專利名稱：：生產(chǎn)生物有機(jī)鉻的方法及其專用菌株的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種生產(chǎn)生物有機(jī)鉻的方法及其專用菌株。
背景技術(shù)：
：GTF(GlucoseToleranceFactor)即葡萄糖耐量因子，是一種能維持動(dòng)物血液中葡萄糖水平正常的物質(zhì)，它能增加動(dòng)物的葡萄糖耐受量和提高胰島素的活性功能，促進(jìn)胰島素與細(xì)胞膜受體結(jié)合，進(jìn)而刺激動(dòng)物機(jī)體組織對(duì)葡萄糖的吸收。目前尚無提取到完全純化的GTF組分的報(bào)道，To印fer等人將富鉻酵母進(jìn)行分離提純后對(duì)GTF的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了推測(cè)GTF是由三價(jià)鉻離子與煙酸、甘氨酸、谷氨酸和半胱氨酸形成的低分子量的八面體配合物；在260nm處有特征吸收峰；GTF以三價(jià)鉻為中心，與兩個(gè)煙酸以吡啶氮反式配位，氨基酸用來滿足其余的配位數(shù)。三價(jià)鉻作為人體必需的微量元素，參與機(jī)體細(xì)胞的葡萄糖吸收、氧化以及依賴胰島素的糖、蛋白質(zhì)和脂肪代謝，主要是通過增加胰島素與受體的結(jié)合力、受體數(shù)量、受體的磷酸化等方式協(xié)助胰島素而發(fā)揮作用。鉻可激活胰島素受體激酶的活性，也可抑制磷酸化酪氨酸磷酸酶，磷酸化酪氨酸磷酸酶可減除胰島素受體的活性。鉻對(duì)胰島素受體激酶的激活作用和對(duì)胰島素受體酪氨酸磷酸酯酶的抑制作用導(dǎo)致其可以使胰島素受體的磷酸化作用增加及胰島素敏感性增強(qiáng)。糖代謝是在胰島素和鉻的共同作用下完成的，缺乏二者中任何一個(gè)都將導(dǎo)致糖尿病。補(bǔ)鉻已成為對(duì)糖尿病患者的營(yíng)養(yǎng)干預(yù)措施，鉻不僅可以作為糖尿病患者的輔助用藥，也可以單獨(dú)使用并己顯示出一定的療效。富鉻酵母是GTF的重要來源，部分酵母菌體具有較高的絡(luò)耐受性，它能夠?qū)⒋嬖谟谄渖姝h(huán)境中的一定無機(jī)鉻離子吸收到體內(nèi)并將其轉(zhuǎn)化為有機(jī)鉻結(jié)合蛋白，該鉻結(jié)合蛋白即為GTF。富鉻酵母中發(fā)揮生物學(xué)作用的是以三價(jià)有機(jī)鉻為活性中心的有機(jī)鉻絡(luò)合物GTF，目前尚未發(fā)現(xiàn)比較完善的活性GTF檢測(cè)方法?，F(xiàn)有的GTF檢測(cè)方法是用三價(jià)有機(jī)鉻離子的含量來間接定量葡萄糖耐量因子含量。在檢測(cè)前首先要對(duì)樣品進(jìn)行處理，將菌種懸液中的有機(jī)鉻和無機(jī)鉻分開，再利用檢測(cè)鉻的方法測(cè)出酵母所富集的有機(jī)鉻量，富鉻酵母中鉻的有機(jī)化程度直接反映著酵母發(fā)酵制備GTF的能力。常用的分離有機(jī)鉻與無機(jī)鉻的方法是利用氨水或有機(jī)溶劑等。富鉻酵母中的GTF耐酸、耐熱，能夠溶于氨水及乙醇等有機(jī)溶劑。Mirsky使用0.1M的氨水提取GTF，提取率達(dá)到44%以上。目前鉻的檢測(cè)主要采用分光光度法、催化動(dòng)力分光光度法、原子吸收光譜法、中子活化法等。大量研究表明，酵母中含有的三價(jià)鉻多以GTF形式存在。不同鉻源生物效價(jià)差異很大，無機(jī)鉻的生物活性低，吸收率僅為2%左右。近年來，有機(jī)鉻產(chǎn)品的開發(fā)成為了醫(yī)藥及保健食品的熱點(diǎn)，化學(xué)合成的有機(jī)鉻產(chǎn)品有吡啶羧酸鉻、煙酸鉻等。酵母鉻是利用酵母生物轉(zhuǎn)化無機(jī)鉻得到的有機(jī)鉻GTF，是通過微生物的發(fā)酵制得的，經(jīng)濟(jì)方便，毒害作用小，生物活性高，易獲得，應(yīng)用潛力巨大。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)于用富鉻酵母生產(chǎn)GTF的研究還主要處在菌株篩選及搖瓶發(fā)酵試驗(yàn)階段，有少數(shù)學(xué)者已經(jīng)進(jìn)行了發(fā)酵罐生產(chǎn)的研究。在菌株篩選方面，紫外線誘變、微波誘變、Co60誘變和化學(xué)誘變等誘變方法已經(jīng)被應(yīng)用到富鉻酵母菌株的選育中，大量研究結(jié)果顯示，啤酒酵母的富鉻能力最強(qiáng)，且有機(jī)鉻含量也最高。在搖瓶發(fā)酵方面，主要從發(fā)酵培養(yǎng)基配方、發(fā)酵時(shí)間、發(fā)酵溫度、接種量、培養(yǎng)基裝量，發(fā)酵初始pH值、加鉻方式、搖床轉(zhuǎn)速以及加鉻濃度等方面研究酵母富鉻發(fā)酵的效果。GTF產(chǎn)量(即有機(jī)鉻含量)受到發(fā)酵菌株、有無誘變及誘變方式、添加的無機(jī)銘的形式、無機(jī)鉻的添加方式、是否添加其它金屬等因素的影響。大量研究顯示各種誘變形式都能夠不同程度的提高酵母菌株富集鉻的能力；發(fā)酵常采用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基為麥芽汁培養(yǎng)基，其成本較低，且可以在其中適當(dāng)添加一些酵母菌生長(zhǎng)所需的其它營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，如尿素，玉米漿等；三氯化鉻作為鉻源添加在培養(yǎng)基中的效果較好；且分批流加鉻源的富鉻效果較一次性加入好；在培養(yǎng)基中加入適量的金屬元素鉺、鑭等也能夠不同程度的提高富鉻效果，但是稀土元素多對(duì)人有害，所以在生產(chǎn)GTF過程中不應(yīng)該予以采用。目前高產(chǎn)GTF的最佳條件為釀酒酵母經(jīng)過紫外線誘變、Co60誘變得到菌株S.cerevisiaeFNX-10，在麥芽汁培養(yǎng)基中一次性加入適量的三氯化鉻，經(jīng)過發(fā)酵可以得到生物量為l.1372g菌粉/100mL發(fā)酵后的菌懸液，同時(shí)菌體中有機(jī)鉻含量達(dá)到1848ug有機(jī)鉻/g菌粉。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種生產(chǎn)生物有機(jī)鉻的方法及其專用菌株。本發(fā)明所提供的釀酒酵母(5"accA9iYM7/cescerew'w'ae)，名稱為YSI-3.7，已于2008年10月7日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱CGMCC，地址為北京市朝陽區(qū)大屯路)，保藏號(hào)為CGMCCNo.2687。釀酒酵母(6"acc/aro7^cescerew's/ae)YSI-3.7CGMCCNo.2687是以酵母泥中分離得到的Y-3作為出發(fā)菌株，利用空間誘變和離子注入法誘變得到的，具有高產(chǎn)有機(jī)鉻(GTF)的能力。本發(fā)明提供的生產(chǎn)有機(jī)鉻的方法，是發(fā)酵釀酒酵母(feccAai^/^cesce潛j'w.ae)YSI-3.7CGMCCNo.2687，得到有機(jī)鉻。發(fā)酵釀酒酵母(6^cc力aro/z^cescerew'w'ae)YSI-3.7CGMCCNo.2687可采用任何含有鉻源的酵母常用培養(yǎng)基，如YEPD培養(yǎng)基。所述鉻源具體可為三價(jià)鉻無機(jī)化合物，如三氯化鉻。所述培養(yǎng)中采用的培養(yǎng)基的組成如下鉻離子(1.13-1.88)X10—3摩爾/升、酵母浸出粉5-15克/升、蛋白胨15-25克/升、葡萄糖15-25克/升，所述溶劑是水;所述培養(yǎng)基的pH是5.0-6.0。所述培養(yǎng)中采用的培養(yǎng)基的組成具體如下鉻離子1.56X10—3摩爾/升、酵母浸出粉10克/升、蛋白胨20克/升、葡萄糖20克/升，所述溶劑是水；所述培養(yǎng)基的pH是5.6。所述鉻離子具體可為三價(jià)鉻離子。所述發(fā)酵的條件可為發(fā)酵溫度為25-3rC、轉(zhuǎn)速為150-300r/min、旋轉(zhuǎn)半徑為12ram、發(fā)酵時(shí)間為25-35小時(shí)。所述發(fā)酵的條件具體可為發(fā)酵溫度為28。C、轉(zhuǎn)速為200r/min、旋轉(zhuǎn)半徑為12mm、發(fā)酵時(shí)間為30小時(shí)。本發(fā)明公開了一種生產(chǎn)生物有機(jī)鉻的方法及其專用菌株。本發(fā)明提供的菌株為釀酒酵母(6^cc力sro歷/cescerew'w'ae)YSI-3.7CGMCCNo.2687，具有高產(chǎn)有機(jī)鉻的能力。本發(fā)明提供的生產(chǎn)有機(jī)鉻的方法，是培養(yǎng)釀酒酵母(&cc力S2^^cescerew'w'ae)YSI-3.7CGMCCNo.2687，得到有機(jī)鉻。采用本發(fā)明的方法生產(chǎn)有機(jī)鉻，試驗(yàn)條件簡(jiǎn)單、成本較低、有機(jī)鉻產(chǎn)量較高。本發(fā)明具有重要的經(jīng)濟(jì)意義和社會(huì)意義。以下的實(shí)施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。圖l為不同注入離子注入劑量下YS-3的存活率。具體實(shí)施例方式下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。YEPD固體培養(yǎng)基酵母浸出粉10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，蒸餾水1000ml，pH5.6，瓊脂20g。實(shí)施例l、釀酒酵母YSI-3.7的獲得和鑒定一、培養(yǎng)基的配制種子培養(yǎng)基酵母浸出粉10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，蒸餾水1000ml，pH5.6。發(fā)酵培養(yǎng)基三氯化鉻1.56X10—3摩爾/升、酵母浸出粉10克/升、蛋白胨2C克/升、葡萄糖20克/升，溶劑是水；pH是5.6。二、菌株YSI-3.7的獲得1、菌株Y-3的獲得菌株Y-3是從北京啤酒廠提供的酵母泥中分離得到的，具體步驟如下(1)采樣從新鮮啤酒酵母泥中無菌取樣l克左右，放入滅菌的生理鹽水中，充分混勻。(2)稀釋反復(fù)用無菌生理鹽水稀釋樣液至l(T6。(3)倒平板取1毫升步驟-(2)的稀釋液加入培養(yǎng)皿中，傾注溶化的45'C的YEPD固體培養(yǎng)基，緩搖使菌液與培養(yǎng)基混勻，將平板置于28"C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)30-40小時(shí)。(4)觀察及挑選菌落觀察菌落生長(zhǎng)情況，挑取菌落大、分離顯著的單一菌落進(jìn)一步進(jìn)行純化，方法同步驟(3)，用液態(tài)培養(yǎng)基將菌株進(jìn)行生長(zhǎng)復(fù)壯。得到一株菌，將其命名為菌株Y-3。2、菌株Ys-3的獲得菌株Y-3于2007年9月12日搭載實(shí)踐8號(hào)航天育種衛(wèi)星，運(yùn)行14天返回地面后，進(jìn)行GTF高產(chǎn)突變菌株的篩選，得到菌株Ys-3。3、釀酒酵母YSI-3.7的獲得離子注入誘變育種是近年來發(fā)展起來的微生物誘變育種方法，以較小的生理損傷得到較高的突變率、較廣的突變譜，具有設(shè)備簡(jiǎn)單、使用方便，成本低廉、對(duì)人體和環(huán)境無害等優(yōu)點(diǎn)。離子注入誘變育種的作用機(jī)理為利用離子注入設(shè)備產(chǎn)生高能離子束(40-60keV)并注入生物體引起遺傳物質(zhì)的永久改變，然后從變異菌株中選育優(yōu)良菌株。1)離子注入?yún)?shù)的優(yōu)化將經(jīng)過活化的Ys-3用接種環(huán)挑取1環(huán)于種子培養(yǎng)基中，28°C200r/m培養(yǎng)15h后制成種子液，吸取0.05ml種子液均勻涂布于無菌平皿中，經(jīng)無菌風(fēng)吹干成菌膜。鏡檢無細(xì)胞重疊后，進(jìn)行離子注入。注入能量為50keV，注入劑量分別為1X2.6X1013icon/cm2，2X2.6X1013icon/cm2，3X2.6X1013icon/cm2，4X2.6Xl013icon/cm2，5X2.6X1013icon/cm2，6X2.6X1013icon/cm2(2.6X1013icon/cm2》單位劑量)；同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照。注入后用lml無菌生理鹽水沖洗平板，分別對(duì)經(jīng)不同劑量離子注入處理的平皿和空白對(duì)照平皿進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)，計(jì)算致死率，結(jié)果見圖l。結(jié)果顯示注入劑量為4X2.6Xl(^icon/cm2時(shí)，菌株的存活率最高，致死率為73%。后續(xù)試驗(yàn)選擇50keV、4X2.6X1013icon/cmM乍為離子注入?yún)?shù)。2)菌株YSI-3.7的獲得將經(jīng)過活化的Ys-3用接種環(huán)挑取l環(huán)于種子培養(yǎng)基中，28°C、200r/m、i2，旋轉(zhuǎn)半徑的搖床上培養(yǎng)15h后得到種子液，吸取0.05ml種子液均勻涂布于無菌平皿中，經(jīng)無菌風(fēng)吹干成菌膜。鏡檢無細(xì)胞重疊后，進(jìn)行離子注入。注入能量為50keV，注入劑量為4X2.6X1013icon/cm2;同時(shí)做空白對(duì)照。注入后用lml生理鹽水沖洗平板，10倍稀釋，吸取0.2ml均勻涂布于含有5.125g/L三氯化鉻的固體YEPD平板中，28"C靜止培養(yǎng)2-3d，挑取平皿中生長(zhǎng)較大，光滑圓潤(rùn)的單菌落編號(hào)。將編號(hào)的酵母菌株和釀酒酵母Ys-3(對(duì)照)分別用接種環(huán)挑取1環(huán)于種子培養(yǎng)基中，28°C、200r/m、12mra旋轉(zhuǎn)半徑的搖床上培養(yǎng)15h，得到種子液；按照10%的接種量(體積比)向發(fā)酵培養(yǎng)基中接種種子液，2S。C、200r/m、12mm旋轉(zhuǎn)半徑的搖床上發(fā)酵30h。然后進(jìn)行生物量測(cè)定、有機(jī)鉻含量測(cè)定。實(shí)驗(yàn)設(shè)置3個(gè)重復(fù)，結(jié)果采用平均值士標(biāo)準(zhǔn)差。①生物量測(cè)定將發(fā)酵后的菌懸液以5000r/m離心10min，棄去上清液，去離子水洗滌沉淀物，離心(條件同前)，重復(fù)洗滌離心兩次，收集菌體，8CTC烘干至恒重，即得酵母菌粉。每100ml發(fā)酵后的菌懸液得到的酵母菌粉的重量即為酵母生物量，單位g菌粉/100ml發(fā)酵后的菌懸液。②有機(jī)鉻含量的測(cè)定用原子吸收法測(cè)定有機(jī)鉻含量，原子吸收標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作方法如下吸取1.000g/L的鉻標(biāo)準(zhǔn)液(一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì))5ml于100ml容量瓶中，用去離子水定容，配置成濃度為50mg/L的鉻標(biāo)準(zhǔn)使用液。分別吸取標(biāo)準(zhǔn)使用液O、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00ml于50ml容量瓶中，分別加入10%NH4C1溶液(質(zhì)量百分比)5ml,1%HN03(質(zhì)量百分比)5ml，用去離子水定容，此即為標(biāo)準(zhǔn)系列(含鉻為0、1,00、2.00、3.00、4.00、5.00mg/L的標(biāo)準(zhǔn)液)。原子吸收條件為燈電流10mA，狹縫寬O.7nra，燃燒器高度9mm，波長(zhǎng)357.9nm，空氣流量15.0L/min，乙炔流量2.8L/min。以鉻含量為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。精確稱取0.lg步驟①制備的酵母菌粉于50ml離心管中，加入10mlNH3.H20，在37。C搖床中以200r/m提取3h，5000r/m離心5min，取上清液加入6ml麗03，于電熱板上16(TC趕煙30min;再加入2ml朋03和0.5mlHC104，裝罐，放入微波消解儀中消解，消解后取出放涼，加2ml麗03和5ml(NH4)2S208，于電熱板上160。C氧化30min;傾入含有5mlNH4C1的50ral容量瓶中，用去離子水定容。得到了一株菌株，該菌株具有最高的有機(jī)鉻含量，將該菌株命名為菌株YSI-3.7。菌株YSI-3.7的生物量測(cè)定結(jié)果和有機(jī)鉻含量測(cè)定結(jié)果見表1。表l菌株YSI-3.7的生物量和有機(jī)鉻含量(mean±SD,n=3)生物量有機(jī)鉻含量菌株(g酵母菌粉/100ral發(fā)酵后的菌懸液)(M有機(jī)鉻/g酵母菌粉)YSI-3.70.932510.78±3.00Ys-3(對(duì)照)0.931948.72±2.92注*表中數(shù)據(jù)后大小寫字母分別代表0.01，0.05水平誘變后菌株的顯著性差異。結(jié)果表明菌株YSI-3.7的生物有機(jī)鉻含量達(dá)2510.78±3.OOPg有機(jī)鉻/g酵母菌粉，比對(duì)照菌株提高了28.84%。三、菌株YSI-3.7的鑒定1、菌落特征的觀察取菌株YSI-3.7的培養(yǎng)液，劃線接種在YEPD固體培養(yǎng)基上，28。C培養(yǎng)3-5d，肉眼觀察菌落特征。菌落特征:乳白色、不透明、濕潤(rùn)；表面光滑、有光澤、平坦、邊緣整齊。2、細(xì)胞形態(tài)特征的觀察將菌株YSI-3.7接種在YEPD固體培養(yǎng)基上，28。C培養(yǎng)3-5d。在潔凈載玻片上滴加一滴無菌水，用接種環(huán)取少許菌苔與無菌水混勻，蓋上蓋玻片，在顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)。細(xì)胞形態(tài)特征呈圓形或橢圓形，能產(chǎn)生子囊孢子，形成孢子慢，孢子較太。3、生理生化特征(1)糖發(fā)酵試驗(yàn)將0.6%酵母浸汁分裝于含杜氏管的試管中，0.1Mpa滅菌15min。用無菌水分別將測(cè)試用的糖類配成10%的溶液，煮沸15min，冷卻。用無菌移液管吸取一定量的糖液分裝于試管內(nèi)的酵母浸汁中，使糖濃度達(dá)到2%;將新鮮的菌株YSI-3.7接入杜氏管中，28'C培養(yǎng)，每天觀察結(jié)果。如果杜氏管頂部有氣體，則為陽性反應(yīng)，說明菌株YSI-3.7能發(fā)酵該糖。試驗(yàn)結(jié)果菌株YSI-3.7可以發(fā)酵如下單糖葡萄糖、果糖、甘露糖、半乳糖;菌株YSI-3.7可以發(fā)酵如下雙糖麥芽糖、蔗糖；三糖棉籽糖、麥芽三糖，弱發(fā)酵棉籽糖；菌株YSI-3.7不能發(fā)酵乳糖和蜜二糖。(2)碳源同化試驗(yàn)取無菌生理鹽水3ml，接入菌株YSI-3.7，充分搖勻；然后吸取lml菌懸液于無菌平皿中，傾入45-5(TC的無碳基礎(chǔ)培養(yǎng)基，搖勻，待凝后，28X:倒置培養(yǎng)7天，使表面稍干；然后在皿底用記號(hào)筆劃分區(qū)域，其一作為對(duì)照，其余區(qū)域分別標(biāo)上試驗(yàn)用的碳源，將米粒大小的碳源用無菌的小不銹鋼伊加入到平板中相應(yīng)標(biāo)記位置，先正放2-4h，然后28"倒置培養(yǎng)l-2d。若在某一區(qū)內(nèi)形成生長(zhǎng)圈，說明菌株YSI-3.7能利用該碳源。無碳基礎(chǔ)培養(yǎng)基(NH4)2S045g，KH2P04lg，NaCl0.lg，MgS047H200.5g,CaCl20.lg，酵母膏0.2g，加蒸餾水至1000ml(加2%水洗瓊脂即成固體培養(yǎng)基)；p朋.5;12rC下滅菌20min。試驗(yàn)結(jié)果菌株YSI-3.7能夠同化葡萄糖、果糖、甘露糖、半乳糖、麥芽糖、蔗糖、棉籽糖、麥芽三糖；不能同化乳糖、纖維二糖、海藻糖、蜜二糖、松三糖、甘油、可溶性淀粉。(3)氮源同化試驗(yàn)在無氮基礎(chǔ)培養(yǎng)基中分別加入供試氮源，滅菌，并作空白對(duì)照。在各培養(yǎng)基中接種菌株YSI-3.7，28"培養(yǎng)。每天觀察菌株的生長(zhǎng)情況，如果對(duì)照試管中沒長(zhǎng)菌，而加氮源的試管中長(zhǎng)出菌，說明菌株YSI-3.7能同化該氮源；如果加氮源的試管菌株的生長(zhǎng)情況與對(duì)照試管一樣，則表明菌株YSI-3.7不能同化該氮源。無氮基礎(chǔ)培養(yǎng)基葡萄糖20g，K2HP04lg，MgS047H200.5g，酵母膏0.lg或20%.豆芽汁20ral,水洗瓊脂20g，加無氨蒸餾水至1000ml;p朋.5;121。C下滅菌20rain。試驗(yàn)結(jié)果菌株YSI-3.7較易同化尿素、硫酸銨、酰胺，不能同化硝酸鉀。上述菌落形態(tài)特征、細(xì)胞形態(tài)特征和生理生化特征表明，菌株YSI-3.7為釀酒酵母。將釀酒酵母YSI-3.7保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏號(hào)為CGMCCNo.2687。實(shí)施例2、利用釀酒酵母YSI-3.7生產(chǎn)有機(jī)鉻一、培養(yǎng)基的配制種子培養(yǎng)基酵母浸出粉10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，蒸餾水lOOOml，pH5.6。發(fā)酵培養(yǎng)基三氯化鉻l.13X10—3摩爾/升、酵母浸出粉5克/升、蛋白胨15克/升、葡萄糖15克/升，溶劑是水；所述培養(yǎng)基的pH是5.0。二、生產(chǎn)有機(jī)鉻將經(jīng)過活化的釀酒酵母YSI-3.7用接種環(huán)挑取1環(huán)于種子培養(yǎng)基中，28°C、200r/m、12mm旋轉(zhuǎn)半徑的搖床上培養(yǎng)15h，得到種子液；按照10%的接種量(體積比)向發(fā)酵培養(yǎng)基中接種種子液，25°C、150r/m、12mm旋轉(zhuǎn)半徑的搖床上發(fā)酵25h。實(shí)驗(yàn)設(shè)置3個(gè)重復(fù)，結(jié)果采用平均值士標(biāo)準(zhǔn)差。發(fā)酵結(jié)束后，測(cè)定菌株的生物量和有機(jī)鉻含量，方法同實(shí)施例l。結(jié)果如下菌體的生物量為0.92g酵母菌粉/100ml發(fā)酵后的菌懸液，有機(jī)鉻含量為2015.92±2.48yg有機(jī)鉻/g菌粉。實(shí)施例3、利用釀酒酵母YSI-3.7生產(chǎn)有機(jī)鉻一、培養(yǎng)基的配制種子培養(yǎng)基酵母浸出粉10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，蒸餾水1000ml，pH5.6。發(fā)酵培養(yǎng)基三氯化鉻1.88X10—3摩爾/升、酵母浸出粉15克/升、蛋白胨25克/升、葡萄糖25克/升，溶劑是水；所述培養(yǎng)基的pH是6.0。二、生產(chǎn)有機(jī)鉻將經(jīng)過活化的釀酒酵母YSI-3.7用接種環(huán)挑取1環(huán)于種子培養(yǎng)基中，28°C、200r/m、12mm旋轉(zhuǎn)半徑的搖床上培養(yǎng)15h，得到種子液；按照10%的接種量(體積比)向發(fā)酵培養(yǎng)基中接種種子液，3rC、300r/m、12mra旋轉(zhuǎn)半徑的搖床上發(fā)酵35h。實(shí)驗(yàn)設(shè)置3個(gè)重復(fù)，結(jié)果采用平均值士標(biāo)準(zhǔn)差。發(fā)酵結(jié)束后，測(cè)定菌株的生物量和有機(jī)鉻含量，方法同實(shí)施例l。結(jié)果如下菌體生物量為0.93g菌粉/100ml菌懸液，有機(jī)鉻含量為2038.77±2.45吆有機(jī)鉻/g菌粉。實(shí)施例4、釀酒酵母YSI-3.7的傳代穩(wěn)定性將釀酒酵母YSI-3.7在YEPD斜面培養(yǎng)基上連續(xù)轉(zhuǎn)接5代。挑取各代菌株，分別用接種環(huán)挑取1環(huán)于種子培養(yǎng)基(配方同實(shí)施例l)中，28°C、200r/m、12mm旋轉(zhuǎn)半徑的搖床上培養(yǎng)15h，得到種子液；按照10%的接種量(體積比)向發(fā)酵培養(yǎng)基(配方同實(shí)施例l)中接種種子液，28°C、200r/m、12ram旋轉(zhuǎn)半徑的搖床上發(fā)酵30h。然后進(jìn)行生物量測(cè)定、有機(jī)鉻含量測(cè)定，方法同實(shí)施例l。實(shí)驗(yàn)設(shè)置3個(gè)重復(fù)，結(jié)果采用平均值士標(biāo)準(zhǔn)差。結(jié)果見表2。表2釀酒酵母YSI-3.7的遺傳穩(wěn)定性結(jié)果(mean±SD，n=3)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>結(jié)果顯示，釀酒酵母YSI-3.7經(jīng)過5代傳代后性能穩(wěn)定。權(quán)利要求1、釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)YSI-3.7CGMCCNo.2687。2、一種生產(chǎn)有機(jī)鉻的方法，是培養(yǎng)釀酒酵母(&ccA3rcM^cescerew'w'ae)YSI-3.7CGMCCNo.2687，得到有機(jī)鉻。3、如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述培養(yǎng)中采用的培養(yǎng)基的組成如下鉻離子(1.13-1.88)X10—3摩爾/升、酵母浸出粉5-15克/升、蛋白胨15-25克/升、葡萄糖15-25克/升，所述培養(yǎng)基的溶劑是水；所述培養(yǎng)基的pH是5.0-6.0。4、如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于所述培養(yǎng)中采用的培養(yǎng)基的組成如下鉻離子1.56Xl(T3摩爾/升、酵母浸出粉10克/升、蛋白胨20克/升、葡萄糖20克/升，所述培養(yǎng)基的溶劑是水；所述培養(yǎng)基的pH是5.6。5、如權(quán)利要求3或4所述的方法，其特征在于所述鉻離子為三價(jià)鉻離子。6、如權(quán)利要求2至5中任一所述的方法，其特征在于所述發(fā)酵的條件為發(fā)酵溫度為25-31°C、轉(zhuǎn)速為150-300r/min、旋轉(zhuǎn)半徑為12mm、發(fā)酵時(shí)間為25-35小時(shí)。7、如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于所述發(fā)酵的條件為發(fā)酵溫度為28°C、轉(zhuǎn)速為200r/min、旋轉(zhuǎn)半徑為12mra、發(fā)酵時(shí)間為30小時(shí)。全文摘要本發(fā)明公開了一種生產(chǎn)生物有機(jī)鉻的方法及其專用菌株。本發(fā)明提供的菌株為釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)YSI-3.7CGMCCNo.2687，該菌株具有高產(chǎn)有機(jī)鉻的能力。本發(fā)明提供的生產(chǎn)有機(jī)鉻的方法，是培養(yǎng)釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)YSI-3.7CGMCCNo.2687，得到有機(jī)鉻。采用本發(fā)明的方法生產(chǎn)有機(jī)鉻，試驗(yàn)條件簡(jiǎn)單，成本較低，有機(jī)鉻產(chǎn)量較高。本發(fā)明具有重要的經(jīng)濟(jì)意義和社會(huì)意義。文檔編號(hào)C12P9/00GK101381686SQ20081022426公開日2009年3月11日申請(qǐng)日期2008年10月15日優(yōu)先權(quán)日2008年10月15日發(fā)明者鷺劉,劉曉銘,呂加平,高艷紅申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所