專利名稱：一種紅曲屬菌株及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種紅曲菌屬菌株及該菌株制備功能性紅曲的方法，屬于微生 物發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
紅曲是我國(guó)傳統(tǒng)的藥、食兩用品，是用紅曲霉菌在大米中發(fā)酵培養(yǎng)而成，其 使用距今已有一千多年的歷史，在中藥、釀酒、發(fā)酵食品、食用色素等方面有 著廣泛的應(yīng)用。我國(guó)古代明確記載紅曲醫(yī)療功效的藥書，可以追溯至元朝吳瑞 《日用本草》所敘之"紅曲釀酒，破血行藥勢(shì)"。金元四大醫(yī)家中最有名的朱丹溪 在其《本草衍義補(bǔ)遺》中記載"紅曲，活血消食，健脾燥胃，治赤白痢，下水谷， 陳久者良"。根據(jù)中國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的理論，紅曲味甘性溫，具調(diào)節(jié)血脂濃度的功 效。近年出版的《中藥大辭典》將紅曲的主要功能定義為"活血化瘀，健脾消食， 治產(chǎn)后惡露不盡，瘀滯腹痛，食積飽脹，赤白下痢及跌打損傷"。
隨著人們生活水平的提高和人口的老齡化，高脂血癥作為一種"富貴病"成為
危害人類健康的主要?dú)⑹?。高脂血癥主要表現(xiàn)為血清膽固醇TC、甘油三酯TG 升高，高密度脂蛋白膽固醇HDL-C降低、低密度脂蛋白LDL升高的一種全身 脂代謝異常。在膽固醇合成途徑中，甲基戊二酰輔酶A (HMG-CoA)還原酶是 控制合成速度的關(guān)鍵酶，所以抑制這種酶的活性就能有效地減少或阻斷人體內(nèi) 膽固醇的合成，從而防治高脂血癥。1979年日本學(xué)者遠(yuǎn)藤章首次從紅色紅曲霉 的代謝產(chǎn)物中發(fā)現(xiàn)具有抑制HMG-CoA還原酶活性的物質(zhì)Monacolin K。 1985 年，美國(guó)科學(xué)家Goldstein和Brown進(jìn)一步找出了 Monacolin K抑制膽固醇合成 的作用機(jī)理，并因此獲得了諾貝爾獎(jiǎng)。同年，遠(yuǎn)藤章又從紅色紅曲霉中分離出 與Monacolin K結(jié)構(gòu)相似的其他活性成分，分別命名為Monacolin L、 X、 J， Dihydromevinolin禾口 Dihydromonacolin L。經(jīng)臨床驗(yàn)i正，這些Monacolins活性物 質(zhì)均能有效降低膽固醇。
功能性紅曲又稱降脂紅曲，是一種調(diào)脂有效成份Monacolin K (洛伐他汀， lovastatin)為0.4°/。以上的紅曲米。研究表明，功能性紅曲還含有大量不飽和脂 肪酸、甾醇、皂甙、異黃酮和MoncolinK同系物等多種降血脂、降低膽固醇、 抑制脂肪合成、提高機(jī)體免疫力的生理活性物質(zhì)。紅曲中的Y-氨基丁酸 (Y-GABA)還具有降低血壓的功效。1995年，Blanc博士發(fā)現(xiàn)紅曲霉能產(chǎn)生具有腎臟毒性的桔霉素(Citrinin)。 之后，為提高有應(yīng)用價(jià)值的功能因子洛伐他汀的含量，同時(shí)減少或消除紅曲產(chǎn) 品中的桔霉素，國(guó)內(nèi)外的專家學(xué)者進(jìn)行了大量的工作。保加利亞Rasheva等選育 了一株不產(chǎn)桔霉素紫色紅曲霉突變體Went CBS 109.07。日本NIfflRA等篩選得 到一個(gè)新的聚酮體合成酶基因，將其應(yīng)用于構(gòu)建不產(chǎn)桔霉素的紅曲霉菌株。江 南大學(xué)生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室篩選得到1株不產(chǎn)桔霉素、高產(chǎn)開環(huán)式洛伐他汀的 紅曲霉9901菌，用這種菌固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)的紅曲米洛伐他汀的含量可達(dá)llmg/g。 CN1065432公開了十九個(gè)紅曲菌菌種以及用其發(fā)酵制備的紅曲；CN1206341公 開了一種功能性紅曲菌快速固體培養(yǎng)的方法，菌體培養(yǎng)28天時(shí)洛伐他汀的含量 可達(dá)1.6%; CN100386425公開了不含桔霉素的功能性紅曲菌的培養(yǎng)方法； CN1908156篩選了一種紅曲屬新菌株，紅曲中洛伐他汀含量15-30mg/g，桔霉素 小于等于100ppb。因此，尋找高產(chǎn)洛伐他汀而低產(chǎn)或不產(chǎn)桔霉素的紅曲霉菌株 尤為必要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及一株由酒曲中分離得到的經(jīng)誘變篩選的高產(chǎn)洛伐他汀的紅曲霉 變異株，命名為紫紅曲(MonascusPurpureus) 9798-0802。本發(fā)明還提供了由該 菌株固體發(fā)酵生產(chǎn)功能性紅曲的方法，及所得制品。
本發(fā)明的目的是提供一種利用紫紅曲9798-0802發(fā)酵生產(chǎn)功能性紅曲的方 法，使紅曲霉的功能性代謝產(chǎn)物洛伐他汀高產(chǎn)，不產(chǎn)或低產(chǎn)桔霉素。本發(fā)明還 提供了一種功能性紅曲，其特征是洛伐他汀的含量4-25mg/g,桔霉素含量小于 等于50ppb。
具體地，本發(fā)明的高產(chǎn)洛伐他汀的紅曲霉變異株命名為紫紅曲(Monascus Purpureus) 9798-0802，該菌株于2008年9月16日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏 委員會(huì)普通微生物中心(北京)，保藏號(hào)為CGMCC2668。
本發(fā)明的菌株紫紅曲9798-0802 (CGMCC2668)具有以下微生物學(xué)特性
1、 形態(tài)學(xué)的特性在顯微鏡下觀察在固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)的菌株時(shí)，菌絲體 有隔，分枝，為多細(xì)胞結(jié)構(gòu)，內(nèi)含少量淺色油滴。直徑4.5-6.8um，分生孢子多 單生，洋梨形或近球形；子囊殼無色，透明，近球形，直徑18-30mn，殼壁較厚， 上有附屬絲，2-2.5um，少數(shù)子囊殼內(nèi)有色素呈紅色，子囊殼內(nèi)子囊孢子生成欠 佳。子囊孢子卵圓形，光滑無色或淡紅色，5.2-6.5x4-5um。
2、 培養(yǎng)學(xué)的特性該菌株在麥芽汁瓊脂平板上3(TC培養(yǎng)，菌落蔓延生長(zhǎng)，呈氈絨狀、較平坦，有少量輻射紋，白色，氣生菌絲稀疏。菌絲體初期為玉粉
白色，老熟后為石榴水紅?；鶅?nèi)菌絲淡橙紅色。在PDA上3(TC培養(yǎng)，菌落薄絨 狀，淺粉紅色，較平坦。在CYA培養(yǎng)基上生長(zhǎng)時(shí)，形成的菌落稀薄，平坦，欠 規(guī)則，呈玉粉紅色。在以上培養(yǎng)基中沒有分泌物及色素形成。
由紫紅曲9798-0802發(fā)酵生產(chǎn)功能性紅曲的方法，其特征在于分高溫和低溫 發(fā)酵培養(yǎng)紅曲霉，從而達(dá)到提高其代謝洛伐他汀的能力，包括如下步驟
a、 菌種培養(yǎng)
紫紅曲9798-0802作為生產(chǎn)用種子，30 4(TC溫度下在麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基 或PDA瓊脂培養(yǎng)基中培養(yǎng)3 15天后，經(jīng)種子培養(yǎng)基培養(yǎng)3 6天作為一級(jí)種 子或發(fā)酵罐種子液；
b、 發(fā)酵培養(yǎng)基制備
發(fā)酵培養(yǎng)基按重量比包括淀粉質(zhì)原料60-85%、大豆蛋白1-10%、糖類或 含糖物質(zhì)5-15%、酵母0.5-2%;
淀粉質(zhì)原料和大豆蛋白一起用水浸泡或直接加水蒸煮，然后加入發(fā)酵培養(yǎng) 基剩余組分，攪拌均勻后高溫滅菌，得到發(fā)酵培養(yǎng)基；
c、 生產(chǎn)發(fā)酵
所述發(fā)酵培養(yǎng)基冷卻至4(TC以下接種，接種量為10-30wt%;裝入發(fā)酵皿， 于35 4rC高溫室培養(yǎng)3-5天；待菌絲布滿整個(gè)培養(yǎng)基，進(jìn)低溫室18 22"C培 養(yǎng)8-20天；發(fā)酵產(chǎn)物經(jīng)烘干、無菌碾粉，得到本發(fā)明的功能性紅曲。
作為優(yōu)化，步驟a所述的種子培養(yǎng)基每升含營(yíng)養(yǎng)肉湯5g，月桂蛋白胨lg， 白糖9.5g， MgSO40.1 g， KH2PO42.0g， NaNO30.15 g，其余為水，用醋酸調(diào)節(jié) pH為4.0。
作為優(yōu)化，步驟b所述的淀粉質(zhì)原料于12rC滅菌半個(gè)小時(shí)后冷卻至40°C
以下接種。
作為優(yōu)化，步驟b所述的發(fā)酵培養(yǎng)基組成按重量比是淀粉質(zhì)原料70-85%、 大豆蛋白2-8%、白糖5-12%、酵母0.5-2%、 7_R6-10%。
作為優(yōu)化，步驟b所述的發(fā)酵培養(yǎng)基配方中，淀粉質(zhì)原料可以是大米、小 米、大麥、玉米中的一種或一種以上。
作為優(yōu)化，步驟c所述的接種量為20-25wty。。
上述方法制備的功能性紅曲，其特征在于洛伐他汀的含量4-25mg/g，含 桔霉素小于等于50ppb，并且可以按照常規(guī)的藥物制備工藝，直接用于制備各種片劑、膠囊或液體制劑等。
本發(fā)明提供的利用紫紅曲9798-0802發(fā)酵生產(chǎn)的功能性紅曲同時(shí)具有洛伐 他汀含量高，不產(chǎn)桔霉素或桔霉素產(chǎn)量極微的特點(diǎn)。與市售用于降血脂的他汀 類藥物相比，多種活性成分具有協(xié)同作用，可同時(shí)降血脂、降血壓、降膽固醇, 起到綜合防治高脂血癥及其相關(guān)的心腦血管疾病的目的，具有療效好、安全性 高、價(jià)格低等優(yōu)勢(shì)。
本發(fā)明提供的利用紫紅曲9798-0802發(fā)酵生產(chǎn)功能性紅曲的方法分高、低溫 培養(yǎng)紅曲霉，可提高其代謝洛伐他汀的能力，所制備的功能性紅曲中洛伐他汀 最高可達(dá)2.5mg/g。該工藝周期短，效率高，成本低廉，易于操作。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明。
實(shí)施例l:
1、 本發(fā)明使用紫紅曲9798-0802菌株，在麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基中38。C培養(yǎng)360h 后，再經(jīng)種子培養(yǎng)基35'C培養(yǎng)120h作為發(fā)酵罐種子液。
種子培養(yǎng)基配方營(yíng)養(yǎng)肉湯5%，月桂蛋白胨1%，白糖9.5%， MgSO40.1%， KH2PO42.0%， NaNO30.15%，其余為水，用醋酸調(diào)節(jié)pH為4.0。
2、 發(fā)酵培養(yǎng)基配方大米60%，大豆蛋白10%，蔗糖15%，酵母0.5%，牛 肉膏4%，水10.5%。
3、 大米、大豆蛋白用水浸泡lh后蒸煮，添加蔗糖、酵母、牛肉膏、水后105°C 滅菌90min，冷卻至3(TC以下接種液體菌種，接種量為10 wt %。
4、 在40'C高溫室內(nèi)發(fā)酵培養(yǎng)5天，入19'C低溫室繼續(xù)培養(yǎng)10天。
5、 將培養(yǎng)物高溫滅菌，8(TC降壓烘干，得到本發(fā)明的功能性紅曲。用 HPLC法測(cè)定洛伐他汀的含量為8.2mg/g。桔霉素含量為40.2ppb，測(cè)定方法見功 能性紅曲米行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(QB/T2847-2007)，下同。
實(shí)施例2:
1、 本發(fā)明使用紫紅曲9798-0802菌株，在PDA瓊脂培養(yǎng)基中35'C培養(yǎng)260h 后，經(jīng)種子培養(yǎng)基35i:培養(yǎng)90h作為一級(jí)種子，在38'C培養(yǎng)60h作為二級(jí)種子。 種子培養(yǎng)基配方同實(shí)施例l。
2、 發(fā)酵培養(yǎng)基配方大米25%，小麥60%，大豆蛋白1%，糖蜜8%，牛肉 膏4%，水2%。
3、 大米、小麥、大豆蛋白用水浸泡2h后蒸煮，添加糖蜜、牛肉膏、水后121°C
6滅菌30min，冷卻至28'C以下接種液體菌種，接種量為20wtM。
4、 在38'C高溫室內(nèi)發(fā)酵培養(yǎng)4天，入2(TC低溫室繼續(xù)培養(yǎng)15天。
5、 將培養(yǎng)物高溫滅菌，8(TC降壓烘干，得到本發(fā)明的功能性紅曲。洛伐他 汀的含量為20.5mg/g，桔霉素含量為48.4ppb。
實(shí)施例3:
1、 本發(fā)明使用紫紅曲9798-0802菌株，在PDA瓊脂培養(yǎng)基中35'C培養(yǎng)320h 后，經(jīng)種子培養(yǎng)基35'C培養(yǎng)90h作為一級(jí)種子，在38t:培養(yǎng)60h作為二級(jí)種子。 種子培養(yǎng)基配方同實(shí)施例l。
2、 發(fā)酵培養(yǎng)基配方大米73%,大豆蛋白6%，白糖10%，酵母1%，水10%。
3、 大米、大豆蛋白用水浸泡1.5h后蒸煮，添加白糖、酵母、水后ll(TC滅 菌60min，冷卻至28""C以下接種液體菌種，接種量為28 wt %。
4、 在38t:高溫室內(nèi)發(fā)酵培養(yǎng)5天，入2(TC低溫室繼續(xù)培養(yǎng)13天。
5、 將培養(yǎng)物高溫滅菌，8(TC降壓烘干，得到本發(fā)明的功能性紅曲。洛伐他 汀的含量為13.6mg/g,桔霉素含量為43.1ppb。
實(shí)施例4:
1、 本發(fā)明使用紫紅曲9798-0802菌株，在麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基中38。C培養(yǎng)260h 后，經(jīng)種子培養(yǎng)基35。C培養(yǎng)100h作為發(fā)酵罐種子液。種子培養(yǎng)基配方同實(shí)施例
lo
2、 發(fā)酵培養(yǎng)基配方小麥60%，麥麩10%,大豆蛋白8%，白糖12°/。，酵 母0.5%，水9.5%。
3、 小麥、麥麩、大豆蛋白用水浸泡lh后蒸煮，添加白糖、酵母、水后高溫 蒸汽滅菌20min,冷卻至28t:以下接種液體菌種，接種量為30wt。/。。
4、 在4rC高溫室內(nèi)發(fā)酵培養(yǎng)3天，入19"C低溫室繼續(xù)培養(yǎng)12天。
5、 將培養(yǎng)物高溫滅菌，8(TC降壓烘干，得到本發(fā)明的功能性紅曲。洛伐他 汀的含量為11.7mg/g，桔霉素含量為47.6ppb。
實(shí)施例5:
1、 本發(fā)明使用紫紅曲9798-0802菌株，在PDA瓊脂培養(yǎng)基中35'C培養(yǎng)260h 后，經(jīng)種子培養(yǎng)基35。C培養(yǎng)90h作為一級(jí)種子，在38。C培養(yǎng)60h作為二級(jí)種子。 種子培養(yǎng)基配方同實(shí)施例l。
2、 發(fā)酵培養(yǎng)基組成按重量比是大米25%，糙米20%，大麥40%，大豆蛋 白2%，白糖5%，酵母2%，水6%。3、 大米、糙米、大麥和大豆蛋白用水浸泡2h后蒸熟，添加白糖、酵母、水 后12rC滅菌30min，冷卻至28°C以下接種液體菌種，接種量為25wt%。
4、 在38。C高溫室內(nèi)發(fā)酵培養(yǎng)4天，入2(TC低溫室繼續(xù)培養(yǎng)15天。
5、 將培養(yǎng)物高溫滅菌，8(TC降壓烘干，得到本發(fā)明的功能性紅曲。洛伐他 汀的含量為25.0mg/g，桔霉素含量為46.9ppb。
實(shí)施例6:
1、 本發(fā)明使用紫紅曲9798-0802菌株，在PDA瓊脂培養(yǎng)基中35。C培養(yǎng)260h 后，經(jīng)種子培養(yǎng)基35-C培養(yǎng)90h作為一級(jí)種子，在38'C培養(yǎng)60h作為二級(jí)種子。
種子培養(yǎng)基配方同實(shí)施例l。
2、 發(fā)酵培養(yǎng)基組成按重量比是小米25%，大米50%，大豆蛋白1%，麥芽 糖5%，酵母1%，牛肉膏3%，蛋白胨7%，水8%。
3、 大米、小米和大豆蛋白用水浸泡2h后蒸熟，添加麥芽糖、酵母、牛肉膏、 蛋白胨、水后121 r滅菌30min，冷卻至28"C以下接種液體菌種，接種量為25wt%。
4、 在38'C高溫室內(nèi)發(fā)酵培養(yǎng)4天，入2(TC低溫室繼續(xù)培養(yǎng)15天。
5、 將培養(yǎng)物高溫滅菌，8(TC降壓烘干，得到本發(fā)明的功能性紅曲。洛伐他 汀的含量為15.0mg/g，桔霉素含量為46.0ppb。
實(shí)施例7:
1、 本發(fā)明使用紫紅曲9798-0802菌株，在PDA瓊脂培養(yǎng)基中35。C培養(yǎng)260h 后，經(jīng)種子培養(yǎng)基35'C培養(yǎng)90h作為一級(jí)種子，在38。C培養(yǎng)60h作為二級(jí)種子。 種子培養(yǎng)基配方同實(shí)施例l。
2、 發(fā)酵培養(yǎng)基組成按重量比是玉米80%，大豆蛋白5%,白糖10%，酵母 1%，水4%。
3、 玉米和大豆蛋白用水浸泡2h后蒸熟，添加白糖、酵母、水后115。C滅菌 50min，冷卻至28。C以下接種液體菌種，接種量為20wt%。
4、 在38'C高溫室內(nèi)發(fā)酵培養(yǎng)4天，入2(TC低溫室繼續(xù)培養(yǎng)15天。
5、 將培養(yǎng)物高溫滅菌，8(TC降壓烘干，得到本發(fā)明的功能性紅曲。洛伐他 汀的含量為16.2mg/g，桔霉素含量為43.9ppb。
實(shí)施例8:
1、本發(fā)明使用紫紅曲9798-0802菌株，在PDA瓊脂培養(yǎng)基中35。C培養(yǎng)260h 后，經(jīng)種子培養(yǎng)基35t:培養(yǎng)卯h作為一級(jí)種子，在38'C培養(yǎng)60h作為二級(jí)種子。 種子培養(yǎng)基配方同實(shí)施例l。2、 發(fā)酵培養(yǎng)基組成按重量比是小米72%，大豆蛋白8%，白糖10%，酵母 2%，水8%。
3、 小米和大豆蛋白用水浸泡1.5h后蒸熟，添加白糖、酵母、水后121'C滅 菌30min，冷卻至28'C以下接種液體菌種，接種量為25wt%。
4、 在38'C高溫室內(nèi)發(fā)酵培養(yǎng)4天，入2(TC低溫室繼續(xù)培養(yǎng)15天。
5、 將培養(yǎng)物高溫滅菌，80。C降壓烘干，得到本發(fā)明的功能性紅曲。洛伐他 汀的含量為24.2mg/g，桔霉素含量為45.3ppb。
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權(quán)利要求
1、一種紅曲屬菌株，命名為紫紅曲(Monascus Purpureus)9798-0802，由中國(guó)微生物菌種保藏委員會(huì)普通微生物中心保藏，保藏號(hào)為CGMCC 2668。
2、 一種根據(jù)權(quán)利要求l所述的菌株制備功能性紅曲的方法，包括如下步驟:a、 菌種培養(yǎng)紫紅曲9798-0802作為生產(chǎn)用種子，30 4(TC溫度下在麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基或PDA瓊脂培養(yǎng)基中培養(yǎng)3 15天后，經(jīng)種子培養(yǎng)基培養(yǎng)3 6天作為一級(jí)種子或發(fā)酵罐種子液；b、 發(fā)酵培養(yǎng)基制備發(fā)酵培養(yǎng)基按重量比包括淀粉質(zhì)原料60-85%、大豆蛋白1-10%、糖類或含糖物質(zhì)5-15°/。、酵母0.5-2%;淀粉質(zhì)原料和大豆蛋白一起用水浸泡或直接加水蒸煮，然后加入發(fā)酵培養(yǎng)基剩余組分，攪拌均勻后高溫滅菌，得到發(fā)酵培養(yǎng)基；c、 生產(chǎn)發(fā)酵所述發(fā)酵培養(yǎng)基冷卻至4(TC以下接種，接種量為10-30wt%;裝入發(fā)酵皿，于35 4rC高溫室培養(yǎng)3-5天；待菌絲布滿整個(gè)培養(yǎng)基，進(jìn)低溫室18 22。C培養(yǎng)8-20天；發(fā)酵產(chǎn)物經(jīng)烘干、無菌碾粉，得到本發(fā)明的功能性紅曲。
3、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于步驟a所述的種子培養(yǎng)基每升含營(yíng)養(yǎng)肉湯5g，月桂蛋白胨lg，白糖9.5g， MgSO40.1 g， KH2PO42.0g， NaN030.15 g，其余為水，用醋酸調(diào)節(jié)pH為4.0。
4、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于步驟b所述的淀粉質(zhì)原料于12rC滅菌半個(gè)小時(shí)后冷卻至4(TC以下接種。
5、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于步驟b所述的發(fā)酵培養(yǎng)基組成按重量比是淀粉質(zhì)原料70-85%、大豆蛋白2-8%、白糖5-12%、酵母0.5-2%、水6-10%。
6、 根據(jù)權(quán)利要求2或5所述的方法，其特征在于步驟b所述的發(fā)酵培養(yǎng)基配方中，淀粉質(zhì)原料可以是大米、小米、大麥、玉米中的一種或一種以上。
7、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于步驟c所述的接種量為20-25wt%。
8、 一種根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法制備的功能性紅曲，其特征在于洛伐他汀的含量4-25mg/g，含桔霉素小于等于50ppb。全文摘要
本發(fā)明公開了一株由酒曲中分離到的經(jīng)誘變篩選獲得的高產(chǎn)洛伐他汀的紅曲霉變異株，命名為紫紅曲(Monascus Purpureus)9798-0802。本發(fā)明同時(shí)提供利用該菌株制備功能性紅曲的方法及其產(chǎn)品。此種功能性紅曲的洛伐他汀含量高達(dá)25mg/g，桔霉素含量小于等于50ppb。本發(fā)明提供的功能性紅曲可用于治療高脂血癥及其相關(guān)的心腦血管疾病，長(zhǎng)期服用無臨床意義上的副作用。本發(fā)明提供的功能性紅曲的生產(chǎn)工藝分高、低溫培養(yǎng)紅曲霉，可提高其代謝洛伐他汀的能力，并且工藝簡(jiǎn)單、成本低廉、易于操作。
文檔編號(hào)C12N1/14GK101475912SQ200810181529
公開日2009年7月8日 申請(qǐng)日期2008年11月20日 優(yōu)先權(quán)日2008年10月13日
發(fā)明者丁予章 申請(qǐng)人:丁予章