專利名稱：：一種針對不同人群基因的儲存與檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及的一種針對不同年齡層人群生理特點設(shè)計的基因儲存與檢測的技術(shù)服務(wù)，屬于基因?qū)W、基因儲存、基因檢測領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：現(xiàn)代醫(yī)學(xué)證明，一切疾病均與基因有關(guān)?；蚴荄NA分子上具有遺傳效應(yīng)的功能片斷，它是生命的密碼，記錄和傳遞著生命的遺傳信息，決定著人的生、老、病、死。當(dāng)前，由于遺傳因素和環(huán)境惡化或病毒感染等外界因素的共同作用，人類的基因在生命的不同階段、不同位點上都有可能發(fā)生變化，而這些變化最終可能導(dǎo)致多種疾病的發(fā)生。醫(yī)學(xué)諾貝爾獎獲得者、基因?qū)W專家利根川進(jìn)曾指出"人類所有的疾病都與基因受損有關(guān)"，因此，對我們每一個人來說，保存一份健康的、高質(zhì)量的、完整的生命信息是非常必要的?；騼Υ婢褪且环N保存生命信息的生物科學(xué)技術(shù)?；騼Υ媸遣捎脽o水乙醇基因儲存技術(shù)，將基因凍存在液氮深低溫儲存罐中(-196°C),保證其生物活性，在此條件下基因可以永久保存，并可多次使用。基因儲存的意義在人生的某一階段將具有自身獨特編碼的個人基因以物質(zhì)形態(tài)方式保存起來，所保存的基因具有編碼特異性生物結(jié)構(gòu)和生物學(xué)活性功能，可無限擴(kuò)增?；騼Υ嫒缤瑸樽约航⒘艘粋€"生命坐標(biāo)點"，通過相配套的基因檢測，可與自身今后不同時期的基因進(jìn)行比對，及時發(fā)現(xiàn)基因突變趨勢和突變位點，以采取有效措施預(yù)防或避免某些基因缺陷和突變所引發(fā)的疾病?；騼Υ娌閷黹_展的基因治療和基因康復(fù)提供了物質(zhì)基礎(chǔ)。疾病易感基因是與疾病發(fā)生密切相關(guān)的一類基因，攜帶疾病易感基因的人在沒有采取針對性預(yù)防措施的情況下，患病的風(fēng)險性比正常人明顯增加。因此，采用分子技術(shù)檢測人體細(xì)胞中是否含有某類疾病易感基因就可以評估個體患某種疾病的風(fēng)險度，從而為疾病的預(yù)防提供早期干預(yù)的機(jī)會?；驒z測即對人體疾病相關(guān)(易感)基因的分子檢測技術(shù)?；驒z測，就是取被檢測者的口腔脫落細(xì)胞，通過基因芯片對被檢測者細(xì)胞中的DNA相應(yīng)分子作檢測，分析它所含有的各種疾病易感基因情況，從而使人能及時了解自己的基因信息，預(yù)測身體患疾病的風(fēng)險，從而改善自己的生活環(huán)境和生活習(xí)慣。通過基因檢測真正掌握自己的生命密碼，以致自己身體的健康走勢，主動地把握健康未來，使我們非常理性、科學(xué)地選擇適合自己的生活方式。讓我們得到相關(guān)疾病的預(yù)防常識，個性化的用藥方案和保健方案。通過基因檢測，醫(yī)生對疾病的診斷和分類將更為精細(xì)和準(zhǔn)確?；驒z測的特點1、準(zhǔn)確性檢測結(jié)果準(zhǔn)確率達(dá)99.99%;2、可靠性每個位點或基因的檢測均設(shè)置內(nèi)對照，并有復(fù)驗程序；3、可行性在一張芯片上同時完成多種疾病基因的檢測；4、微量化所需樣本少，取材僅是少量口腔粘膜細(xì)胞或人體組織樣本。5、安全性可采用擦拭口腔黏膜脫落細(xì)胞或拔取帶有毛囊細(xì)胞的毛發(fā)的采集方法，采集方法安全、簡便?；驒z測的意義切實做到"早預(yù)防、早發(fā)現(xiàn)、早治療"，從而降低疾病發(fā)病率、殘疾率、致死率；正確鎖定有家族遺傳病史的高危人群，減少不必要的危機(jī)感，節(jié)約醫(yī)療開支，提升生活品質(zhì)；了解個人體質(zhì)，有效的針對先天遺傳的特質(zhì)，擬定個性化的健康管理策略，包括個性化的飲食與營養(yǎng)建議。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，提供一種針對不同人群基因的儲存與檢測方法。為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明釆用如下技術(shù)方案一種針對不同人群基因的儲存與檢測方法，包括如下步驟(1)采集人的細(xì)胞樣本；(2)將細(xì)胞樣本進(jìn)行基因提??；(3)對提取基因進(jìn)行質(zhì)量檢測及疾病易感基因檢測；(3)對基因采用無水乙醇儲存，將基因凍存在液氮-196t:深低溫儲存罐中，24小時定期補(bǔ)充液氮，保證冰存的穩(wěn)定性；(4)向客戶提供基因檢測結(jié)果報告和易感基因檢測報告。本發(fā)明的儲存和檢測方法適用于老年人、嬰幼兒、兒童、少年、成年男性、成年女性或孕婦。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果本發(fā)明針對不同年齡層人群的生理特點，經(jīng)過國內(nèi)外知名的基因?qū)W、醫(yī)學(xué)、藥學(xué)、營養(yǎng)學(xué)界的專家共同研究、設(shè)計出了針對各種年齡層相應(yīng)生理特點和體質(zhì)的基因儲存與檢測的方法，把基因儲存與基因檢測有機(jī)的結(jié)合起來，為不同的人群提供個性化、差異性的基因儲存與檢測服務(wù)，更早期、更準(zhǔn)確地監(jiān)測某些重大遺傳性疾病易感基因的變異情況，預(yù)測患病風(fēng)險的概率，根據(jù)提供的基于基因檢測報告的健康生活指導(dǎo)報告，主動采取有針對性的預(yù)防措施，形成良好的生活習(xí)慣，預(yù)防、避免或延緩相應(yīng)疾病的發(fā)生或發(fā)展，并有利于醫(yī)院為這些人群提供個性化醫(yī)療服務(wù)，最終提高生活質(zhì)量；并可繪制出家族基因型圖譜，為家族及后代的基因診斷提供對照，有利于優(yōu)生優(yōu)育，保證下一代孩子的健康、聰明；并為基因治療、基因康復(fù)提供依據(jù)；并可通過基因儲存與檢測尋找有特殊意義的基因，造福家族、造福全人類。具體實施例方式實施例1l.口腔粘膜上皮細(xì)胞采樣與送檢l.1.l樣本采集者為樣本提供者采集細(xì)胞樣本(樣本采集者可由公司專業(yè)的服務(wù)人員或為樣本提供者本人)。樣本采集者先在樣品采樣袋上寫好樣本編號、樣本提供者姓名及采集日期。字跡書寫需清晰，不留空格。l.1.2采樣前，樣本提供者需用清水徹底漱口。樣本采集者在采樣前需徹底洗凈雙手，擦干后，戴好一次性PE手套(薄塑料消毒手套)。l.1.3沿采集袋右側(cè)虛線剪開(或整齊撕開)采集袋封口，手拿采樣刷尾端后1/3處，取出采樣刷(避免手或其他部位觸及采樣刷前端毛刷處，以避免污染)。l.1.4將采樣刷前端毛刷部分伸入口腔內(nèi)一側(cè)內(nèi)頰黏膜部按前、后、上、下方向輕輕旋轉(zhuǎn)或摩擦2030次，約2分鐘后，換至另一側(cè)內(nèi)頰部重復(fù)前述操作約2分鐘后，取出采樣刷。l.1.5采樣完成，將采樣刷自然晾干，(可將采樣刷置于茶杯或其他器皿上，將采樣刷前端毛刷部分懸空)，約2分鐘后，將采樣刷放入采樣袋內(nèi)。l.1.6取另一根采樣刷進(jìn)行同一供者的樣本采集(重復(fù)上述第4、5步驟)。l.1.7將采樣袋封口內(nèi)側(cè)預(yù)放的貼有雙面膠的折頁翻出，撕下雙面膠膠貼，將采樣袋開口處粘貼牢靠。l.1.8由樣本采集員負(fù)責(zé)妥善保管含有相應(yīng)供者細(xì)胞的采樣袋，在不超過35'C的運輸溫度下，立即送達(dá)公司基因檢測中心。由樣本提供者自行采集樣本的，將含有相應(yīng)供者細(xì)胞的采樣袋放入快遞信封，按公司郵寄給供者的信封下方所注明的公司地址，快遞到公司基因檢測中心。2.DNA提取2.1將刮取口腔粘膜上皮細(xì)胞的兩支采樣刷的刷頭分別浸入含lml生理鹽水的1.5mleppendorf管中，輕輕攪動.使刷頭上粘附的細(xì)胞落入生理鹽水中。2000r/min離心5分鐘，棄上清。2.2重復(fù)步驟1。2.3兩管細(xì)胞并入一管內(nèi)，并加入600pl生理鹽水和蛋白酶K溶液(終濃度為200ug/ml)，混勻后置42"C消化1小時(振蕩)。加入1/4體積的5mol/LNaCl溶液，用力搖動15秒后置于4°C15-20分鐘13000r/min離心3分鐘。2.4移上清液于另一1.5mleppendorf管中。加入等體積無水乙醇.混勻.置室溫20分鐘。lOOOOr/min離心10分鐘，棄上清。2.5沉淀用lml70%乙醇洗滌2次，室溫干燥。2.6DNA溶于50jxlTE溶液中(lOmmoI/LTris-cl，0.lmmol/LEDTA，pH8.0)3.DNA質(zhì)量檢測3.1分光光度計使用前預(yù)熱穩(wěn)定至少15分鐘，先用100plTE校正零點。3.2吸取l[ilDNA樣品，加TE至100[il混勻(稀釋倍數(shù)為100),轉(zhuǎn)入分光光度計的石英比色杯中，在260nm和280nm分別讀出光密度，根據(jù)OD260值計算DNA樣品濃度。[計算公式DNA樣品濃度Og/ml^OD260x50xDNA稀釋倍數(shù)，DNA樣品純度=OD260/OD280]4.(疾病易感)基因檢測4.1針對不同年齡層人群生理特點設(shè)計的基因儲存與檢測項目基因檢測適用人群檢測項目相關(guān)基因嬰幼兒、兒童、少年、中年、新婚夫婦、孕婦、老年血壓相關(guān)AGT,ACE,eNOS，ET-2,NPRC，ANP<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>4.2PCR擴(kuò)增相應(yīng)的疾病易感基因4.2.1從試劑盒中取出陰性擴(kuò)增液、陽性擴(kuò)增液、相應(yīng)疾病易感基因的擴(kuò)增液，分別在每管中加入Taq酶管溶液0.^1;4.2.2在陰性擴(kuò)增液管中加入陰性對照管溶液3ul，混勻；4.2.3在陽性擴(kuò)增液管中加入陽性對照管溶液3ul,混勻4.2.4分別在擴(kuò)增液管中各加入抽提好的DNA樣品上清液3d,混勻4.2.5將各管放入PCR儀中，按各個基因的PCR條件擴(kuò)增.4.3擴(kuò)增的基因產(chǎn)物與芯片雜交4.3.1取各管PCR擴(kuò)增產(chǎn)物各5nl，加入到同一個0.2ml的薄壁管中(自備)，用PCR儀98。C熱變性5分鐘，取出后迅速放入冰盒，-20'<:放置。4.3.2取出基因芯片，做好樣品編號，在雜交艙中加入預(yù)雜交液溶液200nl，于44'C恒溫箱靜置5分鐘，同時將洗液1按實驗需要的量放入1.5毫升離心管(自備)中于44。C恒溫箱中預(yù)熱；4.3.3從恒溫箱中取出基因芯片，吸除雜交艙中溶液，取無菌的1.5ml離心管(自備)，從雜交緩沖液瓶中吸出150pl雜交緩沖液，加入已變性的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物混合物，混勻，將液體全部加入到雜交艙中(加液時應(yīng)注意無氣泡產(chǎn)生)；4.3.4將基因芯片迅速放入44'C恒溫箱中，保溫30分鐘。從恒溫箱中取出基因芯片，吸除雜交艙中溶液。4.3.5在雜交艙中加入200|il已預(yù)熱的洗液1，44t:恒溫箱靜置5分鐘，然后吸除。再重復(fù)此步驟兩次。4.3.6在雜交艙中加入洗液2溶液200W，室溫放置2分鐘；4.3.7吸除雜交艙中溶液，向雜交艙中加入抗體液溶液200ul，室溫放置20分鐘；4.3.8吸除雜交艙中溶液，向雜交艙中加入洗液2溶液200ul，室溫靜置5分鐘。再重復(fù)此步驟一次；4.3.9吸除雜交艙中溶液，向雜交艙中加入洗液3溶液200ul，室溫放置2分鐘；4.3.10吸除雜交艙中溶液，向雜交艙中加入顯色液溶液200ul，44'C恒溫箱避光放置30分鐘4.3.11吸除雜交艙中溶液，小心揭除雜交艙，將顯色載玻片顯色區(qū)小心用蒸餾水沖洗一下，置44"C烘干；4.4芯片掃描將顯色載玻片面朝下扣在生物芯片識讀儀的片槽上掃描，得到芯片的圖像。4.5掃描結(jié)果分析芯片檢測圖像經(jīng)ArrayDoctor軟件分析可自動輸出檢測結(jié)果。4.6根據(jù)基因檢測結(jié)果報告，由特聘基因?qū)W、醫(yī)學(xué)、藥學(xué)、營養(yǎng)學(xué)界的專家共同制定出針對該檢測者的健康生活指導(dǎo)報告，并簽署姓名。4.7每五年按時(檢測日期的次年同日的前一個月)向儲戶提供一次易感基因檢5.DNA儲存5.1DNA的液氮深低溫保存將存放有基因的凍存管放入凍存盒，將凍存盒放入凍存架，將凍存架放入盛有液氮的液氮罐。液氮罐在使用前必須認(rèn)真進(jìn)行檢査。首先要檢査外殼有無凹陷，真空排氣口是否完好，若被碰壞，真空度則降低，嚴(yán)重進(jìn)氣時則不能保溫。檢査罐內(nèi)部，若有異物必須取出以防內(nèi)槽被腐蝕。5.2液氮的監(jiān)測與充填24小時全天候自動監(jiān)測液氮罐相關(guān)參數(shù)，及時補(bǔ)充液氮。開關(guān)時要盡量減少蓋塞磨損。補(bǔ)充液氮時先打開門窗。對于新罐、已解凍復(fù)溫及處于干燥狀態(tài)的罐在使用前先充入少量液氮預(yù)冷，需緩慢進(jìn)行裝填，直至近熱平衡(氣化不劇烈)后再注滿液氮。充填液氮時，不要將液氮倒在真空排氣口上，以免造成真空度下降。充裝液氮時，宜用泵或長管漏斗，其充注管要插至接近容器底部，并須在容器中部留有空隙。注入容器內(nèi)的液面高度不能超過頸管下端平面。操作中應(yīng)避免人體與液氮接觸，以免引起凍傷。操作及取放冷凍物品時要輕拿輕放。5.3液氮罐的檢査和維護(hù)液氮罐在使用過程中要經(jīng)常進(jìn)行檢査。檢査時可以用眼觀，也可以用手觸摸外殼，發(fā)現(xiàn)外表掛霜，應(yīng)當(dāng)停止使用，更換新罐。特別是頸管內(nèi)壁附霜結(jié)冰時應(yīng)將液氮取出，讓其自然溶化。在容器初次入冷凍物品后的23個小時，落實專人定時觀察容器外表面是否出現(xiàn)冷凝水或有結(jié)霜現(xiàn)象，如出現(xiàn)異常情況時及時維修或更換液氮罐。容器如需清洗，先用中性洗滌劑洗刷，再用不高于5(TC的溫水沖洗干凈。洗后應(yīng)使用內(nèi)膽干燥(采用熱風(fēng)吹干，其溫度不高于50°C)并冷卻至常溫后，再充入液氮。容器應(yīng)放在陰涼、通風(fēng)、干燥的環(huán)境中；長期貯存時應(yīng)注意定時檢査液面和容器外表面有無冷凝水和結(jié)霜現(xiàn)象，如出現(xiàn)異常情況時及時維修或更換液氮罐。5.4液氮罐的貯存與運輸液氮罐應(yīng)當(dāng)存放在通風(fēng)良好的陰涼處，不要在太陽光下直曬，防止傾倒。液氮罐在運輸時必須裝木架在內(nèi)并墊好軟墊，要固定牢靠。罐與罐之間要用填充物，防止顛簸撞擊，嚴(yán)防傾倒。裝御車要嚴(yán)防碰撞，禁止拖拉。5.5DNA儲存相關(guān)結(jié)果資料的反饋5.5.1檢測中心填寫《DNA質(zhì)量報告單》并及時反饋給儲戶本人。5.5.2檢測中心每年按時(儲存日期的次年同日，以后以此類推)根據(jù)實際的DNA儲存情況向儲戶提供一次《基因儲存質(zhì)控樣本檢測報告》。權(quán)利要求1.一種針對不同人群基因的儲存與檢測方法，其特征在于包括如下步驟(1)采集人的細(xì)胞樣本；(2)將細(xì)胞樣本進(jìn)行基因提??；(3)對提取基因進(jìn)行質(zhì)量檢測及疾病易感基因檢測；(3)對基因采用無水乙醇儲存，將基因凍存在液氮-196℃深低溫儲存罐中，24小時定期補(bǔ)充液氮，保證冰存的穩(wěn)定性；(4)向客戶提供基因檢測結(jié)果報告和易感基因檢測報告。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述人包括老年人、嬰幼兒、兒童、少年、成年男性、成年女性或孕婦。全文摘要本發(fā)明公開了一種針對不同人群基因的儲存與檢測方法。包括(1)采集人的細(xì)胞樣本；(2)將細(xì)胞樣本進(jìn)行基因提??；(3)對提取基因進(jìn)行質(zhì)量檢測及疾病易感基因檢測；(3)對基因采用無水乙醇儲存，將基因凍存在液氮-196℃深低溫儲存罐中，24小時定期補(bǔ)充液氮，保證冰存的穩(wěn)定性；(4)向客戶提供基因檢測結(jié)果報告和易感基因檢測報告。本發(fā)明針對不同年齡層人群的生理特點，設(shè)計出了針對各種年齡層相應(yīng)生理特點和體質(zhì)的基因儲存與檢測的方法，把基因儲存與基因檢測有機(jī)的結(jié)合起來，為不同的人群提供基因儲存與檢測服務(wù)，監(jiān)測某些重大遺傳性疾病易感基因的變異情況，預(yù)測患病風(fēng)險的概率，提供基因檢測報告；并為基因治療、基因康復(fù)提供依據(jù)。文檔編號C12Q1/68GK101381778SQ20081021179公開日2009年3月11日申請日期2008年9月25日優(yōu)先權(quán)日2008年9月25日發(fā)明者敏陸申請人:浙江金時代生物技術(shù)有限公司