專利名稱：一種具有降血脂活性的貽貝多糖ma及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，是一種從海洋生物紫貽貝中分離到的多糖MA及其制備方法。
背景技術(shù)：
紫貝臺(tái)貝(Mj"/m g"http://c^rov/""'W& Lamarck)為貽貝科(Mytilidae)貽貝屬(A/>>"/w5) 的海洋生物，廣泛分布于中國沿海。紫貽貝呈楔形，殼質(zhì)較輕薄，但較堅(jiān)韌，殼長(zhǎng)一般 70 90mm，呈黑褐色或紫褐色，表面光滑。紫貽貝資源豐富，產(chǎn)量高，肉味鮮美，營養(yǎng)豐 富，是高級(jí)蛋白的重要來源。除可鮮食外，又可制成罐頭、貽貝油和干制品等美味食品。 在藥用方面除用做滋補(bǔ)品和藥劑外，它又是提取維生素D的重要原料(王禎瑞.中國動(dòng)物 志.軟體動(dòng)物門.雙殼綱貽貝目.第1版.北京北京科學(xué)出版社.1997 : 50-55)。現(xiàn)代藥理 學(xué)研究認(rèn)為貽貝有多種藥理活性，包括抗動(dòng)脈粥樣硬化，降血脂，抑制血小板的凝聚從而 抑制血栓的形成，改善心肌氧和營養(yǎng)物質(zhì)的供應(yīng)及保護(hù)實(shí)驗(yàn)性心肌缺血，改善微循環(huán)和降 血壓等(邵伯芹等.貽貝多活素對(duì)大鼠腸系膜微循環(huán)的影響.中國藥理學(xué)通報(bào)，1997， i3(3):260'262)。但至今未見從海洋生物紫貽貝中分離到具有降血脂活性的貽貝多糖MA的 相關(guān)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種具有降血脂活性的貽貝多糖MA及其制備方法。
本發(fā)明從生長(zhǎng)于中國浙江海域的紫貽貝中提取分離到的貽貝多糖MA的制備方法如
下
1. 多糖的提取
將紫貽貝貝肉鮮品用攪碎機(jī)制備成勻漿，用水煮沸提取2次，第一次加3倍體積水， 提取2小時(shí)，第二次加2倍體積水，提取l小時(shí)，離心過濾，合并濾液，將濾液濃縮后加 4倍體積95°/。乙醇，攪勻，放置5小時(shí)，待沉淀完全析出，傾去上清液，沉淀中加入等體 積95%乙醇，攪勻，離心過濾，沉淀物用等體積無水乙醇洗滌3次離心抽千，再按常規(guī)經(jīng) 2次Savager法除蛋白，蒸餾水溶解后，冷凍干燥即得到貽貝多糖粗品。
2. 分離純化
將粗品溶于0.05 mo!DL-1的NaCl溶液中，離心去除不溶物后，按常規(guī)上DEAE-cellulose
柱，用0.05 mol口I/'的NaCl洗至無糖檢出時(shí)為止，流速30mL口h—、用硫酸—苯酚法跟蹤
檢測(cè)，收集洗脫部分，用截流分子量為3000的濾膜超濾杯加壓脫鹽濃縮，得到均一的貽 貝多糖MA。
貽貝多糖MA為白色絮狀物，較易溶于水和二甲基亞砜，不溶于乙醇、丙酮等有機(jī)溶 劑，硫酸-苯酚反應(yīng)呈陽性，HPGFC檢測(cè)為單一對(duì)稱峰，MA的相對(duì)分子量為112,700左右。 IR (KBr) cm": 3423 (羥基)，1636 (乙酰氨基),1154、 1080、 1021 (糖環(huán)醚鍵)，847 (a -糖苷鍵)。硫酸咔唑法測(cè)定MA的糖醛酸含量為6.759%。 (HNMR譜確定MA的端基 質(zhì)子為a -吡喃己糖(S 5. 248)。用GC-MS法對(duì)MA的酸水解產(chǎn)物進(jìn)行組分分析，結(jié)果表 明MA由阿拉伯糖、巖藻糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖、葡萄糖胺和半乳糖組成，摩爾數(shù) 比例依次為0.381、 0.081、 0.080、 97.272、 0.587、 0.968和0.631。 Sm池降解后做GC-MS 分析，檢出物有大量的葡萄糖，少量的氨基糖、甘油及微量的巖藻糖、甘露糖、半乳糖， 沒有赤蘚醇檢出。由此證明多糖MA存在的連接方式有l(wèi)口3， l口6， l口2且比例約為
80.3卯13.434:6.176，其主鏈為1D3連接，還有少量的W6連接，支鏈為1D2連接。
經(jīng)動(dòng)物試驗(yàn)表明，貽貝多糖MA具有明顯的降血脂活性，因此，可用于制備降血脂的 藥物或食品。
具體實(shí)施方式
-
現(xiàn)結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作詳細(xì)描述。
實(shí)施例1.貽貝多糖MA的制備
取生長(zhǎng)于中國浙江嵊泗海域的紫貽貝鮮品16千克，用攪碎機(jī)制備成勻槳，水煮沸提 取2次，第一次加3倍體積水，提取2小時(shí)，第二次加2倍體積水，提取l小時(shí)，離心過 濾，合并濾液，將濾液濃縮后加4倍體積95%乙醇，攪勻，放置5小時(shí)，待沉淀完全析出， 傾去上清液，沉淀中加入等體積95%乙醇，攪勻，離心過濾，沉淀物用等體積無水乙醇洗 滌3次離心抽干，再經(jīng)2次Savager法除蛋白，蒸餾水溶解后，冷凍干燥即得到貽貝多糖
粗品約960g。取該粗品約6g溶于10ml 0.05 moEI/1的NaCl溶液中，離心去除不溶物后，
上DEAE-celluIose柱，用0.05 moDL'1的NaCl洗至無糖檢出時(shí)為止，流速30 11111]11-1，用
硫酸一苯酚法跟蹤檢測(cè)，收集洗脫部分，用截流分子量為3000的濾膜超濾杯加壓脫鹽濃 縮，得到均一多糖MA約486mg。
動(dòng)物降血脂試驗(yàn)
取70只SD大鼠(購自復(fù)旦大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部)，體重180土10g，隨機(jī)分組，每組 10只，雌雄各半，共分7組正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽性藥普伐他汀組、陽性藥血脂 康組以及貽貝多糖MA低、中、高劑量組。各組以基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)一周，分別眼眶取血少量， 檢測(cè)血清總膽固醇(TCH)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)。 然后，除正常對(duì)照組仍喂食基礎(chǔ)詞料外，其余各組喂食高脂飼料4周，使其成為高脂動(dòng)物 模型。將藥物分別用蒸餾水配成相應(yīng)濃度的溶液，除正常對(duì)照組每鼠灌胃1毫升蒸餾水外， 其佘各組每鼠灌胃1毫升相應(yīng)藥液，按體重給藥劑量為普伐他汀2mg/kg、血脂康1 mg/kg、 貽貝多糖MA低、中、高劑量組分別為25mg/kg、 50mg/kg禾n 100mg/kg，每天一次，連續(xù) 4周，每周稱重一次。最后一次給藥后大鼠隔夜禁食，腹腔注射戊巴比妥鈉30mg/kg眼眶 取血，分離血清，測(cè)血清總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白。結(jié)果見表
1:
表l.各組大鼠血清中血脂水平測(cè)定結(jié)果比較(3f土5D, n=10)(單位咖。1/L)
組別 實(shí)驗(yàn)前 實(shí)驗(yàn)后
血淸總 t+油三fi旨 高密度 低密度脂血浩總膽 婦-油三酯高'密度脂低密度脂
膽固醇脂蛋白蛋白固醇蛋白蛋白
(TCH)(TG)(HDL)(LDL)(TCH)(TG)(HDL)(LDL)
正常對(duì)照1.414±0. 556±1.203±0. 481 ±1.431±0. 539±1. 202 ±0. 488 ±
0. 1300.1440. 1810. 0960. 2130. 1170. 2060. 111
模型對(duì)照1. 544 ±0. 570±1. 045±0. 473 ±6.152±1. 009 ±1. 178±2. 501±
0. 1570. 1580. 1000. 0671. 225tW0. 1柳#0. 1840. 650tt#
普伐他汀1.559±0. 543 ±1. 125±0. 493 ±3, 451 ±0. 671±1. 174±1. 381±
0. 1480.1150. 1040. 0421.183**0. 128*承0. 1290. 286**
血脂康1. 544±0. 579±1. 114±0. 471 ±3. 702 ±0. 701±1. 198 ±1.878±
0.1220.1440. 1370. 0511. 259**0. 134科0. 1880. 520*
MA低劑量1.414±0. 596 ±L 282士0. 469 ±3. 799±0. 708 ±1. 316±1.918±
0. 3130.0850. 1640. 1130. 877**0. 097+承0. 2450. 688
MA中劑量1.5i0±0. 543 ±1.269±0. 474 ±3. 606 ±0, 635 ±1. 256土1. 617±
0. 2590.0940. 1730. 1320. 850林0. 155承+0. 2800. 620承承
MA高劑量1.475±0. 565士1. 290 ±0. 470 ±3. 503 士0. 615±1.264±1.342±
0. 2320. 1090. 1510. 1151. 095林0. 091*承0, 3010. 427求承
'P〈0. 01與正常對(duì)照組比較；*P〈0. 05 **P〈0. 01與模型對(duì)照組比較。
由表1可見，大鼠喂飼高脂飼料4周后，模型對(duì)照組總膽固醇、甘油三酯、低密度脂 蛋白較喂飼基礎(chǔ)詞料的正常對(duì)照組有非常顯著的升高(PO.Ol)。各藥物治療組與模型對(duì)照 組比較，能降低大鼠總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白水平，差異顯著或非常顯著(P〈0.05 或P〈0.01)。貽貝多糖MA低、中、高三個(gè)劑量組(25mg/kg、 50mg/kg、 100mg/kg)與陽 性對(duì)照藥普伐他汀、血脂康組相比，降低總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白水平相當(dāng)， 表明貽貝多糖MA具有良好的降血脂作用，因此可用于制備降血脂的藥物或食品。本發(fā)明 對(duì)開發(fā)利用海洋藥用生物資源具有重要意義。
權(quán)利要求
1.貽貝多糖MA的制備方法，具體步驟如下1)多糖的提取將紫貽貝貝肉鮮品用攪碎機(jī)制備成勻漿，用水煮沸提取2次，第一次加3倍體積水，提取2小時(shí)，第二次加2倍體積水，提取1小時(shí)，離心過濾，合并濾液，將濾液濃縮后加4倍體積95％乙醇，攪勻，放置5小時(shí)，待沉淀完全析出，傾去上清液，沉淀中加入等體積95％乙醇，攪勻，離心過濾，沉淀物用等體積無水乙醇洗滌3次離心抽干，再經(jīng)2次Savager法除蛋白，蒸餾水溶解后，冷凍干燥即得到貽貝多糖粗品；2)分離純化將貽貝多糖粗品溶于0.05mol口L-1的NaCl溶液中，離心去除不溶物后，上DEAE-cellulose柱，用0.05mol□L-1的NaCl洗至無糖檢出時(shí)為止，流速30mL□h-1，用硫酸-苯酚法跟蹤檢測(cè)，收集洗脫部分，用截流分子量為3000的濾膜超濾杯加壓脫鹽濃縮，得到均一的貽貝多糖MA。
2. 權(quán)利要求i所述方法制備的貽貝多糖MA，其特征在于由阿拉伯糖、巖藻糖、甘露 糖、葡萄糖、半乳糖、葡萄糖胺、半乳糖胺組成，摩爾比依次為0.381、 0.081、 0.080、 97.272、 0.587、 0.968和0.631。
3. 權(quán)利要求2所述貽貝多糖MA在制備降血脂藥物或食品中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，是一種從紫貽貝中分離到的貽貝多糖MA及其制備方法。經(jīng)動(dòng)物體內(nèi)降血脂試驗(yàn)表明，貽貝多糖MA對(duì)高脂飼料誘導(dǎo)的大鼠高脂血癥有明顯的治療作用，可降低大鼠總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白水平，作用與陽性藥普伐他汀或血脂康相當(dāng)。因此，貽貝多糖MA可用于制備降血脂的藥物或食品。本發(fā)明對(duì)充分利用海洋生物資源具有重要意義。
文檔編號(hào)A23L1/33GK101357952SQ20081020002
公開日2009年2月4日 申請(qǐng)日期2008年9月18日 優(yōu)先權(quán)日2008年9月18日
發(fā)明者儲(chǔ)智勇, 文 張, 易楊華, 玲 李, 李樹林, 馬明華 申請(qǐng)人:中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)