18小時(shí)；如調(diào)節(jié)pH至4.3，以10%的接種量接種到含1%的固體發(fā)酵培養(yǎng)基上，在溫度30"C或32。C下培養(yǎng)24小時(shí)，也能達(dá)到相同效果；(4)經(jīng)步驟(3)的固體培養(yǎng)物轉(zhuǎn)至26T:下繼續(xù)培養(yǎng)18小時(shí)，如在28°C下培養(yǎng)12小時(shí)，或在3(TC培養(yǎng)10小時(shí)，也能達(dá)到同樣下效果；(5)經(jīng)步驟(4)的固體培養(yǎng)物轉(zhuǎn)至28'C下繼續(xù)培養(yǎng)5天，如在3(TC下培養(yǎng)7天也能到達(dá)同樣效果；(6)經(jīng)步驟(5)的固體培養(yǎng)物在56。C、6(TC或64"溫度下烘干至恒重，粉碎、過(guò)篩，采用氯仿、乙酸乙酯或無(wú)水乙醇為溶劑，在80—90。C溫度下回流提取3、4或5小時(shí)，提取液濃縮至干。二轉(zhuǎn)化產(chǎn)物分析菌體對(duì)照取步驟(2)中的菌液接種到不含姜黃素的固體發(fā)酵培養(yǎng)基中，培養(yǎng)方法與具體實(shí)施例相同，可排除菌株的發(fā)酵產(chǎn)物和培養(yǎng)基殘留成分的干擾。底物對(duì)照固體發(fā)酵培養(yǎng)基中加入1%的姜黃素，不接種菌液，可以排除非微生物引起的藥物分解產(chǎn)物的作用。做轉(zhuǎn)化產(chǎn)物分析時(shí)，將實(shí)驗(yàn)中得到的回流提取樣品，用氯仿定容至0.2ml。1發(fā)酵產(chǎn)物中的洛伐他汀的檢測(cè)方法Agilent1100高效液相分析儀DAD檢測(cè)器、HPLCPUMPK-501、AgilentZorbaxExtend-C18column(4.6X250腿I.D.,5(imparticlesize),ExtendC18預(yù)柱，流動(dòng)相甲醇-O.1%磷酸水溶液(77:23);流速0.5ml/min。結(jié)果以洛伐他汀標(biāo)準(zhǔn)品(sigma，M2147-25MG)為對(duì)照，發(fā)酵產(chǎn)物中未檢出洛伐他汀類物質(zhì)。2薄層層析分析取姜黃素為標(biāo)準(zhǔn)品，設(shè)有菌體對(duì)照，底物對(duì)照，姜黃素轉(zhuǎn)化產(chǎn)物點(diǎn)樣于硅膠G薄層板，展開劑(氯仿甲醇甲酸=96:2:0.1)中展開，可見光及紫外下觀察。結(jié)果顯示，在紫外光下，轉(zhuǎn)化產(chǎn)物出現(xiàn)了強(qiáng)熒光的新斑點(diǎn)，與姜黃素標(biāo)準(zhǔn)品相近，極性比姜黃素大。3轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的色譜分析以姜黃素為標(biāo)準(zhǔn)品，將提取物進(jìn)行HPLC分析，色譜柱AgilentZorbaxExtendC18column(4.6X250腦I.D.，5拜particlesize),以0.1%乙酸一水和乙腈在3(TC下進(jìn)行梯度洗脫，見表l，分析姜黃素轉(zhuǎn)化前后HPLC指紋圖譜的差異，初步判斷可能山現(xiàn)的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物。表1HPLC流動(dòng)相色譜分離條件如—卜表時(shí)間TimeB相乙腈的濃度流速mL/min010%1.002040%1.004040%1.0050100%1.0065100%1.00轉(zhuǎn)化產(chǎn)物經(jīng)HPLC-DAD分析，用254nm、280nm、360nm、420nm共4個(gè)波長(zhǎng)檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)可能存在6個(gè)代謝產(chǎn)物，其保留時(shí)間分別為16.3min，22.lmin，23.2min，28.0min，33.0min，36.lmin;而姜黃素的為42.Omin。結(jié)果見表2、圖1。9表2姜黃素轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的保留吋間<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>4轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的光譜圖對(duì)檢測(cè)到的6個(gè)可能代謝產(chǎn)物進(jìn)行光譜分析，轉(zhuǎn)化產(chǎn)物1在243nm和339nm有顯著的吸收峰、轉(zhuǎn)化產(chǎn)物2在238nm和365nm有顯著的吸收峰，轉(zhuǎn)化產(chǎn)物3在246nm和351nm有顯著的吸收峰、轉(zhuǎn)化產(chǎn)物4在254皿和372nm有顯著的吸收峰、轉(zhuǎn)化產(chǎn)物5在242nm和403nm有顯著的吸收峰、轉(zhuǎn)化產(chǎn)物6在240nm和405nm有顯著的吸收峰、與姜黃素標(biāo)準(zhǔn)品(209nm，425nm)的光譜圖相似，存在明顯差異。如表3、圖2所示。表3:6種姜黃素轉(zhuǎn)化產(chǎn)物與姜黃素的吸收峰比較_<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>A、降血脂作用l高脂血癥小鼠造模昆明種小鼠(體重20-22g)，雌雄各半。適應(yīng)性飼養(yǎng)后編號(hào)、稱重、斷尾取血，測(cè)定血清總膽固醇(TC)，甘油三酯(TG)，高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平，根據(jù)試驗(yàn)前每組TG、TC含量進(jìn)行分組，以保證每組試驗(yàn)前TG、TC均值基本一致。實(shí)驗(yàn)開始，正常對(duì)照組喂飼基礎(chǔ)飼料，其余動(dòng)物喂飼高脂飼料(79%基礎(chǔ)飼料、1%膽固醇、10%蛋黃粉和10%豬油，0.5%去氧膽酸鈉)，每鼠每天平均6g，15d后取尾血，測(cè)定血清TC、TG、HDL-C水平，與喂飼高脂詞料前比以確定是否已形成高脂血癥模型。2給藥治療發(fā)酵姜黃素、底物對(duì)照物、菌體對(duì)照物均以0.5%的羧甲基纖維素鈉水溶液配成懸液。高脂血癥小鼠隨機(jī)分成六組。以高劑量(500mg/kg.d)、中劑量(200mg/kg.d)、低劑量(100mg/kg.d)的總轉(zhuǎn)化產(chǎn)物姜黃素進(jìn)行灌胃治療；設(shè)立底物對(duì)照和菌體對(duì)照治療組，采用高劑量500mg/kg.d;模型組等體積生理鹽水灌胃。在繼續(xù)喂飼高脂飼料的同時(shí)給不同治療，每天1次，給藥10d。正常組小鼠等體積生理鹽水灌胃。3標(biāo)本采集及脂質(zhì)檢測(cè)禁食約12h，摘眼球取血，酶法測(cè)定血清總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白膽固醇。動(dòng)物斷頸處死取肝，肉眼觀察肝臟病變，在相同部位取肝臟精確秤取0.lg在冰水中制成20%的勻漿，4°C，4000r*min-1離心10min，提取上清液，測(cè)定TC、TG、HDL—C。114結(jié)果(1)對(duì)血清脂質(zhì)的影響結(jié)果顯示姜黃素總轉(zhuǎn)化產(chǎn)物高、中、低劑量治療，均能顯著減低高脂血癥小鼠血清TC、TG(P<0.001)。血清TC降低幅度分別為38.7%、35.2%、37.6%;TG降低幅度分別為38.3%、26.5%、22.3%。同時(shí)血清HDL-C明顯高于模型組(P〈0.001)。而底物對(duì)照組的治療效果不明顯，血清TC、TG與模型組相比差異不明顯，可以排除非微生物引起的藥物分解產(chǎn)物的作用；菌體對(duì)照組血清TC、TG較模型組略有下降，但脂質(zhì)水平經(jīng)方差分析無(wú)顯著差異，可排除菌株的發(fā)酵產(chǎn)物和培養(yǎng)基殘留成分的干擾。因此從表4結(jié)果可見，姜黃素經(jīng)紅曲霉菌轉(zhuǎn)化后形成的總轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，能顯著降低高脂血癥小鼠的TC、TG水平，而同等濃度的底物姜黃素未見療效。表4對(duì)小鼠食餌性高脂血癥動(dòng)物血脂的影響TCTGHDL-Cmg/dlmg/dlmg/dl正常組235.0±38.9120.7±37.5192.7±79.1模,552.5±97.7**201.5±46.9s170.9±40.5高劑量組327.5±53.3'137.8±43.84298.2±97.7中劑量組362.5±54.3'148.9±33.24254.5±66.4低劑量組372.5±53.34162.2±34.8'274.5±82.4菌株對(duì)照組482.5±96.0142.2±56.6243.6±68.8底物對(duì)照組560.0±105.5195.6±37.3170.9±9.95注與正常組比較#PO.001:與模型組比較承PO.OOl(2)對(duì)高脂血癥小鼠肝臟脂質(zhì)的影響表5結(jié)果顯示姜黃素總轉(zhuǎn)化產(chǎn)物亦能降低高脂血癥小鼠肝臟TC(P<0.05)、TG(P〈0.0Q1)。而且同等濃度的底物姜黃素療效不明顯。表5對(duì)小鼠食佴性高脂血癥動(dòng)物肝臟脂質(zhì)的影響TCTGmg/g肝臟mg/g肝臟正常組4.4±0.835.6±6.2模型組8.6±2.394.9±21,9高劑量組4.9±1.228.6±9.0中劑量組6.3±1.155.3±8.7低劑量組6.9±2.0肌2±12.8菌株對(duì)照組7.2±2.552.0±13.4底物對(duì)照組8.2±1.877.2±12.8B抗LDL氧化作用方法取血漿400ml，經(jīng)序列超速離心獲得D二1.019-1.060g/ml部分，經(jīng)過(guò)S印harose6B凝膠過(guò)濾，收集LDL部分，用pH7.4PBS透析過(guò)夜，用SDS-PAGE凝膠電泳和瓊脂糖雙擴(kuò)散法檢測(cè)LDL的純度，Lowery法測(cè)定蛋白質(zhì)的濃度，濃縮到4.3mg蛋白質(zhì)/ml，4"C下儲(chǔ)存?zhèn)溆?。在O.182mg/ml的LDL氧化系統(tǒng)屮，加入10pL不同濃度的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物、底物對(duì)照、菌體對(duì)照及陽(yáng)性對(duì)照藥物姜黃素，37。C孵育17h，以IO(VLLDL加20|aLPBS作為非氧化陰性對(duì)照、LDL加0.12誦o1/1Cu2+lO(iL為氧化LDL對(duì)照。孵育結(jié)束后，蘇丹黑B37。C染色30min，2000r/min離心5分鐘，取上清1%瓊脂糖凝膠電泳(U=100Mv,I=400mA)45min,測(cè)定遷移距離，計(jì)算與LDL的相對(duì)遷移率，對(duì)LDL氧化的抑制率。對(duì)LDL氧化的抑制率％=(氧化LDL遷移距離-實(shí)驗(yàn)組遷移距離)/(氧化LDL遷移距離-非氧化組遷移距離)xlOO%結(jié)果底物對(duì)照物、菌體對(duì)照物對(duì)LDL氧化的抑制作用不明顯，原姜黃素在50pg,/ml和10(ig/ml濃度時(shí)有一定抑制作用，2嗎/ml濃度以下未見有抗氧化作用。而姜黃素轉(zhuǎn)化總產(chǎn)物在0.4-50pg/ml濃度范圍內(nèi)(相當(dāng)于含姜黃素0.004-0.5|dg/ml),能顯著抑制LDL氧化，抑制率可高達(dá)168.8%。說(shuō)明姜黃素經(jīng)紅曲霉菌轉(zhuǎn)化后，對(duì)LDL的抗氧化作用顯著增強(qiáng)(P〈0.OQl)。表6對(duì)LDL氧化的抑制率作用物的濃度(叫/ml)501020.4姜黃素轉(zhuǎn)化產(chǎn)物組137.5*146.9"168.8*137.5"菌體對(duì)照組9.68.99.010.7底物對(duì)照組10.313.83.46.9姜黃素對(duì)照組36.736.76.676.7注ft與對(duì)照組比較有顯著差異P<0.00權(quán)利要求1.利用紅曲霉菌生物轉(zhuǎn)化獲得姜黃素新的化合物群的方法，其特征在于包括以下工藝步驟(1)將紅曲霉菌株(Mpurureuswent)接種于斜面培養(yǎng)基上，26-32℃培養(yǎng)2-6天；(2)取麥芽-葡萄糖液體培養(yǎng)基加入到上述斜面培養(yǎng)物中，制備孢子懸液，孢子懸液以培養(yǎng)基重量7％-13％的接種量轉(zhuǎn)種至麥芽-葡萄糖液體培養(yǎng)基中，在溫度26-30℃下振蕩培養(yǎng)2-6天；(3)將步驟(2)所得菌液調(diào)節(jié)pH至2-5，按培養(yǎng)基重量7％-13％的接種量，接種到含姜黃素重量為0.5％—1.5％的固體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度28-32℃下培養(yǎng)18-30小時(shí)；(4)經(jīng)步驟(3)的固體培養(yǎng)物轉(zhuǎn)至26-30℃下繼續(xù)培養(yǎng)6-18小時(shí)；(5)經(jīng)步驟(4)的固體培養(yǎng)物轉(zhuǎn)至28-32℃下繼續(xù)培養(yǎng)5-9天；(6)經(jīng)步驟(5)的固體培養(yǎng)物在56—64℃溫度下烘干至恒重，粉碎、過(guò)篩，采用氯仿、乙酸乙酯或無(wú)水乙醇為溶劑，在80—90℃溫度下回流提取3—5小時(shí)，提取液濃縮至干。2.如權(quán)利要求1所述的利用紅曲霉菌生物轉(zhuǎn)化獲得姜黃素新的化合物群的方法，其特征在于步驟(1)中培養(yǎng)溫度為28-30°C，培養(yǎng)時(shí)間為3-5天。3.如權(quán)利要求1所述的利用紅曲霉菌生物轉(zhuǎn)化獲得姜黃素新的化合物群的方法，其特征在于步驟(2)中孢子懸液接種量為8%-12%，培養(yǎng)溫度為29-30。C，培養(yǎng)時(shí)間為3-5天。4.如權(quán)利要求1所述的利用紅曲霉菌生物轉(zhuǎn)化獲得姜黃素新的化合物群的方法，其特征在于步驟(3)中用冰醋酸調(diào)pH值為3-4，接種量為8%-12%，發(fā)酵溫度為29-31°C，發(fā)酵時(shí)間為22-26小時(shí)。5.如權(quán)利要求1所述的利用紅曲霉菌生物轉(zhuǎn)化獲得姜黃素新的化合物群的方法，其特征在于步驟(4)培養(yǎng)溫度為27-29°C，培養(yǎng)時(shí)間為8-16小時(shí)。6.如權(quán)利要求1所述的利用紅曲霉菌生物轉(zhuǎn)化獲得姜黃素新的化合物群的方法，其特征在于步驟(5)培養(yǎng)溫度為29-31。C，培養(yǎng)時(shí)間為6-8天。7.如權(quán)利要求1所述的利用紅曲霉菌生物轉(zhuǎn)化獲得姜黃素新的化合物群的方法，其特征在于步驟(6)烘干溫度為58—62°C，回流溫度為83_87°C，回流時(shí)間為3-4小時(shí)。8.如權(quán)利要求1所述的利用紅曲霉菌生物轉(zhuǎn)化獲得姜黃素新的化合物群的方法，其特征在于所述的固體發(fā)酵培養(yǎng)基按如下原料和方法制得早秈米加1一1.5倍重量的沸水，在i2rc高溫滅菌。9.如權(quán)利要求1所述的利用紅曲霉菌生物轉(zhuǎn)化獲得姜黃素新的化合物群的方法，其特征在于所述的斜面培養(yǎng)基組分重量百分比為可溶性淀粉3%、麥芽糖3%、蛋白胨2%、(NHO2SC￥),5%、瓊脂2%，并使pH值調(diào)節(jié)至5.0-5.5。10.如權(quán)利要求1所述的利用紅曲霉菌生物轉(zhuǎn)化獲得姜黃素新的化合物群的方法，其特征在于所述的麥芽-葡萄糖液體培養(yǎng)基組分重量百分比為葡萄糖1%，酵母膏0.3%，蛋白胨0.5%，麥芽膏0.3%，并使pH值調(diào)節(jié)至6.5。全文摘要利用紅曲霉菌生物轉(zhuǎn)化獲得姜黃素新的化合物群的方法，屬于中藥的微生物轉(zhuǎn)化
技術(shù)領(lǐng)域：
。其方法包括先在斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)，再轉(zhuǎn)入液體培養(yǎng)基上制備孢子懸液，然后接種至含有姜黃素的固體培養(yǎng)基上，在不同條件下培養(yǎng)，最后姜黃素轉(zhuǎn)化形成6個(gè)不同的新化合物群，對(duì)高脂血癥小鼠血清和肝臟的總膽固醇和甘油三酯的調(diào)節(jié)作用以及抗LDL氧化活性均優(yōu)于原姜黃素。此方法相對(duì)于化學(xué)合成，具有很高的立體選擇性、區(qū)域選擇性和基團(tuán)選擇性，能完成一些用化學(xué)方法難以進(jìn)行的反應(yīng)，具有反應(yīng)條件溫和、污染小、成本低、副產(chǎn)物少等優(yōu)點(diǎn)，而且微生物具有與動(dòng)物和人相類似的代謝途徑、能產(chǎn)生相同或類似的代謝產(chǎn)物，轉(zhuǎn)化產(chǎn)物形成過(guò)程更接近或等同于自然界。文檔編號(hào)C12P7/26GK101445812SQ20081016326公開日2009年6月3日申請(qǐng)日期2008年12月12日優(yōu)先權(quán)日2008年12月12日發(fā)明者沃興德,程?hào)|慶申請(qǐng)人:浙江中醫(yī)藥大學(xué)