專利名稱：：一種用于生產(chǎn)咪唑立賓的發(fā)酵培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及生物
技術(shù)領(lǐng)域：
；尤其涉及一種發(fā)酵培養(yǎng)基及其制備方法和用途。
背景技術(shù)：
：咪唑立賓(mizoribine，MZR)是1971年從霉菌Eupenicilli咖brefeldia誦的培養(yǎng)液中分離而得的一種咪唑類核苷，后在放射菌(Actinomycetes)科的Str印tomyces屬Str印tomycesbrefeldia皿m的發(fā)酵產(chǎn)物中中也有MZR，其化學(xué)名為5-羥基-1-P_D_呋喃糖基-lH-咪唑-4-羧酰胺。MZR對(duì)核酸代謝中的嘌呤合成具有抑制作用。MZR進(jìn)入機(jī)體內(nèi)，由于細(xì)胞內(nèi)、外的濃度差而向細(xì)胞內(nèi)移動(dòng)。作為一種前藥，進(jìn)人細(xì)胞后，它在腺苷激酶的作用下磷酸化，形成活性物質(zhì)MZR-5'-單磷酸化物(MZR-5'_P)，它可以競爭性地抑制IMP脫氫酶和GMP合成酶，使細(xì)胞內(nèi)的GMP減少，核酸的合成減少，從而進(jìn)一步抑制細(xì)胞的增殖?？咕V為白色念珠菌，對(duì)細(xì)菌和其他真菌作用不明顯。EP1029927A1公布了利用霉菌Eupenicilliumbrefeldia皿m(US.3888843)發(fā)酵生產(chǎn)咪唑立賓的過程從斜面培養(yǎng)基上取一環(huán)咪唑立賓產(chǎn)生菌接種于含種子培養(yǎng)基(葡萄糖1.0%，酪蛋白水解物0.2%，大豆蛋白胨0.5%，121°〇滅菌20min，上述百分比均為重量百分比)的500ml搖瓶中，裝量100ml，26t:振蕩培養(yǎng)24小時(shí)后接種于含發(fā)酵培養(yǎng)基(蔗糖6.0%、大豆蛋白胨2.0%、(NH4)2S040.5%、NaN03l.0%、KH2P040.2%、MgS047H200.02%，上述百分比均為重量百分比)的發(fā)酵罐中，通風(fēng)條件下，26-2『C培養(yǎng)96小時(shí)，經(jīng)HPLC檢測效價(jià)為750-800mg/ml。該發(fā)明公開了一種Eupenicilliumbrefeldia皿m菌產(chǎn)生的化合物MZR及其制備方法，但是使用該方法生產(chǎn)MZR，菌體生長過快，發(fā)酵后期供養(yǎng)不足，發(fā)酵培養(yǎng)產(chǎn)物產(chǎn)率低下。因此，本領(lǐng)域迫切需要提供一種使發(fā)酵產(chǎn)物咪唑立賓產(chǎn)率高的發(fā)酵培養(yǎng)基。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明旨在提供一種發(fā)酵培養(yǎng)基。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法。本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供上述發(fā)酵培養(yǎng)基的用途。在本發(fā)明的第一方面，提供了一種用于生產(chǎn)咪唑立賓的發(fā)酵培養(yǎng)基，以培養(yǎng)基的總重量計(jì)，所述的培養(yǎng)基含有1.0-5.0w/w^有機(jī)氮源、2.0-8.Ow/w^碳源、0.2_1.5w/w^天然油脂、和0.5-3.Ow/w^無機(jī)鹽；所述的有機(jī)氮源選自蛋白胨(魚粉)、大豆蛋白胨、棉籽粉、黃豆餅、豆粕、花生粕、或粉玉米漿干粉；所述的碳源選自麥芽糊精、蔗糖、乳糖、玉米淀粉、糊精、葡萄糖、或玉米粉；所述的天然油脂選自豆油、玉米油、葵花籽油、卵磷脂、或魚油；所述的無機(jī)鹽的酸根離子選自下述的一種或多種硝酸根、磷酸根、硫酸根、碳酸根；所述的無機(jī)鹽的金屬離子選自下述的一種或多種鈉、鉀、鎂、鈣。在另一優(yōu)選例中，所述的有機(jī)氮源選自蛋白胨(魚粉)、大豆蛋白胨、或粉玉米漿干粉；優(yōu)選蛋白胨(魚粉)。在另一優(yōu)選例中，所述的碳源選自糊精或葡萄糖；所述的天然油脂選自玉米油。在另一優(yōu)選例中，所述有機(jī)氮源的含量為1.0-3.0w/w%;更佳地，為2.0w/w%。在另一優(yōu)選例中，所述碳源的含量為4.Ow/w^;所述天然油脂的含量為0.5w/w%。在另一優(yōu)選例中，以培養(yǎng)基的總重量計(jì)，所述的培養(yǎng)基含有1.0-5.Ow/w^有機(jī)氮源，所述有機(jī)氮源選自蛋白胨(魚粉)、大豆蛋白胨、或粉玉米漿干粉；更佳地，含有2.Ow/w^有機(jī)氮源；2.0-8.Ow/w^碳源，所述碳源選自糊精或葡萄糖；更佳地，含有4.Ow/w^碳源；0.2-1.5w/w^玉米油；更佳地，含有0.5w/w^玉米油；禾口0.5-3.Ow/w^無機(jī)鹽以及金屬離子，所述的無機(jī)鹽是硝酸鉀、磷酸氫二鈉、硫酸鎂、和碳酸鈣；更佳地，含有1.2-1.6w/w^無機(jī)鹽以及金屬離子。在本發(fā)明的第二方面，提供了一種如上所述的培養(yǎng)基的制備方法，所述的方法包括步驟以培養(yǎng)基的總重量計(jì)，將1.0-5.0w/w^有機(jī)氮源、2.0_8.Ow/w^碳源、0.2_1.5w/w^天然油脂、和0.5-3.5w/w^無機(jī)鹽混合得到如上所述的本發(fā)明提供的培養(yǎng)基；所述的有機(jī)氮源選自蛋白胨(魚粉)、大豆蛋白胨、棉籽粉、黃豆餅、豆粕、花生粕、或粉玉米漿干粉；所述的碳源選自麥芽糊精、蔗糖、乳糖、玉米淀粉、糊精、葡萄糖、或玉米粉；所述的天然油脂選自豆油、玉米油、葵花籽油、卵磷脂、或魚油；所述的無機(jī)鹽的酸根離子選自下述的一種或多種硝酸根、磷酸根、硫酸根、碳酸根；所述的無機(jī)鹽的金屬離子選自下述的一種或多種鈉、鉀、鎂、鈣。在另一優(yōu)選例中，所述的有機(jī)氮源選自蛋白胨(魚粉)、大豆蛋白胨、或粉玉米漿干粉；優(yōu)選蛋白胨(魚粉)；所述的碳源選自糊精或葡萄糖；所述的天然油脂選自玉米油。在另一優(yōu)選例中，所述有機(jī)氮源的含量為1.0-3.Ow/w^;優(yōu)選2.Ow/w^;所述碳源的含量為4.Ow/w%;所述天然油脂的含量為0.5w/w%。在本發(fā)明的第三方面，提供了如上所述的培養(yǎng)基的用途，用于培養(yǎng)菌株Eupenicilliumbrefeldia皿m以生產(chǎn)咪唑立賓；所述咪唑立賓為結(jié)構(gòu)如式I所示的化合物5OHOH據(jù)此，本發(fā)明提供了一種使發(fā)酵產(chǎn)物咪唑立賓產(chǎn)率高的發(fā)酵培養(yǎng)基。圖1顯示了含不同有機(jī)氮源的培養(yǎng)基對(duì)咪唑立賓合成的影響。圖2顯示了含不同碳源的培養(yǎng)基對(duì)咪唑立賓合成的影響。圖3顯示了含不同天然油脂的培養(yǎng)基對(duì)產(chǎn)生咪唑立賓的影響。具體實(shí)施例方式發(fā)明人經(jīng)過廣泛而深入的研究，意外地發(fā)現(xiàn)在含有有機(jī)氮源、碳源的培養(yǎng)基中加入適量的天然油脂所獲得的發(fā)酵培養(yǎng)基用于培養(yǎng)Eupenicilliumbrefeldia皿m，可以大大提高咪唑立賓的產(chǎn)率。進(jìn)一步地，發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)選自特定的有機(jī)氮源、碳源和天然油脂所構(gòu)成的發(fā)酵培養(yǎng)基的效果更佳。定義如本文所用，"蛋白胨"是指一種外觀呈淡黃色的粉劑，具有肉香的特殊氣息。它作為微生物培養(yǎng)基的主要原料，在抗生素，醫(yī)藥工業(yè)，發(fā)酵工業(yè)，生化制品及微生物學(xué)科研等領(lǐng)域中有廣泛的應(yīng)用。不同的生物體需要特定的氨基酸和多肽，因此存在各種蛋白胨，一般來說，用于蛋白胨生產(chǎn)的蛋白包括動(dòng)物蛋白(酪蛋白、肉類)和植物蛋白(豆類)兩種。如本文所用，"蛋白胨(魚粉)"則是指以魚粉為基質(zhì)的蛋白胨，可以使用本領(lǐng)域熟知的方法制備得到，也可以通過商業(yè)渠道獲得，例如但不限于購自上海東海制藥有限公司。如本文所用，"大豆蛋白胨"是指以大豆為基質(zhì)的蛋白胨，可以使用本領(lǐng)域熟知的方法制備得到，也可以通過商業(yè)渠道獲得，例如但不限于購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。如本文所用，"棉籽粉"是指棉籽(cottonseed)，即棉花的種子經(jīng)壓軋的餅打碎後磨碎成的粉末，含有高蛋白?？梢允褂帽绢I(lǐng)域熟知的方法制備得到，也可以通過商業(yè)渠道獲得，例如但不限于購自北京華康希望生物科技有限公司。如本文所用，"黃豆餅"可以使用本領(lǐng)域熟知的方法經(jīng)榨油工藝生產(chǎn)，例如但不限于，黃豆(大豆)經(jīng)壓榨脫油后的殘餅，液壓榨油后為圓餅狀，螺旋榨油后為薄片狀；為堅(jiān)硬的塊狀物，一般先打碎后再粉碎。粉碎后的大豆餅具有香味。也可以通過商業(yè)渠道獲得，例如但不限于購自山東棗莊市豆制品研究中心。如本文所用，"豆粕(soybeanmeal)"是指大豆用低溫(40_6(TC)浸提法提取油6脂后的殘粕副產(chǎn)品，呈粗粉狀。其適口性一般比大豆餅差?？梢允褂帽绢I(lǐng)域熟知的方法制備得到，也可以通過商業(yè)渠道獲得，例如但不限于購自山東棗莊市豆制品研究中心。如本文所用，"花生粕"是指從花生仁經(jīng)壓榨提煉油料后的產(chǎn)品，富含植物蛋白。可以使用本領(lǐng)域熟知的方法制備得到，也可以通過商業(yè)渠道獲得，例如但不限于購自北京華康希望生物科技有限公司。如本文所用，"玉米漿干粉"是指玉米漿經(jīng)低溫、瞬間噴霧干燥而成的粉末狀物質(zhì)，蛋白質(zhì)含量^42%，水份《10%，在生物發(fā)酵過程中作水溶性植物蛋白及水溶性維生素等營養(yǎng)元素補(bǔ)充劑?？梢允褂帽绢I(lǐng)域熟知的方法制備得到，也可以通過商業(yè)渠道獲得，例如但不限于購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。如本文所用，"玉米漿"可以使用本領(lǐng)域熟知的方法制備，例如但不限于，將玉米粒先用亞硫酸浸泡，浸泡液濃縮而制成的黃褐色液體。玉米漿中含有豐富的可溶性蛋白、生長素和一些前體物質(zhì)，含大約40%_50%固體物質(zhì)。如本文所用，"麥芽糊精"是指是由淀粉經(jīng)低度水解、凈化、噴霧干燥制成的白色或微帶淺黃色陰影的無定形粉末，不含游離淀粉的淀粉衍生物。具有麥芽糊精的特殊氣味，無異味；不甜或微甜，無嗅，無異味。英文簡稱為MD。具有粘性大、增稠性強(qiáng)、溶解性好、速溶性佳、載體性好、發(fā)酵小、吸潮性低、無異味、甜度低，人體易于消化吸收、低熱、低脂肪等特點(diǎn)，是食品工業(yè)中最理想的基礎(chǔ)原料之一，并在造紙工業(yè)、日用化工、精細(xì)化工、醫(yī)藥工業(yè)中得到廣泛的應(yīng)用?？梢允褂帽绢I(lǐng)域熟知的方法制備得到，也可以通過商業(yè)渠道獲得，例如但不限于購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。如本文所用，"糊精"是指淀粉在受到加熱、酸或淀粉酶作用下發(fā)生分解和水解時(shí)，將大分子的淀粉首先轉(zhuǎn)化成為小分子的中間物質(zhì)，這時(shí)的中間小分子物質(zhì)被稱為糊精。干糊精是一種黃白色的粉末，它不溶于酒精，而易溶于水，溶解在水中具有很強(qiáng)的粘性，淀粉質(zhì)原料在進(jìn)行蒸煮時(shí)，淀粉分子受熱分解，首先就生成了糊精。這時(shí)如果加入一滴碘時(shí)，溶液就會(huì)呈紅紫色，而不是象淀粉遇碘那樣呈藍(lán)色。生產(chǎn)上通常把淀粉質(zhì)原料在高溫、高壓下進(jìn)行蒸煮，使淀粉細(xì)胞徹底破裂，淀粉由顆粒狀態(tài)變?yōu)橐汉隣詈倪^程就叫做原料的糊化?？梢允褂帽绢I(lǐng)域熟知的方法制備得到，也可以通過商業(yè)渠道獲得，例如但不限于購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。如本文所用，"玉米淀粉(cornstarch)"又稱玉蜀黍淀粉。俗名六谷粉。白色微帶淡黃色的粉末?？梢允褂帽绢I(lǐng)域熟知的方法制備得到，例如但不限于，將玉米用0.3%亞硫酸浸漬后，通過破碎、過篩、沉淀、干燥、磨細(xì)等工序而制成。也可以通過商業(yè)渠道獲得，例如但不限于購自上海諾泰化工有限公司。如本文所用，"玉米粉"又稱玉米面、苞米面，俗稱棒子面，是玉米加工成的粉狀成品糧。產(chǎn)品規(guī)格按皮胚含量分為精制粉和普通粉兩種前者是以去皮提胚后的玉米或玉米糝為原料；后者是以清理后的玉米為原料。可以使用本領(lǐng)域熟知的方法制備，例如但不限于，將玉米清理、著水潤糧、脫皮、磨粉(或先破糝、提胚再磨粉)、篩分、成品包裝等工序制成。也可以通過商業(yè)渠道獲得，例如但不限于購自上海諾泰化工有限公司。如本文所用，"豆油"是指來自于大豆的油脂，可以使用本領(lǐng)域熟知的方法制備得到，也可以通過商業(yè)渠道獲得，例如但不限于購自上海日清油脂有限公司。如本文所用，"玉米油"是指來自于玉米的油脂，可以使用本領(lǐng)域熟知的方法制備7得到，也可以通過商業(yè)渠道獲得，例如但不限于購自上海融氏有限公司玉米胚胎油。如本文所用，"葵花籽油"是指來自于葵花籽的油脂，可以使用本領(lǐng)域熟知的方法制備得到，也可以通過商業(yè)渠道獲得，例如但不限于購自Molinos純正葵花籽油。如本文所用，"魚油"是指魚體內(nèi)的全部油類物質(zhì)的總稱，它包括體油、肝油和腦油。可以使用本領(lǐng)域熟知的方法制備得到，例如但不限于作為魚粉加工的副產(chǎn)品，即為魚及其廢棄物經(jīng)蒸、壓榨和分離而得到。魚油的主要成分是甘油三脂、磷甘油醚、類脂、脂溶性維生素，以及蛋白質(zhì)降解物等。也可以通過商業(yè)渠道獲得，例如但不限于購自上海日清油脂有限公司。發(fā)酵培養(yǎng)基本發(fā)明提供的發(fā)酵培養(yǎng)基是用于培養(yǎng)Eupenicilliumbrefeldia皿m的培養(yǎng)基，它包含有機(jī)氮源、碳源、無機(jī)鹽和金屬離子。所述培養(yǎng)基中有機(jī)氮源選自蛋白胨(魚粉)、大豆蛋白胨、棉籽粉、黃豆餅、豆粕、花生粕、或粉玉米漿干粉，其中優(yōu)選為蛋白胨(魚粉)、大豆蛋白胨、或粉玉米漿干粉，更優(yōu)選蛋白胨(魚粉)，培養(yǎng)基中有機(jī)氮源的用量為1.0-5.0%，較優(yōu)為1.0_3.0%，最優(yōu)為2.0%。所述碳源選自麥芽糊精、蔗糖、乳糖、玉米淀粉、糊精、葡萄糖、或玉米粉，優(yōu)選為葡萄糖和糊精，更優(yōu)選葡萄糖，其含量為2.0-8.0%，最優(yōu)為4.0%。所述天然油脂選自豆油、玉米油、葵花籽油、卵磷脂(蛋黃素，Lecithin)、或魚油，其含量為0.2-1.5%，最優(yōu)為0.5%。培養(yǎng)基中還需加入磷酸鹽、硝酸鹽等無機(jī)鹽、鎂等金屬離子和碳酸鈣。培養(yǎng)基中還可加入維生素、氨基酸等微量元素。本發(fā)明采用菌株為Eupenicilliumbrefeldianum，優(yōu)選購自中國普通微生物菌種保藏中心保藏的CGMCC3.5698。本發(fā)明提到的上述特征，或?qū)嵤├岬降奶卣骺梢匀我饨M合。本案說明書所揭示的所有特征可與任何組合物形式并用，說明書中所揭示的各個(gè)特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特別說明，所揭示的特征僅為均等或相似特征的一般性例子。本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)在于采用本發(fā)明的發(fā)酵培養(yǎng)基生產(chǎn)咪唑立賓，咪唑立賓產(chǎn)生菌及其突變株菌絲體不會(huì)生長過旺，或菌絲結(jié)球，發(fā)酵產(chǎn)物咪唑立賓的產(chǎn)率高，效價(jià)較現(xiàn)有技術(shù)中的培養(yǎng)基提高了67.7%。下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則所有的百分?jǐn)?shù)、比率、比例、或份數(shù)按重量計(jì)。本發(fā)明中的重量體積百分比中的單位是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的，例如是指在100毫升的溶液中溶質(zhì)的重量。除非另行定義，文中所使用的所有專業(yè)與科學(xué)用語與本領(lǐng)域熟練人員所熟悉的意義相同。此外，任何與所記載內(nèi)容相似或均等的方法及材料皆可應(yīng)用于本發(fā)明方法中。文中所述的較佳實(shí)施方法與材料僅作示范之用。以下實(shí)施例中，相對(duì)效價(jià)計(jì)算公式為相對(duì)效價(jià)=(HPLC測定的改良培養(yǎng)基產(chǎn)物峰面積+實(shí)施例1的標(biāo)準(zhǔn)的產(chǎn)物的峰面積)X100%。以下實(shí)施例中，檢測發(fā)酵產(chǎn)物效價(jià)的HPLC采用的色譜儀是Waters510型高效液相色譜儀，色譜柱是C18柱，檢測器是Waters996PhotodiodeArrayDetector,流動(dòng)相是KH2P04:乙腈(30:70)，流速是1.0ml/min，進(jìn)樣量是20iil，柱溫是室溫。實(shí)施例1發(fā)酵培養(yǎng)方法及標(biāo)準(zhǔn)效價(jià)的制定將Eupenicilliumbrefeldia皿mCPCC460021種子取出活化后接種斜面培養(yǎng)基(PDA培養(yǎng)基去皮馬鈴薯煮沸30min，取濾液30%、葡萄糖2%、麥精0.5%、瓊脂1.8%，余量為水，PH自然，12rC滅菌20min)，將接種菌種的斜面置于28t:恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)6天，得到成熟的孢子，然后成熟的孢子接種于裝有30ml種子培養(yǎng)基(葡萄糖2.0%、糊精2.0%、棉籽粉0.7%、玉米漿干粉0.4%、牛肉膏0.3%、酵母提取物0.1%、CaC030.2%，余量為水，pH7.0，12rC滅菌20min)的250ml搖瓶中，在28。C、220rpm搖床上培養(yǎng)2天，得到成熟的種子，得到的種子以5X的接種量接入裝有40ml發(fā)酵培養(yǎng)基(以該培養(yǎng)基的總重量計(jì)，蔗糖6.0%、大豆蛋白胨2.0%、(NH4)2S040.5%、NaN03l.0%、KH2P040.2%、MgS04*7H200.02X，余量為水，pH6.5)的250ml搖瓶中，置于28°C、220rpm搖床繼續(xù)培養(yǎng)96小時(shí)，取發(fā)酵液lml，離心取上清用HPLC進(jìn)行咪唑立賓含量的測定。實(shí)施例2-8不同有機(jī)氮源考察斜面培養(yǎng)基和種子培養(yǎng)基同實(shí)施例1。發(fā)酵培養(yǎng)基中的碳源為葡萄糖，含量4%;天然油脂為豆油，含量0.5%，無機(jī)鹽以及金屬離子如實(shí)施例l，有機(jī)氮源的含量為2%，其物質(zhì)分別如下<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>發(fā)酵終點(diǎn)用HPLC檢測產(chǎn)物效價(jià)，結(jié)果見圖1。結(jié)果表明，蛋白胨(魚粉)、大豆蛋白胨和玉米漿干粉效果較佳，其中蛋白胨(魚粉)的效果最好。實(shí)施例9-15不同碳源考察斜面培養(yǎng)基和種子培養(yǎng)基同實(shí)施例1。發(fā)酵培養(yǎng)基中的有機(jī)氮源為大豆蛋白胨，含量2%;天然油脂為豆油，含量0.5%，無機(jī)鹽以及金屬離子如實(shí)施例l，碳源的含量為4%，其物質(zhì)分別如下<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>發(fā)酵終點(diǎn)用HPLC檢測產(chǎn)物效價(jià)，結(jié)果見圖2。結(jié)果表明，葡萄糖和糊精的效果較佳，其中又以葡萄糖最佳。實(shí)施例16-20不同天然油脂考察斜面培養(yǎng)基和種子培養(yǎng)基同實(shí)施例1。發(fā)酵培養(yǎng)基中的有機(jī)氮源為蛋白胨(魚粉)，含量2%;碳源為葡萄糖，含量4%，無機(jī)鹽以及金屬離子如實(shí)施例l，天然油脂的含量為1%，其物質(zhì)分別如下，其中以沒有加入天然油脂的培養(yǎng)基作為對(duì)照，卵磷脂購自上海日清油脂有限公司<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>發(fā)酵終點(diǎn)用HPLC檢測產(chǎn)物效價(jià)，結(jié)果見圖3。結(jié)果表明，加入玉米油的效果最好。實(shí)施例21發(fā)酵培養(yǎng)基I斜面培養(yǎng)基和種子培養(yǎng)基同實(shí)施例1。發(fā)酵培養(yǎng)基I:葡萄糖4.0%、玉米油0.5%、蛋白胨(魚粉)2.0%、KN031.0%、Na2HP040.2%、MgS047H200.02X禾PCaC030.2%。p朋.5，121。C滅菌20min。發(fā)酵過程同實(shí)施例l，相對(duì)效價(jià)為167.7%。實(shí)施例22發(fā)酵培養(yǎng)基II斜面培養(yǎng)基和種子培養(yǎng)基同實(shí)施例1。發(fā)酵培養(yǎng)基II:糊精4.0%、玉米油0.5%、蛋白胨(魚粉)2.0%、KN031.0%、Na2HP040.2%、MgS047H200.02X禾PCaC030.2%。p朋.5，121。C滅菌20min。發(fā)酵過程同實(shí)施例l，相對(duì)效價(jià)為132.8%。實(shí)施例23發(fā)酵培養(yǎng)基III斜面培養(yǎng)基和種子培養(yǎng)基同實(shí)施例1。發(fā)酵培養(yǎng)基111:糊精4.0%、玉米油0.5%、大豆蛋白胨2.0%、1(冊(cè)31.0%、Na2HP040.2%、MgS047H200.02X禾PCaC030.2%。p朋.5，121。C滅菌20min。發(fā)酵過程同實(shí)施例l，相對(duì)效價(jià)為117.8%。實(shí)施例24發(fā)酵培養(yǎng)基IV斜面培養(yǎng)基和種子培養(yǎng)基同實(shí)施例1。發(fā)酵培養(yǎng)基IV:葡萄糖4.0%、玉米油0.5%、大豆蛋白胨2.0%、KN031.0%、Na2HP040.2%、MgS047H200.02X禾PCaC030.2%。p朋.5，121。C滅菌20min。發(fā)酵過程同實(shí)施例l，相對(duì)效價(jià)為132.1%。實(shí)施例25發(fā)酵培養(yǎng)基V斜面培養(yǎng)基和種子培養(yǎng)基同實(shí)施例1。發(fā)酵培養(yǎng)基V:葡萄糖6.0%、玉米油1.0%、蛋白胨(魚粉)2.0%、KN031.0%、Na2HP040.2%、MgS047H200.02%禾口CaC030.2%。p朋.5，121。C滅菌20min。發(fā)酵過程同實(shí)施例l，相對(duì)效價(jià)為142.3%。以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非用以限定本發(fā)明的實(shí)質(zhì)技術(shù)內(nèi)容范圍，本發(fā)明的實(shí)質(zhì)技術(shù)內(nèi)容是廣義地定義于申請(qǐng)的權(quán)利要求范圍中，任何他人完成的技術(shù)實(shí)體或方法，若是與申請(qǐng)的權(quán)利要求范圍所定義的完全相同，也或是一種等效的變更，均將被視為涵蓋于該權(quán)利要求范圍之中。權(quán)利要求一種用于生產(chǎn)咪唑立賓的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于，以培養(yǎng)基的總重量計(jì)，所述的培養(yǎng)基含有1.0-5.0w/w％有機(jī)氮源、2.0-8.0w/w％碳源、0.2-1.5w/w％天然油脂、和0.5-3.0w/w％無機(jī)鹽；所述的有機(jī)氮源選自蛋白胨(魚粉)、大豆蛋白胨、棉籽粉、黃豆餅、豆粕、花生粕、或粉玉米漿干粉；所述的碳源選自麥芽糊精、蔗糖、乳糖、玉米淀粉、糊精、葡萄糖、或玉米粉；所述的天然油脂選自豆油、玉米油、葵花籽油、卵磷脂、或魚油；所述的無機(jī)鹽的酸根離子選自下述的一種或多種硝酸根、磷酸根、硫酸根、碳酸根；所述的無機(jī)鹽的金屬離子選自下述的一種或多種鈉、鉀、鎂、鈣。2如權(quán)利要求l所述的培養(yǎng)基，其特征在于，所述的有機(jī)氮源選自蛋白胨(魚粉)、大豆蛋白胨、或粉玉米漿干粉；優(yōu)選蛋白胨(魚粉)。3.如權(quán)利要求l所述的培養(yǎng)基，其特征在于，所述的碳源選自糊精或葡萄糖；所述的天然油脂選自玉米油。4.如權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基，其特征在于，所述有機(jī)氮源的含量為1.0-3.Ow/w^;優(yōu)選2.Ow/w%。5.如權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基，其特征在于，所述碳源的含量為4.Ow/w^;所述天然油脂的含量為0.5w/w%。6.如權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基，其特征在于，以培養(yǎng)基的總重量計(jì)，所述的培養(yǎng)基含有1.0-5.Ow/w^有機(jī)氮源，所述有機(jī)氮源選自蛋白胨(魚粉)、大豆蛋白胨、或粉玉米漿干粉；優(yōu)選2.Ow/w%;2.0-8.Ow/w^碳源，所述碳源選自糊精或葡萄糖；優(yōu)選4.Ow/w%;0.2-1.5w/w^玉米油；優(yōu)選0.5w/w%;禾口0.5-3.Ow/w^無機(jī)鹽以及金屬離子，所述的無機(jī)鹽是硝酸鉀、磷酸氫二鈉、硫酸鎂、和碳酸鈣；優(yōu)選1.2-1.6w/w%。7.—種如權(quán)利要求l-6任一所述的培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于，所述的方法包括步驟以培養(yǎng)基的總重量計(jì)，將1.0-5.0w/w^有機(jī)氮源、2.0-8.Ow/w^碳源、0.2_1.5w/w^天然油脂、和0.5-3.5w/w^無機(jī)鹽混合得到如權(quán)利要求1-6任一所述的培養(yǎng)基；所述的有機(jī)氮源選自蛋白胨(魚粉)、大豆蛋白胨、棉籽粉、黃豆餅、豆粕、花生粕、或粉玉米漿干粉；所述的碳源選自麥芽糊精、蔗糖、乳糖、玉米淀粉、糊精、葡萄糖、或玉米粉；所述的天然油脂選自豆油、玉米油、葵花籽油、卵磷脂、或魚油；所述的無機(jī)鹽的酸根離子選自下述的一種或多種硝酸根、磷酸根、硫酸根、碳酸根；所述的無機(jī)鹽的金屬離子選自下述的一種或多種鈉、鉀、鎂、鈣。8.如權(quán)利要求7所述是制備方法，其特征在于，所述的有機(jī)氮源選自蛋白胨(魚粉)、大豆蛋白胨、或粉玉米漿干粉；優(yōu)選蛋白胨(魚粉)；所述的碳源選自糊精或葡萄糖；所述的天然油脂選自玉米油。9.如權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述有機(jī)氮源的含量為1.0-3.Ow/w%;優(yōu)選2.0w/w%;所述碳源的含量為4.0w/w%;所述天然油脂的含量為0.5w/V%。10.如權(quán)利要求1-6任一所述的培養(yǎng)基的用途，其特征在于，用于培養(yǎng)菌株Eupenicilliumbrefeldia皿m以生產(chǎn)咪唑立賓；所述咪唑立賓為結(jié)構(gòu)如式I所示的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>式I全文摘要本發(fā)明公開了一種用于生產(chǎn)咪唑立賓的發(fā)酵培養(yǎng)基及其制備方法和用途。以培養(yǎng)基的總重量計(jì)，所述的培養(yǎng)基含有1.0-5.0w/w％有機(jī)氮源、2.0-8.0w/w％碳源、0.2-1.5w/w％天然油脂、和0.5-3.0w/w％無機(jī)鹽及金屬離子；所述的有機(jī)氮源選自蛋白胨(魚粉)、大豆蛋白胨、棉籽粉、黃豆餅、豆粕、花生粕、或粉玉米漿干粉；所述的碳源選自麥芽糊精、蔗糖、乳糖、玉米淀粉、糊精、葡萄糖、或玉米粉；所述的天然油脂選自豆油、玉米油、葵花籽油、卵磷脂、或魚油；所述的無機(jī)鹽選自下述的一種或多種硝酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽、碳酸鹽；所述的金屬離子選自下述的一種或多種鈉、鉀、鎂、鈣。文檔編號(hào)C12P17/16GK101760489SQ20081020755公開日2010年6月30日申請(qǐng)日期2008年12月23日優(yōu)先權(quán)日2008年12月23日發(fā)明者朱寶泉,胡海峰,費(fèi)卓婭申請(qǐng)人:上海醫(yī)藥工業(yè)研究院