專利名稱：一種用于養(yǎng)殖水質調控的乳酸菌微生態(tài)制劑的生產方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種乳酸菌的生產方法，尤其涉及一種用于養(yǎng)殖水質調控的乳酸菌微生 態(tài)制劑的生產方法。
背景技術：
乳酸菌與人類的關系密切，其應用范圍廣泛，于臨床醫(yī)學方面，乳酸菌作為微生態(tài) 制劑可以治療腸道功能紊亂，維持腸道菌體平衡等。應用于飼料中，可促進生長發(fā)育， 防治疾病和改善禽產品的品質；可作為食品添加劑，提高酸度改善風味，增加養(yǎng)分提高 營養(yǎng)價值，延長食品保質期，防止腐敗的作用。于集約化對蟲下養(yǎng)殖過程中大量使用，其 調控藻相、凈化水質的作用明顯，提高了對蝦養(yǎng)殖的成功率。
現(xiàn)有的培養(yǎng)乳酸菌制劑的工藝一般是將培養(yǎng)基配料后混合攪拌，然后放置在發(fā)酵裝 置中并加入菌種進行培養(yǎng)，現(xiàn)在常用的是微生物發(fā)酵行業(yè)內的標準發(fā)酵罐進行發(fā)酵。標 準發(fā)酵罐內部有夾層，主要利用水蒸汽或冷水進行加熱或降溫，這種培養(yǎng)罐對環(huán)境條件 要求高，消毒滅菌必須徹底，培養(yǎng)成本高，而且設備投資大。
另一方面，對蝦養(yǎng)殖池塘潑灑使用的乳酸桿菌微生態(tài)制劑使用量大，若能降低產品 的生產成本就能大大降低水產養(yǎng)殖投入成本。

發(fā)明內容
本發(fā)明目的是提供一種用于養(yǎng)殖水質調控的乳酸菌微生態(tài)制劑的生產方法，該方法 采用全開放的培養(yǎng)方式進行乳酸菌微生態(tài)菌劑的生產，具有設備投資少，能耗小、工藝 簡單、生產成本低的特點。
本發(fā)明的目的是通過以下技術方案來實現(xiàn)的 一種用于養(yǎng)殖水質調控的乳酸菌微生 態(tài)制劑的生產方法，包括以下步驟-
(1) 試管培養(yǎng)將乳酸菌菌種接種于裝有培養(yǎng)基的試管中，在28 30'C溫度活化培
養(yǎng)；
(2) 搖瓶培養(yǎng)將菌種的活化培養(yǎng)液接種于裝有培養(yǎng)基的三角瓶中，28 3(TC溫度
靜置培養(yǎng)；
(3) 種子罐培養(yǎng)將三角瓶中的培養(yǎng)液接種于裝有培養(yǎng)基的種子罐中，溫度25 35 。C靜置培養(yǎng)；
(4) 發(fā)酵罐培養(yǎng)將種子罐中的培養(yǎng)液接種入裝有培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，溫度25 35 'C靜置培養(yǎng)24 36小時；當發(fā)酵液最終pH為3. 0 4. 0，菌密度為50億/ml時停止發(fā) 酵；
所述步驟(3)和步驟(4)中的培養(yǎng)基的pH為5. 5 6. 5;所述的培養(yǎng)基為1000重量份 水中包含以下重量份的組分糖蜜3 5、酵母膏3 5、玉米漿O. 8 1、 KH2P04 0. l 0.3、 MgS04 0 . 3 0. 5、 NaCl 3 5、葡萄糖8 10、蛋白胨0. 8 1。
所述歩驟(2)的活化培養(yǎng)液、步驟(3)和步驟(4)中的培養(yǎng)液的接種量為培養(yǎng)基總重量 的3~5%。
所述的步驟(1)和步驟(2)中的培養(yǎng)基為改進的MRS培養(yǎng)基，其pH為5. 5 6. 5;所述 的MRS培養(yǎng)基為1000重量份水中包含以下重量份的組分蛋白胨8 10、酵母膏3 5、 葡萄糖13 15、 KH2P04 1.5 2、 MgS04 0 . 3 0. 5、 MnS04 0. 20 0. 25、 CH3COONa 3 5。
所述的MRS培養(yǎng)基在12rC下高壓滅菌20分鐘。
步驟(3)所述的種子培養(yǎng)是先進行一級種子培養(yǎng)，然后再進行二級種子培養(yǎng)。所述 的一級種子培養(yǎng)為乳酸菌菌種在較小體積的種子罐進行培養(yǎng)；所述的二級種子乳酸菌菌 種在較大體積的種子罐進行培養(yǎng)。
所述步驟(4)種子罐中的培養(yǎng)液以3 5%的接種量接入裝有培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中后，攪 拌均勻，分裝在小口瓶的塑料罐中進行靜置培養(yǎng)。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比具有以下優(yōu)點試管培養(yǎng)、搖瓶培養(yǎng)兩階段的培養(yǎng)基滅菌， 種子罐、發(fā)酵罐生產階段培養(yǎng)基不滅菌，釆用靜置培養(yǎng)方式，從而大大降低能耗；可采 用塑料罐代替微生物培養(yǎng)正式的發(fā)酵罐，從而大幅度降低生產成本的投入。以糖蜜、玉 米漿作為生產發(fā)酵培養(yǎng)基的主要原料，以降低生產成本，變廢為寶實現(xiàn)資源再次利用。
具體實施例方式
以下結合實施例和對比對本發(fā)明進行闡述，然而本發(fā)明的保護范圍并非僅僅局限于 以下實施例。所屬技術領域的普通技術人員依據(jù)本發(fā)明公開的內容，均可實現(xiàn)本發(fā)明的目的。
實施例一
一種用于養(yǎng)殖水質調控的乳酸菌微生態(tài)制劑的生產方法，包括以下步驟
(1) 試管培養(yǎng)將兩株乳酸菌菌種分別接種于兩個裝有MRS培養(yǎng)基的試管中，在28
。C溫度活化培養(yǎng)；然后合并所得培養(yǎng)液；
(2) 搖瓶培養(yǎng):將菌種的活化培養(yǎng)液以培養(yǎng)基總重量的5%的接種量接種于裝有MRS
培養(yǎng)基的三角錐瓶中，28。C溫度靜置培養(yǎng)；
(3) 種子罐培養(yǎng)將三角瓶中的培養(yǎng)液以培養(yǎng)基總重量的5%的接種量接種于裝有
4500ml的培養(yǎng)基的聚乙烯瓶中，在溫度35。C靜置24小時進行一級種子培養(yǎng)，裝滿瓶； 然后再將一級種子培養(yǎng)液按培養(yǎng)基總重量的5%的接種量接種于500L的塑料罐中，按一 級種子培養(yǎng)的條件進行二級種子培養(yǎng)；
(4) 發(fā)酵罐培養(yǎng):將種子罐中的培養(yǎng)液以培養(yǎng)基總重量的5%的接種量接入裝有培養(yǎng) 基的1000L發(fā)酵罐中，溫度35"靜置培養(yǎng)24小時；當發(fā)酵液最終pH為4. 0，菌密度為 50億/ml時停止發(fā)酵。
所述步驟(3)和步驟(4)中的培養(yǎng)基的pH為6. 5;所述的培養(yǎng)基為每升水中包含以下 重量份的組分糖蜜5g、酵母膏5 g、玉米漿1 g、 KH2P04 0. 3 g、 MgS04 0. 5 g、 NaCl 5 g、葡萄糖IO g、蛋白胨l g。
所述的步驟(1)和步驟(2)中的培養(yǎng)基為改進的MRS培養(yǎng)基，其pH為6. 5;所述的MRS 培養(yǎng)基為每升水中包含以下重量份的組分蛋白胨10 g、酵母膏5 g、葡萄糖15 g、 KH2P04 2 g、 MgS04 0. 5 g、 MnS04 0.25 g、 CH3COONa 5 g。所述的MRS培養(yǎng)基在121。C下高壓滅 菌20分鐘。
實施例二
一種用于養(yǎng)殖水質調控的乳酸菌微生態(tài)制劑的生產方法，包括以下步驟
(1) 試管培養(yǎng)將兩株乳酸菌菌種分別接種于兩個裝有MRS培養(yǎng)基的試管中，在29 "C溫度活化培養(yǎng)；然后合并所得培養(yǎng)液；
(2) 搖瓶培養(yǎng):將菌種的活化培養(yǎng)液以培養(yǎng)基總重量的4%的接種量接種于裝有MRS 培養(yǎng)基的三角瓶中，29。C溫度靜置培養(yǎng)；(3)種子罐培養(yǎng)將三角瓶中的培養(yǎng)液以培養(yǎng)基總重量的4%的接種量接種于裝有 4500ml的培養(yǎng)基的聚乙烯瓶中，在溫度30。C靜置30小時進行一級種子培養(yǎng)，裝滿瓶； 然后再將一級種子培養(yǎng)液按培養(yǎng)基總重量的4%的接種量接種于500L的塑料罐中，按一 級種子培養(yǎng)的條件進行二級種子培養(yǎng)；
(4)發(fā)酵罐培養(yǎng)將種子罐中的培養(yǎng)液以培養(yǎng)基總重量的4%的接種量接入裝有培 養(yǎng)基的1000L發(fā)酵罐后，攪拌均勻，分裝在5個小口瓶的塑料罐中，在溫度3(TC靜置培 養(yǎng)30小時；當發(fā)酵液最終pH為3.5，菌密度為50億/ml時停止發(fā)酵。
所述步驟(3)和步驟(4)中的培養(yǎng)基的pH為5. 5;所述的培養(yǎng)基為每升水中包含以下 重量份的組分糖蜜3g、酵母膏3 g、玉米漿0. 8 g、 KH2P04 0. 1 g、 MgS04 0. 3 g、 NaCl 3 g、葡萄糖8 g、蛋白胨0.8 g。
所述的步驟(1)和步驟(2)中的培養(yǎng)基為改進的MRS培養(yǎng)基，其pH為5. 5;所述的MRS 培養(yǎng)基為每升水中包含以下重量份的組分蛋白胨8 g、酵母膏3 g、葡萄糖13 g、 KH2P04 1.5 g、 MgS04 0.3 g、 MnS04 0. 20 g、 CH3C00Na 3 g。所述的MRS培養(yǎng)基在121°<3下高壓 滅菌20分鐘。
實施例三
一種用于養(yǎng)殖水質調控的乳酸菌微生態(tài)制劑的生產方法，包括以下步驟
(1) 試管培養(yǎng)將兩株乳酸菌菌種分別接種于兩個裝有MRS培養(yǎng)基的試管中，在30
"C溫度活化培養(yǎng)；然后合并所得培養(yǎng)液；
(2) 搖瓶培養(yǎng):將菌種的活化培養(yǎng)液以培養(yǎng)基總重量的3%的接種量接種于裝有MRS
培養(yǎng)基的三角瓶中，3(TC溫度靜置培養(yǎng)；
(3) 種子罐培養(yǎng)將三角瓶中的培養(yǎng)液以培養(yǎng)基總重量的3%的接種量接種于裝有
4500ml的培養(yǎng)基的聚乙烯瓶中，在溫度25。C靜置36小時進行一級種子培養(yǎng)，裝滿瓶； 然后再將一級種子培養(yǎng)液按培養(yǎng)基總重量的3%的接種量接種于500L的塑料罐中，按一 級種子培養(yǎng)的條件進行二級種子培養(yǎng)；
(4)發(fā)酵罐培養(yǎng)將種子罐中的培養(yǎng)液以培養(yǎng)基總重量的3%的接種量接入裝有 培養(yǎng)基的1000L發(fā)酵罐中，溫度25'C靜置培養(yǎng)36小時；當發(fā)酵液最終PH為3. 0，菌密 度為50億/ml時停止發(fā)酵。
所述步驟(3)和步驟(4)中的培養(yǎng)基的PH為6;所述的培養(yǎng)基為每升水中包含以下重
量份的組分糖蜜4g、酵母膏4 g、玉米漿0. 9 g、 KH2P04 0 . 2 g、 MgS04 0 . 4 g、 NaCl 4 g、葡萄糖9 g、蛋白胨0.9 g。
所述的步驟(1)和步驟(2)中的培養(yǎng)基為改進的MRS培養(yǎng)基，其pH為6;所述的MRS 培養(yǎng)基為每升水中包含以下重量份的組分蛋白胨9 g、酵母膏4 g、葡萄糖14 g、 KH2P04 1.8 g、 MgS04 0.4 g、 MnS04 0.2 g、 CH3COONa 4 g。所述的MRS培養(yǎng)基在121。C下高壓 滅菌20分鐘。
本發(fā)明提供的產品乳酸菌微生態(tài)制劑施用于養(yǎng)殖水體，使用時每lOOOral菌劑兌塘 水10公斤，攪拌均勻，全塘潑灑，依水質情況，每10 15天投加菌劑一次。施用乳酸 菌微生態(tài)制劑能顯著性改善養(yǎng)殖水體水質，促進有益藻類的生長，調控藻相，水色鮮活， 不暗淡，提高養(yǎng)殖水體溶解氧，降解有機污染物，降低有害物質N02—-N、 NH4—-N的量， 提高養(yǎng)殖成功率。
權利要求
1、一種用于養(yǎng)殖水質調控的乳酸菌微生態(tài)制劑的生產方法，包括以下步驟(1)試管培養(yǎng)將乳酸菌菌種接種于裝有培養(yǎng)基的試管中，在28～30℃溫度活化培養(yǎng)；(2)搖瓶培養(yǎng)將菌種的活化培養(yǎng)液接種于裝有培養(yǎng)基的三角瓶中，28～30℃溫度靜置培養(yǎng)；(3)種子罐培養(yǎng)將三角瓶中的培養(yǎng)液接種于裝有培養(yǎng)基的種子罐中，溫度25～35℃靜置培養(yǎng)；(4)發(fā)酵罐培養(yǎng)將種子罐中的培養(yǎng)液接種入裝有培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，溫度25～35℃靜置培養(yǎng)24～36小時；當發(fā)酵液最終pH為3.0～4.0，菌密度為50億/ml時停止發(fā)酵；所述步驟(3)和步驟(4)中的培養(yǎng)基的pH為5.5～6.5；所述的培養(yǎng)基為1000重量份水中包含以下重量份的組分糖蜜3～5、酵母膏3～5、玉米漿0.8～1、KH2PO4 0.1～0.3、MgSO4 0.3～0.5、NaCl 3～5、葡萄糖8～10、蛋白胨0.8～1。
2、 根據(jù)權利要求1所述的用于養(yǎng)殖水質調控的乳酸菌微生態(tài)制劑的生產方法，其 特征是，所述步驟(2)的活化培養(yǎng)液、步驟(3)和步驟(4)中的培養(yǎng)液的接種量為培養(yǎng)基總 重量的3~5%。
3、 根據(jù)權利要求1所述的用于養(yǎng)殖水質調控的乳酸菌微生態(tài)制劑的生產方法，其 特征是，所述的步驟(1)和步驟(2)中的培養(yǎng)基為改進的MRS培養(yǎng)基，其pH為5. 5 6. 5; 所述改進的MRS培養(yǎng)基為IOOO重量份水中包含以下重量份的組分蛋白胨8 10、酵母 膏3 5、葡萄糖13 15、 KH2P041. 5 2、 MgS04 0. 3 0. 5、 MnS04 0. 20 0. 25、 CH3COONa 3 5。
4、 根據(jù)權利要求3所述的用于養(yǎng)殖水質調控的乳酸菌微生態(tài)制劑的生產方法，其 特征是，所述的MRS培養(yǎng)基在12rC下高壓滅菌20分鐘。
5、 根據(jù)權利要求1所述的用于養(yǎng)殖水質調控的乳酸菌微生態(tài)制劑的生產方法，其 特征是，步驟(3)所述的種子培養(yǎng)是先進行一級種子培養(yǎng)，然后再進行二級種子培養(yǎng)。
6、 根據(jù)權利要求1所述的用于養(yǎng)殖水質調控的乳酸菌微生態(tài)制劑的生產方法，其 特征是，所述步驟(4)種子罐中的培養(yǎng)液以3 5%的接種量接入裝有培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中 后，攪拌均勻后靜置培養(yǎng)，或分裝在小口瓶的塑料罐中進行靜置培養(yǎng)。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用于養(yǎng)殖水質調控的乳酸菌微生態(tài)制劑的生產方法，包括以下步驟(1)試管培養(yǎng)；(2)搖瓶培養(yǎng)；(3)種子罐培養(yǎng)；(4)發(fā)酵罐培養(yǎng)將種子罐中的培養(yǎng)液接種入裝有培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，溫度25～35℃靜置培養(yǎng)24～36小時；當發(fā)酵液最終pH為3.0～4.0，菌密度為50億/ml時停止發(fā)酵；所述步驟(3)和步驟(4)中的培養(yǎng)基的pH為5.5～6.5；所述的培養(yǎng)基為每升水中包含以下重量份的組分糖蜜3～5、酵母膏3～5、玉米漿0.8～1、KH₂PO₄ 0.1～0.3、MgSO₄ 0.3～0.5、NaCl 3～5、葡萄糖8～10、蛋白胨0.8～1。該方法采用全開放的培養(yǎng)方式進行用于養(yǎng)殖水質調控的乳酸菌微生態(tài)菌劑的生產，具有設備投資少，能耗小、工藝簡單、生產成本低的特點。
文檔編號C12R1/225GK101353636SQ20081019847
公開日2009年1月28日 申請日期2008年9月11日 優(yōu)先權日2008年9月11日
發(fā)明者文國樑, 曹煜成, 李佳卓, 楊鶯鶯, 梁曉華, 洪敏娜, 陳永青 申請人:中國水產科學研究院南海水產研究所